CN111826418A - 一种抗凝血酶iii测定试剂盒 - Google Patents

一种抗凝血酶iii测定试剂盒 Download PDF

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CN111826418A CN202010883494.8A CN202010883494A CN111826418A CN 111826418 A CN111826418 A CN 111826418A CN 202010883494 A CN202010883494 A CN 202010883494A CN 111826418 A CN111826418 A CN 111826418A
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焦东燕
刘芳
王玉玉
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Baoding Tianyue Bioengineering Co ltd
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Baoding Tianyue Bioengineering Co ltd
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • G—PHYSICS
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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    • G01N2333/81—Protease inhibitors
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    • G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • G01N2333/8121—Serpins
    • G01N2333/8128—Antithrombin III

Abstract

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种抗凝血酶III测定试剂盒，解决了现有技术中存在的测定试剂盒的测定速率较慢，且在测定完成后试剂反应仍在继续进行中，影响测定实验结果数值，导致最终结果出现偏差的缺点，包括试剂一、试剂二、提速液及终止液；试剂一包括凝血酶、肝素、缓冲液及盐；试剂二包括凝血酶的发色底物、缓冲液及甘露醇；提速液包括磷酸氢二钠溶液；终止液包括聚氯乙烯树酯及叠氮化钠。本发明通过试剂一、试剂二、提速液及终止液组合成试剂盒，利用试剂一、试剂二、提速液快速实现抗凝血酶III的测定，在测定完成后利用终止液来停止反应，避免缓慢继续反应造成的数据偏差，整体测定试剂盒的使用方便，测定快捷，数据准确。

Description

一种抗凝血酶III测定试剂盒
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种抗凝血酶III测定试剂盒。
背景技术
按照医疗器械命名的原则产品名称应统一，目前市场上已上市的产品名称分为两种，抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒(发色底物法)与抗凝血酶测定试剂盒(发色底物法)。
抗凝血酶国际标准物质由英国国家生物制品检定所(NIBSC)制备和赋值。根据该机构提供的信息，国际卫生组织(WHO)于1978年确立的第一代国际参考品(72/1)，使用的名称为抗凝血酶Ⅲ。命名遵循了SeegersWH，JohnsonJF，FellC(1954)的出版物《凝血酶原激活的抗凝血酶反应》Am.J.Physiol.176(1)：97-103。在这篇文章中有四种抗凝血酶的说法，抗凝血酶Ⅲ这一叫法我们现在称之为抗凝血酶。国际血栓与止血学会(ISTH)现在已将术语命名为抗凝血酶，不再使用抗凝血酶Ⅲ。因此NIBSC制备并由WHO于1994年确立的第二代国际参考品(93/578)、2010年确立的第三代(08/258)国际参考品已经不再使用“抗凝血酶Ⅲ”这一名称，而使用了“抗凝血酶”的名称。
尽管国际上已经将术语、国际参考品进行了名称统一，但根据国内的注册情况，本申请仍采用了抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒(发色底物法)进行命名。人体内与凝血系统功能相拮抗的是抗凝血系统，在正常情况下，两者保持动态平衡，从而维持血液在血管内的正常流动。抗凝血酶Ⅲ是抗凝系统中最重要的成分，它由肝脏合成，为一种多功能的丝氨酸蛋白酶抑制物，可抑制凝血酶生成，具有强大的抗凝活性，占血浆抗凝酶活性的70％，对抗凝血酶Ⅲ的测定大多是通过发色底物法进行，现有的测定试剂盒的测定速率较慢，且在测定完成后试剂反应仍在继续进行中，影响测定实验结果数值，导致最终结果出现偏差。
因此，我们提出了一种抗凝血酶III测定试剂盒用于解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的测定试剂盒的测定速率较慢，且在测定完成后试剂反应仍在继续进行中，影响测定实验结果数值，导致最终结果出现偏差的缺点，而提出的一种抗凝血酶III测定试剂盒。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明提出的一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二、提速液及终止液；
所述试剂一包括凝血酶、肝素、缓冲液及盐；
所述试剂二包括凝血酶的发色底物、缓冲液及甘露醇；
所述提速液包括磷酸氢二钠溶液；
所述终止液包括聚氯乙烯树酯及叠氮化钠。
优选的，所述试剂一中：凝血酶的浓度为5～20IU/ml、肝素的含量为0.8～1.2wt％、盐的含量为0.25～0.5wt％。
优选的，所述试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为2.5～4.5wt％、甘露醇的含量为0.3～0.5wt％。
优选的，所述提速液中磷酸氢二钠溶液的浓度为1～3IU/ml，所述终止液中：聚氯乙烯树酯的含量为0.3～1.0wt％及叠氮化钠的含量为0.5～0.8wt％。
优选的，所述发色底物为S2238、S～2160和Chromozym TH中的一种。
优选的，所述缓冲液为Tris。
优选的，所述盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
优选的，一种抗凝血酶III测定试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育5～10min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二及提速液，混合均匀孵育5～10min；
S4：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入终止液，观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
优选的，所述试剂一的加入量为检测液容积的2.5～5.8％，所述试剂二的加入量为检测液容积的1.3～2.5％，所述提速液的加入量为检测液容积的0.5～1.2％，所述终止液的加入量为检测液容积的0.5～1.4％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明通过在测定试剂盒内设置提速液，利用非传统的磷酸氢二钠溶液来提高测定反应速率，加快实验结果的得出，同时磷酸氢二钠溶液还可起到品质改良剂的作用，一物多效，在提高测定反应速率的同时，保证试剂可稳定的进行反应测定。
2、本发明在测定试剂盒内设置了终止液，利用聚氯乙烯树酯及叠氮化钠来及时终止试剂反应，避免在测定完成后，反应继续进行，影响实际测定数据数值，其中聚氯乙烯树酯的来源广泛，制备方便稳定，成本低廉，降低测定试剂盒的成本。
3、本发明通过试剂一、试剂二、提速液及终止液组合构成测定试剂盒，利用试剂一、试剂二、提速液正常高速实现抗凝血酶III的测定，同时在测定完成后利用终止液来及时停止反应，避免缓慢继续反应造成的数据偏差，整体测定试剂盒的使用方便，测定快捷，数据准确。
具体实施方式
除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。“质量、浓度、温度、时间、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，1-50的范围应理解为包括选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50的任何数字、数字的组合、或子范围、以及所有介于上述整数之间的小数值，例如，1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、和1.9。关于子范围，具体考虑从范围内的任意端点开始延伸的“嵌套的子范围”。例如，示例性范围1-50的嵌套子范围可以包括一个方向上的1-10、1-20、1-30和1-40，或在另一方向上的50-40、50-30、50-20和50-10。”
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说，在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例一
本发明提出的一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二、提速液及终止液；
试剂一中：凝血酶的浓度为5IU/ml、肝素的含量为0.8wt％、盐的含量为0.25wt％；
试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为2.5wt％、甘露醇的含量为0.3wt％；
提速液中磷酸氢二钠溶液的浓度为1IU/ml；
终止液中：聚氯乙烯树酯的含量为0.3wt％及叠氮化钠的含量为0.5wt％。
本实施例中，发色底物为S2238、S-2160和Chromozym TH中的一种，缓冲液为Tris，盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
其使用方法包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育5min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二及提速液，混合均匀孵育5min；
S4：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入终止液，观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
其中，试剂一的加入量为检测液容积的2.5％，试剂二的加入量为检测液容积的1.3％，提速液的加入量为检测液容积的0.5％，终止液的加入量为检测液容积的0.5％。
实施例二
本发明提出的一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二、提速液及终止液；
试剂一中：凝血酶的浓度为10IU/ml、肝素的含量为0.9wt％、盐的含量为0.3wt％；
试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为3.0wt％、甘露醇的含量为0.4wt％；
提速液中磷酸氢二钠溶液的浓度为2IU/ml；
终止液中：聚氯乙烯树酯的含量为0.5wt％及叠氮化钠的含量为0.6wt％。
本实施例中，发色底物为S2238、S-2160和Chromozym TH中的一种，缓冲液为Tris，盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
其使用方法包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育7min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二及提速液，混合均匀孵育7min；
S4：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入终止液，观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
其中，试剂一的加入量为检测液容积的3.5％，试剂二的加入量为检测液容积的1.8％，提速液的加入量为检测液容积的0.8％，终止液的加入量为检测液容积的0.8％。
实施例三
本发明提出的一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二、提速液及终止液；
试剂一中：凝血酶的浓度为15IU/ml、肝素的含量为1.1wt％、盐的含量为0.4wt％；
试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为3.5wt％、甘露醇的含量为0.4wt％；
提速液中磷酸氢二钠溶液的浓度为2IU/ml；
终止液中：聚氯乙烯树酯的含量为0.8wt％及叠氮化钠的含量为0.7wt％。
本实施例中，发色底物为S2238、S-2160和Chromozym TH中的一种，缓冲液为Tris，盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
其使用方法包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育9min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二及提速液，混合均匀孵育9min；
S4：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入终止液，观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
其中，试剂一的加入量为检测液容积的4.8％，试剂二的加入量为检测液容积的2.3％，提速液的加入量为检测液容积的0.9％，终止液的加入量为检测液容积的1.2％。
实施例四
本发明提出的一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二、提速液及终止液；
试剂一中：凝血酶的浓度为20IU/ml、肝素的含量为1.2wt％、盐的含量为0.5wt％；
试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为4.5wt％、甘露醇的含量为0.5wt％；
提速液中磷酸氢二钠溶液的浓度为3IU/ml；
终止液中：聚氯乙烯树酯的含量为1.0wt％及叠氮化钠的含量为0.8wt％。
本实施例中，发色底物为S2238、S-2160和Chromozym TH中的一种，缓冲液为Tris，盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
其使用方法包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育10min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二及提速液，混合均匀孵育10min；
S4：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入终止液，观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
其中，试剂一的加入量为检测液容积的5.8％，试剂二的加入量为检测液容积的2.5％，提速液的加入量为检测液容积的1.2％，终止液的加入量为检测液容积的1.4％。
对比例一
一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二、提速液；
试剂一中：凝血酶的浓度为20IU/ml、肝素的含量为1.2wt％、盐的含量为0.5wt％；
试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为4.5wt％、甘露醇的含量为0.5wt％；
提速液中磷酸氢二钠溶液的浓度为3IU/ml。
具体地，发色底物为S2238、S-2160和Chromozym TH中的一种，缓冲液为Tris，盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
其使用方法包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育10min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二及提速液，混合均匀孵育10min；
S4：观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
其中，试剂一的加入量为检测液容积的5.8％，试剂二的加入量为检测液容积的2.5％，提速液的加入量为检测液容积的1.2％。
对比例二
一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二、终止液；
试剂一中：凝血酶的浓度为20IU/ml、肝素的含量为1.2wt％、盐的含量为0.5wt％；
试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为4.5wt％、甘露醇的含量为0.5wt％；
终止液中：聚氯乙烯树酯的含量为1.0wt％及叠氮化钠的含量为0.8wt％。
具体地，发色底物为S2238、S-2160和Chromozym TH中的一种，缓冲液为Tris，盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
其使用方法包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育10min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二，混合均匀孵育10min；
S4：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入终止液，观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
其中，试剂一的加入量为检测液容积的5.8％，试剂二的加入量为检测液容积的2.5％，终止液的加入量为检测液容积的1.4％。
对比例三
一种抗凝血酶III测定试剂盒，包括试剂一、试剂二；
试剂一中：凝血酶的浓度为20IU/ml、肝素的含量为1.2wt％、盐的含量为0.5wt％；
试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为4.5wt％、甘露醇的含量为0.5wt％。
具体地，发色底物为S2238、S-2160和Chromozym TH中的一种，缓冲液为Tris，盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
其使用方法包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育10min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二，混合均匀孵育10min；
S4：观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
其中，试剂一的加入量为检测液容积的5.8％，试剂二的加入量为检测液容积的2.5％。
实施例五
使用实施例四中的测定试剂盒重复测试3次，按公式(1)计算相对偏差，结果如表1所示：
Figure BDA0002654879040000131
式中：
B――相对偏差；
xi――第i次的测定值；
T――参考物质标示值或各浓度样本定值。
表1
第一次 第一次 第一次
相对偏差(％) 8 9 8
实施例六
用实施例四中的AT III试剂盒分别对高(＞50％)、中(30％-50％)、低(＜30％)3个浓度水平样本进行测定，各测试10次，计算测量值的平均值
Figure BDA0002654879040000132
和标准差(s)，按公式(2)计算变异系数(CV％)，结果如表2所示：
Figure BDA0002654879040000133
表2
Figure BDA0002654879040000141
根据表1及表2，所得数据符合：相对偏差在±15.0％范围内；重复性试验使用高、中、低三个浓度水平的样本，高浓度样本变异系数(CV)应≤10％，中浓度样本变异系数(CV)应≤10％，低浓度样本变异系数(CV)应≤15％，故测定试剂盒本身合格。
将参比血浆用生理盐水稀释成浓度75％，然后采用本发明上述实施例一到实施例四、对比例一到对比例三的试剂盒检测抗凝血酶III活性，对比检测结果如表3所示：
表3：75％参比血浆浓度稀释液下的反应数据
Figure BDA0002654879040000142
将参比血浆用生理盐水稀释成浓度50％，然后采用本发明上述实施例一到实施例四、对比例一到对比例三的试剂盒检测抗凝血酶III活性，对比检测结果如表4所示：
表4：50％参比血浆浓度稀释液下的反应数据
Figure BDA0002654879040000151
参照表3及表4可知，在实施例一至四中，在相同浓度的参比血浆的稀释液中，累计反应时间是逐步降低的，且在得到测定数据后均已停止持续反应；
而无论是在稀释液中的参比血浆的浓度为50％还是75％的情况下，当在对比例一中仅加入提速液而未加入终止液的情况下，与其他数值均相同的实施例四相比，稀释液在得到数据结果后仍然持续进行反应，导致实验测定数据的不精准，给最终的AT-III活性带来影响，同时会将累计反应时间推长，增加测定试剂盒的使用测定时长；
当在对比例二中仅加入终止液而未加入提速液的情况下，与其他数值均相同的实施例四相比，稀释液在测定结束后即停止反应，但加入试剂一及试剂二后的反应时间本身过长，使得测定试剂盒的使用测定时长仍偏长；
在对比例三中均未加入提速液及终止液，与其他数值均相同的实施例四相比，对比例三的本身的累计反应时间较长，同时在测定结束后，仍存在缓慢持续反应，再次拖延测定试剂盒的使用时长，同时给最终的AT-III活性带来影响，导致测定数据的精准性偏差。
故综上可得，提速液中的磷酸氢二钠溶液可有效提高测定反应速率，降低测定试剂盒的累计反应时长，提高检验的效率，而终止液中的聚氯乙烯树酯及叠氮化钠可及时有效的终止反应，避免在测定完成后的继续缓慢反应，影响测定实验数据的准确。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种抗凝血酶III测定试剂盒，其特征在于，包括试剂一、试剂二、提速液及终止液；
所述试剂一包括凝血酶、肝素、缓冲液及盐；
所述试剂二包括凝血酶的发色底物、缓冲液及甘露醇；
所述提速液包括磷酸氢二钠溶液；
所述终止液包括聚氯乙烯树酯及叠氮化钠。
2.根据权利要求1所述的一种抗凝血酶III测定试剂盒，其特征在于，所述试剂一中：凝血酶的浓度为5～20IU/ml、肝素的含量为0.8～1.2wt％、盐的含量为0.25～0.5wt％。
3.根据权利要求2所述的一种抗凝血酶III测定试剂盒，其特征在于，所述试剂二中：凝血酶的发色底物的含量为2.5～4.5wt％、甘露醇的含量为0.3～0.5wt％。
4.根据权利要求3所述的一种抗凝血酶III测定试剂盒，其特征在于，所述提速液中磷酸氢二钠溶液的浓度为1～3IU/ml，所述终止液中：聚氯乙烯树酯的含量为0.3～1.0wt％及叠氮化钠的含量为0.5～0.8wt％。
5.根据权利要求1或4任一项所述的一种抗凝血酶III测定试剂盒，其特征在于，所述发色底物为S2238、S～2160和Chromozym TH中的一种。
6.根据权利要求1或4任一项所述的一种抗凝血酶III测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为Tris。
7.根据权利要求1或4任一项所述的一种抗凝血酶III测定试剂盒，其特征在于，所述盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸铵的一种或多种。
8.一种应用权利要求1～7任一项所述的抗凝血酶III测定试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：取需检测液置于第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内；
S2：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂一，孵育5～10min；
S3：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入试剂二及提速液，混合均匀孵育5～10min；
S4：分别在第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶内加入终止液，观察第一试剂瓶、第二试剂瓶及第三试剂瓶的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中抗凝血酶III浓度。
9.根据权利要求8所述的一种抗凝血酶III测定试剂盒的使用方法，其特征在于，所述试剂一的加入量为检测液容积的2.5～5.8％，所述试剂二的加入量为检测液容积的1.3～2.5％，所述提速液的加入量为检测液容积的0.5～1.2％，所述终止液的加入量为检测液容积的0.5～1.4％。
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