CN1117051A - 抗癌活性物质火菇素及其提取工艺 - Google Patents
抗癌活性物质火菇素及其提取工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1117051A CN1117051A CN 95110397 CN95110397A CN1117051A CN 1117051 A CN1117051 A CN 1117051A CN 95110397 CN95110397 CN 95110397 CN 95110397 A CN95110397 A CN 95110397A CN 1117051 A CN1117051 A CN 1117051A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- huogu
- mushroom essence
- essence
- dialysis
- huogu mushroom
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Abstract
本发明涉及一种从食用菌中提取的抗癌活性物质火菇素及其提取工艺；火菇素为白色粉末，蛋白等电点PI9.5，分子量24000D，含C36.35％，H6.1％，N16.2％，蛋白N末端氨基酸为缬氨酸；其紫外吸收光谱λman278nm，λmin253～254nm，其抗癌活性剂量为1.25mg/kg-10mg/kg，最高剂量为100mg/kg；采用金针菇子实体或菌丝体于酸化水中提取，滤液去酸性蛋白后，经两次铵盐饱和和冷乙醇分离纯化，再经两次离子交换可得纯品，具有较高的医疗价值。
Description
本发明涉及一种抗癌活性物质火菇素及其提取工艺，更具体的说是从金针菇中提取抑瘤活性物质火菇素，属于从食用菌中提取有机物技术领域。
癌症是一种危害人类健康的绝症，世界各国的专家学者都在积极地研究寻找治癌方法和药物，尤其对食用菌中抗癌物质的研究十分活跃，有关这方面的动物实验及初步临床观察表明食用菌中的多糖和某些蛋白对动物移植肿瘤有较强的抑制作用，能增强机体的免疫功能，减轻放疗、化疗的毒性反应。目前这种免疫疗法越来越被世人所重视，并且逐渐显示出它的优越性。科学家们已经提取出上百种的真菌蛋白、多糖和糖蛋白或多或少地显示出它们潜在的抗癌活性。金针菇作为一种食用菌不仅营养丰富，而且富含多种活性物质，对人体代谢调节与增强免疫能力都有显著作用。而且金针菇可采用微生物方法大量培养其菌丝体，便于大规模工业化生产，降低抗癌药物的成本。
本发明的目的之一是提供一种抗癌活性物质火菇素；
本发明的目的之二是提供一种上述火菇素的提取工艺；
本发明从金针菇子实体或菌丝体的水提液中提纯而得的一种重要的抗癌物质火菇素，其纯品系白色粉末，是一种简单的碱性蛋白，蛋白等电点PI9.5，不含糖，分子量为24000D(SPS-PAGE法)，含C36.35％，H6.1％，N16.2％，蛋白N-末端氨基酸为缬氨酸；其紫外吸收光谱在最大吸收波长λman＝278nm，最小吸收波长λmin＝253～254nm，其红外光谱在3400～3500cm-1，1400～1600cm-1，600cm-1有吸收峰。
本发明火菇素的提取工艺如下：
(1)水提取：干金针菇子实体或菌丝体浸于1.5-2.0倍体积乙酸酸化水中，PH4.5±1.0，8-15℃提取，过滤；
(2)除酸性蛋白：将上述滤液用硫酸调至PH4.0±1，沉淀完全，滤除沉淀；
(3)氨盐饱和及乙醇分离纯化：将(2)中滤液用硫酸铵调至饱和，待沉淀完全后抽滤，滤饼水溶解透析去盐，配成生理盐水，浓度一般在含氯化钠0.75-1％，用冷乙醇配成45％-55％的乙醇溶液，冷过滤，滤液再次加冷乙醇配成70％-80％乙醇溶液，冷置，上述冷乙醇、冷置、冷过滤温度为-20℃±2℃，离心；所得沉淀水溶解透析去乙醇，再次加上述铵盐至饱和，沉淀完全，抽滤，所得沉淀水溶解透析去盐，待用；
(4)离子交换纯化：将(3)中所得溶液经葡聚糖和纤维素层析提纯可得火菇素纯品。
上述步骤(1)的过滤残渣可再次加乙酸酸化水提取，将两次滤液合并使用。这样可提高火菇素的提取率。步骤(4)中所述的提纯，是将所得溶液对0.02M PH6.6磷酸缓冲液透析平衡，离心除去不溶物，上DEAE-Sephad-ex A50离子交换柱，该柱用同样的缓冲液预先平衡过，收集峰值(穿过蜂30ml)液体，即为火菇素活性成份；再对0.005M PH5.6醋酸缓冲液透析平衡，上用同样的缓冲液预先平衡过的CM-Ssephadex C50柱，然后用0.05M-0.1MPH5.6醋酸缓冲液梯度洗脱，所得样品透析去盐后，-15℃以下冻干，即为火菇素纯品。
上述步骤(3)70％-80％乙醇溶液冷置离心后的上清可用来回收乙醇。
将上述的火菇索提取后残渣进一步综合利用，可提取多糖和含多种氨基酸的营养液，可从整体上降低火菇素的制造成本。
本发明火菇素对实验动物移动肿瘤作用试验由山东省医科院完成，实验动物为雄性健康昆明种小鼠，体重20±2克。结果表明，火菇索对小鼠肉瘤S180剂量5mg/kg有明显抑瘤效果，抑瘤率达55.17％(P＜0.02)；对艾氏腹水瘤1.25mg/kg，2.5mg/kg，5mg/kg，10mg/kg均有明显的抑瘤效果。见下表。
表1.火菇素对小鼠S180实体瘤的抑瘤效果
| 组别 | 剂量(mg/kg×10) | 途径 | 动物数始/末 | 体重增长(克) | 瘤重(克 x±SD) | 抑瘤率(％) | P值 |
| 荷瘤对照 | / | ip | 10/10 | +4.01 | 1.45±0.87 | ||
| 荷瘤火菇素 | 2.5mg | ip | 10/10 | +6.05 | 1.04±0.60 | 28.27 | ＞0.05 |
| 荷瘤火菇素 | 5mg | ip | 10/10 | +3.2 | 0.65±0.42 | 55.17 | -0.02 |
表2.火菇素对小鼠艾氏实体瘤的抑瘤效果
| 组别 | 剂量(mg/kg×10) | 途径 | 动物数始/末 | 体重增长(克) | 瘤重(克 x±SD) | 抑瘤率(％) | P值 |
| 荷瘤对照 | / | ip | 12/12 | +7.25 | 1.05±0.42 | ||
| 荷瘤火菇素 | 1.25mg | ip | 12/12 | +4.13 | 0.69±0.39 | 34.28 | ＜0.05 |
| 荷瘤火菇素 | 2.5mg | ip | 12/12 | +3.38 | 0.57±0.31 | 45.71 | ＜0.01 |
| 荷瘤对照 | / | ip | 10/10 | +9.63 | 1.03±0.45 | ||
| 荷瘤火菇素 | 5mg | ip | 10/10 | +5.25 | 0.53±0.25 | 48.54 | ＜0.01 |
| 荷瘤火菇素 | 10mg | ip | 10/10 | +1.78 | 0.56±0.26 | 45.63 | ＜0.01 |
表3.火菇素对小鼠移植艾氏腹水瘤生存期的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg×10) | 途径 | 动物数始/末 | 无瘤动物存活数 | 平均存活天数 | 生命延长率(％) | P值 |
| 荷瘤对照 | / | ip | 10/0 | 0 | 20.00 | ||
| 荷瘤火菇素 | 1.25mg | ip | 10/3 | 3 | 31.40 | 57.00 | ＞0.05 |
| 荷瘤火菇素 | 2.5mg | ip | 10/4 | 4 | 37.50 | 87.50 | ＜0.02 |
| 荷瘤对照 | / | ip | 11/0 | 0 | 18.87 | ||
| 荷瘤火菇素 | 5mg | ip | 11/3 | 3 | 36.25 | 92.10 | ＜0.02 |
| 荷瘤火菇素 | 10mg | ip | 11/3 | 3 | 38.63 | 104.72 | ＜0.01 |
表4.火菇素对艾氏腹水瘤小鼠胸腺、脾重量的影响
与荷瘤对照组比ΔP＜0.01
| 组别 | 剂量(mg/kg×10) | 途径 | 动物数始/末 | 胸腺重(mg/10g x±SD) | 脾脏重(mg/10g x±SD) |
| 荷瘤对照 | / | ip | 12/12 | 25.69±3.64 | 60.82±17.73 |
| 荷瘤火菇素 | 1.25mg | ip | 12/12 | 29.85±4.01 | 69.83±11.29 |
| 荷瘤火菇素 | 2.5mg | ip | 12/12 | 27.87±2.98 | 68.04±13.99 |
| 荷瘤对照 | -/ | ip | 10/10 | 18.98±4.43 | 57.43±11.74 |
| 荷瘤火菇素 | 5mg | ip | 10/10 | 20.02±4.06 | 61.02±18.26 |
| 荷瘤火菇素 | 10mg | ip | 10/10 | 20.13±3.78 | 84.42±17.30 |
火菇素动物实验毒理学观察结果表明，在药物剂量1.25mg/kg，2.5mg/kg，5mg/kg，10mg/kg(是LD50量的1/10-1/50)，实验过程中未发现有毒副反应，而各组实验动物体重有不同程度的增加，动物解剖也未见异常。因此，本发明认为该火菇素的抗癌活性剂量(动物实验)为1.25mg/kg-10mg/kg，最高剂量为100mg/kg。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1是本发明火菇素的红外光谱，横坐标是波数，单位cm-1，纵坐标是透射率(％)，从图中可见火菇素红外光谱在3400～3500cm-1，1400～1600cm-1，600cm-1有吸收峰。
图2是本发明火菇素的提取工艺流程图，其中，A.干金针菇子实体或菌丝体原料，1.酸化水水提取，B.过滤，2.残渣，3.滤液，4.残渣二次水提取，5.残渣，6.滤液，C.两次滤液合并，7.除酸性蛋白，8.硫铵饱和，9.滤液弃去，10.滤饼，D.水溶解透析去盐，11.配成生理盐水，12.加冷乙醇配成45-55％的乙醇溶液，E.冷置，13.冷过滤，14.沉淀弃去，15.滤液，F.加冷乙醇配成70-80％的乙醇溶液冷置，16.离心，17.上清，18.回收乙醇19.沉淀，G.水溶解透析去乙醇，20.硫铵饱和，H.放置，21.抽滤，22.滤液弃去，23.沉淀，I.水溶解透析去铵盐，24.磷酸缓冲液透析平衡，离心，25.不溶物弃去，26.上清液，27.DEAE-Sephadex柱，K.收集峰值液体，28.醋酸缓冲液透析平衡，29.CM-Sephadex柱，L.醋酸缓冲液梯度洗脱，30.样品，M.冻干，Z.火菇素纯品。
实施例1.如图2所示，风干金针菇子实体原料2Kg，剪碎，加入1.5倍体积的乙酸酸化水，PH4.5，10℃，缓慢搅拌，提取20小时，用纱布挤滤；组织残渣加入1000ml乙酸酸化水中再次提取2小时，挤滤，滤液与上合并；用2.5mol/L硫酸调PH至4.0，放置4小时，折叠滤纸过滤，沉淀弃去，滤液加入粉状硫酸铵使溶液至0.70饱和度，放置12小时，抽滤，滤液弃去，滤饼压干约35克，加50ml蒸馏水溶解，透析48小时去盐，加固体氯化纳配成0.85％百分浓度的生理盐水，加-20℃98％乙醇使成50％乙醇溶液，-20℃放置12小时，过滤，滤饼弃去，滤液加乙醇成75％乙醇溶液，-20℃放置12小时，3000rpm离心5分钟；上清回收乙醇，沉淀6克加20ml蒸馏水溶解，透析24小时去乙醇，加粉末固体硫酸铵至0.70饱和度，放置12小时，抽滤，滤液弃去，沉淀加5ml蒸馏水溶解，透析去硫铵；然后对0.02M PH6.6磷酸缓冲液透析平衡，10,000rpm，10分钟离心，除去不溶物，上清液经过0.02M PH6.6磷酸缓冲液平衡DEAE-Sephadex A50离子交换柱，收集峰值(穿过峰30ml)液体，即为火菇素活性成份；再对0.005M PH5.6醋酸缓冲液透析平衡，上用同样的缓冲液预先平衡过的CM-Sephadex C50柱，然后用0.05M PH5.6醋酸缓冲液梯度洗脱，所得样品100mg，透析去盐后，-18℃冻干，即为火菇素纯品，提取率约0.005％。
实施例2.如实施例1所述，所不同的是：
原料干金针菌丝体4.5Kg，加入2倍酸化水提取，PH5.0，15℃提取24小时，残渣加入2000ml乙酸酸化水中再次提取2小时，硫酸调PH4.5，余者同实施例1，得火菇素135mg，收率为0.003％。
以金针菇菌丝体为原料提取工艺与金针菇子实体相同，收率是子实体的3/5，但菌丝体可用连续发酵方式工业化生产，周期短，成本低。本发明火菇素作为一种抗癌活性物质具有重要的医疗价值，本发明的提取工艺采用金针菇子实体或菌丝体为原料，便于工业化大生产，以降低成本。
Claims (4)
1.一种抗癌活性物质火菇素，其特征在于，是一种白色粉末碱性蛋白，蛋白等电点PI9.5，分子量24000D，含C36.35％，H6.1％，N16.2％，蛋白N-末端氨基酸为缬氨酸；其紫外吸收光谱最大吸收波长λman＝278nm，最小吸收波长λmin＝253～254nm，其红外光谱在3400～3500cm-1，1400～1600cm-1，600cm-1有吸收峰；其抗癌活性剂量为1.25mg/kg-10mg/kg，最高剂量为100mg/kg。
2.一种如权利要求1所述的火菇素的提取工艺，其特征在于，步骤如下：
(1)水提取：干金针菇子实体或菌丝体浸于1.5-2.0倍体积乙酸酸化水中，PH4.5±1.0，8-15℃提取，过滤；
(2)除酸性蛋白：将上述滤液用硫酸调至PH4.0±1，沉淀完全，滤除沉淀；
(3)氨盐饱和及乙醇分离纯化：将(2)中滤液用硫酸铵调至饱和，待沉淀完全后抽滤，滤饼水溶解透析去盐，配成生理盐水，浓度一般在含氯化钠0.75-1％，用冷乙醇配成45％-55％的乙醇溶液，冷过滤，滤液再次加冷乙醇配成70％-80％乙醇溶液，冷置，上述冷乙醇、冷置、冷过滤温度为-20℃±2℃，离心；所得沉淀水溶解透析去乙醇，再次加上述铵盐至饱和，沉淀完全，抽滤，所得沉淀水溶解透析去盐，待用；
(4)离子交换纯化：将(3)中所得溶液经葡聚糖和纤维素层析提纯可得火菇素纯品。
3.如权利要求2所述的火菇素的提取工艺，其特征在于，步骤(1)的过滤残渣再次加乙酸酸化水中提取，两次滤液合并待用。
4.如权利要求2所述的火菇素的提取工艺，其特征在于，步骤(4)中所述的提纯是将所得溶液对PH6.6磷酸缓冲液透析平衡，离心除不溶物，上DEAE-Sephadex A50离子交换柱，该柱用同样的缓冲液预先平衡过，收集峰值液体为火菇素活性成份，再对PH5.6醋酸缓冲液透析平衡，上用同样的缓冲液预先平衡过的CM-Sephadex C50柱，然后用同样的缓冲液梯度洗脱，所得样品透析去盐后，冻干，即为火菇素纯品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 95110397 CN1053197C (zh) | 1995-03-28 | 1995-03-28 | 火菇素提取工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 95110397 CN1053197C (zh) | 1995-03-28 | 1995-03-28 | 火菇素提取工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1117051A true CN1117051A (zh) | 1996-02-21 |
| CN1053197C CN1053197C (zh) | 2000-06-07 |
Family
ID=5077788
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 95110397 Expired - Lifetime CN1053197C (zh) | 1995-03-28 | 1995-03-28 | 火菇素提取工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1053197C (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103285046A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285043A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 具有抗肿瘤功效的食用真菌蛋白质提取物的制备方法 |
| CN103285041A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 朱红密孔菌蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285047A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 长根菇蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
-
1995
- 1995-03-28 CN CN 95110397 patent/CN1053197C/zh not_active Expired - Lifetime
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103285046A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285043A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 具有抗肿瘤功效的食用真菌蛋白质提取物的制备方法 |
| CN103285041A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 朱红密孔菌蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285047A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-11 | 北京市农林科学院 | 长根菇蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285046B (zh) * | 2013-05-30 | 2015-02-04 | 北京市农林科学院 | 毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285047B (zh) * | 2013-05-30 | 2015-02-04 | 北京市农林科学院 | 长根菇蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285041B (zh) * | 2013-05-30 | 2015-05-27 | 北京市农林科学院 | 朱红密孔菌蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 |
| CN103285043B (zh) * | 2013-05-30 | 2016-01-20 | 北京市农林科学院 | 具有抗肿瘤功效的食用真菌蛋白质提取物的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1053197C (zh) | 2000-06-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100858569B1 (ko) | 버섯으로부터의 생리활성 추출물 eem-s, 그의 제조 방법 및 의약 | |
| CN1102993A (zh) | 多酶体系加工中草药的制剂方法 | |
| CN101560267B (zh) | 一种多糖亚硒酸酯的制备方法 | |
| CN100336833C (zh) | 土党参多糖、衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN1053197C (zh) | 火菇素提取工艺 | |
| CN112225827A (zh) | 一种灰树花活性多糖的提取方法及提取的活性多糖和用途 | |
| PT753582E (pt) | Imunopotenciador e processo para o fabrico do mesmo | |
| CN1056751C (zh) | 知石清解注射液 | |
| CN1227267C (zh) | 螺旋藻多糖及其提取方法和在制备升白和抗癌药物中的用途 | |
| CN105906738B (zh) | 一种鸡冠花中提取分离多糖的方法 | |
| CN106954855A (zh) | 一种抗癌复合真菌多糖及其制备方法 | |
| CN101037469A (zh) | 从毛蚶中提取小分子活性多肽的方法 | |
| CN1695686A (zh) | 贞芪扶正注射用制剂及其制备方法 | |
| CN1486743A (zh) | 一种中药注射剂及其生产工艺 | |
| CN1067243C (zh) | 治疗心血管疾病的药用制剂 | |
| CN1160538A (zh) | 香菇多糖注射液及其制备方法 | |
| CN1398630A (zh) | 降血糖活性的白术糖复合物、生产方法和用途 | |
| CN1274596A (zh) | 复方蜂毒搽剂及其制备方法 | |
| CN109400686A (zh) | 一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法及其在肥胖或相关疾病中的应用 | |
| CN100400048C (zh) | 锦灯笼多糖在制备治疗糖尿病药物和保健品中的应用 | |
| CN106265773B (zh) | 灵芝孢子粉糖肽提取物及其制备方法与用途 | |
| CN113666986B (zh) | 膜处理结合高效液相色谱制备高纯度组氨酸二肽的工艺 | |
| CN113637089B (zh) | 一种醇水两溶性党参葡果聚糖、制备工艺及抗肿瘤应用 | |
| CN112625085B (zh) | 一种牛大力叶蛋白及其提取方法 | |
| CN1097465C (zh) | 抗疲劳组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CX01 | Expiry of patent term |
Expiration termination date: 20150328 Granted publication date: 20000607 |