CN111781042B - 一种附红细胞体检测试剂盒及样品处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种附红细胞体检测试剂盒及样品处理方法，属于附红细胞体检测检测技术领域。试剂盒包括洗涤液和增殖液；洗涤液成分如下：氯化钠7‑9g/L，磷酸氢二钠0.05‑0.2g/L，磷酸二氢钾0.05‑0.1g/L，氯化钾0.3‑0.5g/L，葡萄糖0.8‑1.2g/L；配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7.2‑7.5；增殖液以RPMI1640与胎牛血清1:1体积比混合液为基础，添加0.1mg/L亚硒酸钠。本发明试剂盒用于待检测血液样品的处理，方法简单，可保证阳性病料的快速、准确检出，适于临床使用。

Description

一种附红细胞体检测试剂盒及样品处理方法
技术领域
本发明涉及附红细胞体检测技术领域，更具体的说是涉及一种附红细胞体检测试剂盒及样品处理方法。
背景技术
附红细胞体是一种能够寄生于血液中的病原体，可引起以溶血性贫血、黄疸和发热为主要症状的人兽共患传染病。
临床上附红细胞体的检测通常为取血样进行镜检，然而，镜检时阳性患畜的样本并不一定能够观察到附红细胞体，若仅通过红细胞变形进行判断，很容易受到操作中红细胞机械损伤的干扰，进而造成假阳性的检测结果。
因此，如何提高附红细胞体镜检的准确性是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种附红细胞体检测试剂盒及样品处理方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种附红细胞体检测试剂盒，包括洗涤液和增殖液；
洗涤液成分如下：
氯化钠7-9g/L，磷酸氢二钠0.05-0.2g/L，磷酸二氢钾0.05-0.1g/L，氯化钾0.3-0.5g/L，葡萄糖0.8-1.2g/L；配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7.2-7.5；
增殖液以RPMI1640与胎牛血清1:1体积比混合液为基础，添加0.1mg/L亚硒酸钠。
本发明试剂盒中的洗涤液用于对待测样品红细胞进行洗涤，洗涤后的红细胞于增殖液中进行短时间增殖，可提高镜检时附红细胞体的检出率；进而避免通过红细胞形态进行判断的诸多干扰。
增殖液以RPMI1640与胎牛血清1:1体积比混合液为基础，添加亚硒酸钠，可保证附红细胞体的快速增殖，并且减少细胞的溶血。
优选地，洗涤液成分如下：
氯化钠8g/L，磷酸氢二钠0.1g/L，磷酸二氢钾0.08g/L，氯化钾0.4g/L，葡萄糖1.0g/L；配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7.2-7.5。
优选地，还包括阴性红细胞，阴性红细胞的附红细胞体检测为阴性，于阿氏液中保存。
阴性红细胞的添加也有利于避免过早出现溶血。
一种附红细胞体检测样品处理方法，包括如下步骤：
(1)取家畜抗凝血，离心去上清，加入权利要求1中的洗涤液洗涤离心1-2次，获得待检红细胞；
(2)对保存于阿氏液中的阴性红细胞离心去上清，获得阴性红细胞；离心步骤于步骤(1)最后一次离心同时进行；
(3)步骤(1)中洗涤离心完毕后立即将待检红细胞与阴性红细胞混合，加入权利要求1中的增殖液，得到细胞悬液；
(4)将步骤(3)获得的细胞悬液置于37℃、5％CO2条件下恒温培养1-2h，获得可以直接用于附红细胞体镜检的样品。
优选地，步骤(3)中待检红细胞与阴性红细胞以2:1体积比混合。
适宜的待检红细胞与阴性红细胞比例在避免溶血的同时保证1-2h内获得适于镜检的增殖量。
优选地，步骤(3)增殖液的用量为待检红细胞与阴性红细胞总体积的6-7倍。
由上述技术方案可知，本发明试剂盒用于待检测血液样品的处理，方法简单，可保证阳性病料的快速、准确检出，适于临床使用。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种附红细胞体检测试剂盒，包括洗涤液，增殖液和阴性红细胞。
洗涤液成分如下：
氯化钠8g/L，磷酸氢二钠0.1g/L，磷酸二氢钾0.08g/L，氯化钾0.4g/L，葡萄糖1.0g/L；配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7.2-7.5。
增殖液以RPMI1640(Gibco，无丙酮酸钠，C22400500BT，500mL)与胎牛血清1:1体积比混合液为基础，添加0.1mg/L亚硒酸钠。
阴性红细胞为兔红细胞，附红细胞体检测为阴性，于阿氏液中保存。
实施例2
一种附红细胞体检测试剂盒，包括洗涤液，增殖液和阴性红细胞。
洗涤液成分如下：
氯化钠7g/L，磷酸氢二钠0.2g/L，磷酸二氢钾0.1g/L，氯化钾0.5g/L，葡萄糖0.8g/L；配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7.2-7.5。
增殖液以RPMI1640与胎牛血清1:1体积比混合液为基础，添加0.1mg/L亚硒酸钠。
阴性红细胞为兔红细胞，附红细胞体检测为阴性，于阿氏液中保存。
实施例3
一种附红细胞体检测试剂盒，包括洗涤液，增殖液和阴性红细胞。
洗涤液成分如下：
氯化钠9g/L，磷酸氢二钠0.05g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，氯化钾0.3g/L，葡萄糖1.2g/L；配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7.2-7.5。
增殖液以RPMI1640与胎牛血清1:1体积比混合液为基础，添加0.1mg/L亚硒酸钠。
阴性红细胞为兔红细胞，附红细胞体检测为阴性，于阿氏液中保存。
实施例4
一种附红细胞体检测样品处理方法，包括如下步骤：
(1)取家畜抗凝血，离心去上清，加入实施例1洗涤液洗涤，2000r/min离心5min后去上清，再重复洗涤离心一次，获得待检红细胞；
(2)对保存于阿氏液中的阴性红细胞2000r/min离心5min去上清，获得阴性红细胞；离心步骤于步骤(1)最后一次离心同时进行；
(3)步骤(1)中洗涤离心完毕后立即将待检红细胞与阴性红细胞以2:1体积比混合，加入实施例1中的增殖液，得到细胞悬液；增殖液的用量为待检红细胞与阴性红细胞总体积的6.5倍；
(4)将步骤(3)获得的细胞悬液置于37℃、5％CO2条件下恒温培养2h，获得可以直接用于附红细胞体镜检的样品。
实施例5
取经过实施例4方法处理的样品0.2mL，加入2mL生理盐水混匀后，取50μL，制成悬滴标本，于40-100倍显微镜下观察。
以未经过实施例4方法处理的样品作为对照组一，取抗凝血0.2mL，加入2mL生理盐水混匀后，取50μL，制成悬滴标本，于40-100倍显微镜下观察附红细胞体，可观察到附红细胞体则记为阳性，否则为阴性。
同时，对每个样品进行Elisa检测。
此外，在实施例4的基础上对试剂盒进行调整，增殖液替换为RPMI1640与胎牛血清6:4体积比混合液；并且步骤(4)培养时间替换为4h，作为对照组二进行样品处理和检测。
实验结果如表1所示。
表1
样品 实施例4组 对照组一 对照组二 ELisa检测组
1 - - - -
2 - - - -
3 + - + +
4 - - - -
5 + + + +
6 + - - +
7 - - - -
8 + - + +
9 - - - -
10 + + + +
表中“+”为阳性，“-”为阴性。
进一步地，使用本发明试剂盒和样品处理方法可观察附红细胞体形态，附红细胞体在液体中的运动，附红细胞体吸附、感染红细胞的动态过程。也可以进行染色观察，观察效果更佳。
本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (1)

1.一种附红细胞体检测样品处理方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取家畜抗凝血，离心去上清，加入洗涤液洗涤离心1-2次，获得待检红细胞；
(2)对保存于阿氏液中的阴性红细胞离心去上清，获得阴性红细胞；离心步骤于步骤
(1)最后一次离心同时进行；
(3)步骤(1)中洗涤离心完毕后立即将待检红细胞与阴性红细胞混合，加入增殖液，得到细胞悬液；
(4)将步骤(3)获得的细胞悬液置于37℃、5％CO2条件下恒温培养1-2h，获得可以直接用于附红细胞体镜检的样品；
步骤(3)中待检红细胞与阴性红细胞以2:1体积比混合；
步骤(3)增殖液的用量为待检红细胞与阴性红细胞总体积的6-7倍；
附红细胞体检测试剂盒包括洗涤液和增殖液；
所述洗涤液成分如下：
氯化钠7-9g/L，磷酸氢二钠0 .05-0 .2g/L，磷酸二氢钾0 .05-0 .1g/L，氯化钾0 .3-0.5g/L，葡萄糖0 .8-1 .2g/L；配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7 .2-7 .5；
所述增殖液以RPMI1640与胎牛血清1:1体积比混合液为基础，添加0 .1mg/L亚硒酸钠；
配置好后使用碳酸氢钠调节pH至7 .2-7 .5；
还包括阴性红细胞，所述阴性红细胞的附红细胞体检测为阴性，于阿氏液中保存。
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