CN111771450A - 一种南方红豆杉种子低温保存工艺 - Google Patents

一种南方红豆杉种子低温保存工艺 Download PDF

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A01C1/08—Immunising seed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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Abstract

本发明公开了一种南方红豆杉种子低温保存工艺，所述工艺基本步骤如下：择优树采种，将采后种子冲洗完假种皮后暴晒2～3日，然后入袋储藏，温度为4～5℃，放置7～9月，待自然回温打破其休眠，机械去壳后采用蒸馏水浸泡24h，多次换水直至种子内皮脱去，然后将处理好的种子置于无菌条件下，置于1％高锰酸钾溶液中浸泡消毒30min，然后用无菌水冲洗干净后移入冷冻管中，加入10％DMSO冷冻保护剂后封口，然后置于冰浴，采用250W超声波条件下浸泡处理10～15min，然后放入－16～‑18℃冷库预冻75min，处理完成后置于液氮中冷冻保存即可。所述工艺较之传统种子保存方法能进一步提升种子活力，极大提升TTC还原量，且保存时间更长，成本更低，具备更佳的经济效益和社会效益。

Description

一种南方红豆杉种子低温保存工艺
技术领域
本发明属于红豆杉培育繁殖领域，具体涉及一种南方红豆杉种子低温保存工艺。
背景技术
红豆杉，杉属植物，是世界上公认濒临灭绝的天然珍稀抗癌植物，也是我国国家一级保护植物，全世界只有11种，主要分布于东亚、北美洲及中国等地，我国有4种和1变种，均被证实含有新型抗癌药物紫杉醇及其类似物，故而药用、生物和经济价值极大，然而过往红豆杉由于其独特的材质优势而被滥砍滥伐，使得野生红豆杉种群遭受严重打击，加之在自然条件下红豆杉生长速度缓慢，再生能力差，使得成规模的天然原料林基地更加罕见，且红豆杉种子休眠期长，萌芽率和出苗率都较低，使得后续造林引种困难。尽管近年来，由于红豆杉的净化土地和观赏价值被逐渐发掘，使得人工种植红豆杉数量增加，但是野生红豆杉树木却仍然数量稀少，故而保存优质的红豆杉种质资源对红豆杉的育苗造林意义重大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种南方红豆杉种子低温保存工艺，以回应背景技术中所述问题。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其具体步骤如下：第一步：选择树龄在50～80年之间的无病虫害、生长健壮、结实率高的优树采种，将采收后的新鲜红豆杉种子冲洗完假种皮后暴晒2～3日，然后收进布袋储藏，温度为4～5℃，放置7～9个月备用。
第二步：取出需要低温保存的种子，自然回温打破其休眠后备用。
第三步：机械去壳后采用蒸馏水浸泡24h，多次换水直至种子内皮脱去。
第四步：将处理好的种子置于无菌条件下，置于1％高锰酸钾溶液中浸泡消毒30min后备用。
第五步：用无菌水将上述种子冲洗干净后移入冷冻管中，加入10％DMSO冷冻保护剂后封口，然后置于冰浴。
第六步：采用250W超声波条件下浸泡处理上述种子，时长为10～15min，然后放入－16～-18℃冷库预冻75～90min。
第七步：种子经上述步骤处理完成后置于液氮中冷冻保存即可。
进一步地，可选用PVS4冷冻保护剂代替DMSO冷冻保护剂。
进一步地，可选用75％酒精代替高锰酸钾溶液消毒。
进一步地，可选用沙存方法对去种皮后的红豆杉种子进行预处理，以替代袋装储存。
本发明的有益效果：所述保存工艺较之传统种子保存方法能进一步提升种子活力，极大提升TTC还原量，且保存时间更长，成本更低，且通过此类处理种子抗病虫害能力更强，后续育苗成活率更高，在保存优质的红豆杉种质资源的同时具备更佳的经济效益和社会效益。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
第一步：将采收后的新鲜红豆杉种子冲洗完假种皮后暴晒2日，然后收进布袋储藏，温度为4℃，放置9个月备用。
第二步：取出需要低温保存的种子，自然回温打破其休眠后备用。
第三步：机械去壳后采用蒸馏水浸泡24h，多次换水直至种子内皮脱去。
第四步：将处理好的种子置于无菌条件下，置于1％高锰酸钾溶液中浸泡消毒30min后备用。
第五步：用无菌水将上述种子冲洗干净后移入冷冻管中，加入10％DMSO冷冻保护剂后封口，然后置于冰浴。
第六步：采用250W超声波条件下浸泡处理上述种子，时长为10min，然后放入-18℃冷库预冻75min。
第七步：种子经上述步骤处理完成后置于液氮中冷冻保存即可。
实施例2
第一步：将采收后的新鲜红豆杉种子冲洗完假种皮后暴晒3日，然后收进布袋储藏，温度为5℃，放置8个月备用。
第二步：取出需要低温保存的种子，自然回温打破其休眠后备用。
第三步：机械去壳后采用蒸馏水浸泡24h，多次换水直至种子内皮脱去。
第四步：将处理好的种子置于无菌条件下，置于1％高锰酸钾溶液中浸泡消毒30min后备用。
第五步：用无菌水将上述种子冲洗干净后移入冷冻管中，加入10％DMSO冷冻保护剂后封口，然后置于冰浴。
第六步：采用250W超声波条件下浸泡处理上述种子，时长为15min，然后放入－16～℃冷库预冻90min。
第七步：种子经上述步骤处理完成后置于液氮中冷冻保存即可。
实施例3
第一步：将采收后的新鲜红豆杉种子冲洗完假种皮后暴晒3日，然后收进布袋储藏，温度为5℃，放置8个月备用。
第二步：取出需要低温保存的种子，自然回温打破其休眠后备用。
第三步：机械去壳后采用蒸馏水浸泡24h，多次换水直至种子内皮脱去。
第四步：将处理好的种子置于无菌条件下，置于1％高锰酸钾溶液中浸泡消毒30min后备用。
第五步：用无菌水将上述种子冲洗干净后移入冷冻管中，加入PVS4冷冻保护剂(配比为甘油：乙二醇：DMSO溶液2:1:1，经蔗糖MS脱氨液体培养基定容制备而成)后封口，然后置于冰浴。
第六步：采用250W超声波条件下浸泡处理上述种子，时长为15min，然后放入－16～℃冷库预冻90min。
第七步：种子经上述步骤处理完成后置于液氮中冷冻保存即可。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (8)

1.一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，所述工艺具体操作步骤如下：
第一步：选择树龄在50～80年之间的无病虫害、生长健壮、结实率高的优树采种，将采收后的新鲜红豆杉种子冲洗完假种皮后暴晒2～3日，然后收进布袋储藏，温度为4～5℃，放置7～9个月备用。
第二步：取出需要低温保存的种子，自然回温打破其休眠后备用。
第三步：机械去壳后采用蒸馏水浸泡24h，多次换水直至种子内皮脱去。
第四步：将处理好的种子置于无菌条件下，置于1％高锰酸钾溶液中浸泡消毒30min后备用。
第五步：用无菌水将上述种子冲洗干净后移入冷冻管中，加入10％DMSO冷冻保护剂后封口，然后置于冰浴。
第六步：采用250W超声波条件下浸泡处理上述种子，时长为10～15min，然后放入－16～-18℃冷库预冻75～90min。
第七步：种子经上述步骤处理完成后置于液氮中冷冻保存即可。
2.根据权利要求1所述的一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，进行低温保存的种子在暴晒处理结束后，含水量需控制在10～12％。
3.根据权利要求1所述的一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，所述成品红豆杉种子每粒约重7～8g。
4.根据权利要求1所述的一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，将种子移入冷冻管之前，需要采用滤纸充分吸干种子水渍，以防影响种子品质。
5.根据权利要求1所述的一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，冷冻前经预冻处理，可进一步提高种子成活率。
6.根据权利要求1所述的一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，所述冷冻保护剂由DMSO保护液经过蔗糖脱氨液体培养基按比制备。
7.根据权利要求1所述的一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，种子活力检测方法为定量氯化三苯基四氮唑还原法即(TTC法)。
8.根据权利要求1所述的一种南方红豆杉种子低温保存工艺，其特征在于，所述种子如需使用，可在37～40℃水浴中实现快速解冻。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN114557166A (zh) * 2022-03-16 2022-05-31 上海道和邦电子商务有限公司 一种农作物低温处理增产方法

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