CN111619839B - 一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，通过S1精液预稀释、S2精液冻存基础液的配置、S3精液冻存Ⅰ液的配置、S4精液冻存Ⅱ液的配置、S5鲜精灌装液的配置、S6手动灌装、S7精液冷冻等步骤，从而完成细管冻精生产中精液手动罐装的整个过程。本发明一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，方便快捷，效率高，可靠性高，价格便宜，非常适合于广大的中小型畜牧企业使用。
Description
技术领域
本发明涉及精液生产技术领域，具体为一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法。
背景技术
猪的人工受精技术已经广泛的应用，其所用的精液多为液态保存的精液，但以液态保存精液不适于长途运输，并不能充分利用优良的种公猪，这就需要冻精来解决。冻精可以使优良基因得到永久保存，延长公猪使用年限。公猪个体的原因如：死亡、采精间隔、繁殖不育、损失的限制被打破，能更好的使优秀的公猪和较多的母猪配种以便获得更大的遗传进展。冻精在引种尤其是引入国外品种上有着非常大的优势，冻精使时间和地理位置上的差异的影响消除，其可节省外汇的支出，保证了生物安全，有利于人工受精体系的完善。随着全国性、区域性联合育种工作和保种工作的深入开展，猪的冷冻精液技术研究越来越显得重要。
精液自动罐装目前仅在一些大型养殖企业中得到了应用，并没有得到普及其主要原因是价格过高，一台国产的低性能罐装机价格都在20万元之上，进口的高性能灌装机价格更贵价格在60万以上。这让很多小型养殖企业，科研工作者望而却步。目前的自动罐装设备一般都比较大，其不便于携带和运输，这让很多经常需要到实地操作的保种育种科研工作者无比的头疼。同时，自动罐装设备可靠性也有待考证，其若出现损坏将带来高额的维修费用。因此，研发一种性价比高、可靠性好的细管冻精生产中精液手动罐装方法，是十分有必要的。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，以解决以上缺陷。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，包括以下步骤：
S1、精液预稀释：取BTS标准液，并添加庆大霉素300mg/L，配置成精液预稀释液，将取回来的鲜精液与精液预稀释液，按照体积比1：（0.5～2）进行预稀释，然后将稀释后的精液放置于23℃的环境中平衡0.5～2h，待稀释的精液温度稳定后，再放置于17℃的恒温箱中放置2～3h，直至稀释后的精液温度稳定至17℃，从而完成鲜精液的预稀释，制得鲜精稀释液；
S2、精液冻存基础液的配置：取葡萄糖、柠檬酸、Tris若干量，加水定容至100mL，并添加少量卡那霉素，放置于磁力搅拌器上充分混匀，制得精液冻存基础液；
S3、精液冻存Ⅰ液的配置：取新鲜的去除蛋清的鸡蛋黄若干，用滤纸折叠包裹，并用力致卵黄膜破裂，使卵黄流出到事先准备好的量筒中，将卵黄与S2步骤制得的精液冻存基础液，按照体积比1：（2～4）混合，并放置于磁力搅拌器上搅拌20～40min，最后置于17℃的恒温箱中，待混合液温度稳定后，即制得精液冻存Ⅰ液；
S4、精液冻存Ⅱ液的配置：取精液冻存Ⅰ液定量，并添加甘油、磷酸酯渗透剂适量，放置于磁力搅拌器上搅拌混匀后，再放置于4℃的冰箱中降温至4℃备用，从而制得精液冻存Ⅱ液；
S5、鲜精灌装液的配置：取S1步骤制得的鲜精稀释液适量，放入大容量离心机中，于800g条件下离心10～20min，然后去除上清液，再根据计算公式添加适量精液冻存Ⅰ液充分混匀后移入集精瓶中，并放入4℃的冰箱中水浴降温2～4h；最后从冰箱中取出，并等体积加入精液冻存Ⅱ液，轻轻摇匀，放入4℃的冰箱中备用，即制得鲜精灌装液；
S6、手动灌装：将S5步骤制得的鲜精灌装液，从冰箱中取出，利用灌装器吸满鲜精灌装液，并将灌装器前端插入麦管无棉花端，然后轻推灌装器，使灌装器内的鲜精灌装液缓慢进入麦管内，直至灌装器内的鲜精灌装液与麦管前端的棉花相接触，而灌装器受到阻力为止停止灌装；
S7、精液冷冻：将S6步骤中灌装好鲜精灌装液的麦管的非棉花端进行封口，并将封好口的麦管放入程序冷冻仪中进行冷冻，从而完成细管冻精生产中精液手动罐装的整个过程。
优选地，在S1步骤中，所述BTS标准液的组分包括：葡萄糖37g/L，EDTA 1.25g/L，柠檬酸钠6g/L，碳酸氢钠1.25 g/L，氯化钾0.75 g/L，余量为水。
优选地，在S2步骤中，以加水定容制备100mL精液冻存基础液计算，所述精液冻存基础液的原料包括：葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48 g、Tris2.42g、卡那霉素微量。
优选地，在S3步骤中，所述卵黄与精液冻存基础液的体积比为1：4。
优选地，在S4步骤中，以体积份计，所述精液冻存Ⅱ液的原料包括：精液冻存Ⅰ液400份、甘油24份、磷酸酯渗透剂6份。
优选地，在S5步骤中，所述计算公式为：V=（V1*φ*ρ*Λ）/2，其中，V为加入的精液冻存Ⅰ液的体积；V1为离心前的鲜精稀释液的体积，单位为mL；φ为鲜精稀释液中的鲜精液的体积百分比浓度；ρ为鲜精液的密度，单位为亿/mL；Λ为鲜精液的活力。
优选地，在S6步骤中，所述灌装器，包括注射器、点胶针头、硅胶垫片，所述硅胶垫片于点胶针头上部穿刺而过，并与注射器组装在一起。
优选地，在S6步骤中，所述灌装器，包括注射筒、活塞组件、注射针头组件，所述注射筒前端设置有喇叭形口颈，所述喇叭形口颈前端设置有圆管形连接端；所述活塞组件，包括活塞柄、活塞杆、活塞片，所述活塞柄、活塞片分别设置在活塞杆的两端，所述活塞片的前端设置有与喇叭形口颈相适配的喇叭形堵塞，所述喇叭形堵塞前端设置有圆柱形堵塞，所述活塞片、喇叭形堵塞、圆柱形堵塞设置在注射筒内；所述注射针头组件，包括针栓、针梗，所述针栓安装在圆管形连接端上，所述针梗外壁上设置有环形硅胶片，所述环形硅胶片上设置有环形槽，所述针梗前端设置有锥形台状针尖，所述锥形台状针尖顶端设置连通针梗和针栓的内通孔，所述锥形台状针尖外壁上设置有多个连通内通孔的旁通孔。
优选地，所述针栓一端设置有外凸的环形限位片。
优选地，所述针栓、针梗、锥形台状针尖、环形限位片、以及环形硅胶片，均采用硅胶制成。
本发明的有益效果在于：
本发明一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，步骤简单、便捷，通过对鲜精液的稀释、以及精液冻存基础液、精液冻存Ⅰ液、精液冻存Ⅱ液的混匀处理，提高精液在细管冻存、及解冻后的活力；通过灌装器对鲜精灌装液在麦管中进行手动灌装，方便快捷，可靠性高；同时灌装器结构简单，方便携带，不易损坏，非常适合于经常需要到实地操作的保种育种科研工作者，避免高额的维修费用。本发明一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，方便快捷，效率高，可靠性高，价格便宜，非常适合于广大的中小型畜牧企业使用。
附图说明
图1：本发明实施例中的灌装器结构示意图。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员理解，下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：
一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，包括以下步骤：
S1、精液预稀释：取BTS标准液，并添加庆大霉素300mg/L，配置成精液预稀释液，将取回来的鲜精液与精液预稀释液，按照体积比1：0.5进行预稀释，然后将稀释后的精液放置于23℃的环境中平衡0.5h，待稀释的精液温度稳定后，再放置于17℃的恒温箱中放置3h，直至稀释后的精液温度稳定至17℃，从而完成鲜精液的预稀释，制得鲜精稀释液；上述BTS标准液的组分包括：葡萄糖37g/L，EDTA 1.25g/L，柠檬酸钠6g/L，碳酸氢钠1.25 g/L，氯化钾0.75 g/L，余量为水。
S2、精液冻存基础液的配置：取葡萄糖、柠檬酸、Tris若干量，加水定容至100mL，并添加少量卡那霉素，放置于磁力搅拌器上充分混匀，制得精液冻存基础液；以加水定容制备100mL精液冻存基础液计算，所述精液冻存基础液的原料包括：葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48 g、Tris2.42g、卡那霉素微量。
S3、精液冻存Ⅰ液的配置：取新鲜鸡蛋若干，用酒精棉球擦拭鸡蛋表面进行消毒，取镊子敲击鸡蛋尖口部位在其上拨出一大小适当的小口，并用镊子沿着小口缓慢的剥去其余的蛋壳直至剩下蛋黄，把蛋黄放到滤纸上吸干蛋黄上剩余的蛋清，再把蛋黄转移到另一张滤纸上，使滤纸折叠包裹蛋黄，后轻轻用力使卵黄膜破裂，使卵黄流出到事先准备好的量筒中，将卵黄与S2步骤制得的精液冻存基础液，按照体积比1：3混合，并放置于磁力搅拌器上搅拌20min，最后置于17℃的恒温箱中，待混合液温度稳定后，即制得精液冻存Ⅰ液。
S4、精液冻存Ⅱ液的配置：取精液冻存Ⅰ液定量，并添加甘油、磷酸酯渗透剂适量，放置于磁力搅拌器上搅拌混匀后，再放置于4℃的冰箱中降温至4℃备用，从而制得精液冻存Ⅱ液；以体积份计，所述精液冻存Ⅱ液的原料包括：精液冻存Ⅰ液400份、甘油24份、磷酸酯渗透剂6份。
S5、鲜精灌装液的配置：取S1步骤制得的鲜精稀释液适量，放入大容量离心机中，于800g条件下离心10min，然后去除上清液，再根据计算公式添加适量精液冻存Ⅰ液充分混匀后移入集精瓶中，并放入4℃的冰箱中水浴降温4h；最后从冰箱中取出，并等体积加入精液冻存Ⅱ液，轻轻摇匀，放入4℃的冰箱中备用，即制得鲜精灌装液；
所述计算公式为：V=（V1*φ*ρ*Λ）/2，其中，V为加入的精液冻存Ⅰ液的体积；V1为离心前的鲜精稀释液的体积，单位为mL；φ为鲜精稀释液中的鲜精液的体积百分比浓度；ρ为鲜精液的密度，单位为亿/mL；Λ为鲜精液的活力。
S6、手动灌装：将S5步骤制得的鲜精灌装液，从冰箱中取出，利用灌装器吸满鲜精灌装液，并将灌装器前端插入麦管无棉花端，然后轻推灌装器，使灌装器内的鲜精灌装液缓慢进入麦管内，直至灌装器内的鲜精灌装液与麦管前端的棉花相接触，而灌装器受到阻力为止停止灌装。在鲜精灌装液与麦管前端的棉花相接触时，棉花中浸入水分后变得不再透过空气，从而造成灌装器的推进受到阻力，此时停止向麦管中灌入鲜精灌装液。
S7、精液冷冻：将S6步骤中灌装好鲜精灌装液的麦管的非棉花端进行封口，并将封好口的麦管放入程序冷冻仪中进行冷冻，从而完成细管冻精生产中精液手动罐装的整个过程。
实施例2：
一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，包括以下步骤：
S1、精液预稀释：取BTS标准液，并添加庆大霉素300mg/L，配置成精液预稀释液，将取回来的鲜精液与精液预稀释液，按照体积比1：2进行预稀释，然后将稀释后的精液放置于23℃的环境中平衡2h，待稀释的精液温度稳定后，再放置于17℃的恒温箱中放置2h，直至稀释后的精液温度稳定至17℃，从而完成鲜精液的预稀释，制得鲜精稀释液；上述BTS标准液的组分包括：葡萄糖37g/L，EDTA 1.25g/L，柠檬酸钠6g/L，碳酸氢钠1.25 g/L，氯化钾0.75g/L，庆大霉素300mg/L，余量为水。
S2、精液冻存基础液的配置：取葡萄糖、柠檬酸、Tris若干量，加水定容至100mL，并添加少量卡那霉素，放置于磁力搅拌器上充分混匀，制得精液冻存基础液；以加水定容制备100mL精液冻存基础液计算，上述精液冻存基础液的原料包括：葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48 g、Tris2.42g、卡那霉素微量。
S3、精液冻存Ⅰ液的配置：取新鲜的去除蛋清的鸡蛋黄若干，用滤纸折叠包裹，并用力致卵黄膜破裂，使卵黄流出到事先准备好的量筒中，将卵黄与S2步骤制得的精液冻存基础液，按照体积比1：2混合，并放置于磁力搅拌器上搅拌40min，最后置于17℃的恒温箱中，待混合液温度稳定后，即制得精液冻存Ⅰ液。
S4、精液冻存Ⅱ液的配置：取精液冻存Ⅰ液定量，并添加甘油、磷酸酯渗透剂适量，放置于磁力搅拌器上搅拌混匀后，再放置于4℃的冰箱中降温至4℃备用，从而制得精液冻存Ⅱ液；所述精液冻存Ⅱ液的原料包括：精液冻存Ⅰ液400mL、甘油24mL、磷酸酯渗透剂6mL。
S5、鲜精灌装液的配置：取S1步骤制得的鲜精稀释液适量，放入大容量离心机中，于800g条件下离心20min，然后去除上清液，再根据计算公式添加适量精液冻存Ⅰ液充分混匀后移入集精瓶中，并放入4℃的冰箱中水浴降温2h；最后从冰箱中取出，并等体积加入精液冻存Ⅱ液，轻轻摇匀，放入4℃的冰箱中备用，即制得鲜精灌装液；
所述计算公式为：V=（V1*φ*ρ*Λ）/2，其中，V为加入的精液冻存Ⅰ液的体积；V1为离心前的鲜精稀释液的体积，单位为mL；φ为鲜精稀释液中的鲜精液的体积百分比浓度；ρ为鲜精液的密度，单位为亿/mL；Λ为鲜精液的活力。
S6、手动灌装：将S5步骤制得的鲜精灌装液，从冰箱中取出，利用灌装器吸满鲜精灌装液，并将灌装器前端插入麦管无棉花端，然后轻推灌装器，使灌装器内的鲜精灌装液缓慢进入麦管内，直至灌装器内的鲜精灌装液与麦管前端的棉花相接触，而灌装器受到阻力为止停止灌装。
S7、精液冷冻：将S6步骤中灌装好鲜精灌装液的麦管的非棉花端进行封口，并将封好口的麦管放入程序冷冻仪中进行-120℃条件下冷冻，从而完成细管冻精生产中精液手动罐装的整个过程。
实施例3：
一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，包括以下步骤：
S1、精液预稀释：取BTS标准液，并添加庆大霉素300mg/L，配置成精液预稀释液，将取回来的鲜精液与精液预稀释液，按照体积比1：1进行预稀释，然后将稀释后的精液放置于23℃的环境中平衡1h，待稀释的精液温度稳定后，再放置于17℃的恒温箱中放置2.5h，直至稀释后的精液温度稳定至17℃，从而完成鲜精液的预稀释，制得鲜精稀释液；上述BTS标准液的组分包括：葡萄糖37g/L，EDTA 1.25g/L，柠檬酸钠6g/L，碳酸氢钠1.25 g/L，氯化钾0.75 g/L，庆大霉素300mg/L，余量为水。
S2、精液冻存基础液的配置：取葡萄糖、柠檬酸、Tris若干量，加水定容至100mL，并添加少量卡那霉素，放置于磁力搅拌器上充分混匀，制得精液冻存基础液；以加水定容制备100mL精液冻存基础液计算，所述精液冻存基础液的原料包括：葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48 g、Tris2.42g、卡那霉素微量。
S3、精液冻存Ⅰ液的配置：取新鲜的去除蛋清的鸡蛋黄若干，用滤纸折叠包裹，并用力致卵黄膜破裂，使卵黄流出到事先准备好的量筒中，将卵黄与S2步骤制得的精液冻存基础液，按照体积比1：4混合，并放置于磁力搅拌器上搅拌30min，最后置于17℃的恒温箱中，待混合液温度稳定后，即制得精液冻存Ⅰ液。
S4、精液冻存Ⅱ液的配置：取精液冻存Ⅰ液定量，并添加甘油、磷酸酯渗透剂适量，放置于磁力搅拌器上搅拌混匀后，再放置于4℃的冰箱中降温至4℃备用，从而制得精液冻存Ⅱ液；以体积份计，所述精液冻存Ⅱ液的原料包括：精液冻存Ⅰ液400份、甘油24份、磷酸酯渗透剂6份。
S5、鲜精灌装液的配置：取S1步骤制得的鲜精稀释液适量，放入大容量离心机中，于800g条件下离心15min，然后去除上清液，再根据计算公式添加适量精液冻存Ⅰ液充分混匀后移入集精瓶中，并放入4℃的冰箱中水浴降温3h；最后从冰箱中取出，并等体积加入精液冻存Ⅱ液，轻轻摇匀，放入4℃的冰箱中备用，即制得鲜精灌装液；
所述计算公式为：V=（V1*φ*ρ*Λ）/2，其中，V为加入的精液冻存Ⅰ液的体积；V1为离心前的鲜精稀释液的体积，单位为mL；φ为鲜精稀释液中的鲜精液的体积百分比浓度；ρ为鲜精液的密度，单位为亿/mL；Λ为鲜精液的活力。
S6、手动灌装：将S5步骤制得的鲜精灌装液，从冰箱中取出，利用灌装器吸满鲜精灌装液，并将灌装器前端插入麦管无棉花端，然后轻推灌装器，使灌装器内的鲜精灌装液缓慢进入麦管内，直至灌装器内的鲜精灌装液与麦管前端的棉花相接触，而灌装器受到阻力为止停止灌装。
S7、精液冷冻：将S6步骤中灌装好鲜精灌装液的麦管的非棉花端进行封口，并将封好口的麦管放入程序冷冻仪中进行冷冻，从而完成细管冻精生产中精液手动罐装的整个过程。
如图1所示，在实施例1～3的S6步骤中，所述灌装器，包括注射筒1、活塞组件2、注射针头组件3，注射筒1前端设置有喇叭形口颈11，喇叭形口颈11前端设置有圆管形连接端12；活塞组件2，包括活塞柄21、活塞杆22、活塞片23，活塞柄21、活塞片23分别设置在活塞杆22的两端，活塞片23的前端设置有与喇叭形口颈11相适配的喇叭形堵塞24，喇叭形堵塞24前端设置有圆柱形堵塞25，活塞片23、喇叭形堵塞24、圆柱形堵塞25设置在注射筒1内；注射针头组件3，包括针栓31、针梗32，针栓31安装在圆管形连接端12上，针梗32外壁上设置有环形硅胶片4，环形硅胶片4上设置有环形槽41，针梗32前端设置有锥形台状针尖33，锥形台状针尖33顶端设置连通针梗32和针栓31的内通孔331，锥形台状针尖33外壁上设置有多个连通内通孔331的旁通孔332。针栓31一端设置有外凸的环形限位片34。针栓31、针梗32、锥形台状针尖33、环形限位片34、以及环形硅胶片4，均采用硅胶制成。在灌装器使用过程中，将针梗32插入麦管中，并将麦管一端紧扣在环形硅胶片4的环形槽41中，使麦管紧贴环形硅胶片4，以防止麦管漏气。
同时，上述灌装器，也可以通过市场上购买的设备进行组装而成，所述灌装器，包括注射器、点胶针头、硅胶垫片，硅胶垫片于点胶针头上部穿刺而过，并与注射器组装在一起。在灌装器使用过程中，要把硅胶垫片与麦管接触端压紧防止其漏气。
对于实施例1～3制备的冷冻精液，通过解冻并进行精子活力检测，并与市场上常见的自动灌装方法进行对比，其具体步骤为：
先用镊子从程序冷冻仪的液氮中夹取冷冻后的冻精麦管，放入50℃的水浴锅中并快速摆动，计时15s；然后将解冻后的麦管用剪刀把封口端剪去并用解冻针把解冻后的精液从麦管中取出置入事先准备好的装有解冻液（葡萄糖注射液）的试管中（按照1∶10的比例进行稀释）平衡5-10min；待平衡完成后，再用移液枪取20μL稀释后的精液至于38℃预热后的载玻片上并盖上盖玻片，并至于显微镜下，用精子分析仪分析并记录数据。
A2、手动罐装方法与自动罐装方法冻后精子活力的比较：
实施例1～3的每种方法，各取三支麦管解冻并计算平均值，精液均来源于同一头猪的精液，除罐装方法外其余方法均相同，并记录下精子分析仪分析的冻后活力数据，具体见表一：
表一、手动罐装方法与自动罐装方法冻存后的精子活力
由上表可知，手动罐装方法和自动罐装方法相比较，手动罐装方法解冻后活力略低于自动罐装方法，但是差异不大。手动冻精麦管的罐装方法相比于自动罐装，经济性方面，手动罐装是自动罐装没法比拟的，其特有优势独一无二，其价格便宜仅为几元钱，方便携带，便于科研人员开展冻精保种等一系列工作。其经济节省，方便携带的特性必将受到更多科研人员和企业的青睐。
本发明一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，步骤简单、便捷，通过对鲜精液的稀释、以及精液冻存基础液、精液冻存Ⅰ液、精液冻存Ⅱ液的混匀处理，提高精液在细管冻存、及解冻后的活力；通过灌装器对鲜精灌装液在麦管中进行手动灌装，方便快捷，可靠性高；同时灌装器结构简单，方便携带，不易损坏，非常适合于经常需要到实地操作的保种育种科研工作者，避免高额的维修费用。本发明一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，方便快捷，效率高，可靠性高，价格便宜，非常适合于广大的中小型畜牧企业使用。
上述是对发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的这种非实质改进，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其他场合的，均在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、精液预稀释：取BTS标准液，并添加庆大霉素300mg/L，配置成精液预稀释液，将取回来的鲜精液与精液预稀释液，按照体积比1：（0.5～2）进行预稀释，然后将稀释后的精液放置于23℃的环境中平衡0.5～2h，待稀释的精液温度稳定后，再放置于17℃的恒温箱中放置2～3h，直至稀释后的精液温度稳定至17℃，从而完成鲜精液的预稀释，制得鲜精稀释液；
S2、精液冻存基础液的配置：取葡萄糖、柠檬酸、Tris若干量，加水定容至100mL，并添加少量卡那霉素，放置于磁力搅拌器上充分混匀，制得精液冻存基础液；
S3、精液冻存Ⅰ液的配置：取新鲜的去除蛋清的鸡蛋黄若干，用滤纸擦干鸡蛋黄表面蛋清，再用滤纸折叠包裹鸡蛋黄，并用力致鸡蛋黄膜破裂，使鸡蛋黄流出到事先准备好的量筒中，将鸡蛋黄与S2步骤制得的精液冻存基础液，按照体积比1：（2～4）混合，并放置于磁力搅拌器上搅拌20～40min，最后置于17℃的恒温箱中，待混合液温度稳定后，即制得精液冻存Ⅰ液；
S4、精液冻存Ⅱ液的配置：取精液冻存Ⅰ液定量，并添加甘油、磷酸酯渗透剂适量，放置于磁力搅拌器上搅拌混匀后，再放置于4℃的冰箱中降温至4℃备用，从而制得精液冻存Ⅱ液；
S5、鲜精灌装液的配置：取S1步骤制得的鲜精稀释液适量，放入大容量离心机中，于800g条件下离心10～20min，然后去除上清液，再根据计算公式添加适量精液冻存Ⅰ液充分混匀后移入集精瓶中，并放入4℃的冰箱中水浴降温2～4h；最后从冰箱中取出，并等体积加入精液冻存Ⅱ液，轻轻摇匀，放入4℃的冰箱中备用，即制得鲜精灌装液；所述计算公式为：V=（V1*φ*ρ*Λ）/2，其中，V为加入的精液冻存Ⅰ液的体积；V1为离心前的鲜精稀释液的体积，单位为mL；φ为鲜精稀释液中的鲜精液的体积百分比浓度；ρ为鲜精液的密度，单位为亿/mL；Λ为鲜精液的活力；
S6、手动灌装：将S5步骤制得的鲜精灌装液，从冰箱中取出，利用灌装器吸满鲜精灌装液，并将灌装器前端插入麦管无棉花端，然后轻推灌装器，使灌装器内的鲜精灌装液缓慢进入麦管内，直至灌装器内的鲜精灌装液与麦管前端的棉花相接触，而灌装器受到阻力为止停止灌装；所述灌装器，包括注射器、点胶针头、硅胶垫片，所述硅胶垫片于点胶针头上部穿刺而过，并与注射器组装在一起，所述灌装器，包括注射筒（1）、活塞组件（2）、注射针头组件（3），所述注射筒（1）前端设置有喇叭形口颈（11），所述喇叭形口颈（11）前端设置有圆管形连接端（12）；所述活塞组件（2），包括活塞柄（21）、活塞杆（22）、活塞片（23），所述活塞柄（21）、活塞片（23）分别设置在活塞杆（22）的两端，所述活塞片（23）的前端设置有与喇叭形口颈（11）相适配的喇叭形堵塞（24），所述喇叭形堵塞（24）前端设置有圆柱形堵塞（25），所述活塞片（23）、喇叭形堵塞（24）、圆柱形堵塞（25）设置在注射筒（1）内；所述注射针头组件（3），包括针栓（31）、针梗（32），所述针栓（31）安装在圆管形连接端（12）上，所述针梗（32）外壁上设置有环形硅胶片（4），所述环形硅胶片（4）上设置有环形槽（41），所述针梗（32）前端设置有锥形台状针尖（33），所述锥形台状针尖（33）顶端设置连通针梗（32）和针栓（31）的内通孔（331），所述锥形台状针尖（33）外壁上设置有多个连通内通孔（331）的旁通孔（332），所述针栓（31）一端设置有外凸的环形限位片（34）；
S7、精液冷冻：将S6步骤中灌装好鲜精灌装液的麦管的非棉花端进行封口，并将封好口的麦管放入程序冷冻仪中进行冷冻，从而完成细管冻精生产中精液手动罐装的整个过程。
2. 根据权利要求 1 所述的一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，在S1步骤中，所述BTS标准液的组分包括：葡萄糖37g/L，EDTA 1.25g/L，柠檬酸钠6g/L，碳酸氢钠1.25 g/L，氯化钾0.75 g/L，余量为水。
3.根据权利要求 1 所述的一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，在S2步骤中，以加水定容制备100mL精液冻存基础液计算，所述精液冻存基础液的原料包括：葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48 g、Tris2.42g、卡那霉素微量。
4.根据权利要求 1 所述的一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，在S3步骤中，所述鸡蛋黄与精液冻存基础液的体积比为1：4。
5.根据权利要求 1 所述的一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，在S4步骤中，以体积份计，所述精液冻存Ⅱ液的原料包括：精液冻存Ⅰ液400份、甘油24份、磷酸酯渗透剂6份。
6.根据权利要求 1 所述的一种细管冻精生产中精液手动罐装的方法，其特征在于，所述针栓（31）、针梗（32）、锥形台状针尖（33）、环形限位片（34）、以及环形硅胶片（4），均采用硅胶制成。
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| GR01 | Patent grant | ||
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