CN111718375A - 具有g1和g2结构的铂类物质及其制备方法和应用 - Google Patents

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常新亮
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Hainan Changan International Pharmaceutical Co ltd
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Abstract

本发明涉及一种具有G1和G2结构的铂类物质及其制备方法和应用。其中，所述铂类物质为具有如下结构式的G1或G2铂类化合物或者两者的混合物：

Description

具有G1和G2结构的铂类物质及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及药物领域，特别涉及一种具有式G1和G2结构的铂类物质及其制备方法和在药物中的应用，属于药物化学技术领域。
背景技术
洛铂(Lobaplatin，D19466)，又名洛巴铂，是继顺铂、卡铂之后的第三代铂类抗肿瘤药物，其化学名称为：顺式-[反式-1,2-环丁烷双(甲胺)-N,N']-[(2S)-乳酸 -O1,O2]-铂(II)，分子式为C9H18N2O3Pt，分子量为397.34，化学结构式如下式(I) 所示：
Figure RE-GDA0002122512690000011
洛铂具有烷化作用，属烷化剂(广义)。具有良好的抗肿瘤作用，如对离体 AH135-瘤、B16-黑色素瘤、结肠癌115，在体小鼠P338白血病等具有很好的抑制作用。洛铂的特点是抗癌活性强，毒性低，无蓄积毒性和肾毒性，并且对骨髓毒性较小，目前已上市的注射用洛铂主要用于乳腺癌、小细胞肺癌及慢性粒细胞性白血病的治疗。
发明内容
为了保证该药物的安全、有效、质量可控，对其有关物质及有关物质的检测方法的研究显得十分重要。针对该药物，由于三个手性碳的存在以及制备过程产生的有关物质，因此确认有关物质结构以及寻找到合适的检测方法用于控制该药物的产品质量成为本领域急需解决的技术问题。
本发明为了解决上述技术问题，提供了具有结构式G1和G2的铂类物质及其制备方法，并建立针对该化合物在洛铂中作为有关物质的检测方法以及该化合物在抗肿瘤中的应用。
具体来说，本发明通过如下技术方案实现的。
一方面，本发明提供了一种铂类物质，所述铂类物质为具有如下结构式的 G1或G2的化合物或G1和G2的化合物：
Figure RE-GDA0002122512690000021
其中，G1 和G2可以互换。
另一方面，本发明提供了一种铂类物质的制备方法，经过如下结构式的化合物6制备得到：
Figure RE-GDA0002122512690000022
优选的是，通过化合物6制备所述铂类物质的反应中，将化合物6的溶液与乳酸化合物7反应得到G1和G2的混合物，进一步优选的是，所述化合物6与乳酸化合物7的摩尔比为1:1-2；进一步优选的是，用乳酸化合物7调节体系pH 为6.4-6.8，进一步优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃；进一步优选的是，反应时间为72-96小时，优选87小时；
其中，所述乳酸化合物7的结构式如下：
Figure RE-GDA0002122512690000023
优选的是，上述的制备方法，所述化合物6经过如下结构式的化合物5制备得到：
Figure RE-GDA0002122512690000024
优选的是，通过化合物5制备化合物6的反应中，加入树脂反应，之后过滤得到滤液，洗涤树脂得到洗液，合并滤液和洗液得到含化合物6的溶液进行下一步反应，优选的是，所述树脂是经氢氧化钠水溶液处理的树脂，进一步优选的是，氢氧化钠水溶液的浓度为1-2mol/L，进一步优选1.5mol/L；进一步优选的是，加入树脂反应0.5-2小时，进一步优选反应1小时。
优选的是，上述的制备方法，所述化合物5经过如下结构式的化合物4.1制备得到，更优选地经过如下结构式的化合物4制备得到：
Figure RE-GDA0002122512690000031
其中，X代表卤素元素，选自F、Cl、Br或I；
Figure RE-GDA0002122512690000032
优选的是，通过化合物4.1制备化合物5的反应中，将化合物4.1分散到酮-水混合溶剂中，再加入硝酸银的水溶液，避光反应制得含化合物5的溶液用于下一步反应；进一步优选的是化合物4.1与硝酸银的摩尔比为1:1-2，进一步优选 1:1.4-2；
优选的是，所述酮选自丙酮，进一步优选的是，丙酮-水混合溶剂中体积比为丙酮：水＝0-9:1；进一步优选的是反应温度为15-25℃，优选20℃；反应时间为14-18小时，优选16小时。
优选的是，上述的制备方法，所述化合物4.1经过如下结构式的化合物3制备得到：
Figure RE-GDA0002122512690000033
优选的是，通过化合物3制备化合物4.1的反应中，将化合物3、卤亚铂酸盐或卤亚铂酸盐和碱金属卤化物、和氢氧化物反应制得化合物4.1，进一步优选的是，化合物3和卤亚铂酸盐的摩尔比为1:0.5-2；
进一步优选的是，所述卤亚铂酸盐选自卤亚铂酸钾或卤亚铂酸钠，进一步优选的是，所述卤亚铂酸盐选自氯亚铂酸钾或氯亚铂酸钠，进一步优选氯亚铂酸钾；
进一步优选的是，所述碱金属卤化物选自卤化钾或卤化钠，进一步优选的是，所述碱金属卤化物选自碘化钾或碘化钠，进一步优选碘化钾；
进一步优选的是，所述氢氧化物选自氢氧化钾或氢氧化钠，进一步优选氢氧化钾。
优选的是，上述的制备方法，所述化合物3经过如下结构式的化合物2制备得到：
Figure RE-GDA0002122512690000041
优选的是，通过化合物2制备化合物3的反应中，将化合物2和草酸的醇溶液反应得到白色固体化合物3，进一步优选的是，将化合物2和草酸的摩尔比为 1:0.5-2；优选的是，将反应体系升温至65-75℃反应，优选反应0.5-2小时，优选 70℃反应1小时；然后分离出固体加至四氢呋喃溶剂中，于60-70℃继续混合，优选65℃继续混合，经固液分离得到纯化化合物3。
优选的是，上述的制备方法，所述化合物2经过如下结构式的化合物1制备得到：
Figure RE-GDA0002122512690000042
优选的是，通过化合物1制备化合物2的反应中，向化合物1的四氢呋喃溶液中加入硼烷二甲硫醚反应，进一步优选的是，化合物1和硼烷二甲硫醚的摩尔比为1:5-10；
优选的是，反应分为三个阶段，第一阶段反应温度为-5-5℃，优选0℃，第二阶段反应温度为35-45℃，优选40℃，第三阶段反应温度为60-70℃，优选65℃；进一步优选的是，所述第一阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第二阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第三阶段的反应时间为50-70 分钟，优选60分钟；进一步优选的是，向反应得到的固体中加入醇，优选正丁醇升温，优选升温至90-110℃，优选100℃。
优选的是，上述制备方法，其中，原料为化合物1：
Figure RE-GDA0002122512690000051
优选的是，上述制备方法，所述制备方法的步骤如下：
Figure RE-GDA0002122512690000052
其中，通过化合物1制备化合物2的反应中，向化合物1的四氢呋喃溶液中加入硼烷二甲硫醚反应；优选的是，反应分为三个阶段，第一阶段反应温度为 -5-5℃，优选0℃；第二阶段反应温度为35-45℃，优选40℃；第三阶段反应温度为60-70℃，优选65℃；进一步优选的是，所述第一阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟；所述第二阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟；所述第三阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟；进一步优选的是，向反应得到的固体中加入正丁醇升温，优选升温至90-110℃，优选100℃；
和/或，通过化合物2制备化合物3的反应中，将化合物2和草酸的异丙醇溶液反应得到白色固体化合物3；优选的是，将反应体系升温至65-75℃反应，优选反应0.5-2小时，优选70℃反应1小时；然后分离出固体加至四氢呋喃溶剂中，于 60-70℃继续混合，优选65℃继续混合，经固液分离得到纯化化合物3；
和/或，通过化合物3制备化合物4的反应中，将化合物3氯亚铂酸钾、碘化钾和氢氧化钾反应制得化合物4，优选的是，将化合物3和氢氧化钾的水溶液混合得到F液，将氯亚铂酸钾和碘化钾的水溶液混合得到E液，将F液和E液混合反应得到化合物4，优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃，进一步优选的是，反应时间为3-5小时，优选反应4小时；
和/或，通过化合物4制备化合物5的反应中，将化合物4分散到丙酮-水混合溶剂中，再加入硝酸银的水溶液，避光反应制得含化合物5的溶液用于下一步反应；优选的是，丙酮-水混合溶剂中体积比为丙酮：水＝0-9:1反应温度为15-25℃，优选20℃；反应时间为14-18小时，优选16小时；
和/或，通过化合物5制备化合物6的反应中，加入树脂反应，之后过滤得到滤液，洗涤树脂得到洗液，合并滤液和洗液得到含化合物6的溶液进行下一步反应，优选的是，其中所述树脂是经氢氧化钠水溶液处理的树脂，优选氢氧化钠水溶液的浓度为1-2mol/L，进一步优选1.5mol/L；进一步优选的是，加入树脂反应0.5-2小时，进一步优选反应1h；
和/或，通过化合物6制备所述铂类物质的反应中，将化合物6的溶液与乳酸化合物7反应得到G1和G2的混合物，优选的是，用乳酸化合物7调节体系pH为 6.4-6.8，进一步优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃，反应时间为72-96小时，优选87小时。
或者优选的是，上述的制备方法，包括如下步骤：将制备得到的化合物G1 和G2的混合物，通过液相色谱分离得到化合物G1和化合物G2；优选的是，以 NH4HCO3的水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；优选流动相A的浓度为8-12m mol/L，优选10m mol/L；进一步优选的是，采用梯度洗脱，0-17.8min内流动相 B的体积由0增加到17.5％，流动相A的体积由100％降低至82.5％。
另一方面，本发明提供了一种铂类物质的检测方法，其特征在于，所述方法为HPLC法或HPLC-MS法；
优选的是，所述的HPLC法的检测条件为：用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3- 氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂，以正己烷-乙醇(体积比例为60-70:40-30) 为流动相，流速为每分钟0.8-1.5ml，检测波长为208-212nm，柱温为30-40℃，等度洗脱30-50min；优选的是，以正己烷-乙醇(体积比例为63-67:37-33)为流动相，柱温为33-37℃；进一步优选的是，流动相为正己烷-乙醇(体积比例为65:35)，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，柱温为35℃，等度洗脱时间为40min。
本发明还提供了铂类物质在洛铂原料药或者制剂的质量标准中作为有关物质指标进行控制的用途。
另一方面，本发明提供了一种洛铂原料药或制剂的质量检测方法，其包括测定其中影响洛铂质量的有关物质的步骤，所述的有关物质为上述化合物，所述测定其中影响洛铂质量的有关物质采用HPLC法或HPLC-MS法检测；
优选的是，所述HPLC法检测条件为：用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3-氯-4- 甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂，以正己烷-乙醇(体积比例为60-70:30-40)为流动相，流速为每分钟0.8-1.5ml，检测波长为208-212nm，柱温为30-40℃，等度洗脱30-50min；优选的是，以正己烷-乙醇(体积比例为63-67:37-33)为流动相，柱温为33-37℃；进一步优选的是，流动相为正己烷-乙醇(体积比例为65:35)，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，柱温为35℃，等度洗脱时间为40min。
进一步优选的是，供试品溶液的色谱图中如果存在有关物质峰，以供试品溶液的1％稀释液为对照溶液，按不加校正因子的主成分自身对照法以峰面积计算，供试品溶液中化合物G1、化合物G2的峰面积各不得超过对照溶液中主成分峰面积；其中，所述1％指的是对供试品溶液稀释至1％；
进一步优选的是，对于所述的洛铂原料药或制剂的质量检测方法，其中，供试品溶液色谱图中如有有关物质峰，以有关物质标识色谱图中的色谱峰进行定位：化合物G1、G2的相对保留时间为2.40-2.70。
另一方面，本发明提供了一种含有铂类物质的药物组合物，所述药物组合物为药物制剂，优选所述药物组合物为注射用药物制剂。
优选的是，上述的药物组合物，其中所述药物制剂包括辅料，优选的是，所述辅料选自填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、抗氧化剂和基质中的一种或两种以上；进一步优选的是，所述辅料选自填充剂和/或抗氧化剂。
另一方面，本发明提供了铂类物质或上述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选的是，上述应用，其中所述肿瘤为肺癌、白血病、胃癌、卵巢癌和/或肾癌细胞。
为使本发明所述组合物中的制剂能够实现，可以在制备这些制剂时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、抗氧化剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括：淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；抗氧化剂包括：亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酚、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、叔丁基对羟基茴香醚、硫脲、维生素c、没食子酸丙酯、α-生育酚、抗坏血酸棕榈酸酯；基质包括：PEG6000， PEG4000，虫蜡等。因此在本发明化合物的基础上加入任何其他的有助于形成稳定地发挥药效的其他物质的都是本发明的保护范围。
本发明的有益效果如下：
本发明合成制备了铂类化合物G1和G2，其具有抗肿瘤的效果；本发明还将 G1和G2两个非对映异构体分离，并且确认G1和G2为洛铂的有关物质，为建立完整的洛铂质量检测体系奠定了较好的基础。本发明提供了具有结构式G1和G2的铂类化合物作为洛铂质量标准中的有关物质进行检测的方法，该方法灵敏度高，重复性好，准确度高。
附图说明
图1a：本发明化合物G1的HPLC-MS联用结构确认检测中的HPLC图谱(波长为215nm)；
图1b：本发明化合物G1的HPLC-MS联用结构确认检测中的HPLC图谱(波长为210nm)；
图1c：本发明化合物G1的HPLC-MS联用结构确认检测中MS图谱；
图2：本发明化合物G1的1H-NMR图谱；
图3：本发明化合物G1的13C-NMR图谱；
图4：本发明化合物G1的UV图谱；
图5：本发明化合物G1的IR图谱；
图6：本发明化合物G1的DSC图谱；
图7：本发明化合物G1的Q-NMR图谱；
图8：本发明化合物G1的HPLC图谱；
图9a：本发明化合物G2的HPLC-MS联用结构确认检测中的HPLC图谱(波长为215nm)；
图9b：本发明化合物G2的HPLC-MS联用结构确认检测中的HPLC图谱(波长为210nm)；
图9c：本发明化合物G2的HPLC-MS联用结构确认检测中MS图谱；
图10：本发明化合物G2的1H-NMR图谱；
图11：本发明化合物G2的13C-NMR图谱；
图12：本发明化合物G2的UV图谱；
图13：本发明化合物G2的IR图谱；
图14：本发明化合物G2的DSC图谱；
图15：本发明化合物G2的Q-NMR图谱；
图16：本发明化合物G2的HPLC图谱；
图17：本发明化合物G1和G2作为洛铂有关物质的HPLC图谱；
图18a：洛铂非对映体Ⅱ的峰面积和浓度线性图；
图18b：洛铂非对映体Ⅰ的峰面积和浓度线性图；；
图19：本发明化合物G1的峰面积和浓度线性图；
图20：本发明化合物G2的峰面积和浓度线性图；
图21a：本发明化合物G1对白血病细胞K562的抑制活性；
图21b：阳性对照药(STSP)对白血病细胞K562的抑制活性；
图21c：本发明化合物G1对白血病细胞Jurkat Clone E6-1的抑制活性；
图21d：阳性对照药(STSP)对白血病细胞Jurkat Clone E6-1的抑制活性；
图21e：本发明化合物G1对胃癌细胞AGS的抑制活性；
图21f：本发明阳性对照药(STSP)对胃癌细胞AGS的抑制活性；
图21g：本发明化合物G1对白血病细胞HL-60的抑制活性；
图21h：阳性对照药(STSP)对白血病细胞HL-60的抑制活性；
图21i：本发明化合物G1对肾癌细胞SK-NEP-1的抑制活性；
图21j：阳性对照药(STSP)对肾癌细胞SK-NEP-1的抑制活性；
图21k：本发明化合物G1对肺癌细胞95-D的抑制活性；
图21l：阳性对照药(STSP)对肺癌细胞95-D的抑制活性；
图21m：本发明化合物G1对白血病细胞THP-1的抑制活性；
图21n：阳性对照药(STSP)对白血病细胞THP-1的抑制活性；
图21o：本发明化合物G1对卵巢癌细胞OVCAR-3的抑制活性；
图21p：阳性对照药(STSP)对卵巢癌细胞OVCAR-3的抑制活性；
图22a：本发明化合物G2白血病细胞K562的抑制活性；
图22b：阳性对照药(STSP)对白血病细胞K562的抑制活性；
图22c：本发明化合物G2对白血病细胞Jurkat Clone E6-1的抑制活性；
图22d：阳性对照药(STSP)对白血病细胞Jurkat Clone E6-1的抑制活性；
图22e：本发明化合物G2对胃癌细胞AGS的抑制活性；
图22f：阳性对照药(STSP)对胃癌细胞AGS的抑制活性；
图22g：本发明化合物G2对白血病细胞HL-60的抑制活性；
图22h：阳性对照药(STSP)对白血病细胞HL-60的抑制活性；
图22i：本发明化合物G2对肾癌细胞SK-NEP-1的抑制活性；
图22j：阳性对照药(STSP)对肾癌细胞SK-NEP-1的抑制活性；
图22k：本发明化合物G2对肺癌细胞95-D的抑制活性；
图22l：阳性对照药(STSP)对肺癌细胞95-D的抑制活性；
图22m：本发明化合物G2对白血病细胞THP-1的抑制活性；
图22n：阳性对照药(STSP)对白血病细胞THP-1的抑制活性；
图22o：本发明化合物G2对卵巢癌细胞OVCAR-3的抑制活性；
图22p：阳性对照药(STSP)对卵巢癌细胞OVCAR-3的抑制活性；
具体实施方式
本发明提供一种铂类物质(化合物G1或G2或其混合物)的制备方法及其检测方法，以及其抗肿瘤的应用。下面将通过铂类物质的制备，化合物结构确认和化合物的抗肿瘤活性测定等作为具体实施例进行说明。
本发明优选的实施方式中，制备铂类物质G1或G2的方法如下：
Figure RE-GDA0002122512690000111
其中，通过化合物1制备化合物2的反应中，向化合物1的四氢呋喃溶液中加入硼烷二甲硫醚反应；优选的是，反应分为三个阶段，第一阶段反应温度为 -5-5℃，优选0℃，第二阶段反应温度为35-45℃，优选40℃，第三阶段反应温度为60-70℃，优选65℃；进一步优选的是，所述第一阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第二阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第三阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟；进一步优选的是，向反应得到的固体中加入正丁醇升温，优选升温至90-110℃，优选100℃；
通过化合物2制备化合物3的反应中，将化合物2和草酸的异丙醇溶液反应得到白色固体化合物3；优选的是，将反应体系升温至65-75℃反应，优选反应0.5-2 小时，优选70℃反应1小时；然后分离出固体加至四氢呋喃溶剂中，于60-70℃继续混合，优选65℃继续混合，经固液分离得到纯化化合物3；
通过化合物3制备化合物4的反应中，将化合物3、碱金属卤化物或碱金属卤化物和卤亚铂酸盐、和氢氧化物反应制得化合物4；优选的是，所述碱金属卤化物选自卤化钾或卤化钠，进一步优选的是，所述碱金属卤化物选自氯化钾或氯化钠或碘化钾或碘化钠，进一步优选碘化钾；优选的是，所述卤亚铂酸盐选自卤亚铂酸钾或卤亚铂酸钠，进一步优选的是，所述卤亚铂酸盐选自氯亚铂酸钾或氯亚铂酸钠；优选的是，所述氢氧化物选自氢氧化钾或氢氧化钠，进一步优选氢氧化钾；进一步优选的是，将化合物3，氯亚铂酸钾,碘化钾和氢氧化钾反应制得化合物4，优选的是，将化合物3和氢氧化钾的水溶液混合得到F液，将氯亚铂酸钾和碘化钾的水溶液混合得到E液，将F液和E液混合反应得到化合物4，优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃，进一步优选的是，反应时间为3-5 小时，优选反应4小时；
利用通过化合物3制备化合物4的反应中，如果不加入碘化钾，化合物3和氯亚铂酸钾反应的产物为化合物4.2：
Figure RE-GDA0002122512690000121
如果加入碘化钾，化合物3和氯亚铂酸钾以及碘化钾反应的产物为化合物4：
Figure RE-GDA0002122512690000122
化合物4与化合物4.2相比较而言，化合物4用于制备后续化合物引起的副反应更少，杂质更少；
通过化合物4制备化合物5的反应中，将化合物4分散到丙酮-水混合溶剂中，再加入硝酸银的水溶液，避光反应制得含化合物5的溶液用于下一步反应；优选的是，丙酮-水混合溶剂中体积比为丙酮：水＝0-9:1(比例为0：1时即纯水)，反应温度为15-25℃，优选20℃；反应时间为14-18小时，优选16小时；
通过化合物5制备化合物6的反应中，加入树脂反应，之后过滤得到滤液，洗涤树脂得到洗液，合并滤液和洗液得到含化合物6的溶液进行下一步反应，优选的是，其中所述树脂是经氢氧化钠水溶液处理的树脂，优选氢氧化钠水溶液的浓度为1-2mol/L，进一步优选1.5mol/L；进一步优选的是，加入树脂反应0.5-2 小时，进一步优选反应1h；
通过化合物6制备所述铂类物质的反应中，将化合物6的溶液与乳酸化合物7 反应得到G1和G2的混合物，优选的是，用乳酸化合物7调节体系pH为6.4-6.8，进一步优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃，反应时间为72-96小时，优选 87小时。
本发明的一种优选实施方案中，本发明提供一种洛铂原料药或制剂的质量检测方法，其包括测定其中影响洛铂质量的有关物质的步骤，所述的有关物质为本发明所述的化合物G1或G2，所述的测定方法采用HPLC法检测，检测条件为：用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂，以正己烷-乙醇(体积比例为60-70:30-40)为流动相，流速为每分钟0.8-1.5ml，检测波长为208-212nm，柱温为30-40℃，等度洗脱30-50min；优选的是，流动相为正己烷-乙醇(体积比例为65:35)，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，柱温为35℃，等度洗脱时间为40min。
进一步优选的是，供试品溶液的色谱图中如果存在有关物质峰，以供试品溶液的1％稀释液为对照溶液，按不加校正因子的主成分自身对照法以峰面积计算，供试品溶液中化合物G1、化合物G2的峰面积各不得超过对照溶液中主成分峰面积；其中，所述1％指的是对供试品溶液稀释至1％；
进一步优选的是，对于所述的洛铂原料药或制剂的质量检测方法，其中，供试品溶液色谱图中如有有关物质峰，以有关物质标识色谱图中的色谱峰进行定位：化合物G1、G2的相对保留时间为2.40-2.70。
其中，所述相对保留时间是指相对于洛铂的保留时间，具体是相对于洛铂非对映体II的保留时间。具体来说，作为洛铂化合物已知有2种异构体，即洛铂非对映体I和洛铂非对映体II，它们的结构式如下所述：
洛铂非对映体I(简称RRS)：
Figure RE-GDA0002122512690000131
洛铂非对映体II(简称SSS)：
Figure RE-GDA0002122512690000132
本发明提供一种洛铂中的有关物质及其检测方法，以及其抗肿瘤的应用。
在本发明中，任何影响药物纯度的物质统称为“影响洛铂质量的有关物质”或者“影响质量的有关物质”，简称“有关物质”，例如在检测洛铂质量的XRD衍射峰中出现的影响洛铂质量的有关物质峰，简称为“有关物质峰”；本发明中的所述“有关物质”有些情况下即是本领域技术人员公知的影响药物纯度的“杂质”，然而，在本发明中所述”有关物质”不限于“杂质”的范畴，还包括具有一定抗癌活性甚至其活性高于洛铂的物质，他们相对于活性分子“洛铂”而言属于与洛铂有关的物质范畴，其抗癌活性或者其他的研发新药物方面积极的作用和功能的原理尚未完全研究清楚。本发明中“有关物质”的研究是药品研发的一项重要内容，它包括选择合适的分析方法，准确地分辨与测定杂质的含量并综合药学、毒理及临床研究的结果确定杂质的合理限度，这一研究贯穿于药品研发的整个过程。
下面实施例中所用到各试剂和仪器来源如下，凡是本申请未记载的试剂或者仪器，均是本领域技术人员可以常规确定的内容。
其中，实施例中所用到的试剂见下表1。
表1实施例中所用的试剂
Figure RE-GDA0002122512690000141
实施例1化合物的制备
制备方法如下：
Figure RE-GDA0002122512690000142
实施例1-1
具体制备方法如下：
1)制备化合物2
将化合物1(24.0g,226.1mmol)溶于无水四氢呋喃(THF，480mL)中,降温至0℃。0℃下,滴加10mol/L硼烷二甲硫醚(BH3.Me2S，其CAS号为13292-87-0，加入157mL,1.57mol)，保温搅拌1小时。体系升至40℃搅拌1小时。升温至65℃搅拌1小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯体积比＝2/1)显示原料反应完全。将体系降温至0℃,用甲醇480mL淬灭反应,浓缩体系至干。加入正丁醇(350mL)升温至100℃搅拌16小时。得到化合物2粗品(42.0g),直接用于下一步。
2)制备化合物3
将化合物2(42.0g,粗品)溶于异丙醇(i-PrOH，400mL),得A液。将草酸 (11.5g,127.7mmol)溶于异丙醇(115mL),得B液。将B液滴至A液,有大量白色固体(化合物3粗品)析出。将体系升温至70℃,搅拌1小时。过滤，滤饼加至常温THF(110mL)中，升温至65℃搅拌1h。过滤,滤饼干燥得化合物3(23.0g)为白色固体。
3)制备化合物4
将化合物3(17.0g，57.7mmol)，氯亚铂酸钾(21.5g，51.9mmol)，碘化钾(51.4g,309.7mmol)和氢氧化钾(14.6g,220.8mmol)分别溶于65mL，70mL， 50mL和143mL纯化水，得A，B，C，D液。将B液升温至30℃。将A料搅拌，打散。将C液加至B液，搅拌0.5h，得E液。将D液加至A液，搅拌，体系变澄清，使用0.45微米滤膜过滤，得F液。将F液加至E液，有黄色固体析出，继续在30℃下搅拌4小时。过滤，滤饼用纯化水洗涤(100mL*6)至无卤素离子残留。滤饼经旋转蒸发仪干燥，得化合物4粗品(19g，crude)为黄色粉末。
4)制备化合物5
将化合物4(19g)分散至水(82mL)和丙酮(9.5mL)中，搅拌10分钟。将硝酸银(10.4g，61.3mmol)溶于水(31mL)，加至体系，避光在20℃下搅拌16 小时。过滤，滤饼用纯化水冲洗(30mL×5)，合并水相得化合物5(200mL)的水溶液直接用于下一步。
5)制备化合物6
用1.5mol/L氢氧化钠水溶液(150mL)处理树脂(80g，三菱化学株式会社，型号为DIAION SA10AX)，处理三遍。将化合物5的水溶液加热至30℃。将处理过的树脂一次性加至体系，搅拌1小时。过滤，树脂用纯化水洗涤(50mL×6)。合并水相得化合物6(500mL)的水溶液直接用于下一步。
6)制备化合物G1和G2
将化合物6(500mL)的水溶液置于烧瓶。用化合物7乳酸调体系pH＝6.6，升温至30℃，有少量黑渣生成，搅拌87小时。过滤，将水相冻干得到黄色固体。冻干品经制备型高效液相色谱prep.HPLC：[仪器型号：SHIMADZU LC-20AP；色谱柱:Phenomenex Synergi Max-RP(250*50mm*10μm)；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，B：乙腈；0-17.8min梯度洗脱，流动相B的体积由0增大到17.5％]两次纯化得化合物G1(1.45g)和化合物G2(1.54g)为白色固体。其中将先出峰的化合物标记为G1，后出峰的化合物标记为G2。
在随后的结构确认实施例和活性测试实施例中，化合物G1和G2均对应于本实施例中制备得到的化合物G1和化合物G2，也就是说，本发明所称化合物G1为按照上述液相色谱条件制备化合物时先得到(即保留时间较短)的化合物，本发明所称化合物G2为按照上述液相色谱条件制备化合物时后得到(即保留时间较长)的化合物。
实施例1-2
具体制备方法如下：
1)制备化合物2
将化合物1(24.0g,226.1mmol)分溶于无水四氢呋喃(480mL)中,降温至 -5℃。-5℃下,滴加10M BH3.Me2S(157mL,1.57mol)，保温搅拌一小时。体系升至45℃搅拌1小时。升温至70℃搅拌50分钟。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)显示原料反应完全。将体系降温至0℃,用甲醇480mL淬灭反应,浓缩体系至干。加入正丁醇(350mL)升温至100℃搅拌16小时。得到化合物2粗品(42.8g),直接用于下一步。
2)制备化合物3
将化合物2(42.8g,粗品)溶于异丙醇(400mL),得A液。将草酸(11.5g, 127.7mmol)溶于异丙醇(115mL),得B液。将B液滴至A液,有大量白色固体析出。将体系升温至65℃,搅拌1小时。过滤，滤饼加至THF(110mL)中，升温至 65℃搅拌1h.过滤,滤饼干燥得化合物3(22.8g)为白色固体。
3)制备化合物4
将化合物3(17.0g，57.7mmol)，氯亚铂酸钾(21.5g，51.9mmol),碘化钾(51.4g，309.7mmol)和氢氧化钾(14.6g，220.8mmol)分别溶于65mL，70 mL，50mL和143mL纯化水，得A，B，C，D液。将B液升温至35℃。将A料搅拌，打散。将C液加至B液，搅拌0.5h，得E液。将D液加至A液，搅拌，体系变澄清，使用0.45微米滤膜过滤，得F液。将F液加至E液，有黄色固体析出，继续在35℃下搅拌3.5小时。过滤，滤饼用纯化水洗涤(100mL*6)至无卤素离子残留。滤饼经旋转蒸发仪干燥，得化合物4粗品(18.1g，crude)为黄色粉末。
4)制备化合物5
将化合物4(18.1g)分散至水(82mL)和丙酮(9.5mL)中，搅拌10分钟。将硝酸银(10.4g，61.3mmol)溶于水(31mL)，加至体系，避光在15℃下搅拌 18小时。过滤，滤饼用纯化水冲洗(30mL×5)，合并水相得化合物5(200mL)的水溶液直接用于下一步。
5)制备化合物6
用1.5mol/L氢氧化钠水溶液(150mL)处理树脂(80g)，处理三遍。将化合物5的水溶液加热至30℃。将处理过的树脂一次性加至体系，搅拌2小时。过滤，树脂用纯化水洗涤(50mL×6)。合并水相得化合物6(500mL)的水溶液直接用于下一步。
6)制备化合物G1和G2
将化合物6(500mL)的水溶液置于烧瓶。用化合物7乳酸调体系pH＝6.4，升温至30℃,有少量黑渣生成，搅拌96小时。过滤，将水相冻干得到黄色固体。冻干品经制备型高效液相色谱prep.HPLC(色谱柱:Phenomenex Synergi Max-RP(250*50mm*10μm)；流动相A：水(10mMNH4HCO3)，B：乙腈； 0-17.8min梯度洗脱，流动相B的体积由0增大到17.5％，两次纯化得化合物G1 (1.33g)和化合物G2(1.45g)为白色固体。其中将先出峰的化合物标记为G1，后出峰的化合物标记为G2。
实施例1-3
具体制备方法如下：
1)制备化合物2
将化合物1(24.0g,226.1mmol)分溶于无水四氢呋喃(480mL)中,降温至 5℃。5℃下,滴加10M BH3.Me2S(157mL,1.57mol)，保温搅拌一小时。体系升至35℃搅拌1小时。升温至60℃搅拌70分钟。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)显示原料反应完全。将体系降温至0℃,用甲醇480mL淬灭反应,浓缩体系至干。加入正丁醇(350mL)升温至100℃搅拌16小时。得到化合物2粗品(41.4g),直接用于下一步。
2)制备化合物3
将化合物2(41.4g,粗品)溶于异丙醇(400mL),得A液。将草酸(11.5g, 127.7mmol)溶于异丙醇(115mL),得B液。将B液滴至A液,有大量白色固体析出。将体系升温至75℃,搅拌1小时。过滤，滤饼加至THF(110mL)中，升温至 65℃搅拌1h.过滤,滤饼干燥得化合物3(22.3g)为白色固体。
3)制备化合物4
将化合物3(17.0g，57.7mmol)，氯亚铂酸钾(21.5g，51.9mmol)，碘化钾(51.4g,309.7mmol)和氢氧化钾(14.6g,220.8mmol)分别溶于65mL，70mL， 50mL和143mL纯化水，得A，B，C，D液。将B液升温至25℃。将A料搅拌，打散。将C液加至B液，搅拌0.5h，得E液。将D液加至A液，搅拌，体系变澄清，使用0.45微米滤膜过滤，得F液。将F液加至E液，有黄色固体析出，继续在25℃下搅拌5小时。过滤，滤饼用纯化水洗涤(100mL*6)至无卤素离子残留。滤饼经旋转蒸发仪干燥，得化合物4粗品(18.7g,crude)为黄色粉末。
4)制备化合物5
将化合物4(18.7g)分散至水(82mL)和丙酮(9.5mL)中，搅拌10分钟。将硝酸银(10.4g，61.3mmol)溶于水(31mL)，加至体系，避光在25℃下搅拌 14小时。过滤，滤饼用纯化水冲洗(30mL×5)，合并水相得化合物5(200mL)的水溶液直接用于下一步。
5)制备化合物6
用1.5mol/L氢氧化钠水溶液(150mL)处理树脂(80g)，处理三遍。将化合物5的水溶液加热至30℃。将处理过的树脂一次性加至体系，搅拌0.5小时。过滤，树脂用纯化水洗涤(50mL×6)。合并水相得化合物6(500mL)的水溶液直接用于下一步。
6)制备化合物G1和G2
将化合物6(500mL)的水溶液置于烧瓶。用化合物7乳酸调体系pH＝6.8，升温至30℃，有少量黑渣生成，搅拌72小时。过滤，将水相冻干得到黄色固体。冻干品经制备型高效液相色谱prep.HPLC(色谱柱:Phenomenex Synergi Max-RP(250*50mm*10μm)；流动相A：水(10mMNH4HCO3)，B：乙腈； 0-17.8min梯度洗脱，流动相B的体积由0增大到17.5％)两次纯化得化合物G1 (1.38g)和化合物G2(1.41g)为白色固体。其中将先出峰的化合物标记为G1，后出峰的化合物标记为G2。
实施例2：结构确认
将实施例1-1中步骤6)得到的纯化化合物G1和G2依次取样进行检测，包括高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)；核磁共振氢谱(1H NMR)；核磁共振碳谱(13C NMR)；紫外吸收光谱(UV)；红外光谱(IR)；差示扫描量热 (DSC)；旋光度(OR)；定量核磁共振(Q NMR)；高效液相色谱(HPLC)。
对化合物G1和G2进行单晶培养，由于单晶培养失败不能确认最终两个化合物的具体具体结构，但是可以确认的是两个手性对映体，除了单晶衍射外的其他检测确认数据仅能确认所述相关物质为两个化合物，但是不能最终确认具体化合物。因此上述关于化合物G1和G2的结构确认都是指定。具体结构如下：
为:
Figure RE-GDA0002122512690000191
分子式:C9H18N2O3Pt
分子量:397.33
1.对化合物G1进行结构确认：
1)HPLC-MS:
仪器名称和型号为：Agilent 1200 LC&Agilent 6110 MSD
所用的HPLC-MS条件为：
HPLC条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent ZORBAX SB-Aq, 2.1*50mm，5μm)，以0.0375体积％三氟乙酸为流动相A，乙腈(+0.01875体积％三氟乙酸)为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；检测波长为210nm和215nm (DAD检测器)，柱温为50℃，检测结果见图1a，图1b，梯度洗脱程序见下表2。
表2梯度洗脱程序
时间(分钟) 流动相A(体积％) 流动相B(体积％) 流速(ml/min)
0.00 10 90 1.2
1.50 10 90 1.2
MS条件：以单四级杆串联质谱仪检测，离子源为电喷雾(ESI)离子源，使用正离子扫描模式，监测模式为全扫描，扫描范围为100-1000。
检测结果如下表3，图谱见附图1c，可以看出，该化合物为含铂有机物，由于铂元素丰度较高的同位素有194Pt，195Pt，196Pt，因此在样品的MS中，在397.1、 398.1、399.1、400.1处出现[M’+H]+峰是样品准分子离子峰、在438.1、439.1、 440.2左右处出现[M’+CH3CN+H]+峰是样品准分子离子峰，对应于化合物 G1(C9H18N2O3Pt)的分子量为397.33，质谱信息与化合物G1(C9H18N2O3Pt)分子结构相符。
表3 MS检测结果
m/e 碎片离子峰 备注
397.1,398.1,399.1,400.1 [M’+H]<sup>+</sup> 样品的准分子离子峰
438.1,439.1,440.2 [M’+CH<sub>3</sub>CN+H]<sup>+</sup> 样品加乙腈的准分子离子峰
注：M’为C9H18N2O3Pt的分子量
2)1H-NMR:
仪器名称：BRUKERBV-400型核磁共振仪
谱图见附图2，氢谱(1H NMR:CD3OD 400MHz)的化学位移及归属如下：化合物G1(C9H18N2O3Pt)中含有4个活泼氢和14个不活泼氢，氢谱检测结果如下表4。可以看出，样品氢谱数据与G1(C9H18N2O3Pt)的分子结构相吻合。
表4氢谱检测结果
化学位移(ppm) 多重性 质子数 氢的归属
1.31-1.37 m 3 6
1.55-1.65 m 2 1,1’
2.07-2.19 m 2 1,1’
2.70-3.01 m 6 3,3’,2,2’
4.12-4.18 m 1 5
3)13C-NMR:
仪器名称：BRUKERBV-400型核磁共振仪
谱图见附图3，碳谱(13C NMR:CD3OD 400MHz)的化学位移及归属如下，碳谱检测结果如下表5。
表5碳谱检测结果
化学位移(ppm) 碳原子类型 碳原子数 碳的归属
20.34-20.37 仲碳 2 1,1’
21.75 伯碳 1 6
35.09-35.65 仲碳 2 3,3’
44.47-44.86 叔碳 2 2,2’
74.83 仲碳 1 5
194.23 季碳 1 7
可以看出，13C-NMR共振光谱图中有5个饱和仲碳峰、2个饱和叔碳峰、1 个饱和伯碳峰、1个不饱和季碳峰，这与所示化合物G1的分子结构相符。
4)紫外吸收光谱(UV):
紫外可见光谱仪:UV-2600Series；测定温度:室温；测定范围:190－400nm；测定溶剂:水；谱图见附图4，190nm处为最大紫外吸收波长。
5)红外光谱(IR)
红外光谱仪：ALPHA-BRUKER；测定条件：固体KBr压片。测定范围：4000cm-1～400cm-1，测定结果如下表6及解析如下；图谱见附图5。
表6红外光谱检测结果
吸收峰波数(cm<sup>-1</sup>) 振动类型 基团归属
3422.64,3253.80,3128.37 νNH 氨基N-H伸缩振动
2978.35,2937.71,2873.05 νCH 烷基C-H伸缩振动
1637.54,1615.10 νC＝O 羰基C＝O伸缩振动
1363.46,1336.51 δCH 烷基C-H弯曲振动
1048.04 νC-N C-N键的伸缩振动
6)差示扫描量热法(DSC)
仪器型号:METTELER DSC1；升温速率:10.0℃/min；温度范围:40-350℃，图谱见附图6。
图中，第一个峰左极限为122.04℃，峰值为154.49℃，右极限为161.69℃；第二个峰左极限为161.69℃，峰值为177.73℃，右极限为240.05℃。
7)旋光度(OR)
旋光仪：Anton Paar MCP 500；测定条件：C＝0.5mol/L(水)，25℃；结果如下表7：
表7旋光度检测结果
质量(mg) 体积(mL) C(g/100mL) 旋光度 比旋度
25.40 5 0.508 -0.0307° -6.043°
8)定量核磁共振(Q NMR)
仪器型号：BrukerAVANCE NEO 400；使用的溶剂为CD3OD，采用内标法进行测定，内标物为苯甲酸苄酯(99.8％)，测定结果如下表8，图谱见附图7，从上表中可以看出，其标定含量为94.86％。
表8定量核磁共振检测结果
Figure RE-GDA0002122512690000221
W％的计算公式如下：
Figure RE-GDA0002122512690000231
式中，WISTD为内标物的质量(mg)；
WSam为样品的质量(mg)；
ASam/AISTD为样品和内标物的面积比；
MWSAM为样品的分子量；
MWISTD为内标物的分子量；
nISTD和nSam为各官能团的质子数；
WISTD％为内标物的质量百分比；
9)高效液相色谱(HPLC)
仪器型号：SHIMADZU LC-20AB
HPLC的操作条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters XSELECT CSHC18，4.6*150mm，3.5μm)，以水(+0.0375体积％三氟乙酸)为流动相A，乙腈(+0.01875体积％三氟乙酸)为流动相B，按下表9程序进行梯度洗脱；检测波长为235nm(PDA检测器)，柱温为40℃。
表9梯度洗脱程序
时间(分钟) 流动相A(体积％) 流动相B(体积％) 流速(mL/min)
0.01 95 5 1.0
5.00 82 18 1.0
10.00 80 20 1.0
20.00 10 90 1.0
20.01 95 5 1.0
28.00 95 5 1.0
图谱见附图8，从图中可以看出保留时间为7.815min时，出现了化合物G1 的峰。
2.对化合物G2的结构确认：
1)HPLC-MS:
仪器名称和型号为：Agilent 1200 LC&Agilent 6110 MSD
所用的HPLC条件为：
其中HPLC条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent ZORBAX SB-Aq,2.1*50mm，5μm)，以0.0375体积％三氟乙酸为流动相A，乙腈(+0.01875 体积％三氟乙酸)为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；检测波长为210nm 和215nm(DAD检测器)，柱温为50℃，检测结果见图9a，图9b，梯度洗脱程序如下表10。
表10梯度洗脱程序
时间(分钟) 流动相A(体积％) 流动相B(体积％) 流速(mL/min)
0.00 10 90 1.2
1.50 10 90 1.2
其中MS条件：以单四级杆串联质谱仪检测，离子源为电喷雾(ESI)离子源，使用正离子扫描模式，监测模式为全扫描，扫描范围为100-1000。
检测结果如下表11，图谱见附图9c，可以看出，该化合物为含铂有机物，由于铂元素丰度较高的同位素有194Pt,195Pt,196Pt,因此在样品的MS中，在397.0、 398.1、399.1、400.1、401.1处出现[M’+H]+峰是样品准分子离子峰、在440.2 左右处出现[M’+CH3CN+H]+峰是样品准分子离子峰，对应于化合物G2 (C9H18N2O3Pt)的分子量为397.33，质谱信息与化合物G2(C9H18N2O3Pt)分子结构相符。
表11 MS检测结果
m/e 碎片离子峰 备注
397.0，398.1，399.1,400.1,401.1 [M’+H]<sup>+</sup> 样品的准分子离子峰
440.2 [M’+CH<sub>3</sub>CN+H]<sup>+</sup> 样品加乙腈的准分子离子峰
注：M’为C9H18N2O3Pt的分子量
2)1H-NMR:
仪器名称：BRUKERBV-400型核磁共振仪
谱图见附图10，氢谱(1H NMR:CD3OD 400MHz)的化学位移及归属如下，氢谱检测结果如下表12。
表12氢谱检测结果
化学位移(ppm) 多重性 质子数 氢的归属
1.28-1.35 d 3 6
1.44-1.65 m 2 1,1’
2.10-2.22 m 2 1,1’
2.54-3.00 m 6 3,3’,2,2’
4.10-4.18 m 1 5
化合物G2(C9H18N2O3Pt)中含有4个活泼氢和14个不活泼氢；可以看出，样品氢谱数据与G2(C9H18N2O3Pt)的分子结构相吻合。
3)13C-NMR:
仪器名称：BRUKERBV-400型核磁共振仪
谱图见附图11，碳谱(13C NMR:CD3OD 400MHz)的化学位移及归属如下，碳谱检测结果如下表13。
表13碳谱检测结果
化学位移(ppm) 碳原子类型 碳原子数 碳的归属
20.34 仲碳 2 1,1’
21.82 伯碳 1 6
35.19 仲碳 2 3,3’
44.40-44.94 叔碳 2 2,2’
74.85 仲碳 1 5
194.22 季碳 1 7
可以看出，13C-NMR共振光谱图中有5个饱和仲碳峰、2个饱和叔碳峰、1 个饱和伯碳峰、1个不饱和季碳峰，这与所示化合物G2的分子结构相符。
4)紫外吸收光谱(UV):
紫外可见光谱仪:UV-2600 Series；测定温度:室温；测定范围:190-400nm；测定溶剂:水；谱图见附图12，190nm处为最大紫外吸收波长。
5)红外光谱(IR)
红外光谱仪：ALPHA-BRUKER；测定条件：固体KBr压片。测定范围：4000 cm-1～400cm-1，测定结果如下表14及解析如下，图谱见附图13。
表14红外光谱检测结果
吸收峰波数(cm<sup>-1</sup>) 振动类型 基团归属
3424.38,3217.09,3133.38 νNH 氨基N-H伸缩振动
2975.09,2868.01 νCH 烷基C-H伸缩振动
1636.72 νC＝O 羰基C＝O伸缩振动
1350.46 δCH 烷基C-H弯曲振动
1110.91 νC-O C-O键的伸缩振动
1048.04 νC-N C-N键的伸缩振动
6)差示扫描量热法(DSC)
仪器型号:METTELER DSC1；升温速率:10.0℃/min；温度范围:40-350℃
图谱见附图14，图中，第一个峰的左极限为100.35℃，峰值为130.32℃，右极限为150.86℃；第二个峰的左极限为154.96℃，峰值为182.38℃，右极限为241.85℃。
7)旋光度(OR)
旋光仪:Anton Paar MCP 500；测定条件:C＝0.5mol/L(水)，25℃，结果如下表15。
表15旋光度检测结果
质量(mg) 体积(mL) C(g/100mL) 旋光度 比旋度
25.68 5 0.5136 -0.0482° -9.385°
8)定量核磁共振(Q NMR)
仪器型号：BrukerAVANCE NEO 400；使用的溶剂为CD3OD，采用内标法进行测定，内标物为苯甲酸苄酯(99.8％)，测定结果如下表16：
表16定量核磁共振检测结果
Figure RE-GDA0002122512690000261
W％的计算公式如下：
Figure RE-GDA0002122512690000262
式中，WISTD为内标物的质量(mg)；
WSam为样品的质量(mg)；
ASam/AISTD为样品和内标物的面积比；
MWSAM为样品的分子量；
MWISTD为内标物的分子量；
nISTD和nSam为各官能团的质子数；
WISTD％为内标物的质量百分比；
图谱见附图15，从上表16中可以看出，其标定含量为95.49％。。
9)高效液相色谱(HPLC)
仪器型号：SHIMADZU LC-20AB，色谱柱型号：Waters XSelect CSH-C18 4.6*150mm*3.5μm。
HPLC的操作条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters XSELECT CSHC18，4.6*150mm，3.5μm)，以水(+0.0375体积％三氟乙酸)为流动相A，乙腈(+0.01875体积％三氟乙酸)为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；检测波长为235nm(PDA检测器)，柱温为40℃。
表17梯度洗脱程序
时间(分钟) 流动相A(体积％) 流动相B(体积％) 流速(mL/min)
0.01 95 5 1.0
5.00 82 18 1.0
10.00 80 20 1.0
20.00 10 90 1.0
20.01 95 5 1.0
28.00 95 5 1.0
图谱见附图16，从图中可以看出保留时间为8.800min时，出现了化合物 G2的峰。
实施例3：检测方法(化合物G1和G2在洛铂质量标准的控制方法)
依照高效液相法(中国药典2015年版四部通则0512)测定
1.色谱条件与系统适用性试验
色谱仪型号为：SHIMADZU LC-20AD，用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3-氯 -4-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂(Daicel Chiralcel OZ-3，4.6*150mm，3.0μm)，以正己烷-乙醇(体积比例为65:35)为流动相，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，柱温为35℃，等度洗脱40min。系统适用性试验溶液连续进样6次，洛铂主峰峰面积的相对标准偏差应不大于4.0％。
2.供试品溶液的制备
取待测洛铂样品(本实施例中采用根据专利CN 102020679 B说明书中实施例2公开的方法制备、并且经过结构鉴定确认得到的的洛铂样品，即本实施例加入洛铂三水合物作为待测洛铂，在各个实施例中涉及洛铂含量时均以洛铂无水物计)约100mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3.系统适用性试验溶液/1％对照溶液的制备
精密量取供试品溶液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照贮备液；精密量取对照贮备液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，同时作为1％对照溶液。
4.测定法
取系统适用性溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪(SHIMADZU LC-20AD)，记录色谱图至40分钟。供试品溶液色谱图中如有有关物质峰，以有关物质标识典型色谱图中的色谱峰进行定位，G1和G2在洛铂质量标准的控制方法中作为洛铂有关物质的典型图谱见附图17：在保留时间t＝10.062处出现了洛铂非对映体I的峰，在保留时间t＝8.550处出现了洛铂非对映体II的峰，在保留时间t＝22.043处出现了化合物G1和G2的峰，化合物G1、化合物G2的相对保留时间(相对于洛铂非对映体II)约为2.58；化合物G1、化合物G2在洛铂中的控制限度为：按不加校正因子的主成分自身对照法以峰面积计算，化合物G1、化合物G2的峰面积总和不得超过对照溶液中主成分峰面积。G1和G2 在洛铂质量标准的控制方法中作为洛铂有关物质的典型图谱见附图17。
实施例4：检测方法的方法学验证
为了确认本发明检测方法的实用性和准确性，下面对检测方法的灵敏度和定量限、线性及范围、准确度(回收率)、溶液稳定性、耐用性等方面进行说明，采用实施例1-1制备得到的化合物G1和G2。以下洛铂以洛铂无水物计。
1.灵敏度
取化合物G1溶液、化合物G2溶液，逐步稀释，以信噪比(S/N)10为定量限。化合物G1定量限浓度为0.0200mg/mL，化合物G2定量限浓度为 0.0200mg/mL，定量限结果如下表18所示。
表18定量限检测结果
Figure RE-GDA0002122512690000291
2.线性及范围
以洛铂非对映体Ⅱ的浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，如图18a 所示，线性结果如下：在3.994mg/mL～6.04mg/mL范围内洛铂非对映体Ⅱ的浓度和峰面积呈良好的线性关系，线性关系为Y＝8595033.2484X-2155759.5499，相关系数R2为0.9934，表明线性关系良好。
以洛铂非对映体Ⅰ的浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，如图18b 所示，线性结果如下：在3.994mg/mL～5.965mg/mL范围内洛铂非对映体Ⅰ的浓度和峰面积呈良好的线性关系，线性关系为Y＝8027255.9361X-2805049.4891，相关系数R2为0.9977，表明线性关系良好。
以化合物G1的浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，如图19所示，线性结果如下：在0.0501mg/mL～0.2505mg/mL范围内化合物G1的浓度和峰面积呈良好的线性关系，线性关系为Y＝7400098.8024X-13089.7750，相关系数R2 为1.0000，表明线性关系良好。
以化合物G2的浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，如图20所示，线性结果如下：在0.0500mg/mL～0.2500mg/mL范围内化合物G2的浓度和峰面积呈良好的线性关系，线性关系为Y＝6093148.0000X+8425.1000，相关系数R2 为0.9998，表明线性关系良好。
3.准确度(回收率)
将洛铂非对映体Ⅰ、Ⅱ和化合物G1、G2分别平行配制3份50％限度浓度、3 份限度浓度和3份150％限度浓度的回收率溶液，考察各自的准确度。结果表明：
洛铂非对映体Ⅰ的回收率在99％～102％之间，洛铂非对映体Ⅱ的回收率为 98％～100％之间；
50％限度浓度下，化合物G1的回收率在105％～110％之间，化合物G2的回收率在95％～105％之间；100％限度浓度下，化合物G1的回收率在98％～102％之间，化合物G2的回收率在98％～102％之间；150％限度浓度下，化合物G1的回收率在100％～102％之间，化合物G2的回收率在100％～105％之间；
由此证明该方法的准确度良好。
4.溶液稳定性
分别量取供试品溶液和洛铂对照品溶液，于0h、1.3h、2.7h、4.75h、6h、 15h、26h、48h、81.5h进样，考察化合物含量变化。溶液稳定性结果如下表19 所示，化合物G1，G2在26h内稳定。
表19溶液稳定性检测结果
Figure RE-GDA0002122512690000311
备注：SEE＝(每个时间间隔溶液中非对映体比例/第一针色谱图中非对映体比例)×100％；
SSTD＝(每个时间间隔溶液中洛铂峰面积/第一针色谱图中洛铂峰面积)×100％；
Sim-X＝(每个时间间隔溶液中各化合物含量/第一针色谱图中各化合物含量)×100％，x 为G1或G2。
5.耐用性
取系统适用性溶液，适当调整液相色谱系统中的参数，考察系统条件变化后的各化合物含量检测情况，耐用性结果如下表20所示，系统条件微小变动后，各化合物U％在92％～102％之间，表明该法的耐用性良好。
表20耐用性检测结果
Figure RE-GDA0002122512690000312
备注：Uiso＝(改变条件后溶液中洛铂非对映体Ⅱ与洛铂主峰的峰面积比/改变条件前溶液中洛铂非对映体Ⅱ与洛铂主峰的峰面积比)×100％；
Uim-X＝(改变条件后溶液中各化合物的含量/改变条件前溶液中各化合物含量)×100％； x为G1或G2。
实施例5：体外抗肿瘤活性测定
1.试剂及耗材
(1)体外抗肿瘤活性测定所用细胞株如下表21所示，来自于中科院细胞库：
表21体外抗肿瘤活性测定所用细胞株
种属 细胞名称
白血病细胞 Jurkat Clone E6-1
胃癌细胞 AGS
白血病细胞 HL-60
肾癌细胞 SK-NEP-1
肺癌细胞 95-D
白血病细胞 THP-1
卵巢癌细胞 OVCAR-3
白血病细胞 K-562
(2)McCoy’s 5A培养基，中国Procell，货号：PM150710
(3)Ham's F-12培养基，中国Procell，货号：PM150810
(4)
Figure RE-GDA0002122512690000321
Luminescent Cell Viability Assay，美国Promega，货号：G7572
(5)96孔细胞培养板，美国Corning，货号：3610
(6)Envision酶标仪，美国PerkinElmer
(7)FBS，Lonsera，货号：S711-001S
(8)丙酮酸钠，中国Procell，货号：PB180422
(9)Insulin，中国上海源培，货号：S454
(10)β-mercaptoethanol，Gibco，货号：21985
(11)DMSO，美国Sigma，货号：D8418
(12)Penicillin&Streptomycin(P/S)，中国Procell，货号：PB180120
(13)0.25％胰酶-EDTA，中国Procell，货号：PB180228
(14)RPMI-1640培养基，中国Procell，货号：PM150110
(15)IMDM培养基，中国Procell，货号：PM150510
2.溶液与缓冲液
(1)细胞生长培养基
细胞生长培养基如下表22所示，配置完毕后，储存在4℃备用。
表22细胞生长培养基
细胞名称 培养基
95-D RPMI-1640+10％FBS+1％P/S
AGS F-12+10％FBS+1％P/S
OVCAR-3 RPMI-1640+20％FBS+0.01mg/ml Insulin+1％P/S
Jurkat Clone E6-1 RPMI-1640+10％FBS+1％P/S
HL-60 IMDM+20％FBS+1％P/S
K-562 RPMI-1640+10％FBS+1％P/S
THP-1 RPMI-1640+10％FBS+0.05mM β-mercaptoethanol+1％P/S
SK-NEP-1 McCoy’s 5A+15％FBS+1％P/S
上表中％均为体积百分比。
(2)热灭活血清
将血清于56摄氏度水浴30分钟即可。
(3)化合物处理
将实施例1-1制备得到的化合物G1(3.13g)，G2(3.25g)分别溶解于DMSO 中配制浓度为30mM的溶液在-20℃下保存待用。阳性对照药为星形孢菌素 (Staurosporine)(购自MedChemExpress(MCE)、产品名称staurosporine、货号 HY-15141)，简称STSP，是一种最初于1977年由细菌霉菌Staurosporeus分离的天然产物。
3.实验方法：
(1)复苏细胞
将需要复苏的细胞从液氮罐内迅速取出，在37℃水浴锅中融化，迅速加入预热的培养基中。1000转/分钟，离心5分钟后将离心管取出，弃去上清液，向离心管内加入新鲜预热的培养基，重悬细胞，然后将细胞悬液加入培养皿中，37℃， 5体积％CO2培养。
(2)细胞传代
细胞传代：贴壁细胞，当细胞长满培养皿80-90％，用0.25％胰酶消化细胞(即由0.25g胰酶加入100mlpbs溶液配制而成)，然后用新的培养基将细胞重悬，将细胞按适当比例传代，约2-3d传代1次。悬浮细胞，收集细胞悬液，800rpm，离心5分钟，去除上清，用新鲜培养基重悬，按照适当比例传代，约2-3d传代1次。
(3)化合物工作液浓度的配制
A.化合物单一浓度测试
根据检测要求，实验当天，将化合物使用DMSO稀释至1mM母液，再用培养基进一步稀释到50uM(5X最终浓度)工作液，化合物的测试浓度为10微摩尔，化合物的孵育时间为72小时。
B.化合物IC50测试
根据检测要求，实验当天，将化合物使用DMSO稀释至1mM母液作为最高浓度，并进行2倍，3倍或5倍梯度稀释，再用培养基将每一个浓度点进一步稀释到5X最终浓度的工作液。
(4)细胞接种及药物处理
检测前1天，根据细胞生长速度将细胞按不同密度接种于96孔细胞板中，每孔接种80μL细胞悬液，37℃，5体积％CO2培养箱，孵育过夜。细胞的具体铺板密度如下表23。
表23细胞具体铺板密度
细胞名称 密度(细胞/孔)
K-562 2000
SK-NEP-1 3000
Jurkat Clone E6-1 15000
AGS 4000
HL-60 8000
SK-NEP-1 3000
95-D 3000
THP-1 15000
OVCAR-3 5000
根据实验要求，每孔加入20μL化合物工作液，37℃，5体积％CO2培养箱，孵育72小时。结束孵育后，按照CTG试剂盒(CTG(celltiter-glo)购自：promega 公司，货号：G7572)操作要求进行检测，得到相应化学发光值，计算细胞活性。计算方法如下：
细胞活率＝加药组RLU值/对照组(溶剂)RLU值×100％
(5)实验结果：
单一浓度10μM的化合物G1和G2的抑制活性如下表24、25：
表24 10μM化合物G1的单一浓度抑制活性
细胞名称 化合物的细胞存活率(％) 对照的细胞存活率(％)
95-D 47.10 2.51
AGS 34.43 3.11
OVCAR-3 49.6 5.15
Jurkat Clone E6-1 7.65 0.93
HL-60 11.2 2.03
K-562 37.25 2.71
THP-1 2.63 1.30
SK-NEP-1 10.65 3.07
表25 10μM化合物G2的单一浓度抑制活性
细胞名称 化合物的细胞存活率(％) 对照的细胞存活率(％)
95-D 46.13 2.51
AGS 35.67 3.11
OVCAR-3 45.33 5.15
Jurkat Clone E6-1 9.07 0.93
HL-60 17.63 2.03
K-562 46.15 2.71
THP-1 3.53 1.30
SK-NEP-1 14.70 3.07
通过上述数据可以看出，本发明化合物G1或者G2在10μM的浓度下对上述癌细胞具有较好的抑制活性，特别是针对Jurkat Clone E6-1和THP-1的抑制率达到90％以上，具有显著的抑瘤活性。
分别对化合物G1、G2和对照药(STSP)进行剂量-效应测试(化合物对癌细胞的抑制活性)，测定的剂量-效应曲线见附图21a至21p和图22a至22p，其中横坐标为浓度，单位为微摩尔，纵坐标为细胞存活率。通过剂量-效应曲线读出化合物G1和G2的IC50值分别如下表26、27所示：
表26化合物G1的IC50值
细胞名称 化合物IC<sub>50</sub> 对照(STSP)
95-D 5.02μM 56.48nM/50.42nM/69.34nM
AGS 4.77μM 6.02nM/5.72nM/5.84nM
OVCAR-3 2.34μM 27.19nM/47.29nM/40.25nM
Jurkat Clone E6-1 1.8μM 14.67nM/11.63nM/12.12nM/12.84nM
HL-60 4.12μM 17.1nM/17.42nM/17.06nM
K-562 >10μM 129nM/212.2nM
THP-1 3.12μM 73.02nM/74.45nM/42.58nM
SK-NEP-1 1.55μM 12.09nM/12.38nM/11.81nM/10.72nM
表27化合物G2的IC50值
细胞名称 化合物IC<sub>50</sub> 对照(STSP)
95-D 3.16μM 56.48nM/50.42nM/69.34nM
AGS 6.42μM 40.35nM/40.41nM
OVCAR-3 2.08μM 48.08nM
Jurkat Clone E6-1 1.68μM 93.13nM/93.32nM
HL-60 5.09μM 14.67nM/11.63nM/12.12nM/12.84nM
K-562 >10μM 6.02nM/5.72nM/5.84nM
THP-1 3.25μM 17.1nM/17.42nM/17.06nM
SK-NEP-1 1.6μM 12.09nM/12.38nM/11.81nM/10.72nM
通过上述活性数据可以看出，本发明化合物G1和G2对肿瘤细胞有一定的抑制活性。抗癌活性显著，可以进一步开发为抗癌药物应用于临床。

Claims (17)

1.一种铂类物质，其特征在于，所述铂类物质为具有如下结构式的G1或G2的化合物或G1和G2的化合物：
Figure FDA0001999874890000011
其中，G1和G2可以互换。
2.权利要求1所述铂类物质的制备方法，经过如下结构式的化合物6制备得到：
Figure FDA0001999874890000012
优选的是，通过化合物6制备所述铂类物质的反应中，将化合物6的溶液与乳酸化合物7反应得到G1和G2的混合物，进一步优选的是，所述化合物6与乳酸化合物7的摩尔比为1:1-2；进一步优选的是，用乳酸化合物7调节体系pH为6.4-6.8；进一步优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃；进一步优选的是，反应时间为72-96小时，优选87小时；
其中，所述乳酸化合物7的结构式如下：
Figure FDA0001999874890000013
3.根据权利要求2所述的制备方法，所述化合物6经过如下结构式的化合物5制备得到：
Figure FDA0001999874890000014
优选的是，通过化合物5制备化合物6的反应中，加入树脂反应，之后过滤得到滤液，洗涤树脂得到洗液，合并滤液和洗液得到含化合物6的溶液进行下一步反应；进一步优选的是，所述树脂是经氢氧化钠水溶液处理的树脂；进一步优选的是，所述氢氧化钠水溶液的浓度为1-2mol/L，进一步优选1.5mol/L；进一步优选的是，加入树脂反应0.5-2小时，进一步优选反应1小时。
4.根据权利要求3所述的制备方法，所述化合物5经过如下结构式的化合物4.1制备得到，优选地经过如下结构式的化合物4制备得到：
Figure FDA0001999874890000021
其中，X代表卤素元素，选自F、Cl、Br或I；
进一步优选的是，通过化合物4.1制备化合物5的反应中，将化合物4.1分散到酮-水混合溶剂中，再加入硝酸银的水溶液，避光反应制得含化合物5的溶液用于下一步反应；进一步优选的是化合物4.1与硝酸银的摩尔比为1:1-2，进一步优选1:1.4-2；
进一步优选的是，所述酮选自丙酮，进一步优选的是，丙酮-水混合溶剂中体积比为丙酮：水＝0-9:1；进一步优选的是反应温度为15-25℃，优选20℃；反应时间为14-18小时，优选16小时。
5.根据权利要求4所述的制备方法，所述化合物4.1经过如下结构式的化合物3制备得到：
Figure FDA0001999874890000022
优选的是，通过化合物3制备化合物4.1的反应中，将化合物3、卤亚铂酸盐或卤亚铂酸盐和碱金属卤化物、和氢氧化物反应制得化合物4.1，进一步优选的是，化合物3和卤亚铂酸盐的摩尔比为1:0.5-2；
进一步优选的是，所述卤亚铂酸盐选自卤亚铂酸钾或卤亚铂酸钠，进一步优选的是，所述卤亚铂酸盐选自氯亚铂酸钾或氯亚铂酸钠，进一步优选氯亚铂酸钾；
进一步优选的是，所述碱金属卤化物选自卤化钾或卤化钠，进一步优选的是，所述碱金属卤化物选自碘化钾或碘化钠，进一步优选碘化钾；
进一步优选的是，所述氢氧化物选自氢氧化钾或氢氧化钠，进一步优选氢氧化钾。
6.根据权利要求5所述的制备方法，所述化合物3经过如下结构式的化合物2制备得到：
Figure FDA0001999874890000031
优选的是，通过化合物2制备化合物3的反应中，将化合物2和草酸的醇溶液反应得到白色固体化合物3，进一步优选的是，将化合物2和草酸的摩尔比为1:0.5-2；进一步优选的是，将反应体系升温至65-75℃反应，进一步优选的是，反应0.5-2小时，进一步优选70℃反应1小时；然后分离出固体加至四氢呋喃溶剂中，于60-70℃继续混合，进一步优选65℃继续混合，经固液分离得到纯化化合物3。
7.根据权利要求6所述的制备方法，所述化合物2经过如下结构式的化合物1制备得到：
Figure FDA0001999874890000032
优选的是，通过化合物1制备化合物2的反应中，向化合物1的四氢呋喃溶液中加入硼烷二甲硫醚反应，进一步优选的是，化合物1和硼烷二甲硫醚的摩尔比为1:5-10；
优选的是，反应分为三个阶段，第一阶段反应温度为-5-5℃，优选0℃，第二阶段反应温度为35-45℃，优选40℃，第三阶段反应温度为60-70℃，优选65℃；进一步优选的是，所述第一阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第二阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第三阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟；进一步优选的是，向反应得到的固体中加入醇，优选正丁醇升温，优选升温至90-110℃，优选100℃。
8.根据权利要求2-7任一项所述制备方法，其中，原料为化合物1：
Figure FDA0001999874890000041
9.根据权利要求2-8任一项所述制备方法，所述制备方法的步骤如下：
Figure FDA0001999874890000042
其中，通过化合物1制备化合物2的反应中，向化合物1的四氢呋喃溶液中加入硼烷二甲硫醚反应；优选的是，反应分为三个阶段，第一阶段反应温度为-5-5℃，优选0℃，第二阶段反应温度为35-45℃，优选40℃，第三阶段反应温度为60-70℃，优选65℃；进一步优选的是，所述第一阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第二阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟，所述第三阶段的反应时间为50-70分钟，优选60分钟；进一步优选的是，向反应得到的固体中加入正丁醇升温，优选升温至90-110℃，优选100℃；
和/或，通过化合物2制备化合物3的反应中，将化合物2和草酸的异丙醇溶液反应得到白色固体化合物3；优选的是，将反应体系升温至65-75℃反应，优选反应0.5-2小时，优选70℃反应1小时；然后分离出固体加至四氢呋喃溶剂中，于60-70℃继续混合，优选65℃继续混合，经固液分离得到纯化化合物3；
和/或，通过化合物3制备化合物4的反应中，将化合物3氯亚铂酸钾、碘化钾和氢氧化钾反应制得化合物4，优选的是，将化合物3和氢氧化钾的水溶液混合得到F液，将氯亚铂酸钾和碘化钾的水溶液混合得到E液，将F液和E液混合反应得到化合物4，优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃，进一步优选的是，反应时间为3-5小时，优选反应4小时；
和/或，通过化合物4制备化合物5的反应中，将化合物4分散到丙酮-水混合溶剂中，再加入硝酸银的水溶液，避光反应制得含化合物5的溶液用于下一步反应；优选的是，丙酮-水混合溶剂中体积比为丙酮：水＝0-9:1反应温度为15-25℃，优选20℃；反应时间为14-18小时，优选16小时；
和/或，通过化合物5制备化合物6的反应中，加入树脂反应，之后过滤得到滤液，洗涤树脂得到洗液，合并滤液和洗液得到含化合物6的溶液进行下一步反应，优选的是，其中所述树脂是经氢氧化钠水溶液处理的树脂，优选氢氧化钠水溶液的浓度为1-2mol/L，进一步优选1.5mol/L；进一步优选的是，加入树脂反应0.5-2小时，进一步优选反应1h；
和/或，通过化合物6制备所述铂类物质的反应中，将化合物6的溶液与乳酸化合物7反应得到G1和G2的混合物，优选的是，用乳酸化合物7调节体系pH为6.4-6.8，进一步优选的是，反应温度为25-35℃，优选30℃；进一步优选的是，反应时间为72-96小时，优选87小时。
10.根据权利要求9所述制备方法，包括如下步骤：将制备得到的化合物G1和G2的混合物，通过液相色谱分离得到化合物G1和化合物G2；优选的是，以NH4HCO3的水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；优选流动相A的浓度为8-12m mol/L，优选10m mol/L；进一步优选的是，采用梯度洗脱，0-17.8min内流动相B的体积由0增加到17.5％，流动相A的体积由100％降低至82.5％。
11.一种权利要求1所述的铂类物质的检测方法，其特征在于，所述方法为HPLC法或HPLC-MS法；
优选的，所述的HPLC法的检测条件为：用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂，以正己烷-乙醇(体积比例为60-70:40-30)为流动相，流速为每分钟0.8-1.5ml，检测波长为208-212nm，柱温为30-40℃，等度洗脱30-50min；优选的是，以正己烷-乙醇(体积比例为63-67:37-33)为流动相，柱温为33-37℃；进一步优选的是，流动相为正己烷-乙醇(体积比例为65:35)，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，柱温为35℃，等度洗脱时间为40min。
12.权利要求1所述的铂类物质在洛铂原料药或者制剂的质量标准中作为有关物质指标进行控制的用途。
13.一种洛铂原料药或制剂的质量检测方法，其包括测定其中影响洛铂质量的有关物质的步骤，所述的有关物质为权利要求1所述的化合物，所述测定其中影响洛铂质量的有关物质采用HPLC法或HPLC-MS法检测；
优选的，所述HPLC法检测条件为：用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂，以正己烷-乙醇(体积比例为60-70:30-40)为流动相，流速为每分钟0.8-1.5ml，检测波长为208-212nm，柱温为30-40℃，等度洗脱30-50min；进一步优选的是，以正己烷-乙醇(体积比例为63-67:37-33)为流动相，柱温为33-37℃；进一步优选的是，流动相为正己烷-乙醇(体积比例为65:35)，流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，柱温为35℃，等度洗脱时间为40min；
进一步优选的是，供试品溶液的色谱图中如果存在有关物质峰，以供试品溶液的1％稀释液为对照溶液，按不加校正因子的主成分自身对照法以峰面积计算，供试品溶液中化合物G1、化合物G2的峰面积总和不得超过对照溶液中主成分峰面积；其中，所述1％指的是对供试品溶液稀释至1％；
进一步优选的是，供试品溶液色谱图中如有有关物质峰，以有关物质标识色谱图中的色谱峰进行定位：化合物G1、G2的相对保留时间为2.40-2.70。
14.一种含有权利要求1所述铂类物质的药物组合物，所述药物组合物为药物制剂，优选所述药物组合物为注射用药物制剂。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中所述药物制剂包括辅料，优选的是，所述辅料选自填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、抗氧化剂和基质中的一种或两种以上；进一步优选的是，所述辅料选自填充剂和/或抗氧化剂。
16.根据权利要求1所述铂类物质或权利要求14或15所述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
17.根据权利要求16所述应用，其中所述肿瘤为肺癌、白血病、胃癌、卵巢癌和/或肾癌细胞，优选为白血病细胞，更优选为Jurkat Clone E6-1和/或THP-1细胞。
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