CN111819281A - 用于神经变性疾病的基因疗法 - Google Patents

用于神经变性疾病的基因疗法 Download PDF

Info

Publication number
CN111819281A
CN111819281A CN201880081355.4A CN201880081355A CN111819281A CN 111819281 A CN111819281 A CN 111819281A CN 201880081355 A CN201880081355 A CN 201880081355A CN 111819281 A CN111819281 A CN 111819281A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nucleic acid
isolated nucleic
vector
sequence
optionally
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880081355.4A
Other languages
English (en)
Inventor
阿萨·阿贝利奥维奇
劳拉·赫克曼
赫维·莱茵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Privelle Therapeutics
Prevail Therapeutics Inc
Original Assignee
Privelle Therapeutics
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Privelle Therapeutics filed Critical Privelle Therapeutics
Priority to CN202110196181.XA priority Critical patent/CN113005123A/zh
Publication of CN111819281A publication Critical patent/CN111819281A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0085—Brain, e.g. brain implants; Spinal cord
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell
    • C12N2330/51—Specially adapted vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/14011—Baculoviridae
    • C12N2710/14041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/14043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vectore
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Abstract

本公开在一些方面涉及用于治疗神经变性疾病(例如肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和/或额颞叶痴呆(FTD)、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆或溶酶体贮积病)的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供了表达构建体，所述表达构建体包含编码一个或多个抑制性核酸(例如靶向C9orf72、TMEM106B、ATNX2、RPS25等)、野生型C9orf72蛋白或其部分或上述物质的任何组合的转基因。在一些实施方案中，本公开提供了通过将这些表达构建体施用到需要的对象来治疗ALS/FTD的方法。

Description

用于神经变性疾病的基因疗法
相关申请
本申请要求2018年10月8日提交的题为“用于神经变性疾病的基因疗法”(GENETHERAPIES FOR NEURODEGENERATIVE DISEASE)的美国临时申请系列号62/742,723和2017年10月23日提交的题为“用于神经变性疾病的基因疗法”(GENE THERAPIES FORNEURODEGENERATIVE DISEASE)的62/575,795在35U.S.C.119(e)下的利益，每个所述临时申请的全部内容通过引用并入本文。
背景技术
在人类中，肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和额颞叶痴呆(FTD)是与C9orf72基因中的六核苷酸重复区的扩增相关的神经变性疾病。通常，与所述C9orf72重复区的扩增相关的疾病由C9orf72蛋白的表达降低和由于有毒RNA病灶的积累导致的功能获得所引起。目前，用于ALS/FTD的治疗选项是有限的。
发明内容
本公开的多方面涉及可用于治疗神经变性疾病例如肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和/或额颞叶痴呆(FTD)、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆或溶酶体贮积病的组合物和方法。在一些实施方案中，本文描述的方法和组合物用于治疗患有以C9orf72基因的二肽重复区的扩增为特征的ALS/FTD的对象。
在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制C9orf72和/或脊髓小脑性共济失调蛋白2(ATXN2)和/或核糖体蛋白25(RPS25)的表达或活性的抑制性核酸的表达盒。在一些实施方案中，靶向ATXN的抑制性核酸包含SEQ ID NO：10-25中的任一者中阐述的序列或由所述序列组成。在一些实施方案中，靶向C9orf72的抑制性核酸包含SEQ IDNO：37-50中的任一者中阐述的序列或由所述序列组成。
在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，所述分离的核酸包含编码密码子优化的C9orf72蛋白(或其部分)的表达盒。在一些实施方案中，密码子优化的C9orf72蛋白包含SEQ ID NO：4中阐述的氨基酸序列。在一些实施方案中，密码子优化的C9orf72蛋白由具有SEQ ID NO：51中阐述的序列的核酸编码。
在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制C9orf72和/或ATXN2和/或RPS25的表达或活性的抑制性核酸，和野生型C9orf72蛋白(例如缺少致病性二肽重复序列(dipeptide repeat)扩增的C9orf72蛋白)的表达盒。在一些实施方案中，野生型C9orf72蛋白由SEQ ID NO：3或其部分编码。在一些实施方案中，野生型C9orf72蛋白包含SEQ ID NO：4中阐述的序列或其部分或由SEQ ID NO：4中阐述的序列或其部分组成。
在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制C9orf72的表达或活性的第一抑制性核酸，和抑制脊髓小脑性共济失调蛋白2(ATXN2)的表达或活性的第二抑制性核酸的表达盒。在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制C9orf72的表达或活性的第一抑制性核酸，和抑制跨膜蛋白106B(TMEM106B)的表达或活性的第二抑制性核酸的表达盒。在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制C9orf72的表达或活性的第一抑制性核酸和抑制RPS25的表达或活性的第二抑制性核酸的表达盒。在一些实施方案中，分离的核酸还包含编码野生型C9orf72蛋白的核酸序列(例如在SEQ IDNO：3中阐述的)。
在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制C9orf72的表达或活性的抑制性核酸和β-葡糖脑苷脂酶(GBA)蛋白的表达盒。在一些实施方案中，所述GBA蛋白是GBA1蛋白(例如由GBA1基因或其部分编码的蛋白)。在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制ATXN2的表达或活性的抑制性核酸和β-葡糖脑苷脂酶(GBA)蛋白的表达盒。在一些实施方案中，所述GBA蛋白是GBA1蛋白(例如由GBA1基因或其部分编码的蛋白)。在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其包含编码抑制TMEM106B的表达或活性的抑制性核酸和β-葡糖脑苷脂酶(GBA)蛋白的表达盒。在一些实施方案中，所述GBA蛋白是GBA1蛋白(例如由GBA1基因或其部分编码的蛋白)。
在一些实施方案中，抑制性核酸(例如第一抑制性核酸、第二抑制性核酸、第三抑制性核酸等)结合到编码C9orf72的二肽重复区的核酸(例如包含二肽重复区的C9orf72mRNA转录本)。在一些实施方案中，二肽重复区包含一个或多个GGGGCC重复序列(repeat)，或一个或多个CCCCGG重复序列(例如C9orf72的二肽重复区)。在一些实施方案中，二肽重复区包含23个或更多的(例如23至10,000之间的任何整数，例如24、25、30、50、100、1000、5000或10,000个)GGGGCC重复序列(例如C9orf72的正义链二肽重复区)或23个或更多的(例如23至10,000之间的任何整数，例如24、25、30、50、100、1000、5000或10,000个)CCCCGG重复序列(例如C9orf72的反义链二肽重复区)。
在一些实施方案中，抑制性核酸结合到编码C9orf72的、不是二肽重复区的区域的核酸(例如在C9orf72二肽重复区之外的核酸的部分)。在一些实施方案中，抑制性核酸结合到二肽重复区内的1个核苷酸(例如与二肽重复区相邻的)至约500个核苷酸之间的分离的核酸序列。在一些实施方案中，抑制性核酸靶向编码C9orf72蛋白的基因的内含子区。
在一些实施方案中，抑制性核酸(例如第一抑制性核酸、第二抑制性核酸,第三抑制性核酸等)结合到编码ATXN2的核酸序列(例如ATXN2 mRNA转录本)，例如在SEQ ID NO：9中所阐述的。在一些实施方案中，靶向ATXN2的抑制性核酸结合到编码ATXN2的核酸序列的非翻译区(例如5’UTR、3’UTR等)。
在一些实施方案中，抑制性核酸(例如第一抑制性核酸、第二抑制性核酸、第三抑制性核酸等)结合到编码TMEM106B的核酸序列(例如TMEM106B mRNA转录本)，例如在SEQ IDNO：7中所阐述的。在一些实施方案中，靶向TMEM106B的抑制性核酸结合到编码TMEM106B的核酸序列的非翻译区(例如5’UTR、3’UTR等)。
在一些实施方案中，抑制性核酸(例如第一抑制性核酸、第二抑制性核酸、第三抑制性核酸等)结合到编码RPS25的核酸序列(例如RPS25 mRNA转录本)，例如在SEQ ID NO：60中所阐述的。在一些实施方案中，靶向RPS25的抑制性核酸结合到编码RPS25的核酸序列的非翻译区(例如5’UTR、3’UTR等)。
在一些实施方案中，抑制性核酸(例如第一抑制性核酸和/或第二抑制性核酸)是siRNA、shRNA、miRNA和dsRNA。在一些实施方案中，miRNA是人工miRNA(amiRNA)，所述人工miRNA包含两侧带有miRNA支架序列例如miR-155支架序列的抑制性核酸序列。
在一些实施方案中，抑制性核酸(例如第一抑制性核酸和/或第二抑制性核酸)位于所述表达构建体的非翻译区内。在一些实施方案中，非翻译区是内含子、5’非翻译区(5’UTR)或3’非翻译区(3’UTR)。
在一些实施方案中，分离的核酸包含一个或多个启动子。在一些实施方案中，启动子是RNA pol III启动子(例如U6或H1)、RNA pol II启动子、鸡β肌动蛋白(CBA)启动子、CAG启动子、CD68启动子或JeT启动子。
在一些实施方案中，表达构建体两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)序列。在一些实施方案中，在表达构建体两侧的ITR序列之一缺少有功能的末端解链位点(terminal resolution site)。
在一些方面，本公开涉及包含ITR的rAAV载体，所述ITR具有修饰的“D”区(例如相对于野生型AAV2 ITR即SEQ ID NO：32修饰的D序列)。在一些实施方案中，具有修饰的D区的ITR是所述rAAV载体的5’ITR。在一些实施方案中，修饰的“D”区包含“S”序列，例如在SEQ IDNO：29中所阐述的。在一些实施方案中，具有修饰的“D”区的ITR是所述rAAV载体的3’ITR。在一些实施方案中，修饰的“D”区包含3’ITR，其中所述“D”区位于所述ITR的3’末端处(例如相对于所述载体的转基因插入片段在所述ITR的外侧或末端上)。在一些实施方案中，修饰的“D”区包含SEQ ID NO：29或30中所阐述的序列。
在一些实施方案中，分离的核酸(例如rAAV载体)包含TRY区。在一些实施方案中，TRY区包含SEQ ID NO：31中阐述的序列。
在一些实施方案中，分离的核酸包含SEQ ID NO：1-62中的任一者中阐述的序列或其部分(或编码SEQ ID NO：1-62中的任一者中阐述的氨基酸序列或其部分)。
在一些方面，本公开提供了一种包含本公开所描述的分离的核酸的载体。在一些实施方案中，载体是质粒或病毒载体。在一些实施方案中，病毒载体是重组腺相关病毒载体(rAAV)(例如两侧带有AAV ITR的转基因，所述转基因包含编码一种或多种抑制性核酸的分离的核酸序列和/或编码一种或多种蛋白例如野生型C9orf72和/或GBA1的分离的核酸)或杆状病毒载体。在一些实施方案中，rAAV载体是单链的(例如单链DNA)。
在一些方面，本公开提供了一种组合物，其包含本公开所描述的分离的核酸或载体。在一些实施方案中，组合物还包含可药用载剂(carrier)。
在一些方面，本公开提供了一种宿主细胞，其包含本公开所描述的分离的核酸或载体。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞(例如哺乳动物细胞、昆虫细胞等)或原核细胞(例如细菌细胞)。
在一些方面，本公开提供了一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含衣壳蛋白和本公开所描述的分离的核酸或载体。在一些实施方案中，衣壳蛋白能够跨过血脑屏障。在一些实施方案中，衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白、AAVrh.10衣壳蛋白或AAV-PHP.B衣壳蛋白。在一些实施方案中，rAAV转导中枢神经系统(CNS)的神经元细胞和/或非神经元细胞。
在一些方面，本公开提供了一种治疗患有或怀疑患有神经变性障碍(例如肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和/或额颞叶痴呆(FTD)、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆或溶酶体贮积病)的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用本公开所描述的分离的核酸、载体、组合物或rAAV。
在一些实施方案中，施用包括直接注射到对象的CNS。在一些实施方案中，直接注射到所述CNS包括直接注射到对象的脑脊液(CSF)，例如颅内注射、脑室内注射、腰椎内注射或其任何组合。在一些实施方案中，直接注射是脑内注射、实质内注射、鞘内注射、大池内注射或其任何组合。在一些实施方案中，直接注射包括对流增强递送(CED)。
在一些实施方案中，所述对象是哺乳动物例如人类对象。在一些实施方案中，对象的特征在于具有约30至约5000个之间(例如30至5000之间(含)的任何整数)的GGGGCC二肽重复序列和/或约30至5000个之间(例如30至5000之间(含)的任何整数)的CCCCGG重复序列。在一些实施方案中，对象的特征在于具有超过5000个GGGGCC二肽重复序列和/或CCCCGG重复序列。
附图说明
图1是描绘了包含rAAV载体的质粒的一个实施方案的示意图，所述rAAV载体包括编码靶向C9orf72的重复序列扩增的抑制性核酸、靶向跨膜蛋白106B(TMEM106B)的抑制性核酸和野生型C9orf72编码序列的表达构建体。所述rAAV载体还包含在所述表达构建体两侧的AAV反向末端重复序列。
图2是描绘了包含rAAV的质粒的一个实施方案的示意图，所述rAAV包括编码靶向C9orf72的重复序列扩增的抑制性核酸和β-葡糖脑苷脂酶(GBA1)编码序列的表达构建体。所述rAAV载体还包含在所述表达构建体两侧的AAV反向末端重复序列。
图3是描绘了包含rAAV载体的质粒的一个实施方案的示意图，所述rAAV载体包括编码靶向C9orf72的重复序列扩增的抑制性核酸和野生型C9orf72编码序列的表达构建体。
图4是描绘了包含rAAV载体的质粒的一个实施方案的示意图，所述rAAV载体包括编码可操作连接到pol III(H1)启动子的靶向ATXN2(例如编码ATNX2的基因)的抑制性核酸的表达构建体。所述rAAV载体还包含在所述表达构建体两侧的AAV反向末端重复序列。所述3’UTR的“D”序列位于“外侧”位置中。
图5是描绘了包含rAAV载体的质粒的一个实施方案的示意图，所述rAAV载体包括编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向ATXN2(例如编码ATNX2的基因)的抑制性核酸的表达构建体。所述rAAV载体还包含在所述表达构建体两侧的AAV反向末端重复序列。所述3’UTR的“D”序列位于“外侧”位置中。
图6是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到polII(CBA)启动子的靶向ATXN2(例如编码ATNX2的基因)的抑制性核酸的表达构建体。
图7是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到polII(CBA)启动子的各自靶向ATXN2(例如编码ATNX2的基因)的两个抑制性核酸的表达构建体。
图8是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到polII(CBA)启动子的靶向ATXN2(例如编码ATNX2的基因)的抑制性核酸的表达构建体。
图9是描绘了包含rAAV载体的质粒的一个实施方案的示意图，所述rAAV载体包括编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向ATXN2(例如编码ATNX2的基因)的抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。所述rAAV载体还包含在所述表达构建体两侧的AAV反向末端重复序列。所述3’UTR的“D”序列位于“外侧”位置中。
图10是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向C9orf72的抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
图11是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向C9orf72的抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
图12是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向C9orf72的抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
图13是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol III(例如H1)启动子的靶向C9orf72的抑制性核酸的表达构建体。
图14是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向C9orf72的抑制性核酸的表达构建体。
图15是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向C9orf72的两个抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
图16是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向C9orf72的两个抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
图17是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向C9orf72的两个抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
图18是描绘了包含位于ITR的“外侧”(例如相对于转基因插入片段或表达构建体在ITR的末端的近端)的“D”区的rAAV载体(上图)和具有在载体的“内侧”(例如在载体的转基因插入片段的近端)的ITR的野生型rAAV载体的示意图。
图19A-19B示出了体外C9orf72表达和敲落测定的代表性数据。图19A示出的代表性数据指示了内源C9orf72被rAAV载体的统计学显著的沉默。图19B示出的代表性数据指示了在用rAAV载体转染后野生型C9orf72表达的统计学显著的提高。
图20是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向RPS25的抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
图21是描绘了质粒的一个实施方案的示意图，所述质粒包含编码可操作连接到pol II(CBA)启动子的靶向RPS25的抑制性核酸和编码野生型C9orf72蛋白的密码子优化的核酸序列的表达构建体。
具体实施方式
本公开的多方面涉及用于治疗神经变性疾病例如ALS/FTD、帕金森氏病、阿兹海默氏病、溶酶体贮积病和路易体痴呆的组合物和方法。本公开部分是基于对象中编码ALS/FTD相关基因产物(例如C9orf72、ATXN2、TMEM106B、靶向上述基因的抑制性核酸等)及其组合的表达构建体。基因产物可以是蛋白、蛋白的片段(例如部分)、抑制ALS/FTD相关基因的干扰核酸等。在一些实施方案中，基因产物是由ALS/FTD相关基因编码的蛋白或蛋白片段。在一些实施方案中，基因产物是抑制ALS/FTD相关基因的干扰核酸(例如shRNA、siRNA、miRNA、amiRNA等)。
ALS/FTD相关基因是指编码在遗传、生物化学或功能上与肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)、额颞叶痴呆(FTD)或ALS和FTD(ALS/FTD)相关的基因产物的基因。例如，已观察到在C9orf72基因中具有超过23个GGGGCC六核苷酸重复序列的个体与没有重复区扩增的个体相比具有发生ALS/FTD的增加的风险。在一些实施方案中，本文中描述的表达盒编码野生型或非突变形式的ALS/FTD相关基因(或其编码序列)。通常，基因的“野生型”或“非突变”形式是指编码与正常或非致病性活性相关的蛋白(例如缺少突变或变化例如导致神经变性疾病的发生或进展的重复区扩增的蛋白)的核酸。例如，在一些实施方案中，野生型C9orf72蛋白包含SEQ ID NO：4中阐述的序列或由所述序列组成。
分离的核酸和载体
分离的核酸可以是DNA或RNA。在一些方面，本公开提供了分离的核酸(例如rAAV载体)，其编码靶向一种或多种ALS/FTD相关基因例如C9orf72(例如C9orf72的二肽重复区)、ATXN2、TMEM106B、RPS25等的一种或多种抑制性核酸。抑制性核酸可以靶向基因的正义链(例如从基因转录的mRNA)、基因的反义链(例如从基因转录的mRNA)或基因的正义和反义链两者(例如从基因转录的mRNA)。
通常，本文中所描述的分离的核酸可以编码1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种抑制性核酸(例如dsRNA、siRNA、shRNA、miRNA、amiRNA等)。在一些实施方案中，分离的核酸编码超过10种抑制性核酸。在一些实施方案中，所述一种或多种抑制性核酸中的每一者靶向不同基因或基因部分(例如第一miRNA靶向基因的第一靶序列，并且第二miRNA靶向所述基因的不同于所述第一靶序列的第二靶序列)。在一些实施方案中，所述一种或多种抑制性核酸中的每一者靶向同一基因的相同靶序列(例如分离的核酸编码同一miRNA的多个拷贝)。
本公开的各方面涉及一种分离的核酸，其包含编码靶向C9orf72蛋白(例如C9orf72 mRNA转录本的二肽重复区)的一种或多种干扰核酸(例如dsRNA、siRNA、miRNA、amiRNA等)的表达构建体。在一些实施方案中，二肽重复区由六核苷酸重复序列GGGGCC的5个或更多个聚合物单元(例如包含所述GGGGCC重复序列的5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100、200、500、1000个或更多个重复序列的区)编码。
通常，C9orf72蛋白是指在神经元的细胞质和突触前末梢中发现的一种蛋白，其据认为是小的GTP酶例如Rab的交换因子。在人类中，C9orf72基因位于9号染色体上。在一些实施方案中，所述C9orf72基因编码NCBI参考序列NP_060795.1表示的肽。在一些实施方案中，C9orf72基因包含SEQ ID NO：3中阐述的序列或编码SEQ ID NO：4中阐述的氨基酸序列。
靶向C9orf72的抑制性核酸可以包含长度在6至50个核苷酸之间的互补区(例如与靶基因例如C9orf72或靶基因的一部分例如C9orf72的二肽重复区或二肽重复区之外的区杂交的所述抑制性核酸的区)。在一些实施方案中，抑制性核酸包含长度在约6至30、约8至20或约10至19个核苷酸之间的与C9orf72互补的区。在一些实施方案中，抑制性核酸与C9orf72序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个毗连核苷酸互补。在一些实施方案中，被所述抑制性核酸靶向(例如结合)的C9orf72序列远离所述C9orf72的二肽重复区(相对于它在5’或3’)1个核苷酸至500个核苷酸之间(例如1至500(含)之间的任何整数个核苷酸)。在一些实施方案中，抑制性核酸靶向编码C9orf72蛋白的基因的内含子区(例如非蛋白编码区)。
本公开的多方面涉及一种分离的核酸，其包含编码靶向TMEM106B蛋白(例如TMEM106B基因的基因产物)的一种或多种干扰核酸(例如dsRNA、siRNA、miRNA、amiRNA等)的表达构建体。TMEM106B蛋白是指跨膜蛋白106B，其是参与树突形态发生和溶酶体运输的调控的一种蛋白。在人类中，TMEM106B基因位于7号染色体上。在一些实施方案中，所述TMEM106B基因编码由NCBI参考序列NP_060844.2表示的肽。在一些实施方案中，TMEM106B基因包含SEQ ID NO：7中阐述的序列或编码SEQ ID NO：6中阐述的氨基酸序列。
靶向TMEM106B的抑制性核酸可以包含长度在6至50个核苷酸之间的互补区(例如与靶基因例如TMEM106B杂交的所述抑制性核酸的区)。在一些实施方案中，抑制性核酸包含长度在约6至30、约8至20或约10至19个核苷酸之间的与TMEM106B互补的区。在一些实施方案中，抑制性核酸与TMEM106B序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个毗连核苷酸互补。
本公开的多方面涉及一种分离的核酸，其包含编码靶向ATXN2蛋白(例如ATXN2基因、也被称为SCA基因的基因产物)的一种或多种干扰核酸(例如dsRNA、siRNA、miRNA、amiRNA等)的表达构建体。ATXN2蛋白是指脊髓小脑性共济失调蛋白2，其是通过它与poly(A)结合蛋白的相互作用而参与调控mRNA翻译的一种蛋白。在人类中，ATXN2基因位于12号染色体上。在一些实施方案中，所述ATXN2基因编码由NCBI参考序列NP_002964.3表示的肽。在一些实施方案中，ATXN2基因包含SEQ ID NO：9中阐述的序列或编码SEQ ID NO：8中阐述的氨基酸序列。
靶向ATXN2的抑制性核酸可以包含长度在6至50个核苷酸之间的互补区(例如与靶基因例如ATXN2杂交的所述抑制性核酸的区)。在一些实施方案中，抑制性核酸包含长度在约6至30、约8至20或约10至19个核苷酸之间的与ATXN2互补的区。在一些实施方案中，抑制性核酸与ATXN2序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个毗连核苷酸互补。
本公开的多方面涉及一种分离的核酸，其包含编码靶向核糖体蛋白s25(RPS25)(例如RPS25的基因产物)的一种或多种干扰核酸(例如dsRNA、siRNA、miRNA、amiRNA等)的表达构建体。RPS25蛋白是指一种核糖体蛋白，其是参与蛋白合成的蛋白复合体s40核糖体的亚基。在人类中，RPS25基因位于11号染色体上。在一些实施方案中，所述RPS25基因编码由NCBI参考序列NP_001019.1表示的肽。在一些实施方案中，RPS25基因包含SEQ ID NO：60中阐述的序列。
靶向RPS25的抑制性核酸可以包含长度在6至50个核苷酸之间的互补区(例如与靶基因例如RPS25杂交的所述抑制性核酸的区)。在一些实施方案中，抑制性核酸包含长度在约6至30、约8至20或约10至19个核苷酸之间的与RPS25互补的区。在一些实施方案中，抑制性核酸与RPS25序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个毗连核苷酸互补。
本公开的多方面涉及表达构建体，其包含编码一种或多种抑制性核酸(例如靶向C9orf72的二肽重复区的抑制性核酸、靶向C9orf72的非二肽重复区的抑制性核酸和/或靶向TMEM106B的抑制性核酸和/或靶向ATXN2的抑制性核酸和/或靶向RPS25的抑制性核酸等)的第一基因产物和编码蛋白例如野生型C9orf72蛋白或GBA蛋白的第二基因产物。
在一些实施方案中，分离的核酸包含表达盒，其编码抑制C9orf72的表达或活性的第一抑制性核酸和抑制TMEM106B的表达或活性的第二抑制性核酸。
在一些实施方案中，分离的核酸包含表达盒，其编码抑制C9orf72的表达或活性的第一抑制性核酸和抑制ATXN2的表达或活性的第二抑制性核酸。
在一些实施方案中，分离的核酸包含表达盒，其编码抑制C9orf72的表达或活性的第一抑制性核酸和抑制RPS25的表达或活性的第二抑制性核酸。
在一些实施方案中，分离的核酸包含表达盒，其编码抑制C9orf72的表达或活性的抑制性核酸和β-葡糖脑苷脂酶(GBA)蛋白。在一些实施方案中，所述GBA蛋白是GBA1蛋白(例如由GBA1基因或其部分编码的蛋白)。
在一些实施方案中，分离的核酸包含表达盒，其编码抑制C9orf72的表达或活性的抑制性核酸和野生型C9orf72蛋白(例如缺少致病性二肽重复序列扩增的C9orf72蛋白)。在一些实施方案中，编码野生型C9orf72蛋白或其部分的核酸序列是密码子优化的核酸序列。在一些实施方案中，野生型C9orf72蛋白由SEQ ID NO：3中阐述的核酸序列或其部分编码。在一些实施方案中，野生型C9orf72蛋白包含SEQ ID NO：4中阐述的序列或其部分或由SEQID NO：4中阐述的序列或其部分组成。在一些实施方案中，编码密码子优化的C9orf72的分离的核酸包含SEQ ID NO：51中阐述的序列或由SEQ ID NO：51中阐述的序列组成。
专业技术人员认识到第一基因产物(例如编码C9orf72蛋白或GBA蛋白的核酸序列)和第二基因产物(例如靶向C9orf72、ATXN2、TMEM106B等的抑制性RNA)的表达顺序通常可以颠倒(例如所述抑制性RNA是第一基因产物，并且蛋白编码序列是第二基因产物)。在一些实施方案中，基因产物是基因(例如C9orf72、TMEM106B、ATXN2、GBA1等)的片段(例如部分)。蛋白片段可包含蛋白(例如C9orf72蛋白，GBA蛋白等)的约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约99％。在一些实施方案中，蛋白片段包含C9orf72蛋白或GBA蛋白的50％至99.9％之间(例如50％至99.9％之间的任何值)。在一些实施方案中，基因产物(例如抑制性RNA)杂交到靶基因的部分(例如与靶基因例如C9orf72、ATXN2或TMEM106B的5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21个或更多个毗连核苷酸互补)。
在一些实施方案中，表达构建体是单顺反子的(例如所述表达构建体编码包含第一基因产物和第二基因产物的单一融合蛋白)。在一些实施方案中，表达构建体是多顺反子的(例如所述表达构建体编码两个不同的基因产物，例如两个不同的蛋白或蛋白片段)。
多顺反子表达载体可以包含一个或多个(例如1、2、3、4、5个或更多个)启动子。可以使用任何适合的启动子，例如组成型启动子、诱导型启动子、内源启动子、组织特异性启动子(例如CNS特异性启动子)等。在一些实施方案中，启动子是鸡β-肌动蛋白启动子(CBA启动子)、CAG启动子(例如由Alexopoulou等，(2008)BMC Cell Biol.9:2；doi:10.1186/1471-2121-9-2所描述的)、CD68启动子或JeT启动子(例如由
Figure BDA0002541850140000151
等，(2002)Gene 297(1-2):21-32或Karumuthil-Melethil等，(2016)Human Gene Therapy 27(7):509-521所描述的)。在一些实施方案中，启动子被可操作连接到编码第一基因产物、第二基因产物或第一基因产物和第二基因产物的核酸序列。在一些实施方案中，表达盒包含一个或多个另外的调控序列，包括但不限于转录因子结合序列、内含子剪接位点、poly(A)添加位点、增强子序列、阻遏蛋白结合位点或上述序列的任何组合。
在一些实施方案中，编码第一基因产物的核酸序列和编码第二基因产物的核酸序列被编码内部核糖体进入位点(IRES)的核酸序列分隔开。IRES位点的实例被例如Mokrejs等，(2006)Nucleic Acids Res.34(Database issue):D125-30描述。在一些实施方案中，编码第一基因产物的核酸序列和编码第二基因产物的核酸序列被编码自切割肽的核酸序列分隔开。自切割肽的实例包括但不限于T2A、P2A、E2A、F2A、BmCPV 2A和BmIFV 2A，以及被Liu等，(2017)Sci Rep.7:2193所描述的。在一些实施方案中，所述自切割肽是T2A肽。
在病理学上，诸如ALS和FTD的障碍与主要由源自于C9orf72基因的与重复序列相关的非ATG(RAN)翻译的蛋白构成的蛋白聚集体的积累相关。因此，在一些实施方案中，本文中描述的分离的核酸包含降低或阻止C9orf72蛋白(例如由具有病原性二肽重复序列扩增的基因编码的C9orf72蛋白)的表达的抑制性核酸。编码抑制性核酸的序列可以被放置在所述表达构建体的非翻译区(例如内含子、5’UTR、3’UTR等)中。
在一些实施方案中，抑制性核酸被放置在表达构建体的内含子中，例如在编码第一基因产物的序列上游的内含子中。抑制性核酸可以是双链RNA(dsRNA)、siRNA、micro RNA(miRNA)、人工miRNA(amiRNA)或RNA适体。通常，抑制性核酸结合到靶RNA(例如mRNA)的约6至约30个之间(例如6至30之间的任何整数(含))的毗连核苷酸(例如与所述毗连核苷酸杂交)。在一些实施方案中，所述抑制性核酸分子是miRNA或amiRNA，例如靶向C9orf72(编码病原性C9orf72蛋白的基因)的miRNA。在一些实施方案中，所述miRNA不包含与它所杂交的C9orf72 mRNA的区的任何错配(例如所述miRNA是“完美的”)。在一些实施方案中，miRNA包含与它所杂交的C9orf72 mRNA的区的2至20个之间(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)的错配，例如“凸起”。在一些实施方案中，miRNA包含与它所杂交的C9orf72mRNA的区的超过20个错配。
在一些实施方案中，所述抑制性核酸是shRNA(例如靶向C9orf72的shRNA)。在一些实施方案中，所述抑制性核酸是miRNA(例如靶向C9orf72的miRNA)。在一些实施方案中，表达构建体的一个或多个抑制性RNA的表达由一个或多个RNA pol III启动子例如H1启动子或U6启动子驱动。每个抑制性RNA可以由不同的启动子或相同的启动子驱动。
在一些实施方案中，抑制性核酸是人工microRNA(amiRNA)。microRNA(miRNA)通常是指在植物和动物中发现的、并在基因表达的转录和翻译后调控中起作用的小的非编码RNA。MiRNA被RNA聚合酶转录以形成被称为pri-miRNA的发夹-环结构，pri-miRNA随后被酶(例如Drosha、Pasha、剪接体等)加工以形成pre-miRNA发夹结构，其然后被Dicer加工以形成miRNA/miRNA*双链体(其中*指示所述miRNA双链体的随从链)，其中一条链随后被并入到RNA诱导的沉默复合体(RISC)中。在一些实施方案中，本文中所描述的抑制性RNA是靶向C9orf72(例如C9orf72的二肽重复区或C9orf72的非二肽重复区)、ATXN2或TMEM106B的miRNA。
在一些实施方案中，靶向C9orf72的抑制性核酸包含miRNA/miRNA*双链体。在一些实施方案中，所述miRNA/miRNA*双链体的miRNA链包含SEQ ID NO：24或25、37或38、40或41中的任一者中阐述的序列或其部分，或由SEQ ID NO：24或25、37或38、40或41中的任一者中阐述的序列或其部分组成。在一些实施方案中，所述miRNA/miRNA*双链体的miRNA*链包含SEQ ID NO：24或25、37或38、40或41中的任一者中阐述的序列或其部分，或由SEQ ID NO：24或25、37或38、40或41中的任一者中阐述的序列或其部分组成。
在一些实施方案中，靶向TMEM106B的抑制性核酸包含miRNA/miRNA*双链体。在一些实施方案中，所述miRNA/miRNA*双链体的miRNA链包含SEQ ID NO：1或7中阐述的序列或其部分，或由SEQ ID NO：1或7中阐述的序列或其部分组成。在一些实施方案中，所述miRNA/miRNA*双链体的miRNA*链包含SEQ ID NO：1或7中阐述的序列或其部分，或由SEQ ID NO：1或7中阐述的序列或其部分组成。
在一些实施方案中，靶向ATXN2的抑制性核酸包含miRNA/miRNA*双链体。在一些实施方案中，所述miRNA/miRNA*双链体的miRNA链包含SEQ ID NO：10-23中的任一者中阐述的序列或其部分，或由SEQ ID NO：10-23中的任一者中阐述的序列或其部分组成。在一些实施方案中，所述miRNA/miRNA*双链体的miRNA*链包含SEQ ID NO：10-23中的任一者中阐述的序列或其部分，或由SEQ ID NO：10-23中的任一者中阐述的序列或其部分组成。
人工microRNA(amiRNA)通过修饰本源miRNA(native miRNA)以用感兴趣的靶向区代替pre-mRNA的天然靶向区来衍生。例如，可以使用天然存在的表达的miRNA作为支架或骨架(例如pri-miRNA支架)，并将茎序列用靶向感兴趣的基因的miRNA的茎序列代替。人工前体microRNA(pre-amiRNA)通常被加工，以便优选地产生单一稳定的小RNA。在一些实施方案中，本文中描述的scAAV载体和scAAV包含编码amiRNA的核酸。在一些实施方案中，所述amiRNA的pri-miRNA支架源自于选自pri-MIR-21、pri-MIR-22、pri-MIR-26a、pri-MIR-30a、pri-MIR-33、pri-MIR-122、pri-MIR-375、pri-MIR-199、pri-MIR-99、pri-MIR-194、pri-MIR-155和pri-MIR-451的pri-miRNA。在一些实施方案中，amiRNA包含靶向C9orf72、ATNX2或TMEM106B的核酸序列和eSIBR amiRNA支架，例如在Fowler等，Nucleic AcidsRes.2016Mar 18；44(5):e48中所描述的。
在一些方面，本公开涉及表达构建体，其包含用于治疗神经变性疾病(例如ALS/FTD)的抑制性RNA的组合。例如，在一些实施方案中，由本公开描述的表达构建体包含靶向C9orf72的抑制性RNA和靶向跨膜蛋白106B(TMEM106B)的抑制性RNA。所述分离的核酸编码所述抑制性核酸的序列的顺序可以变化。例如，分离的核酸可以从5’末端到3’末端编码靶向C9orf72和TMEM106B，或靶向TMEM106B和C9orf72的shRNA。
本文中描述的分离的核酸可以自身存在或作为载体的一部分存在。通常，载体可以是质粒、粘粒、噬菌粒、细菌人工染色体(BAC)或病毒载体(例如腺病毒载体、腺相关病毒(AAV)载体、反转录病毒载体、杆状病毒载体等)。在一些实施方案中，所述载体是质粒(例如包含本文中描述的分离的核酸的质粒)。在一些实施方案中，所述载体是重组AAV(rAAV)载体(例如两侧带有AAV ITR的编码转基因的表达构建体)。在一些实施方案中，rAAV载体是单链的(例如单链DNA)。在一些实施方案中，载体是杆状病毒载体(例如苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)载体)。
通常，rAAV载体包含两侧带有两个AAV反向末端重复(ITR)序列的转基因。在一些实施方案中，所述rAAV载体的转基因包含本公开所描述的分离的核酸。在一些实施方案中，所述rAAV载体的两个ITR序列中的每一者是全长ITR(例如长度约为145bp，并含有有功能的Rep结合位点(RBS)和末端解链位点(trs))。在一些实施方案中，所述rAAV载体的ITR之一是截短的(例如缩短或非全长的)。在一些实施方案中，截短的ITR缺少有功能的末端解链位点(trs)并被用于生产自我互补的AAV载体(scAAV载体)。在一些实施方案中，截短的ITR是ΔITR，例如由McCarty等，(2003)Gene Ther.10(26):2112-8所描述的。
本公开的多方面涉及分离的核酸(例如rAAV载体)，其包含相对于野生型AAV ITR，例如相对于野生型AAV2 ITR(例如SEQ ID NO：32)具有一个或多个修饰(例如核酸添加、缺失、替换等)的ITR。野生型AAV2 ITR的结构示出在图18中。通常，野生型ITR包含125个核苷酸的区，其自我退火形成回文双链T形发夹结构，所述发夹结构由两个横臂(分别由被称为B/B′和C/C′的序列形成)、较长的茎区(由序列A/A′形成)和被称为“D”区的单链末端区组成(图18)。通常，所述ITR的“D”区位于所述由A/A′序列形成的茎区与含有所述rAAV载体的转基因的插入片段之间(例如相对于ITR的末端位于所述ITR的“内侧”或所述rAAV载体的转基因插入片段或表达构建体的近端)。在一些实施方案中，“D”区包含SEQ ID NO：30中阐述的序列。已观察到所述“D”区在rAAV载体被衣壳蛋白的衣壳化中发挥重要作用，例如由Ling等，(2015)J Mol Genet Med 9(3)所公开的。
本公开部分是基于下述令人吃惊的发现，即包含位于ITR的“外侧”(例如相对于转基因插入片段或表达构建体位于ITR的末端的近端)上的“D”区的rAAV载体，与ITR具有未修饰的(例如野生型)ITR的rAAV载体相比高效地被AAV衣壳蛋白衣壳化。在一些实施方案中，具有修饰的“D”序列(例如在“外侧”位置中的“D”序列)的rAAV载体相对于具有野生型ITR序列的rAAV载体具有降低的毒性。
在一些实施方案中，修饰的“D”序列相对于野生型“D”序列(例如SEQ ID NO：30)包含至少一个核苷酸替换。修饰的“D”序列相对于野生型“D”序列(例如SEQ ID NO：30)可以具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或超过10个核苷酸替换。在一些实施方案中，修饰的“D”序列相对于野生型“D”序列(例如SEQ ID NO：30)包含至少10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个核酸替换。在一些实施方案中，修饰的“D”序列与野生型“D”序列(例如SEQ IDNO：30)具有约10％至约99％之间(例如10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％)的一致性。在一些实施方案中，修饰的“D”序列包含SEQ ID NO：29中阐述的序列，其也被称为“S”序列，正如在Wang等，(1995)J MolBiol 250(5):573-80中所描述的。
本公开描述的分离的核酸或rAAV载体还可以包含“TRY”序列，例如在SEQ ID NO：31中所阐述的，正如由Francois等，2005，细胞的TATA结合蛋白为最小腺相关病毒2型p5元件的Rep依赖性复制所需(The Cellular TATA Binding Protein Is Required for Rep-Dependent Replication of a Minimal Adeno-Associated Virus Type 2p5 Element)，JVirol.所描述的。在一些实施方案中，TRY序列位于分离的核酸或rAAV载体的ITR(例如5’ITR)与表达构建体(例如编码转基因的插入片段)之间。
在一些方面，本公开涉及杆状病毒载体，其包含本公开所描述的分离的核酸或rAAV载体。在一些实施方案中，所述杆状病毒载体是苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)载体，例如由Urabe等，(2002)Hum Gene Ther13(16):1935-43和Smith等，(2009)Mol Ther17(11):1888-1896所描述的。
在一些方面，本公开提供了一种宿主细胞，其包含本文中所描述的分离的核酸或载体。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。例如，宿主细胞可以是哺乳动物细胞、细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞等。在一些实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞例如HEK293T细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是细菌细胞例如大肠杆菌细胞。
rAAV
在一些方面，本公开涉及重组AAV(rAAV)，其包含编码本文中所描述的核酸的转基因(例如本文中所描述的rAAV载体)。术语“rAAV”通常是指包含被一种或多种AAV衣壳蛋白衣壳化的rAAV载体的病毒粒子。本公开描述的rAAV可以包含具有选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAV10的血清型的衣壳蛋白。在一些实施方案中，rAAV包含来自于非人类宿主的衣壳蛋白，例如恒河猴的AAV衣壳蛋白例如AAVrh.10、AAVrh.39等。在一些实施方案中，本公开描述的rAAV包含作为野生型衣壳蛋白的变体的衣壳蛋白，例如相对于它所源自的野生型AAV衣壳蛋白包括至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或超过10个(例如15、20、25、50、100个等)氨基酸替换(例如突变)的衣壳蛋白变体。
在一些实施方案中，本公开描述的rAAV容易地通过CNS传播，特别是当被引入到CSF空间或直接引入到脑实质中时。因此，在一些实施方案中，本公开描述的rAAV包含能够跨过血脑屏障(BBB)的衣壳蛋白。例如，在一些实施方案中，rAAV包含具有AAV9或AAVrh.10血清型的衣壳蛋白。在一些实施方案中，rAAV包含跨过血脑屏障的AAV9变体例如AAV-PHP.B血清型，正如由Deverman等，(2016)Nature Biotechnology 34:204-209所描述的。一般来说，rAAV的生产被例如Samulski等，(1989)J Virol.63(9):3822-8和Wright(2009)HumGene Ther.20(7):698–706描述。
在一些实施方案中，本公开描述的rAAV(例如包含被AAV衣壳蛋白衣壳化以形成rAAV衣壳粒子的重组rAAV基因组)在杆状病毒载体表达系统(BEVS)中生产。使用BEVS生产rAAV被例如Urabe等，(2002)Hum Gene Ther13(16):1935-43，Smith等，(2009)Mol Ther17(11):1888-1896，美国专利号8,945,918，美国专利号9,879,282和国际PCT公布WO 2017/184879描述。然而，rAAV可以使用任何适合的方法(例如使用重组rep和cap基因)来生产。
药物组合物
在一些方面，本公开提供了包含本文中所描述的分离的核酸或rAAV和可药用载剂的药物组合物。当在本文中使用时，术语“可药用”是指材料例如载剂或稀释剂，所述材料不废除化合物的生物活性或性质，并且是相对无毒性的，例如所述材料可以被施用到个体而不引起不想要的生物学效应或不以有害的方式与包含它的组合物的任何组分相互作用。
当在本文中使用时，术语“可药用载剂”意味着可药用材料、组合物或载剂例如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包胶材料，它们参与将本发明中的有用化合物在患者内携带或运输，或携带或运输到患者，使得所述化合物可以执行其目标功能。可以包括在本发明的实践中使用的药物组合物中的其他成分在本领域中是已知的，并描述在例如《Remington制药学》(Remington's PharmaceuticalSciences)(Genaro主编，Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)中，其通过引用并入本文。
本文中提供的组合物(例如药物组合物)可以通过任何途径施用，包括肠(例如口服)、肠胃外、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、鞘内、大池内、皮下、脑室内、透皮、真皮内、直肠、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉剂、软膏、霜剂和/或滴剂)、粘膜、鼻、颊、舌下，通过气管内滴注、支气管滴注和/或吸入，和/或作为口喷剂、鼻喷剂和/或气溶胶。具体设想的途径是口服施用、静脉内施用(例如系统性静脉内注射)、通过血液和/或淋巴供应的区域性施用和/或向患病部位的直接施用。通常，最适合的施用途径取决于各种因素，包括所述药剂的本质(例如它在胃肠道环境中的稳定性)和/或对象的状况(例如所述对象是否能够耐受口服施用)。
方法
本公开部分是基于在对象中一个或多个ALS-FTD相关基因产物(或其组合)的表达的组合物，所述一个或多个ALS-FTD相关基因产物(或其组合)一起作用(例如协同)以治疗神经变性疾病(例如ALS/FTD等)。当在本文中使用时，“治疗”(“treat”或者“treating”)是指(a)阻止或延迟神经变性疾病(例如ALS/FTD、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、溶酶体贮积病等)的发作；(b)减轻神经变性疾病的严重性；(c)减轻或阻止神经变性疾病特有的症状的发生；(d)和/或阻止神经变性疾病特有的症状的恶化。例如，ALS/FTD的症状包括例如运动功能障碍(例如麻痹、摇晃、僵硬、运动缓慢、行走困难)、认知功能障碍(例如痴呆、抑郁、焦虑)、情绪和行为功能障碍。
因此，在一些方面，本公开提供了一种治疗患有或怀疑患有神经变性疾病的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用本公开所描述的组合物(例如包含分离的核酸或载体或rAAV的组合物)。在一些实施方案中，所述神经变性疾病是ALS/FTD、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆或溶酶体贮积病。
在一些实施方案中，组合物被直接施用到所述对象的CNS，例如通过直接注射到所述对象的脑和/或脊髓中。CNS直接施用方式的实例包括但不限于脑内注射、脑室内注射、颅内注射、实质内注射、鞘内注射和上述方式的任何组合。在一些实施方案中，直接注射到对象的CNS中引起转基因在所述对象的中脑、纹状体和/或大脑皮层中的表达(例如第一基因产物、第二基因产物以及如果适用的话第三基因产物的表达)。
在一些实施方案中，本公开所描述的组合物被直接施用到对象的脑脊液(CSF)。在一些实施方案中，直接注射到CNS中引起转基因在所述对象的脊髓和/或CSF中的表达(例如第一基因产物、第二基因产物以及如果适用的话第三基因产物的表达)。向对象的CSF的直接注射的实例包括但不限于颅内注射、脑室内注射、腰椎内注射或其任何组合。
在一些实施方案中，直接注射到对象的CNS包括对流增强递送(CED)。对流增强递送是一种治疗策略，其包括将脑手术暴露并将小直径的导管直接放置在脑的靶区域中，然后将治疗剂(例如本文中所描述的组合物或rAAV)直接输注到所述对象的脑中。CED被例如Debinski等，(2009)Expert Rev Neurother.9(10):1519-27描述。
在一些实施方案中，组合物被外周施用到对象，例如通过外周注射。外周注射的实例包括皮下注射、静脉内注射、动脉内注射、腹膜内注射或上述方式的任何组合。在一些实施方案中，所述外周注射是动脉内注射，例如注射到对象的颈动脉中。
在一些实施方案中，本公开所描述的组合物(例如包含分离的核酸或载体或rAAV的组合物)通过外周和直接两种方式被施用到对象的CNS。例如，在一些实施方案中，对象通过动脉内注射(例如注射到颈动脉中)并通过实质内注射(例如通过CED的实质内注射)来施用组合物。在一些实施方案中，所述向CNS的直接注射和外周注射是同时的(例如在同一时间发生)。在一些实施方案中，所述直接注射发生在所述外周注射之前(例如1分钟至1周或更长时间之前)。在一些实施方案中，所述直接注射发生在所述外周注射之后(例如1分钟至1周或更长时间之后)。
本公开所描述的组合物(例如包含分离的核酸或载体或rAAV的组合物)被施用到对象的量将随着施用方法而变。例如，在一些实施方案中，本文中所描述的rAAV以约109个基因组拷贝(GC)/kg至约1014GC/kg之间(例如约109GC/kg、约1010GC/kg、约1011GC/kg、约1012GC/kg、约1012GC/kg或约1014GC/kg)的滴度施用到对象。在一些实施方案中，对象通过注射到CSF空间或通过实质内注射被高滴度施用(例如>1012个基因组拷贝GC/kg的rAAV)。
本公开所描述的组合物(例如包含分离的核酸或载体或rAAV的组合物)可以被一次或多次(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、20次或更多次)施用到对象。在一些实施方案中，组合物被连续(例如长期)施用到对象，例如通过输注泵。
实施例
实施例1：rAAV载体
AAV载体使用细胞例如用于三质粒转染的HEK293细胞来产生。ITR序列在表达构建体的两侧，所述表达构建体包含用于每个感兴趣的转基因的启动子/增强子元件、3’polyA信号和翻译后信号例如WPRE元件。多个基因产物例如C9orf72蛋白或GBA1蛋白和一种或多种抑制性核酸(例如靶向C9orf72和/或TMEM106B的抑制性核酸)可以被同时表达，例如通过使用单一表达盒或分开的表达盒来表达。在所述被表达基因上游的高效剪接的短内含子序列的存在可以提高表达水平。抑制性RNA(例如miRNA、shRNA等)和其他调控性RNA可以潜在地被包含在这些序列中。本公开所描述的表达构建体的实例示出在图1-17和20-21以及下面的表1中。
表1
Figure BDA0002541850140000261
Figure BDA0002541850140000271
实施例2：病毒在ALS/FTD细胞中的转导的基于细胞的测定
以C9orf72的重复序列扩增为特征的细胞作为例如来自于ALS/FTD患者的成纤维细胞、单核细胞或hES细胞或患者来源的诱导多能干细胞(iPSC)而被获得。这些细胞积累RNA病灶和RAN翻译的蛋白。
使用这些细胞模型，根据蛋白聚集体例如RAN蛋白的聚集体的积累，使用抗RAN蛋白抗体，然后使用荧光显微术成像来定量细胞疾病。使用Western印迹和/或ELISA来定量RAN蛋白的异常积累。
在AAV载体的转导的表达的背景中测量治疗终点(例如ALS/FTD相关疾病的减轻)，以确认并定量活性和功能。内源(例如致病性的含有重复序列扩增的)C9orf72 mRNA水平的降低可以例如使用定量RT-PCT(qRT-PCR)来定量。
实施例3：体外研究
本实施例描述了本公开描述的C9orf72 rAAV载体的体外测试。在哺乳动物细胞中研究了C9orf72敲落和过表达的效果。测试的构建体的实例列于表2中。
ID 启动子 敲落 启动子 过表达
I00017 H1 C9_sh CMV opt-C9
I00018 CMV C9_sh,TMEM_mi CMV opt-C9
I00030 CMV_intronic C9_sh(cons) CMV opt-C9
I00031 CMV_intronic C9repeat_sh CMV opt-C9
I00032 CMV_intronic C9_sh(validated) CMV opt-C9
I00037 CMV_intronic C9r_sh,ATXN_sh CMV opt-C9
通过定量PCR(qPCR)和ELISA测定了基因敲落和过表达。图19A示出的代表性数据表明C9orf72被rAAV载体的统计学显著的沉默。图19B示出的代表性数据表明在用rAAV载体转染后野生型C9orf72表达的统计学显著的提高。
序列
在一些实施方案中，编码一个或多个基因产物(例如第一、第二和/或第三基因产物)的表达盒包含SEQ ID NO：1-62中的任一者中阐述的序列或由所述序列组成(或编码所述序列)。在一些实施方案中，基因产物包含SEQ ID NO：1-62中的任一者的部分(例如片段)或由SEQ ID NO：1-62中的任一者的部分(例如片段)组成(或由SEQ ID NO：1-62中的任一者的部分(例如片段)编码)。在一些实施方案中，下述序列中的“T”核苷酸被“U”核苷酸代替，例如在RNA分子的情形中。
专业技术人员将会认识到，上述序列的“部分”可以是所述表达盒的缺少质粒骨架(例如复制原点序列、选择标志物序列等)的序列(例如编码ITR的序列、干扰RNA、编码序列、调控序列等)。
序列表
<110> 普利维尔治疗公司（Prevail Therapeutics, Inc. ）
<120> 用于神经变性疾病的基因疗法
<130> P1094.70005WO00
<140> 尚未指派
<141> 2018-10-23
<150> 62/742723
<151> 2018-10-08
<150> 62/575795
<151> 2017-10-23
<160> 62
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10953
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 1
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgttggagg cttgctgaag gctgtatgct gttgtcgggg 1140
ccggtttcgg ggccttagtg aagccacaga tgtacggccc cgaaaccggc cccaggacac 1200
aaggcctgtt actagcactc acatggaaca aatggccacc gtgggaggat gacaagtgat 1260
atcacaaggt cccagggctg gggtcagaaa ttctctcccg agggaatgaa gccacaggag 1320
ccaagagcag gaggaccaag gccctggcga aggccgtggc ctcgttcaag taaaagatcc 1380
tagtacagtg caggtcccaa tgtgtactag gatcttttac ttgaacgggg acgccggcat 1440
ccgggctcag gacccccctc tctgccagag gcaccaacac cagagttcac aaatcagtct 1500
cctgcccttt gcatgtagca aatttctgtg gctgcgtgaa agccttgagg ggctccggga 1560
gctagagcct ctgctaacca tgttcatgcc ttcttctttt tcctacagct cctgggcaac 1620
gtgctggtta ttgtgctgtc tcatcatttt ggcaaagaat tcctcgaaga tccgaaggga 1680
aagtcttcca cgactgtggg atccgttcga agatatcacc ggttgagcca ccatgagcac 1740
cctgtgcccc ccccccagcc ccgccgtggc caagaccgag atcgccctga gcggcaagag 1800
ccccctgctg gccgccacct tcgcctactg ggacaacatc ctgggccccc gcgtgcgcca 1860
catctgggcc cccaagaccg agcaggtgct gctgagcgac ggcgagatca ccttcctggc 1920
caaccacacc ctgaacggcg agatcctgcg caacgccgag agcggcgcca tcgacgtgaa 1980
gttcttcgtg ctgagcgaga agggcgtgat catcgtgagc ctgatcttcg acggcaactg 2040
gaacggcgac cgcagcacct acggcctgag catcatcctg ccccagaccg agctgagctt 2100
ctacctgccc ctgcaccgcg tgtgcgtgga ccgcctgacc cacatcatcc gcaagggccg 2160
catctggatg cacaaggagc gccaggagaa cgtgcagaag atcatcctgg agggcaccga 2220
gcgcatggag gaccagggcc agagcatcat ccccatgctg accggcgagg tgatccccgt 2280
gatggagctg ctgagcagca tgaagagcca cagcgtgccc gaggagatcg acatcgccga 2340
caccgtgctg aacgacgacg acatcggcga cagctgccac gagggcttcc tgctgaacgc 2400
catcagcagc cacctgcaga cctgcggctg cagcgtggtg gtgggcagca gcgccgagaa 2460
ggtgaacaag atcgtgcgca ccctgtgcct gttcctgacc cccgccgagc gcaagtgcag 2520
ccgcctgtgc gaggccgaga gcagcttcaa gtacgagagc ggcctgttcg tgcagggcct 2580
gctgaaggac agcaccggca gcttcgtgct gcccttccgc caggtgatgt acgcccccta 2640
ccccaccacc cacatcgacg tggacgtgaa caccgtgaag cagatgcccc cctgccacga 2700
gcacatctac aaccagcgcc gctacatgcg cagcgagctg accgccttct ggcgcgccac 2760
cagcgaggag gacatggccc aggacaccat catctacacc gacgagagct tcacccccga 2820
cctgaacatc ttccaggacg tgctgcaccg cgacaccctg gtgaaggcct tcctggacca 2880
ggtgttccag ctgaagcccg gcctgagcct gcgcagcacc ttcctggccc agttcctgct 2940
ggtgctgcac cgcaaggccc tgaccctgat caagtacatc gaggacgaca cccagaaggg 3000
caagaagccc ttcaagagcc tgcgcaacct gaagatcgac ctggacctga ccgccgaggg 3060
cgacctgaac atcatcatgg ccctggccga gaagatcaag cccggcctgc acagcttcat 3120
cttcggccgc cccttctaca ccagcgtgca ggagcgcgac gtgctgatga ccttctaatg 3180
acaattgtta attaagttta aaccctcgag gccgcaagct tatcgataat caacctctgg 3240
attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta tgttgctcct tttacgctat 3300
gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc ttcccgtatg gctttcattt 3360
tctcctcctt gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga ggagttgtgg cccgttgtca 3420
ggcaacgtgg cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac ccccactggt tggggcattg 3480
ccaccacctg tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc cctccctatt gccacggcgg 3540
aactcatcgc cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc tcggctgttg ggcactgaca 3600
attccgtggt gttgtcgggg aaatcatcgt cctttccttg gctgctcgcc tgtgttgcca 3660
cctggattct gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc ggccctcaat ccagcggacc 3720
ttccttcccg cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc gcgtcttcgc cttcgccctc 3780
agacgagtcg gatctccctt tgggccgcct ccccgcatcg ataccgtcga ctagagctcg 3840
ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct gttgtttgcc cctcccccgt 3900
gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt tcctaataaa atgaggaaat 3960
tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg ggtggggtgg ggcaggacag 4020
caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg gagagatcca cgataacaaa 4080
cagctttttt ggggtgaaca tattgactga attccctgca ggttggccac tccctctctg 4140
cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt 4200
cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agagagggag tggccaactc catcactagg 4260
ggttcctgcg gccgctcgta cggtctcgag gaattcctgc aggataactt gccaacctca 4320
ttctaaaatg tatatagaag cccaaaagac aataacaaaa atattcttgt agaacaaaat 4380
gggaaagaat gttccactaa atatcaagat ttagagcaaa gcatgagatg tgtggggata 4440
gacagtgagg ctgataaaat agagtagagc tcagaaacag acccattgat atatgtaagt 4500
gacctatgaa aaaaatatgg cattttacaa tgggaaaatg atggtctttt tcttttttag 4560
aaaaacaggg aaatatattt atatgtaaaa aataaaaggg aacccatatg tcataccata 4620
cacacaaaaa aattccagtg aattataagt ctaaatggag aaggcaaaac tttaaatctt 4680
ttagaaaata atatagaagc atgcagacca gcctggccaa catgatgaaa ccctctctac 4740
taataataaa atcagtagaa ctactcagga ctactttgag tgggaagtcc ttttctatga 4800
agacttcttt ggccaaaatt aggctctaaa tgcaaggaga tagtgcatca tgcctggctg 4860
cacttactga taaatgatgt tatcaccatc tttaaccaaa tgcacaggaa caagttatgg 4920
tactgatgtg ctggattgag aaggagctct acttccttga caggacacat ttgtatcaac 4980
ttaaaaaagc agatttttgc cagcagaact attcattcag aggtaggaaa cttagaatag 5040
atgatgtcac tgattagcat ggcttcccca tctccacagc tgcttcccac ccaggttgcc 5100
cacagttgag tttgtccagt gctcagggct gcccactctc agtaagaagc cccacaccag 5160
cccctctcca aatatgttgg ctgttccttc cattaaagtg accccacttt agagcagcaa 5220
gtggatttct gtttcttaca gttcaggaag gaggagtcag ctgtgagaac ctggagcctg 5280
agatgcttct aagtcccact gctactgggg tcagggaagc cagactccag catcagcagt 5340
caggagcact aagcccttgc caacatcctg tttctcagag aaactgcttc cattataatg 5400
gttgtccttt tttaagctat caagccaaac aaccagtgtc taccattatt ctcatcacct 5460
gaagccaagg gttctagcaa aagtcaagct gtcttgtaat ggttgatgtg cctccagctt 5520
ctgtcttcag tcactccact cttagcctgc tctgaatcaa ctctgaccac agttccctgg 5580
agcccctgcc acctgctgcc cctgccacct tctccatctg cagtgctgtg cagccttctg 5640
cactcttgca gagctaatag gtggagactt gaaggaagag gaggaaagtt tctcataata 5700
gccttgctgc aagctcaaat gggaggtggg cactgtgccc aggagccttg gagcaaaggc 5760
tgtgcccaac ctctgactgc atccaggttt ggtcttgaca gagataagaa gccctggctt 5820
ttggagccaa aatctaggtc agacttaggc aggattctca aagtttatca gcagaacatg 5880
aggcagaaga ccctttctgc tccagcttct tcaggctcaa ccttcatcag aatagataga 5940
aagagaggct gtgagggttc ttaaaacaga agcaaatctg actcagagaa taaacaacct 6000
cctagtaaac tacagcttag acagagcatc tggtggtgag tgtgctcagt gtcctactca 6060
actgtctggt atcagccctc atgaggactt ctcttctttc cctcatagac ctccatctct 6120
gttttcctta gcctgcagaa atctggatgg ctattcacag aatgcctgtg ctttcagagt 6180
tgcatttttt ctctggtatt ctggttcaag catttgaagg taggaaaggt tctccaagtg 6240
caagaaagcc agccctgagc ctcaactgcc tggctagtgt ggtcagtagg atgcaaaggc 6300
tgttgaatgc cacaaggcca aactttaacc tgtgtaccac aagcctagca gcagaggcag 6360
ctctgctcac tggaactctc tgtcttcttt ctcctgagcc ttttcttttc ctgagttttc 6420
tagctctcct caaccttacc tctgccctac ccaggacaaa cccaagagcc actgtttctg 6480
tgatgtcctc tccagcccta attaggcatc atgacttcag cctgaccttc catgctcaga 6540
agcagtgcta atccacttca gatgagctgc tctatgcaac acaggcagag cctacaaacc 6600
tttgcaccag agccctccac atatcagtgt ttgttcatac tcacttcaac agcaaatgtg 6660
actgctgaga ttaagatttt acacaagatg gtctgtaatt tcacagttag ttttatccca 6720
ttaggtatga aagaattagc ataattcccc ttaaacatga atgaatctta gattttttaa 6780
taaatagttt tggaagtaaa gacagagaca tcaggagcac aaggaatagc ctgagaggac 6840
aaacagaaca agaaagagtc tggaaataca caggatgttc ttggcctcct caaagcaagt 6900
gcaagcagat agtaccagca gccccaggct atcagagccc agtgaagaga agtaccatga 6960
aagccacagc tctaaccacc ctgttccaga gtgacagaca gtccccaaga caagccagcc 7020
tgagccagag agagaactgc aagagaaagt ttctaattta ggttctgtta gattcagaca 7080
agtgcaggtc atcctctctc cacagctact cacctctcca gcctaacaaa gcctgcagtc 7140
cacactccaa ccctggtgtc tcacctccta gcctctccca acatcctgct ctctgaccat 7200
cttctgcatc tctcatctca ccatctccca ctgtctacag cctactcttg caactaccat 7260
ctcattttct gacatcctgt ctacatcttc tgccatactc tgccatctac cataccacct 7320
cttaccatct accacaccat cttttatctc catccctctc agaagcctcc aagctgaatc 7380
ctgctttatg tgttcatctc agcccctgca tggaaagctg accccagagg cagaactatt 7440
cccagagagc ttggccaaga aaaacaaaac taccagcctg gccaggctca ggagtagtaa 7500
gctgcagtgt ctgttgtgtt ctagcttcaa cagctgcagg agttccactc tcaaatgctc 7560
cacatttctc acatcctcct gattctggtc actacccatc ttcaaagaac agaatatctc 7620
acatcagcat actgtgaagg actagtcatg ggtgcagctg ctcagagctg caaagtcatt 7680
ctggatggtg gagagcttac aaacatttca tgatgctccc cccgctctga tggctggagc 7740
ccaatcccta cacagactcc tgctgtatgt gttttccttt cactctgagc cacagccaga 7800
gggcaggcat tcagtctcct cttcaggctg gggctggggc actgagaact cacccaacac 7860
cttgctctca ctccttctgc aaaacaagaa agagctttgt gctgcagtag ccatgaagaa 7920
tgaaaggaag gctttaacta aaaaatgtca gagattattt tcaacccctt actgtggatc 7980
accagcaagg aggaaacaca acacagagac attttttccc ctcaaattat caaaagaatc 8040
actgcatttg ttaaagagag caactgaatc aggaagcaga gttttgaaca tatcagaagt 8100
taggaatctg catcagagac aaatgcagtc atggttgttt gctgcatacc agccctaatc 8160
attagaagcc tcatggactt caaacatcat tccctctgac aagatgctct agcctaactc 8220
catgagataa aataaatctg cctttcagag ccaaagaaga gtccaccagc ttcttctcag 8280
tgtgaacaag agctccagtc aggttagtca gtccagtgca gtagaggaga ccagtctgca 8340
tcctctaatt ttcaaaggca agaagatttg tttaccctgg acaccaggca caagtgaggt 8400
cacagagctc ttagatatgc agtcctcatg agtgaggaga ctaaagcgca tgccatcaag 8460
acttcagtgt agagaaaacc tccaaaaaag cctcctcact acttctggaa tagctcagag 8520
gccgaggcgg cctcggcctc tgcataaata aaaaaaatta gtcagccatg gggcggagaa 8580
tgggcggaac tgggcggagt taggggcggg atgggcggag ttaggggcgg gactatggtt 8640
gctgactaat tgagatgcat gctttgcata cttctgcctg ctggggagcc tggggacttt 8700
ccacacctgg ttgctgacta attgagatgc atgctttgca tacttctgcc tgctggggag 8760
cctggggact ttccacaccc taactgacac acattccaca gctgcattaa tgaatcggcc 8820
aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact 8880
cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac 8940
ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa 9000
aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg 9060
acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa 9120
gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc 9180
ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac 9240
gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac 9300
cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg 9360
taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt 9420
atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa 9480
cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct 9540
cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga 9600
ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg 9660
ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct 9720
tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt 9780
aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc 9840
tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc tgcaaaccac gttgtgtctc aaaatctctg 9900
atgttacatt gcacaagata aaaatatatc atcatgaaca ataaaactgt ctgcttacat 9960
aaacagtaat acaaggggtg ttatgagcca tattcaacgg gaaacgtctt gctcgaggcc 10020
gcgattaaat tccaacatgg atgctgattt atatgggtat aaatgggctc gcgataatgt 10080
cgggcaatca ggtgcgacaa tctatcgatt gtatgggaag cccgatgcgc cagagttgtt 10140
tctgaaacat ggcaaaggta gcgttgccaa tgatgttaca gatgagatgg tcagactaaa 10200
ctggctgacg gaatttatgc ctcttccgac catcaagcat tttatccgta ctcctgatga 10260
tgcatggtta ctcaccactg cgatccccgg gaaaacagca ttccaggtat tagaagaata 10320
tcctgattca ggtgaaaata ttgttgatgc gctggcagtg ttcctgcgcc ggttgcattc 10380
gattcctgtt tgtaattgtc cttttaacag cgatcgcgta tttcgtctcg ctcaggcgca 10440
atcacgaatg aataacggtt tggttgatgc gagtgatttt gatgacgagc gtaatggctg 10500
gcctgttgaa caagtctgga aagaaatgca taagcttttg ccattctcac cggattcagt 10560
cgtcactcat ggtgatttct cacttgataa ccttattttt gacgagggga aattaatagg 10620
ttgtattgat gttggacgag tcggaatcgc agaccgatac caggatcttg ccatcctatg 10680
gaactgcctc ggtgagtttt ctccttcatt acagaaacgg ctttttcaaa aatatggtat 10740
tgataatcct gatatgaata aattgcagtt tcatttgatg ctcgatgagt ttttctaagg 10800
gcggcctgcc accataccca cgccgaaaca agcgctcatg agcccgaagt ggcgagcccg 10860
atcttcccca tcggtgatgt cggcgatata ggcgccagca accgcacctg tggcgccggt 10920
gatgagggcg cgccaagtcg acgtccggca gtc 10953
<210> 2
<211> 10848
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 2
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgttggagg cttgctgaag gctgtatgct gttgtcgggg 1140
ccggtttcgg ggccttagtg aagccacaga tgtacggccc cgaaaccggc cccaggacac 1200
aaggcctgtt actagcactc acatggaaca aatggccacc gtgggaggat gacaatttct 1260
gtggctgcgt gaaagccttg aggggctccg ggagctagag cctctgctaa ccatgttcat 1320
gccttcttct ttttcctaca gctcctgggc aacgtgctgg ttattgtgct gtctcatcat 1380
tttggcaaag aattcctcga agatccgaag ggaaagtctt ccacgactgt gggatccgtt 1440
cgaagatatc accggttgag ccaccatgga attcagcagc cccagcagag aggaatgccc 1500
caagcctctg agccgggtgt caatcatggc cggatctctg acaggactgc tgctgcttca 1560
ggccgtgtct tgggcttctg gcgctagacc ttgcatcccc aagagcttcg gctacagcag 1620
cgtcgtgtgc gtgtgcaatg ccacctactg cgacagcttc gaccctccta cctttcctgc 1680
tctgggcacc ttcagcagat acgagagcac cagatccggc agacggatgg aactgagcat 1740
gggacccatc caggccaatc acacaggcac tggcctgctg ctgacactgc agcctgagca 1800
gaaattccag aaagtgaaag gcttcggcgg agccatgaca gatgccgccg ctctgaatat 1860
cctggctctg tctccaccag ctcagaacct gctgctcaag agctacttca gcgaggaagg 1920
catcggctac aacatcatca gagtgcccat ggccagctgc gacttcagca tcaggaccta 1980
cacctacgcc gacacacccg acgatttcca gctgcacaac ttcagcctgc ctgaagagga 2040
caccaagctg aagatccctc tgatccacag agccctgcag ctggcacaaa gacccgtgtc 2100
actgctggcc tctccatgga catctcccac ctggctgaaa acaaatggcg ccgtgaatgg 2160
caagggcagc ctgaaaggcc aacctggcga catctaccac cagacctggg ccagatactt 2220
cgtgaagttc ctggacgcct atgccgagca caagctgcag ttttgggccg tgacagccga 2280
gaacgaacct tctgctggac tgctgagcgg ctaccccttt cagtgcctgg gctttacacc 2340
cgagcaccag cgggacttta tcgcccgtga tctgggaccc acactggcca atagcaccca 2400
ccataatgtg cggctgctga tgctggacga ccagagactg cttctgcccc actgggctaa 2460
agtggtgctg acagatcctg aggccgccaa atacgtgcac ggaatcgccg tgcactggta 2520
tctggacttt ctggcccctg ccaaggccac actgggagag acacacagac tgttccccaa 2580
caccatgctg ttcgccagcg aagcctgtgt gggcagcaag ttttgggaac agagcgtgcg 2640
gctcggcagc tgggatagag gcatgcagta cagccacagc atcatcacca acctgctgta 2700
ccacgtcgtc ggctggaccg actggaatct ggccctgaat cctgaaggcg gccctaactg 2760
ggtccgaaac ttcgtggaca gccccatcat cgtggacatc accaaggaca ccttctacaa 2820
gcagcccatg ttctaccacc tgggacactt cagcaagttc atccccgagg gctctcagcg 2880
cgttggactg gtggcttccc agaagaacga tctggacgcc gtggctctga tgcaccctga 2940
tggatctgct gtggtggtgg tcctgaaccg cagcagcaaa gatgtgcccc tgaccatcaa 3000
ggatcccgcc gtgggattcc tggaaacaat cagccctggc tactccatcc acacctacct 3060
gtggcgtaga cagtgacaat tgttaattaa gtttaaaccc tcgaggccgc aagcttatcg 3120
ataatcaacc tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg 3180
ctccttttac gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc 3240
gtatggcttt cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt 3300
tgtggcccgt tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac gcaaccccca 3360
ctggttgggg cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct ttccccctcc 3420
ctattgccac ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc 3480
tgttgggcac tgacaattcc gtggtgttgt cggggaaatc atcgtccttt ccttggctgc 3540
tcgcctgtgt tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc ccttcggccc 3600
tcaatccagc ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct cttccgcgtc 3660
ttcgccttcg ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg catcgatacc 3720
gtcgactaga gctcgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt 3780
ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta 3840
ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg 3900
ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg ctggggagag 3960
atccacgata acaaacagct tttttggggt gaacatattg actgaattcc ctgcaggttg 4020
gccactccct ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg cccgggcaaa gcccgggcgt 4080
cgggcgacct ttggtcgccc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagaga gggagtggcc 4140
aactccatca ctaggggttc ctgcggccgc tcgtacggtc tcgaggaatt cctgcaggat 4200
aacttgccaa cctcattcta aaatgtatat agaagcccaa aagacaataa caaaaatatt 4260
cttgtagaac aaaatgggaa agaatgttcc actaaatatc aagatttaga gcaaagcatg 4320
agatgtgtgg ggatagacag tgaggctgat aaaatagagt agagctcaga aacagaccca 4380
ttgatatatg taagtgacct atgaaaaaaa tatggcattt tacaatggga aaatgatggt 4440
ctttttcttt tttagaaaaa cagggaaata tatttatatg taaaaaataa aagggaaccc 4500
atatgtcata ccatacacac aaaaaaattc cagtgaatta taagtctaaa tggagaaggc 4560
aaaactttaa atcttttaga aaataatata gaagcatgca gaccagcctg gccaacatga 4620
tgaaaccctc tctactaata ataaaatcag tagaactact caggactact ttgagtggga 4680
agtccttttc tatgaagact tctttggcca aaattaggct ctaaatgcaa ggagatagtg 4740
catcatgcct ggctgcactt actgataaat gatgttatca ccatctttaa ccaaatgcac 4800
aggaacaagt tatggtactg atgtgctgga ttgagaagga gctctacttc cttgacagga 4860
cacatttgta tcaacttaaa aaagcagatt tttgccagca gaactattca ttcagaggta 4920
ggaaacttag aatagatgat gtcactgatt agcatggctt ccccatctcc acagctgctt 4980
cccacccagg ttgcccacag ttgagtttgt ccagtgctca gggctgccca ctctcagtaa 5040
gaagccccac accagcccct ctccaaatat gttggctgtt ccttccatta aagtgacccc 5100
actttagagc agcaagtgga tttctgtttc ttacagttca ggaaggagga gtcagctgtg 5160
agaacctgga gcctgagatg cttctaagtc ccactgctac tggggtcagg gaagccagac 5220
tccagcatca gcagtcagga gcactaagcc cttgccaaca tcctgtttct cagagaaact 5280
gcttccatta taatggttgt ccttttttaa gctatcaagc caaacaacca gtgtctacca 5340
ttattctcat cacctgaagc caagggttct agcaaaagtc aagctgtctt gtaatggttg 5400
atgtgcctcc agcttctgtc ttcagtcact ccactcttag cctgctctga atcaactctg 5460
accacagttc cctggagccc ctgccacctg ctgcccctgc caccttctcc atctgcagtg 5520
ctgtgcagcc ttctgcactc ttgcagagct aataggtgga gacttgaagg aagaggagga 5580
aagtttctca taatagcctt gctgcaagct caaatgggag gtgggcactg tgcccaggag 5640
ccttggagca aaggctgtgc ccaacctctg actgcatcca ggtttggtct tgacagagat 5700
aagaagccct ggcttttgga gccaaaatct aggtcagact taggcaggat tctcaaagtt 5760
tatcagcaga acatgaggca gaagaccctt tctgctccag cttcttcagg ctcaaccttc 5820
atcagaatag atagaaagag aggctgtgag ggttcttaaa acagaagcaa atctgactca 5880
gagaataaac aacctcctag taaactacag cttagacaga gcatctggtg gtgagtgtgc 5940
tcagtgtcct actcaactgt ctggtatcag ccctcatgag gacttctctt ctttccctca 6000
tagacctcca tctctgtttt ccttagcctg cagaaatctg gatggctatt cacagaatgc 6060
ctgtgctttc agagttgcat tttttctctg gtattctggt tcaagcattt gaaggtagga 6120
aaggttctcc aagtgcaaga aagccagccc tgagcctcaa ctgcctggct agtgtggtca 6180
gtaggatgca aaggctgttg aatgccacaa ggccaaactt taacctgtgt accacaagcc 6240
tagcagcaga ggcagctctg ctcactggaa ctctctgtct tctttctcct gagccttttc 6300
ttttcctgag ttttctagct ctcctcaacc ttacctctgc cctacccagg acaaacccaa 6360
gagccactgt ttctgtgatg tcctctccag ccctaattag gcatcatgac ttcagcctga 6420
ccttccatgc tcagaagcag tgctaatcca cttcagatga gctgctctat gcaacacagg 6480
cagagcctac aaacctttgc accagagccc tccacatatc agtgtttgtt catactcact 6540
tcaacagcaa atgtgactgc tgagattaag attttacaca agatggtctg taatttcaca 6600
gttagtttta tcccattagg tatgaaagaa ttagcataat tccccttaaa catgaatgaa 6660
tcttagattt tttaataaat agttttggaa gtaaagacag agacatcagg agcacaagga 6720
atagcctgag aggacaaaca gaacaagaaa gagtctggaa atacacagga tgttcttggc 6780
ctcctcaaag caagtgcaag cagatagtac cagcagcccc aggctatcag agcccagtga 6840
agagaagtac catgaaagcc acagctctaa ccaccctgtt ccagagtgac agacagtccc 6900
caagacaagc cagcctgagc cagagagaga actgcaagag aaagtttcta atttaggttc 6960
tgttagattc agacaagtgc aggtcatcct ctctccacag ctactcacct ctccagccta 7020
acaaagcctg cagtccacac tccaaccctg gtgtctcacc tcctagcctc tcccaacatc 7080
ctgctctctg accatcttct gcatctctca tctcaccatc tcccactgtc tacagcctac 7140
tcttgcaact accatctcat tttctgacat cctgtctaca tcttctgcca tactctgcca 7200
tctaccatac cacctcttac catctaccac accatctttt atctccatcc ctctcagaag 7260
cctccaagct gaatcctgct ttatgtgttc atctcagccc ctgcatggaa agctgacccc 7320
agaggcagaa ctattcccag agagcttggc caagaaaaac aaaactacca gcctggccag 7380
gctcaggagt agtaagctgc agtgtctgtt gtgttctagc ttcaacagct gcaggagttc 7440
cactctcaaa tgctccacat ttctcacatc ctcctgattc tggtcactac ccatcttcaa 7500
agaacagaat atctcacatc agcatactgt gaaggactag tcatgggtgc agctgctcag 7560
agctgcaaag tcattctgga tggtggagag cttacaaaca tttcatgatg ctccccccgc 7620
tctgatggct ggagcccaat ccctacacag actcctgctg tatgtgtttt cctttcactc 7680
tgagccacag ccagagggca ggcattcagt ctcctcttca ggctggggct ggggcactga 7740
gaactcaccc aacaccttgc tctcactcct tctgcaaaac aagaaagagc tttgtgctgc 7800
agtagccatg aagaatgaaa ggaaggcttt aactaaaaaa tgtcagagat tattttcaac 7860
cccttactgt ggatcaccag caaggaggaa acacaacaca gagacatttt ttcccctcaa 7920
attatcaaaa gaatcactgc atttgttaaa gagagcaact gaatcaggaa gcagagtttt 7980
gaacatatca gaagttagga atctgcatca gagacaaatg cagtcatggt tgtttgctgc 8040
ataccagccc taatcattag aagcctcatg gacttcaaac atcattccct ctgacaagat 8100
gctctagcct aactccatga gataaaataa atctgccttt cagagccaaa gaagagtcca 8160
ccagcttctt ctcagtgtga acaagagctc cagtcaggtt agtcagtcca gtgcagtaga 8220
ggagaccagt ctgcatcctc taattttcaa aggcaagaag atttgtttac cctggacacc 8280
aggcacaagt gaggtcacag agctcttaga tatgcagtcc tcatgagtga ggagactaaa 8340
gcgcatgcca tcaagacttc agtgtagaga aaacctccaa aaaagcctcc tcactacttc 8400
tggaatagct cagaggccga ggcggcctcg gcctctgcat aaataaaaaa aattagtcag 8460
ccatggggcg gagaatgggc ggaactgggc ggagttaggg gcgggatggg cggagttagg 8520
ggcgggacta tggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctggg 8580
gagcctgggg actttccaca cctggttgct gactaattga gatgcatgct ttgcatactt 8640
ctgcctgctg gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagctgc 8700
attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt 8760
cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact 8820
caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag 8880
caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata 8940
ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc 9000
cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg 9060
ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc 9120
tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg 9180
gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc 9240
ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga 9300
ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg 9360
gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa 9420
aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg 9480
tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt 9540
ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat 9600
tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct 9660
aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta 9720
tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actcctgcaa accacgttgt 9780
gtctcaaaat ctctgatgtt acattgcaca agataaaaat atatcatcat gaacaataaa 9840
actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttatg agccatattc aacgggaaac 9900
gtcttgctcg aggccgcgat taaattccaa catggatgct gatttatatg ggtataaatg 9960
ggctcgcgat aatgtcgggc aatcaggtgc gacaatctat cgattgtatg ggaagcccga 10020
tgcgccagag ttgtttctga aacatggcaa aggtagcgtt gccaatgatg ttacagatga 10080
gatggtcaga ctaaactggc tgacggaatt tatgcctctt ccgaccatca agcattttat 10140
ccgtactcct gatgatgcat ggttactcac cactgcgatc cccgggaaaa cagcattcca 10200
ggtattagaa gaatatcctg attcaggtga aaatattgtt gatgcgctgg cagtgttcct 10260
gcgccggttg cattcgattc ctgtttgtaa ttgtcctttt aacagcgatc gcgtatttcg 10320
tctcgctcag gcgcaatcac gaatgaataa cggtttggtt gatgcgagtg attttgatga 10380
cgagcgtaat ggctggcctg ttgaacaagt ctggaaagaa atgcataagc ttttgccatt 10440
ctcaccggat tcagtcgtca ctcatggtga tttctcactt gataacctta tttttgacga 10500
ggggaaatta ataggttgta ttgatgttgg acgagtcgga atcgcagacc gataccagga 10560
tcttgccatc ctatggaact gcctcggtga gttttctcct tcattacaga aacggctttt 10620
tcaaaaatat ggtattgata atcctgatat gaataaattg cagtttcatt tgatgctcga 10680
tgagtttttc taagggcggc ctgccaccat acccacgccg aaacaagcgc tcatgagccc 10740
gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc cagcaaccgc 10800
acctgtggcg ccggtgatga gggcgcgcca agtcgacgtc cggcagtc 10848
<210> 3
<211> 1446
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 3
atgagcaccc tgtgcccccc ccccagcccc gccgtggcca agaccgagat cgccctgagc 60
ggcaagagcc ccctgctggc cgccaccttc gcctactggg acaacatcct gggcccccgc 120
gtgcgccaca tctgggcccc caagaccgag caggtgctgc tgagcgacgg cgagatcacc 180
ttcctggcca accacaccct gaacggcgag atcctgcgca acgccgagag cggcgccatc 240
gacgtgaagt tcttcgtgct gagcgagaag ggcgtgatca tcgtgagcct gatcttcgac 300
ggcaactgga acggcgaccg cagcacctac ggcctgagca tcatcctgcc ccagaccgag 360
ctgagcttct acctgcccct gcaccgcgtg tgcgtggacc gcctgaccca catcatccgc 420
aagggccgca tctggatgca caaggagcgc caggagaacg tgcagaagat catcctggag 480
ggcaccgagc gcatggagga ccagggccag agcatcatcc ccatgctgac cggcgaggtg 540
atccccgtga tggagctgct gagcagcatg aagagccaca gcgtgcccga ggagatcgac 600
atcgccgaca ccgtgctgaa cgacgacgac atcggcgaca gctgccacga gggcttcctg 660
ctgaacgcca tcagcagcca cctgcagacc tgcggctgca gcgtggtggt gggcagcagc 720
gccgagaagg tgaacaagat cgtgcgcacc ctgtgcctgt tcctgacccc cgccgagcgc 780
aagtgcagcc gcctgtgcga ggccgagagc agcttcaagt acgagagcgg cctgttcgtg 840
cagggcctgc tgaaggacag caccggcagc ttcgtgctgc ccttccgcca ggtgatgtac 900
gccccctacc ccaccaccca catcgacgtg gacgtgaaca ccgtgaagca gatgcccccc 960
tgccacgagc acatctacaa ccagcgccgc tacatgcgca gcgagctgac cgccttctgg 1020
cgcgccacca gcgaggagga catggcccag gacaccatca tctacaccga cgagagcttc 1080
acccccgacc tgaacatctt ccaggacgtg ctgcaccgcg acaccctggt gaaggccttc 1140
ctggaccagg tgttccagct gaagcccggc ctgagcctgc gcagcacctt cctggcccag 1200
ttcctgctgg tgctgcaccg caaggccctg accctgatca agtacatcga ggacgacacc 1260
cagaagggca agaagccctt caagagcctg cgcaacctga agatcgacct ggacctgacc 1320
gccgagggcg acctgaacat catcatggcc ctggccgaga agatcaagcc cggcctgcac 1380
agcttcatct tcggccgccc cttctacacc agcgtgcagg agcgcgacgt gctgatgacc 1440
ttctaa 1446
<210> 4
<211> 481
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 4
Met Ser Thr Leu Cys Pro Pro Pro Ser Pro Ala Val Ala Lys Thr Glu
1 5 10 15
Ile Ala Leu Ser Gly Lys Ser Pro Leu Leu Ala Ala Thr Phe Ala Tyr
20 25 30
Trp Asp Asn Ile Leu Gly Pro Arg Val Arg His Ile Trp Ala Pro Lys
35 40 45
Thr Glu Gln Val Leu Leu Ser Asp Gly Glu Ile Thr Phe Leu Ala Asn
50 55 60
His Thr Leu Asn Gly Glu Ile Leu Arg Asn Ala Glu Ser Gly Ala Ile
65 70 75 80
Asp Val Lys Phe Phe Val Leu Ser Glu Lys Gly Val Ile Ile Val Ser
85 90 95
Leu Ile Phe Asp Gly Asn Trp Asn Gly Asp Arg Ser Thr Tyr Gly Leu
100 105 110
Ser Ile Ile Leu Pro Gln Thr Glu Leu Ser Phe Tyr Leu Pro Leu His
115 120 125
Arg Val Cys Val Asp Arg Leu Thr His Ile Ile Arg Lys Gly Arg Ile
130 135 140
Trp Met His Lys Glu Arg Gln Glu Asn Val Gln Lys Ile Ile Leu Glu
145 150 155 160
Gly Thr Glu Arg Met Glu Asp Gln Gly Gln Ser Ile Ile Pro Met Leu
165 170 175
Thr Gly Glu Val Ile Pro Val Met Glu Leu Leu Ser Ser Met Lys Ser
180 185 190
His Ser Val Pro Glu Glu Ile Asp Ile Ala Asp Thr Val Leu Asn Asp
195 200 205
Asp Asp Ile Gly Asp Ser Cys His Glu Gly Phe Leu Leu Asn Ala Ile
210 215 220
Ser Ser His Leu Gln Thr Cys Gly Cys Ser Val Val Val Gly Ser Ser
225 230 235 240
Ala Glu Lys Val Asn Lys Ile Val Arg Thr Leu Cys Leu Phe Leu Thr
245 250 255
Pro Ala Glu Arg Lys Cys Ser Arg Leu Cys Glu Ala Glu Ser Ser Phe
260 265 270
Lys Tyr Glu Ser Gly Leu Phe Val Gln Gly Leu Leu Lys Asp Ser Thr
275 280 285
Gly Ser Phe Val Leu Pro Phe Arg Gln Val Met Tyr Ala Pro Tyr Pro
290 295 300
Thr Thr His Ile Asp Val Asp Val Asn Thr Val Lys Gln Met Pro Pro
305 310 315 320
Cys His Glu His Ile Tyr Asn Gln Arg Arg Tyr Met Arg Ser Glu Leu
325 330 335
Thr Ala Phe Trp Arg Ala Thr Ser Glu Glu Asp Met Ala Gln Asp Thr
340 345 350
Ile Ile Tyr Thr Asp Glu Ser Phe Thr Pro Asp Leu Asn Ile Phe Gln
355 360 365
Asp Val Leu His Arg Asp Thr Leu Val Lys Ala Phe Leu Asp Gln Val
370 375 380
Phe Gln Leu Lys Pro Gly Leu Ser Leu Arg Ser Thr Phe Leu Ala Gln
385 390 395 400
Phe Leu Leu Val Leu His Arg Lys Ala Leu Thr Leu Ile Lys Tyr Ile
405 410 415
Glu Asp Asp Thr Gln Lys Gly Lys Lys Pro Phe Lys Ser Leu Arg Asn
420 425 430
Leu Lys Ile Asp Leu Asp Leu Thr Ala Glu Gly Asp Leu Asn Ile Ile
435 440 445
Met Ala Leu Ala Glu Lys Ile Lys Pro Gly Leu His Ser Phe Ile Phe
450 455 460
Gly Arg Pro Phe Tyr Thr Ser Val Gln Glu Arg Asp Val Leu Met Thr
465 470 475 480
Phe
<210> 5
<211> 10900
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 5
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtcttg tcatcctccc acggtggcca tttgttccat 300
gtgagtgcta gtaacaggcc ttgtgtcctg gggccggttt cggggccgta catctgtggc 360
ttcactaagg ccccgaaacc ggccccgaca acagcataca gccttcagca agcctccagt 420
ggtctcatac agaacttata agattcccaa atccaaagac atttcacgtt tatggtgatt 480
tcccagaaca catagcgaca tgcaaatatt gcagggcgcc actcccctgt ccctcacagc 540
catcttcctg ccagggcgca cgcgcgctgg gtgttcccgc ctagtgacac tgggcccgcg 600
attccttgga gcgggttgat gacgtcagcg tttcccatgg tgaagcttgg atctgaattc 660
ggtaccctag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg 720
agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc 780
gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg actttccatt 840
gacgtcaatg ggtggactat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc 900
atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg 960
cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg 1020
ctattaccat ggtcgaggtg agccccacgt tctgcttcac tctccccatc tcccccccct 1080
ccccaccccc aattttgtat ttatttattt tttaattatt ttgtgcagcg atgggggcgg 1140
gggggggggg ggggcgcgcg ccaggcgggg cggggcgggg cgaggggcgg ggcggggcga 1200
ggcggagagg tgcggcggca gccaatcaga gcggcgcgct ccgaaagttt ccttttatgg 1260
cgaggcggcg gcggcggcgg ccctataaaa agcgaagcgc gcggcgggcg ggagtcgctg 1320
cgacgctgcc ttcgccccgt gccccgctcc gccgccgcct cgcgccgccc gccccggctc 1380
tgactgaccg cgttactccc acaggtgagc gggcgggacg gcccttctcc tccgggctgt 1440
aattagcgct tggtttaatg acggcttgtt ttctgtggct gcgtgaaagc cttgaggggc 1500
tccgggagct agagcctctg ctaaccatgt tcatgccttc ttctttttcc tacagctcct 1560
gggcaacgtg ctggttattg tgctgtctca tcattttggc aaagaattcc tcgaagatcc 1620
gaagggaaag tcttccacga ctgtgggatc cgttcgaaga tatcaccggt tgagccacca 1680
tgagcaccct gtgccccccc cccagccccg ccgtggccaa gaccgagatc gccctgagcg 1740
gcaagagccc cctgctggcc gccaccttcg cctactggga caacatcctg ggcccccgcg 1800
tgcgccacat ctgggccccc aagaccgagc aggtgctgct gagcgacggc gagatcacct 1860
tcctggccaa ccacaccctg aacggcgaga tcctgcgcaa cgccgagagc ggcgccatcg 1920
acgtgaagtt cttcgtgctg agcgagaagg gcgtgatcat cgtgagcctg atcttcgacg 1980
gcaactggaa cggcgaccgc agcacctacg gcctgagcat catcctgccc cagaccgagc 2040
tgagcttcta cctgcccctg caccgcgtgt gcgtggaccg cctgacccac atcatccgca 2100
agggccgcat ctggatgcac aaggagcgcc aggagaacgt gcagaagatc atcctggagg 2160
gcaccgagcg catggaggac cagggccaga gcatcatccc catgctgacc ggcgaggtga 2220
tccccgtgat ggagctgctg agcagcatga agagccacag cgtgcccgag gagatcgaca 2280
tcgccgacac cgtgctgaac gacgacgaca tcggcgacag ctgccacgag ggcttcctgc 2340
tgaacgccat cagcagccac ctgcagacct gcggctgcag cgtggtggtg ggcagcagcg 2400
ccgagaaggt gaacaagatc gtgcgcaccc tgtgcctgtt cctgaccccc gccgagcgca 2460
agtgcagccg cctgtgcgag gccgagagca gcttcaagta cgagagcggc ctgttcgtgc 2520
agggcctgct gaaggacagc accggcagct tcgtgctgcc cttccgccag gtgatgtacg 2580
ccccctaccc caccacccac atcgacgtgg acgtgaacac cgtgaagcag atgcccccct 2640
gccacgagca catctacaac cagcgccgct acatgcgcag cgagctgacc gccttctggc 2700
gcgccaccag cgaggaggac atggcccagg acaccatcat ctacaccgac gagagcttca 2760
cccccgacct gaacatcttc caggacgtgc tgcaccgcga caccctggtg aaggccttcc 2820
tggaccaggt gttccagctg aagcccggcc tgagcctgcg cagcaccttc ctggcccagt 2880
tcctgctggt gctgcaccgc aaggccctga ccctgatcaa gtacatcgag gacgacaccc 2940
agaagggcaa gaagcccttc aagagcctgc gcaacctgaa gatcgacctg gacctgaccg 3000
ccgagggcga cctgaacatc atcatggccc tggccgagaa gatcaagccc ggcctgcaca 3060
gcttcatctt cggccgcccc ttctacacca gcgtgcagga gcgcgacgtg ctgatgacct 3120
tctaatgaca attgttaatt aagtttaaac cctcgaggcc gcaagcttat cgataatcaa 3180
cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg actggtattc ttaactatgt tgctcctttt 3240
acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct ttgtatcatg ctattgcttc ccgtatggct 3300
ttcattttct cctccttgta taaatcctgg ttgctgtctc tttatgagga gttgtggccc 3360
gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact gtgtttgctg acgcaacccc cactggttgg 3420
ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc gggactttcg ctttccccct ccctattgcc 3480
acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc cgctgctgga caggggctcg gctgttgggc 3540
actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaaa tcatcgtcct ttccttggct gctcgcctgt 3600
gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc ttctgctacg tcccttcggc cctcaatcca 3660
gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg gctctgcggc ctcttccgcg tcttcgcctt 3720
cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg gccgcctccc cgcatcgata ccgtcgacta 3780
gagctcgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct 3840
cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg 3900
aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc 3960
aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggag agatccacga 4020
taacaaacag cttttttggg gtgaacatat tgactgaatt ccctgcaggt tggccactcc 4080
ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc cgcccgggca aagcccgggc gtcgggcgac 4140
ctttggtcgc ccggcctcag tgagcgagcg agcgcgcaga gagggagtgg ccaactccat 4200
cactaggggt tcctgcggcc gctcgtacgg tctcgaggaa ttcctgcagg ataacttgcc 4260
aacctcattc taaaatgtat atagaagccc aaaagacaat aacaaaaata ttcttgtaga 4320
acaaaatggg aaagaatgtt ccactaaata tcaagattta gagcaaagca tgagatgtgt 4380
ggggatagac agtgaggctg ataaaataga gtagagctca gaaacagacc cattgatata 4440
tgtaagtgac ctatgaaaaa aatatggcat tttacaatgg gaaaatgatg gtctttttct 4500
tttttagaaa aacagggaaa tatatttata tgtaaaaaat aaaagggaac ccatatgtca 4560
taccatacac acaaaaaaat tccagtgaat tataagtcta aatggagaag gcaaaacttt 4620
aaatctttta gaaaataata tagaagcatg cagaccagcc tggccaacat gatgaaaccc 4680
tctctactaa taataaaatc agtagaacta ctcaggacta ctttgagtgg gaagtccttt 4740
tctatgaaga cttctttggc caaaattagg ctctaaatgc aaggagatag tgcatcatgc 4800
ctggctgcac ttactgataa atgatgttat caccatcttt aaccaaatgc acaggaacaa 4860
gttatggtac tgatgtgctg gattgagaag gagctctact tccttgacag gacacatttg 4920
tatcaactta aaaaagcaga tttttgccag cagaactatt cattcagagg taggaaactt 4980
agaatagatg atgtcactga ttagcatggc ttccccatct ccacagctgc ttcccaccca 5040
ggttgcccac agttgagttt gtccagtgct cagggctgcc cactctcagt aagaagcccc 5100
acaccagccc ctctccaaat atgttggctg ttccttccat taaagtgacc ccactttaga 5160
gcagcaagtg gatttctgtt tcttacagtt caggaaggag gagtcagctg tgagaacctg 5220
gagcctgaga tgcttctaag tcccactgct actggggtca gggaagccag actccagcat 5280
cagcagtcag gagcactaag cccttgccaa catcctgttt ctcagagaaa ctgcttccat 5340
tataatggtt gtcctttttt aagctatcaa gccaaacaac cagtgtctac cattattctc 5400
atcacctgaa gccaagggtt ctagcaaaag tcaagctgtc ttgtaatggt tgatgtgcct 5460
ccagcttctg tcttcagtca ctccactctt agcctgctct gaatcaactc tgaccacagt 5520
tccctggagc ccctgccacc tgctgcccct gccaccttct ccatctgcag tgctgtgcag 5580
ccttctgcac tcttgcagag ctaataggtg gagacttgaa ggaagaggag gaaagtttct 5640
cataatagcc ttgctgcaag ctcaaatggg aggtgggcac tgtgcccagg agccttggag 5700
caaaggctgt gcccaacctc tgactgcatc caggtttggt cttgacagag ataagaagcc 5760
ctggcttttg gagccaaaat ctaggtcaga cttaggcagg attctcaaag tttatcagca 5820
gaacatgagg cagaagaccc tttctgctcc agcttcttca ggctcaacct tcatcagaat 5880
agatagaaag agaggctgtg agggttctta aaacagaagc aaatctgact cagagaataa 5940
acaacctcct agtaaactac agcttagaca gagcatctgg tggtgagtgt gctcagtgtc 6000
ctactcaact gtctggtatc agccctcatg aggacttctc ttctttccct catagacctc 6060
catctctgtt ttccttagcc tgcagaaatc tggatggcta ttcacagaat gcctgtgctt 6120
tcagagttgc attttttctc tggtattctg gttcaagcat ttgaaggtag gaaaggttct 6180
ccaagtgcaa gaaagccagc cctgagcctc aactgcctgg ctagtgtggt cagtaggatg 6240
caaaggctgt tgaatgccac aaggccaaac tttaacctgt gtaccacaag cctagcagca 6300
gaggcagctc tgctcactgg aactctctgt cttctttctc ctgagccttt tcttttcctg 6360
agttttctag ctctcctcaa ccttacctct gccctaccca ggacaaaccc aagagccact 6420
gtttctgtga tgtcctctcc agccctaatt aggcatcatg acttcagcct gaccttccat 6480
gctcagaagc agtgctaatc cacttcagat gagctgctct atgcaacaca ggcagagcct 6540
acaaaccttt gcaccagagc cctccacata tcagtgtttg ttcatactca cttcaacagc 6600
aaatgtgact gctgagatta agattttaca caagatggtc tgtaatttca cagttagttt 6660
tatcccatta ggtatgaaag aattagcata attcccctta aacatgaatg aatcttagat 6720
tttttaataa atagttttgg aagtaaagac agagacatca ggagcacaag gaatagcctg 6780
agaggacaaa cagaacaaga aagagtctgg aaatacacag gatgttcttg gcctcctcaa 6840
agcaagtgca agcagatagt accagcagcc ccaggctatc agagcccagt gaagagaagt 6900
accatgaaag ccacagctct aaccaccctg ttccagagtg acagacagtc cccaagacaa 6960
gccagcctga gccagagaga gaactgcaag agaaagtttc taatttaggt tctgttagat 7020
tcagacaagt gcaggtcatc ctctctccac agctactcac ctctccagcc taacaaagcc 7080
tgcagtccac actccaaccc tggtgtctca cctcctagcc tctcccaaca tcctgctctc 7140
tgaccatctt ctgcatctct catctcacca tctcccactg tctacagcct actcttgcaa 7200
ctaccatctc attttctgac atcctgtcta catcttctgc catactctgc catctaccat 7260
accacctctt accatctacc acaccatctt ttatctccat ccctctcaga agcctccaag 7320
ctgaatcctg ctttatgtgt tcatctcagc ccctgcatgg aaagctgacc ccagaggcag 7380
aactattccc agagagcttg gccaagaaaa acaaaactac cagcctggcc aggctcagga 7440
gtagtaagct gcagtgtctg ttgtgttcta gcttcaacag ctgcaggagt tccactctca 7500
aatgctccac atttctcaca tcctcctgat tctggtcact acccatcttc aaagaacaga 7560
atatctcaca tcagcatact gtgaaggact agtcatgggt gcagctgctc agagctgcaa 7620
agtcattctg gatggtggag agcttacaaa catttcatga tgctcccccc gctctgatgg 7680
ctggagccca atccctacac agactcctgc tgtatgtgtt ttcctttcac tctgagccac 7740
agccagaggg caggcattca gtctcctctt caggctgggg ctggggcact gagaactcac 7800
ccaacacctt gctctcactc cttctgcaaa acaagaaaga gctttgtgct gcagtagcca 7860
tgaagaatga aaggaaggct ttaactaaaa aatgtcagag attattttca accccttact 7920
gtggatcacc agcaaggagg aaacacaaca cagagacatt ttttcccctc aaattatcaa 7980
aagaatcact gcatttgtta aagagagcaa ctgaatcagg aagcagagtt ttgaacatat 8040
cagaagttag gaatctgcat cagagacaaa tgcagtcatg gttgtttgct gcataccagc 8100
cctaatcatt agaagcctca tggacttcaa acatcattcc ctctgacaag atgctctagc 8160
ctaactccat gagataaaat aaatctgcct ttcagagcca aagaagagtc caccagcttc 8220
ttctcagtgt gaacaagagc tccagtcagg ttagtcagtc cagtgcagta gaggagacca 8280
gtctgcatcc tctaattttc aaaggcaaga agatttgttt accctggaca ccaggcacaa 8340
gtgaggtcac agagctctta gatatgcagt cctcatgagt gaggagacta aagcgcatgc 8400
catcaagact tcagtgtaga gaaaacctcc aaaaaagcct cctcactact tctggaatag 8460
ctcagaggcc gaggcggcct cggcctctgc ataaataaaa aaaattagtc agccatgggg 8520
cggagaatgg gcggaactgg gcggagttag gggcgggatg ggcggagtta ggggcgggac 8580
tatggttgct gactaattga gatgcatgct ttgcatactt ctgcctgctg gggagcctgg 8640
ggactttcca cacctggttg ctgactaatt gagatgcatg ctttgcatac ttctgcctgc 8700
tggggagcct ggggactttc cacaccctaa ctgacacaca ttccacagct gcattaatga 8760
atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc 8820
actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg 8880
gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc 8940
cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc 9000
ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga 9060
ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc 9120
ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat 9180
agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg 9240
cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc 9300
aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga 9360
gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact 9420
agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt 9480
ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag 9540
cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg 9600
tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa 9660
aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata 9720
tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg 9780
atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactcctgc aaaccacgtt gtgtctcaaa 9840
atctctgatg ttacattgca caagataaaa atatatcatc atgaacaata aaactgtctg 9900
cttacataaa cagtaataca aggggtgtta tgagccatat tcaacgggaa acgtcttgct 9960
cgaggccgcg attaaattcc aacatggatg ctgatttata tgggtataaa tgggctcgcg 10020
ataatgtcgg gcaatcaggt gcgacaatct atcgattgta tgggaagccc gatgcgccag 10080
agttgtttct gaaacatggc aaaggtagcg ttgccaatga tgttacagat gagatggtca 10140
gactaaactg gctgacggaa tttatgcctc ttccgaccat caagcatttt atccgtactc 10200
ctgatgatgc atggttactc accactgcga tccccgggaa aacagcattc caggtattag 10260
aagaatatcc tgattcaggt gaaaatattg ttgatgcgct ggcagtgttc ctgcgccggt 10320
tgcattcgat tcctgtttgt aattgtcctt ttaacagcga tcgcgtattt cgtctcgctc 10380
aggcgcaatc acgaatgaat aacggtttgg ttgatgcgag tgattttgat gacgagcgta 10440
atggctggcc tgttgaacaa gtctggaaag aaatgcataa gcttttgcca ttctcaccgg 10500
attcagtcgt cactcatggt gatttctcac ttgataacct tatttttgac gaggggaaat 10560
taataggttg tattgatgtt ggacgagtcg gaatcgcaga ccgataccag gatcttgcca 10620
tcctatggaa ctgcctcggt gagttttctc cttcattaca gaaacggctt tttcaaaaat 10680
atggtattga taatcctgat atgaataaat tgcagtttca tttgatgctc gatgagtttt 10740
tctaagggcg gcctgccacc atacccacgc cgaaacaagc gctcatgagc ccgaagtggc 10800
gagcccgatc ttccccatcg gtgatgtcgg cgatataggc gccagcaacc gcacctgtgg 10860
cgccggtgat gagggcgcgc caagtcgacg tccggcagtc 10900
<210> 6
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 6
Met Gly Lys Ser Leu Ser His Leu Pro Leu His Ser Ser Lys Glu Asp
1 5 10 15
Ala Tyr Asp Gly Val Thr Ser Glu Asn Met Arg Asn Gly Leu Val Asn
20 25 30
Ser Glu Val His Asn Glu Asp Gly Arg Asn Gly Asp Val Ser Gln Phe
35 40 45
Pro Tyr Val Glu Phe Thr Gly Arg Asp Ser Val Thr Cys Pro Thr Cys
50 55 60
Gln Gly Thr Gly Arg Ile Pro Arg Gly Gln Glu Asn Gln Leu Val Ala
65 70 75 80
Leu Ile Pro Tyr Ser Asp Gln Arg Leu Arg Pro Arg Arg Thr Lys Leu
85 90 95
Tyr Val Met Ala Ser Val Phe Val Cys Leu Leu Leu Ser Gly Leu Ala
100 105 110
Val Phe Phe Leu Phe Pro Arg Ser Ile Asp Val Lys Tyr Ile Gly Val
115 120 125
Lys Ser Ala Tyr Val Ser Tyr Asp Val Gln Lys Arg Thr Ile Tyr Leu
130 135 140
Asn Ile Thr Asn Thr Leu Asn Ile Thr Asn Asn Asn Tyr Tyr Ser Val
145 150 155 160
Glu Val Glu Asn Ile Thr Ala Gln Val Gln Phe Ser Lys Thr Val Ile
165 170 175
Gly Lys Ala Arg Leu Asn Asn Ile Thr Ile Ile Gly Pro Leu Asp Met
180 185 190
Lys Gln Ile Asp Tyr Thr Val Pro Thr Val Ile Ala Glu Glu Met Ser
195 200 205
Tyr Met Tyr Asp Phe Cys Thr Leu Ile Ser Ile Lys Val His Asn Ile
210 215 220
Val Leu Met Met Gln Val Thr Val Thr Thr Thr Tyr Phe Gly His Ser
225 230 235 240
Glu Gln Ile Ser Gln Glu Arg Tyr Gln Tyr Val Asp Cys Gly Arg Asn
245 250 255
Thr Thr Tyr Gln Leu Gly Gln Ser Glu Tyr Leu Asn Val Leu Gln Pro
260 265 270
Gln Gln
<210> 7
<211> 6514
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 7
aggcgcggac gcaggttaca gcagcgcttg gcctctgctg atgccgtcgt tatcctaccc 60
ctcccccgtc ccagctctac ggcggccgcg cgctccaggc cggtcgctcc accccccggc 120
tcccgggact gtggactcca cgaccctgtc ctcggccctg tccgcgccga agcagcccgg 180
gactgcgcag cgccccgcgt gccgatcttt tcctaattca gcagcgattt aaccaagagc 240
ctggaatatt ttaaggagta ataagagaca tttacaaact attctctctg aagcctgcta 300
cctggaggca tcatctagat aatcagaacc ttggcttcca catcctcctc ccttgtctta 360
actacaaaca tttctttctg ctgacttcaa ctcctcagac atgggaaagt ctctttctca 420
tttgcctttg cattcaagca aagaagatgc ttatgatgga gtcacatctg aaaacatgag 480
gaatggactg gttaatagtg aagtccataa tgaagatgga agaaatggag atgtctctca 540
gtttccatat gtggaattta caggaagaga tagtgtcacc tgccctactt gtcagggaac 600
aggaagaatt cctagggggc aagaaaacca actggtggca ttgattccat atagtgatca 660
gagattaagg ccaagaagaa caaagctgta tgtgatggct tctgtgtttg tctgtctact 720
cctttctgga ttggctgtgt ttttcctttt ccctcgctct atcgacgtga aatacattgg 780
tgtaaaatca gcctatgtca gttatgatgt tcagaagcgt acaatttatt taaatatcac 840
aaacacacta aatataacaa acaataacta ttactctgtc gaagttgaaa acatcactgc 900
ccaagttcaa ttttcaaaaa cagttattgg aaaggcacgc ttaaacaaca taaccattat 960
tggtccactt gatatgaaac aaattgatta cacagtacct accgttatag cagaggaaat 1020
gagttatatg tatgatttct gtactctgat atccatcaaa gtgcataaca tagtactcat 1080
gatgcaagtt actgtgacaa caacatactt tggccactct gaacagatat cccaggagag 1140
gtatcagtat gtcgactgtg gaagaaacac aacttatcag ttggggcagt ctgaatattt 1200
aaatgtactt cagccacaac agtaaaaact ggaagagatg gatttaaaga agaaatatct 1260
attgatattt cctatactct caatgaagag gtatttccta ataggagacc ttaaattgaa 1320
caaacctaaa gtttacactt ctaagagtac agttaaaagt atgtggacct gcagttcttg 1380
taactctcca ctctgtgtta atgatatatt tgtactagga tcttttactt gaatctaaat 1440
ttactggttg atttccttct ccagcctatc ccctacaggg aaaagctgat acttccccta 1500
tagtacaata aataattatt taaaagtcat agctccagtc actactgaaa acataatttt 1560
ggtgataaac ataatttgag aaacttaatt tctgaatgtt tttatagaaa attactgaaa 1620
gtctattact catggaagac ttttaaagaa taaccttttt tcctgtttta taaattccca 1680
ttgttatatg gtagtatttc agctacacaa tattttagct tttagctaga catttatagc 1740
ttttcatttg ttgaaatggt aatcatctgc atgtttttgt cacttatttc aggttagtga 1800
ttgcctaaca cttataagcc aaaataatct ttgcaaaatt ccatacctaa aattttgaaa 1860
gcccctaatg ttttcacaca tctttctgta ttagttatag ttttgtgaaa tctttgtgtg 1920
atcttcaaac attatcattt aatgtacaat actgtaaata aactgtgcat ggcttttata 1980
cagctttagt aaatgtcaaa taaagtggta cagactcatt acaacaagtt tctcataaaa 2040
atacaataaa taggaaaatg aaattcagaa acccatagac tgggaatagg ttccagttac 2100
agcttggatc tggcataaaa taaatttgaa ataaaatatt ttgatgctcc atttttttat 2160
gttgcttttc atactaaaga atggtgtaga catgttttgc aactgttagg tacccagtta 2220
tcaattttat caatgtttta gaggaggaaa ttattttttt ggtagaaatt gttcaagaaa 2280
tccttaattg aatgtcatta aatgatggtg gccaaaataa aacctattta gaaatttaat 2340
cactttgcac atcacttgga atatgatgcc tctagtagtt acttttttat agttttctac 2400
ttttggtttt atttaaaatt gttttcaaat atagattatt gacttattca actttgctgt 2460
tttatatttt cagtatcatt tttcattttt tttttttttt gtcttttcac ttaccaagtt 2520
ctagggacat ttaaaatatg tactaagtgt aggagtggtt atgataccaa aaaatgtagc 2580
tgggttgaga ttaatttcgt tctgttttct catgacagaa atcaggtttc cctttcccca 2640
cccctaagtg cctaacttag gtctgaaaca gcctgtttat tagtctgact ctctcaacca 2700
taaaacataa gctttattta attctgcctt taaacacact caggtttccc cttaattttc 2760
atattatttt ctgcaagttt tcttgagtat cttcaattcg ttgaatgtgg tttttggttt 2820
ttttttgttt taacactagt cttcccttaa ttcattgcta actcaagcca tccttactat 2880
taaacccaaa tcagtccttt aagttcatta tggcctttct agtatttaaa aaaaaaaaaa 2940
tcattttcat ttttcttctg ctacgtttcc tgactactac tgcatacttc tctgatacag 3000
gttctgtttg tattttttat atcattctca ttttctcatt tgacatgatc tatgtctata 3060
tatgatatag gtcccctttt gtctcaaaat ttttaattat gtgacttcaa aaatcacctg 3120
tatctgtagt agggcttcca aatctgcttc tccatatgtg accagtcacc tgtctgcttt 3180
cacatttagc tagtgaacta cacatttact aaaatgtgta aattttacac atttagtgac 3240
tgtgtaaaat aaaaaaaaag ttattttatc atatcctttc tattatgttc ccatcctgtc 3300
ctcatgtccc atttacttta ttatcaccat tcatttcttc aaaattatct tttagatacg 3360
ctcatacaaa aatcaatcct tgttttcttg cttgtgtctt ttaaccttgg aaaattacat 3420
cgtgtaaatt aaacagattt ttctgatgat ctgtgcttct tatatactat tagagtgcat 3480
gatagtatct cctgaaaagg atggaaagta gaagcatttg cttttagtca cttaattttg 3540
aatctttttt cttcatcttt tgaattaatt ttttttatta tatctacttt tagtggagtt 3600
tgagtcagaa aaaaacaaga atttgaaaca agtaaaaaga tagaagagaa ataaagatgg 3660
tatgtgacta ctttcagaga gagttaagta actgtcagaa taagcctgga acaaaacagg 3720
ctgtaaatta ataaaactac aaacacacat tcaggtgaag cagaagtata gccataaaac 3780
atctagaaag agtgaatgag gcttttagct tttcttaggt caatgtccag tgtgcttttt 3840
tccatgggaa taggataggt attaatacgc ttttctaaac tgctctcaga ccttatccag 3900
aggacatggt aaagatatgt tacagaaatt tttctgatac ttcctggaat aactttaagt 3960
tacaccctag tagactggtc attctaataa aatccagtac tataacaaac ctctgtatgt 4020
tgatagcaca ttggcccttt ttagagttct ttcctatgtt tttcttacgt gatttcccac 4080
agttccatga gtccaacaaa ggagagtgat aggctcctta tcttttagaa gaggaaggaa 4140
aggcatgaag aagttgaggg actggctgaa gatcacgtac ttactaagta gtacaactgg 4200
agcaagatca agtatctctg tctcccatat ctgtgttcta tcatttaaaa tatatattgg 4260
aaatccctgc tgactcagat tggtatgatt aaaaatgaga ggaaagttca aatagttagt 4320
agtgacaaac taatactgct ggactaagat tttggtagca ttgttttcta aaatatttta 4380
aatggagaat gaacacttat aaaatgcttt ggaacataat ctttagctta attttctgtt 4440
aaaatttagt accccttcat cattccaata aagataagac tgatccattg tctaaggaaa 4500
ttatttataa ataatagaga ttaatttatt tgagatttga aataagaata gtatgaaaat 4560
attagatacc acataaattg tttgaaatta ctgaataacc atcttaagta tggaacattt 4620
aaatggctat attttatttg tgtacagttt ttctgtgcct tgttaggcca gtgaagcaat 4680
tattttctct aagaaaatga caataaaata taacacactt cagattgtct gatttacagt 4740
ttggaaagga caccgcaatg ttcaaatagg taggagacca tcaaaaacac aattaaagta 4800
acatattagg agacttgaaa cttcagccta ataaatcctt catggttctt agccttatta 4860
ttgtgatata attctagata ttttcttgga gggcatgtgc ccaactctcc cgcaccccat 4920
tttgtttgtc ttttaaagtt cttagaataa acagttcttt atataataat tatattttat 4980
ttaagaaaat agtttgttag gtacttttta aaagatgtaa atttttaaat ttacaaatac 5040
atatgggtct ttgataagca ataggaattg aattacaagt tactagggtt ataagcaaaa 5100
ggttgcttac cataatgtca ttaggtcacg atttttagct cacatctgga agcagcaact 5160
acttggctca agtacatata agagtaatta gttttattct ctctttttta taaaatcggg 5220
tttcagatga gatgtttatc ttagactatt ttagggaaaa attttacatg tttgagatgg 5280
tggagtaaaa agactgttaa acatttcttt taaaaaatta tttttacatt acaacaatat 5340
atttatgatg tgttcagatc aaaaatttaa cttctgtgtc ccagatctac tttcaaagtg 5400
agattttcac ttgtcagctt aaatttctga ctagaactaa catttgtgta tttttgtgct 5460
tagtcggaat acaaatttca cagtggattt ttgaagtttg tccttaaatt ggataaaatc 5520
aagtgattaa agttactaaa gagataaaaa tggtaatttc catttttaaa agtaatttgg 5580
ttgtgtttat agttatttgt acaagtattt atcacagact ctaaattgaa aaatgtagta 5640
tgatctatat ttgaccctaa aaatgttgga ttaatttaac aaatatggca gatttttcat 5700
aactaagtct taagtcttct aaaaggaagc tgttaccctt ctgtttttaa ttacattaat 5760
tgaaatgtgt tttaagagat acaatttcag catattttat atattaaaaa acaaaaaagg 5820
attagtattg agccagtggc caaaaggtaa tattactacc atgtagactg ttatagttca 5880
aattgtccca cttcacccag aattttagaa actagaagtc tgggaggtac tatatcagct 5940
gtagttgggt aattccaagt gctgatagta ctattcatct tttttattat tgtgtcagat 6000
gaaacaaatg ccaagttgca aaatatgcag atttttatta tataatggtt ttaggcataa 6060
attattaaca agccatgcct tatgtgtttc atcttatatt tttctttaga actaaactat 6120
aacagatttt ggaaaatgat ttgacgtgct tgctcacttg attgacttgg tcagatattt 6180
gaatgatggt attacctaga ttctaatcct tgattctagt tatataataa ataatataga 6240
atatgaaaat atgtttgggc atttactgtt tatattatgt agtagcctcc atcatgacac 6300
acttactaca tttatgaatt gagcagttct gtaattgtaa ttattattgc tgttcatgta 6360
acaaaacatg cttataatag caaacaaata gaaatgcccc caaaatgcta tttttttaat 6420
tcagttataa ctgttactct tgtagttgtg tatgacgcaa taaaatttgt aaaaaaattt 6480
cagcatgaaa aataaaattt gtatcactta tgta 6514
<210> 8
<211> 1313
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 8
Met Arg Ser Ala Ala Ala Ala Pro Arg Ser Pro Ala Val Ala Thr Glu
1 5 10 15
Ser Arg Arg Phe Ala Ala Ala Arg Trp Pro Gly Trp Arg Ser Leu Gln
20 25 30
Arg Pro Ala Arg Arg Ser Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ala Ala Pro Gly
35 40 45
Pro Tyr Pro Ser Ala Ala Pro Pro Pro Pro Gly Pro Gly Pro Pro Pro
50 55 60
Ser Arg Gln Ser Ser Pro Pro Ser Ala Ser Asp Cys Phe Gly Ser Asn
65 70 75 80
Gly Asn Gly Gly Gly Ala Phe Arg Pro Gly Ser Arg Arg Leu Leu Gly
85 90 95
Leu Gly Gly Pro Pro Arg Pro Phe Val Val Leu Leu Leu Pro Leu Ala
100 105 110
Ser Pro Gly Ala Pro Pro Ala Ala Pro Thr Arg Ala Ser Pro Leu Gly
115 120 125
Ala Arg Ala Ser Pro Pro Arg Ser Gly Val Ser Leu Ala Arg Pro Ala
130 135 140
Pro Gly Cys Pro Arg Pro Ala Cys Glu Pro Val Tyr Gly Pro Leu Thr
145 150 155 160
Met Ser Leu Lys Pro Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln
165 170 175
Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Pro Pro Ala
180 185 190
Ala Ala Asn Val Arg Lys Pro Gly Gly Ser Gly Leu Leu Ala Ser Pro
195 200 205
Ala Ala Ala Pro Ser Pro Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Ser Ala
210 215 220
Thr Ala Pro Ser Ser Val Val Ala Ala Thr Ser Gly Gly Gly Arg Pro
225 230 235 240
Gly Leu Gly Arg Gly Arg Asn Ser Asn Lys Gly Leu Pro Gln Ser Thr
245 250 255
Ile Ser Phe Asp Gly Ile Tyr Ala Asn Met Arg Met Val His Ile Leu
260 265 270
Thr Ser Val Val Gly Ser Lys Cys Glu Val Gln Val Lys Asn Gly Gly
275 280 285
Ile Tyr Glu Gly Val Phe Lys Thr Tyr Ser Pro Lys Cys Asp Leu Val
290 295 300
Leu Asp Ala Ala His Glu Lys Ser Thr Glu Ser Ser Ser Gly Pro Lys
305 310 315 320
Arg Glu Glu Ile Met Glu Ser Ile Leu Phe Lys Cys Ser Asp Phe Val
325 330 335
Val Val Gln Phe Lys Asp Met Asp Ser Ser Tyr Ala Lys Arg Asp Ala
340 345 350
Phe Thr Asp Ser Ala Ile Ser Ala Lys Val Asn Gly Glu His Lys Glu
355 360 365
Lys Asp Leu Glu Pro Trp Asp Ala Gly Glu Leu Thr Ala Asn Glu Glu
370 375 380
Leu Glu Ala Leu Glu Asn Asp Val Ser Asn Gly Trp Asp Pro Asn Asp
385 390 395 400
Met Phe Arg Tyr Asn Glu Glu Asn Tyr Gly Val Val Ser Thr Tyr Asp
405 410 415
Ser Ser Leu Ser Ser Tyr Thr Val Pro Leu Glu Arg Asp Asn Ser Glu
420 425 430
Glu Phe Leu Lys Arg Glu Ala Arg Ala Asn Gln Leu Ala Glu Glu Ile
435 440 445
Glu Ser Ser Ala Gln Tyr Lys Ala Arg Val Ala Leu Glu Asn Asp Asp
450 455 460
Arg Ser Glu Glu Glu Lys Tyr Thr Ala Val Gln Arg Asn Ser Ser Glu
465 470 475 480
Arg Glu Gly His Ser Ile Asn Thr Arg Glu Asn Lys Tyr Ile Pro Pro
485 490 495
Gly Gln Arg Asn Arg Glu Val Ile Ser Trp Gly Ser Gly Arg Gln Asn
500 505 510
Ser Pro Arg Met Gly Gln Pro Gly Ser Gly Ser Met Pro Ser Arg Ser
515 520 525
Thr Ser His Thr Ser Asp Phe Asn Pro Asn Ser Gly Ser Asp Gln Arg
530 535 540
Val Val Asn Gly Gly Val Pro Trp Pro Ser Pro Cys Pro Ser Pro Ser
545 550 555 560
Ser Arg Pro Pro Ser Arg Tyr Gln Ser Gly Pro Asn Ser Leu Pro Pro
565 570 575
Arg Ala Ala Thr Pro Thr Arg Pro Pro Ser Arg Pro Pro Ser Arg Pro
580 585 590
Ser Arg Pro Pro Ser His Pro Ser Ala His Gly Ser Pro Ala Pro Val
595 600 605
Ser Thr Met Pro Lys Arg Met Ser Ser Glu Gly Pro Pro Arg Met Ser
610 615 620
Pro Lys Ala Gln Arg His Pro Arg Asn His Arg Val Ser Ala Gly Arg
625 630 635 640
Gly Ser Ile Ser Ser Gly Leu Glu Phe Val Ser His Asn Pro Pro Ser
645 650 655
Glu Ala Ala Thr Pro Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Ser Gly Gly Thr
660 665 670
Trp Ser Ser Val Val Ser Gly Val Pro Arg Leu Ser Pro Lys Thr His
675 680 685
Arg Pro Arg Ser Pro Arg Gln Asn Ser Ile Gly Asn Thr Pro Ser Gly
690 695 700
Pro Val Leu Ala Ser Pro Gln Ala Gly Ile Ile Pro Thr Glu Ala Val
705 710 715 720
Ala Met Pro Ile Pro Ala Ala Ser Pro Thr Pro Ala Ser Pro Ala Ser
725 730 735
Asn Arg Ala Val Thr Pro Ser Ser Glu Ala Lys Asp Ser Arg Leu Gln
740 745 750
Asp Gln Arg Gln Asn Ser Pro Ala Gly Asn Lys Glu Asn Ile Lys Pro
755 760 765
Asn Glu Thr Ser Pro Ser Phe Ser Lys Ala Glu Asn Lys Gly Ile Ser
770 775 780
Pro Val Val Ser Glu His Arg Lys Gln Ile Asp Asp Leu Lys Lys Phe
785 790 795 800
Lys Asn Asp Phe Arg Leu Gln Pro Ser Ser Thr Ser Glu Ser Met Asp
805 810 815
Gln Leu Leu Asn Lys Asn Arg Glu Gly Glu Lys Ser Arg Asp Leu Ile
820 825 830
Lys Asp Lys Ile Glu Pro Ser Ala Lys Asp Ser Phe Ile Glu Asn Ser
835 840 845
Ser Ser Asn Cys Thr Ser Gly Ser Ser Lys Pro Asn Ser Pro Ser Ile
850 855 860
Ser Pro Ser Ile Leu Ser Asn Thr Glu His Lys Arg Gly Pro Glu Val
865 870 875 880
Thr Ser Gln Gly Val Gln Thr Ser Ser Pro Ala Cys Lys Gln Glu Lys
885 890 895
Asp Asp Lys Glu Glu Lys Lys Asp Ala Ala Glu Gln Val Arg Lys Ser
900 905 910
Thr Leu Asn Pro Asn Ala Lys Glu Phe Asn Pro Arg Ser Phe Ser Gln
915 920 925
Pro Lys Pro Ser Thr Thr Pro Thr Ser Pro Arg Pro Gln Ala Gln Pro
930 935 940
Ser Pro Ser Met Val Gly His Gln Gln Pro Thr Pro Val Tyr Thr Gln
945 950 955 960
Pro Val Cys Phe Ala Pro Asn Met Met Tyr Pro Val Pro Val Ser Pro
965 970 975
Gly Val Gln Pro Leu Tyr Pro Ile Pro Met Thr Pro Met Pro Val Asn
980 985 990
Gln Ala Lys Thr Tyr Arg Ala Val Pro Asn Met Pro Gln Gln Arg Gln
995 1000 1005
Asp Gln His His Gln Ser Ala Met Met His Pro Ala Ser Ala Ala
1010 1015 1020
Gly Pro Pro Ile Ala Ala Thr Pro Pro Ala Tyr Ser Thr Gln Tyr
1025 1030 1035
Val Ala Tyr Ser Pro Gln Gln Phe Pro Asn Gln Pro Leu Val Gln
1040 1045 1050
His Val Pro His Tyr Gln Ser Gln His Pro His Val Tyr Ser Pro
1055 1060 1065
Val Ile Gln Gly Asn Ala Arg Met Met Ala Pro Pro Thr His Ala
1070 1075 1080
Gln Pro Gly Leu Val Ser Ser Ser Ala Thr Gln Tyr Gly Ala His
1085 1090 1095
Glu Gln Thr His Ala Met Tyr Ala Cys Pro Lys Leu Pro Tyr Asn
1100 1105 1110
Lys Glu Thr Ser Pro Ser Phe Tyr Phe Ala Ile Ser Thr Gly Ser
1115 1120 1125
Leu Ala Gln Gln Tyr Ala His Pro Asn Ala Thr Leu His Pro His
1130 1135 1140
Thr Pro His Pro Gln Pro Ser Ala Thr Pro Thr Gly Gln Gln Gln
1145 1150 1155
Ser Gln His Gly Gly Ser His Pro Ala Pro Ser Pro Val Gln His
1160 1165 1170
His Gln His Gln Ala Ala Gln Ala Leu His Leu Ala Ser Pro Gln
1175 1180 1185
Gln Gln Ser Ala Ile Tyr His Ala Gly Leu Ala Pro Thr Pro Pro
1190 1195 1200
Ser Met Thr Pro Ala Ser Asn Thr Gln Ser Pro Gln Asn Ser Phe
1205 1210 1215
Pro Ala Ala Gln Gln Thr Val Phe Thr Ile His Pro Ser His Val
1220 1225 1230
Gln Pro Ala Tyr Thr Asn Pro Pro His Met Ala His Val Pro Gln
1235 1240 1245
Ala His Val Gln Ser Gly Met Val Pro Ser His Pro Thr Ala His
1250 1255 1260
Ala Pro Met Met Leu Met Thr Thr Gln Pro Pro Gly Gly Pro Gln
1265 1270 1275
Ala Ala Leu Ala Gln Ser Ala Leu Gln Pro Ile Pro Val Ser Thr
1280 1285 1290
Thr Ala His Phe Pro Tyr Met Thr His Pro Ser Val Gln Ala His
1295 1300 1305
His Gln Gln Gln Leu
1310
<210> 9
<211> 4712
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 9
acccccgaga aagcaaccca gcgcgccgcc cgctcctcac gtgtccctcc cggccccggg 60
gccacctcac gttctgcttc cgtctgaccc ctccgacttc cggtaaagag tccctatccg 120
cacctccgct cccacccggc gcctcggcgc gcccgccctc cgatgcgctc agcggccgca 180
gctcctcgga gtcccgcggt ggccaccgag tctcgccgct tcgccgcagc caggtggccc 240
gggtggcgct cgctccagcg gccggcgcgg cggagcgggc ggggcggcgg tggcgcggcc 300
ccgggaccgt atccctccgc cgcccctccc ccgcccggcc ccggcccccc tccctcccgg 360
cagagctcgc ctccctccgc ctcagactgt tttggtagca acggcaacgg cggcggcgcg 420
tttcggcccg gctcccggcg gctccttggt ctcggcgggc ctccccgccc cttcgtcgtc 480
ctccttctcc ccctcgccag cccgggcgcc cctccggccg cgccaacccg cgcctccccg 540
ctcggcgccc gcgcgtcccc gccgcgttcc ggcgtctcct tggcgcgccc ggctcccggc 600
tgtccccgcc cggcgtgcga gccggtgtat gggcccctca ccatgtcgct gaagccccag 660
cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagcaac agcagcagca gcagcagcag 720
cagcagccgc cgcccgcggc tgccaatgtc cgcaagcccg gcggcagcgg ccttctagcg 780
tcgcccgccg ccgcgccttc gccgtcctcg tcctcggtct cctcgtcctc ggccacggct 840
ccctcctcgg tggtcgcggc gacctccggc ggcgggaggc ccggcctggg cagaggtcga 900
aacagtaaca aaggactgcc tcagtctacg atttcttttg atggaatcta tgcaaatatg 960
aggatggttc atatacttac atcagttgtt ggctccaaat gtgaagtaca agtgaaaaat 1020
ggaggtatat atgaaggagt ttttaaaact tacagtccga agtgtgattt ggtacttgat 1080
gccgcacatg agaaaagtac agaatccagt tcggggccga aacgtgaaga aataatggag 1140
agtattttgt tcaaatgttc agactttgtt gtggtacagt ttaaagatat ggactccagt 1200
tatgcaaaaa gagatgcttt tactgactct gctatcagtg ctaaagtgaa tggcgaacac 1260
aaagagaagg acctggagcc ctgggatgca ggtgaactca cagccaatga ggaacttgag 1320
gctttggaaa atgacgtatc taatggatgg gatcccaatg atatgtttcg atataatgaa 1380
gaaaattatg gtgtagtgtc tacgtatgat agcagtttat cttcgtatac agtgccctta 1440
gaaagagata actcagaaga atttttaaaa cgggaagcaa gggcaaacca gttagcagaa 1500
gaaattgagt caagtgccca gtacaaagct cgagtggccc tggaaaatga tgataggagt 1560
gaggaagaaa aatacacagc agttcagaga aattccagtg aacgtgaggg gcacagcata 1620
aacactaggg aaaataaata tattcctcct ggacaaagaa atagagaagt catatcctgg 1680
ggaagtggga gacagaattc accgcgtatg ggccagcctg gatcgggctc catgccatca 1740
agatccactt ctcacacttc agatttcaac ccgaattctg gttcagacca aagagtagtt 1800
aatggaggtg ttccctggcc atcgccttgc ccatctcctt cctctcgccc accttctcgc 1860
taccagtcag gtcccaactc tcttccacct cgggcagcca cccctacacg gccgccctcc 1920
aggcccccct cgcggccatc cagacccccg tctcacccct ctgctcatgg ttctccagct 1980
cctgtctcta ctatgcctaa acgcatgtct tcagaagggc ctccaaggat gtccccaaag 2040
gcccagcgac atcctcgaaa tcacagagtt tctgctggga ggggttccat atccagtggc 2100
ctagaatttg tatcccacaa cccacccagt gaagcagcta ctcctccagt agcaaggacc 2160
agtccctcgg ggggaacgtg gtcatcagtg gtcagtgggg ttccaagatt atcccctaaa 2220
actcatagac ccaggtctcc cagacagaac agtattggaa atacccccag tgggccagtt 2280
cttgcttctc cccaagctgg tattattcca actgaagctg ttgccatgcc tattccagct 2340
gcatctccta cgcctgctag tcctgcatcg aacagagctg ttaccccttc tagtgaggct 2400
aaagattcca ggcttcaaga tcagaggcag aactctcctg cagggaataa agaaaatatt 2460
aaacccaatg aaacatcacc tagcttctca aaagctgaaa acaaaggtat atcaccagtt 2520
gtttctgaac atagaaaaca gattgatgat ttaaagaaat ttaagaatga ttttaggtta 2580
cagccaagtt ctacttctga atctatggat caactactaa acaaaaatag agagggagaa 2640
aaatcaagag atttgatcaa agacaaaatt gaaccaagtg ctaaggattc tttcattgaa 2700
aatagcagca gcaactgtac cagtggcagc agcaagccga atagccccag catttcccct 2760
tcaatactta gtaacacgga gcacaagagg ggacctgagg tcacttccca aggggttcag 2820
acttccagcc cagcatgtaa acaagagaaa gacgataagg aagagaagaa agacgcagct 2880
gagcaagtta ggaaatcaac attgaatccc aatgcaaagg agttcaaccc acgttccttc 2940
tctcagccaa agccttctac taccccaact tcacctcggc ctcaagcaca acctagccca 3000
tctatggtgg gtcatcaaca gccaactcca gtttatactc agcctgtttg ttttgcacca 3060
aatatgatgt atccagtccc agtgagccca ggcgtgcaac ctttataccc aatacctatg 3120
acgcccatgc cagtgaatca agccaagaca tatagagcag taccaaatat gccccaacag 3180
cggcaagacc agcatcatca gagtgccatg atgcacccag cgtcagcagc gggcccaccg 3240
attgcagcca ccccaccagc ttactccacg caatatgttg cctacagtcc tcagcagttc 3300
ccaaatcagc cccttgttca gcatgtgcca cattatcagt ctcagcatcc tcatgtctat 3360
agtcctgtaa tacagggtaa tgctagaatg atggcaccac caacacacgc ccagcctggt 3420
ttagtatctt cttcagcaac tcagtacggg gctcatgagc agacgcatgc gatgtatgca 3480
tgtcccaaat taccatacaa caaggagaca agcccttctt tctactttgc catttccacg 3540
ggctcccttg ctcagcagta tgcgcaccct aacgctaccc tgcacccaca tactccacac 3600
cctcagcctt cagctacccc cactggacag cagcaaagcc aacatggtgg aagtcatcct 3660
gcacccagtc ctgttcagca ccatcagcac caggccgccc aggctctcca tctggccagt 3720
ccacagcagc agtcagccat ttaccacgcg gggcttgcgc caactccacc ctccatgaca 3780
cctgcctcca acacgcagtc gccacagaat agtttcccag cagcacaaca gactgtcttt 3840
acgatccatc cttctcacgt tcagccggcg tataccaacc caccccacat ggcccacgta 3900
cctcaggctc atgtacagtc aggaatggtt ccttctcatc caactgccca tgcgccaatg 3960
atgctaatga cgacacagcc acccggcggt ccccaggccg ccctcgctca aagtgcacta 4020
cagcccattc cagtctcgac aacagcgcat ttcccctata tgacgcaccc ttcagtacaa 4080
gcccaccacc aacagcagtt gtaaggctgc cctggaggaa ccgaaaggcc aaattccctc 4140
ctcccttcta ctgcttctac caactggaag cacagaaaac tagaatttca tttattttgt 4200
ttttaaaata tatatgttga tttcttgtaa catccaatag gaatgctaac agttcacttg 4260
cagtggaaga tacttggacc gagtagaggc atttaggaac ttgggggcta ttccataatt 4320
ccatatgctg tttcagagtc ccgcaggtac cccagctctg cttgccgaaa ctggaagtta 4380
tttatttttt aataaccctt gaaagtcatg aacacatcag ctagcaaaag aagtaacaag 4440
agtgattctt gctgctatta ctgctaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaatcaa gacttggaac 4500
gcccttttac taaacttgac aaagtttcag taaattctta ccgtcaaact gacggattat 4560
tatttataaa tcaagtttga tgaggtgatc actgtctaca gtggttcaac ttttaagtta 4620
agggaaaaac ttttactttg tagataatat aaaataaaaa cttaaaaaaa atttaaaaaa 4680
taaaaaaagt tttaaaaact gaaaaaaaaa aa 4712
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 10
ttggcctttc ggttcctcc 19
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 11
ggaggaaccg aaaggccaa 19
<210> 12
<211> 148
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 12
tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgttg tcttggcctt tcggttcctc cagtgaagcc 60
acagatggga ggaaccgaaa ggccaaagga cacaaggcct gttactagca ctcacatgga 120
acaaatggcc accgtgggag gatgacaa 148
<210> 13
<211> 148
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 13
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctagtaacag gccttgtgtc 60
ctttggcctt tcggttcctc ccatctgtgg cttcactgga ggaaccgaaa ggccaagaca 120
acagcataca gccttcagca agcctcca 148
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 14
atagcagcaa gaatcactct tg 22
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 15
caagagtgat tcttgctgct at 22
<210> 16
<211> 151
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 16
ctggaggctt gctttgggct gtatgctgat agcagcaaga atcactcttg ttttggcctc 60
tgactgaaca agaggatctt gctgctatca ggacacaagg ccctttatca gcactcacat 120
ggaacaaatg gccaccgtgg gaggatgaca a 151
<210> 17
<211> 151
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 17
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctgataaagg gccttgtgtc 60
ctgatagcag caagatcctc ttgttcagtc agaggccaaa acaagagtga ttcttgctgc 120
tatcagcata cagcccaaag caagcctcca g 151
<210> 18
<211> 300
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 18
tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgttg tctactgctc tatatgtctt ggcagtgaag 60
ccacagatgg ccaagacata tagagcagta aggacacaag gcctgttact agcactcaca 120
tggaacaaat ggccaccgtg ggaggatgac aatggaggct tgctgaaggc tgtatgctgt 180
tgtcttggcc tttcggttcc tccagtgaag ccacagatgg gaggaaccga aaggccaaag 240
gacacaaggc ctgttactag cactcacatg gaacaaatgg ccaccgtggg aggatgacaa 300
<210> 19
<211> 300
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 19
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctagtaacag gccttgtgtc 60
ctttggcctt tcggttcctc ccatctgtgg cttcactgga ggaaccgaaa ggccaagaca 120
acagcataca gccttcagca agcctccatt gtcatcctcc cacggtggcc atttgttcca 180
tgtgagtgct agtaacaggc cttgtgtcct tactgctcta tatgtcttgg ccatctgtgg 240
cttcactgcc aagacatata gagcagtaga caacagcata cagccttcag caagcctcca 300
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 20
ttccagttgg tagaagcagt aga 23
<210> 21
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 21
tctactgctt ctaccaactg gaa 23
<210> 22
<211> 152
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 22
ctggaggctt gctttgggct gtatgctgtt ccagttggta gaagcagtag attttggcct 60
ctgactgatc tactgttcac caactggaac aggacacaag gccctttatc agcactcaca 120
tggaacaaat ggccaccgtg ggaggatgac aa 152
<210> 23
<211> 152
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 23
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctgataaagg gccttgtgtc 60
ctgttccagt tggtgaacag tagatcagtc agaggccaaa atctactgct tctaccaact 120
ggaacagcat acagcccaaa gcaagcctcc ag 152
<210> 24
<211> 151
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 24
tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgttg tcggggccgg tttcggggcc ttagtgaagc 60
cacagatgta cggccccgaa accggcccca ggacacaagg cctgttacta gcactcacat 120
ggaacaaatg gccaccgtgg gaggatgaca a 151
<210> 25
<211> 151
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 25
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctagtaacag gccttgtgtc 60
ctggggccgg tttcggggcc gtacatctgt ggcttcacta aggccccgaa accggccccg 120
acaacagcat acagccttca gcaagcctcc a 151
<210> 26
<211> 4145
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 26
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctcagc gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgttggagg cttgctgaag gctgtatgct gttgtcgggg 1140
ccggtttcgg ggccttagtg aagccacaga tgtacggccc cgaaaccggc cccaggacac 1200
aaggcctgtt actagcactc acatggaaca aatggccacc gtgggaggat gacaatggag 1260
gcttgctgaa ggctgtatgc tgttgtcttg gcctttcggt tcctccagtg aagccacaga 1320
tgggaggaac cgaaaggcca aaggacacaa ggcctgttac tagcactcac atggaacaaa 1380
tggccaccgt gggaggatga caatttctgt ggctgcgtga aagccttgag gggctccggg 1440
agctagagcc tctgctaacc atgttcatgc cttcttcttt ttcctacagc tcctgggcaa 1500
cgtgctggtt attgtgctgt ctcatcattt tggcaaagaa ttcctcgaag atccgaaggg 1560
aaagtcttcc acgactgtgg gatccgttcg aagatatcac cggttgagcc accatgagca 1620
ccctgtgccc cccccccagc cccgccgtgg ccaagaccga gatcgccctg agcggcaaga 1680
gccccctgct ggccgccacc ttcgcctact gggacaacat cctgggcccc cgcgtgcgcc 1740
acatctgggc ccccaagacc gagcaggtgc tgctgagcga cggcgagatc accttcctgg 1800
ccaaccacac cctgaacggc gagatcctgc gcaacgccga gagcggcgcc atcgacgtga 1860
agttcttcgt gctgagcgag aagggcgtga tcatcgtgag cctgatcttc gacggcaact 1920
ggaacggcga ccgcagcacc tacggcctga gcatcatcct gccccagacc gagctgagct 1980
tctacctgcc cctgcaccgc gtgtgcgtgg accgcctgac ccacatcatc cgcaagggcc 2040
gcatctggat gcacaaggag cgccaggaga acgtgcagaa gatcatcctg gagggcaccg 2100
agcgcatgga ggaccagggc cagagcatca tccccatgct gaccggcgag gtgatccccg 2160
tgatggagct gctgagcagc atgaagagcc acagcgtgcc cgaggagatc gacatcgccg 2220
acaccgtgct gaacgacgac gacatcggcg acagctgcca cgagggcttc ctgctgaacg 2280
ccatcagcag ccacctgcag acctgcggct gcagcgtggt ggtgggcagc agcgccgaga 2340
aggtgaacaa gatcgtgcgc accctgtgcc tgttcctgac ccccgccgag cgcaagtgca 2400
gccgcctgtg cgaggccgag agcagcttca agtacgagag cggcctgttc gtgcagggcc 2460
tgctgaagga cagcaccggc agcttcgtgc tgcccttccg ccaggtgatg tacgccccct 2520
accccaccac ccacatcgac gtggacgtga acaccgtgaa gcagatgccc ccctgccacg 2580
agcacatcta caaccagcgc cgctacatgc gcagcgagct gaccgccttc tggcgcgcca 2640
ccagcgagga ggacatggcc caggacacca tcatctacac cgacgagagc ttcacccccg 2700
acctgaacat cttccaggac gtgctgcacc gcgacaccct ggtgaaggcc ttcctggacc 2760
aggtgttcca gctgaagccc ggcctgagcc tgcgcagcac cttcctggcc cagttcctgc 2820
tggtgctgca ccgcaaggcc ctgaccctga tcaagtacat cgaggacgac acccagaagg 2880
gcaagaagcc cttcaagagc ctgcgcaacc tgaagatcga cctggacctg accgccgagg 2940
gcgacctgaa catcatcatg gccctggccg agaagatcaa gcccggcctg cacagcttca 3000
tcttcggccg ccccttctac accagcgtgc aggagcgcga cgtgctgatg accttctaac 3060
aattgttaat taagtttaaa ccctcgaggc cgcaagctta tcgataatca acctctggat 3120
tacaaaattt gtgaaagatt gactggtatt cttaactatg ttgctccttt tacgctatgt 3180
ggatacgctg ctttaatgcc tttgtatcat gctattgctt cccgtatggc tttcattttc 3240
tcctccttgt ataaatcctg gttgctgtct ctttatgagg agttgtggcc cgttgtcagg 3300
caacgtggcg tggtgtgcac tgtgtttgct gacgcaaccc ccactggttg gggcattgcc 3360
accacctgtc agctcctttc cgggactttc gctttccccc tccctattgc cacggcggaa 3420
ctcatcgccg cctgccttgc ccgctgctgg acaggggctc ggctgttggg cactgacaat 3480
tccgtggtgt tgtcggggaa atcatcgtcc tttccttggc tgctcgcctg tgttgccacc 3540
tggattctgc gcgggacgtc cttctgctac gtcccttcgg ccctcaatcc agcggacctt 3600
ccttcccgcg gcctgctgcc ggctctgcgg cctcttccgc gtcttcgcct tcgccctcag 3660
acgagtcgga tctccctttg ggccgcctcc ccgcatcgat accgtcgact agagctcgct 3720
gatcagcctc gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc tcccccgtgc 3780
cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat gaggaaattg 3840
catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg caggacagca 3900
agggggagga ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga gagatccacg ataacaaaca 3960
gcttttttgg ggtgaacata ttgactgaat tccctgcagg ttggccactc cctctctgcg 4020
cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg cgtcgggcga cctttggtcg 4080
cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg 4140
ttcct 4145
<210> 27
<211> 899
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 27
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
aaaaaaattg tcatcctccc acggtggcca tttgttccat gtgagtgcta gtaacaggcc 300
ttgtgtcctt tggcctttcg gttcctccca tctgtggctt cactggagga accgaaaggc 360
caagacaaca gcatacagcc ttcagcaagc ctccagtggt ctcatacaga acttataaga 420
ttcccaaatc caaagacatt tcacgtttat ggtgatttcc cagaacacat agcgacatgc 480
aaatattgca gggcgccact cccctgtccc tcacagccat cttcctgcca gggcgcacgc 540
gcgctgggtg ttcccgccta gtgacactgg gcccgcgatt ccttggagcg ggttgatgac 600
gtcagcgttt cccatggtga agcttggatc tgatccctag gttctagaac cggtgaccaa 660
ttgttaatta agtttaaacc ctcgaggccg caagcagatc cacgataaca aacagctttt 720
ttggggtgaa catattgact gaattccctg caggttggcc actccctctc tgcgcgctcg 780
ctcgctcact gaggccgccc gggcaaagcc cgggcgtcgg gcgacctttg gtcgcccggc 840
ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggccaac tccatcacta ggggttcct 899
<210> 28
<211> 2547
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 28
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg 60
cgtcgggcga cctttggtcg cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc 360
gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat 420
tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc 480
aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc 540
caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt 600
acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta 660
ccatggtcga ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac 720
ccccaatttt gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg 780
ggggggggcg cgcgccaggc ggggcggggc ggggcgaggg gcggggcggg gcgaggcgga 840
gaggtgcggc ggcagccaat cagagcggcg cgctccgaaa gtttcctttt atggcgaggc 900
ggcggcggcg gcggccctat aaaaagcgaa gcgcgcggcg ggcgggagtc gctgcgacgc 960
tgccttcgcc ccgtgccccg ctccgccgcc gcctcgcgcc gcccgccccg gctctgactg 1020
accgcgttac tcccacaggt gagcgggcgg gacggccctt ctcctcagcg ctgtaattag 1080
cgcttggttt aatgacggct tgttggaggc ttgctgaagg ctgtatgctg ttgtcttggc 1140
ctttcggttc ctccagtgaa gccacagatg ggaggaaccg aaaggccaaa ggacacaagg 1200
cctgttacta gcactcacat ggaacaaatg gccaccgtgg gaggatgaca atttctgtgg 1260
ctgcgtgaaa gccttgaggg gctccgggag ctagagcctc tgctaaccat gttcatgcct 1320
tcttcttttt cctacagctc ctgggcaacg tgctggttat tgtgctgtct catcattttg 1380
gcaaagaatt cctcgaagat ccgaagggaa agtcttccac gactgtggga tccgttcgaa 1440
gatatcaccg gttgagccac ccaattgtta attaagttta aaccctcgag gccgcaagct 1500
tatcgataat caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta 1560
tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc 1620
ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga 1680
ggagttgtgg cccgttgtca ggcaacgtgg cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac 1740
ccccactggt tggggcattg ccaccacctg tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc 1800
cctccctatt gccacggcgg aactcatcgc cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc 1860
tcggctgttg ggcactgaca attccgtggt gttgtcgggg aaatcatcgt cctttccttg 1920
gctgctcgcc tgtgttgcca cctggattct gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc 1980
ggccctcaat ccagcggacc ttccttcccg cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc 2040
gcgtcttcgc cttcgccctc agacgagtcg gatctccctt tgggccgcct ccccgcatcg 2100
ataccgtcga ctagagctcg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct 2160
gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt 2220
tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg 2280
ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg 2340
gagagatcca cgataacaaa cagctttttt ggggtgaaca tattgactga attccctgca 2400
ggttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg gcaaagcccg 2460
ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agagagggag 2520
tggccaactc catcactagg ggttcct 2547
<210> 29
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 29
tattagatct gatggccgc 19
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 30
ctccatcact aggggttcct 20
<210> 31
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 31
agctctgggt atttaagccc gagtgagcac gcagggtctc cattttgaag cgggaggtta 60
<210> 32
<211> 145
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 32
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag agagggagtg gccaa 145
<210> 33
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 33
gtgtactagg atcttttact tgaa 24
<210> 34
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 34
ttcaagtaaa agatcctagt acac 24
<210> 35
<211> 267
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 35
gtgatatcac aaggtcccag ggctggggtc agaaattctc tcccgaggga atgaagccac 60
aggagccaag agcaggagga ccaaggccct ggcgaaggcc gtggcctcgt tcaagtaaaa 120
gatcctagta cagtgcaggt cccaatgtgt actaggatct tttacttgaa cggggacgcc 180
ggcatccggg ctcaggaccc ccctctctgc cagaggcacc aacaccagag ttcacaaatc 240
agtctcctgc cctttgcatg tagcaaa 267
<210> 36
<211> 267
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 36
tttgctacat gcaaagggca ggagactgat ttgtgaactc tggtgttggt gcctctggca 60
gagagggggg tcctgagccc ggatgccggc gtccccgttc aagtaaaaga tcctagtaca 120
cattgggacc tgcactgtac taggatcttt tacttgaacg aggccacggc cttcgccagg 180
gccttggtcc tcctgctctt ggctcctgtg gcttcattcc ctcgggagag aatttctgac 240
cccagccctg ggaccttgtg atatcac 267
<210> 37
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 37
atgcatccat attcttcct 19
<210> 38
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 38
aggaagaata tggatgcat 19
<210> 39
<211> 148
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 39
tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgttg tcatgcatcc atattcttcc tagtgaagcc 60
acagatgagg aagaatatgg atgcatagga cacaaggcct gttactagca ctcacatgga 120
acaaatggcc accgtgggag gatgacaa 148
<210> 40
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 40
ttatttactt tctctgcac 19
<210> 41
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 41
gtgcagagaa agtaaataa 19
<210> 42
<211> 148
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 42
tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgttg tcttatttac tttctctgca cagtgaagcc 60
acagatggtg cagagaaagt aaataaagga cacaaggcct gttactagca ctcacatgga 120
acaaatggcc accgtgggag gatgacaa 148
<210> 43
<211> 151
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 43
tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgttg tcggggccgg tttcggggcc ttagtgaagc 60
cacagatgta cggccccgaa accggcccca ggacacaagg cctgttacta gcactcacat 120
ggaacaaatg gccaccgtgg gaggatgaca a 151
<210> 44
<211> 151
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 44
tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgttg tcggggccgg tttcggggcc ttagtgaagc 60
cacagatgta cggccccgaa accggcccca ggacacaagg cctgttacta gcactcacat 120
ggaacaaatg gccaccgtgg gaggatgaca a 151
<210> 45
<211> 296
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 45
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctgataaagg gccttgtgtc 60
ctgtctggtt aatctttatc aggttcagtc agaggccaaa aacctgataa agattaacca 120
gacagcatac agcccaaagc aagcctccag ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc 180
catgtgagtg ctgataaagg gccttgtgtc ctgcggttgc ggtgcctgcg cctcagtcag 240
aggccaaaag gcgcaggcac cgcaaccgca gcatacagcc caaagcaagc ctccag 296
<210> 46
<211> 296
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 46
ctggaggctt gctttgggct gtatgctgcg gttgcggtgc ctgcgccttt tggcctctga 60
ctgaggcgca ggcaccgcaa ccgcaggaca caaggccctt tatcagcact cacatggaac 120
aaatggccac cgtgggagga tgacaactgg aggcttgctt tgggctgtat gctgtctggt 180
taatctttat caggtttttg gcctctgact gaacctgata aagattaacc agacaggaca 240
caaggccctt tatcagcact cacatggaac aaatggccac cgtgggagga tgacaa 296
<210> 47
<211> 297
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 47
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctgataaagg gccttgtgtc 60
ctgggttgtt tccctccttg ttttcagtca gaggccaaaa taaacaagga gggaaacaac 120
ccagcataca gcccaaagca agcctccagt tgtcatcctc ccacggtggc catttgttcc 180
atgtgagtgc tgataaaggg ccttgtgtcc tggctgcggt tgcggtgcct gctcagtcag 240
aggccaaaag caggcaccgc aaccgcagcc agcatacagc ccaaagcaag cctccag 297
<210> 48
<211> 297
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 48
ctggaggctt gctttgggct gtatgctggc tgcggttgcg gtgcctgctt ttggcctctg 60
actgagcagg caccgcaacc gcagccagga cacaaggccc tttatcagca ctcacatgga 120
acaaatggcc accgtgggag gatgacaact ggaggcttgc tttgggctgt atgctgggtt 180
gtttccctcc ttgtttattt tggcctctga ctgaaaacaa ggagggaaac aacccaggac 240
acaaggccct ttatcagcac tcacatggaa caaatggcca ccgtgggagg atgacaa 297
<210> 49
<211> 294
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 49
ttgtcatcct cccacggtgg ccatttgttc catgtgagtg ctgataaagg gccttgtgtc 60
ctgtttcttc tggttaatct ttatcagtca gaggccaaaa taaagattaa ccagaagaaa 120
cagcatacag cccaaagcaa gcctccagtt gtcatcctcc cacggtggcc atttgttcca 180
tgtgagtgct gataaagggc cttgtgtcct gcggtgcctg cgcccgcggc tcagtcagag 240
gccaaaagcc gcgggcgcag gcaccgcagc atacagccca aagcaagcct ccag 294
<210> 50
<211> 294
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 50
ctggaggctt gctttgggct gtatgctgcg gtgcctgcgc ccgcggcttt tggcctctga 60
ctgagccgcg ggcgcaggca ccgcaggaca caaggccctt tatcagcact cacatggaac 120
aaatggccac cgtgggagga tgacaactgg aggcttgctt tgggctgtat gctgtttctt 180
ctggttaatc tttattttgg cctctgactg ataaagatta accagaagaa acaggacaca 240
aggcccttta tcagcactca catggaacaa atggccaccg tgggaggatg acaa 294
<210> 51
<211> 1446
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 51
atgagcaccc tgtgcccccc ccccagcccc gccgtggcca agaccgagat cgccctgagc 60
ggcaagagcc ccctgctggc cgccaccttc gcctactggg acaacatcct gggcccccgc 120
gtgcgccaca tctgggcccc caagaccgag caggtgctgc tgagcgacgg cgagatcacc 180
ttcctggcca accacaccct gaacggcgag atcctgcgca acgccgagag cggcgccatc 240
gacgtgaagt tcttcgtgct gagcgagaag ggcgtgatca tcgtgagcct gatcttcgac 300
ggcaactgga acggcgaccg cagcacctac ggcctgagca tcatcctgcc ccagaccgag 360
ctgagcttct acctgcccct gcaccgcgtg tgcgtggacc gcctgaccca catcatccgc 420
aagggccgca tctggatgca caaggagcgc caggagaacg tgcagaagat catcctggag 480
ggcaccgagc gcatggagga ccagggccag agcatcatcc ccatgctgac cggcgaggtg 540
atccccgtga tggagctgct gagcagcatg aagagccaca gcgtgcccga ggagatcgac 600
atcgccgaca ccgtgctgaa cgacgacgac atcggcgaca gctgccacga gggcttcctg 660
ctgaacgcca tcagcagcca cctgcagacc tgcggctgca gcgtggtggt gggcagcagc 720
gccgagaagg tgaacaagat cgtgcgcacc ctgtgcctgt tcctgacccc cgccgagcgc 780
aagtgcagcc gcctgtgcga ggccgagagc agcttcaagt acgagagcgg cctgttcgtg 840
cagggcctgc tgaaggacag caccggcagc ttcgtgctgc ccttccgcca ggtgatgtac 900
gccccctacc ccaccaccca catcgacgtg gacgtgaaca ccgtgaagca gatgcccccc 960
tgccacgagc acatctacaa ccagcgccgc tacatgcgca gcgagctgac cgccttctgg 1020
cgcgccacca gcgaggagga catggcccag gacaccatca tctacaccga cgagagcttc 1080
acccccgacc tgaacatctt ccaggacgtg ctgcaccgcg acaccctggt gaaggccttc 1140
ctggaccagg tgttccagct gaagcccggc ctgagcctgc gcagcacctt cctggcccag 1200
ttcctgctgg tgctgcaccg caaggccctg accctgatca agtacatcga ggacgacacc 1260
cagaagggca agaagccctt caagagcctg cgcaacctga agatcgacct ggacctgacc 1320
gccgagggcg acctgaacat catcatggcc ctggccgaga agatcaagcc cggcctgcac 1380
agcttcatct tcggccgccc cttctacacc agcgtgcagg agcgcgacgt gctgatgacc 1440
ttctaa 1446
<210> 52
<211> 3994
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 52
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctcagc gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgttggagg cttgctgaag gctgtatgct gttgtcatgc 1140
atccatattc ttcctagtga agccacagat gaggaagaat atggatgcat aggacacaag 1200
gcctgttact agcactcaca tggaacaaat ggccaccgtg ggaggatgac aatttctgtg 1260
gctgcgtgaa agccttgagg ggctccggga gctagagcct ctgctaacca tgttcatgcc 1320
ttcttctttt tcctacagct cctgggcaac gtgctggtta ttgtgctgtc tcatcatttt 1380
ggcaaagaat tcctcgaaga tccgaaggga aagtcttcca cgactgtggg atccgttcga 1440
agatatcacc ggttgagcca ccatgagcac cctgtgcccc ccccccagcc ccgccgtggc 1500
caagaccgag atcgccctga gcggcaagag ccccctgctg gccgccacct tcgcctactg 1560
ggacaacatc ctgggccccc gcgtgcgcca catctgggcc cccaagaccg agcaggtgct 1620
gctgagcgac ggcgagatca ccttcctggc caaccacacc ctgaacggcg agatcctgcg 1680
caacgccgag agcggcgcca tcgacgtgaa gttcttcgtg ctgagcgaga agggcgtgat 1740
catcgtgagc ctgatcttcg acggcaactg gaacggcgac cgcagcacct acggcctgag 1800
catcatcctg ccccagaccg agctgagctt ctacctgccc ctgcaccgcg tgtgcgtgga 1860
ccgcctgacc cacatcatcc gcaagggccg catctggatg cacaaggagc gccaggagaa 1920
cgtgcagaag atcatcctgg agggcaccga gcgcatggag gaccagggcc agagcatcat 1980
ccccatgctg accggcgagg tgatccccgt gatggagctg ctgagcagca tgaagagcca 2040
cagcgtgccc gaggagatcg acatcgccga caccgtgctg aacgacgacg acatcggcga 2100
cagctgccac gagggcttcc tgctgaacgc catcagcagc cacctgcaga cctgcggctg 2160
cagcgtggtg gtgggcagca gcgccgagaa ggtgaacaag atcgtgcgca ccctgtgcct 2220
gttcctgacc cccgccgagc gcaagtgcag ccgcctgtgc gaggccgaga gcagcttcaa 2280
gtacgagagc ggcctgttcg tgcagggcct gctgaaggac agcaccggca gcttcgtgct 2340
gcccttccgc caggtgatgt acgcccccta ccccaccacc cacatcgacg tggacgtgaa 2400
caccgtgaag cagatgcccc cctgccacga gcacatctac aaccagcgcc gctacatgcg 2460
cagcgagctg accgccttct ggcgcgccac cagcgaggag gacatggccc aggacaccat 2520
catctacacc gacgagagct tcacccccga cctgaacatc ttccaggacg tgctgcaccg 2580
cgacaccctg gtgaaggcct tcctggacca ggtgttccag ctgaagcccg gcctgagcct 2640
gcgcagcacc ttcctggccc agttcctgct ggtgctgcac cgcaaggccc tgaccctgat 2700
caagtacatc gaggacgaca cccagaaggg caagaagccc ttcaagagcc tgcgcaacct 2760
gaagatcgac ctggacctga ccgccgaggg cgacctgaac atcatcatgg ccctggccga 2820
gaagatcaag cccggcctgc acagcttcat cttcggccgc cccttctaca ccagcgtgca 2880
ggagcgcgac gtgctgatga ccttctaaca attgttaatt aagtttaaac cctcgaggcc 2940
gcaagcttat cgataatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg actggtattc 3000
ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct ttgtatcatg 3060
ctattgcttc ccgtatggct ttcattttct cctccttgta taaatcctgg ttgctgtctc 3120
tttatgagga gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact gtgtttgctg 3180
acgcaacccc cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc gggactttcg 3240
ctttccccct ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc cgctgctgga 3300
caggggctcg gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaaa tcatcgtcct 3360
ttccttggct gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc ttctgctacg 3420
tcccttcggc cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg gctctgcggc 3480
ctcttccgcg tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg gccgcctccc 3540
cgcatcgata ccgtcgacta gagctcgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca 3600
gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac 3660
tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat 3720
tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca 3780
tgctggggag agatccacga taacaaacag cttttttggg gtgaacatat tgactgaatt 3840
ccctgcaggt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc cgcccgggca 3900
aagcccgggc gtcgggcgac ctttggtcgc ccggcctcag tgagcgagcg agcgcgcaga 3960
gagggagtgg ccaactccat cactaggggt tcct 3994
<210> 53
<211> 3997
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 53
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctcagc gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgttggagg cttgctgaag gctgtatgct gttgtcgggg 1140
ccggtttcgg ggccttagtg aagccacaga tgtacggccc cgaaaccggc cccaggacac 1200
aaggcctgtt actagcactc acatggaaca aatggccacc gtgggaggat gacaatttct 1260
gtggctgcgt gaaagccttg aggggctccg ggagctagag cctctgctaa ccatgttcat 1320
gccttcttct ttttcctaca gctcctgggc aacgtgctgg ttattgtgct gtctcatcat 1380
tttggcaaag aattcctcga agatccgaag ggaaagtctt ccacgactgt gggatccgtt 1440
cgaagatatc accggttgag ccaccatgag caccctgtgc ccccccccca gccccgccgt 1500
ggccaagacc gagatcgccc tgagcggcaa gagccccctg ctggccgcca ccttcgccta 1560
ctgggacaac atcctgggcc cccgcgtgcg ccacatctgg gcccccaaga ccgagcaggt 1620
gctgctgagc gacggcgaga tcaccttcct ggccaaccac accctgaacg gcgagatcct 1680
gcgcaacgcc gagagcggcg ccatcgacgt gaagttcttc gtgctgagcg agaagggcgt 1740
gatcatcgtg agcctgatct tcgacggcaa ctggaacggc gaccgcagca cctacggcct 1800
gagcatcatc ctgccccaga ccgagctgag cttctacctg cccctgcacc gcgtgtgcgt 1860
ggaccgcctg acccacatca tccgcaaggg ccgcatctgg atgcacaagg agcgccagga 1920
gaacgtgcag aagatcatcc tggagggcac cgagcgcatg gaggaccagg gccagagcat 1980
catccccatg ctgaccggcg aggtgatccc cgtgatggag ctgctgagca gcatgaagag 2040
ccacagcgtg cccgaggaga tcgacatcgc cgacaccgtg ctgaacgacg acgacatcgg 2100
cgacagctgc cacgagggct tcctgctgaa cgccatcagc agccacctgc agacctgcgg 2160
ctgcagcgtg gtggtgggca gcagcgccga gaaggtgaac aagatcgtgc gcaccctgtg 2220
cctgttcctg acccccgccg agcgcaagtg cagccgcctg tgcgaggccg agagcagctt 2280
caagtacgag agcggcctgt tcgtgcaggg cctgctgaag gacagcaccg gcagcttcgt 2340
gctgcccttc cgccaggtga tgtacgcccc ctaccccacc acccacatcg acgtggacgt 2400
gaacaccgtg aagcagatgc ccccctgcca cgagcacatc tacaaccagc gccgctacat 2460
gcgcagcgag ctgaccgcct tctggcgcgc caccagcgag gaggacatgg cccaggacac 2520
catcatctac accgacgaga gcttcacccc cgacctgaac atcttccagg acgtgctgca 2580
ccgcgacacc ctggtgaagg ccttcctgga ccaggtgttc cagctgaagc ccggcctgag 2640
cctgcgcagc accttcctgg cccagttcct gctggtgctg caccgcaagg ccctgaccct 2700
gatcaagtac atcgaggacg acacccagaa gggcaagaag cccttcaaga gcctgcgcaa 2760
cctgaagatc gacctggacc tgaccgccga gggcgacctg aacatcatca tggccctggc 2820
cgagaagatc aagcccggcc tgcacagctt catcttcggc cgccccttct acaccagcgt 2880
gcaggagcgc gacgtgctga tgaccttcta acaattgtta attaagttta aaccctcgag 2940
gccgcaagct tatcgataat caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta 3000
ttcttaacta tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc 3060
atgctattgc ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc tggttgctgt 3120
ctctttatga ggagttgtgg cccgttgtca ggcaacgtgg cgtggtgtgc actgtgtttg 3180
ctgacgcaac ccccactggt tggggcattg ccaccacctg tcagctcctt tccgggactt 3240
tcgctttccc cctccctatt gccacggcgg aactcatcgc cgcctgcctt gcccgctgct 3300
ggacaggggc tcggctgttg ggcactgaca attccgtggt gttgtcgggg aaatcatcgt 3360
cctttccttg gctgctcgcc tgtgttgcca cctggattct gcgcgggacg tccttctgct 3420
acgtcccttc ggccctcaat ccagcggacc ttccttcccg cggcctgctg ccggctctgc 3480
ggcctcttcc gcgtcttcgc cttcgccctc agacgagtcg gatctccctt tgggccgcct 3540
ccccgcatcg ataccgtcga ctagagctcg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg 3600
ccagccatct gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc 3660
cactgtcctt tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc 3720
tattctgggg ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag 3780
gcatgctggg gagagatcca cgataacaaa cagctttttt ggggtgaaca tattgactga 3840
attccctgca ggttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 3900
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 3960
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttcct 3997
<210> 54
<211> 3994
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 54
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctcagc gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgttggagg cttgctgaag gctgtatgct gttgtcttat 1140
ttactttctc tgcacagtga agccacagat ggtgcagaga aagtaaataa aggacacaag 1200
gcctgttact agcactcaca tggaacaaat ggccaccgtg ggaggatgac aatttctgtg 1260
gctgcgtgaa agccttgagg ggctccggga gctagagcct ctgctaacca tgttcatgcc 1320
ttcttctttt tcctacagct cctgggcaac gtgctggtta ttgtgctgtc tcatcatttt 1380
ggcaaagaat tcctcgaaga tccgaaggga aagtcttcca cgactgtggg atccgttcga 1440
agatatcacc ggttgagcca ccatgagcac cctgtgcccc ccccccagcc ccgccgtggc 1500
caagaccgag atcgccctga gcggcaagag ccccctgctg gccgccacct tcgcctactg 1560
ggacaacatc ctgggccccc gcgtgcgcca catctgggcc cccaagaccg agcaggtgct 1620
gctgagcgac ggcgagatca ccttcctggc caaccacacc ctgaacggcg agatcctgcg 1680
caacgccgag agcggcgcca tcgacgtgaa gttcttcgtg ctgagcgaga agggcgtgat 1740
catcgtgagc ctgatcttcg acggcaactg gaacggcgac cgcagcacct acggcctgag 1800
catcatcctg ccccagaccg agctgagctt ctacctgccc ctgcaccgcg tgtgcgtgga 1860
ccgcctgacc cacatcatcc gcaagggccg catctggatg cacaaggagc gccaggagaa 1920
cgtgcagaag atcatcctgg agggcaccga gcgcatggag gaccagggcc agagcatcat 1980
ccccatgctg accggcgagg tgatccccgt gatggagctg ctgagcagca tgaagagcca 2040
cagcgtgccc gaggagatcg acatcgccga caccgtgctg aacgacgacg acatcggcga 2100
cagctgccac gagggcttcc tgctgaacgc catcagcagc cacctgcaga cctgcggctg 2160
cagcgtggtg gtgggcagca gcgccgagaa ggtgaacaag atcgtgcgca ccctgtgcct 2220
gttcctgacc cccgccgagc gcaagtgcag ccgcctgtgc gaggccgaga gcagcttcaa 2280
gtacgagagc ggcctgttcg tgcagggcct gctgaaggac agcaccggca gcttcgtgct 2340
gcccttccgc caggtgatgt acgcccccta ccccaccacc cacatcgacg tggacgtgaa 2400
caccgtgaag cagatgcccc cctgccacga gcacatctac aaccagcgcc gctacatgcg 2460
cagcgagctg accgccttct ggcgcgccac cagcgaggag gacatggccc aggacaccat 2520
catctacacc gacgagagct tcacccccga cctgaacatc ttccaggacg tgctgcaccg 2580
cgacaccctg gtgaaggcct tcctggacca ggtgttccag ctgaagcccg gcctgagcct 2640
gcgcagcacc ttcctggccc agttcctgct ggtgctgcac cgcaaggccc tgaccctgat 2700
caagtacatc gaggacgaca cccagaaggg caagaagccc ttcaagagcc tgcgcaacct 2760
gaagatcgac ctggacctga ccgccgaggg cgacctgaac atcatcatgg ccctggccga 2820
gaagatcaag cccggcctgc acagcttcat cttcggccgc cccttctaca ccagcgtgca 2880
ggagcgcgac gtgctgatga ccttctaaca attgttaatt aagtttaaac cctcgaggcc 2940
gcaagcttat cgataatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg actggtattc 3000
ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct ttgtatcatg 3060
ctattgcttc ccgtatggct ttcattttct cctccttgta taaatcctgg ttgctgtctc 3120
tttatgagga gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact gtgtttgctg 3180
acgcaacccc cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc gggactttcg 3240
ctttccccct ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc cgctgctgga 3300
caggggctcg gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaaa tcatcgtcct 3360
ttccttggct gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc ttctgctacg 3420
tcccttcggc cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg gctctgcggc 3480
ctcttccgcg tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg gccgcctccc 3540
cgcatcgata ccgtcgacta gagctcgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca 3600
gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac 3660
tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat 3720
tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca 3780
tgctggggag agatccacga taacaaacag cttttttggg gtgaacatat tgactgaatt 3840
ccctgcaggt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc cgcccgggca 3900
aagcccgggc gtcgggcgac ctttggtcgc ccggcctcag tgagcgagcg agcgcgcaga 3960
gagggagtgg ccaactccat cactaggggt tcct 3994
<210> 55
<211> 902
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 55
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
aaaaaaattg tcatcctccc acggtggcca tttgttccat gtgagtgcta gtaacaggcc 300
ttgtgtcctg gggccggttt cggggccgta catctgtggc ttcactaagg ccccgaaacc 360
ggccccgaca acagcataca gccttcagca agcctccagt ggtctcatac agaacttata 420
agattcccaa atccaaagac atttcacgtt tatggtgatt tcccagaaca catagcgaca 480
tgcaaatatt gcagggcgcc actcccctgt ccctcacagc catcttcctg ccagggcgca 540
cgcgcgctgg gtgttcccgc ctagtgacac tgggcccgcg attccttgga gcgggttgat 600
gacgtcagcg tttcccatgg tgaagcttgg atctgatccc taggttctag aaccggtgac 660
caattgttaa ttaagtttaa accctcgagg ccgcaagcag atccacgata acaaacagct 720
tttttggggt gaacatattg actgaattcc ctgcaggttg gccactccct ctctgcgcgc 780
tcgctcgctc actgaggccg cccgggcaaa gcccgggcgt cgggcgacct ttggtcgccc 840
ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagaga gggagtggcc aactccatca ctaggggttc 900
ct 902
<210> 56
<211> 2550
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 56
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg 60
cgtcgggcga cctttggtcg cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc 360
gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat 420
tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc 480
aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc 540
caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt 600
acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta 660
ccatggtcga ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac 720
ccccaatttt gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg 780
ggggggggcg cgcgccaggc ggggcggggc ggggcgaggg gcggggcggg gcgaggcgga 840
gaggtgcggc ggcagccaat cagagcggcg cgctccgaaa gtttcctttt atggcgaggc 900
ggcggcggcg gcggccctat aaaaagcgaa gcgcgcggcg ggcgggagtc gctgcgacgc 960
tgccttcgcc ccgtgccccg ctccgccgcc gcctcgcgcc gcccgccccg gctctgactg 1020
accgcgttac tcccacaggt gagcgggcgg gacggccctt ctcctcagcg ctgtaattag 1080
cgcttggttt aatgacggct tgttggaggc ttgctgaagg ctgtatgctg ttgtcggggc 1140
cggtttcggg gccttagtga agccacagat gtacggcccc gaaaccggcc ccaggacaca 1200
aggcctgtta ctagcactca catggaacaa atggccaccg tgggaggatg acaatttctg 1260
tggctgcgtg aaagccttga ggggctccgg gagctagagc ctctgctaac catgttcatg 1320
ccttcttctt tttcctacag ctcctgggca acgtgctggt tattgtgctg tctcatcatt 1380
ttggcaaaga attcctcgaa gatccgaagg gaaagtcttc cacgactgtg ggatccgttc 1440
gaagatatca ccggttgagc cacccaattg ttaattaagt ttaaaccctc gaggccgcaa 1500
gcttatcgat aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa 1560
ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat 1620
tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta 1680
tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc 1740
aacccccact ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt 1800
ccccctccct attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg 1860
ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc 1920
ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc 1980
ttcggccctc aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct 2040
tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgca 2100
tcgataccgt cgactagagc tcgctgatca gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca 2160
tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc 2220
ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg 2280
gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aagacaatag caggcatgct 2340
ggggagagat ccacgataac aaacagcttt tttggggtga acatattgac tgaattccct 2400
gcaggttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc 2460
ccgggcgtcg ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg 2520
gagtggccaa ctccatcact aggggttcct 2550
<210> 57
<211> 4142
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 57
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgtctggag gcttgctttg ggctgtatgc tgcggttgcg 1140
gtgcctgcgc cttttggcct ctgactgagg cgcaggcacc gcaaccgcag gacacaaggc 1200
cctttatcag cactcacatg gaacaaatgg ccaccgtggg aggatgacaa ctggaggctt 1260
gctttgggct gtatgctgtc tggttaatct ttatcaggtt tttggcctct gactgaacct 1320
gataaagatt aaccagacag gacacaaggc cctttatcag cactcacatg gaacaaatgg 1380
ccaccgtggg aggatgacaa tttctgtggc tgcgtgaaag ccttgagggg ctccgggagc 1440
tagagcctct gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc tgggcaacgt 1500
gctggttatt gtgctgtctc atcattttgg caaagaattc ctcgaagatc cgaagggaaa 1560
gtcttccacg actgtgggat ccgttcgaag atatcaccgg ttgagccacc atgagcaccc 1620
tgtgcccccc ccccagcccc gccgtggcca agaccgagat cgccctgagc ggcaagagcc 1680
ccctgctggc cgccaccttc gcctactggg acaacatcct gggcccccgc gtgcgccaca 1740
tctgggcccc caagaccgag caggtgctgc tgagcgacgg cgagatcacc ttcctggcca 1800
accacaccct gaacggcgag atcctgcgca acgccgagag cggcgccatc gacgtgaagt 1860
tcttcgtgct gagcgagaag ggcgtgatca tcgtgagcct gatcttcgac ggcaactgga 1920
acggcgaccg cagcacctac ggcctgagca tcatcctgcc ccagaccgag ctgagcttct 1980
acctgcccct gcaccgcgtg tgcgtggacc gcctgaccca catcatccgc aagggccgca 2040
tctggatgca caaggagcgc caggagaacg tgcagaagat catcctggag ggcaccgagc 2100
gcatggagga ccagggccag agcatcatcc ccatgctgac cggcgaggtg atccccgtga 2160
tggagctgct gagcagcatg aagagccaca gcgtgcccga ggagatcgac atcgccgaca 2220
ccgtgctgaa cgacgacgac atcggcgaca gctgccacga gggcttcctg ctgaacgcca 2280
tcagcagcca cctgcagacc tgcggctgca gcgtggtggt gggcagcagc gccgagaagg 2340
tgaacaagat cgtgcgcacc ctgtgcctgt tcctgacccc cgccgagcgc aagtgcagcc 2400
gcctgtgcga ggccgagagc agcttcaagt acgagagcgg cctgttcgtg cagggcctgc 2460
tgaaggacag caccggcagc ttcgtgctgc ccttccgcca ggtgatgtac gccccctacc 2520
ccaccaccca catcgacgtg gacgtgaaca ccgtgaagca gatgcccccc tgccacgagc 2580
acatctacaa ccagcgccgc tacatgcgca gcgagctgac cgccttctgg cgcgccacca 2640
gcgaggagga catggcccag gacaccatca tctacaccga cgagagcttc acccccgacc 2700
tgaacatctt ccaggacgtg ctgcaccgcg acaccctggt gaaggccttc ctggaccagg 2760
tgttccagct gaagcccggc ctgagcctgc gcagcacctt cctggcccag ttcctgctgg 2820
tgctgcaccg caaggccctg accctgatca agtacatcga ggacgacacc cagaagggca 2880
agaagccctt caagagcctg cgcaacctga agatcgacct ggacctgacc gccgagggcg 2940
acctgaacat catcatggcc ctggccgaga agatcaagcc cggcctgcac agcttcatct 3000
tcggccgccc cttctacacc agcgtgcagg agcgcgacgt gctgatgacc ttctaacaat 3060
tgttaattaa gtttaaaccc tcgaggccgc aagcttatcg ataatcaacc tctggattac 3120
aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg ctccttttac gctatgtgga 3180
tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc gtatggcttt cattttctcc 3240
tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt tgtggcccgt tgtcaggcaa 3300
cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac gcaaccccca ctggttgggg cattgccacc 3360
acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct ttccccctcc ctattgccac ggcggaactc 3420
atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc tgttgggcac tgacaattcc 3480
gtggtgttgt cggggaaatc atcgtccttt ccttggctgc tcgcctgtgt tgccacctgg 3540
attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc ccttcggccc tcaatccagc ggaccttcct 3600
tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct cttccgcgtc ttcgccttcg ccctcagacg 3660
agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg catcgatacc gtcgactaga gctcgctgat 3720
cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt 3780
ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat 3840
cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg 3900
gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg ctggggagag atccacgata acaaacagct 3960
tttttggggt gaacatattg actgaattcc ctgcaggttg gccactccct ctctgcgcgc 4020
tcgctcgctc actgaggccg cccgggcaaa gcccgggcgt cgggcgacct ttggtcgccc 4080
ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagaga gggagtggcc aactccatca ctaggggttc 4140
ct 4142
<210> 58
<211> 4143
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 58
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgtctggag gcttgctttg ggctgtatgc tggctgcggt 1140
tgcggtgcct gcttttggcc tctgactgag caggcaccgc aaccgcagcc aggacacaag 1200
gccctttatc agcactcaca tggaacaaat ggccaccgtg ggaggatgac aactggaggc 1260
ttgctttggg ctgtatgctg ggttgtttcc ctccttgttt attttggcct ctgactgaaa 1320
acaaggaggg aaacaaccca ggacacaagg ccctttatca gcactcacat ggaacaaatg 1380
gccaccgtgg gaggatgaca atttctgtgg ctgcgtgaaa gccttgaggg gctccgggag 1440
ctagagcctc tgctaaccat gttcatgcct tcttcttttt cctacagctc ctgggcaacg 1500
tgctggttat tgtgctgtct catcattttg gcaaagaatt cctcgaagat ccgaagggaa 1560
agtcttccac gactgtggga tccgttcgaa gatatcaccg gttgagccac catgagcacc 1620
ctgtgccccc cccccagccc cgccgtggcc aagaccgaga tcgccctgag cggcaagagc 1680
cccctgctgg ccgccacctt cgcctactgg gacaacatcc tgggcccccg cgtgcgccac 1740
atctgggccc ccaagaccga gcaggtgctg ctgagcgacg gcgagatcac cttcctggcc 1800
aaccacaccc tgaacggcga gatcctgcgc aacgccgaga gcggcgccat cgacgtgaag 1860
ttcttcgtgc tgagcgagaa gggcgtgatc atcgtgagcc tgatcttcga cggcaactgg 1920
aacggcgacc gcagcaccta cggcctgagc atcatcctgc cccagaccga gctgagcttc 1980
tacctgcccc tgcaccgcgt gtgcgtggac cgcctgaccc acatcatccg caagggccgc 2040
atctggatgc acaaggagcg ccaggagaac gtgcagaaga tcatcctgga gggcaccgag 2100
cgcatggagg accagggcca gagcatcatc cccatgctga ccggcgaggt gatccccgtg 2160
atggagctgc tgagcagcat gaagagccac agcgtgcccg aggagatcga catcgccgac 2220
accgtgctga acgacgacga catcggcgac agctgccacg agggcttcct gctgaacgcc 2280
atcagcagcc acctgcagac ctgcggctgc agcgtggtgg tgggcagcag cgccgagaag 2340
gtgaacaaga tcgtgcgcac cctgtgcctg ttcctgaccc ccgccgagcg caagtgcagc 2400
cgcctgtgcg aggccgagag cagcttcaag tacgagagcg gcctgttcgt gcagggcctg 2460
ctgaaggaca gcaccggcag cttcgtgctg cccttccgcc aggtgatgta cgccccctac 2520
cccaccaccc acatcgacgt ggacgtgaac accgtgaagc agatgccccc ctgccacgag 2580
cacatctaca accagcgccg ctacatgcgc agcgagctga ccgccttctg gcgcgccacc 2640
agcgaggagg acatggccca ggacaccatc atctacaccg acgagagctt cacccccgac 2700
ctgaacatct tccaggacgt gctgcaccgc gacaccctgg tgaaggcctt cctggaccag 2760
gtgttccagc tgaagcccgg cctgagcctg cgcagcacct tcctggccca gttcctgctg 2820
gtgctgcacc gcaaggccct gaccctgatc aagtacatcg aggacgacac ccagaagggc 2880
aagaagccct tcaagagcct gcgcaacctg aagatcgacc tggacctgac cgccgagggc 2940
gacctgaaca tcatcatggc cctggccgag aagatcaagc ccggcctgca cagcttcatc 3000
ttcggccgcc ccttctacac cagcgtgcag gagcgcgacg tgctgatgac cttctaacaa 3060
ttgttaatta agtttaaacc ctcgaggccg caagcttatc gataatcaac ctctggatta 3120
caaaatttgt gaaagattga ctggtattct taactatgtt gctcctttta cgctatgtgg 3180
atacgctgct ttaatgcctt tgtatcatgc tattgcttcc cgtatggctt tcattttctc 3240
ctccttgtat aaatcctggt tgctgtctct ttatgaggag ttgtggcccg ttgtcaggca 3300
acgtggcgtg gtgtgcactg tgtttgctga cgcaaccccc actggttggg gcattgccac 3360
cacctgtcag ctcctttccg ggactttcgc tttccccctc cctattgcca cggcggaact 3420
catcgccgcc tgccttgccc gctgctggac aggggctcgg ctgttgggca ctgacaattc 3480
cgtggtgttg tcggggaaat catcgtcctt tccttggctg ctcgcctgtg ttgccacctg 3540
gattctgcgc gggacgtcct tctgctacgt cccttcggcc ctcaatccag cggaccttcc 3600
ttcccgcggc ctgctgccgg ctctgcggcc tcttccgcgt cttcgccttc gccctcagac 3660
gagtcggatc tccctttggg ccgcctcccc gcatcgatac cgtcgactag agctcgctga 3720
tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct 3780
tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca 3840
tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag 3900
ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggaga gatccacgat aacaaacagc 3960
ttttttgggg tgaacatatt gactgaattc cctgcaggtt ggccactccc tctctgcgcg 4020
ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc 4080
cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag agggagtggc caactccatc actaggggtt 4140
cct 4143
<210> 59
<211> 4140
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 59
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgtctggag gcttgctttg ggctgtatgc tgcggtgcct 1140
gcgcccgcgg cttttggcct ctgactgagc cgcgggcgca ggcaccgcag gacacaaggc 1200
cctttatcag cactcacatg gaacaaatgg ccaccgtggg aggatgacaa ctggaggctt 1260
gctttgggct gtatgctgtt tcttctggtt aatctttatt ttggcctctg actgataaag 1320
attaaccaga agaaacagga cacaaggccc tttatcagca ctcacatgga acaaatggcc 1380
accgtgggag gatgacaatt tctgtggctg cgtgaaagcc ttgaggggct ccgggagcta 1440
gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg ggcaacgtgc 1500
tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattcct cgaagatccg aagggaaagt 1560
cttccacgac tgtgggatcc gttcgaagat atcaccggtt gagccaccat gagcaccctg 1620
tgcccccccc ccagccccgc cgtggccaag accgagatcg ccctgagcgg caagagcccc 1680
ctgctggccg ccaccttcgc ctactgggac aacatcctgg gcccccgcgt gcgccacatc 1740
tgggccccca agaccgagca ggtgctgctg agcgacggcg agatcacctt cctggccaac 1800
cacaccctga acggcgagat cctgcgcaac gccgagagcg gcgccatcga cgtgaagttc 1860
ttcgtgctga gcgagaaggg cgtgatcatc gtgagcctga tcttcgacgg caactggaac 1920
ggcgaccgca gcacctacgg cctgagcatc atcctgcccc agaccgagct gagcttctac 1980
ctgcccctgc accgcgtgtg cgtggaccgc ctgacccaca tcatccgcaa gggccgcatc 2040
tggatgcaca aggagcgcca ggagaacgtg cagaagatca tcctggaggg caccgagcgc 2100
atggaggacc agggccagag catcatcccc atgctgaccg gcgaggtgat ccccgtgatg 2160
gagctgctga gcagcatgaa gagccacagc gtgcccgagg agatcgacat cgccgacacc 2220
gtgctgaacg acgacgacat cggcgacagc tgccacgagg gcttcctgct gaacgccatc 2280
agcagccacc tgcagacctg cggctgcagc gtggtggtgg gcagcagcgc cgagaaggtg 2340
aacaagatcg tgcgcaccct gtgcctgttc ctgacccccg ccgagcgcaa gtgcagccgc 2400
ctgtgcgagg ccgagagcag cttcaagtac gagagcggcc tgttcgtgca gggcctgctg 2460
aaggacagca ccggcagctt cgtgctgccc ttccgccagg tgatgtacgc cccctacccc 2520
accacccaca tcgacgtgga cgtgaacacc gtgaagcaga tgcccccctg ccacgagcac 2580
atctacaacc agcgccgcta catgcgcagc gagctgaccg ccttctggcg cgccaccagc 2640
gaggaggaca tggcccagga caccatcatc tacaccgacg agagcttcac ccccgacctg 2700
aacatcttcc aggacgtgct gcaccgcgac accctggtga aggccttcct ggaccaggtg 2760
ttccagctga agcccggcct gagcctgcgc agcaccttcc tggcccagtt cctgctggtg 2820
ctgcaccgca aggccctgac cctgatcaag tacatcgagg acgacaccca gaagggcaag 2880
aagcccttca agagcctgcg caacctgaag atcgacctgg acctgaccgc cgagggcgac 2940
ctgaacatca tcatggccct ggccgagaag atcaagcccg gcctgcacag cttcatcttc 3000
ggccgcccct tctacaccag cgtgcaggag cgcgacgtgc tgatgacctt ctaacaattg 3060
ttaattaagt ttaaaccctc gaggccgcaa gcttatcgat aatcaacctc tggattacaa 3120
aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata 3180
cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc 3240
cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg 3300
tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac 3360
ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat 3420
cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt 3480
ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat 3540
tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc 3600
ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag 3660
tcggatctcc ctttgggccg cctccccgca tcgataccgt cgactagagc tcgctgatca 3720
gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc 3780
ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg 3840
cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg 3900
gaggattggg aagacaatag caggcatgct ggggagagat ccacgataac aaacagcttt 3960
tttggggtga acatattgac tgaattccct gcaggttggc cactccctct ctgcgcgctc 4020
gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt ggtcgcccgg 4080
cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact aggggttcct 4140
<210> 60
<211> 3793
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 60
tctcattaga agtgaggcgg ggccggccaa atcgaatgga caccgggtaa ttagcagggt 60
tacccagata ctccagcacc tctttcccgt cggccgtgta cctgccattc acgtccatgc 120
cattgatggc cagcactgca tgacccactg cagaggtgaa gctaacggtc agcgaaggtg 180
cagcccgggg attccgccga ggggacaagg gacccgacac aacccctttt cccccaaccc 240
cgcacctaca accagcccac ttctacagca ctggggccct cccacccccg cacccgccac 300
gggcccgagc ctagcccacc tcggatgccg tcccgctggc cgaaagcaac caacacacgc 360
tcatcgtgta gcttgagcag cagatccagc ggataactga aagttttctc agcctcagcc 420
cgtggcgcgt agctgtccaa ctggtaaatc aagccgccag ctttgttcac cacatacaca 480
ctaaaaatcg ccatcgctgc cttgccgctc ggaaactggt attcagcctc tacccgacgg 540
cccctccccg gaaccgcatc acagcacttg ccgccggccc caccccagcc tcctcctcct 600
cctcctcctc ctcccgcgcc ccccgtgcag ccacctgctg cacttgcgca ctgggagcga 660
cacgctcggg cataagtagt gccgaaaagt tagctgccga gacctggtgg attgcttttc 720
gtttatcagt gcaggaaaac agcgctatag tactgcgtca caactagcgc agactccggc 780
agtatttagg cggtgcggct tgggaactag aatccacttc ctgtcttccg cctcaggcta 840
gagggcgagc gcttcgccgt gggacttctt ctgcctggct ccgcctcttg ccccggaagt 900
actcacagcg gacggtggtt tttgggcccg tttctgagca gcgcttcctt tttgtccgac 960
atcttgacga ggctgcggtg tctgctgcta ttctccgagc ttcgcaatgg taagcttcag 1020
gggtgtgaag tcgccggcgt tcttgggttt gaggactcag tggggagagc cttcggcggg 1080
agcgctcctt ggcctgccgg cctcggttgc agggcgggcg cggttattgc ttggcccatg 1140
tgctctggtg gtggagtttg cgggggctga gggcgcagta ttaggggact ttggcgctat 1200
ttgaggacct ggttgcattc ccgctgccct cctacagccg cctaaggacg acaagaagaa 1260
gaaggacgct ggaaagtcgg ccaagaaaga caaagaccca gtgaacaaat ccgggggcaa 1320
ggccaaaaag aaggtagaaa taagacctct ctgaaagaga ctaggggtaa ctctctcgta 1380
atcctctagt aataggtaac ttgtatagta agtggttttt caggtgtaga tttctagagt 1440
caaaatgtga gagtttatct tcccgtcacc actcgttctt tttcccatta ggatcatgaa 1500
aatgggtctg ttgtgcgaag tgtctgccgc tgtgcctgct gtgttatttt taactgatct 1560
agtggggctc ggcccctgtt tgaaggccaa aaacgtgtcg gtgttttttt tttgtttttg 1620
ttttagtaat gtgtaattta tccttgataa cggtggaaca gatttctctg acgcagatta 1680
ctcgagaggg aaagggtgct tctgccagaa atactaactt gtttctgttt tgttttggtg 1740
agcagaagtg gtccaaaggc aaagttcggg acaagctcaa taacttagtc ttgtttgaca 1800
aagctaccta tgataaactc tgtaaggaag ttcccaacta taaacttata accccagctg 1860
tggtctctga gagactgaag attcgaggct ccctggccag ggcagccctt caggagctcc 1920
ttagtaaagg tgaggggtgt atcctacatg tgtgtttttg taggttaaat tgtcttgacc 1980
atgttaagca tcttcagtgg ttttgctgga aaagcagaat taaaaaaaaa aagcgtggct 2040
tgaccattgg ctgttagtaa tgtaattctg acgtcttact cctgatcctg agatgaattc 2100
tcagggttct tagccacttt tgtgccgtgg accctgtggc agtttagtga agcccaagga 2160
tcttttatgt ttcgagtaaa tggatgcata gaattacagg gacaaccgtt tttgaaataa 2220
ttagattact attttgaaac aactttgaaa atgtttaaaa cctttatggt aaatattttg 2280
ttgatgtatt aaattttaaa accagaaatt tagtacggtc tactcagtag tatggtctga 2340
ttaccataat tccacaataa taaggctcag ctaactatag tgactgaacg tctataattc 2400
tagcactttg ggaggccaag gcgggtgaat caacggaggt caggagttaa agaccagcct 2460
ggccaatatg gtgaaaacct gctctactga aagttagctg gacgtggggg cacacgtctg 2520
taatcccagc tactcaggat gctgaggcat gaggatccct tgaacccagg agatggaggt 2580
ggcagtgagc cgagatgaca ccactgcact ccagccttag tgacagcaaa agactgtctc 2640
agaaaggggg ggggggtgga agataatgga gccctaattt aaaggaaaag taaggataga 2700
tgatccgtta aaaacttgga ttctcggtta ccgaacgtca gattaagcaa ttctggagcc 2760
aggtgcagtg gtacccttgt atttctagct acttgggagg ccaaagcagg aggatcattt 2820
gagccaagga gttttaagac cattctgggc acctctgaga gaactctgtc tttttgtttt 2880
ccttttcttt aaatagagat gcggttttgc catgttgccc aggctggtct cctgggctca 2940
agagatccac ctgtccaaag tgctgggatt acaggcatga gcctctgcac ccggccaaaa 3000
caaaccttac tagagtctca ttctgttgcc caggttggag tgcggagggg cagtcttggc 3060
tcaatgcaac caccaattcc tgggttcagg tggtcctcac ctcagcttcc caagtagctg 3120
gaattacaag catgtgccac catgcccagc taatttttgt atttttggta gagatggggt 3180
ttcaccttgt tggccaggct ggtgtgcaac tccttacctc aagctatctg cccgtctcca 3240
cctcccaaag cagtgggatt ataagcatga gccaccgcgc ccagccaaaa accttactag 3300
tttctattgt agcatctgtt aagcatctca tcgtgctatt ctctccccct aggacttatc 3360
aaactggttt caaagcacag agctcaagta atttacacca gaaataccaa gggtggagat 3420
gctccagctg ctggtgaaga tgcatgaata ggtgagtagg aatgtgtggg ctcatggtgt 3480
aggaggtaga tacaaagctt tatggttctg attcttttaa ttttttttta caggtccaac 3540
cagctgtaca tttggaaaaa taaaacttta ttaaatcaaa tgaatgagta tgtctgtttc 3600
ctaagaaaga caatgataaa gaatttggtg gaaggtataa taggggtttg ttgactttgc 3660
ttttagcctc atggtagttg gtagagagca tgattagctt ttttctgtat gtgactgctt 3720
cttcattgct gcagcttcag ttttgaattg atgtctgaaa ggaaataaag ggttaacacg 3780
atgatgaagg gtg 3793
<210> 61
<211> 3996
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 61
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgtctggag gcttgctttg ggctgtatgc tgataccttc 1140
caccaaattc tttattttgg cctctgactg ataaagaatt gtggaaggta tcaggacaca 1200
aggcccttta tcagcactca catggaacaa atggccaccg tgggaggatg acaatttctg 1260
tggctgcgtg aaagccttga ggggctccgg gagctagagc ctctgctaac catgttcatg 1320
ccttcttctt tttcctacag ctcctgggca acgtgctggt tattgtgctg tctcatcatt 1380
ttggcaaaga attcctcgaa gatccgaagg gaaagtcttc cacgactgtg ggatccgttc 1440
gaagatatca ccggttgagc caccatgagc accctgtgcc ccccccccag ccccgccgtg 1500
gccaagaccg agatcgccct gagcggcaag agccccctgc tggccgccac cttcgcctac 1560
tgggacaaca tcctgggccc ccgcgtgcgc cacatctggg cccccaagac cgagcaggtg 1620
ctgctgagcg acggcgagat caccttcctg gccaaccaca ccctgaacgg cgagatcctg 1680
cgcaacgccg agagcggcgc catcgacgtg aagttcttcg tgctgagcga gaagggcgtg 1740
atcatcgtga gcctgatctt cgacggcaac tggaacggcg accgcagcac ctacggcctg 1800
agcatcatcc tgccccagac cgagctgagc ttctacctgc ccctgcaccg cgtgtgcgtg 1860
gaccgcctga cccacatcat ccgcaagggc cgcatctgga tgcacaagga gcgccaggag 1920
aacgtgcaga agatcatcct ggagggcacc gagcgcatgg aggaccaggg ccagagcatc 1980
atccccatgc tgaccggcga ggtgatcccc gtgatggagc tgctgagcag catgaagagc 2040
cacagcgtgc ccgaggagat cgacatcgcc gacaccgtgc tgaacgacga cgacatcggc 2100
gacagctgcc acgagggctt cctgctgaac gccatcagca gccacctgca gacctgcggc 2160
tgcagcgtgg tggtgggcag cagcgccgag aaggtgaaca agatcgtgcg caccctgtgc 2220
ctgttcctga cccccgccga gcgcaagtgc agccgcctgt gcgaggccga gagcagcttc 2280
aagtacgaga gcggcctgtt cgtgcagggc ctgctgaagg acagcaccgg cagcttcgtg 2340
ctgcccttcc gccaggtgat gtacgccccc taccccacca cccacatcga cgtggacgtg 2400
aacaccgtga agcagatgcc cccctgccac gagcacatct acaaccagcg ccgctacatg 2460
cgcagcgagc tgaccgcctt ctggcgcgcc accagcgagg aggacatggc ccaggacacc 2520
atcatctaca ccgacgagag cttcaccccc gacctgaaca tcttccagga cgtgctgcac 2580
cgcgacaccc tggtgaaggc cttcctggac caggtgttcc agctgaagcc cggcctgagc 2640
ctgcgcagca ccttcctggc ccagttcctg ctggtgctgc accgcaaggc cctgaccctg 2700
atcaagtaca tcgaggacga cacccagaag ggcaagaagc ccttcaagag cctgcgcaac 2760
ctgaagatcg acctggacct gaccgccgag ggcgacctga acatcatcat ggccctggcc 2820
gagaagatca agcccggcct gcacagcttc atcttcggcc gccccttcta caccagcgtg 2880
caggagcgcg acgtgctgat gaccttctaa caattgttaa ttaagtttaa accctcgagg 2940
ccgcaagctt atcgataatc aacctctgga ttacaaaatt tgtgaaagat tgactggtat 3000
tcttaactat gttgctcctt ttacgctatg tggatacgct gctttaatgc ctttgtatca 3060
tgctattgct tcccgtatgg ctttcatttt ctcctccttg tataaatcct ggttgctgtc 3120
tctttatgag gagttgtggc ccgttgtcag gcaacgtggc gtggtgtgca ctgtgtttgc 3180
tgacgcaacc cccactggtt ggggcattgc caccacctgt cagctccttt ccgggacttt 3240
cgctttcccc ctccctattg ccacggcgga actcatcgcc gcctgccttg cccgctgctg 3300
gacaggggct cggctgttgg gcactgacaa ttccgtggtg ttgtcgggga aatcatcgtc 3360
ctttccttgg ctgctcgcct gtgttgccac ctggattctg cgcgggacgt ccttctgcta 3420
cgtcccttcg gccctcaatc cagcggacct tccttcccgc ggcctgctgc cggctctgcg 3480
gcctcttccg cgtcttcgcc ttcgccctca gacgagtcgg atctcccttt gggccgcctc 3540
cccgcatcga taccgtcgac tagagctcgc tgatcagcct cgactgtgcc ttctagttgc 3600
cagccatctg ttgtttgccc ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc 3660
actgtccttt cctaataaaa tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct 3720
attctggggg gtggggtggg gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg 3780
catgctgggg agagatccac gataacaaac agcttttttg gggtgaacat attgactgaa 3840
ttccctgcag gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg 3900
caaagcccgg gcgtcgggcg acctttggtc gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca 3960
gagagggagt ggccaactcc atcactaggg gttcct 3996
<210> 62
<211> 3994
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 62
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgctag ctctgggtat ttaagcccga gtgagcacgc 180
agggtctcca ttttgaagcg ggaggttacg cgttcgtcga ctactagtgg gtaccagagc 240
tccctaggtt ctagaaccgg tgacgtctcc catggtgaag cttggatctg aattcggtac 300
cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc 360
cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 420
ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 480
caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 540
ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 600
tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 660
accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca 720
cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg 780
gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg 840
agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg 900
cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt cgctgcgacg 960
ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 1020
gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 1080
gcgcttggtt taatgacggc ttgtctggag gcttgctttg ggctgtatgc tgataagtcc 1140
tttactaagg agcttttggc ctctgactga gctccttgta aggacttatc aggacacaag 1200
gccctttatc agcactcaca tggaacaaat ggccaccgtg ggaggatgac aatttctgtg 1260
gctgcgtgaa agccttgagg ggctccggga gctagagcct ctgctaacca tgttcatgcc 1320
ttcttctttt tcctacagct cctgggcaac gtgctggtta ttgtgctgtc tcatcatttt 1380
ggcaaagaat tcctcgaaga tccgaaggga aagtcttcca cgactgtggg atccgttcga 1440
agatatcacc ggttgagcca ccatgagcac cctgtgcccc ccccccagcc ccgccgtggc 1500
caagaccgag atcgccctga gcggcaagag ccccctgctg gccgccacct tcgcctactg 1560
ggacaacatc ctgggccccc gcgtgcgcca catctgggcc cccaagaccg agcaggtgct 1620
gctgagcgac ggcgagatca ccttcctggc caaccacacc ctgaacggcg agatcctgcg 1680
caacgccgag agcggcgcca tcgacgtgaa gttcttcgtg ctgagcgaga agggcgtgat 1740
catcgtgagc ctgatcttcg acggcaactg gaacggcgac cgcagcacct acggcctgag 1800
catcatcctg ccccagaccg agctgagctt ctacctgccc ctgcaccgcg tgtgcgtgga 1860
ccgcctgacc cacatcatcc gcaagggccg catctggatg cacaaggagc gccaggagaa 1920
cgtgcagaag atcatcctgg agggcaccga gcgcatggag gaccagggcc agagcatcat 1980
ccccatgctg accggcgagg tgatccccgt gatggagctg ctgagcagca tgaagagcca 2040
cagcgtgccc gaggagatcg acatcgccga caccgtgctg aacgacgacg acatcggcga 2100
cagctgccac gagggcttcc tgctgaacgc catcagcagc cacctgcaga cctgcggctg 2160
cagcgtggtg gtgggcagca gcgccgagaa ggtgaacaag atcgtgcgca ccctgtgcct 2220
gttcctgacc cccgccgagc gcaagtgcag ccgcctgtgc gaggccgaga gcagcttcaa 2280
gtacgagagc ggcctgttcg tgcagggcct gctgaaggac agcaccggca gcttcgtgct 2340
gcccttccgc caggtgatgt acgcccccta ccccaccacc cacatcgacg tggacgtgaa 2400
caccgtgaag cagatgcccc cctgccacga gcacatctac aaccagcgcc gctacatgcg 2460
cagcgagctg accgccttct ggcgcgccac cagcgaggag gacatggccc aggacaccat 2520
catctacacc gacgagagct tcacccccga cctgaacatc ttccaggacg tgctgcaccg 2580
cgacaccctg gtgaaggcct tcctggacca ggtgttccag ctgaagcccg gcctgagcct 2640
gcgcagcacc ttcctggccc agttcctgct ggtgctgcac cgcaaggccc tgaccctgat 2700
caagtacatc gaggacgaca cccagaaggg caagaagccc ttcaagagcc tgcgcaacct 2760
gaagatcgac ctggacctga ccgccgaggg cgacctgaac atcatcatgg ccctggccga 2820
gaagatcaag cccggcctgc acagcttcat cttcggccgc cccttctaca ccagcgtgca 2880
ggagcgcgac gtgctgatga ccttctaaca attgttaatt aagtttaaac cctcgaggcc 2940
gcaagcttat cgataatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg actggtattc 3000
ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct ttgtatcatg 3060
ctattgcttc ccgtatggct ttcattttct cctccttgta taaatcctgg ttgctgtctc 3120
tttatgagga gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact gtgtttgctg 3180
acgcaacccc cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc gggactttcg 3240
ctttccccct ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc cgctgctgga 3300
caggggctcg gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaaa tcatcgtcct 3360
ttccttggct gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc ttctgctacg 3420
tcccttcggc cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg gctctgcggc 3480
ctcttccgcg tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg gccgcctccc 3540
cgcatcgata ccgtcgacta gagctcgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca 3600
gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac 3660
tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat 3720
tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca 3780
tgctggggag agatccacga taacaaacag cttttttggg gtgaacatat tgactgaatt 3840
ccctgcaggt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc cgcccgggca 3900
aagcccgggc gtcgggcgac ctttggtcgc ccggcctcag tgagcgagcg agcgcgcaga 3960
gagggagtgg ccaactccat cactaggggt tcct 3994

Claims (90)

1.一种分离的核酸，其包含两侧带有AAV反向末端重复序列(ITR)的编码抑制C9orf72的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2 ITR(SEQ ID NO：32)修饰的“D”序列。
2.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸与C9orf72的二肽重复区的至少6个毗连核苷酸互补。
3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸是包含SEQ ID NO：24中阐述的核酸序列或其部分的抑制性RNA。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸包含SEQ IDNO：25中阐述的序列或其部分。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建体位于所述ITR外侧的“D”序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的所述ITR是3’ITR。
7.一种分离的核酸，其包含两侧带有AAV反向末端重复序列(ITR)的编码抑制TMEM106B的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2 ITR(SEQ ID NO：32)修饰的“D”序列。
8.根据权利要求7所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸与SEQ ID NO：7中阐述的序列的至少6个毗连核苷酸互补。
9.根据权利要求7或8所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸是包含SEQ ID NO：33或34中阐述的核酸序列的抑制性RNA。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸包含SEQ IDNO：35或36中阐述的序列。
11.根据权利要求7至10中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建体位于所述ITR外侧的“D”序列。
12.根据权利要求7至11中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的所述ITR是3’ITR。
13.一种分离的核酸，其包含两侧带有AAV反向末端重复序列(ITR)的编码抑制ATXN2的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2 ITR(SEQ ID NO：32)修饰的“D”序列。
14.根据权利要求13所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸与SEQ ID NO：9中阐述的序列的至少6个毗连核苷酸互补。
15.根据权利要求13或14所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸是包含SEQ ID NO：10-23中的任一者中阐述的核酸序列的抑制性RNA。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的分离的核酸，其中所述修饰的“D”区是相对于所述表达构建体位于所述ITR外侧的“D”序列。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的分离的核酸，其中包含修饰的“D”序列的所述ITR是3’ITR。
18.一种分离的核酸，其包含编码下述抑制性核酸的表达盒：
(i)抑制C9orf72的表达或活性的第一抑制性核酸，和
(ii)抑制TMEM106B或ATXN2的表达或活性的第二抑制性核酸。
19.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述第一抑制性核酸结合到C9orf72 mRNA转录本的二肽重复区，任选地其中所述二肽重复区包含一个或多个GGGGCC重复序列，或一个或多个CCCCGG重复序列。
20.根据权利要求18或权利要求19所述的分离的核酸，其中所述第一抑制性核酸和第二抑制性核酸各自独立地选自siRNA、shRNA、miRNA和dsRNA。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的分离的核酸，其中所述第一抑制性核酸和/或第二抑制性核酸位于所述表达构建体的非翻译区中，任选地其中所述非翻译区是内含子、5’非翻译区(5’UTR)或3’非翻译区(3’UTR)。
22.根据权利要求18至21中任一项所述的分离的核酸，其还包含野生型C9orf72蛋白编码序列或β-葡糖脑苷脂酶(GBA)蛋白编码序列，任选地其中所述GBA蛋白是GBA1蛋白。
23.根据权利要求18至20中任一项所述的分离的核酸，其还包含一个或多个启动子，任选地其中所述一个或多个启动子中的每一者独立地是RNA pol III启动子(例如U6、H1等)、鸡β肌动蛋白(CBA)启动子、CAG启动子、CD68启动子或JeT启动子。
24.根据权利要求18至23中任一项所述的分离的核酸，其中所述表达构建体两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)序列，任选地其中所述ITR序列之一缺少有功能的末端解链位点。
25.根据权利要求18至24中任一项所述的分离的核酸，所述分离的核酸具有SEQ IDNO：1-28或33-36中的任一者中阐述的序列或其部分。
26.一种载体，其包含根据权利要求1至25中任一项所述的分离的核酸。
27.根据权利要求26所述的载体，其中所述载体是质粒。
28.根据权利要求26所述的载体，其中所述载体是病毒载体，任选地其中所述病毒载体是重组腺相关病毒载体(rAAV)或杆状病毒载体。
29.一种组合物，其包含根据权利要求1至25中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求26至28中任一项所述的载体，和任选的可药用载剂。
30.一种宿主细胞，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求9至11中任一项所述的载体。
31.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含：
(i)衣壳蛋白；和
(ii)根据权利要求1至25中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求26所述的载体。
32.根据权利要求31所述的rAAV，其中所述衣壳蛋白能够跨过血脑屏障，任选地其中所述衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白、AAVrh.10衣壳蛋白或AAV-PHP.B变体。
33.根据权利要求31或32所述的rAAV，其中所述rAAV转导中枢神经系统(CNS)的神经元细胞和/或非神经元细胞。
34.一种治疗患有或怀疑患有神经变性疾病的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用根据权利要求1至25中任一项所述的分离的核酸、根据权利要求26至28中任一项所述的载体、根据权利要求29所述的组合物或根据权利要求31至33中任一项所述的rAAV。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和/或额颞叶痴呆(FTD)、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆或溶酶体贮积病。
36.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述神经变性疾病是ALS和/或FTD。
37.根据权利要求34至36中任一项所述的方法，其中所述施用包括直接注射到所述对象的CNS，任选地其中所述直接注射是脑内注射、实质内注射、鞘内注射、大池内注射或其任何组合。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述直接注射是直接注射到所述对象的脑脊液(CSF)，任选地其中所述直接注射是颅内注射、脑室内注射，和/或腰椎内注射。
39.根据权利要求34至38中任一项所述的方法，其中所述对象的特征在于具有约30至约5000个之间的GGGGCC二肽重复序列和/或约30至5000个之间的CCCCGG重复序列。
40.一种分离的核酸，其包含编码下述物质的表达盒：
(i)抑制C9orf72的表达或活性的抑制性核酸，和
(ii)β-葡糖脑苷脂酶(GBA)蛋白，任选地其中所述GBA蛋白是GBA1蛋白。
41.根据权利要求40所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸结合到C9orf72 mRNA转录本的二肽重复区，任选地其中所述二肽重复区包含一个或多个GGGGCC重复序列或一个或多个CCCCGG重复序列。
42.根据权利要求40或41所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸是siRNA、shRNA、miRNA或dsRNA。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸位于所述表达构建体的非翻译区中，任选地其中所述非翻译区是内含子、5’非翻译区(5’UTR)或3’非翻译区(3’UTR)。
44.根据权利要求40至43中任一项所述的分离的核酸，其还包含一个或多个启动子，任选地其中所述一个或多个启动子中的每一者独立地是RNA polIII启动子(例如U6、H1等)、鸡β肌动蛋白(CBA)启动子、CAG启动子、CD68启动子或JeT启动子。
45.根据权利要求40至44中任一项所述的分离的核酸，其中所述表达构建体两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)序列，任选地其中所述ITR序列之一缺少有功能的末端解链位点。
46.根据权利要求40至45中任一项所述的分离的核酸，所述分离的核酸具有SEQ IDNO：2中阐述的序列或其部分。
47.一种载体，其包含根据权利要求40至46中任一项所述的分离的核酸。
48.根据权利要求47所述的载体，其中所述载体是质粒。
49.根据权利要求47所述的载体，其中所述载体是病毒载体，任选地其中所述病毒载体是重组腺相关病毒载体(rAAV)或杆状病毒载体。
50.一种组合物，其包含根据权利要求40至46中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求47至49中任一项所述的载体，和任选的可药用载剂。
51.一种宿主细胞，其包含根据权利要求40至46中任一项所述的分离的核酸，或根据权利要求47至49中任一项所述的载体。
52.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含：
(i)衣壳蛋白；和
(ii)根据权利要求40至46中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求47所述的载体。
53.根据权利要求52所述的rAAV，其中所述衣壳蛋白能够跨过血脑屏障，任选地其中所述衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白、AAVrh.10衣壳蛋白或AAV-PHP.B衣壳蛋白。
54.根据权利要求52或53所述的rAAV，其中所述rAAV转导中枢神经系统(CNS)的神经元细胞和/或非神经元细胞。
55.一种治疗患有或怀疑患有神经变性疾病的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用根据权利要求40至46中任一项所述的分离的核酸、根据权利要求47至49中任一项所述的载体、根据权利要求50所述的组合物，或根据权利要求52至54中任一项所述的rAAV。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和/或额颞叶痴呆(FTD)、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆或溶酶体贮积病。
57.根据权利要求55或56所述的方法，其中所述神经变性疾病是ALS和/或FTD。
58.根据权利要求55至57中任一项所述的方法，其中所述施用包括直接注射到所述对象的CNS，任选地其中所述直接注射是脑内注射、实质内注射、鞘内注射或其任何组合。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述直接注射是直接注射到所述对象的脑脊液(CSF)，任选地其中所述直接注射是颅内注射、脑室内注射，和/或腰椎内注射。
60.根据权利要求55至59中任一项所述的方法，其中所述对象的特征在于具有约30至约5000个之间的GGGGCC二肽重复序列和/或约30至5000个之间的CCCCGG重复序列。
61.一种分离的核酸，其包含编码下述物质的表达盒：
(i)抑制C9orf72的表达或活性的抑制性核酸，和
(ii)野生型C9orf72蛋白。
62.根据权利要求61所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸结合到C9orf72 mRNA转录本的二肽重复区，任选地其中所述二肽重复区包含一个或多个GGGGCC重复序列，或一个或多个CCCCGG重复序列。
63.根据权利要求61或62所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸是siRNA、shRNA、miRNA或dsRNA。
64.根据权利要求61至63中任一项所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸位于所述表达构建体的非翻译区中，任选地其中所述非翻译区是内含子、5’非翻译区(5’UTR)或3’非翻译区(3’UTR)。
65.根据权利要求61至64中任一项所述的分离的核酸，其还包含一个或多个启动子，任选地其中所述一个或多个启动子中的每一者独立地是RNA pol III启动子(例如U6、H1等)、鸡β肌动蛋白(CBA)启动子、CAG启动子、CD68启动子或JeT启动子。
66.根据权利要求61至65中任一项所述的分离的核酸，其中所述表达构建体两侧带有两个腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)序列，任选地其中所述ITR序列之一缺少有功能的末端解链位点。
67.根据权利要求61至66中任一项所述的分离的核酸，其中所述C9orf72蛋白由SEQ IDNO：3中阐述的序列或其部分编码。
68.根据权利要求67所述的分离的核酸，其中所述野生型C9orf72蛋白包含SEQ ID NO：4中阐述的序列或由SEQ ID NO：4中阐述的序列组成。
69.根据权利要求67或68所述的分离的核酸，所述分离的核酸具有SEQ ID NO：5中阐述的序列或其部分。
70.一种载体，其包含根据权利要求61至69中任一项所述的分离的核酸。
71.根据权利要求70所述的载体，其中所述载体是质粒。
72.根据权利要求70所述的载体，其中所述载体是病毒载体，任选地其中所述病毒载体是重组腺相关病毒载体(rAAV)。
73.一种组合物，其包含根据权利要求61至69中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求70至72中任一项所述的载体，和任选的可药用载剂。
74.一种宿主细胞，其包含根据权利要求61至69中任一项所述的分离的核酸，或根据权利要求70至72中任一项所述的载体。
75.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含：
(i)衣壳蛋白；和
(ii)根据权利要求61至69中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求70所述的载体。
76.根据权利要求75所述的rAAV，其中所述衣壳蛋白能够跨过血脑屏障，任选地其中所述衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白、AAVrh.10衣壳蛋白，或AAV-PHP.B衣壳蛋白。
77.根据权利要求75或76所述的rAAV，其中所述rAAV转导中枢神经系统(CNS)的神经元细胞和/或非神经元细胞。
78.一种治疗患有或怀疑患有神经变性疾病的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用根据权利要求61至69中任一项所述的分离的核酸、根据权利要求70至72中任一项所述的载体、根据权利要求73所述的组合物，或根据权利要求75至77中任一项所述的rAAV。
79.根据权利要求78所述的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和/或额颞叶痴呆(FTD)、阿兹海默氏病、高雪氏病、帕金森氏病、路易体痴呆或溶酶体贮积病。
80.根据权利要求78或79所述的方法，其中所述神经变性疾病是ALS和/或FTD。
81.根据权利要求78至80中任一项所述的方法，其中所述施用包括直接注射到所述对象的CNS，任选地其中所述直接注射是脑内注射、实质内注射、鞘内注射或其任何组合。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述直接注射是直接注射到所述对象的脑脊液(CSF)，任选地其中所述直接注射是颅内注射、脑室内注射，和/或腰椎内注射。
83.根据权利要求78至82中任一项所述的方法，其中所述对象的特征在于具有约30至约5000个之间的GGGGCC二肽重复序列和/或约30至5000个之间的CCCCGG重复序列。
84.一种分离的核酸，其包含两侧带有AAV反向末端重复序列(ITR)的编码抑制C9Orf72的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述抑制性核酸包含SEQ ID NO：24、25和37-49中的任一者中阐述的序列。
85.一种分离的核酸，其包含两侧带有AAV反向末端重复序列(ITR)的编码抑制ATXN2的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述抑制性核酸包含SEQ ID NO：10-23中的任一者中阐述的序列。
86.一种分离的核酸，其包含两侧带有AAV反向末端重复序列(ITR)的编码抑制TMEM106B的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述抑制性核酸包含SEQ ID NO：33-36中的任一者中阐述的序列。
87.一种重组AAV(rAAV)载体，其包含SEQ ID NO：51-58中的任一者中阐述的序列。
88.一种分离的核酸，其包含编码C9orf72蛋白的表达构建体，其中所述表达构建体包含SEQ ID NO：50中阐述的序列。
89.根据权利要求87所述的分离的核酸，其中所述表达构建体两侧带有腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)。
90.根据权利要求88所述的分离的核酸，其中所述ITR中的至少一者包含相对于野生型AAV2 ITR(SEQ ID NO：32)修饰的“D”序列。
CN201880081355.4A 2017-10-23 2018-10-23 用于神经变性疾病的基因疗法 Pending CN111819281A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110196181.XA CN113005123A (zh) 2017-10-23 2018-10-23 用于神经变性疾病的基因疗法

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762575795P 2017-10-23 2017-10-23
US62/575,795 2017-10-23
US201862742723P 2018-10-08 2018-10-08
US62/742,723 2018-10-08
PCT/US2018/057187 WO2019084068A1 (en) 2017-10-23 2018-10-23 GENE THERAPIES FOR NEURODEGENERATIVE DISEASE

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110196181.XA Division CN113005123A (zh) 2017-10-23 2018-10-23 用于神经变性疾病的基因疗法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111819281A true CN111819281A (zh) 2020-10-23

Family

ID=66247008

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110196181.XA Pending CN113005123A (zh) 2017-10-23 2018-10-23 用于神经变性疾病的基因疗法
CN201880081355.4A Pending CN111819281A (zh) 2017-10-23 2018-10-23 用于神经变性疾病的基因疗法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110196181.XA Pending CN113005123A (zh) 2017-10-23 2018-10-23 用于神经变性疾病的基因疗法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20210261981A1 (zh)
EP (1) EP3701030A4 (zh)
JP (2) JP7413256B2 (zh)
KR (1) KR20200075865A (zh)
CN (2) CN113005123A (zh)
AU (1) AU2018354195A1 (zh)
BR (1) BR112020008033A2 (zh)
CA (2) CA3083582A1 (zh)
IL (2) IL274129A (zh)
MX (1) MX2020004207A (zh)
WO (1) WO2019084068A1 (zh)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112501208A (zh) * 2017-10-03 2021-03-16 普利维尔治疗公司 用于溶酶体障碍的基因疗法
KR20220015499A (ko) 2017-10-03 2022-02-08 프리베일 테라퓨틱스, 인크. 리소좀 장애를 위한 유전자 요법
BR112020006633A2 (pt) 2017-10-03 2020-10-06 Prevail Therapeutics, Inc. terapias genéticas para distúrbios lisossômicos
AU2019231889A1 (en) * 2018-03-09 2020-10-01 Avrobio, Inc. Compositions and methods for treating Parkinson's disease
CA3136117A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Prevail Therapeutics, Inc. Gene therapies for lysosomal disorders
US20210147873A1 (en) * 2019-10-22 2021-05-20 Applied Genetic Technologies Corporation Triple function adeno-associated virus (aav)vectors for the treatment of c9orf72 associated diseases
WO2022026531A1 (en) * 2020-07-29 2022-02-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Atxn2 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing atxn2-associated neurodegenerative diseases
MX2023004420A (es) 2020-10-15 2023-07-05 Prevail Therapeutics Inc Composiciones de virus adenoasociados recombinantes y métodos para su producción.
CA3198041A1 (en) 2020-10-15 2022-04-21 Prevail Therapeutics, Inc. Assay for measuring potency of gene therapy drug product
CN116507727A (zh) 2020-11-06 2023-07-28 住友制药株式会社 Rps25基因的表达和/或功能调节剂
KR20220109347A (ko) 2021-01-28 2022-08-04 주식회사 에이브레인 신경 퇴행성 질환의 치료를 위한 유전자 요법
CN117043179A (zh) 2021-01-28 2023-11-10 爱博瑞株式会社 用于治疗神经退行性疾病的基因治疗
KR20230061109A (ko) 2021-10-28 2023-05-08 한국해양과학기술원 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 신경염증성 뇌질환 예방 또는 치료용 조성물
AR128239A1 (es) * 2022-01-10 2024-04-10 Univ Pennsylvania Composiciones y métodos útiles para el tratamiento de trastornos mediados por c9orf72

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140271550A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Constructs and Methods for Delivering Molecules via Viral Vectors with Blunted Innate Immune Responses
WO2015153760A2 (en) * 2014-04-01 2015-10-08 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of a nervous system disorder
US20160108396A1 (en) * 2014-08-15 2016-04-21 Pfizer Inc. Oligomers targeting hexanucleotide repeat expansion in human c9orf72 gene
US20170114340A1 (en) * 2014-03-18 2017-04-27 University Of Massachusetts Raav-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6204059B1 (en) * 1994-06-30 2001-03-20 University Of Pittsburgh AAV capsid vehicles for molecular transfer
US20040053876A1 (en) * 2002-03-26 2004-03-18 The Regents Of The University Of Michigan siRNAs and uses therof
WO2004069173A2 (en) 2003-01-31 2004-08-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods for modulating an inflammatory response
EP1844148A2 (en) * 2005-01-31 2007-10-17 University of Iowa Research Foundation Nucleic acid silencing of huntington's disease gene
JP5559185B2 (ja) 2008-11-11 2014-07-23 オックスフォード バイオメディカ（ユーケー）リミテッド 方法
WO2012115980A1 (en) * 2011-02-22 2012-08-30 California Institute Of Technology Delivery of proteins using adeno-associated virus (aav) vectors
CN104271741A (zh) 2012-04-23 2015-01-07 普罗森萨科技有限公司 用于治疗神经肌肉障碍的具有改善特性的rna调节寡核苷酸
TW201427695A (zh) 2012-11-05 2014-07-16 Genzyme Corp 用於治療蛋白質病變（ｐｒｏｔｅｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）的組成物及方法
AU2014331652B2 (en) * 2013-10-11 2020-05-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating C9ORF72 expression
JP6902869B2 (ja) * 2014-03-19 2021-07-14 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． アタキシン２の発現を調節するための組成物
AU2015346162B2 (en) * 2014-11-14 2022-02-10 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS)
CA3019315A1 (en) * 2015-04-23 2016-10-27 University Of Massachusetts Modulation of aav vector transgene expression
US10967073B2 (en) * 2015-05-07 2021-04-06 The Mclean Hospital Corporation Glucocerebrosidase gene therapy for Parkinson's disease
WO2017151884A1 (en) * 2016-03-02 2017-09-08 The Children's Hospital Of Philadelphia Therapy for frontotemporal dementia
WO2018064600A1 (en) * 2016-09-30 2018-04-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a hexanucleotide repeat expansion in a c9orf72 locus
WO2020053258A1 (en) * 2018-09-12 2020-03-19 Uniqure Ip B.V. Rnai induced c9orf72 suppression for the treatment of als/ftd

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140271550A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Constructs and Methods for Delivering Molecules via Viral Vectors with Blunted Innate Immune Responses
US20170114340A1 (en) * 2014-03-18 2017-04-27 University Of Massachusetts Raav-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis
WO2015153760A2 (en) * 2014-04-01 2015-10-08 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of a nervous system disorder
US20160108396A1 (en) * 2014-08-15 2016-04-21 Pfizer Inc. Oligomers targeting hexanucleotide repeat expansion in human c9orf72 gene

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GABRIELA TORO CABRERA 等: "738. Engineered MicroRNA Silences C9ORF72 Variants in BAC Transgenic Mouse", MOLECULAR THERAPY, vol. 24, no. 1, pages 291 *
MARIA SARA CIPOLAT MIS 等: "Development of Therapeutics for C9ORF72 ALS/FTD-Related Disorders", MOLECULAR NEUROBIOLOGY, vol. 54, no. 6, pages 4466 - 4476, XP036276831, DOI: 10.1007/s12035-016-9993-0 *
无: "guanine nucleotide exchange C9orf72 isoform a [Homo sapiens]", NCBI REFERENCE SEQUENCE: NP_060795.1, pages 1 - 3 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021500049A (ja) 2021-01-07
EP3701030A1 (en) 2020-09-02
EP3701030A4 (en) 2022-04-20
IL274129A (en) 2020-06-30
CN113005123A (zh) 2021-06-22
US20210261981A1 (en) 2021-08-26
CA3083582A1 (en) 2019-05-02
KR20200075865A (ko) 2020-06-26
JP2024045131A (ja) 2024-04-02
BR112020008033A2 (pt) 2020-10-27
CA3177979A1 (en) 2019-05-02
JP7413256B2 (ja) 2024-01-15
WO2019084068A1 (en) 2019-05-02
MX2020004207A (es) 2020-11-11
AU2018354195A1 (en) 2020-06-04
IL281057A (en) 2021-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111819281A (zh) 用于神经变性疾病的基因疗法
AU2020260476B2 (en) Gene therapies for lysosomal disorders
AU2020260485B2 (en) Gene therapies for lysosomal disorders
AU2020205228B2 (en) Gene therapies for lysosomal disorders
CN105408352B (zh) 通过双重aav载体有效递送大基因
KR20200111726A (ko) 무세포 합성으로부터 수득된 폐쇄 말단 DNA 벡터 및 ceDNA 벡터를 수득하는 방법
KR20220006527A (ko) 리소좀 장애에 대한 유전자 요법
CN113302201A (zh) 重组病毒载体和用于产生所述重组病毒载体的核酸
JP2024028931A (ja) 閉端ｄｎａ（ｃｅｄｎａ）ベクターを使用した導入遺伝子の制御された発現
JP6824169B2 (ja) 改変ｇ６ｐｃをコードするアデノ随伴ウイルスベクターおよびその使用
KR20210086645A (ko) Aav 삼중-플라스미드 시스템
CA3005474A1 (en) Compositions and methods for correction of heritable ocular disease
WO2021011842A1 (en) Synthetic production of single-stranded adeno associated viral dna vectors
AU2020314865A1 (en) Compositions and production of nicked closed-ended DNA vectors
CN114174324A (zh) 用于溶酶体病症的基因疗法
KR20210096168A (ko) 신경퇴행성 질환을 위한 유전자 요법
KR20230051529A (ko) 리소좀 장애에 대한 유전자 요법
CN115605266A (zh) Dysferlin双载体的基因疗法
CN116437968A (zh) 用于神经退行性病症的基因疗法
CN115516100A (zh) 靶向肌肉疾病中肌肉的优化基因疗法
RU2816871C2 (ru) КОНТРОЛИРУЕМАЯ ЭКСПРЕССИЯ ТРАНСГЕНОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-ВЕКТОРОВ С ЗАМКНУТЫМИ КОНЦАМИ (зкДНК)
Minskaia et al. Viral Vectors in Gene Replacement Therapy
KR20210150487A (ko) 리소좀 장애를 위한 유전자 요법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40039908

Country of ref document: HK