JPH0353898A - 体液中の抗トロンビン3を測定する方法及び試薬 - Google Patents
体液中の抗トロンビン3を測定する方法及び試薬Info
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- JPH0353898A JPH0353898A JP2185456A JP18545690A JPH0353898A JP H0353898 A JPH0353898 A JP H0353898A JP 2185456 A JP2185456 A JP 2185456A JP 18545690 A JP18545690 A JP 18545690A JP H0353898 A JPH0353898 A JP H0353898A
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- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、試料とトロンビン及びトロンビンの作用下に
発色する色原住基質との反応及び生じる色の測定による
、体液中の抗トロンビン■を測定する方法並びにそのた
めに好適な試薬に関する。
発色する色原住基質との反応及び生じる色の測定による
、体液中の抗トロンビン■を測定する方法並びにそのた
めに好適な試薬に関する。
抗トロンビンIは、その調節に役立つ血液凝固系の1因
子である。血液凝固は、種々のプロテアーゼのカスケー
ド様結合作用によシ起こる。
子である。血液凝固は、種々のプロテアーゼのカスケー
ド様結合作用によシ起こる。
前後に接絖された活性化工程の最後のものは、トロンビ
ンを放出し、これは、再びフイブリノーデンの分解によ
シ、フィゾリンモノマーを生じ、これは凝集し、血栓を
形成する。最も重要な調節剤は抗トロンビンl(ATI
)であシ、これはトロンビン及び他の血液凝固に寄与す
るプロテアーゼと一緒になって錯体(これは活性中心を
ブロツクする)を形成することができる。
ンを放出し、これは、再びフイブリノーデンの分解によ
シ、フィゾリンモノマーを生じ、これは凝集し、血栓を
形成する。最も重要な調節剤は抗トロンビンl(ATI
)であシ、これはトロンビン及び他の血液凝固に寄与す
るプロテアーゼと一緒になって錯体(これは活性中心を
ブロツクする)を形成することができる。
血液中の抗トロンビンI一含分は、健康なヒトでは、比
較的狭い範囲内に存在する。減少されたわ゛1、トロン
ビン■一含分は、消費凝因病(Verbrauchsk
oagulopathie)、重症の肝臓疾病又は類似
の病気によシ著るしく制限されうる。
較的狭い範囲内に存在する。減少されたわ゛1、トロン
ビン■一含分は、消費凝因病(Verbrauchsk
oagulopathie)、重症の肝臓疾病又は類似
の病気によシ著るしく制限されうる。
低減された抗トロンビンI一含分は、現在、般に血栓症
の危険率と評価される。従って、多くの場合に、抗トロ
ンビン■一含分は、急性血栓症の場合にも低減されてい
る。従って、抗トロンビン■一含分は、馳床診断字に唄
けるhaなパラメータである。
の危険率と評価される。従って、多くの場合に、抗トロ
ンビン■一含分は、急性血栓症の場合にも低減されてい
る。従って、抗トロンビン■一含分は、馳床診断字に唄
けるhaなパラメータである。
す
既に、免疫学的方法を基旋と〆るか又は色原性基負の使
用下に3ける抗トロンビンIを検出する種々の方法が公
知である。後者の場合には、試料に、この試料中に存在
するATIと反応(3) ?、失活されるトロンビンを添加する。次いで、過剰の
トロンビンを、トロンビンの作用によシ着色された物質
を形成する色原住基質と共にインキユベートシ、色形成
を評価することにより検出し、この際、抗トロンビンl
一含分は、色形成に対し間嫉的に関係している。抗ト!
ンビンIの測定法は、例えば、次の文■献に記載されて
いる:ベルグマイヤ−(Bergmeier)のメソッ
ズ・オデ・エンザ゛イマティック・アナリシス(Met
hods of Bnzymatic Analysi
s ; VerlagOhemie)第3版、5巻44
1〜448;工.ウイット(Witt)のノイエ●メト
ーデン●デル●デリンヌングスアナリイゼ・ミット・ク
ロモrン●ズゾストラーテン(Neue Method
en derGerinnungsanalyse m
it Ohromogene=+Substraten
)、ストルモルクン(Stormorken)のノイエ
・メトーデン・デル・グリンヌングスアナリイゼ(Ne
ue Methoden lierGerinnung
sanalyse) l l 9 〜1 2 1頁、オ
デガルト(Odegard)等ニよるヘモスタシス(4
) (aaemostas1s)、 7 : 2 0 2
〜2 0 9 (1978Lファリード(Faread
)等によるクロモゲニツク・ペプチド●ズゾストラーテ
ス( Ohromogeni cKakkar.
Livingstone発行X1979)、1
83〜191及びアヒルトガールド (Abi’ldgaard)等によるThromb.
Rea. i1、549〜553(1977)。
用下に3ける抗トロンビンIを検出する種々の方法が公
知である。後者の場合には、試料に、この試料中に存在
するATIと反応(3) ?、失活されるトロンビンを添加する。次いで、過剰の
トロンビンを、トロンビンの作用によシ着色された物質
を形成する色原住基質と共にインキユベートシ、色形成
を評価することにより検出し、この際、抗トロンビンl
一含分は、色形成に対し間嫉的に関係している。抗ト!
ンビンIの測定法は、例えば、次の文■献に記載されて
いる:ベルグマイヤ−(Bergmeier)のメソッ
ズ・オデ・エンザ゛イマティック・アナリシス(Met
hods of Bnzymatic Analysi
s ; VerlagOhemie)第3版、5巻44
1〜448;工.ウイット(Witt)のノイエ●メト
ーデン●デル●デリンヌングスアナリイゼ・ミット・ク
ロモrン●ズゾストラーテン(Neue Method
en derGerinnungsanalyse m
it Ohromogene=+Substraten
)、ストルモルクン(Stormorken)のノイエ
・メトーデン・デル・グリンヌングスアナリイゼ(Ne
ue Methoden lierGerinnung
sanalyse) l l 9 〜1 2 1頁、オ
デガルト(Odegard)等ニよるヘモスタシス(4
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〜2 0 9 (1978Lファリード(Faread
)等によるクロモゲニツク・ペプチド●ズゾストラーテ
ス( Ohromogeni cKakkar.
Livingstone発行X1979)、1
83〜191及びアヒルトガールド (Abi’ldgaard)等によるThromb.
Rea. i1、549〜553(1977)。
一般に、試験時の防害をさけるために、試料は非常に著
るレく稀釈される。それというのも、試料の固有色、濁
シ及び一一値の偏シ並びに塩含分は、試験バッチ中の試
料量を少なく測定できる程、測定結果に少なく影響する
からである。
るレく稀釈される。それというのも、試料の固有色、濁
シ及び一一値の偏シ並びに塩含分は、試験バッチ中の試
料量を少なく測定できる程、測定結果に少なく影響する
からである。
従って、殊に分析装置での反応速度論的測定の実施の際
には、1:1500までの範囲の試料稀釈率で操作され
る。しかしながら、このことはへ日常作業(Routi
ne) (特殊な緊急状態)にとっては非実際的である
。
には、1:1500までの範囲の試料稀釈率で操作され
る。しかしながら、このことはへ日常作業(Routi
ne) (特殊な緊急状態)にとっては非実際的である
。
従って、公知の検出法を改良し、分析装置内で実施する
ことができ、短時間で、かつ試料稀釈することなしに実
施可能であb1特有の標準の使用を可能とする方法を提
供することが本発明の課題である。
ことができ、短時間で、かつ試料稀釈することなしに実
施可能であb1特有の標準の使用を可能とする方法を提
供することが本発明の課題である。
この課題は、試料とトロンビン及びトロンビンの作用下
に発色する色原住基質との反応及び生じる色の測定によ
る、体液中の抗トロンビンIの測定法によシ解決され、
この反応は変性剤又はテトラペゾチドGly−Pro−
Arg−Proの存在で実施し、基質として、トロンビ
ンに対するその感度がTo s−G’ly−Pro−A
rg−pNAと比べてH 〜Mooの低いオリゴペプチ
ド基質を使用することよシ成る。
に発色する色原住基質との反応及び生じる色の測定によ
る、体液中の抗トロンビンIの測定法によシ解決され、
この反応は変性剤又はテトラペゾチドGly−Pro−
Arg−Proの存在で実施し、基質として、トロンビ
ンに対するその感度がTo s−G’ly−Pro−A
rg−pNAと比べてH 〜Mooの低いオリゴペプチ
ド基質を使用することよシ成る。
意外にも、変性剤もしくはテトラペプチドの添加及びト
ロンビンに対して比較的鈍感なオリゴペプチド基質の使
用によう、抗トロンビン■を正確かつ再現可能に測定す
ることが成巧し、この際、長い試験シリーズも分析装置
に悪影響を及ぼすことなく実施することができる。
ロンビンに対して比較的鈍感なオリゴペプチド基質の使
用によう、抗トロンビン■を正確かつ再現可能に測定す
ることが成巧し、この際、長い試験シリーズも分析装置
に悪影響を及ぼすことなく実施することができる。
体液内の抗トロンビンIを測定するために、試料溶液に
トロンビンを過剰に(抗トロンビンIに対して)加える
。この際に、抗トロンビンlとトロンビンから錯体が生
じる。このような錯結合されたトロンビンはもはやプロ
テアーゼ活性を有しない。次いで、この溶液に、トロン
ビンによシ色形戒下に分解されうる基質を添加する。過
剰に存在する錯結合されなかったトロンビンのみが、基
質と反応する。測定信号は試料の抗トロンビンI濃度と
反比例する。この方法を実施するために、抗トロンビン
Iとトロンビンとの間の反応を促進するヘパリンを添加
するのが有利である。
トロンビンを過剰に(抗トロンビンIに対して)加える
。この際に、抗トロンビンlとトロンビンから錯体が生
じる。このような錯結合されたトロンビンはもはやプロ
テアーゼ活性を有しない。次いで、この溶液に、トロン
ビンによシ色形戒下に分解されうる基質を添加する。過
剰に存在する錯結合されなかったトロンビンのみが、基
質と反応する。測定信号は試料の抗トロンビンI濃度と
反比例する。この方法を実施するために、抗トロンビン
Iとトロンビンとの間の反応を促進するヘパリンを添加
するのが有利である。
この方法に好適な基質が多くあるが、そのうち、最も多
く使用されるものはTos−Gly−Pro−Arg−
pNA−アセテー} (OhromozJ TH)であ
る。
く使用されるものはTos−Gly−Pro−Arg−
pNA−アセテー} (OhromozJ TH)であ
る。
この試薬は高感度を有する。
本発明によれば、付加的に第1工程に変性剤又はテトラ
ペゾチドGay−Pro−Arg−Proを添加する。
ペゾチドGay−Pro−Arg−Proを添加する。
長い試験工程で、非稀釈試料の使用の際に(7)
はトロンビン出発値は一定のま筐残らないことが判明し
た。このことは、前記成分の添加によυ排除される。.
変性剤としては、この分野で公知の物質が好適である。
た。このことは、前記成分の添加によυ排除される。.
変性剤としては、この分野で公知の物質が好適である。
尿素又は塩酸グアニジンを使用するのが有利である。こ
の変性剤を、この試験で0.1〜1モル/l又は基質溶
液中で1〜6モル/lの濃度で使用するのが有利である
。成分としてテトラペプチドを使用する際には、これを
テスト中で0.04〜1ynJ’/一の範囲で添加する
のが有利である。
の変性剤を、この試験で0.1〜1モル/l又は基質溶
液中で1〜6モル/lの濃度で使用するのが有利である
。成分としてテトラペプチドを使用する際には、これを
テスト中で0.04〜1ynJ’/一の範囲で添加する
のが有利である。
変性剤もしくはテトラペゾチドは、既に試薬溶液に添加
するか又は試料溶液を試薬溶液と共にインキユベートす
る際に添加することができる。変性剤として尿素を使用
する際には、尿素を、まず基質と一緒に添加するのが有
利である。
するか又は試料溶液を試薬溶液と共にインキユベートす
る際に添加することができる。変性剤として尿素を使用
する際には、尿素を、まず基質と一緒に添加するのが有
利である。
それというのも、尿素は、トロンビン安定性に不都合な
影響を有するからである。
影響を有するからである。
本発明方法の更なる主要特徴はクロモチーム( Ohr
omozym■) THに比べてその感度が込〜Moo
であるzトロンビンに対する色原性オリゴペプ(8) ?ド基質の使用である。この条件を満たすすべての基質
v1例えば、OBZ−Va7−Gly−Arg−pNH
,H−D−Pro−Phe−Arg−pNA , H
−D−VaI!−Lue−Arg−pNA ,Bz−V
aA−Leu−Arg−pNH , Bz−Leu−L
eu−Arg−pNA ,Bz−Phe−Leu−Ar
g−pNA並びにBz−Leu一工1e−Arg−pN
A( OBZ :カルボペンゾキシ、Bz:ベンゾイル
、D−Pro : D−プロリン、D−Val: D−
バリン、pNA : p−二ト■アニリン)が好適であ
る。
omozym■) THに比べてその感度が込〜Moo
であるzトロンビンに対する色原性オリゴペプ(8) ?ド基質の使用である。この条件を満たすすべての基質
v1例えば、OBZ−Va7−Gly−Arg−pNH
,H−D−Pro−Phe−Arg−pNA , H
−D−VaI!−Lue−Arg−pNA ,Bz−V
aA−Leu−Arg−pNH , Bz−Leu−L
eu−Arg−pNA ,Bz−Phe−Leu−Ar
g−pNA並びにBz−Leu一工1e−Arg−pN
A( OBZ :カルボペンゾキシ、Bz:ベンゾイル
、D−Pro : D−プロリン、D−Val: D−
バリン、pNA : p−二ト■アニリン)が好適であ
る。
これらの例として挙げられている化合物は、全て色原体
として、トロンビンによシ分解されるp−ニトロアニリ
ンを有する。他の慣用の色原体例えば基質中にpNAの
代シに存在しうる5一アミノー2−ニトロ安息査酸又は
メトキシーニトロアニリンも好適である。基質として、
式: R−OCO−Gly−Pro−Arg−pNA
(ここでRはC−原子数1〜3を有するアルキル基を表
わし、特にメチル基が有利である)のペグチドを使用す
るのが有利である。
として、トロンビンによシ分解されるp−ニトロアニリ
ンを有する。他の慣用の色原体例えば基質中にpNAの
代シに存在しうる5一アミノー2−ニトロ安息査酸又は
メトキシーニトロアニリンも好適である。基質として、
式: R−OCO−Gly−Pro−Arg−pNA
(ここでRはC−原子数1〜3を有するアルキル基を表
わし、特にメチル基が有利である)のペグチドを使用す
るのが有利である。
特に、クロモツイム■THに比べて×o−%0の低い感
度を有する基質を使用するのが有利である。
度を有する基質を使用するのが有利である。
基質が試験溶液中に存在する基質濃度は、そのミハエリ
ス定数に依シ決まる。その都度のミハエリス定数の2〜
20倍の範囲の基質濃度が好適である。
ス定数に依シ決まる。その都度のミハエリス定数の2〜
20倍の範囲の基質濃度が好適である。
この方法に使用されるトロンビン濃度は、本発明によれ
ば、技術水準で使用されているトロンビン濃度の30倍
まで、有利に7〜15倍〔トロンビン約6 3 0 U
/試験溶液IJ(25℃で基質としてのTos−Gly
−Pro−Arg−pNA f有する国際酵素単位トロ
ンビン)までに相当〕まで高めることができる。この範
囲内であるが、よシ少なくないトロンビンを用いて、本
発明方法で2 な訃直線状較正曲線を得ることができ、従で、反応速度
測定の実施は広範囲で、かつ特に快適な試験実施が分析
装置で、標準を用いるだけで可能になる。即ち、測定範
囲にわたる直線性が得られない場合は、多数の標準を用
いて操作すべきであシ、このことが、例えば緊急の場合
にhaであるこの試験の迅速使用を困紬にする。
ば、技術水準で使用されているトロンビン濃度の30倍
まで、有利に7〜15倍〔トロンビン約6 3 0 U
/試験溶液IJ(25℃で基質としてのTos−Gly
−Pro−Arg−pNA f有する国際酵素単位トロ
ンビン)までに相当〕まで高めることができる。この範
囲内であるが、よシ少なくないトロンビンを用いて、本
発明方法で2 な訃直線状較正曲線を得ることができ、従で、反応速度
測定の実施は広範囲で、かつ特に快適な試験実施が分析
装置で、標準を用いるだけで可能になる。即ち、測定範
囲にわたる直線性が得られない場合は、多数の標準を用
いて操作すべきであシ、このことが、例えば緊急の場合
にhaであるこの試験の迅速使用を困紬にする。
試料量は、この試験の測定範囲並びに技術的可能性に依
って決1る。下限は、分析装置のために1μlである。
って決1る。下限は、分析装置のために1μlである。
上限は分析装置の型に依シ決まシ、通例5μlより多く
ない。この試料董が高いと、その他は同じ試験条件下で
は、狭い測定範囲を提供し、更に、よシ高い試料量では
、フイゾリン形成による妨害の程度が増大する。
ない。この試料董が高いと、その他は同じ試験条件下で
は、狭い測定範囲を提供し、更に、よシ高い試料量では
、フイゾリン形成による妨害の程度が増大する。
他方、よシ少ない試料量では、特有の測定信号が低下し
、このことは、非常に少ない量の秤取正確度の上昇に伴
ない、この試験の精度の劣悪化をもたらす。
、このことは、非常に少ない量の秤取正確度の上昇に伴
ない、この試験の精度の劣悪化をもたらす。
本発明のもう1つの目的は、抗トロンビン■の測定試薬
であシ、これは、トロンビン、変性剤又はテトラペゾチ
ドGly−Pro−Arg−Pro並びにトロンビンの
作用下に発色し、クロモツイム■THと比べて外〜%0
0のトロンビンに対する感度を有する色原住基質を含有
する。
であシ、これは、トロンビン、変性剤又はテトラペゾチ
ドGly−Pro−Arg−Pro並びにトロンビンの
作用下に発色し、クロモツイム■THと比べて外〜%0
0のトロンビンに対する感度を有する色原住基質を含有
する。
有利な実施形では、この試薬は、付加的にな訟ヘハリン
を含有する。
を含有する。
(11)
次の実施例につき本発明を詳述する:
例1(比較)
Hol一緩衝液(pH8−1;これは同時にヘパリンを
充分な量( 2 USP一単位/ ml )で含有する
〕20部と混合する。トロンビン出発値の測定のために
、このトロンビン試薬2TLlに、生理食塩水0.10
mlを、かつ酵素/基質一反応の開始時にトロンビン基
質溶液(クロモツィム■TH:Tos−Gly−Pro
−Arg−pNA X試験バッチ中0.16mモル/l
)0.200−を添加する。このように規定された試験
バッチ中では、反応速度CjWmin )が4 0 5
nmで25℃では0.220、37℃では0.4 0
0に達する。
充分な量( 2 USP一単位/ ml )で含有する
〕20部と混合する。トロンビン出発値の測定のために
、このトロンビン試薬2TLlに、生理食塩水0.10
mlを、かつ酵素/基質一反応の開始時にトロンビン基
質溶液(クロモツィム■TH:Tos−Gly−Pro
−Arg−pNA X試験バッチ中0.16mモル/l
)0.200−を添加する。このように規定された試験
バッチ中では、反応速度CjWmin )が4 0 5
nmで25℃では0.220、37℃では0.4 0
0に達する。
例 2
試料溶液中の抗トロンビン■を例1に記載の方法で測定
するが、ここでは、クロモツィム■TH 9本発明の基
質で代えた。
するが、ここでは、クロモツィム■TH 9本発明の基
質で代えた。
試料稀釈しない手による試験:
(19)
非稀釈試料 0.0 1 1111 (試験菫l
ml当少試料3、6μlに相当) トロンビン試薬 1.25d(試験中のトロンビン3
0 8 Tl/Is技術水準に対して1 4.7 4
倍) 基 質 0.2 5 d (試験中のメチル−
OCO−01.y−Pro−Arg−PNA Q.29
8mモル/A’%尿素0−5モル/l )分析装置での
試験: 一ヒタチ(Hitabhi) 704 / 705 :
非稀釈試料 0.003mA!(試験ii一当シ試
料7.1μlに相当) トロンビン試薬 0.5 5 0 ml(試験中のト
ロンビン3 0 8 U/i及び Gly−Pro−Arg−Pro 24 8■/ l
)基 質 0.070d(試験中のMeO−f
ly−Pro−Arg−pNA 0.2 9 8mモル
//) 一ヒタチ717: 非稀釈試料 0.002mA!(試験ii 1rn
l当多試料6,6μに相当) トロンビン試薬 0.250mA!(試験中のトロン
ビン3 0 8 U/t及びGl7−prO−Arg−
prO 2 4 8 ”9/ l )基 質
0.050d(試験中のMeO(30−Gly−Pro
−Arg−pNA0.2 9 8 mモル/11) 第1表 ここで選択された試験条件下に訃ける、クロモツイム■
TH及びMeOOO−Gly−Pro−Arg−pNA
の使用時のトロンビン出発値(試料不合)の比較MeO
OO−Gly−Pro− クロモツイム■THArg−
pNA ( J B/ min) ( A l/ mi
n)ヒタチ717、37℃ [1.400
5.700ヒタチ71入25℃ 0.
200 2.900ヒタチ70437℃
0.300 4.300ヒタチ70
4%25℃ 0.150 2.1
00このヒタチ装置の酵素/基質一反応速度の測定可能
性の限度は約1.o o < ai/min )である
。
ml当少試料3、6μlに相当) トロンビン試薬 1.25d(試験中のトロンビン3
0 8 Tl/Is技術水準に対して1 4.7 4
倍) 基 質 0.2 5 d (試験中のメチル−
OCO−01.y−Pro−Arg−PNA Q.29
8mモル/A’%尿素0−5モル/l )分析装置での
試験: 一ヒタチ(Hitabhi) 704 / 705 :
非稀釈試料 0.003mA!(試験ii一当シ試
料7.1μlに相当) トロンビン試薬 0.5 5 0 ml(試験中のト
ロンビン3 0 8 U/i及び Gly−Pro−Arg−Pro 24 8■/ l
)基 質 0.070d(試験中のMeO−f
ly−Pro−Arg−pNA 0.2 9 8mモル
//) 一ヒタチ717: 非稀釈試料 0.002mA!(試験ii 1rn
l当多試料6,6μに相当) トロンビン試薬 0.250mA!(試験中のトロン
ビン3 0 8 U/t及びGl7−prO−Arg−
prO 2 4 8 ”9/ l )基 質
0.050d(試験中のMeO(30−Gly−Pro
−Arg−pNA0.2 9 8 mモル/11) 第1表 ここで選択された試験条件下に訃ける、クロモツイム■
TH及びMeOOO−Gly−Pro−Arg−pNA
の使用時のトロンビン出発値(試料不合)の比較MeO
OO−Gly−Pro− クロモツイム■THArg−
pNA ( J B/ min) ( A l/ mi
n)ヒタチ717、37℃ [1.400
5.700ヒタチ71入25℃ 0.
200 2.900ヒタチ70437℃
0.300 4.300ヒタチ70
4%25℃ 0.150 2.1
00このヒタチ装置の酵素/基質一反応速度の測定可能
性の限度は約1.o o < ai/min )である
。
他の公知の分析装置でも、この高いApa/ min−
値では、もはや不可能な分析限度につき当たる。
値では、もはや不可能な分析限度につき当たる。
もちろん、同じことが手による試験にもあては壕シ、こ
こでは、前記条件下で予め稀釈せずに、基質としてクロ
モツイム■THを用いると、25℃で3.3のJK一値
が現われ、37℃では3、0のJE一値が現われる。
こでは、前記条件下で予め稀釈せずに、基質としてクロ
モツイム■THを用いると、25℃で3.3のJK一値
が現われ、37℃では3、0のJE一値が現われる。
(15)
聰
入
0
任
V
誠
■
高い感度(クロモツイム■THの17条もしくは20%
)の基質を用いると、全ての試験バジョン(例えば37
℃もしくは高いトロンビン濃度)で非常に良好な結果で
実施されるとはかぎらないことが明らかでロシ、本発明
方法を有利に試料稀釈せずに実施できる範囲が認められ
る。
)の基質を用いると、全ての試験バジョン(例えば37
℃もしくは高いトロンビン濃度)で非常に良好な結果で
実施されるとはかぎらないことが明らかでロシ、本発明
方法を有利に試料稀釈せずに実施できる範囲が認められ
る。
(17)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、試料とトロンビン及びトロンビンの作用下に発色す
る色原性基質との反応及び生じる色の測定により、体液
中の抗トロンビンIIIを測定する方法において、この反
応を、変性剤又はテトラペプチドGly−Pro−Ar
g−Proの存在下で実施し、基質として、トロンビン
に対するその感度がTos−Gly−Pro−Arg−
pNAと比べて1/5−1/100の低いオリゴペプチ
ド基質を使用することを特徴とする、体液中の抗トロン
ビンIIIを測定する方法。 2、オリゴペプチド基質として、式: R−OCO−Gly−Pro−Arg−pNA〔式中R
は、C−原子数1〜6を有するアルキル基である〕を有
するペプチドを使用する、請求項1記載の方法。 3、トロンビン、変性剤又はテトラペプチドGly−P
ro−Arg−Pro及びトロンビンの作用下に発色す
る基質として、Tos−Gly−Pro−Arg−pN
Aと比べたその感度が1/5〜1/100の低いオリゴ
ペプチド基質を含有することを特徴とする、抗トロンビ
ンIIIの測定試薬
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3923340.5 | 1989-07-14 | ||
DE3923340A DE3923340A1 (de) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | Verfahren und reagenz zur bestimmung von antithrombin iii |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0353898A true JPH0353898A (ja) | 1991-03-07 |
JPH0734759B2 JPH0734759B2 (ja) | 1995-04-19 |
Family
ID=6385054
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2185456A Expired - Fee Related JPH0734759B2 (ja) | 1989-07-14 | 1990-07-16 | 体液中の抗トロンビン▲iii▼を測定する方法及び試薬 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0408075B1 (ja) |
JP (1) | JPH0734759B2 (ja) |
AT (1) | ATE119578T1 (ja) |
AU (1) | AU622339B2 (ja) |
DD (1) | DD298444A5 (ja) |
DE (2) | DE3923340A1 (ja) |
ES (1) | ES2069635T3 (ja) |
ZA (1) | ZA905489B (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995000663A1 (fr) | 1993-06-28 | 1995-01-05 | Nippon Shoji Kaisha, Ltd. | Methode de titrage de l'activite de l'antithrombine iii et kit de reactifs conçu a cet effet |
JP2008224687A (ja) * | 1998-06-25 | 2008-09-25 | Cardiovascular Diagnostics Inc | エカリンと磁性粒子を含む乾式化学試薬を用いてフィブリノーゲンアッセイを行う方法 |
US9340820B2 (en) | 2009-08-26 | 2016-05-17 | Queen's University Of Belfast | Compounds and methods for protease detection |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU628960B2 (en) * | 1989-04-07 | 1992-09-24 | Teijin Limited | Method of immunologically assaying human thrombin- antithrombin III complex, assay reagent and kit therefor |
EP0825443B1 (de) * | 1996-08-17 | 2001-04-11 | Aventis Behring Gesellschaft mit beschränkter Haftung | Verfahren zur Quantifizierung von Glykosaminoglykanen in Antithrombin III-haltigen Lösungen |
DE102005003145B4 (de) | 2005-01-21 | 2006-10-19 | Dade Behring Marburg Gmbh | Stablies, chromogenes Flüssigreagenz und dessen Verwendung in gerinnungsdiagnostischen Tests |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3005540A1 (de) * | 1980-02-14 | 1981-08-20 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zur bestimmung der biologischen aktivitaet von heparin im plasma |
US4473639A (en) * | 1982-09-15 | 1984-09-25 | Miles Laboratories, Inc. | Reagent strip test for antithrombin-III |
DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
DE3811647A1 (de) * | 1988-04-07 | 1989-10-26 | Behringwerke Ag | Verfahren und verpackung enthaltend mittel zur kinetischen bestimmung von faktor xiii |
-
1989
- 1989-07-14 DE DE3923340A patent/DE3923340A1/de not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-07-11 AU AU58885/90A patent/AU622339B2/en not_active Ceased
- 1990-07-12 DD DD90342731A patent/DD298444A5/de not_active IP Right Cessation
- 1990-07-13 DE DE59008621T patent/DE59008621D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-13 ES ES90113483T patent/ES2069635T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-13 AT AT90113483T patent/ATE119578T1/de active
- 1990-07-13 ZA ZA905489A patent/ZA905489B/xx unknown
- 1990-07-13 EP EP90113483A patent/EP0408075B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-16 JP JP2185456A patent/JPH0734759B2/ja not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995000663A1 (fr) | 1993-06-28 | 1995-01-05 | Nippon Shoji Kaisha, Ltd. | Methode de titrage de l'activite de l'antithrombine iii et kit de reactifs conçu a cet effet |
JP2008224687A (ja) * | 1998-06-25 | 2008-09-25 | Cardiovascular Diagnostics Inc | エカリンと磁性粒子を含む乾式化学試薬を用いてフィブリノーゲンアッセイを行う方法 |
US9340820B2 (en) | 2009-08-26 | 2016-05-17 | Queen's University Of Belfast | Compounds and methods for protease detection |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU5888590A (en) | 1991-01-17 |
EP0408075A3 (en) | 1992-02-26 |
DE59008621D1 (de) | 1995-04-13 |
EP0408075A2 (de) | 1991-01-16 |
EP0408075B1 (de) | 1995-03-08 |
ATE119578T1 (de) | 1995-03-15 |
DE3923340A1 (de) | 1991-01-24 |
DD298444A5 (de) | 1992-02-20 |
AU622339B2 (en) | 1992-04-02 |
ZA905489B (en) | 1991-04-24 |
ES2069635T3 (es) | 1995-05-16 |
JPH0734759B2 (ja) | 1995-04-19 |
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