CN111818930A - 用于治疗白血病的联合疗法 - Google Patents

用于治疗白血病的联合疗法 Download PDF

Info

Publication number
CN111818930A
CN111818930A CN201980017188.1A CN201980017188A CN111818930A CN 111818930 A CN111818930 A CN 111818930A CN 201980017188 A CN201980017188 A CN 201980017188A CN 111818930 A CN111818930 A CN 111818930A
Authority
CN
China
Prior art keywords
iron
artemisinin
leukemia
arsenic trioxide
treatment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201980017188.1A
Other languages
English (en)
Inventor
维克拉姆·马修斯
桑吉夫·克里希纳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
St George's Medical College
St Georges Hospital Medical School
Original Assignee
St George's Medical College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by St George's Medical College filed Critical St George's Medical College
Publication of CN111818930A publication Critical patent/CN111818930A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/36—Arsenic; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/26—Iron; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及白血病(例如急性骨髓性白血病，AML)的治疗，使用以下三联组合：三氧化二砷；铁；和青蒿素，例如青蒿琥酯。

Description

用于治疗白血病的联合疗法
技术领域
本发明涉及白血病(例如急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)的治疗，使用以下三联组合：(i)三氧化二砷，(ii)铁；和(iii)青蒿素，例如青蒿琥酯。
背景技术
白血病是白细胞的癌症。白血病的类型包括急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myeloidleukemia,CML)、慢性淋巴性白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)和毛细胞性白血病。据报道，2015年全世界超过200万人患有白血病，并造成超过35万人死亡。它是儿童中最常见的癌症类型，儿童中四分之三的白血病病例属于ALL型。然而，所有白血病中约90％是在成人中诊断出来的，AML和CLL型在成人中最常见。
例如，目前用于急性骨髓性白血病(AML)的骨干疗法为柔红霉素和阿糖胞苷的组合，它们是骨髓抑制性的且对正常细胞有显著的旁观者效应。
急性前骨髓性白血病(AML-M3；APL)是AML的亚型，至少在非高危人群中，急性前骨髓性白血病的疗法已经发展成为一种不再需要常规骨髓抑制治疗的疗法。取而代之的是，使用全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)和三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)的联合疗法，它们一起诱导恶性细胞群的分化以及恶性细胞群的相对特异性的凋亡。因此，未见化学疗法的常规副作用，例如复发性血细胞减少症、脱发症和粘膜炎。在大多数研究中，采用这种非骨髓抑制性方案的目前预期的APL治愈率超过90％。然而，在一些APL患者中，治疗受到耐药性的不利影响，例如ATO耐药性。
此外，与APL相比，大多数AML患者在治疗后肯定会出现疾病复发，特别是成年人，并且这仍然是造成致命性的主要原因。另外，大部分老年AML患者以及诊断有重大并存疾病的老年患者无法接受标准的强化化疗方案，由于这些方案的相关毒性。
研究和合理化解释白血病复发率的主要关注点，首先在于获得性体细胞遗传突变和表观遗传突变，这些突变给针对化学疗法的亚克隆赋予耐药性，其次在于白血病起源区室(也称为白血病干细胞群)的存在，其固有地对化学疗法有耐药性并以最小的残留疾病持续存在。然而，人们越来越认识到，还存在其他生物学过程可导致常规化疗后白血病的复发。认识和研究这些新的耐药机制可能导致新治疗靶点的识别。
迫切需要开发新的治疗策略用于治疗白血病(包括AML)，特别是结合了对恶性细胞的高功效和特异性并减少了脱靶副作用的治疗策略。还期望开发出这样的治疗策略，即，适用于治疗目前与高疾病复发相关的白血病类型(例如，AML)，适用于治疗ATO耐药性白血病和/或适用于治疗对于常规化疗方案不可行的患者。
发明内容
现已发现：(i)三氧化二砷；(ii)铁；和(iii)青蒿素的组合能够用于治疗白血病。还发现，与相应化合物单独或“双重”组合(即上述活性剂中任意两种的组合)给予的效果相比，这种三联组合疗法会产生益处(例如协同效益)。更进一步地，已发现这种三联组合具有临床上可接受的毒性特性，其可与使用类似活性剂的联合疗法形成对比，例如δ-氨基乙酰丙酸作为用于增加细胞内铁浓度的试剂。
因此，本发明提供了：
[1]一种药物组合物，其包含：(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素(例如青蒿琥酯)；用于治疗白血病(例如AML)。
[2]三氧化二砷在治疗白血病(例如AML)中的应用，所述三氧化二砷与铁和青蒿素(例如青蒿琥酯)联合施用。
[3]铁在治疗白血病(例如AML)中的应用，所述铁与三氧化二砷和青蒿素(例如青蒿琥酯)联合施用。
[4]青蒿素(例如青蒿琥酯)在治疗白血病(例如AML)中的应用，所述所述青蒿素与三氧化二砷和铁联合施用。
[5]一种治疗白血病(例如AML)患者的方法，所述方法包括对所述患者联合施用三氧化二砷、铁和青蒿素(例如青蒿琥酯)。
[6]一种产品，包含(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素(例如青蒿琥酯)，作为同时、并发、分别或依次用于治疗白血病(例如AML)患者的组合制剂。
[7]三氧化二砷通过与铁和青蒿素(例如青蒿琥酯)联合施用在制备用于治疗白血病(例如AML)的药物中的应用。
[8]铁通过与三氧化二砷和青蒿素(例如青蒿琥酯)联合施用在制备用于治疗白血病(例如AML)的药物中的应用。
[9]青蒿素(例如青蒿琥酯)通过与三氧化二砷和铁联合施用在制备用于治疗白血病(例如AML)的药物中的应用。
[10]一种药物组合物，其包含：(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素(例如青蒿琥酯)。
[11]一种试剂盒，其包含以下组分：(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素(例如青蒿琥酯)；其中，所述组分(a)、(b)和(c)中的每一种各自配制在单独的药物组合物中，或者，所述组分(a)、(b)和(c)中的任意两种一起配制在第一药物组合物中，而剩余组分则配制在第二药物组合物中。
下文详细概述本发明的其他方面。
附图说明
图1示出了各种细胞系的线粒体膜电位的基础水平，如实施例1中所述。Y轴对应于相对荧光强度[RFU 590nm/530nm]，而沿X轴的从左到右的条形分别是ATO敏感性NB4细胞系的结果、由NB4(“NB4-EVAsR1”)产生的ATO耐药性APL细胞系的结果以及先天ATO耐药性UF1细胞系的结果。该图显示出ATO耐药性细胞系的线粒体膜电位的基础水平显著低于NB4原初细胞(n＝4)。
图2示出了各种细胞系的葡萄糖摄取的基础量，如实施例1中所述。Y轴对应于相对荧光强度[RFU 485nm/595nm]，而沿X轴的从左到右的条形分别是ATO敏感性NB4细胞系的结果、由NB4(“NB4-EVAsR1”)产生的ATO耐药性APL细胞系的结果以及先天ATO耐药性UF1细胞系的结果。该图显示出ATO耐药性细胞系的葡萄糖摄取的基础量显著低于NB4原初细胞(n＝4)。
图3示出了糖酵解抑制剂(i)2-DG；(ii)ATO；以及(iii)2-DG和ATO的组合对各种细胞系的作用，如实施例1中所述(n＝4；时间段＝48小时)。Y轴对应于存活率％。沿X轴显示了四个组，每组三个条形。对于每组的三个条形，最左边的条形示出了NB4原初细胞的结果，中间的条形示出了由NB4(“NB4-EVAsR1”)产生的ATO耐药性APL细胞系的结果，并且最右边的条形示出了先天ATO耐药性UF1细胞系的结果。从左到右，这些组分别对应于：(i)未处理的细胞(即对照)；(ii)仅用ATO处理；(iii)仅用2-DG处理；以及(iv)用ATO和2-DG的组合处理。
图4示出了(i)氧化磷酸化解偶联剂FCCP；(ii)ATO；以及(iii)FCCP和ATO的组合对各种细胞系的作用，如实施例1中所述(n＝4；时间段＝48小时)。Y轴对应于存活率％。沿X轴显示了五个组，每组四个条形。对于每组的四个条形，各个条形从左到右分别对应于：(i)未处理的细胞(对照)；(ii)仅用ATO处理；(iii)仅用FCCP处理；以及(iv)用ATO和FCCP的组合处理。从左到右，这些组分别对应于：(i)NB4原初细胞系的结果；(ii)由NB4(“NB4-EVAsR1”)产生的ATO耐药性APL细胞系的结果；(iii)UF1细胞系的结果；(iv)U937细胞系的结果；以及(v)对正常外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMNC)的作用。
图5示出了(i)ATO；(ii)ART；以及(iii)ATO和ART的组合对各种细胞系的作用，如实施例1中所述(n＝8；时间段＝48小时)。Y轴对应于膜联蛋白V-/7AAD-细胞％。沿X轴显示了六个组，每组四个条形。对于每组的四个条形，各个条形从左到右分别对应于：(i)未处理的细胞(对照)；(ii)仅用2μM ATO处理；(iii)仅用5μM ART处理；以及(iv)用ATO和ART的组合处理。从左到右，这些组分别对应于：(i)ATO敏感性NB4原初细胞系的结果；(ii)由NB4(“NB4-EVAsR1”)产生的ATO耐药性APL细胞系的结果；(iii)ATO耐药性U937细胞系的结果；(iv)ATO耐药性THP-1细胞系的结果；(v)ATO敏感性Kasumi细胞系的结果；以及(vi)ATO耐药性Jurkat细胞系的结果。
图6示出了对正常PBMNC进行体外细胞毒性分析的结果，其中ATO以两种不同的浓度使用，而ART以多种变化的浓度使用，如实施例1中所述(n＝3；时间段＝48小时)。Y轴对应于MTT还原％(归一化为对照)。X轴对应于青蒿琥酯的对数浓度(μM)。单独使用ART的结果以圆圈显示，其最佳拟合线趋向图右侧，位于其他两条最佳拟合线之间。使用1μM ATO和ART进行处理的结果以正方形显示，其最佳拟合线趋向图右侧，是最上面那条线。使用2μM ATO和ART进行处理的结果以三角形显示，其最佳拟合线趋向图右侧，是最下面那条线。
图7示出了用以下方式处理U937细胞的结果：(i)未处理(对照)；(ii)ATO(1μM)；(iii)ART(5μM)；(iv)ART(5μM)和ALA(1mM)；(v)ATO(1μM)和ART(5μM)；(vi)ATO(1μM)和ART(5μM)和ALA(1mM)；(vii)ART(5μM)和ALA(1mM)和DFO(20μM)；以及ATO(1μM)和ART(5μM)和ALA(1mM)和DFO(20μM)，如实施例1中所述(n＝4；时间段＝48小时)。(右数第三个条形)还显示了用ATO(2μM)处理NB4原初细胞的结果。Y轴对应于膜联蛋白V-/7AAD-细胞％。
图8示出了对U937细胞的处理结果，如实施例2中所述(n＝5；时间段＝48小时)。组(Panel)A示出了用以各种组合和各种浓度存在的ATO、ART和/或氯高铁血红素进行处理的结果。组B示出了与DFO联合施用的效能的消除(对于每对条形，最左边的条形显示未施用DFO的结果，而最右边的条形显示联合施用DFO的结果)。两幅图中的Y轴均对应于膜联蛋白V-/7AAD-细胞％。
具体实施方式
定义
如本文所使用的，并且除非另有说明，否则术语“药学上可接受的盐”包括但不限于：本文所述化合物的酸性或碱性部分的盐(包括但不限于青蒿素，青蒿琥酯，δ-氨基乙酰丙酸和铁)。碱性部分能够与各种无机酸和有机酸形成各种各样的盐。可用于制备此类碱性化合物的药学上可接受的酸式加成盐的酸是形成无毒的酸式加成盐的酸，所述无毒的酸式加成盐例如为含有药理学上可接受的阴离子的盐。合适的有机酸包括但不限于马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏血酸、琥珀酸、乙酸、甲酸、草酸、丙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡萄糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、油酸、鞣酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、乙醇酸、谷氨酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、糖质酸、异烟酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸或扑酸(例如，1,1'-亚甲基双-(2-羟基-3-萘甲酸))。合适的无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸或硝酸。除上述酸外，包括胺部分的化合物还能够与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。本质上为酸性的化学部分能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱式盐。这种盐的例子为碱金属盐或碱土金属盐，特别是钙盐、镁盐、钠盐、锂盐、锌盐、钾盐或铁盐。
如本文所使用的，并且除非另有说明，否则术语“溶剂化物”是指还包括有通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量量的溶剂。当溶剂是水时，溶剂化物是水合物。
如本文所使用的，并且除非另有说明，否则术语“立体异构体”涵盖本文提供的所有对映体纯/立体异构纯化合物和对映体富集/立体异构富集化合物。
如本文所使用的，并且除非另有说明，否则术语“立体异构纯”是指一种成分，其包含化合物的一种立体异构体并且基本上不含该化合物的其他立体异构体。例如，具有一个手性中心的化合物的立体异构纯成分将基本上不含该化合物的相反对映体。具有两个手性中心的化合物的立体异构纯成分将基本上不含该化合物的其他非对映异构体。一种典型的立体异构纯化合物包含大于约80wt％的该化合物的一种立体异构体和小于约20wt％的该化合物的其他立体异构体，大于约90wt％的该化合物的一种立体异构体和小于约10wt％的该化合物的其他立体异构体，大于约95wt％的该化合物的一种立体异构体和小于约5wt％的该化合物的其他立体异构体，大于约97wt％的该化合物的一种立体异构体和小于约3wt％的该化合物的其他立体异构体，大于约98wt％的该化合物的一种立体异构体和小于约2wt％的该化合物的其他立体异构体，或者，大于约99wt％的该化合物的一种立体异构体和小于约1wt％的该化合物的其他立体异构体。
如本文所使用的，并且除非另有说明，否则术语“立体异构富集”是指一种成分，其包含大于约55wt％的化合物的一种立体异构体，大于约60wt％的化合物的一种立体异构体，大于约70wt％的化合物的一种立体异构体，或者，大于约80wt％的化合物的一种立体异构体。
如本文所使用的，并且除非另有说明，否则术语“对映体纯”是指具有一个手性中心的化合物的立体异构纯成分。类似地，术语“对映体富集”是指具有一个手性中心的化合物的立体异构富集成分。
青蒿素
青蒿素是一种公知的化合物，具有以下结构式：
Figure BDA0002666423480000051
青蒿素及其衍生物(在本文中统称为“青蒿素”)已广泛用作治疗疟疾的药物。
青蒿素本身和青蒿素类的活性代谢产物通常为双氢青蒿素(DHA)，其具有以下分子式：
Figure BDA0002666423480000052
青蒿素类的非限制性例子包括：青蒿琥酯、青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚、蒿醚林酸、蒿乙醚、青蒿酮和双氢青蒿素。因此，在本发明中，所述青蒿素例如可以是一种化合物，其选自由以下组成的组：青蒿琥酯、青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚、蒿醚林酸、蒿乙醚、青蒿酮和双氢青蒿素。
青蒿琥酯的化学结构式为：
Figure BDA0002666423480000061
青蒿琥酯具有半琥珀酸酯基团，其将物质的水溶性和高口服生物利用度赋予该化合物。在本发明中，所述青蒿素优选为青蒿琥酯。
以前的研究认为，青蒿素类(包括青蒿琥酯)可具有抗癌特性。例如，青蒿琥酯的抗白血病活性的临床前研究描述于《白血病研究》59，2017，124-135(Leukemia Research,59,2017,124-135)。
青蒿素类(例如青蒿琥酯)可以通过各种方式被方便地施用，包括肠胃外方式(例如，肌内静脉给药或直肠给药)和口服方式。
青蒿素可以本身或任何生理上可接受的物理形式被施用。例如，青蒿素可以生理上可接受的盐或溶剂化物的形式存在。就此而言，要强调的是，本文所使用的术语“青蒿素”包括其生理上可接受的盐或溶剂化物(例如，“青蒿琥酯”包括其任何生理上可接受的盐或溶剂化物)。制备已知药物的生理上可接受的物理形式(包括盐和溶剂化物)是本领域的惯例，本申请不对此类方法进行基础性介绍。青蒿琥酯的一种常见制剂是其钠盐(即青蒿琥酯钠)。
青蒿素还可以任何对映体形式存在，例如，外消旋的，对映体富集/立体异构富集的和/或对映体纯/立体异构纯的。
三氧化二砷
三氧化二砷，即As2O3，是一种已知的化学治疗剂。例如，它已作为药物Trisenox销售，用于治疗急性前骨髓性白血病。
例如，三氧化二砷能够方便地作为浓缩液用于输液，例如用于稀释和随后的静脉内给药。在另一个实施例中，三氧化二砷可被配制用于口服给药(例如，Au等人在《血液学年鉴》(2013)92:417中所述的那样(Au et al.Ann Hematol(2013)92:417))。
δ-氨基乙酰丙酸
δ-氨基乙酰丙酸(也称为5-氨基乙酰丙酸)具有以下化学式：
Figure BDA0002666423480000062
它以盐酸盐的形式已作为药物Ameluz销售，用于治疗面部和头皮上的轻度至中度严重的光化性角化病以及区域性癌变。
在人类中，δ-氨基乙酰丙酸是血红素的前体。δ-氨基乙酰丙酸在胞质溶胶中经历一系列转化，最后在线粒体内转化为原卟啉IX。在亚铁螯合酶存在下，该原卟啉分子与铁螯合，生成血红素。因此，δ-氨基乙酰丙酸的施用可用于提升细胞内血红素水平和增加细胞内铁浓度。
δ-氨基乙酰丙酸可以本身或任何生理上可接受的物理形式被施用。例如，δ-氨基乙酰丙酸可以生理上可接受的盐或溶剂化物的形式存在。就此而言，要强调的是，本文所使用的术语“δ-氨基乙酰丙酸”包括其生理上可接受的盐或溶剂化物。制备已知药物的生理上可接受的物理形式(包括盐和溶剂化物)是本领域的惯例，本申请不对此类方法进行基础性介绍。如上所述，一种常见的δ-氨基乙酰丙酸的制剂是其盐酸盐。
本发明的一个令人惊奇的方面是发现了：相比于使用δ-氨基乙酰丙酸代替铁的相应的三联组合，在用于治疗白血病的还包含有三氧化二砷和青蒿素的三联组合的情况下铁(例如以铁配合物的形式，如氯高铁血红素)的直接施用可能涉及改善的结果，如更低的旁观者毒性/副作用。
铁
铁在医学上已使用了数百年，特别是用于贫血的治疗。它在WHO的基本药物清单中。
为避免疑虑，根据本发明，当铁用作活性剂时，它可以任何物理形式存在，只要它能够增加施用了它的个体的细胞内铁浓度即可。因此，本文中提及的“铁”不应被解释为限于元素铁金属。例如，铁活性剂的非限制性可接受形式包括元素铁和药学上可接受的铁盐和铁配合物。因此，所述“铁”活性剂可以富铁化合物的形式存在，当然，只要该化合物在施用后能够将铁递送给受试者即可，例如，只要该化合物在施用后能够增加细胞内铁浓度即可。
硫酸亚铁(II)是一种医疗用途的众所周知的可商购的铁的形式。富马酸亚铁(II)是另一种常用的和示例性的药用铁的形式。两者均代表根据本发明使用的铁的示例性形式。
铁的其他示例性形式包括血红素铁多肽(heme iron polypeptide,HIP)、硫酸甘氨酸亚铁、羧基麦芽糖铁、右旋糖酐铁、蔗糖铁和异麦芽糖酐铁。
在本发明的优选方面，所述铁以铁配合物的形式存在。例如，这种配合物可以是二价铁(II)配合物或三价铁(III)配合物。一种优选的铁配合物为卟啉铁配合物，例如铁(III)卟啉配合物。一种优选的卟啉为原卟啉IX或其衍生物。例如，原卟啉IX的铁配合物(例如铁(III)配合物)是用于本发明的一种优选的铁类型。氯高铁血红素和羟高铁血红素是示例性的这类物质，即，其中的配合阴离子(氯高铁血红素中的Cl-；羟高铁血红素中的OH-)被另一种药学上可接受的阴离子替代的化合物。在本发明的一个当前优选的实施例中，所述铁活性剂包括氯高铁血红素。令人惊奇地发现，在本发明实施的三联组合疗法中，此类铁配合物涉及低的旁观者毒性/更可接受的副作用特性。
当根据本发明要施用铁时，它可以以任何合适的形式被制备并被配制成通过任何合适的方式施用。铁的常见施用方式包括口服给药和肠胃外给药。
铁的施用直接增加细胞内铁水平。
活性成分的组合
本发明涉及三氧化二砷、铁和青蒿素的三联组合的使用。所述三氧化二砷、所述铁和所述青蒿素在本文中被称为“活性成分”或“活性剂”。
一方面，本发明提供了一种用于治疗白血病的药物组合物，其包含：(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素。根据本发明的药物组合物通常将进一步包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。
本发明扩展至联合施用上述活性成分的情况。当所述活性成分被联合施用时，它们可以存在于单一药物组合物中，或存在于不同的多种药物组合物中，包括存在于通过相同或不同模式为施用进行了优化的不同的多种药物组合物中。例如，所述活性成分均可以在单一药物组合物中口服给药，或更优选地，在不同的多种药物组合物中口服给药。
为避免疑虑，在包含(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素的产品中，作为可同时、并发、分别或依次使用的组合制剂，所述产品可包含以下任一种：
(i)包含(a)；(b)；和(c)全部的单一药物组合物；
(ii)两种(不同的)药物组合物，其中(a)；(b)；和(c)中的任意两种一起配制在第一药物组合物中，而其余组分配制在第二药物组合物中；或
(iii)三种(不同的)药物组合物，其中(a)配制在第一药物组合物中，(b)配制在第二药物组合物中，并且(c)配制在第三药物组合物中。
根据本发明所述的活性成分的联合施用包括同时、分别和依次施用。
一般而言，本发明中所使用的药物组合物可适于通过本领域已知的任何方式给药，例如，口服给药、黏膜给药(例如，鼻腔给药、舌下给药、阴道给药、颊部给药或直肠给药)、肠胃外给药(例如，皮下注射、静脉内注射、团注、肌内注射或动脉内注射)、局部给药(例如，滴眼剂或其他眼用制剂)、经皮给药或透皮给药。
对于口服给药，本发明所述的药物组合物可以采用例如片剂、锭剂或胶囊剂的形式，所述片剂、锭剂或胶囊剂通过常规方式用药学上可接受的赋形剂制备，如粘合剂(例如预糊化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或乙醇酸钠)；或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。片剂可以通过本领域公知的方法进行包衣。例如，用于口服给药的液体制剂可以采用溶液剂、糖浆剂或混悬剂的形式，或者它们可以作为干燥产品存在，在使用前用水或其他合适的载体配制。此类液体制剂可通过常规方法用药学上可接受的添加剂制备，如悬浮剂、乳化剂、非水载体或防腐剂。所述制剂还可酌情包含缓冲盐、调味剂、着色剂或甜味剂。
对于眼用制剂，本发明所述的药物组合物可被方便地配制成在等渗的pH调节的无菌生理盐水中的微粉混悬剂，含有或不含防腐剂，如杀菌剂或杀真菌剂，例如硝酸苯汞、苯扎氯铵或醋酸氯己定。可选地，对于眼部给药，化合物可被配制成软膏，如凡士林。
对于直肠给药，本发明所述的药物组合物可被方便地配制成栓剂。这些栓剂可以通过将活性成分与合适的无刺激性赋形剂混合以制备，所述无刺激性赋形剂在室温下为固体，在直肠温度下为液体，因此会在直肠中融化从而释放出所述活性成分。此类材料包括，例如可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
对于局部给药，本发明所述的药物组合物可以采用通常用于局部给药的任何制剂的形式，特别是溶液剂、洗剂、液体稠度乳剂、半液体稠度乳剂、半固体稠度乳剂、固体稠度乳剂、乳膏、凝胶或软膏。通过将油相分散在水中(O/W)或将水相分散在油中(W/O)获得乳剂。例如，一些用于局部给药的药物组合物含有油相。例如，此类药物组合物可以是油包水型乳剂(即，水是分散相而油是分散介质的乳剂)或基本上是非水的乳剂。
根据本发明的局部使用的组合物还可包含一种或多种润肤剂、乳化剂、增稠剂和/或防腐剂。所述润肤剂通常为长链醇，如鲸蜡醇、硬脂醇和鲸蜡硬脂醇；凡士林和轻质矿物油等烃类化合物；或乙酰化羊毛脂。基于制剂的总重量，制剂中润肤剂的总量优选为约5wt％至约30wt％，且更优选为约5wt％至约10wt％。所述乳化剂通常为非离子型表面活性剂，例如，聚山梨醇酯60(可从西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich)获得)、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚甘油-4油酸酯和四聚乙二醇单月桂醚或三价阳离子。基于制剂的总重量，通常，乳化剂的总量优选为约2wt％至约14wt％，且更优选为约2wt％至约6wt％。可以使用药学上可接受的增稠剂，如VeegumTM.K(可从R.T.范德比尔特公司(R.T.Vanderbilt Company,Inc.)获得)和长链醇(即鲸蜡醇、硬脂醇或鲸蜡硬脂醇)。基于制剂的总重量，存在的增稠剂的总量优选为约3wt％至约12wt％。如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和苯甲醇等防腐剂可存在于制剂中。
可选地，制剂中可包含额外的增溶剂，如苯甲醇、乳酸、乙酸、硬脂酸或盐酸。如果使用了额外的增溶剂，则基于乳膏的总重量，该额外的增溶剂存在的量优选为约1wt％至约12wt％。
可选地，所述制剂可包含保湿剂(如甘油)和皮肤渗透增强剂(如硬脂酸丁酯)。
本领域技术人员已知，单一成分可以在组合物中发挥不止一种功能，即鲸蜡醇既可以用作润肤剂也可以用作增稠剂。
本发明所述的药物组合物可选地包含油相。在这种情况下，基于组合物的总重量，通常，该组合物中油的量为至少10wt％，优选至少30wt％，更优选至少50wt％，更优选至少80wt％。如本文所使用的油相通常是基本上与水不相溶的液相或固相。更典型地，如本文所使用的油相在25℃下在水中的溶解度小于或等于1mg/L，优选小于0.1mg/L。
乳剂中的油相可以是通常用于局部给药的乳剂中的任何油相。例如，此类油相包括：烃类基质，如硬石蜡、软石蜡、地蜡和微晶蜡；吸收基质，如羊毛脂和蜂蜡；乳化基质，如乳化蜡和西曲溴胺；以及植物油，如橄榄油、椰子油、芝麻油、杏仁油和花生油。根据本发明的有用的其他油相为矿物油、液态石油、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酸酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、苯甲醇和2-辛基十二醇。
本领域技术人员应理解，通过改变乳剂中水与油的比例，可以按照油比例增加顺序将所得物视为洗剂、乳膏或软膏。包含相似比例的油相和水相的乳剂通常被认为是乳膏，而软膏通常包含的油相比例相比于水相基本上更高，例如，大于60wt％的油相，优选大于70wt％的油相，更优选大于80wt％的油相，基于油相和水相的总重量。洗剂通常含有比乳膏更低的油相比例，例如，低于25wt％的油相，低于20wt％的油相，低于15wt％的油相，低于10wt％的油相或低于5wt％的油相，基于油相和水相的总重量。
一般而言，根据本发明使用的乳膏包含混合在一起以形成乳剂的油相和水相。优选地，基于乳膏的总重量，存在于本发明所述乳膏中的水的量为约45wt％至约85wt％，更优选为约45wt％至约65wt％，甚至更优选为约45wt％至约55wt％。
所述组合物是软膏的情况下，将使用药学上可接受的软膏基质。软膏基质的例子包括：烃类基质，如硬石蜡、软石蜡、地蜡和微晶蜡；吸收基质，如羊毛脂和蜂蜡；水溶性基质，如聚乙二醇(例如聚乙二醇200、300、400、3350、4000或6000)、丙二醇和聚丙二醇；乳化基质，如乳化蜡和西曲溴胺；以及植物油，如橄榄油、椰子油、芝麻油、杏仁油和花生油。软膏基质的混合物当然可被使用。基于软膏的总重量，存在于本发明的软膏中的软膏基质的量优选为约60wt％至约95wt％，更优选为约70wt％至约90wt％，更优选为约75wt％至约85wt％。
根据本发明使用的药物组合物也可以是洗剂，含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性成分。特定的载体例如包括，矿物油、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、苯甲醇、2-辛基十二醇和水。
可以通过各种途径对患者进行肠胃外给药，包括但不限于：皮下注射、静脉内注射(包括团注)、肌内注射和动脉内注射。因为它们的给药通常绕过患者对污染物的天然防御，所以用于肠胃外给药的药物组合物优选为无菌的或能够在对患者给药之前被灭菌。此类药物组合物的例子包括但不限于：准备注射的溶液剂、准备溶解或悬浮在药学上可接受的注射用载体中的干燥产品、准备注射的混悬剂以及乳剂。
可用于提供用于肠胃外给药的药物组合物的一些合适的载体包括但不限于：注射用水USP；水性载体，例如但不限于氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液以及乳酸钠林格注射液；水溶性载体，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性载体，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。
活性成分的合适剂量可以由熟练的执业医师确定。活性成分的实际剂量水平可被改变以获得一定量的活性成分，其对特定患者、组合物和给药方式而言有效地实现了所需的治疗反应，而对患者无毒。因此，该剂量通常是有效的或治疗有效的剂量。
选择的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括：所采用的本发明所述特定组合物的活性、给药途径、给药时间、所用特定化合物的排泄率、治疗持续时间、与采用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、被治疗患者的年龄、性别、体重、状况、总体健康状况和既往病史以及医学领域公知的类似因素。
剂量方案可被调整以提供最佳的期望反应。例如，可以施用单次剂量(例如每天单次剂量)，随着时间的推移，可施用若干个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度成比例地减少或增加剂量。本文所使用的剂量单位形式是指适于作为待治疗受试者的单一剂量的物理上离散的单位；每个单位包含经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果的预定量的活性化合物。
在本发明所述的组合物和产品中，例如，相对于组合物或产品的总重量，活性成分可各自以0.001-20wt％的浓度存在，优选为0.01-10wt％，更优选为0.02-5wt％，并且更优选为1-4wt％。在一个特定实施例中，三种活性成分中的每一种均以1-3wt％的浓度存在。
在一个目前优选的方面，青蒿素(例如青蒿琥酯)被配制为每天50至500mg(更优选100至300mg，例如约200mg)给药(基于约70公斤的体重；剂量可以根据体重成比例地调整)。优选地，青蒿素(例如青蒿琥酯)被配制用于口服或肠胃外给药。优选地，青蒿素(例如青蒿琥酯)持续给药3至30天的一段时期，更优选10至20天，如约14天。该时期可对应于包含多个此类治疗周期(例如，至少两个、三个、四个、五个、六个或更多个周期，例如持续此类周期直到实现所需的治疗效果为止)的给药方案中的一个治疗周期。每个治疗周期可以通过青蒿素(例如青蒿琥酯)给药的中断分隔开；例如，这种中断可允许骨髓恢复。给药的中断可包括在3至14天的时期内不施用青蒿素(例如青蒿琥酯)，更优选5至10天，如约7天。
在一个示例性的方面，青蒿素(例如青蒿琥酯)在为期两周的治疗周期中每天给药约200mg，每个周期后中断给药一周。
在当前优选的方面中，三氧化二砷被配制为每天1至30mg(更优选5至20mg，如约10mg)给药(基于约70公斤的体重；剂量可以根据体重成比例地调整)。优选地，三氧化二砷被配制用于肠胃外或口服给药，最优选用于肠胃外给药，例如用于静脉输注。优选地，三氧化二砷持续给药3至60天的一段时期，更优选20至40天，如约30天。该时期可对应于包含多个此类治疗周期(例如，至少两个、三个、四个、五个、六个或更多个周期，例如持续此类周期直到实现所需的治疗效果为止)的给药方案中的一个治疗周期。每个治疗周期可以通过三氧化二砷给药的中断分隔开；例如，这种中断可允许骨髓恢复。给药的中断可包括在3至14天的时期内不施用三氧化二砷，更优选5至10天，如约7天。
在一个示例性的方面，三氧化二砷在为期30天的治疗周期中每天给药约10mg，每个周期后中断给药一周。
在当前优选的方面中，铁被配制为每天50至500mg(更优选100至250mg，如约150mg)给药。优选地，铁被配制用于口服或肠胃外给药。优选地，铁持续给药3至30天的一段时期，更优选10至20天，如约14天。该时期可对应于包含多个此类治疗周期(例如，至少两个、三个、四个、五个、六个或更多个周期，例如持续此类周期直到实现所需的治疗效果为止)的给药方案中的一个治疗周期。每个治疗周期可以通过铁给药的中断分隔开；例如，这种中断可允许骨髓恢复。给药的中断可包括在3至14天的时期内不施用铁，更优选5至10天，如约7天。在一个示例性的方面，铁在为期两周的治疗周期中每天给药约200mg，每个周期后中断给药一周。
如本文其他地方所论述的，在本发明的一个实施例中，所述铁以富含铁的配合物的形式提供，如氯高铁血红素。在当前优选的方面中，根据时间表，将氯高铁血红素配制成以1-4mg/kg/天的剂量静脉输注超过10-15分钟，持续给药3-14天。优选地，将氯高铁血红素给药3-25天的一段时期，更优选为10-20天，如约14天。该时期可对应于包含多个此类治疗周期(例如，至少两个、三个、四个、五个、六个或更多个周期，例如持续此类周期直到实现所需的治疗效果为止)的给药方案中的一个治疗周期。每个治疗周期可以通过氯高铁血红素给药的中断分隔开；例如，这种中断可允许骨髓恢复。给药的中断可包括在3至14天的时期内不施用氯高铁血红素，更优选5至10天，如约7天。
额外的活性剂
可选地，除三氧化二砷、铁和青蒿素外，还可施用一种或多种额外的活性成分。因此，一种或多种额外的活性剂可存在于本发明所述的产品、药物组合物和试剂盒中。此类额外的活性剂的例子包括：阿糖胞苷(胞嘧啶阿糖核苷或者Ara-C)；蒽环类药物，如阿霉素、柔红霉素、道诺霉素、伊达比星和米托蒽醌；其他化疗药物，如羟基脲
Figure BDA0002666423480000111
地西他滨
Figure BDA0002666423480000112
克拉屈滨(
Figure BDA0002666423480000113
2-CdA)、氟达拉滨
Figure BDA0002666423480000114
拓扑替康、依托泊苷(VP-16)和6-硫鸟嘌呤(6-TG)；皮质类固醇药物，如泼尼松或地塞米松
Figure BDA0002666423480000115
甲氨蝶呤(MTX)、6-巯基嘌呤(6-MP)或阿扎胞苷
Figure BDA0002666423480000116
以及其它药物，如全反式视黄酸(ATRA)、维甲酸或
Figure BDA0002666423480000117
例如，本文所定义的药物组合物可另外包含一种或多种额外的活性剂。进一步地，(a)三氧化二砷通过联合施用在治疗白血病中的应用；(b)铁通过联合施用在治疗白血病中的应用；和(c)青蒿素通过联合施用在治疗白血病中的应用中的每一种还可另外包括与一种或多种额外的活性剂联合施用。此外，治疗患有白血病的患者的方法可以包括向所述患者联合施用一种或多种额外的活性剂。此外，包含(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素的产品，作为同时、并发、分别或依次用于治疗白血病患者的组合制剂还可包含一种或多种额外的活性剂。更进一步地，本发明所述的应用可包括通过联合施用一种或多种额外的活性剂制备用于治疗白血病的药物。更进一步地，所述试剂盒可包含一种或多种额外的活性剂。
白血病的治疗
通常待治疗的患者为哺乳动物。优选地，所述患者为人类。
一般而言，对根据本发明的易于治疗的白血病类型的形式没有限制。例如，所述白血病可以是急性骨髓性白血病(AML)。所述白血病可以是急性淋巴性白血病(ALL)。所述白血病可以是慢性骨髓性白血病(CML)。所述白血病可以是慢性淋巴性白血病(CLL)。所述白血病可以是毛细胞性白血病。
在一个优选实施例中，所述白血病选自AML和ALL。在另一个优选实施例中，所述白血病选自AML和CML。特别优选地，所述白血病为AML。
急性骨髓性白血病的治疗
本发明扩展至AML的所有亚型的治疗。例如，AML的WHO分类包括以下亚型：
伴t(8；21)(q22；q22)；(AML1/ETO)的急性骨髓性白血病
伴异常的骨髓嗜酸性粒细胞和inv(16)(p13q22)或t(16；16)(p13；q22)；(CBFβ/MYH11)的急性骨髓性白血病
伴t(15；17)(q22；q12)；(PML/RARα)和变体的急性前骨髓性白血病(即APL)
伴11q23(MLL)异常的急性骨髓性白血病
伴多系发育异常的急性骨髓性白血病
伴随MDS或MDS/MPD
无既往MDS或MDS/MPD，但在2个或更多骨髓系统中至少50％的细胞发育异常
治疗相关的急性骨髓性白血病和骨髓增生异常综合症
烷基化剂/辐射相关类型
拓扑异构酶II抑制剂相关类型(有些可能是淋巴的)
未另外分类的急性骨髓性白血病
微分化型急性骨髓性白血病
未成熟型急性骨髓性白血病
成熟型急性骨髓性白血病
急性髓单核细胞白血病
急性单核母细胞性/急性单核细胞性白血病
急性红白血病(红系/髓性和纯红白血病)
急性巨核细胞白血病
急性嗜碱粒细胞性白血病
急性全髓增殖症伴有骨髓纤维化
髓样肉瘤。
在一个实施例中，AML是APL(AML-M3)以外的AML形式，即AML不是APL。在另一个实施例中，AML是APL。
AML可以是难治性AML。例如，所述难治性AML可包括先前治疗后未能实现完全缓解或血液恢复不完全的完全缓解。所述难治性AML可以是ATO难以治疗的APL(在本文中也称为ATO耐药性APL)，例如，先前使用ATO治疗后未能实现完全缓解或血液恢复不完全的完全缓解。例如，这种先前使用ATO进行的治疗可能涉及：(i)用作为单一活性剂的ATO进行治疗；和/或(ii)ATO与ART的双重组合；和/或(iii)除ART、ATO和铁的三联组合以外的ATO的任何组合。ATO耐药性可以是先天的或获得的(即，由于用ATO早期治疗而产生)。如果难治性AML不是APL，则其将固有地对ATO有耐药性。
术语“完全缓解”可以是形态上无白血病的状态(即，根据形态学标准，骨髓具有小于5％的母细胞，并且无棒状小体，无髓外白血病的证据)，并且嗜中性细胞绝对计数为1,000/μL，血小板>100,000/μL。术语“血液恢复不完全的完全缓解”可以是形态上无白血病的状态(即，根据形态学标准，骨髓具有小于5％的母细胞，并且无棒状小体，无髓外白血病的证据)，并且血液中的嗜中性细胞计数<1,000/μL，或血小板<100,000/μL。
AML可以是复发性AML。完全缓解后，复发性AML可与血液中白血病母细胞或骨髓中大于5％的母细胞的再现有关，不归因于任何其他原因。
待治疗的患者可以是已建立的AML疗法对其不可行的患者(例如，使用例如柔红霉素和/或阿糖胞苷的骨髓抑制疗法)。例如，在一个实施例中，待治疗的患者是年龄为65岁或以上，优选72岁或以上，例如80岁或以上，最优选85岁或以上的患者。可选地或另外地，待治疗的患者可能患有并存疾病，其妨碍如使用柔红霉素和/或阿糖胞苷的骨髓抑制疗法。此类患者可能另外患有难治性AML(例如化疗耐药性AML或ATO耐药性AML)和/或复发性AML。
下面通过参考实施例更详细地解释本发明，所述实施例不应解释为限制性的。
实施例
实施例1(参照)
介绍
癌细胞的代谢重整是癌症的标志之一，越来越多的证据表明，癌细胞的代谢可塑性推动了实体瘤的耐药性。据报道，恶性细胞依赖糖酵解来维持其细胞的存活和增殖，与线粒体呼吸相比，这是一种产生更少的能量途径。癌细胞的这种行为被称为瓦博格效应(Warburg effect)：有氧糖酵解，其中即使存在大量的氧气，癌细胞也会进行糖酵解。
对常规药剂有耐药性的恶性细胞可能正在利用线粒体呼吸来存活，据报道，破坏代谢适应力的药剂与常规药剂合用时克服了耐药性。例如，对用三氧化二砷(ATO)处理的恶性细胞进行的全面蛋白质组学和代谢研究已经表明，糖酵解是靶向性显著的关键途径之一，并且它可能是ATO抗癌作用的作用机制之一。
先前已有报道(Alex等人在《血液》2014 124(21)3605(Alex et al.,Blood 2014124(21)3605)中)称ATO耐药性细胞具有独特的代谢特征。现在已经假设ATO耐药性细胞系(包括非M3AML细胞)的存活依赖线粒体呼吸。
本文描述的实验表明，将ATO与氧化代谢抑制剂组合使用能够克服ATO耐药性，并且本发明所述的组合也对非APL AML细胞有效。
具体地，以下实验涉及这些治疗剂组合对内部产生的ATO耐药性APL细胞系以及针对AML细胞系和原代AML细胞的功效的评估。
结果
i)观察到，相比于NB4原初细胞系，由ATO敏感性早幼粒细胞系NB4产生的耐药性细胞系以及UF-1细胞系具有显著区别的代谢特征，例如降低的活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)水平、较低的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)(图1)、降低的葡萄糖摄取(图2)、降低的增殖速率和升高的谷胱甘肽水平。
ii)还测量了这些耐药性细胞系对糖酵解抑制剂的敏感性，鉴于NB4原初细胞系对糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-DOG是葡萄糖的类似物)敏感。观察到(见图3)，不同于NB4原初细胞，ATO耐药性细胞系对2-DOG具有耐药性。当将2-DOG与ATO结合时，耐药性细胞系的存活率没有受到明显影响。数据表明ATO耐药性细胞系的增殖和存活并不依赖于糖酵解。
iii)随后，进一步评估线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)抑制剂对这些细胞系的作用。最初预计，耐药性细胞系的存活率将受到FCCP(碳酰氰-4-(三氟甲氧基)苯腙；OXPHOS的解偶联剂)的显著影响。然而，观察到，当FCCP用作单一药剂时，耐药性细胞系的存活率不受影响，而FCCP和ATO的组合显著降低了耐药性细胞系的存活率，并且对NB4原初细胞没有明显的累加作用(图4)。该组合不仅降低了ATO耐药性早幼粒细胞的存活，而且还降低了先天ATO耐药性髓样和淋巴样白血病细胞(例如U937(图4)、THP-1和Jurkat E6.1(数据未显示))的存活率。然而，这种组合对恶性细胞的作用不是特异性的，并且还注意到对正常外周血单核细胞(PBMNC；图4)存在显著的旁观者效应。这些观察结果表明，原初ATO敏感性细胞的存活依赖于糖酵解途径，而ATO耐药性细胞系具有当一种能量产生途径被抑制时能在两种能量产生途径之间有效切换的能力。总之，这些观察结果表明，与敏感性NB4原初细胞相比，ATO耐药性(获得的和先天的)白血病细胞更多地依赖于线粒体的氧化代谢(逆向瓦博格效应)。
iv)因为，相比于恶性细胞，这种组合对正常细胞有显著的旁观者效应，对报道的以较宽的治疗指数靶向/破坏代谢适应力的分子进行了筛选。具体地，评估了二甲双胍、二氯乙酸盐(DCA)和青蒿琥酯(ART)与三氧化二砷组合的效果。所有这些药剂作为单一药剂时对恶性细胞没有显著效果。然而，三氧化二砷与ART的组合对恶性细胞有显著效果(图5)，而与二甲双胍的组合则没有观察到显著差异。相比于DCA(数据未显示)，ART与三氧化二砷的组合对恶性细胞具有明显更深远的影响。
v)还评估了ATO和ART的组合是否影响正常外周血单核细胞，并且观察到对这些细胞不存在显著的旁观者效应，这不同于使用FCCP(非特异性的OXPHOS的解偶联剂)观察到的结果(图6)。
vi)在疟疾中，据报道，铁/血红素通过增强ART的抗寄生虫活性而发挥重要作用。进行了一项实验，其中通过用δ-氨基乙酰丙酸(ALA；一种非蛋白氨基酸，它是生成血红素的卟啉合成途径中的第一个化合物)组合ART和较低浓度的ATO(1μM)处理细胞以提高细胞内血红素水平。观察到，ART与ALA组合导致了AML细胞存活率的显著降低，这表明细胞内血红素水平在ART的活性中起重要作用。在具有ATO的三联组合中，存活率甚至更显著地降低(图7)。发现凋亡活性被铁螯合剂(去铁胺；“DFO”)消除。作为单一活性剂的ALA和DFO对这种ATO耐药性细胞系的存活率没有显著影响(数据未在图7中显示)。
方法
i)体外细胞毒性测定：将105细胞/孔接种至96孔板中，并用增加浓度的青蒿琥酯和三氧化二砷处理，并培养48小时。在48小时结束时，加入MTT，然后加入SDS以溶解由活细胞形成的甲臜晶体。在ELISA酶标仪SpectraMaxM4(分子装置公司(Molecular Devices))上，于570nm测试波长和630nm参考波长下测量吸光度，以测量光密度。获得的比色信号应当与活细胞数成比例。如果检测到明显的细胞毒性，则产生IC-50值。使用Graph Pad Prism 5软件(美国加利福尼亚州拉霍亚)生成半数最大抑制浓度(IC-50)值。
ii)细胞凋亡测定：将白血病细胞系(2×105细胞/孔)添加至24孔板中，并用不同药物处理，伴有适当的对照，所述药物据报道会破坏白血病细胞的代谢适应力。在37℃的CO2培养箱中培养48小时后，按照制造商的操作规程，使用膜联蛋白V/7-氨基放线菌素D(7AAD)细胞凋亡测定试剂盒(BD Pharmingen；美国加利福尼亚州圣地亚哥)测量白血病细胞的存活率。使用Cell Quest pro软件(贝克顿·迪金森公司(BD Biosciences)；美国加利福尼亚州圣何塞)分析流式细胞仪数据。
iii)葡萄糖摄取的测量：用2-NBDG(2-脱氧葡萄糖的荧光类似物)将5×105细胞染色10分钟，洗涤，并使用Spectramax M4在485nm/595nm下测量荧光。染料的强度表示为相对荧光强度。
iv)线粒体膜电位：使用JC-1染料(生命技术公司(Life Technologies)；美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)测量经药物处理的细胞的线粒体膜电位(Δψm)。使用Spectramax M4测量荧光强度(分子装置公司；美国加利福尼亚州桑尼维尔)(绿色通道：激发：485nm；发射：530nm；截止波长：515nm；红色通道：激发：485nm；发射：590nm；截止波长：570nm)。计算红色荧光与绿色荧光的比率(590/530)，并计算出经处理的细胞与未处理的细胞相比的Δψm。
实施例2(青蒿琥酯、三氧化二砷和铁配合物(氯高铁血红素)的三联组合)
重复实施例1中所述的实验，但使用铁配合物氯高铁血红素替代δ-氨基乙酰丙酸。
结果如图8所示。观察到ART与氯高铁血红素组合导致AML细胞的存活率显著降低。在具有ATO的三联组合中存活率更显著地降低。发现凋亡活性被铁螯合剂(去铁胺；“DFO”)消除。作为单一活性剂的氯高铁血红素和DFO对这种ATO耐药性细胞系的存活率没有显著影响。
实施例3(体内研究)
概要
体外研究表明，三氧化二砷和青蒿琥酯之间存在明显的协同作用。组合的效果通过加入铁增强剂(如α-氨基乙酰丙酸(ALA)或氯高铁血红素)得到进一步增强。为了进一步验证该体外观察结果，对急性前骨髓性白血病的小鼠模型进行了体内研究。使用α-氨基乙酰丙酸(ALA)的初步实验表明，在小鼠中存在与该药物及其制剂有关的显著毒性，因此选择进一步评估这种与氯高铁血红素的组合。在不存在关于使用氯高铁血红素治疗恶性肿瘤(癌症)的现有文献的情况下，来自非恶性研究(Lu,X.、J.Chen-Roetling和R.F.Regan在《疾病神经生物学》2014.70:p.245-251中题为“全身性血红素疗法减轻脑出血后的血脑屏障破坏”(Lu,X.,J.Chen-Roetling,and R.F.Regan,Systemic hemin therapy attenuatesblood-brain barrier disruption after intracerebral hemorrhage.Neurobiology ofdisease,2014.70:p.245-251))的氯高铁血红素剂量计划表适用于这些体内实验。
小鼠模型和药物治疗
FVB/N小鼠获取自杰克逊实验室(Jackson Laboratory；美国缅因州巴尔港)。将6至8周龄的小鼠用于实验。动物研究设计和安乐死的方案已获得机构动物伦理委员会的批准。收集来自MRP8-PML-RAR转基因小鼠(FVB/N)的脾脏的急性早幼粒细胞，并冷冻保存用于白血病的发展。通过尾静脉将APL细胞(5×104细胞/小鼠)静脉注射到遗传相容的FVB/N受体中。
药物和给药途径
1.从注射恶性细胞后第7天开始，以5mg/kg小鼠的浓度腹膜内施用ATO，并持续28天。
2.从注射恶性细胞后第7天开始，以50mg/kg小鼠的浓度腹膜内施用青蒿琥酯，并持续28天。
3.在第7天的ATO和青蒿琥酯治疗之前6小时，以26mg/kg小鼠的浓度腹膜内施用氯高铁血红素(PANHEMATIN)。
注射期后，监测小鼠的白血病和存活情况。
观察到，氯高铁血红素施用甚至在ATO和ART治疗之前或之后对组合的活性也具有显著影响。虽然，除了治疗标准(ATO在APL处理中其结果大于80％)外没有明显改善，但与安慰剂相比，ATO+ART/ATO+ART+氯高铁血红素的组合具有明显的存活优势。
结果
初步分析表明，这种三联组合对小鼠白血病消退和存活具有显著的益处。

Claims (28)

1.一种药物组合物，其包含：
(a)三氧化二砷；
(b)铁；和
(c)青蒿素；
用于治疗白血病。
2.三氧化二砷在治疗白血病中的应用，其中，所述三氧化二砷与铁和青蒿素联合施用。
3.根据权利要求2所述的三氧化二砷的应用，其中，所述青蒿素为青蒿琥酯。
4.根据权利要求2或3所述的三氧化二砷的应用，其中，所述铁为铁配合物。
5.根据权利要求4所述的三氧化二砷的应用，其中，所述铁配合物为卟啉配合物。
6.根据权利要求5所述的三氧化二砷的应用，其中，所述卟啉配合物为氯高铁血红素。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的三氧化二砷的应用，其中，所述白血病为急性骨髓性白血病(AML)。
8.铁在治疗白血病中的应用，其中，所述铁与三氧化二砷和青蒿素联合施用。
9.根据权利要求8所述的铁的应用，其中，所述青蒿素为青蒿琥酯。
10.根据权利要求8或9所述的铁的应用，其中，所述铁为铁配合物。
11.根据权利要求10所述的铁的应用，其中，所述铁配合物为卟啉配合物。
12.根据权利要求11所述的铁的应用，其中，所述卟啉配合物为氯高铁血红素。
13.根据权利要求8-12中任一项所述的铁的应用，其中，所述白血病为急性骨髓性白血病(AML)。
14.青蒿素在治疗白血病中的应用，其中，所述青蒿素与三氧化二砷和铁联合施用。
15.根据权利要求14所述的青蒿素的应用，其中，所述青蒿素为青蒿琥酯。
16.根据权利要求14或15所述的青蒿素的应用，其中，所述铁为铁配合物。
17.根据权利要求16所述的青蒿素的应用，其中，所述铁配合物为卟啉配合物。
18.根据权利要求17所述的青蒿素的应用，其中，所述卟啉配合物为氯高铁血红素。
19.根据权利要求14-18中任一项所述的青蒿素的应用，其中，所述白血病为急性骨髓性白血病(AML)。
20.一种治疗白血病患者的方法，所述方法包括对所述患者联合施用三氧化二砷、铁和青蒿素。
21.一种产品，包含(a)三氧化二砷；(b)铁；和(c)青蒿素，作为组合制剂同时、共同、分别或依次用于治疗白血病患者。
22.三氧化二砷在制备通过与铁和青蒿素联合施用治疗白血病的药物中的应用。
23.铁在制备通过与三氧化二砷和青蒿素联合施用治疗白血病的药物中的应用。
24.青蒿素在制备通过与三氧化二砷和铁联合施用治疗白血病的药物中的应用。
25.一种药物组合物，其包含：
(a)三氧化二砷；
(b)铁；和
(c)青蒿素。
26.一种试剂盒，其包含以下组分：
(a)三氧化二砷；
(b)铁；和
(c)青蒿素；
其中，所述组分(a)、(b)和(c)各自配制在单独的药物组合物中，或者，所述组分(a)、(b)和(c)中的任意两种一起配制在第一药物组合物中，而剩余组分则配制在第二药物组合物中。
27.根据权利要求1所述的药物组合物的应用，根据权利要求20所述的方法，根据权利要求21所述的产品的应用，根据权利要求22-24中任一项所述的应用，根据权利要求25所述的药物组合物，或者根据权利要求26所述的试剂盒，其中，所述白血病为急性骨髓性白血病(AML)。
28.根据权利要求1或27所述的药物组合物的应用，根据权利要求20或27所述的方法，根据权利要求21或21所述的产品的应用，根据权利要求22-24和27中任一项所述的应用，根据权利要求25或27所述的药物组合物，或者根据权利要求26或27所述的试剂盒，其中
所述青蒿素为青蒿琥酯；或
所述铁为铁配合物，优选为卟啉铁配合物，并且更优选为氯高铁血红素；或
所述青蒿素为青蒿琥酯且所述铁为铁配合物，优选为卟啉铁配合物，并且更优选为氯高铁血红素。
CN201980017188.1A 2018-01-17 2019-01-17 用于治疗白血病的联合疗法 Pending CN111818930A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB1800736.9 2018-01-17
GBGB1800736.9A GB201800736D0 (en) 2018-01-17 2018-01-17 Combination therapy for treatment of leukemia
PCT/GB2019/050124 WO2019141988A1 (en) 2018-01-17 2019-01-17 Combination therapy for treatment of leukemia

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111818930A true CN111818930A (zh) 2020-10-23

Family

ID=61256143

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980017188.1A Pending CN111818930A (zh) 2018-01-17 2019-01-17 用于治疗白血病的联合疗法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US11400112B2 (zh)
EP (1) EP3740215A1 (zh)
JP (1) JP2021510715A (zh)
CN (1) CN111818930A (zh)
GB (1) GB201800736D0 (zh)
WO (1) WO2019141988A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117085038A (zh) * 2019-05-21 2023-11-21 麦德赛尼克公司 金属离子增强砷的治疗作用的用途
EP3868372A1 (en) * 2020-02-19 2021-08-25 JLP Health GmbH A pharmaceutical combination of an artemisinin compound and a heme synthesis modulator for treating cancer
US11583552B2 (en) * 2021-02-17 2023-02-21 Manoj Maniar Pharmaceutical formulation of arsenic trioxide

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6720011B1 (en) * 1995-08-23 2004-04-13 Ting-Dong Zhang Injectable composition for cancer treatment
CN103202836A (zh) * 2012-01-16 2013-07-17 上海交通大学医学院附属瑞金医院 青蒿素衍生物及其药用盐用于制备治疗急性髓细胞性白血病的药物
CN103202835A (zh) * 2012-01-16 2013-07-17 上海交通大学医学院附属瑞金医院 青蒿素衍生物及其药用盐用于制备治疗急性白血病的药物
CN103202837A (zh) * 2012-01-16 2013-07-17 上海交通大学医学院附属瑞金医院 青蒿素衍生物及其药用盐用于治疗制备白血病的药物
US20130317095A1 (en) * 2011-01-31 2013-11-28 Shanghai Institute Of Materia Medica, Chinese Academy Of Sciences Use of Artemisine Derivatives and Pharmaceutical Salts Thereof
WO2014082569A1 (zh) * 2012-11-29 2014-06-05 昆明制药集团股份有限公司 蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途
CN104739824A (zh) * 2013-12-30 2015-07-01 昆山达人生物医药有限公司 双氢青蒿素在制备抑制肿瘤生长药物中的应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04273819A (ja) * 1991-02-28 1992-09-30 Takeda Chem Ind Ltd 血圧上昇剤
PT1964557E (pt) * 1997-11-10 2013-02-20 Sloan Kettering Inst Cancer Processo para a produção de formulações de trióxido de arsénio
AU2003243418B2 (en) * 2002-06-06 2009-02-19 University Of Washington Covalent conjugates between artemisinin-related endoperoxides and iron-carrying proteins and methods of use
JP2008201765A (ja) * 2007-01-26 2008-09-04 Jichi Medical Univ 腫瘍治療における三酸化二ヒ素の副作用低減剤及び解毒剤
US9801851B2 (en) 2012-05-23 2017-10-31 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions for the treatment of BCR-ABL positive lymphoblastic leukemias
CN103845360A (zh) * 2012-11-29 2014-06-11 昆明制药集团股份有限公司 含蒿甲醚的药物组合物、制剂及其用途
WO2016100882A1 (en) * 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
US9918972B2 (en) 2014-12-23 2018-03-20 The University Of Maryland, Baltimore Treatment of leukemia with artemisinin derivatives and combinations with other antineoplastic agents
US10925963B2 (en) 2015-06-22 2021-02-23 Washington University Combination artemisinin and chemiluminescent photodynamic therapy and uses therefor

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6720011B1 (en) * 1995-08-23 2004-04-13 Ting-Dong Zhang Injectable composition for cancer treatment
US20130317095A1 (en) * 2011-01-31 2013-11-28 Shanghai Institute Of Materia Medica, Chinese Academy Of Sciences Use of Artemisine Derivatives and Pharmaceutical Salts Thereof
CN103202836A (zh) * 2012-01-16 2013-07-17 上海交通大学医学院附属瑞金医院 青蒿素衍生物及其药用盐用于制备治疗急性髓细胞性白血病的药物
CN103202835A (zh) * 2012-01-16 2013-07-17 上海交通大学医学院附属瑞金医院 青蒿素衍生物及其药用盐用于制备治疗急性白血病的药物
CN103202837A (zh) * 2012-01-16 2013-07-17 上海交通大学医学院附属瑞金医院 青蒿素衍生物及其药用盐用于治疗制备白血病的药物
WO2014082569A1 (zh) * 2012-11-29 2014-06-05 昆明制药集团股份有限公司 蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途
CN104739824A (zh) * 2013-12-30 2015-07-01 昆山达人生物医药有限公司 双氢青蒿素在制备抑制肿瘤生长药物中的应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HENRY LAI ET AL: "Selective cancer cell cytotoxicity from exposure to dihydroartemisinin and holotransferrin", 《CANCER LETTERS》 *
YING LI ET AL: "Artesunate possesses anti-leukemia properties that can be enhanced by arsenic trioxide", 《LEUKEMIA & LYMPHOMA》 *
彭宇: "青蒿素衍生物SM1044抗急性髓性白血病的作用和机制研究", 《万方数据知识服务平台》 *
曹履先等主编: "《曹履先教授从医60年学术论文集》", 30 June 2012, 军事医药科学出版社 *
梅全喜主编: "《现代中药药理与临床应用手册》", 31 October 2008, 中国中医药出版社 *
编辑委员会编: "《中国肿瘤临床年鉴》", 30 September 2016, 中国协和医科大学出版社 *

Also Published As

Publication number Publication date
GB201800736D0 (en) 2018-02-28
WO2019141988A1 (en) 2019-07-25
US11400112B2 (en) 2022-08-02
EP3740215A1 (en) 2020-11-25
US20200345770A1 (en) 2020-11-05
JP2021510715A (ja) 2021-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111818930A (zh) 用于治疗白血病的联合疗法
US20080070848A1 (en) Anti-cancer combinations
EP1323423B1 (en) Combined preparation comprising a morpholinyl anthracycline derivative and a topoisomerase II inhibitor
CZ305799B6 (cs) Kombinace analogů epothilonu a chemoterapeutických činidel pro léčení proliferačních nemocí
DE69918819T2 (de) Antikrebs-zusammensetzung enthaltend eine synergistische kombination bestehend aus einem anthracyclin-derivat mit einen camptothecin-derivat
KR20190130078A (ko) 항종양 알칼로이드를 이용한 병용요법
CN112912072A (zh) 组合疗法治疗肌萎缩侧索硬化症及相关疾病
RU2391101C2 (ru) Комбинированное применение эктеинасцидина-743 и содержащих платину противоопухолевых соединений
JPWO2018043530A1 (ja) 抗腫瘍剤、抗腫瘍効果増強剤及び抗腫瘍用キット
DE3319347A1 (de) Arzneimittel zur verstaerkung der therapeutischen wirkung von antitumormitteln und deren verwendung
US20080090848A1 (en) Substituted Purinyl Derivatives With Immunomodulator And Chemoprotective Activity And Use Alone Or With Medium-Chain Length Fatty Acids Or Glycerides
EP1515750B1 (en) Combinations comprising epothilones and pharmaceutical uses thereof
TW201249435A (en) Antitumoral combination comprising cabazitaxel and cisplatin
TW202011946A (zh) 以bet抑制劑及蛋白酶體抑制劑之組合療法
DE69408394T2 (de) 4-Piperidino-piperidin zur Behandlung von Tumoren
EP3782620B1 (en) Pharmaceutical composition comprising 1,2-naphthoquinone derivative for use in preventing or treating acute myeloid or lymphoblastic leukemia
US20080025984A1 (en) Combination Therapy Comprising Cloretazine
TW201311234A (zh) 抗癌劑副作用改善用組成物
De Rosa et al. Therapy of ‘high risk’myelodysplastic syndromes with an association of low-dose Ara-C, retinoic acid and 1, 25-dihydroxyvitamin D3
DE60313344T2 (de) Verwendung von 4-pyridylmethyl-phthalazin-derivaten zur herstellung eines medikaments zur behandlung von myelodysplastischen syndromen
Zhao et al. Composition containing artesunate
EP0874630B1 (en) Topoisomerase ii poison and bis-dioxypiperazine derivative combination therapy
DE60316775T2 (de) Kombinationspräparat aus epothilone derivate und imidazotetrazinone
US6265385B1 (en) Topoisomerase II poison and bis-dioxopiperazine derivative combination therapy
WO2016073733A1 (en) Methods of treating cancer using lipopeptides

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Vicram Matthews

Inventor after: Sangiev Krishna

Inventor after: Yolanda Sidney Augustine

Inventor before: Vicram Matthews

Inventor before: Sangiev Krishna

CB03 Change of inventor or designer information
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20201023

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication