CN111808805A - 一种糖苷用于促进骨髓间充质干细胞体外增殖的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种糖苷用于促进骨髓间充质干细胞体外增殖的用途。甜菊醇‑19‑葡萄糖苷是一种广泛使用的天然来源的糖苷化合物。本发明发现，甜菊醇‑19‑葡萄糖苷具有体外促进hBMSCs增殖的作用，而且不会明显降低hBMSCs的干细胞特性。因此，甜菊醇‑19‑葡萄糖苷具有促进hBMSCs体外增殖的作用，具有开发成促进hBMSCs体外增殖的培养基的前景。

Description

一种糖苷用于促进骨髓间充质干细胞体外增殖的用途
技术领域
本发明属于医药领域，涉及干细胞，具体涉及一种甜菊醇-19-葡萄糖苷用于促进骨髓间充质干细胞体外增殖的用途。
背景技术
间充质干细胞凭其自我更新能力与多向分化潜能，目前已被广泛应用于组织工程与再生医学领域，来源广泛，体外易于操作，因此间充质干细胞治疗具有广阔前景，其中，人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)相对较早，研究也较为丰富。
由于hBMSCs的获得途径相对较为困难，细胞量不够，限制了其临床应用。因此，如何有效提高hBMSCs的体外增殖活性尤为重要。
甜菊醇-19-葡萄糖苷是一种广泛使用的天然糖苷，比如用作食品添加剂。甜菊醇-19-葡萄糖苷具有广泛的生物活性。但是没有其促进hBMSCs增殖的报道。
发明内容
本发明的意图在于提供一种糖苷用于促进骨髓间充质干细胞体外增殖的用途，所述糖苷为甜菊醇-19-葡萄糖苷，以提高体外扩增骨髓间充质干细胞的效率。
技术方案如下：
一种糖苷用于促进骨髓间充质干细胞体外增殖的用途，所述述糖苷为甜菊醇-19-葡萄糖苷。在具体实施方式中，不同浓度甜菊醇-19-葡萄糖苷可以有效促进骨髓间充质干细胞体外增殖，与对照组增殖率100％相比，0.1mg/mL、0.3mg/mL甜菊醇-19-葡萄糖苷的实验组的增殖率高达189.76％、317.82％。
一种糖苷用于制备促进骨髓间充质干细胞体外增殖的培养基的用途，所述述糖苷为甜菊醇-19-葡萄糖苷。
技术效果：
本发明通过研究发现，甜菊醇-19-葡萄糖苷具有体外促进hBMSCs增殖的作用，而且不会明显降低hBMSCs的干细胞特性。因此，甜菊醇-19-葡萄糖苷具有促进hBMSCs体外增殖的作用，具有开发成促进hBMSCs体外增殖的培养基的前景。
附图说明
图1为对照组和不同浓度实验组的OD值，不同浓度实验组的OD值均显著高于对照组。
图2为对照组和不同浓度实验组的增殖率，不同浓度甜菊醇-19-葡萄糖苷可以有效促进骨髓间充质干细胞体外增殖，与对照组增殖率100％相比，0.1mg/mL、0.3mg/mL甜菊醇-19-葡萄糖苷的实验组的增殖率高达189.76％、317.82％。
具体实施方式
下面通过具体实施例和附图介绍本发明的实质性内容，但不作为本发明保护范围的限制。
一、试验材料
人骨髓间充质干细胞购自赛业生物科技有限公司(来自于健康成年人的骨髓，传代扩增至第二代冻存，流式检测结果显示，CD29、CD44、CD105阳性，CD34、CD45阴性)，按照常规方法复苏后用于试验。
DMEM培养基、胎牛血清FBS和0.25％胰蛋白酶购自美国Gibco公司。
FITC或PE标记的小鼠抗人CD29、CD44、CD105、CD34和CD45抗体及各相关同型对照购自美国eBioscince公司。
MTT试验试剂购自碧云天。
甜菊醇-19-葡萄糖苷(CAS号：1185737-16-9)纯度≥98％。
二、试验方法
1、MTT法测定骨髓间充质干细胞体外增殖活性
取复苏后继续培养72h的hBMSCs，0.25％胰酶消化并调整细胞密度为5×104个/mL，接种于96孔板，每孔200μL，分为对照组及实验组，实验组更换为含不同浓度甜菊醇-19-葡萄糖苷(0.1mg/mL、0.3mg/mL，溶媒为DMSO)的完全培养基，对照组更换为含等体积溶媒的完全培养基，对照组和实验组的各浓度均分别设置5个平行复孔，继续培养48h后，每孔加入20μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，培养4h，去上清液，加入150μL DMSO轻轻震荡，用酶标仪检测其在490nm处的吸光度(OD值)，通过OD值按照如下公式计算实验组hBMSCs增殖率，对照组hBMSCs增殖率计为100％。实验组增殖率＝实验组OD值/对照组OD值×100％。
2、流式法测定骨髓间充质干细胞的干细胞特性
取复苏后继续培养72h的hBMSCs，0.25％胰酶消化并调整细胞密度为1×106个/mL，接种于12孔板，每孔2mL，分为对照组及实验组，实验组更换为含不同浓度甜菊醇-19-葡萄糖苷(0.1mg/mL、0.3mg/mL，溶媒为DMSO)的完全培养基，对照组更换为含等体积溶媒的完全培养基，继续培养48h后，去上清液，PBS洗涤，收集细胞，制成1×106个/mL浓度的细胞悬液，每离心管中加入1mL细胞悬液，无菌PBS洗涤2次，1000×g离心5min，弃上清，100μL PBS重悬细胞后，向各管单细胞悬液中加入适量CD29、CD44、CD105、CD34、CD45抗体以及各同型对照，室温避光孵育30min，1000×g离心5min，PBS洗涤2次，加入500μL PBS重悬，制成单细胞悬液，流式细胞仪检测。
3、统计学分析
采用SPSS 17.0统计学软件分析所有数据并以均数±标准差(mean±SD)表示。两组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。
三、试验结果
1、骨髓间充质干细胞体外增殖活性测定结果
对照组和不同浓度实验组的OD值如表1和图1～2所示，不同浓度实验组的OD值均显著高于对照组，不同浓度甜菊醇-19-葡萄糖苷可以有效促进骨髓间充质干细胞体外增殖，与对照组增殖率100％相比，0.1mg/mL、0.3mg/mL甜菊醇-19-葡萄糖苷的实验组的增殖率高达189.76％、317.82％。
表1对照组和不同浓度实验组的OD值和增殖率
Figure BDA0002590705820000031
2、骨髓间充质干细胞的干细胞特性测定结果
对照组和不同浓度实验组的流式细胞仪检测结果如表2所示，不同浓度实验组的骨髓间充质干细胞表面的各标记表达水平与对照组基本一致，符合hBMSCs的表面标记特点。该结果表明，甜菊醇-19-葡萄糖苷在促进hBMSCs增殖的同时不会降低其干细胞特性。
表2对照组和不同浓度实验组的流式细胞仪检测结果
Figure BDA0002590705820000032
综上可见，甜菊醇-19-葡萄糖苷具有体外促进hBMSCs增殖的作用，而且不会明显降低hBMSCs的干细胞特性。因此，甜菊醇-19-葡萄糖苷具有促进hBMSCs体外增殖的作用，具有开发成促进hBMSCs体外增殖的培养基的前景。
上述实施例和附图用于具体介绍本发明的实质性内容，但不作为本发明保护范围的限制。

Claims (2)

1.一种糖苷用于促进骨髓间充质干细胞体外增殖的用途，其特征在于：所述述糖苷为甜菊醇-19-葡萄糖苷。
2.一种糖苷用于制备促进骨髓间充质干细胞体外增殖的培养基的用途，其特征在于：所述述糖苷为甜菊醇-19-葡萄糖苷。
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