CN111855828B - 一种同时测定普瑞巴林以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法 - Google Patents

一种同时测定普瑞巴林以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于医药领域，涉及一种测定普瑞巴林以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法。具体地，本发明涉及一种同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其为HPLC方法，其中，HPLC的条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温20℃‑40℃；流动相A为20‑30mmol/L的磷酸二氢钾溶液，pH为6.2‑7.0；流动相B为甲醇；流速0.5‑1.5mL/min；进样量10‑30μL；检测波长210nm。本发明的方法专属性好，灵敏度高、重复性好、准确度高，可用于普瑞巴林口服溶液的质量控制。

Description

一种同时测定普瑞巴林以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一种测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，具体地，涉及一种同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法。
背景技术
普瑞巴林(pregabalin)是一种γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂,临床常用于治疗带状疱疹神经痛、纤维肌痛综合征等神经病理性疼痛,以及成年患者局部不全性癫痫发作,广泛性焦虑症等疾病。Lyrica(普瑞巴林)是全球最畅销的镇痛药之一，FDA批准用于治疗与糖尿病周围神经病变神经痛、带状疱疹后神经痛、脊髓损伤相关神经痛、纤维肌痛相关神经痛以及特定成人癫痫患者部分性发作。普瑞巴林化学名为(S)-3-氨甲基-5-甲基己酸，结构式如下面的式I所示：
Figure BDA0002394624540000011
目前《中国药典》尚无普瑞巴林含量的测定方法，而《美国药典》(USP41-NF36)、《欧洲药典》(EP9.0)仅收载了普瑞巴林原料药的含量测定，二者均存在羟苯酯类抑菌剂保留时间太长，理论塔板数低、峰形差等问题。
目前尚无文献报道同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法。
发明内容
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，开发了一种测定普瑞巴林口服溶液普瑞巴林以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，该方法本发明的检测方法专属性强，具有较高的精密度和准确性，耐用性好，适用于普瑞巴林口服溶液质量控制，可用于普瑞巴林口服溶液的质量控制，并且显著优于美国药典和欧洲药典中的检测方法。
由此提供了下述发明：
本发明的一个方面涉及一种同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其为HPLC方法，
其中，HPLC的条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；
柱温20℃-40℃；
流动相A为20-30mmol/L的磷酸二氢钾溶液，pH为6.2-7.0；
流动相B为甲醇(例如色谱级甲醇)；
流速0.5-1.5mL/min；
进样量10-30μL；
检测波长210nm；
优选地，所述羟苯酯类抑菌剂为羟苯甲酯和/或羟苯丙酯。
在本发明的一个或多个实施方式中，普瑞巴林的保留时间为小于或等于20分钟，羟苯甲酯和羟苯丙酯的保留时间均小于或等于45分钟。
在本发明的一个或多个实施方式中，普瑞巴林的保留时间为小于或等于15分钟，羟苯甲酯和羟苯丙酯的保留时间均小于或等于30分钟。
在本发明的一个或多个实施方式中，普瑞巴林的保留时间为小于或等于10分钟(优选小于或等于8分钟，或者小于或等于6分钟)，羟苯甲酯和羟苯丙酯的保留时间均小于或等于25分钟。
在本发明的一个或多个实施方式中，普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯含量测定时对称因子均在0.90～1.10之间，且理论塔板数均在13000以上。
在本发明的一个或多个实施方式中，普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯含量测定时对称因子均在0.95～1.05之间，且理论塔板数均在14000以上。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述普瑞巴林口服溶液中含有有效量的普瑞巴林，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述辅料包括羟苯酯类抑菌剂例如羟苯甲酯和/或羟苯丙酯。优选地，所述辅料还包括pH调节剂例如磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠。更优选地，所述辅料还包括甜味剂例如三氯蔗糖，和/或香精例如草莓香精。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述普瑞巴林口服溶液包括如下组分：
有效量的普瑞巴林、适量的羟苯甲酯、适量的羟苯丙酯、适量的pH调节剂例如磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠、适量的甜味剂例如三氯蔗糖以及适量的香精例如草莓香精；
优选地，所述普瑞巴林口服溶液包括如下组分：
普瑞巴林15-25mg/mL、羟苯甲酯1-1.5mg/mL、羟苯丙酯0.1-0.2mg/mL、适量的pH调节剂例如磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠、适量的甜味剂例如三氯蔗糖以及适量的香精例如草莓香精；
更优选地，所述普瑞巴林口服溶液包括如下组分：
普瑞巴林20mg/mL、羟苯甲酯1.3mg/mL、羟苯丙酯0.163mg/mL、适量的pH调节剂例如磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠、适量的甜味剂例如三氯蔗糖以及适量的香精例如草莓香精。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述普瑞巴林口服溶液通过包括如下步骤的制备方法制得：
将纯化水加热至60℃以上，加入羟苯酯类抑菌剂(例如羟苯甲酯和/或羟苯丙酯)并溶解，制得抑菌剂水溶液；冷却后加入普瑞巴林、pH调节剂(例如磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠；优选pH为5.9-6.3)、甜味剂例如三氯蔗糖、香精例如草莓香精等辅料搅拌均匀，即得。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述色谱柱为CPACELL PAK MGII，优选为CPACELL PAK C18 MGII；优选地，色谱柱的参数为4.6mm x 250mm,5.0μm；或者为4.6mm x250mm,10.0μm。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述柱温为25℃-35℃、26℃-34℃、28℃-32℃或30℃。
在本发明的一个或多个实施方式中，流动相A为22-28mmol/L、24-26mmol/L或者25mmol/L的磷酸二氢钾溶液；
和/或
流动相A的pH为6.5-6.9或6.7；优选地，所述pH通过氨水调节得到。
在本发明的一个或多个实施方式中，流速为0.8-1.2mL/min或1.0mL/min。
在本发明的一个或多个实施方式中，进样量为18-25μL、18-22μL或20μL。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的检测方法，
其中，HPLC的条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；
柱温25℃-35℃；
流动相为25mmol/L的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节pH为6.7；
流速0.8-1.2mL/min；
进样量18-22μL；
检测波长210nm；
优选地，HPLC的条件如下：
色谱柱为CPACELL PAK C18 MGII；
柱温28℃-32℃；
流动相为25mmol/L的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节pH为6.7；
流速1.0mL/min；
进样量20μL；
检测波长210nm。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的检测方法，其中，洗脱程序如下：
Figure BDA0002394624540000051
在本发明的一个或多个实施方式中，测定方法样品配制：量取普瑞巴林口服溶液适量，用稀释剂(流动相A)稀释制成每1ml约含普瑞巴林2mg的溶液作为供试品溶液；精密称取普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯对照品适量，用稀释剂稀释制成每1ml约含普瑞巴林2mg、羟苯甲酯130μg、羟苯丙酯15μg的溶液作为对照溶液。
在本发明的一个或多个实施方式中，各物质均以外标法计算含量。
本发明中，如果没有特别说明，术语“检测”为定性检测或定量检测。
本发明中，如果没有特别说明，术语“主成分”或“API”或“主药”是指普瑞巴林。
本发明中，如果没有特别说明，普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯的结构如下面的表1所示。
表1：杂质化合物结构和名称
Figure BDA0002394624540000061
本发明中，如果没有特别说明，术语“羟苯酯类抑菌剂”是指羟苯甲酯和/或羟苯丙酯，优选为羟苯甲酯和羟苯丙酯。
本发明中，如果没有特别说明，术语“分离度”是指分离度是指前后化合物的分离情况，一般大于1.5才可认为分离情况良好，测定方法准确可用。
本发明中，如果没有特别说明，术语“保留时间”是指对应化合物的出峰时间。
本发明中，如果没有特别说明，术语“v％”是指体积百分比。
发明的有益效果
本发明取得了如下的技术效果中的任意一项或者几项：
(1)普瑞巴林、羟苯酯类抑菌剂峰形较好、理论塔板数较高；特别是普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯含量测定时对称因子均在0.95～1.05之间，且理论塔板数均在14000以上；
(2)本发明的方法专属性好，空白溶剂及其它辅料溶液对普瑞巴林及羟苯酯类抑菌剂含量测定无干扰；
(3)普瑞巴林、羟苯酯类抑菌剂在一定浓度范围内，呈现良好线性关系；
(4)普瑞巴林及羟苯酯类抑菌剂的测定精密度高、重复性好；
(5)本发明的方法准确度好。
附图说明
图1：普瑞巴林口服溶液含量测定空白溶剂液相图谱。
图2：普瑞巴林口服溶液含量测定系统适用性溶液液相图谱。
图3：普瑞巴林口服溶液含量测定辅料溶液液相图谱。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：检测方法示例
1.实验样品
样品贮备溶液：取普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯对照品适量，精密称定，分别稀释成每1ml中约含普瑞巴林20mg、羟苯甲酯130μg、羟苯丙酯15μg的溶液，摇匀，分别作为对照品贮备溶液；其中，普瑞巴林以纯水稀释，羟苯酯类抑菌剂以甲醇稀释。
系统适用性试验溶液：取上述贮备溶液各1ml，置10ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
空白溶液：流动相A。
普瑞巴林(EP，批号：2.0，纯度99.7％)，羟苯甲酯(Accustandard，批号：17528-01纯度97.5％)，羟苯丙酯(Accustandard，批号：A008525301-02纯度99.3％)。
2.实验方法
仪器：waters高效液相色谱仪。
色谱柱：CPACELL PAK C18 MGII(250mm×4.6mm 5μm)。
流动相A:25mmol磷酸二氢钾溶液(氨水调节pH至6.70)；流动相B：甲醇；检测波长210nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃。
洗脱程序：如下面的表2所示。
表2：洗脱程序
时间(min) 流动相A(v％) 流动相B(v％)
0 70 30
4 70 30
7 45 55
12 45 55
14 35 65
19 35 65
19.1 70 30
25 70 30
按照上述色谱条件进样空白溶液、系统适用性溶液，记录色谱图。
3.实验结果
如图1、图2以及表3所示。
表3：系统适用性结果
Figure BDA0002394624540000091
备注：普瑞巴林为色谱图中首个色谱峰，故系统未进行计算，如图2所示，普瑞巴林与其它色谱峰不存在分离度问题。
结果显示，普瑞巴林与羟苯酯类抑菌剂的分离度符合系统适用性要求，且峰形较好，理论塔板数较高，且分析方法时间较短，高效便捷。
实施例2：专属性验证
配制空白辅料溶液(不含普瑞巴林、羟苯酯类抑菌剂)，量取上述空白辅料溶液1ml，流动相A稀释至10ml，按照实施例1色谱条件进样，结果见图3。其中空白辅料溶液为含有适量的磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠、三氯蔗糖和草莓香精的水溶液。
图2中的普瑞巴林、羟苯酯类抑菌剂出峰位置，图1空白溶剂及图3辅料溶液的相应位置均无色谱峰出峰，即无干扰。由图1-图3可见，空白溶剂、空白辅料溶液对普瑞巴林及羟苯酯类抑菌剂含量的检测无干扰，表明该色谱条件的专属性良好。
实施例3：线性试验
普瑞巴林原料药(印度太阳药业有限公司，批号：PRVNF18053)，羟苯甲酯(江西阿尔法高科药业有限公司，批号：20180701)，羟苯丙酯(湖南尔康制药股份有限公司，批号：11072010401)
精密称取普瑞巴林原料药2000.89mg，置100ml容量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，作为普瑞巴林贮备液；精密称取羟苯甲酯130.42mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为羟苯甲酯贮备液；精密称取羟苯丙酯16.34mg置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为羟苯丙酯贮备液。精密量取普瑞巴林贮备液1、1.5、2、3、4mL分别置20mL容量瓶中，分别精密添加羟苯酯类贮备液，1、1.5、2、3、4mL，用流动相A稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度混合对照品溶液。分别精密量取各溶液20μL，注入高效液相色谱仪，记录图谱。
对于普瑞巴林及羟苯酯类抑菌剂，在其检测浓度50％至200％范围内，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别得到普瑞巴林与羟苯酯类抑菌剂的线性回归方程，线性结果见表4。
表4：普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯线性范围
样品名称 回归方程 r 线性范围(μg/mL)
普瑞巴林 y＝516.45x–22975.20 0.9998 1000.45-4000.78
羟苯甲酯 y＝101,136.08x+291,574.03 0.9998 65.21-260.84
羟苯丙酯 y＝88629.06x-17,259.97 0.9995 8.17-32.68
结果显示，普瑞巴林、羟苯酯类抑菌剂在各自检测浓度的50％～200％范围内成良好的线性关系(r＞0.999)。
实施例4：精密度实验
量取实施例3线性中间浓度(参见实施例3)的标准溶液20μL，连续进样6次，记录峰面积，计算普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯峰面积的RSD分别为0.39％、0.18％、0.16％。结果表明该方法精密度好。
实施例5：准确度试验
量取空白辅料溶液(与实施例2相同)2.5mL置25mL容量瓶中，加实施例1下普瑞巴林贮备液、羟苯酯类贮备液2.0、2.5、3m L各3份，(相当于中间浓度的80％、100％、120％的溶液)用流动相A稀释至刻度，摇匀。
按实施例1的色谱条件进样测定并记录色谱图,计算实验结果,结果见表5至表7。
表5：普瑞巴林回收率实验结果(n＝9)
Figure BDA0002394624540000111
表6：羟苯甲酯回收率实验结果(n＝9)
Figure BDA0002394624540000112
表7：羟苯丙酯回收率实验结果(n＝9)
Figure BDA0002394624540000113
Figure BDA0002394624540000121
结果显示，普瑞巴林、羟苯酯类抑菌剂回收率均在98％～102％之间，准确度均符合含量测定要求，说明方法准确性好，测量误差小。
实施例6：稳定性试验
混合对照品溶液：配制方式同实施例1中“系统适用性溶液”。
普瑞巴林供试品溶液：精密量取普瑞巴林口服溶液2mL(约相当于普瑞巴林40mg)，置20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。
其中普瑞巴林口服溶液的成分及配制如下：
普瑞巴林(20mg/mL)、羟苯甲酯(1.3mg/mL)、羟苯丙酯(0.163mg/mL)；适量的磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠、三氯蔗糖和草莓香精。
配制方法：将纯化水加热至60℃以上，加入羟苯酯类抑菌剂溶解，制抑菌剂水溶液；冷却后加入普瑞巴林、磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠、三氯蔗糖、草莓香精等其它辅料搅拌均匀，即得。
量取混合对照品溶液及普瑞巴林供试品溶液20μL，在0、3、6、12、16、20、24h进样测定，结果混合对照品溶液普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯峰面积的RSD分别为0.35％、0.63％、0.77％；普瑞巴林供试品溶液普瑞巴林、羟苯甲酯、羟苯丙酯峰面积的RSD分别为0.56％、0.70％、0.85％；表明对照品及供试品溶液24小时稳定。
实施例7：耐用性试验
普瑞巴林供试品溶液：与实施例6的普瑞巴林供试品溶液相同。
取同一批次供试品溶液，更换不同批号的色谱柱，不同型号的高效液相色谱仪(岛津LC-20AT、Waters ARC-2489UV)，柱温变化±5℃、流动相pH变化±0.2等，按照实施例1的色谱条件测定，记录峰面积，按外标法计算含量，结果无明显差异，说明方法耐用性良好。
实施例8：市售样品测定
取市售Lyrica样品，制备供试品溶液：精密量取普瑞巴林口服溶液(Lyrica)2mL(约相当于普瑞巴林40mg)，置20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。
按实施例1色谱条件测定，记录峰面积，按外标法计算含量。结果如下面的表8所示。
表8：市售样品测定结果
样品 普瑞巴林(mg/ml) 羟苯甲酯(mg/ml) 羟苯丙酯(mg/ml)
Lyrica 19.93 1.255 0.1600
比较例：药典方法的考察与比较
1.实验样品
系统适用性溶液，同实施例1。
2.实验方法
按照《美国药典》(USP43-NF38(美国药典43版)[S].2019:3674)，《欧洲药典》(EP10.0(欧洲药典10.0版)[S].2017:3633)中的检测方法进行了实验考察。
3.实验结果
《欧洲药典》采用磷酸二氢钾溶液-甲醇(85:15)为流动相等度洗脱，经试验发现该流动相比例下，羟苯酯类抑菌剂出峰时间较长(约90min以上)，且峰宽较宽，峰形较差；《美国药典》流动相为水-乙腈(5:95)等度洗脱，同样存在洗脱时间长(90min以上)、峰形较差、理论塔板数低等问题，不适用于普瑞巴林口服溶液含量检测。《欧洲药典》羟苯甲酯保留时间87.088min，羟苯丙酯在90min仍未出峰。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (33)

1.一种同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其为HPLC方法，
其中，HPLC的条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；
柱温20℃-40℃；
流动相A为20-30mmol/L的磷酸二氢钾溶液，pH为6.2-7.0；
流动相B为甲醇；
流速0.5-1.5mL/min；
进样量10-30μL；
检测波长210nm；
其中，所述羟苯酯类抑菌剂为羟苯甲酯和/或羟苯丙酯；
其中，洗脱程序如下：
Figure FDA0003637931580000011
2.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述色谱柱为CPACELL PAK C18 MGII。
3.根据权利要求2所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，色谱柱的参数为4.6mm x 250mm,5.0μm；或者为4.6mm x 250mm,10.0μm。
4.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，柱温为25℃-35℃。
5.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，柱温为26℃-34℃。
6.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，柱温为28℃-32℃。
7.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，柱温为30℃。
8.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，流动相A为22-28mmol/L的磷酸二氢钾溶液；
和/或
流动相A的pH为6.5-6.9。
9.根据权利要求8所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，流动相A为24-26mmol/L的磷酸二氢钾溶液。
10.根据权利要求8所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，流动相A为25mmol/L的磷酸二氢钾溶液。
11.根据权利要求8所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，流动相A的pH为6.7。
12.根据权利要求8所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述pH通过氨水调节得到。
13.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，流速为0.8-1.2mL/min。
14.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，流速为1.0mL/min。
15.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，进样量为18-25μL。
16.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，进样量为18-22μL。
17.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，进样量为20μL。
18.根据权利要求1至17中任一权利要求所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述普瑞巴林口服溶液中含有有效量的普瑞巴林，以及一种或多种药学上可接受的辅料；
并且，所述辅料包括羟苯酯类抑菌剂羟苯甲酯和/或羟苯丙酯。
19.根据权利要求18所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述辅料还包括pH调节剂。
20.根据权利要求19所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述pH调节剂为磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠。
21.根据权利要求18所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述辅料还包括甜味剂，和/或香精。
22.根据权利要求21所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述甜味剂为三氯蔗糖。
23.根据权利要求21所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述香精为草莓香精。
24.根据权利要求1至17中任一权利要求所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述普瑞巴林口服溶液包括：
普瑞巴林15-25mg/mL、羟苯甲酯1-1.5mg/mL、羟苯丙酯0.1-0.2mg/mL、适量的pH调节剂、适量的甜味剂以及适量的香精。
25.根据权利要求24所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述pH调节剂为磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠。
26.根据权利要求24所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述甜味剂为三氯蔗糖。
27.根据权利要求24所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述香精为草莓香精。
28.根据权利要求1至17中任一权利要求所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述普瑞巴林口服溶液包括：
普瑞巴林20mg/mL、羟苯甲酯1.3mg/mL、羟苯丙酯0.163mg/mL、适量的pH调节剂、适量的甜味剂以及适量的香精。
29.根据权利要求28所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述pH调节剂为磷酸二氢钠和/或无水磷酸氢二钠。
30.根据权利要求28所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述甜味剂为三氯蔗糖。
31.根据权利要求28所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，其中，所述香精为草莓香精。
32.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，
其中，HPLC的条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；
柱温25℃-35℃；
流动相为25mmol/L的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节pH为6.7；
流速0.8-1.2mL/min；
进样量18-22μL；
检测波长210nm。
33.根据权利要求1所述的同时测定普瑞巴林口服溶液中普瑞巴林含量以及羟苯酯类抑菌剂含量的方法，
其中，HPLC的条件如下：
色谱柱为CPACELL PAK C18 MGII；
柱温28℃-32℃；
流动相为25mmol/L的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节pH为6.7；
流速1.0mL/min；
进样量20μL；
检测波长210nm。
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