SU709062A1 - Способ определени лизосомального катионного белка лейкоцитов - Google Patents

Description

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в лабораторной практике для оценки функционального состояния лейкоцитов.

Известен способ определения лизо- 5 сомального катионного белка лейкоцитов путем приготовления мазка крови, его фиксации, окрашивания, высушивания, микроскопирования и определения . количества белка по степени интенсивности окраски (1J. Однако известный способ не обеспечивает высокой точности определения, так как возможно побочное диффузное окрашивание других клеточных элементов. 1Целью изобретения является повышение точности путем устранения диффузного окрашивания других клеточных элементов.

Эта цель достигается тем, что Фик-2< сацию проводят в парах формалина концентрации 8-10% при pH 8,1-8,2, окрашивание осуществляют прочным зеленым . FSF при концентрации красителя 0,01--0,05 мг в 1 М трис-буфере и непосред-^³ ственно по окончании его проводят ок-’ рашивание сафранином при концентрации 0,01-0,02%.

Способ осуществляют следующим образом. ^:

Приготавливают равномерно тонкий мазок из небольшой капли' свёжевзятой капиллярной крови после прокола пальца у человека или других частей тела у животных. Высушенные на воздухе при комнатной температуре мазки помещают на подставке вертикально в эксикатор и фиксируют в., парах. 8-10%-ного формалина при pH 8,1-8,2, который приготавливают из нейтрального 10%ного формалина путем добавления 0,1Н. раствора КОН в количестве, позволяющем довести pH до 8,1-8,2. Фиксированные мазки выветривают путем высушивания на воздухе не менее 5-10 мин, после чего проводят окрашивание в течение 3-4 мин анионным красителем — .прочным зеленым FSF, в 1 М трисбуфере. при концентрации в пределах .0,01-0,05% (10-50 мг сухого вещества в 100 мл 1М трис-бефере) строго при pH 8,1-8,15, что поддерживают добавлением в раствор., минимальных количеств (в каплях) 0,1 Н. раствора КОН, после чего, минуя операцию промывания, проводят операцию докрашивания в течение 15 с последовательно по 5 с в трех порциях водного раствора сафронина при концентрации 0,010,02%. Фиксацию, окрашивание и докра3 цвета с большим количеством крупных гранул от темно-зеленого, преимущественно фиолетового, и темно-фиолетового цвета в цитоплазме;

базофилы обычной Формы с типичным 5 ядром розового и ярко-розового цвета со значительным количеством гранул зеленого цвета в цитоплазме;

нейтрофильные лейкоциты выделяются на общем Фоне клеток по содержанию большого количества мелких и более крупных гранул от светлого до темнозеленого цвета,с хорошо выраженной структурой ядра, окрашенного в бледнорозовый цвет, в незрелых юных клетках 5 в более насыщенные розовые тона до ярко-красного по мере их созревания.

Получение четких контрастных гранул от'светло-зеленого до темно-зеленого и Фиолетового цвета на Фоне хорошо выраженной морфологической структуры ядра й' клетки в целом, позволяет дать количественную характеристику содержания катионного белка. В зависимости от степени зрелости й функционального состояния лейкоцитов меняется и цветовая Окраска лизосомальных гранул,определяемых количественным содержанием в них катионного белка,что позволяет группировать окрашенные, лейкоциты, по различным степеням,. (0,1, II,III,IV, V) при подсчете в 100 лейкоцитах и оценивать принципом Kaplo.w с выведением среднеарифметического показателя, процентным отношением клеток с различной степенью, также графически гистограммой.

Предлагаемый способ обеспечивает’ высокую точность определения, техни- . ческуго простоту и быстрое исполнение в лабораторных условиях, не требующих сложного оборудования.

Предлагаемый способ позволит улучшить диагностику, своевременно назначить правильное лечение, что значительно сократит, в среднем до 10 дней, пребывание больного в больнице.

шивание проводят при 20-24°С, Окрашенные мазки высушивают и микроскопируют под иммерсией светового микроскопа. При этом высушенные мазки хорошо сохраняют свою первоначальную окраску в течение 6 и более месяцев, что позволяет проводить повторные исследования для сравнения и контроля.

При мер. В условиях клиники, родильного отделения, амбулаторно- 1 поликлинического обслуживания, в школьно-дошкольных учреждениях при предварительном врачебном осмотре и одновременном общеклиническом исследовании крови выборочно проводились 1 .исследования предлагаемым способом у 125 здоровых и 117 больных различными заболеваниями в возрасте от 1 дня жизни до 40 лет. Взятие крови проводилось путем прокола пальца, а 2 у 7 больных с диагностической целью брался пунктат костного мозга путем стернальной пункции. Из крови и костного мозга готовили мазки. Высушенные мазки на подставке помещали в эк- j сикатор, насыщенный парами 10%-ного Формалина, который добавлением 0,1 н. КОН доводили до pH — 8,1-8,2. Фиксацию мазков проводили в течение 5 мин, после чего фиксированные мазки вывет- , ривали на воздухе в течение 5-10 мин, Фиксацию и последующие операции окрашивания проводили при комнатной температуре 20-24°С. Краситель, прочный зеленый FSF. в количестве 50 мг сухого _ вещества растворяли в 100 мп 1 И трис-^5 буфере с добавлением по каплям.минимальных количеств. 0,1 н. КОН строго до pH 8,1. Окрашивание фиксированных и просушенных мазков проводили погружением в красящий раствор на 3 мин,' ‘40 после чего мазки без промывания погружали последовательно в три сменных раствора сафранина.' 0,01 %-ного, ' приготовленного путем растворения 10 мг сухого вещества в 100 мГ дистиллиро- 45 ванной вода, докрашивание в каждой смене раствора сафранина проводили по 5 с. Окрашенные мазки высушивали и микроскопировали под иммерсией. дл

Claims (2)

1. шивание провод т при 20-24°С, Окрашенные мазки высушивают и ми-кроскопируют под иммерсией светового микро скопа. При этом высушенные мазки хорошо сохран ют свою первоначальную окраску в течение б и более мес цев, что позвол ет проводить повторные исследовани  дл  сравнени  и контрол . При мер. В услови х клиники, родильного отделени , амбулаторно поликлинического обслуживани , в школьно-дошкольных учреждени х при предварительном врачебном осмотре и одновременном общеклиническом исследовании крови выборочно проводились .исследовани  npeanaraeNSJM способом у 125 здоровых и 117 больных различными заболевани ми в возрасте от 1 дн  MiSHii до 40 лет. Вз тие крови проводилось путем прокола пальца, а у 7 больных с диагностической целью бралс  пунктат костного мозга путем стерналь-ной пункции. Из крови и кост ного мозга готовили мазки. Высушенные маз-ки на подставке помещали в эк сикатор, насытенЕ ый парами 10%-ного Формалина, который добавлением 0,1 н КОП доводили до рН - 8,1-8,
2. 2. Фиксацию мазков проводили в течение 5 мин после чего фиксированные мазки вывет ривали на воздухе в течение 5-10 мин . фиксацию и последую 1ие операции окоа шивани  проводили при комнатной температуре 2 О -2 4 С. Краситель прочный зеленый PSF, в количестве 50 мг сухог вещества раствор ли в 100 мл 1 М три буфере с .добавлением по капл м.минимальных количеств. 0,1 н. КОН строго рН 8,1. Окрашивание фиксированных и просушенных мазков проводили погруг жением в крас щий раствор на 3 мин, после чего мазки без прогиывани  погр жали последовательно в три сменных раствора сафранина 0|.01%-ного, приго товленного путем растворени  10 мг сухого вещества в 100 мГ дистиллированной во,цы, докрш ивание з каждой .смене раствора сафранина проводили ПО 5 с. Окрашенные мазки высуши вали и микроскопиров-али под иммерсией . В поле зрени  обычного светового микроскопа под масл ной иммерсией полученные предлагаемым способом мазки к-рози и костного мозга выгл д  следующим образом: эритроциты тусклого светло-розово го цвета обычной Формы; лимфоциты и моноциты -характериой присущей им формы с хорошо .енной клеточной структурой с бледнорозовой цитоплазмой и  рко-розовым  д;эом, лишенные катионного белка эозинофилы обычной формы, с харак терным типичным  дром  рко-розового цвета с большим количеством крупных гранул от темно-зеленого, преимущественно фиолетового, и темно-фиолетового цвета в цитоплазме; базофилы обычной Формы с типичным  дром розового и  рко-розового цвета со значительным количеством гранул зеленого цвета в цитоплазме; нейтрофильные лейкоциты выдел ютс  на общем фоне клеток по содержанию большого количества мелких и более крупных гранул от светлого до темнозеленого цвета, с хорошо выраокенной структурой  дра, окрашенного в бледнорозовый цвет, в незрелых юных клетках в более насыщенные розовые тона до  рко-красного по мере их созревани . Получение четких контрастных гранул отсветло-зеленого до темно-зеленого и Фиолетового цвета на Лоне хорошо выраженной морфологической структуры  дра и клетки в целом, позвол ет дать количественную характеристику содержани  катиониого белка. В зависимости от степени зрелости и функционального состо ни  лейкоцитов мен етс  и цветова  окраска лизосомальных гранул,определ емых количественным содержанием в них катионного белка,что позвол ет группировать окраиюнные. лейкоциты, по различным степен м,. (О,I, II,III,IV, V) при подсчете в 100 лейкоцитах и оценивать принципом Kaplo.w с выведением среднеарифметического показател , процентным отношением клеток с различной степенью, также графически гистограммой. Предлагаег ий способ обеспечивает высокую точность определени , техни- . :ческуго простоту и быстрое исполнение в лабораторных услови х, не требующих сложного оборудовани . Предлагаемый способ позволит улучшить диагностику, своевременно назначить правильное лечение, что значительно сократит, в среднем до 10 дней, пребывание больного в больнице. Формула изобретени  Способ определени  лизосомального катионного белка лейкоцитов путем приготовлени  мазка крови, его фиксащии, окрашивани , высушивани , микроскопировани  и определени  количества белка по степени интенсивности окраски, отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности путем устранени  диффузного окрашивани  друг-их клеточных элементов, фиксацию провод т в парах формалина концентрации 8-10% при рН 8,1-8,2, окрашивание осуществл ют прочным зеленым FSF при концентрации красител  0,01-0,05 мг в IМ трис-буфера и непосредственно

   57090626

   ПО окончании его провод т окрашива-Источники информации,

   ние сафранином при концентрации 0,01- прин тые во внимание при экспертизе

   0,02%. Архив патологии, 38, 5, с.55-59.