CN111744552B - 一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂及其制备方法与应用。所述制备方法为：(1)以溶液为反应介质，将硝酸铈、硝酸铜和均苯四甲酸在室温下反应得到双金属有机框架；(2)将双金属有机框架在空气氛围、200～400℃下煅烧1.5～3.5h，得到基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂，用于抑制食源性致病菌。本发明纳米酶杀菌剂是由双金属有机框架经过低温氧化衍生而成的二维片状准MOFs材料，具有生物酶样催化活性，同时低温氧化保持了MOFs的结构特点，提高了其稳定性，并增强了金属位点间的电子传递，结合双金属的协同催化效应，极大地增强了纳米酶的催化作用，达到高效杀菌的目的。

Description

一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂及其制备方法与 应用
技术领域
本发明属于食品杀菌领域，具体涉及一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂及其制备方法与应用。
背景技术
由于高发病率和高死亡率，食源性致病菌感染已成为世界范围内的医疗保健问题。食源性致病菌常存在于面包、剩饭、牛奶等营养丰富的食物中，人体误食或感染后通常会引起食物中毒、皮肤溃烂、免疫系统功能下降等危害，严重时甚至导致脑膜发炎和休克。食源性致病菌感染已成为全球公共卫生的最大威胁之一，每年折磨着数百万人，同时造成严重的经济损失。
许多传统且有效的杀菌方法已经广泛应用于食源性致病菌的抑制，如化学消毒剂(如ClO2，环氧乙烷)、非均相光催化技术(如ZnO，TiO2)、紫外杀菌技术和抗生素等，然而这些杀菌方法通常具有诸如杀菌不均匀、产生有害副产物、杀菌效率低、产生臭氧污染和发生多重抗药性等缺点。其中抗生素引起的细菌耐药性是普遍存在的问题。
羟基自由基(·OH)具有强氧化能力，对细菌表现出比双氧水(H2O2)更强的抗菌性能，近年来·OH已被广泛用于抗菌性能的研究。通过分解H2O2生成·OH不仅能提高抗菌性能，还能解决细菌耐药性的问题。为了促使H2O2快速而有效的分解，需要开发强的催化剂。
纳米酶是一类既有纳米材料的独特物理和化学性质，又有生物酶样活性的模拟酶。金属有机框架(MOFs)作为常见的纳米酶之一，是由有机配体和金属阳离子或簇连接而成的新型多孔纳米结构，具有高比表面积，高孔隙率和分散良好的活性中心。然而常规的MOFs材料结构较为疏松，在水溶液中伴随着金属离子的释放，仍具有稳定性不高、催化效果较差等缺点，无法达到有效的灭菌效果。
发明内容
为解决现有技术的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的制备方法，该方法操作简单，成本低，有望用于工业化生产。
本发明的另一目的在于提供上述方法制得的一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂，该纳米酶杀菌剂可以高效催化H2O2分解生成·OH。
本发明的再一目的在于提供上述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂用于抑制食源性致病菌。该纳米酶杀菌剂是由双金属有机框架经过低温氧化衍生而成的二维片状准MOFs材料，能催化H2O2分解成具有超强杀菌能力的·OH，同时低温氧化不仅保持了MOFs的结构特点，还提高了其稳定性，增强了金属位点间的电子传递，并结合双金属的协同催化效应，极大地增强了纳米酶的催化作用，达到高效杀菌的目的。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)以溶液为反应介质，将硝酸铈、硝酸铜和均苯四甲酸在室温下反应，离心，洗涤，干燥后得到双金属有机框架；
(2)将双金属有机框架在空气氛围、200～400℃下煅烧1.5～3.5h，得到基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂。
优选的，步骤(1)所述溶液为乙醇、甲醇和N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种。
优选的，步骤(1)所述硝酸铈和硝酸铜的摩尔比为3:1～1:3，所述均苯四甲酸的摩尔量与硝酸铈和硝酸铜总的摩尔量之比为1:2～2:1。
优选的，步骤(1)所述硝酸铈与溶液的比例为15～25mmol/L。
优选的，步骤(1)所述反应的时间为2～3h，更优选为2.5h。
优选的，步骤(1)所述反应在搅拌状态下进行，所述搅拌的转速为1000～1400rpm，更优选为1200rpm。
优选的，步骤(1)所述洗涤指反应产物用乙醇洗涤3～5次。
优选的，步骤(1)所述干燥的温度为55～65℃，时间为10～15h。
优选的，步骤(2)所述煅烧的温度为300℃，时间2.5h；更优选在管式炉中煅烧。
上述方法制得的一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂。
优选的，所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂为二维片状结构。
上述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用。
优选的，所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂用于抑制食源性致病菌。
优选的，所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，包括以下步骤：
将基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂和H2O2加入到含细菌的样品中，在室温及以上温度下杀菌3～5h。
更优选的，所述细菌菌种为金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌中的至少一种。
更优选的，所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂与H2O2的比例为45～55mg：5～15mmol；所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂与细菌量比例为：45～55μg：105～108CFU。
更优选的，所述含细菌的样品为溶液时，其细菌的含量为105～108CFU/mL。
更优选的，所述含细菌的样品为含菌溶液或含菌固体样品，当为含菌溶液时，可将基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂和H2O2直接加入其中；当为含菌固体样品时，可将基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂和H2O2混合后涂膜在样品表面或注射到样品内部。
更优选的，所述杀菌在震荡条件下进行，所述震荡的速度为120～200rpm。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
(1)本发明的基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂制备方法简单，无需复杂的仪器设备，成本低，有望用于工业化生产。
(2)本发明采用纳米酶作为杀菌剂，通过催化H2O2迅速有效的生成对细菌具有强毒性的·OH，其能有效抑制细菌生长，且具有广谱杀菌性，对正常细胞具有较低的毒性，也不存在细菌耐药性的问题。
(3)相对于现有杀菌技术，本发明的纳米酶杀菌剂是由双金属有机框架经过低温氧化衍生而成的二维片状准MOFs材料，能催化H2O2分解成具有超强杀菌能力的·OH，同时低温氧化不仅保持了MOFs的结构特点，还提高了其稳定性，增强了金属位点间的电子传递，并结合双金属的协同催化效应，极大的增强了纳米酶的催化作用，达到高效杀菌的目的。
附图说明
图1为实施例1制得的基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的扫描电子显微镜(SEM)表征图，显示了纳米酶的形貌。
图2为实施例1制得的基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的扫描电子显微镜(SEM)表征图，显示了纳米酶的形貌。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
本发明实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或者制造商建议的条件进行。所用未注明生产厂商者的原料、试剂等，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂在抑制食源性致病菌中的应用，其步骤如下：
(1)将0.5mmol硝酸铈、0.5mmol硝酸铜和1mmol均苯四甲酸同时溶解到25mL乙醇中，充分混合均匀后将溶液置于磁力搅拌器上(转速1200rpm)，在室温下混合反应2.5h；反应结束后离心获得产物，并用乙醇洗涤5次，然后在60℃下真空干燥12h得到双金属有机框架；
(2)将步骤(1)所述的双金属有机框架置于管式炉(温度300℃)中，然后在空气氛围下煅烧2.5h得到纳米酶杀菌剂，将其置于常温密封容器内保存；
(3)取少量大肠杆菌(ATCC700728)的菌种在LB固体培养基上划线，然后将该LB固体培养基至于37℃培养箱中培养36h后，从LB固体培养基上挑取单菌落分散到100mL LB液体培养基中，将液体培养基移到37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取培养3.5h后的细菌悬液，离心获得细菌细胞，然后，用无菌生理盐水(pH7.0的质量浓度为0.9％的NaCl溶液)洗涤细胞3次，以除去生长培养基残留物，将细胞沉淀物重新分散在一定体积的无菌生理盐水中，并将细菌悬液的细菌密度稀释至106CFU/mL，保存备用；
(4)将无菌生理盐水(质量浓度为0.9％的NaCl溶液，50μL)(对照组、组别1)、H2O2(10mmol/L)(组别2)、双金属有机框架(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别3)、纳米酶杀菌剂(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别4)分别加入到5mL步骤(3)中的大肠杆菌悬液(浓度为106CFU/mL)中(上述双金属有机框架、纳米酶杀菌剂和H2O2的浓度均指在大肠杆菌悬液中的浓度)，置于37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，分别取震荡4h后的菌液100μL，按照平板涂布法接种到LB固体培养基，并将其置于37℃培养箱中培养36h，然后进行活菌菌落计数，按以下公式计算杀菌率：
杀菌率＝(对照组菌落数-实验组菌落数)/对照组菌落数×100％
计算得到组别2、组别3和组别4的杀菌率分别为1.62％、60.53％和98.02％，表明10mmol/L的H2O2对大肠杆菌的几乎没有杀菌作用；50μg/mL的双金属有机框架和10mmol/L的H2O2能杀灭一部分大肠杆菌；而50μg/mL的纳米酶杀菌剂和10mmol/L的H2O2几乎可以完全杀灭大肠杆菌。
实施例2
一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂在抑制食源性致病菌中的应用，其步骤如下：
(1)将0.5mmol硝酸铈、0.5mmol硝酸铜和1mmol均苯四甲酸同时溶解到25mL乙醇中，充分混合均匀后将溶液置于磁力搅拌器上(转速1200rpm)，在室温下混合反应2.5h；反应结束后离心获得产物，并用乙醇洗涤5次，然后在60℃下真空干燥12h得到双金属有机框架；
(2)将步骤(1)所述的双金属有机框架置于管式炉(温度300℃)中，然后在空气氛围下煅烧2.5h得到纳米酶杀菌剂，将其置于常温密封容器内保存；
(3)取少量金黄色葡萄球菌(ATCC6538)的菌种在LB固体培养基上划线，然后将固体培养基至于37℃培养箱中培养36h后，从LB固体培养基上挑取单菌落分散到100mL LB液体培养基中，将液体培养基移到37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取培养4.5h后的细菌悬液，离心获得细菌细胞，然后，用无菌生理盐水(pH7.0的质量浓度为0.9％NaCl溶液)洗涤细胞3次，以除去生长培养基残留物，将细胞沉淀物重新分散在一定体积的无菌生理盐水中，并将细菌悬液的细菌密度稀释至106CFU/mL，保存备用；
(4)将无菌生理盐水(质量浓度为0.9％的NaCl溶液，50μL)(对照组、组别1)、H2O2(10mmol/L)(组别2)、双金属有机框架(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别3)、纳米酶杀菌剂(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别4)分别加入到5mL步骤(3)中的金黄色葡萄球菌悬液(浓度为106CFU/mL)中(上述双金属有机框架、纳米酶杀菌剂和H2O2的浓度均指在金黄色葡萄球菌悬液中的浓度)，置于37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取震荡4h后的菌液100μL，按照平板涂布法接种到LB固体培养基，并将其置于37℃培养箱中培养36h，然后进行活菌菌落计数，按以下公式计算杀菌率：
杀菌率＝(对照组菌落数-实验组菌落数)/对照组菌落数×100％
计算得到组别2、组别3和组别4的杀菌率分别为2.01％、78.19％和99.94％，表明10mmol/L的H2O2对金黄色葡萄球菌几乎没有杀菌效果；50μg/mL的双金属有机框架和10mmol/L的H2O2能杀灭大部分金黄色葡萄球菌；而50μg/mL的纳米酶杀菌剂和10mmol/L的H2O2可以完全杀灭金黄色葡萄球菌。
实施例3
一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂在抑制食源性致病菌中的应用，其步骤如下：
(1)将0.5mmol硝酸铈、0.5mmol硝酸铜和1mmol均苯四甲酸同时溶解到25mL乙醇中，充分混合均匀后将溶液置于磁力搅拌器上(转速1200rpm)，在室温下混合反应2.5h；反应结束后离心获得产物，并用乙醇洗涤5次，然后在60℃下真空干燥12h得到双金属有机框架；
(2)将步骤(1)所述的双金属有机框架置于管式炉(温度300℃)中，然后在空气氛围下煅烧2.5h得到纳米酶杀菌剂，将其置于常温密封容器内保存；
(3)取少量沙门氏菌(ATCC14028)的菌种在LB固体培养基上划线，然后将固体培养基至于37℃培养箱中培养36h，从LB固体培养基上挑取单菌落分散到100mL LB液体培养基中，将液体培养基移到37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取培养3.5h后的细菌悬液，离心获得细菌细胞。然后，用无菌生理盐水(pH7.0的质量浓度为0.9％NaCl溶液)洗涤细胞3次，以除去生长培养基残留物，将细胞沉淀物重新分散在一定体积的无菌生理盐水中，并将细菌悬液的细菌密度稀释至106CFU/mL，保存备用；
(4)将无菌生理盐水(质量浓度为0.9％的NaCl溶液，50μL)(对照组、组别1)、H2O2(10mmol/L)(组别2)、双金属有机框架(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别3)、纳米酶杀菌剂(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别4)分别加入到5mL步骤(3)中的沙门氏菌悬液(浓度为106CFU/mL)中(上述双金属有机框架、纳米酶杀菌剂和H2O2的浓度均指在沙门氏菌悬液中的浓度)，置于37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取震荡4h后的菌液100μL，按照平板涂布法接种到LB固体培养基，并将其置于37℃培养箱中培养36h，然后进行活菌菌落计数，按以下公式计算杀菌率：
杀菌率＝(对照组菌落数-实验组菌落数)/对照组菌落数×100％
计算得到组别2、组别3和组别4的杀菌率分别为1.83％、69.28％和99.57％，表明10mmol/L的H2O2对沙门氏菌几乎没有杀菌作用；50μg/mL的双金属有机框架和10mmol/L的H2O2能杀灭一部分沙门氏菌；而50μg/mL的纳米酶杀菌剂和10mmol/L的H2O2几乎可以完全杀灭沙门氏菌。
实施例4
一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂在抑制食源性致病菌中的应用，其步骤如下：
(1)将0.75mmol硝酸铈、0.25mmol硝酸铜和1mmol均苯四甲酸同时溶解到25mL乙醇中，充分混合均匀后将溶液置于磁力搅拌器上(转速1200rpm)，在室温下混合反应2.5h；反应结束后离心获得产物，并用乙醇洗涤5次，然后在60℃下真空干燥12h得到双金属有机框架；
(2)将步骤(1)所述的双金属有机框架置于管式炉(温度300℃)中，然后在空气氛围下煅烧2.5h得到纳米酶杀菌剂，将其置于常温密封容器内保存；
(3)取少量沙门氏菌(ATCC14028)的菌种在LB固体培养基上划线，然后将固体培养基至于37℃培养箱中培养36h，从LB固体培养基上挑取单菌落分散到100mL LB液体培养基中，将液体培养基移到37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取培养3.5h后的细菌悬液，离心获得细菌细胞。然后，用无菌生理盐水(pH7.0的质量浓度为0.9％NaCl溶液)洗涤细胞3次，以除去生长培养基残留物，将细胞沉淀物重新分散在一定体积的无菌生理盐水中，并将细菌悬液的细菌密度稀释至106CFU/mL，保存备用；
(4)将无菌生理盐水(质量浓度为0.9％的NaCl溶液，50μL)(对照组、组别1)、H2O2(10mmol/L)(组别2)、双金属有机框架(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别3)、纳米酶杀菌剂(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别4)分别加入到5mL步骤(3)中的沙门氏菌悬液(浓度为106CFU/mL)中(上述双金属有机框架、纳米酶杀菌剂和H2O2的浓度均指在沙门氏菌悬液中的浓度)，置于37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取震荡4h后的菌液100μL，按照平板涂布法接种到LB固体培养基，并将其置于37℃培养箱中培养36h，然后进行活菌菌落计数，按以下公式计算杀菌率：
杀菌率＝(对照组菌落数-实验组菌落数)/对照组菌落数×100％
计算得到组别2、组别3和组别4的杀菌率分别为1.79％、60.18％和95.44％，表明10mmol/L的H2O2对沙门氏菌几乎没有杀菌作用；50μg/mL的双金属有机框架和10mmol/L的H2O2能杀灭一部分沙门氏菌；而50μg/mL的纳米酶杀菌剂和10mmol/L的H2O2能杀灭绝大部分沙门氏菌。
实施例5
一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂在抑制食源性致病菌中的应用，其步骤如下：
(1)将0.3mmol硝酸铈、0.6mmol硝酸铜和1mmol均苯四甲酸同时溶解到25mL乙醇中，充分混合均匀后将溶液置于磁力搅拌器上(转速1200rpm)，在室温下混合反应2.5h；反应结束后离心获得产物，并用乙醇洗涤5次，然后在60℃下真空干燥12h得到双金属有机框架；
(2)将步骤(1)所述的双金属有机框架置于管式炉(温度300℃)中，然后在空气氛围下煅烧2.5h得到纳米酶杀菌剂，将其置于常温密封容器内保存；
(3)取少量沙门氏菌(ATCC14028)的菌种在LB固体培养基上划线，然后将固体培养基至于37℃培养箱中培养36h，从LB固体培养基上挑取单菌落分散到100mL LB液体培养基中，将液体培养基移到37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取培养3.5h后的细菌悬液，离心获得细菌细胞。然后，用无菌生理盐水(pH7.0的质量浓度为0.9％NaCl溶液)洗涤细胞3次，以除去生长培养基残留物，将细胞沉淀物重新分散在一定体积的无菌生理盐水中，并将细菌悬液的细菌密度稀释至106CFU/mL，保存备用；
(4)将无菌生理盐水(质量浓度为0.9％的NaCl溶液，50μL)(对照组、组别1)、H2O2(10mmol/L)(组别2)、双金属有机框架(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别3)、纳米酶杀菌剂(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别4)分别加入到5mL步骤(3)中的沙门氏菌悬液(浓度为106CFU/mL)中(上述双金属有机框架、纳米酶杀菌剂和H2O2的浓度均指在沙门氏菌悬液中的浓度)，置于37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取震荡4h后的菌液100μL，按照平板涂布法接种到LB固体培养基，并将其置于37℃培养箱中培养36h，然后进行活菌菌落计数，按以下公式计算杀菌率：
杀菌率＝(对照组菌落数-实验组菌落数)/对照组菌落数×100％
计算得到组别2、组别3和组别4的杀菌率分别为1.82％、64.22％和96.87％，表明10mmol/L的H2O2对沙门氏菌几乎没有杀菌作用；50μg/mL的双金属有机框架和10mmol/L的H2O2能杀灭一部分沙门氏菌；而50μg/mL的纳米酶杀菌剂和10mmol/L的H2O2能杀灭绝大部分沙门氏菌。
实施例6
一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂在抑制食源性致病菌中的应用，其步骤如下：
(1)将0.25mmol硝酸铈、0.75mmol硝酸铜和1mmol均苯四甲酸同时溶解到25mL乙醇中，充分混合均匀后将溶液置于磁力搅拌器上(转速1200rpm)，在室温下混合反应2.5h；反应结束后离心获得产物，并用乙醇洗涤5次，然后在60℃下真空干燥12h得到双金属有机框架；
(2)将步骤(1)所述的双金属有机框架置于管式炉(温度300℃)中，然后在空气氛围下煅烧2.5h得到纳米酶杀菌剂，将其置于常温密封容器内保存；
(3)取少量沙门氏菌(ATCC14028)的菌种在LB固体培养基上划线，然后将固体培养基至于37℃培养箱中培养36h，从LB固体培养基上挑取单菌落分散到100mL LB液体培养基中，将液体培养基移到37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取培养3.5h后的细菌悬液，离心获得细菌细胞。然后，用无菌生理盐水(pH7.0的质量浓度为0.9％NaCl溶液)洗涤细胞3次，以除去生长培养基残留物，将细胞沉淀物重新分散在一定体积的无菌生理盐水中，并将细菌悬液的细菌密度稀释至106CFU/mL，保存备用；
(4)将无菌生理盐水(质量浓度为0.9％的NaCl溶液，50μL)(对照组、组别1)、H2O2(10mmol/L)(组别2)、双金属有机框架(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别3)、纳米酶杀菌剂(50μg/mL)+H2O2(10mmol/L)(组别4)分别加入到5mL步骤(3)中的沙门氏菌悬液(浓度为106CFU/mL)中(上述双金属有机框架、纳米酶杀菌剂和H2O2的浓度均指在沙门氏菌悬液中的浓度)，置于37℃培养箱中在摇床上以150rpm的速度震荡，取震荡4h后的菌液100μL，按照平板涂布法接种到LB固体培养基，并将其置于37℃培养箱中培养36h，然后进行活菌菌落计数，按以下公式计算杀菌率：
杀菌率＝(对照组菌落数-实验组菌落数)/对照组菌落数×100％
计算得到组别2、组别3和组别4的杀菌率分别为2.01％、63.58％和96.57％，表明10mmol/L的H2O2对沙门氏菌几乎没有杀菌作用；50μg/mL的双金属有机框架和10mmol/L的H2O2能杀灭一部分沙门氏菌；而50μg/mL的纳米酶杀菌剂和10mmol/L的H2O2能杀灭绝大部分沙门氏菌。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，其特征在于，所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂由以下方法制备得到：
（1）以溶液为反应介质，将硝酸铈、硝酸铜和均苯四甲酸在室温下反应2～3 h，离心，洗涤，干燥后得到双金属有机框架；
（2）将双金属有机框架在空气氛围、200～400 ℃下煅烧1.5～3.5 h，得到基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂。
2.根据权利要求1所述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，其特征在于，所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂用于抑制食源性致病菌。
3.根据权利要求1或2所述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，其特征在于，包括以下步骤：将基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂和H2O2加入到含细菌的样品中，在室温及以上温度下杀菌3～5 h。
4.根据权利要求3所述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，其特征在于，所述细菌菌种为金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌中的至少一种；所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂与H2O2的比例为45～55 mg ：5～15 mmol；所述基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂与细菌量比例为：45～55 μg ：105～108CFU；所述含细菌的样品为溶液时，其细菌的含量为105～108 CFU/mL。
5.根据权利要求1所述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，其特征在于，步骤（1）所述硝酸铈和硝酸铜的摩尔比为3 : 1～1 : 3，所述均苯四甲酸的摩尔量与硝酸铈和硝酸铜总的摩尔量之比为1 : 2～2 : 1。
6.根据权利要求1所述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，其特征在于，步骤（1）所述硝酸铈的摩尔量与溶液的体积比为15～25 mmol/L。
7.根据权利要求1或5或6所述一种基于双金属有机框架的纳米酶杀菌剂的应用，其特征在于，步骤（1）所述反应在搅拌状态下进行，所述搅拌的转速为1000～1400 rpm；所述洗涤指反应产物用乙醇洗涤3~5次；所述干燥的温度为55～65 ℃，时间为10～15 h；所述溶液为乙醇、甲醇和N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种。
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