CN111394424A - 一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂及方法 - Google Patents

一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂及方法 Download PDF

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Abstract

本发明实施例公开了一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂，所述检测试剂包括第一试剂、第二试剂和第三试剂，其中，所述第一试剂包括碳酸钠。所述检测试剂基于酶法测定人血清肌酐，同时能够避免血清中羟苯磺酸钙类药物的干扰，克服了现有酶法检测肌酐的缺点。本发明实施例还提供了一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测方法。

Description

一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂及方法
技术领域
本发明涉及人体生化检测技术领域，具体涉及一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂及方法。
背景技术
肌酐是肌细胞内产生的肌酸的最终代谢产物。在肾功能低下的肾脏疾病、肌肉疾病时，血清肌酐浓度增高；肌肉营养障碍时，血清肌酐浓度降低。尿中肌酐的排泄量与肌肉总量成正比，不受食物、尿量、肾小管重吸收的影响，因此可用于肾小球滤过功能的检查。
以往多使用碱性苦味酸法(Jaffe法)测定肌酐，此法属于传统肌酐检测方法，缺点是特异性不高，干扰较多且稳定性不好。近来广泛使用酶法测定肌酐，此法非特异反应少且线性，相比Jaffe法，灵敏度和其他性能也更优；但此法存在羟苯磺酸钙类药物的干扰，且一直无有效的方法可以解决。
羟苯磺酸钙是一种血管保护药，可以通过调节微血管壁的生理功能来减小血管阻力，主要用于糖尿病肾病、慢性肾功能不全等病人，使用量相当可观。近来有诸多文献报道，羟苯磺酸钙对肌酐酶法检测有严重的负干扰。宋静芳，潘本友，伍贤鼎等(羟苯磺酸钙对氧化酶法检测血清肌酐影响的临床研究[J].当代医学,2019,25(09):175-177)研究了羟苯磺酸钙对肌酐酶法检测的干扰的情况，发现羟苯磺酸钙会导致肌酐测定试剂盒(肌氨酸氧化酶法)出现负偏差。当羟苯磺酸钙浓度在4.7mg/L以上，干扰值高于干扰实验的可接受标准(dmax)。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂。所述检测试剂基于酶法测定人血清肌酐，同时能够避免血清中羟苯磺酸钙类药物的干扰，克服了现有酶法检测肌酐的缺点。本发明实施例还提供了一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测方法。
为实现上述目的，本发明实施例的一个方面提供了一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂，所述检测试剂包括第一试剂(R1)、第二试剂(R2)和第三试剂(R3)，其中，
所述第一试剂包括碳酸钠；所述第二试剂包括三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)、肌氨酸氧化酶、肌酸激酶和抗坏血酸氧化酶；所述第三试剂包括三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)、4-氨基安替比林(4-AAP)、肌酐酶、过氧化物酶和叠氮钠。
在一个实施方案中，所述第一试剂(R1)为液体试剂，例如水溶液；且所述第一试剂中碳酸钠的浓度为1g/L。
在一个实施方案中，所述第二试剂(R2)为液体试剂，例如水溶液；且所述第二试剂中各成分的浓度为：三羟甲基甲胺基丙磺酸9.4g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐0.2g/L、肌氨酸氧化酶40KU/L、肌酸激酶20KU/L和抗坏血酸氧化酶2KU/L。
在一个实施方案中，所述第三试剂(R3)为液体试剂，例如水溶液；且所述第三试剂中各成分的浓度为：三羟甲基甲胺基丙磺酸9.4g/L、4-氨基安替比林0.3g/L、肌酐酶100KU/L、过氧化物酶2KU/L和叠氮钠1g/L。
上述试剂各成分的组配和浓度的设置能够使得所述试剂充分去除血清中羟苯磺酸钙的影响，并获得准确的肌酐含量测定值。
在一个实施方案中，所述第二试剂中还包括氯霉素和庆大霉素。
进一步的，所述第二试剂中氯霉素的浓度为0.3g/L，庆大霉素的浓度为0.2g/L。
通过在所述试剂中添加适当含量的氯霉素和庆大霉素，能够有利地去除测试过程中微生物带来的不利影响，且不会对肌酐含量测定带来负面影响。
在一个实施方案中，所述第一试剂的pH值为11.5；所述第二试剂的pH值为7.5；所述第三试剂的pH值为7.5。
所述试剂中pH值的设置能够确保试剂中各成分在适合的反应条件下进行反应，保证检测速度和结果的准确性。
本发明实施例的另一个方面还提供了一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测方法，所述检测方法包括使用上述任一种检测试剂进行人血清肌酐含量检测。
进一步的，所述检测方法包括下列步骤：
(1)除去待检测人血清中的羟苯磺酸钙；
(2)除去内源性肌酐和肌氨酸；
(3)进行肌酐测定。
进一步的，步骤(3)中生成醌类色素，且所述醌类色素的颜色深度与所述待检测人血清中的肌酐浓度成正比。
其中，各步骤中检测试剂的检测原理可通过下列反应式示意性地表示，包括但不限于：
步骤(1)：除去羟苯磺酸钙类成分
碳酸钠+羟苯磺酸钙羟苯磺酸钙中羟基的H+被Na+取代，不再有消耗H2O2的能力，干扰因素被去除。
步骤(2)：除去内源性肌酐和肌氨酸
Figure BDA0002407961440000031
Figure BDA0002407961440000032
Figure BDA0002407961440000033
步骤(3)：肌酐测定
Figure BDA0002407961440000034
Figure BDA0002407961440000035
Figure BDA0002407961440000036
Figure BDA0002407961440000037
本发明抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂和检测方法，通过采用液体三试剂比色法检测人血清中肌酐的含量。使用时可采用具有三试剂检测功能的全自动生化分析仪，如日立7080全自动分析仪等，利用三试剂终点法进行测定。
例如，可以将R1、R2和R3放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、Randox复合校准品和样本，具体操作可以通过下列表1和表2显示：
表1三试剂终点法测定条件
反应温度 37℃ 测定方法 终点法
主波长 546nm 副波长 700nm
反应方向 正反应 定标模式 线性
表2三试剂终点法操作步骤
Figure BDA0002407961440000041
由此，根据校准品浓度对相应△A，采用两点线性校准作标准曲线；样品中的肌酐浓度通过样品的△A从标准曲线上计算得出。
本发明技术方案具有如下优点：
1、通过配制第一试剂、第二试剂和第三试剂形成组合试剂，使用时通过在第一试剂中添加例如pH值为11.5的碳酸钠来分解羟苯磺酸钙，有效消除羟苯磺酸钙药物干扰；
2、同时保证检测的准确性、重复性、线性和抗干扰性能。
3、能够实现线性范围宽，稳定性好，准确度高，抗羟苯磺酸钙药物干扰能力强的血清肌酐检测。
4、检测试剂容易配制，使用方便，便于大规模推广。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例中配制所述抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂。所述检测试剂包括第一试剂(R1)、第二试剂(R2)和第三试剂(R3)，其中，
R1：水溶液，pH值11.5；各成分浓度：碳酸钠1g/L；
R2：水溶液，pH值7.5；各成分浓度：三羟甲基甲胺基丙磺酸9.4g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐0.2g/L、肌氨酸氧化酶40KU/L、肌酸激酶20KU/L、抗坏血酸氧化酶2KU/L，氯霉素0.3g/L和庆大霉素0.2g/L；
R3：水溶液，pH值7.5；各成分浓度：三羟甲基甲胺基丙磺酸9.4g/L、4-氨基安替比林0.3g/L、肌酐酶100KU/L、过氧化物酶2KU/L和叠氮钠1g/L。
实施例2
抗干扰检测试验
对实施例1配制的人血清肌酐含量检测试剂和市面对照试剂进行羟苯磺酸钙干扰性试验。
试验方法
取新鲜混合血清，分成5等份，分别加入等体积的不同浓度的羟苯磺酸钙药物和水，使其在血清中的浓度达到规定的要求，然后分别用实施例1配制的检测试剂(酶法三试剂)，与市场常见的肌酐试剂(酶法双试剂)同时对比，测定血清中肌酐的含量。
测定结果
根据文献、生物变异和临床意见以肌酐偏差(6.63μmol/L)作为干扰试验的接受标准(dMaX)(余久如，潘桂红，鞠萍.羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的影响[J].中国检测医学杂志,2013,2月第36卷第二期)。试验结果如下列表3和表4所示。
表3对照试剂(双试剂)
Figure BDA0002407961440000061
表4本发明实施例1检测试剂(三试剂)
Figure BDA0002407961440000062
由上表3可以看出，市场常见的肌酐试剂(酶法双试剂)在羟苯磺酸钙浓度5mg/L时，绝对偏差为-14.7，不合格。参见表4，本发明实施例1试剂由于在反应第一步，对羟苯磺酸钙进行了分解，抗羟苯磺酸钙干扰效果明显优于市场常见的肌酐试剂(酶法双试剂)，在羟苯磺酸钙浓度6.25-50mg/L之间时，对测试结果没有影响。
本发明的试剂在羟苯磺酸钙浓度<50mg/L时，测试结果不受影响；而对照试剂在上述浓度干扰时，受到明显干扰。本发明技术方案提供的检测试剂和检测方法能够有效抗血药浓度在50mg/L以内的羟苯磺酸钙药物的干扰，保证临床肌酐试剂检测的准确性。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括第一试剂、第二试剂和第三试剂，其中，
所述第一试剂包括碳酸钠；所述第二试剂包括三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)、肌氨酸氧化酶、肌酸激酶和抗坏血酸氧化酶；所述第三试剂包括三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)、4-氨基安替比林(4-AAP)、肌酐酶、过氧化物酶和叠氮钠。
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第一试剂为液体试剂；且所述第一试剂中碳酸钠的浓度为1g/L。
3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第二试剂为液体试剂；且所述第二试剂中各成分的浓度为：三羟甲基甲胺基丙磺酸9.4g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐0.2g/L、肌氨酸氧化酶40KU/L、肌酸激酶20KU/L和抗坏血酸氧化酶2KU/L。
4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第三试剂为液体试剂；且所述第三试剂中各成分的浓度为：三羟甲基甲胺基丙磺酸9.4g/L、4-氨基安替比林0.3g/L、肌酐酶100KU/L、过氧化物酶2KU/L和叠氮钠1g/L。
5.根据权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，所述第二试剂中还包括氯霉素和庆大霉素。
6.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于，所述第二试剂中氯霉素的浓度为0.3g/L，庆大霉素的浓度为0.2g/L。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的检测试剂，其特征在于，所述第一试剂的pH值为11.5；所述第二试剂的pH值为7.5；所述第三试剂的pH值为7.5。
8.一种抗羟苯磺酸钙干扰的人血清肌酐含量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括使用根据权利要求1-7中任一项所述的检测试剂进行人血清肌酐含量检测。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括下列步骤：
(1)除去待检测人血清中的羟苯磺酸钙；
(2)除去内源性肌酐和肌氨酸；
(3)进行肌酐测定。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中生成醌类色素，且所述醌类色素的颜色深度与所述待检测人血清中的肌酐浓度成正比。
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