CN100346695C - 一种蒲葵种子的保藏育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蒲葵种子的保藏育苗方法，先对种子进行灭菌、胚分离和脱水，然后将胚装入无菌的低温冻存管并置于液氮生物容器中，使低温冻存管快速降温。当需要幼苗时，将低温冻存管从液氮中取出，投入30～35℃的温水中，将温度恢复到室温。最后在培养皿内对胚进行培养，2～3个月即可成苗。本发明使蒲葵种子得以长期保存，其操作简便，成本低廉，种子存活率接近100%，成苗率在95%以上，具有良好的应用前景。同时，本发明的方法对其他顽拗性种子保藏技术的完善也具有积极的促进作用。
Description
技术领域
本发明属于植物种质资源保藏技术领域，具体涉及一种蒲葵种子的保藏育苗方法。
背景技术
蒲葵是棕榈科植物，原产于我国华南。蒲葵全身都是宝，其树干可做手杖、伞柄，叶片可用来制造葵扇、蓑衣、笠帽、提蓝，葵骨(中叶脉)可以制造扫帚、牙签等。蒲葵又是优良的纤维植物，可制绳索，叶柄外皮可以编织成葵花席。蒲葵的嫩芽可食用，果、叶和根皆可入药(据《中国高等植物图鉴》第五册科学出版社1976年)。又因树形优美，广泛用于园林造景、庭院观赏及用作行道树，是最受欢迎的室内外棕榈科扇形观赏树种。
目前，蒲葵的繁殖主要依靠采种育苗。蒲葵种子是典型的顽拗性种子，种子在母株上脱落时已经启动萌发，种子寿命短，其保藏历来是植物种质长期保藏的难点和研究重点。常规的保藏技术都因在保藏过程中种子生命力过快丧失而导致种子发芽率降低，失去使用价值。普遍认为，超低温贮藏可能是顽拗性种子长期保藏最有希望的途径，但现有技术中尚未见有成功的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对现有技术的不足，提供一种蒲葵种子长期保藏和育苗的方法，解决在保藏过程中蒲葵种子活力过快丧失的问题，使保藏后的蒲葵种子能够恢复生长，发育成正常幼苗，从而实现蒲葵种质资源的长期保藏。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现。
本发明提供了一种蒲葵种子的保藏育苗方法，该方法由以下步骤组成：
①保藏种子的采收：选择花后120～180天的果序，除去外果皮，收集种子并装入聚乙烯袋，在10℃～20℃条件下贮存备用；
②种子的灭菌：取备用的种子，先用70％～80％酒精浸泡1～3分钟，然后在0.05％～0.15％的升汞溶液中浸泡10～30分钟，再用无菌水漂洗4～6次，每次5～8分钟；
③胚的剥取：用枝剪从胚的两侧各剪一刀，再用解剖刀分离胚；
④脱水处理：按每15～25个胚90g～110g活化硅胶的比例，把蒲葵胚放入有盖的小盒内用硅胶脱水5～9小时，将胚的含水量降至10～15％，然后立即把胚装入无菌的低温冻存管，每管装15～20个胚；
⑤保藏：将装有胚的低温冻存管置于液氮生物容器中，使低温冻存管完全浸泡在液氮中快速降温，经常检查液氮生物容器中的液氮存量，及时补充丧失的液氮；
⑥当需要蒲葵幼苗时，将装有胚的低温冻存管从液氮容器中取出，投入30～35℃的温水中1～2分钟，将温度恢复到室温；
⑦育苗：以MS培养基为基盐，每升添加160～180mg磷酸二氢钠，25～35g蔗糖，0.1～0.2mg萘乙酸和0.1～0.3mg 6-苄基腺嘌呤和8～12g琼脂固定，在培养皿内装10～15ml培养基，对胚进行培养；设定温度30～35℃，保证每天16小时光照、8小时黑暗条件下进行培养，2～3个月可以成苗。
其中步骤②、③和④均在超净工作台上进行。
步骤1中备用的种子应在1～3周内进行步骤2所述的灭菌处理。
与现有技术相比，本发明所述的保藏育苗方法可以使蒲葵种子得以长期保存，保藏后的种子存活率接近100％，成苗率在95％以上，其操作简便，成本低廉，具有良好的应用前景。同时，本发明的方法对其他顽拗性种子保藏技术的完善也具有积极的促进作用。
具体实施方式
通过下面给出的具体实施例，可以进一步清楚地了解本发明。但它们不是对本发明的限定。
实施例1
选择花后160天的果序，此时内果皮已发育完全，外果皮绿色，种子达到生理成熟期，脱水耐性和超低温耐性最高，超低温保存容易成功。除去外果皮，收集种子后装入聚乙烯袋，在15℃条件下贮存备用，在1周内取备用的种子在超净工作台上进行灭菌处理，先用75％酒精浸泡2分钟，然后用0.1％的升汞溶液浸泡20分钟，再用无菌水漂洗5次，每次6分钟。用枝剪从胚的两侧各剪一刀，再用解剖刀分离胚。按每20个胚100g活化硅胶的比例，把蒲葵胚放入有盖的小铝盒内用硅胶脱水7小时，将胚的含水量降至12％，然后立即把胚装入无菌的低温冻存管，每管装20个胚；将装有胚的低温冻存管置于液氮生物容器中快速降温，经常检查液氮生物容器中的液氮存量，及时补充丧失的液氮。当需要蒲葵幼苗时，将冻存的胚从液氮容器中取出，投入30℃～35℃的温水中1～2分钟，快速将温度恢复到15℃。以MS培养基为基盐，每升添加170mg磷酸二氢钠，30g蔗糖，0.1mg萘乙酸和0.2mg 6-苄基腺嘌呤和10g琼脂固定，在直径5cm的培养皿内装12ml培养基，对胚进行培养；温度保持在30～35℃，每天16h光照、8h黑暗条件下进行培养，约两个月可以成苗。
实施例2
重复实施例1，有以下不同点：把蒲葵胚放入有盖的小盒内用硅胶脱水9小时，将胚的含水量降至10％。
实施例3
重复实施例1，有以下不同点：把蒲葵胚放入有盖的小盒内用硅胶脱水5小时，将胚的含水量降至15％。
实施例4
重复实施例1，有以下不同点：将冻存的胚从液氮容器中取出，投入温水中将温度恢复到20℃。
实施例5
重复实施例1，有以下不同点：将冻存的胚从液氮容器中取出，投入温水中将温度恢复到25℃。
实施例6
重复实施例1，有以下不同点：将冻存的胚从液氮容器中取出，投入温水中将温度恢复到30℃。
实施例7
重复实施例1，有以下不同点：选择花后120天的果序进行处理。
实施例8
重复实施例1，有以下不同点：选择花后140天的果序进行处理。
实施例9
重复实施例1，有以下不同点：选择花后180天的果序进行处理。
Claims (3)
1、一种蒲葵种子的保藏育苗方法，该方法由以下步骤组成：
①保藏种子的采收：选择花后120～180天的果序，除去外果皮，收集种子并装入聚乙烯袋，在10℃～20℃条件下贮存备用；
②种子的灭菌：取备用的种子，先用70％～80％酒精浸泡1～3分钟，然后在0.05％～0.15％的升汞溶液中浸泡10～30分钟，再用无菌水漂洗4～6次，每次5～8分钟；
③胚的剥取：用枝剪从胚的两侧各剪一刀，再用解剖刀分离胚；
④脱水处理：按每15～25个胚90g～110g活化硅胶的比例，把蒲葵胚放入有盖的小盒内用硅胶脱水5～9小时，将胚的含水量降至10～15％，然后立即把胚装入无菌的低温冻存管，每管装15～20个胚；
⑤保藏：将装有胚的低温冻存管置于液氮生物容器中，使低温冻存管完全浸泡在液氮中快速降温，经常检查液氮生物容器中的液氮存量，及时补充丧失的液氮；
⑥当需要蒲葵幼苗时，将装有胚的低温冻存管从液氮生物容器中取出，投入30～35℃的温水中1～2分钟后取出；
⑦育苗：以MS培养基为基盐，每升添加160～180mg磷酸二氢钠，25～35g蔗糖，0.1～0.2mg萘乙酸和0.1～0.3mg 6-苄基腺嘌呤和8～12g琼脂固定，在培养皿内装10～15ml培养基，对胚进行培养；设定温度30～35℃，保证每天16小时光照、8小时黑暗条件下进行培养，2～3个月后成苗。
2、根据权利要求1所述的保藏育苗方法，其特征在于：其中步骤②、③和④均在超净工作台上进行。
3、根据权利要求1所述的保藏育苗方法，其特征在于：步骤①中所述的种子的贮存备用时间为1～3周。
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Non-Patent Citations (3)
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| 棕榈植物种子贮藏和繁殖研究 何洁英.广东园林，第3期 2002 * |
| 蒲葵栽培管理技术 张朝鑫.山西开发，第3期 1995 * |
| 蒲葵的栽培方法 梁荣华.农业科技通讯，第7期 1974 * |
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