CN111742929A

CN111742929A - 一种增效型杀虫剂及其应用

Info

Publication number: CN111742929A
Application number: CN202010787654.9A
Authority: CN
Inventors: 周哲; 梁金丰; 殷文锋
Original assignee: Nanjing Shineking Biotech Co ltd
Current assignee: Nanjing Shineking Biotech Co ltd
Priority date: 2020-08-07
Filing date: 2020-08-07
Publication date: 2020-10-09

Abstract

本发明公开一种增效型杀虫剂及其应用，所述的增效型杀虫剂包括噻虫嗪、增效成分和辅料；其中，所述的增效成分为泛菌多糖、聚谷氨酸和氨基寡糖素中的任意一种或几种组合；其中，所述的泛菌多糖为骆驼刺泛菌发酵制得的产品。本发明的增效型杀虫剂能有效提高农药药效，显著改善在农业种植中因病虫害问题导致的植物病害及减产问题，同时所述增效成分聚谷氨酸、氨基寡糖素、泛菌多糖均为生物制品，在土壤中可完全被生物降解，对植物本身以及对土壤环境无毒无害无污染。

Description

一种增效型杀虫剂及其应用

技术领域

本发明涉及杀虫剂技术应用领域，具体涉及一种增效型杀虫剂及其应用。

背景技术

长期以来，由于农药单剂的长期应用，剂型的选择不当，室内外滞留喷洒防治害虫如稻飞虱、苹果蚜虫、瓜类白粉虱、棉花蓟马、梨木虱等出现了防效普遍降低的现象。一方面，这是由于单剂的长期使用导致害虫对药剂的抗性增加；另一方面是由于剂型的选择不当，导致无法将滞留喷洒的优势体现出来。同时随着农药的广泛使用，农药的慢性毒性及其对环境的影响引起了人们的注意，对于申请注册新农药的毒性问题要求越来越严，使得开发一种新农药的费用成倍增长，周期大大延长。因此需要一种环保高效的农药复配品种来延缓农业上害虫抗药性的产生，通过农药药剂与生物刺激素的复配，这样不仅能提高对农业害虫的防治效果，而且经济方便，延缓卫生害虫抗药性的产生，同时生物刺激素的有效加入，不仅可以使得农药的药效大大提升，同时它可以改善植物的生理生化状态，改善农作物抵抗逆境的水平，也改善农作物的最终产量和农产品品质。

因此，开发高效化、生态化、专业化和多功能化的新型增效型杀虫剂是基于现代农业现状的必然趋势和发展潮流，也是未来农业可持续发展的前景产品。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对目前农业上农药单剂的长期使用导致的作物病虫害、减产、降低品质的现象以及现有技术的不足，提供一种增效型杀虫剂，以显著提高农药药效，提高农业上的病虫害防治效果。

本发明还要解决的技术问题是提供上述增效型杀虫剂的应用

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种包括噻虫嗪、增效成分和辅料的增效型杀虫剂；其中，所述的增效成分为泛菌多糖、聚谷氨酸和氨基寡糖素中的任意一种或几种组合；其中，所述的泛菌多糖为骆驼刺泛菌发酵制得的产品。

优选地，所述的增效成分含有泛菌多糖，即所述的增效成分为泛菌多糖、泛菌多糖与聚谷氨酸的组合物、泛菌多糖与氨基寡糖素的组合物、泛菌多糖与聚谷氨酸和氨基寡糖素的组合物中的任意一种；进一步优选地，所述的增效成分为泛菌多糖与聚谷氨酸和氨基寡糖素的组合物。

优选地，按照质量百分比，所述的噻虫嗪与泛菌多糖的质量百分比为0.3％～8％：1.0％～2.0％；进一步优选地，所述的噻虫嗪与泛菌多糖的质量百分比为3％～6％： 1.0％～2.0％；更进一步优选地，所述的噻虫嗪与泛菌多糖的质量百分比为3％：2％。

其中，所述的噻虫嗪具有防治稻飞虱、苹果蚜虫、瓜类白粉虱、棉花蓟马、梨木虱等等多种植物病虫害的功能。

其中，所述的泛菌多糖为由骆驼刺泛菌(Pantoea alhagi)经发酵后制得的产品，为发酵原液、发酵液的处理液、发酵原液干燥后获得的粉剂和泛菌多糖纯品中的任意一种。

其中，所述的泛菌多糖的分子量为100～2000kDa。

具体地，所述的泛菌多糖的制备方法为：将骆驼刺泛菌的菌液按照10％的体积比接种于发酵培养基中发酵即得；其中，所述的发酵培养基中各组分的浓度为碳源30～50 g/L；氮源2～8g/L；无机盐0.5～2.5g/L；氧载体0.5～10g/L；所述的发酵的过程中，温度为25～32℃，通气强度为0.1～0.8vvm，发酵周期为16～48h，pH为6.5～7.5。

其中，所述的骆驼刺泛菌的分类命名为Pantoea alhagi，菌株名为XK-11，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年3月29日，保藏编号为CGMCC NO.15526，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所保藏中心，邮编100101。P.alhagi XK-11的16S rDNA如序列表 SEQ ID No.1所示，序列全长为1488bp。

其中，所述的聚谷氨酸为γ-聚谷氨酸纯品、γ-聚谷氨酸盐纯品、γ-聚谷氨酸发酵液和γ-聚谷氨酸发酵液喷雾干燥粉剂中的任意一种或几种的组合；其中，所述的聚谷氨酸的分子量为5～100kDa。其中，所述的γ-聚谷氨酸是由微生物发酵产生的一种均聚氨基酸，含有末端胺和多个COO-基团，土壤以及肥料中的Ca²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺等可以直接和聚谷氨酸的羧基位点与酰胺基位点键合，形成水溶性的、稳定的聚谷氨酸盐，缓慢的为作物生长提供营养。同时特有的聚羧基结构具有超强的吸水、保水能力，能减少土壤里面的水肥流失，重塑土壤团粒机构。提高农作物光合作用效率和抗逆能力，增加产量、提升作物品质。

其中，所述的氨基寡糖素为壳聚糖经酶法降解制备得到的；其中，所述的壳聚糖的脱乙酰度为65～85％，酶法降解后氨基寡糖素的聚合度为4～6。其中，所述的氨基寡糖素(壳寡糖)是指D-氨基葡萄糖以β-1，4糖苷键连接的低聚糖，是天然糖中唯一大量存在的碱性氨基寡糖，由几丁质经部分脱乙酰制得壳聚糖后再降解获得，或由微生物发酵提取的低毒杀菌剂，具有水溶性好、安全无毒、易吸收等优点。在农业应用上，氨基寡糖素(农业级壳寡糖)能对一些病菌的生长产生抑制作用，影响真菌孢子萌发，诱发菌丝形态发生变异、孢内生化发生改变等，能激发植物体内基因，产生具有抗病作用的几丁酶、葡聚糖酶、保素及PR蛋白等，并具有细胞活化作用，有助于受害植株的恢复，促根壮苗，增强作物的抗逆性，促进植物生长发育。氨基寡糖素溶液，具有杀毒、杀细菌、杀真菌作用。在上应用具有微量(PPM级)、高效、低成本、无公害等特点。

其中，当杀虫剂为液体时，所述的辅料为水和消泡剂；当杀虫剂为固体颗粒或固体粉末时，所述的辅料为硅砂、硅藻土、膨润土、高岭土、凹凸棒土、粘土、白炭黑、锯末、陶土、轻质碳酸钙、滑石粉和沸石中的任意一种或几种组合。

其中，各组分占杀虫剂总质量的百分比如下：

噻虫嗪 0.3％～8％，

泛菌多糖 1.0％～2.0％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

聚谷氨酸 1.0％～3.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

氨基寡糖素 0.3％～2.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

泛菌多糖 1.0％～2.0％，

聚谷氨酸 1.0％～3.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

泛菌多糖 1.0％～2.0％，

氨基寡糖素 0.3％～2.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

聚谷氨酸 1.0％～3.5％，

氨基寡糖素 0.3％～2.5％，

其余为辅料；

或，

优选地，各组分占杀虫剂总质量的百分比如下：噻虫嗪0.3％～8％，泛菌多糖1.0％～2.0％，聚谷氨酸1.0％～3.5％，氨基寡糖素0.3％～2.5％，其余为辅料。

上述增效型杀虫剂的制备方法为：在噻虫嗪存在的条件之下，按照配方比，调整噻虫嗪、聚谷氨酸、氨基寡糖素、泛菌多糖及辅料的配比进行调配混合。

上述增效型杀虫剂在田间作物上的应用也在本发明的保护范围之内。

其中，所述的应用为将增效型杀虫剂的施用浓度为0.6g/L～8g/L，其可通过水培、喷施或灌根施用于农作物，能显著提高农药药效、作物的抗病、抗逆能力，促进作物增产提质。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势

(1)本发明在噻虫嗪存在的条件之下，通过调整噻虫嗪、聚谷氨酸、氨基寡糖素、微生物多糖、及辅料的配比，制得一种增效型杀虫剂，能够显著提高农药药效，提高农业上的病虫害防治效果、提高作物抗病抗逆能力以及增产提质的效果。

(2)本发明增效型杀虫剂配方中的聚谷氨酸、氨基寡糖素和微生物多糖均是生物制品，在土壤中可完全被生物降解，对植物本身以及对土壤环境无毒无害无污染。

(3)本发明能显著提高农药药效，有效降低农药的用量，减少农药的慢性毒性及其对环境的影响。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/ 或其他方面的优点将会变得更加清楚。

图1为实施例3中干旱抗性实验后的水稻幼苗。

图2为实施例3中干旱抗性实验后的水稻幼苗的总叶绿素含量、可溶性糖含量和脯氨酸含量。

图3为实施例3中干旱抗性实验后的水稻幼苗的丙二醛(MDA)含量、三种抗氧化酶(SOD，POD，CAT)的活性。

图4为实施例3中低温抗性实验后的水稻幼苗。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。

本发明提供了一种增效型杀虫剂，其包含如下质量百分比的组分：0.3％～8％的噻虫嗪、1.0％～3.5％的聚谷氨酸、0.3％～2.5％的氨基寡糖素、1.0％～2.0％的泛菌多糖和余量的辅料。其中，所述增效型杀虫剂中在噻虫嗪存在的条件之下，至少包含聚谷氨酸、氨基寡糖素或泛菌多糖中的任意一种。

下述实施例中，通过如下方法制备各组分：

聚谷氨酸的制备：往发酵结束后的聚谷氨酸发酵液^[1]中添加浓硫酸调节pH至3.5左右，升温至80℃，保温并同时搅拌1小时，随后用氢氧化钠调整pH至7.5，即制备得到本发明所述分子量为5-100kDa的聚谷氨酸；

氨基寡糖素的制备：将壳聚糖酶表达宿主大肠杆菌BL21接种于发酵培养基中，37℃培养至OD₆₀₀＝0.8，降温至28℃并添加IPTG使其终浓度为1mM，诱导产酶12h后经过滤除菌即得到本发明所述粗酶制剂。发酵培养基各组分浓度为：酵母粉：5g/L；蛋白胨10g/L；氯化钠10g/L；发酵过程中。通气强度为0.8vvm，发酵周期为20h， pH为6.5。将大肠杆菌发酵制备的粗酶制剂按照1：100(v粗酶制剂/v底物体积)添加至50g/L壳聚糖溶液中，50℃条件下反应8小时，反应混合物经灭酶活后即为氨基寡糖的浓缩液，即制备得到本发明所述的聚合度为4-6的氨基寡糖素浓缩溶液；

泛菌多糖的制备：将骆驼刺泛菌的种子液按10％的体积比接种于发酵培养基中发酵，即得；发酵培养基各组分的浓度为：碳源(蔗糖)40g/L；氮源(蛋白胨)6g/L；无机盐总浓度为1.3g/L(磷酸二氢钾0.8g/L和硫酸镁0.5g/L)；氧载体总浓度为2.6g/L (正己烷1.3g/L、正庚烷1.3g/L)；发酵过程中，温度为30℃，通气强度为0.6vvm，发酵周期为36h，pH为6.8；发酵结束之后往泛菌多糖发酵液中添加浓硫酸调节pH至 3.5左右，升温至80℃，保温并同时搅拌1小时，随后用氢氧化钠调整pH至7.5，即制备得到本发明所述分子量为100-2000kDa的泛菌多糖。

其中，采用的菌株为Pantoea alhagi XK-11，藏编号为CGMCC NO.15526，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年3月29日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

其中，上述发酵产物的获得均可通过现有技术中公开的方法进行制备。

实施例1：一种增效型杀虫剂的制备，包括如下步骤：

以100重量份杀虫剂组合物为基准：取6重量份的噻虫嗪，1.5重量份的聚谷氨酸，0.2重量份的消泡剂(有机硅消泡剂)和92.3重量份的水，经充分搅拌混合、分散均匀，即得到本实施例所制得的杀虫剂组合1。

按照实施例1的制备其他组合，具体见表1，其余为水。

表1

	噻虫嗪	泛菌多糖	聚谷氨酸	氨基寡糖素	消泡剂
						对比例1	6	/	/	/	0.2
组合1	6	1.5	/	/	0.2
						组合2	6	/	1.5	/	0.2
组合3	6	/	/	1.5	0.2
						组合4	6	1.5	2.0	/	0.2
组合5	6	1.5	/	2.0	0.2
						组合6	6	/	2.0	1.5	0.2
组合7	6	1.5	1.0	1.0	0.2
						组合8	6	1.5	1.2	0.8	0.4
组合9	5	1.0	/	/	0.2
						组合10	4	1.5	/	/	0.2
组合11	3	2.0	/	/	0.2
						组合12	2	2.5	/	/	/
组合13	3	2.5	/	/	/
						对比例2	6	银耳多糖1.5	/	/	0.2

实施例2：一种增效型杀虫剂在水稻上的杀虫效果对比

测试上述表1中的杀虫剂组合和对比例1(噻虫嗪)对稻飞虱、苹果蚜虫、瓜类白粉虱、棉花蓟马、梨木虱这些害虫的防治效果，测试每个样品(水稻)的种植区面积均为1亩，种植后的各处理区作物按常规生产管理。

具体步骤包括：使用背负式喷雾剂，使用实施例1-5和对比例的杀虫剂样品药液分别对各个种植区的作物进行喷雾，空白对照组使用等量清水对种植区中的作物进行喷雾，实施例1-5和对比例的杀虫剂施药量为20g/亩，各杀虫剂均稀释500-1000倍后进行喷雾，各杀虫剂稀释后的药液中活性成分的总浓度保持相同。分别施药后7天调查防治效果，具体试验方法按照《农药田间药效试验准则》进行。每个处理区采用随机5点取样，每个处理小区调查25丛作物，调查各处理去的各病虫害的防治效果，按照公式(1)计算防治率，施药7天后，通过下式计算并统计各杀虫剂组合物对害虫的防治率，结果如表2所示。

公式(1)：防治率(％)＝(死亡虫数/处理总虫数)*100

表2各处理对病虫害的防治效果

由上表可以看出，本发明各组合增效型杀虫剂对稻飞虱、苹果蚜虫、瓜类白粉虱、棉花蓟马、梨木虱这些病虫害均表现出良好的防治效果，从组合1-3可以看出，相比于单一的噻虫嗪，在添加了增效成分后，病虫害的防治效果均有一定的提升，尤其是泛菌多糖的加入，对于噻虫嗪药效有了明显的提升；从组合4-6中可以看出，泛菌多糖与聚谷氨酸或氨基寡糖素的组合增效效果要优于聚谷氨酸与氨基寡糖素的组合；进一步地，从组合9-11的防治效果不难看出，随着泛菌多糖的添加量逐步提升，虽然噻虫嗪的用量在不断减少，但防治效果却在不断加强，由此可见，泛菌多糖的加入能够显著提升噻虫嗪的药效，但随着噻虫嗪用量的不断减少，多糖的添加也有了一定的限制，从组合12和组合13可以看出，随着噻虫嗪的不断减少，相比于组合11，多糖用量的增加并没有起到防治效果增强的结果。最后为了验证其他多糖是否具有相同的效果，选取银耳多糖进行验证，结果表明，本发明所述泛菌多糖具有明显的增强药效的功能；且在实验过程中本发明还验证了与其他的多糖进行比较，本发明的泛菌多糖的增效杀虫效果也要远优于其他的，包括脱乙酰壳多糖、海带多糖、昆布多糖等。

实施例3

1、一种来源于骆驼刺泛菌XK-11胞外多糖的制备方法

挑选P.alhagi XK-11的单菌落至新鲜的LB液体培养基中，置于37℃，200rpm过夜培养，获得种子液。将种子液按4vt％的接种量转接至发酵培养基中(40g/L蔗糖； 5g/L蛋白胨；2g/L K₂HPO₄；2.33g/L正己烷，5.36g/L正庚烷，9.06g/L正十六烷)，随后，发酵过程控温为30℃，pH为7.0，通气量为0.8vvm，搅拌转速为800rpm，发酵24小时，即获得骆驼刺泛菌XK-11胞外多糖的发酵液，发酵液中XK-11的胞外多糖产量为21.8g/L。

将发酵所得的P.alhagi XK-11发酵液进行原位高温(110℃)油浴降粘处理，时长为15min。随后，将其再一次经过高压匀质机破壁处理降粘，其中所述压力为600bar，流量为600L/h，并使用板框压滤机除去菌体碎片等沉淀，获得澄清的多糖溶液。将多糖溶液通过旋蒸仪浓缩至原始体积的2/3，浓缩后加入2.5倍体积的乙醇，4℃过夜静止，离心收集絮状沉淀，干燥后即获得胞外多糖。

2、胞外多糖的单糖组分测定

称步骤1中获得的干燥后胞外多糖10mg，通过三氟乙酸完全酸水解之后，用氮吹仪吹干；随后使用甲醇复溶，并再次吹干，重复三次，获得单糖组分。将单糖组分乙酸化为糖腈乙酸酯衍生物，使用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)分析单糖组分。

实验结果表明，胞外多糖由葡萄糖，半乳糖和甘露糖组成。其中，葡萄糖的摩尔比例最高，为56.3％；半乳糖的比例为29.6％；甘露糖的比例为14.1％。

3、胞外多糖增强水稻幼苗干旱抗性

本实施例以水稻为例，对处于幼苗期的水稻用步骤1中获得的干燥后的胞外多糖先配置成水溶液，再进行喷施处理，具体处理如下：

将水稻种子用2.5％(g/mL)次氯酸钠水溶液表面灭菌20分钟，然后用去离子水洗涤3次。消毒后的种子在黑暗中于22℃萌发3天。将种子随机转移到装有Hoagland 溶液的水培盒中，每盒100株幼苗。水培两周后，将水稻幼苗分为四组，分别喷施50mL 去离子水(对照组)，20ppm(EPS 20)、50ppm(EPS 50)和100ppm(EPS 100)的胞外多糖。同时，向水培溶液中添加20％(g/mL水培液体积)PEG-6000，模拟干旱胁迫，进一步在22℃的环境下培养7天。在整个实验过程中，每两天更换一次Hoagland 溶液。

实验结果：

1)实验结束后，立即采样，拍照记录(图1)，并称取、记录各组水稻苗的鲜重。随后，从水稻苗上摘下叶子，立即称取叶子鲜重。将称重后的叶子浸入装有蒸馏水的 50mL管中，并在4℃的黑暗环境中放置20h。取出后，用纸巾将叶子的表面干燥，然后迅速称重，以得到溶胀重量(TW)。然后将叶片放入80℃的烤箱中72小时，然后确定干重(DW)。相对含水量计算如下：

相对含水量(％)＝(鲜重-干重)/(溶胀重量-干重)×100％

从图1中可以清楚地看到，干旱胁迫使对照组的水稻幼苗的叶子萎缩并略显枯萎。在喷洒不同浓度的EPS组中，干旱胁迫对水稻幼苗的生长的抑制作用得到了显着缓解。水稻苗鲜重及相对含水量实验结果参见表1，从表1可以看出与对照相比，所有叶面喷施的EPS的水稻幼苗鲜重均显着增加(表3)。在20、50和100ppm EPS剂量下，鲜重分别为131.3、129.2和133.3mg，是对照组的1.22倍，1.28倍和1.26倍；同时，相对含水量分别为89.1％，92.5％和88.7％，与对照组相比分别提高了21.4％，26.0％和 20.8％。

表3不同处理下，EPS对干旱胁迫水稻幼苗鲜重及相对含水量的影响

2)实验结束后，立即测定不同处理组中水稻幼苗的总叶绿素含量、可溶性糖含量和脯氨酸含量。实验结果见图2，从图2中，可以看出，EPS的叶面喷施缓解了水稻幼苗受到干旱胁迫的影响。干旱胁迫下，对照组的叶绿素含量为620.4μg·g^-1FW，50ppm EPS浓度处理的叶绿素含量比对照高1.51倍，达到935.7μg·g^-1FW。此外，不同浓度 EPS的处理显着促进了可溶性糖和脯氨酸的积累，可以缓解干旱胁迫引起的渗透压失衡。在20、50和100ppm EPS喷施浓度下，可溶性糖含量分别比对照高3.08、3.83和 3.42倍(附图2B)，脯氨酸含量比对照高63.2％，84.3％和52.6％(附图2C)。

3)实验结束后，立即测定不同处理组中水稻幼苗的丙二醛(MDA)含量、三种抗氧化酶(SOD，POD，CAT)的活性。MDA的含量通常可以表示非生物胁迫下由过量活性氧(ROS)引起的脂质过氧化水平，MDA含量越高，说明植株受到的伤害越严重。

其中，所述MDA的测定方法为：称取0.5g叶片组织，用5％(g/mL)的三氯乙酸水溶液研磨成匀浆；匀浆液在12000g条件下离心15min，上清液与5mL 0.5％g/mL 的硫代巴比妥酸水溶液(用20％g/mL的三氯乙酸水溶液配制)混合；混合液置于沸水中加热25min，冷却至室温后，7500g条件下离心5min。离心后测定上清液在450nm、 532nm、600nm波长下的吸光值。按照下述公式计算叶片组织中MDA含量：

C(μmol·L¹)＝6.45(A₅₃₂-A₆₀₀)-0.56A₄₅₀

其中，C代表待测液中MDA浓度，A₄₅₀、A₅₃₂、A₆₀₀分别代表待测液在在450nm、 532nm、600nm波长下的吸光值。MDA的含量最终以nmol·g^-1FW表示。

4)实验结果见图3，从图3中，可以看出，喷洒EPS可以显着防止脂质过氧化，因为与对照组相比，以20、50、100ppm的EPS喷施分别降低了39.3％，50.1％和44.65％的MDA含量(图3A)。酶促抗氧化系统是植物清除ROS时最重要的部分之一。图3 说明了EPS处理后干旱胁迫下水稻幼苗叶片中SOD，CAT和POD活性的变化。结果表明，EPS喷施后SOD，CAT和POD的活性显着增加。在浓度为50ppm时，SOD，CAT和POD的酶活性显着高于对照组，分别增加了29.3％，82.2％和78.9％(图3B-D)。

4、胞外多糖增强水稻幼苗低温抗性

本实施例以水稻为例，对处于幼苗期的水稻用步骤1中获得的干燥后的胞外多糖先配置成水溶液，进行灌根处理，具体处理如下：

将水稻种子用2.5％(g/mL)次氯酸钠水溶液表面灭菌20分钟，然后用去离子水洗涤3次。消毒后的种子在黑暗中于22℃萌发3天。将种子随机转移到装有Hoagland 溶液的水培盒中，每盒100株幼苗。水培两周后，将水稻幼苗分为四组，进行下属处理：空白对照组(CK)，10℃低温处理组(LT)，100ppm多糖灌根处理组(EPS)，100 ppm多糖灌根处理加10℃低温处理组(EPS+LT)，并进一步培养7天。在整个实验过程中，每两天更换一次Hoagland溶液。

实验结果：

实验结束后，立即采样，拍照记录(图4)，并称取、记录各组水稻苗的鲜重。随后测量并记录茎长与根长，同时测量叶绿素含量、脯氨酸含量及MDA含量。

实验结果如图4、表2所示，LT组的水稻幼苗根系氧化变暗，页面皱缩，失水。而EPS+LT组的水稻幼苗的长势明显好于LT组(图4)。此外，从表4可以看出，低温胁迫严重影响了水稻幼苗的生长，而施用EPS的水稻幼苗，在低温胁迫下的鲜重、茎长、根长、叶绿素含量、脯氨酸含量都显著高于LT组，而MDA含量却显著低于LT 组，这说明胞外多糖的使用缓解了水稻幼苗在低温胁迫下的伤害。

表4不同处理下，胞外多糖对水稻幼苗的鲜重、茎长、根长、叶绿素含量、脯氨酸含量及MDA含量的影响。

5、胞外多糖增强番茄幼苗干旱抗性

本发明以番茄为例，对处于幼苗期的番茄用实施例1中获得的干燥后的胞外多糖先配置成水溶液，进行灌根处理，具体处理如下：

将番茄种子用2.5％(g/mL)次氯酸钠水溶液表面消毒20分钟，然后用去离子水洗涤3次。消毒后的种子在黑暗中于22℃萌发3天。将种子随机转移到装有Hoagland 溶液的水培盒中，每盒100株幼苗。水培两周后，将番茄幼苗分为四组，分别喷施50mL 去离子水(T1，T2)，50mL胞外多糖溶液并确保EPS的终浓度为50ppm(T3，T4)。同时，向T2与T4两组水培溶液中添加20％(g/mL)PEG-6000，模拟干旱胁迫，进一步培养7天。在整个实验过程中，每两天更换一次Hoagland溶液。

实验结果：

实验结束后，立即采样，并称取、记录各组水稻苗的鲜重。随后，从水稻苗上摘下叶子，测量并记录相对含水量，叶绿素及MDA含量。

实验结果如表5所示，T2组的鲜重、相对含水量和叶绿素含量均小于T1组，而 MDA含量却是显著上升，这说明，干旱胁迫下严重抑制了番茄幼苗的生长。然而，多糖处理组T4的番茄幼苗的鲜重、相对含水量和叶绿素含量均显著高于T2组，同时， MDA含量显著降低。这说明，多糖的使用能显著增强瓜果类作物的抗干旱能力。

表5不同处理下，胞外多糖对番茄幼苗的鲜重、相对含水量、叶绿素含量及MDA含量的影响。

6、胞外多糖增强油菜幼苗低温抗性

本实施例以油菜为例，对处于幼苗期的油菜用步骤1中获得的干燥后的胞外多糖先配置成水溶液，进行灌根处理，具体处理如下:

将油菜种子用2.5％(g/mL)次氯酸钠水溶液表面灭菌20分钟，然后用去离子水洗涤3次。消毒后的种子在黑暗中于22℃萌发3天。将种子随机转移到装有Hoagland 溶液的水培盒中，每盒100株幼苗。水培四周后，将油菜幼苗分为四组，进行下述处理：空白对照组(T5)，4℃低温处理组(T6)，100ppm多糖灌根处理组(T7)，100ppm 多糖灌根处理加4℃低温处理组(T8)，并进一步培养7天。在整个实验过程中，每两天更换一次水培营养液。

实验结果：

实验结束后，立即采样，并称取、记录各组油菜苗的鲜重。随后，从油菜苗上摘下叶子，测量并记录叶绿素、MDA及脯氨酸含量。

实验结果如表6所示，T8组的鲜重、叶绿素含量和脯氨酸含量菌显著高于T6组，而MDA含量显著小于T6组，说明，多糖的施加显著缓解了低温胁迫下对叶菜类作物的负面影响。同时，T7组的鲜重、叶绿素等含量显著高于T5组，这说明，多糖的使用能显著促进叶菜类作物的生长。

表6不同处理下，胞外多糖对油菜幼苗的鲜重、叶绿素含量、MDA含量及脯氨酸含量的影响。

本发明提供了一种增效型杀虫剂的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选组合及实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

[1]Xu Z,Feng X,Dan Z,et,al.Enhanced poly(γ-glutamic acid)fermentation by Bacillus subtilis,NX-2immobilized in aerobic plant fibrous-bed bioreactor[J].Bioresour Technol,2014,155:8-14。

序列表

<110> 南京轩凯生物科技有限公司

<120> 一种增效型杀虫剂及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1488

<212> DNA

<213> 骆驼刺泛菌(Pantoea alhagi)

<400> 1

tctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgaac ggtaacaggg 60

agcagcttgc tgctctgctg acgagtggcg gacgggtgag taatgtctgg ggatctgccc 120

gatggagggg gataaccact ggaaacggtg gctaataccg cataacgtcg caagaccaaa 180

gtgggggacc ttcgggcctc acaccatcgg atgaacccag atgggattag ctagtaggtg 240

aggtaacggc tcacctaggc gacgatccct agctggtctg agaggatgac cagccacact 300

ggaactgaga cacggtccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg 360

gcgcaagcct gatgcagcca tgccgcgtgt atgaagaagg ccttcgggtt gtaaagtact 420

ttcagcgggg aggaagggag caaggttaat aacctggttc attgacgtta cccgcagaag 480

aagcaccggc taactccgtg ccagcagccg cggtaatacg gagggtgcaa gcgttaatcg 540

gaattactgg gcgtaaagcg cacgcaggcg gtctgtcaag tcggatgtga aatccccggg 600

ctcaacccgg gaactgcatt cgaaactggc aggctagagt cttgtagagg ggggtagaat 660

tccaggtgta gcggtgaaat gcgtagagat ctggaggaat accggtggcg aaggcggccc 720

cctggacaaa gactgacgct caggtgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc 780

tggtagtcca cgccgtaaac gatgtcgact tggaggctgt gagcttgact cgtggcttcc 840

ggagctaacg cgttaagtcg accgcctggg gagtacggcc gcaaggttaa aactcaaatg 900

aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgatgc aacgcgaaga 960

accttacctg gccttgacat ccacggaatt ctgcagagat gcggaagtgc cttcgggaac 1020

cgtgagacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgttg tgaaatgttg ggttaagtcc 1080

cgcaacgagc gcaaccctta tcctttgttg ccagcgattc ggtcgggaac tcaagggaga 1140

ctgccggtga taaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc 1200

cagggctaca cacgtgctac aatggcgcat acaaagagaa gcgacctcgc gagagcaagc 1260

ggacctcata aagtgcgtcg tagtccggat cggagtctgc aactcgactc cgtgaagtcg 1320

gaatcgctag taatcgtgga tcagaatgcc acggtgaata cgttcccggg ccttgtacac 1380

accgcccgtc acaccatggg agtgggttgc aaaagaagta ggtagcttaa ccttcgggag 1440

ggcgcttacc actttgtgat tcatgactgg ggtgaagtcg taacaagg 1488

Claims

1.一种增效型杀虫剂，其特征在于，包括噻虫嗪、增效成分和辅料；其中，所述的增效成分为泛菌多糖、聚谷氨酸和氨基寡糖素中的任意一种或几种组合；其中，所述的泛菌多糖为骆驼刺泛菌发酵制得的产品。

2.根据权利要求1所述的增效型杀虫剂，其特征在于，所述的泛菌多糖为由骆驼刺泛菌经发酵后制得的产品，为发酵原液、发酵液的处理液、发酵原液干燥后获得的粉剂和泛菌多糖纯品中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的增效型杀虫剂，其特征在于，所述的泛菌多糖的分子量为100～2000kDa。

4.根据权利要求1所述的增效型杀虫剂，其特征在于，所述的聚谷氨酸为γ-聚谷氨酸纯品、γ-聚谷氨酸盐纯品、γ-聚谷氨酸发酵液和γ-聚谷氨酸发酵液喷雾干燥粉剂中的任意一种或几种的组合。

5.根据权利要求4所述的增效型杀虫剂，其特征在于，所述的聚谷氨酸的分子量为5～100kDa。

6.根据权利要求1所述的增效型杀虫剂，其特征在于，所述的氨基寡糖素为壳聚糖经酶法降解制备得到的；其中，所述的壳聚糖的脱乙酰度为65～85％。

7.根据权利要求6所述的增效型杀虫剂，其特征在于，所述的氨基寡糖素的聚合度为4～6。

8.根据权利要求1所述的增效型杀虫剂，其特征在于，当杀虫剂为液体时，所述的辅料为水和消泡剂；当杀虫剂为固体颗粒或固体粉末时，所述的辅料为硅砂、硅藻土、膨润土、高岭土、凹凸棒土、粘土、白炭黑、锯末、陶土、轻质碳酸钙、滑石粉和沸石中的任意一种或几种组合。

9.根据权利要求1所述的增效型杀虫剂，其特征在于，各组分占杀虫剂总质量的百分比如下：

噻虫嗪 0.3％～8％，

泛菌多糖 1.0％～2.0％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

聚谷氨酸 1.0％～3.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

氨基寡糖素 0.3％～2.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

泛菌多糖 1.0％～2.0％，

聚谷氨酸 1.0％～3.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

泛菌多糖 1.0％～2.0％，

氨基寡糖素 0.3％～2.5％，

其余为辅料；

或，

噻虫嗪 0.3％～8％，

聚谷氨酸 1.0％～3.5％，

氨基寡糖素 0.3％～2.5％，

其余为辅料；

或，

10.权利要求1～9中任意一项所述的增效型杀虫剂在田间作物上的应用。