CN111693714A - 新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒及其应用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸依次粘贴在反应支持物上，样品垫的一端压覆胶体金垫的一端，胶体金垫的另一端压覆硝酸纤维素膜的一端，吸水滤纸压覆硝酸纤维素膜的另一端，胶体金垫为含有胶体金标记的新型冠状病毒重组S抗原蛋白、重组N抗原蛋白和鼠IgG蛋白的胶体金垫。本发明还提供了上述检测试剂盒的应用方法。本发明可作为新型冠状病毒抗原检测的补充，减少漏检；不对任何实验仪器、环境或人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读，便于随时随地的监测和检验。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒及其应用方法。
背景技术
新型冠状病毒是一类传染性很强的病毒，可引起严重的肺炎，该病毒的世界性大流行给人类的健康、生活和社会正常运行带来了极大危害，已经成为当前医学领域的主要研究对象。由于目前尚无特效的抗病毒治疗药物，因此对病人进行及时的确诊的收治，对于遏制病毒的扩散，以及后续消灭该病毒，具有极为重要的现实意义。目前，现有的新型冠状病毒检测试剂盒存在检测耗时长，操作步骤繁琐等问题。因此迫切开发一种快速检测新型冠状病毒的试剂盒。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明提供了新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒及其应用方法，目的在于为了解决现有的新型冠状病毒检测试剂盒存在检测耗时长，操作步骤繁琐等技术问题。
本发明提供了新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，具体技术方案如下：
新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；
所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水滤纸依次粘贴在所述反应支持物上，所述样品垫的一端压覆所述胶体金垫的一端，所述胶体金垫的另一端压覆所述硝酸纤维素膜的一端，所述吸水滤纸压覆所述硝酸纤维素膜的另一端，
所述胶体金垫为含有胶体金标记的新型冠状病毒重组S抗原蛋白、重组N抗原蛋白和鼠IgG抗原蛋白的胶体金垫。
在某些实施方式中，所述硝酸纤维素膜设置有第一检测条带、第二检测条带和质控条带，所述第一检测条带、第二检测条带位于所述硝酸纤维素膜靠近所述胶体金垫的一侧，所述第一检测条带含有抗人IgG单克隆抗体，所述第二检测条带含有抗人IgM单克隆抗体，所述质控条带位于所述硝酸纤维素膜远离所述胶体金垫的一侧，且含有羊抗鼠IgG多克隆抗体。
在某些实施方式中，所述第一检测条带、所述第二检测条带和所述质控条带的长度均为0.35-0.4cm，宽度均为0.5-1mm，所述第一检测条带和所述第二检测条带的间距、所述第二检测条带和所述质控条带的间距均为3.5-4mm。
在某些实施方式中，所述结合有抗原的胶体金中胶体金颗粒的直径为20-50nm。
在某些实施方式中，所述反应支持物的材质为塑料。
本发明还提供了新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒的应用方法，基于上述的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，包括如下步骤：
1.将待检样本进行稀释液处理，获得处理样本；
2.将步骤1中处理样本滴加至样品垫上，所述处理样本将依次沿着反应支持物上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动；
3.若所述处理样本中含有新型冠状病毒IgG抗体和IgM抗体，在经过所述胶体金垫的过程中，与所述胶体金垫标记的新型冠状病毒重组S抗原蛋白、重组N抗原蛋白特异性结合形成复合物；所述复合物在经过所述硝酸纤维素膜的过程中，依次与抗人IgG单克隆抗体、抗人IgM单克隆抗体特异性结合，则第一检测条带和第二检测条带处出现红色或紫红色，说明所述待测样本为阳性；若所述处理样本中不含有新型冠状病毒的IgM/IgG抗体，则第一检测条带和第二检测条带未出现红色或紫红色，样本为阴性；而胶体金标记的鼠IgG抗原蛋白继续前进与羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，质控条带处出现红色或紫红色；
4.如果质控条带处出现红色或紫红色，则表明胶体金标记的鼠IgG抗原蛋白与羊抗鼠IgG多克隆抗体正常结合，实验结果有效；如果质控条带处未出现红色或紫红色，则表明胶体金失效或者实验操作有误，实验结果无效。
在某些实施方式中，步骤1中，所述待检样本为血清、血浆或全血；所述稀释处理中的样品稀释液为生理盐水。
本发明具有以下特点：新冠病毒感染会导致机体产生免疫应答，并产生病毒特异性抗体，因此对血液样本(血清、血浆或全血)中的病毒特异性抗体进行检测。本发明提供的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，能够简化新型冠状病毒的检测流程。本发明的检测试剂盒检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，适应性强，检测周期短，易于判读，便于随时随地的监测和检验。
附图说明
图1是本发明的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒的正视图；
图2是本发明的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒的侧视图；
图3是本发明的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒检测结果阳性示意图；
图4是本发明的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒检测结果阴性示意图；
图5是本发明的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒结果无效示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图1-5，对本发明进一步详细说明。
本发明实施方式为针对新型冠状病毒IgM/IgG抗体的具体检测方式，其他亚型的检测方法，在制得合适的抗原后均可以按照以下思路得到检测方法。
本发明提供的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒由吸水滤纸1、硝酸纤维素膜2、胶体金垫3、样品垫4和反应支持物5组成。样品垫4、胶体金垫3、硝酸纤维素膜2和吸水滤纸1依次粘贴在反应支持物5上，样品垫4的一端压覆胶体金垫3的一端，胶体金垫3的另一端压覆硝酸纤维素膜2的一端，吸水滤纸1压覆硝酸纤维素膜2的另一端。优选的，反应支持物5可以为塑料胶板。吸水滤纸1可以防止样本在硝酸纤维素膜2的一端堆积，从而导致后续的样本无法继续前行，进而能够使反应充分。优选的，硝酸纤维素膜2包括分别含有抗人IgM单克隆抗体和抗人IgG单克隆抗体的第一检测条带T1和第二检测条带T2，以及含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控条带C。胶体金垫3含有胶体金标记的新型冠状病毒重组S抗原蛋白、重组N抗原蛋白和鼠IgG蛋白。设有第一检测条带T1、第二检测条带T2和质控条带C的硝酸纤维素膜2粘贴在反应支持物5上。
优选地，第一检测条带G、第二检测条带M和质控条带C的长度均为0.35-0.4cm，宽度均为0.5-1mm，第一检测条带G和第二检测条带M的间距、第二检测条带M和质控条带C的间距均为3.5-4mm。
优选地，本发明的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒中，在结合物区中所述结合有抗原的胶体金中胶体金的颗粒的直径为20-50nm。胶体金可以为通过本领域常规方法制备的胶体金，例如，胶体金的制备方法可以为柠檬酸三钠还原法。
上述用于抗原结合的胶体金可以采用以下手段制得：采用柠檬酸三钠还原法，取质量分数为0.01％的氯金酸水溶液100mL，加热至沸腾，快速加入1.75mL的1％柠檬酸三钠，反应10min冷却后将溶液倒入洁净玻璃器皿，采用分光光度计测定制备的胶体金的最大吸收峰值，于4℃存放备用。
此外，本发明的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒可以通过将含有结合有抗原的胶体金溶液涂覆在硝酸纤维膜2上面制备。
本发明提供的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒的制备方法，具体步骤如下：
(1)胶体金溶液(100mL)中加入2mL碳酸钾溶液(0.1mol/L)并搅拌均匀，再向其中加入1mg新型冠状病毒S1抗原蛋白，反应15min后再向其中加入10％牛血清白蛋白溶液10mL，封闭10min，将上述抗体标记好的胶体金溶液转移至离心管中，4℃10000r/min，离心半径为10cm，离心30min，弃除上清液，加入3mL的pH为8.2的PBS(0.02mol/L，含1％牛血清白蛋白)溶液来复溶沉淀，4℃保存备用。采用相同方法对新型冠状病毒N抗原蛋白和鼠IgG蛋白进行胶体金标记。其中，所述胶体金溶液中胶体金颗粒的直径为20-50nm；
(3)在支持物板上一端顺次相互搭接地贴附样品垫4、结合物垫、硝酸纤维素膜2和吸水纸制成试纸基板；
(4)通过三维平面划膜仪在纸质基板上的硝酸纤维素膜2上包被T1、T2和C线：其中，C线为羊抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.5mg/mL；T1线为鼠抗人IgM单克隆抗体，T2线为鼠抗人IgG单克隆抗体，，浓度为1mg/mL；
(5)将试纸基板切成3.5-4mm宽的试纸条。
为了能够达到检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的目的，需要选用合适的稀释液配方，本实例中使用的是生理盐水作为样品处理液。
将50～100ul的待检样品处理液直接滴加至检测试剂盒样品垫4，此时样品将依次沿着反应支持物5上的各个附着物向吸水滤纸1的方向移动，15分钟内读取实验结果。
如果待检样本(血清、血浆或全血)中含有的新型冠状病毒IgM/IgG抗体时，则分别与检测试剂盒上的胶体金标记的新型冠状病毒重组S抗原蛋白、重组N抗原蛋白特异性结合形成复合物，而后继续前行，与包被在硝酸纤维素膜2上的抗人IgM单克隆抗体和抗人IgG单克隆抗体发生特异性结合，在第一检测条带T1和第二检测条带T2处出现红色或者紫红色，即检测线，表明待检样品中含有新型冠状病毒IgM/IgG抗体，为阳性，而胶体金标记的鼠IgG蛋白继续前进与羊抗鼠IgG多克隆抗体正常结合，质控条带C处出现红色或者紫红色，参照图3。
如果待检样本中含有的不含有新型冠状病毒IgM/IgG抗体，就不能形成足量复合物，第一检测条带T1和第二检测条带T2处也就不能出现红色或紫红色，为阴性，而胶体金标记的鼠IgG蛋白与羊抗鼠IgG多克隆抗体正常结合，质控条带C处出现红色或者紫红色，参照图4。
无论样本中是否含有新型冠状病毒IgM/IgG抗体，上述胶体金标记的鼠IgG蛋白都会继续前行至质控条带C并与此处包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，形成红色或者紫红色条带，即为质控线。如果在检测质控线中不出现，则证明胶体金失效或者操作有失误，结果无效，需要重新检测，参照图5。
本实施方式中，新型冠状病毒重组S抗原蛋白和重组N抗原蛋白由近岸蛋白质科技有限公司生产；羊抗人IgM单克隆抗体、羊抗人IgG单克隆抗体、鼠IgG、羊抗鼠IgG多克隆抗体由杭州博岳生物技术有限公司生产；
本发明提供的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，能够简化血液样本中新型冠状病毒IgM/IgG抗体的检测流程。利用该种检测试剂盒检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体，不对任何实验仪器、环境或者操作人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。
上述仅本发明较佳可行实施例，并非是对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的技术人员，在本发明的实质范围内，所作出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；
所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水滤纸依次粘贴在所述反应支持物上，所述样品垫的一端压覆所述胶体金垫的一端，所述胶体金垫的另一端压覆所述硝酸纤维素膜的一端，所述吸水滤纸压覆所述硝酸纤维素膜的另一端，
所述胶体金垫为含有胶体金标记的新型冠状病毒重组S抗原蛋白、重组N抗原蛋白和鼠IgG蛋白的胶体金垫。
2.根据权利要求1所述新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜设置有第一检测条带、第二检测条带和质控条带，所述第一检测条带、第二检测条带位于所述硝酸纤维素膜靠近所述胶体金垫的一侧，所述第一检测条带含有抗人IgG单克隆抗体，所述第二检测条带含有抗人IgM单克隆抗体，所述质控条带位于所述硝酸纤维素膜远离所述胶体金垫的一侧，且含有羊抗鼠IgG多克隆抗体。
3.根据权利要求2所述新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述第一检测条带、所述第二检测条带和所述质控条带的长度均为0.35-0.4cm，宽度均为0.5-1mm，所述第一检测条带和所述第二检测条带的间距、所述第二检测条带和所述质控条带的间距均为3.5-4mm。
4.根据权利要求1所述新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述结合有抗原的胶体金中胶体金颗粒的直径为20-50nm。
5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述反应支持物的材质为塑料。
6.新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒的应用方法，基于权利要求1-5任一项所述的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，包括如下步骤：
S1，将待检样本进行稀释液处理，获得处理样本；
S2，将步骤S1中处理样本滴加至样品垫上，所述处理样本将依次沿着反应支持物上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动；
S3，若所述处理样本中含有新型冠状病毒IgG抗体和IgM抗体，在经过所述胶体金垫的过程中，与所述胶体金垫标记的新型冠状病毒S1重组抗原蛋白、N重组抗原蛋白特异性结合形成复合物；所述复合物在经过所述硝酸纤维素膜的过程中，依次与抗人IgG单克隆抗体、抗人IgM单克隆抗体特异性结合，则第一检测条带和第二检测条带处出现红色或紫红色，说明所述待测样本为阳性；若所述处理样本中不含有新型冠状病毒的IgM/IgG抗体，则第一检测条带和第二检测条带未出现红色或紫红色，样本为阴性；而胶体金标记的鼠IgG抗原蛋白继续前进与羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，质控条带处出现红色或紫红色；
S4，如果质控条带处出现红色或紫红色，则表明胶体金标记的鼠IgG抗原蛋白与羊抗鼠IgG多克隆抗体正常结合，实验结果有效；如果质控条带处未出现红色或紫红色，则表明胶体金失效或者实验操作有误，实验结果无效。
7.根据权利要求6所述的新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤S1中，所述待检样本为血清、血浆或全血；所述稀释处理中的样品稀释液为生理盐水。
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