CN111812231B - 一种分离检测食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法 - Google Patents

一种分离检测食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种分离检测食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法，包括使用水与样品充分混合，去除不溶物和蛋白质，微滤膜过滤，之后进行HPLC分析。本发明的一些实例，前处理工艺简单，后续的分离操作可以有效将结构和物理特性极其接近的蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖高效分离，进而得以准确检测。建立了蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖/异麦芽酮糖醇同时检测的液相色谱方法，样品前处理简单，方法快捷，灵敏度高，回收率高，方法的线性范围宽，相关系数好，检出限低，适用性良好，填补了国内外蔗糖/异麦芽酮糖醇、异麦芽酮糖/异麦芽酮糖醇同时检测的空白，大大提高了食品检测中的工作效率。

Description

一种分离检测食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法
技术领域
本发明食品分析领域，具体涉及一种分离检测食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法。
背景技术
异麦芽酮糖醇(Isomalt)，亦称帕拉金糖醇(Palatinit)、益寿糖，由等分子的6-O-α-D-吡喃葡萄基-D-山梨醇(GPS)和1-O-α-D-吡喃葡萄基-D-甘露醇(GPM)混合组成。其不仅具有甜味纯正、热值低、吸湿性低、安全性高和不致龋齿等优异性质，而且其在体内的代谢不依赖于胰岛素，可供高血糖、糖尿病及肥胖人群食用。因此，异麦芽酮糖醇被认为是蔗糖的“理想替代品”，在食品、制药及化工等领域拥有巨大的应用潜力和市场前景。
目前用于食品中的异麦芽酮糖醇是通过重排将蔗糖转化为异麦芽酮糖(α-D-吡喃葡萄糖基-1,6-果糖)，然后通过氢化将上述纯化的异麦芽酮糖转化为异麦芽酮糖醇。在此工艺中，蔗糖不会完全转化为异麦芽酮糖，同样异麦芽酮糖也不会完全转化为异麦芽酮糖醇，始终可以检测到痕量。有效分离并检测异麦芽酮糖醇中的异麦芽酮糖和蔗糖杂质，是检测确定异麦芽酮糖醇纯度的关键所在。
此外，不同国家对异麦芽酮糖醇的不同要求和食品标签强制性标准的施行，以及进一步监督食品生产，预防不法商贩利用异麦芽酮糖醇的低热值、低糖等优点，达到某种营养指标，对食品进行非法添加，所以对食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖/异麦芽酮糖醇的分离、检测也具有非常实际的意义。然而，蔗糖、异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖的结构近似，分子量相差也不大，分离的难度较大，导致其杂质检测存在一定的难度。
开发出一种有效的分离、检测蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法，具有非常实际的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种分离检测食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种检测样品中蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖的方法，包括如下步骤：
S1)将样品分散在去离子水中，超声处理，得到样液；
S2)去除样液中的不溶物，得水溶液；
S3)将水溶液使用滤膜过滤，滤液即为待测液；
S4)取待测液进行高效液相色谱分析，色谱条件为：采用Waters Sugar PakI柱作为HPLC色谱柱，其规格为6.5×300mm×5μm，流动相为去离子水，流速为0.5mL/min，柱温为70℃；检测器选用时差折光检测器。
在一些实例中，超声处理的时间为10～50min。
在一些实例中，所述滤膜为孔径为0.2μm～0.45μm滤膜。
在一些实例中，通过离心使不溶物沉淀来去除不溶物。
在一些实例中，所述离心的转速为5000～8000rpm。
在一些实例中，所述离心的时间为5min～10min。
在一些实例中，待测液的制备方法为：称取样品5.00～20.00g，加去离子水溶解，超声处理，混合摇匀，最后加入水定容至50mL，混匀后，离心机离心8 000r/min，5min，取上清，用0.45μm滤膜过滤，滤液供检测。
在一些实例中，还包括蔗糖、异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖标准曲线的确定。
在一些实例中，蔗糖、异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖标准曲线的确定包括：
S01)分别准确称取蔗糖、异麦芽酮糖、异麦芽酮糖醇各0.1250g于100mL烧杯中，用
少量超纯水溶解，超声波震荡2min，过0.45μm水相滤膜并转移至25mL容量瓶，定容
至刻度，配制成5.0mg/mL的单一标准溶液；
S02)用移液器分别精确吸取0.02mL，0.06mL，0.1mL，0.8mL，1.6mL，2.00mL，0.25mL，
5.00mL于10mL容量瓶中，再分别以超纯水定容到刻度，得到0.010mg/mL，0.030mg/mL，
0.050mg/mL，0.400mg/mL，0.800mg/mL，1.000mg/mL，2.500mg/mL的标准品液；
S03)取标准品液进行高效液相色谱分析，色谱条件为：采用Waters Sugar PakI柱作为
HPLC色谱柱，其规格为6.5×300mm×5μm，流动相为去离子水，流速为0.5mL/min，柱
温为70℃；检测器选用时差折光检测器，按浓度mg/L与色谱峰面积之间的关系绘制标
准曲线。
在一些实例中，高效液相色谱分析时的进样量为10μL。
本发明的有益效果是：
本发明的一些实例，前处理工艺简单，后续的分离操作可以有效地将物理特性极其接近的蔗糖/异麦芽酮糖醇，或异麦芽酮糖醇/异麦芽酮糖高效分离，进而得以准确检测。
本发明的一些实例，建立了蔗糖/异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖/异麦芽酮糖醇检测的液相色谱方法，样品前处理简单，方法快捷，灵敏度高，回收率高，方法的线性范围宽，相关系数好，检出限低，适用性良好，填补了国内外蔗糖/异麦芽酮糖醇、异麦芽酮糖/异麦芽酮糖醇同时检测的空白，大大提高了食品检测中的工作效率。
附图说明
图1是各单标的定量标准曲线；
图2是食品中蔗糖/异麦芽酮糖醇高效液相色谱图；
图3是食品中异麦芽酮糖/异麦芽酮糖醇高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。
材料，试剂与仪器：
本发明所设计的样品与试剂：
样品：糖果，饼干，牛奶；
试剂：蔗糖，异麦芽酮糖，异麦芽酮糖，去离子水，均为分析纯。
实施例1、三种单标溶液的配制
将5mg/mL的各种单标溶液的浓度依次稀释为2.50mg/mL，1.00mg/mL，0.80mg/mL，0.40mg/mL，0.05mg/mL，0.03mg/mL，0.01mg/mL，分别在确定最佳分离条件下进行检测，根据峰面积(Y)与对应糖和糖醇的浓度(X)进行线性回归，可得到3种糖、糖醇的标准曲线、标准曲线方程、线性范围，并将浓度不断稀释，当信噪比为3时，确定每种糖或糖醇标准溶液的检出限，具体结果见表1。
表1三种物质的标准曲线方程、线性、线性相关系数及检出限
Figure BDA0002559258840000031
各单标的定量标准曲线如图1所示。
实施例2：超声时间的确定
超声时间的长短应能够保证样品在此时间内均释放出95％以上的糖和糖醇。通常，液体和半固体食品，所需超声时间应比固体食品短，选用糖果为模型。
称取一定质量的糖果，用1000mL超纯水稀释，超声5min、10min、20min、30min、40min、50min时，分别取10mL溶液，经0.22μm尼龙滤膜，取滤液供高效液相色谱分析，计算糖果在对应超声时间溶出的糖或糖醇的质量。
结果显示，超声30min之后，糖或糖醇的溶出量不再增加，可以认为，此时糖果中糖或糖醇已全部溶出。所以，选择超声30min作为糖或糖醇的超声提取时间。
实施例3：样品中异麦芽酮糖醇和蔗糖的分离检测
样品前处理：称取约0.1g样品于小烧杯中，用去离子水约5mL超声30min溶解样品后转移到10mL容量瓶中，加去离子水定容到刻度，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液约2mL，用0.45μm微孔滤膜过滤到样品瓶子中，待上机测定；
上机分离检测：设定色谱条件，色谱柱：Waters Sugar PakI(6.5×300mm×5μm)，流动相为超纯水，流速为0.5mL/min，柱温为70℃；检测器选用时差折光检测器，进样量为10μl。将上述样品瓶置于自动进样盘中进行分离检测。
检测结果如图2所示：异麦芽酮糖醇和蔗糖完全分离。
实施例4：样品中异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖的分离检测
样品前处理：称取约0.1g样品于小烧杯中，用去离子水约5mL超声30min溶解样品后转移到10mL容量瓶中，加去离子水定容到刻度，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液约2mL，用0.45μm微孔滤膜过滤到样品瓶子中，待上机测定；
上机分离检测：设定色谱条件，色谱柱：Waters Sugar PakI(6.5×300mm×5μm)，流动相为超纯水，流速为0.5mL/min，柱温为70℃；检测器选用时差折光检测器，进样量为10μl。将上述样品瓶置于自动进样盘中进行分离检测。
检测结果如图3所示：异麦芽酮糖醇和异麦芽酮糖完全分离。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的包含范围之内。

Claims (5)

1.一种检测样品中蔗糖和异麦芽酮糖醇的方法，包括如下步骤：
S1)将样品分散在去离子水中，超声处理，得到样液；
S2)去除样液中的不溶物，得水溶液；
S3)将水溶液使用滤膜过滤，滤液即为待测液；
S4)取待测液进行高效液相色谱分析，色谱条件为：采用Waters Sugar PakI柱作为HPLC色谱柱，其规格为6.5×300mm×5μm，流动相为去离子水，流速为0.5mL/min，柱温为70℃；检测器选用示差折光检测器；超声处理的时间为10～50 min；所述滤膜为孔径为0.2μm～0.45μm滤膜；通过离心使不溶物沉淀来去除不溶物；所述离心的转速为5000～8000rpm；所述离心的时间为5 min～10 min。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：待测液的制备方法为：称取样品5.00～20.00 g，加去离子水溶解，超声处理，混合摇匀，最后加入水定容至50 mL，混匀后，离心机离心8 000 r/min，5 min，取上清，用0.45μm滤膜过滤，滤液供检测。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：还包括蔗糖和异麦芽酮糖醇标准曲线的确定。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：蔗糖和异麦芽酮糖醇标准曲线的确定包括：
S01）分别准确称取蔗糖和异麦芽酮糖醇各0.1250g于100mL烧杯中，用少量超纯水溶解，超声波震荡2min，过0.45μm水相滤膜并转移至25mL容量瓶，定容至刻度，配制成5.0mg/mL的单一标准溶液；
S02）用移液器分别精确吸取0.02mL，0.06mL，0.1 mL，0.8mL，1.6 mL，2.00 mL，5.00mL于10 mL容量瓶中，再分别以超纯水定容到刻度，得到0.010mg/mL，0.030 mg/mL，0.050mg/mL，0.400mg/mL，0.800mg/mL，1.000mg/mL，2.500mg/mL的标准品液；
S03）取标准品液进行高效液相色谱分析，色谱条件为：采用Waters Sugar PakI柱作为HPLC色谱柱，其规格为6.5×300mm×5μm，流动相为去离子水，流速为0.5mL/min，柱温为70℃；检测器选用示差折光检测器，按浓度mg/L与色谱峰面积之间的关系绘制标准曲线。
5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于：高效液相色谱分析时的进样量为10μL。
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