CN111617122A - 一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，包括如下步骤：步骤1：设备的清理及检查，步骤2：一枝蒿的量取与预处理，步骤3：一枝蒿的相关处理，步骤4：相关溶液基本处理过程，步骤5：总黄酮浓度的基本测定，本发明涉及黄酮纯化技术领域。该一枝蒿总黄酮的纯化工艺，通过步骤6和步骤7的设置，经过AB‑8大孔树脂对一枝蒿内部总黄酮的处理，能精准获得一枝蒿内部较多的黄酮类物质，从而使得提取物中黄酮含量有较大提高，并且操作时间较短，方便后续进一步对黄酮提取物进行开发，解决了现有的一枝蒿总黄酮在进行纯化时，工艺手段较为原始，工作人员的操作步骤十分繁琐，导致工作人员操作时间较长，生产效率非常低下的问题。
Description
技术领域
本发明涉及黄酮纯化技术领域，具体为一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺。
背景技术
一枝蒿是一种菊科多年生草本植物，为菊科蒿属苦艾组植物，在我国主要分布在西北一带。一枝蒿是维药中常用药物之一，以全草入药，一枝蒿性寒，味辛苦，具有清热解毒、健胃消食、镇静止吐、抗过敏等功效，用于治疗毒蛇咬伤、荨麻疹、消化不良、感冒、过敏性疾病等，具有很高的开发利用价值，一枝蒿作为疗效确切的地道药材，已广泛应用于临床，且临床制剂较多，复方一枝蒿颗粒由一枝蒿、板蓝根、大青叶3味中药组成，用于治疗感冒发烧、咽喉肿痛等，其中治疗感冒疗效显著。一枝蒿中含有黄酮类、倍半萜类、苷类、多糖类、挥发油类，其中黄酮类化合物在一枝蒿中含量丰富，是其主要活性成分，具有抗氧化、抗病毒、抑菌等作用，从一枝蒿中已分离鉴定25个黄酮类成分，主要包括黄酮及黄酮苷、黄酮醇类、2-苯氧色原酮类等。
现有的一枝蒿总黄酮在进行纯化时，工艺手段较为原始，工作人员的操作步骤十分繁琐，导致工作人员操作时间较长，生产效率非常低下，因此急需一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，解决了现有的一枝蒿总黄酮在进行纯化时，工艺手段较为原始，工作人员的操作步骤十分繁琐，导致工作人员操作时间较长，生产效率非常低下的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，包括如下步骤：
步骤1：设备的清理及相关检查：在微尘环境中，使用蒸馏水对参与操作的设备和相关器械进行清洗，表面完全洁净后，采用棉质消毒毛巾将相关器械擦拭干净，放置备用；
步骤2：一枝蒿的量取与预处理：获取500克一枝蒿，使用破壁装置对其进行粉碎，然后对粉碎后的物料过筛并且对过筛的物料进行干燥；
步骤3：一枝蒿的相关处理：将粉碎预处理好的一枝蒿放入无铅密封泡酒玻璃坛中使用60％乙醇溶液浸泡24小时，将溶液蒸发至乙醇完全蒸出，用石油醚脱脂三次之后将一枝蒿总黄酮的粗提取液全部转移至容量瓶中；
步骤4：相关溶液基本处理过程：对上述粗提取液加入60％乙醇溶液定容，然后作为待测样品溶液，取1mL待测液置于容量瓶中，用蒸馏水补充至3mL；
步骤5：总黄酮浓度的基本测定：各容量瓶中加入5％硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.5mL，摇匀，放置6min，加4％氢氧化钠溶液5.0mL，加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测吸光度，然后求得一枝蒿总黄酮浓度，最后计算总黄酮提取量；
步骤6：一枝蒿黄酮吸附的基本操作：已预处理好的AB-8树脂柱中，缓慢加入pH值为6-8一枝蒿黄酮提取液进行吸附；
步骤7：一枝蒿黄酮解吸的基本操作：待流出液全部流出后洗去水溶性杂质，以0.6mL/min-3.4mL/min的流速缓慢加入70％乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干得纯化一枝蒿总黄酮。
优选的，所述步骤1中，纯净水能够代替蒸馏水，棉质毛巾使用前消毒方式为紫外线。
优选的，所述步骤2中，采用医用破壁装置进行粉碎，筛子采用40目筛。
优选的，所述步骤3中，玻璃坛必须采用无铅材质玻璃坛。
优选的，所述步骤3中，溶液蒸发时需要进行搅拌，容量瓶的容积为500mL。
优选的，所述步骤5中，容量瓶的容积为10mL，移液时采用移液枪进行操作。
优选的，所述步骤5中，容量瓶放置时底部垫有隔热防护垫，采用紫外可见分光光度计进行测试吸光度。
优选的，所述步骤7中，采用去离子水洗去水溶性杂质。
(三)有益效果
本发明提供了一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺。与现有技术相比，具备以下有益效果：
(1)、该一枝蒿总黄酮的纯化工艺，通过步骤6：一枝蒿黄酮吸附的基本操作：已预处理好的AB-8树脂柱中，缓慢加入pH值为6-8一枝蒿黄酮提取液进行吸附；步骤7：一枝蒿黄酮解吸的基本操作：待流出液全部流出后洗去水溶性杂质，以0.6mL/min-3.4mL/min的流速缓慢加入70％乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干得纯化一枝蒿总黄酮，通过步骤6和步骤7的设置，经过AB-8大孔树脂对一枝蒿内部总黄酮的处理，能精准获得一枝蒿内部较多的黄酮类物质，从而使得提取物中黄酮含量有较大提高，并且操作时间较短，方便后续进一步对黄酮提取物进行开发，解决了现有的一枝蒿总黄酮在进行纯化时，工艺手段较为原始，工作人员的操作步骤十分繁琐，导致工作人员操作时间较长，生产效率非常低下的问题。
(2)、该一枝蒿总黄酮的纯化工艺，通过步骤5：总黄酮浓度的基本测定：各容量瓶中加入5％硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.5mL，摇匀，放置6min，加4％氢氧化钠溶液5.0mL，加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测吸光度，然后求得一枝蒿总黄酮浓度，最后计算总黄酮提取量，通过步骤5的设置，使得总黄酮浓度在进行纯化前就能够得到测定，方便了后续操作对物体内部总黄酮数据的分析与判断，提高了工作人员的工作积极性，通过对一枝蒿的相关处理，使得黄酮提取量占比较高。
(3)、该一枝蒿总黄酮的纯化工艺，通过步骤1：设备的清理及相关检查：在微尘环境中，使用蒸馏水对参与操作的设备和相关器械进行清洗，表面完全洁净后，采用棉质消毒毛巾将相关器械擦拭干净，放置备用；步骤2：一枝蒿的量取与预处理：获取500克一枝蒿，使用破壁装置对其进行粉碎，然后对粉碎后的物料过筛并且对过筛的物料进行干燥；步骤3：一枝蒿的相关处理：将粉碎预处理好的一枝蒿放入无铅密封泡酒玻璃坛中使用60％乙醇溶液浸泡24小时，将溶液蒸发至乙醇完全蒸出，用石油醚脱脂三次之后将一枝蒿总黄酮的粗提取液全部转移至容量瓶中，通过步骤1、步骤2和步骤3的联合设置，通过对设备的清洗和消毒，有效的避免了因为灰尘等杂物对实验的精确性造成影响，通过对一枝蒿的预处理，能够最大量的获得一枝蒿内部的黄酮，并且方便操作。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附表，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅表1，本发明实施例提供三种技术方案：一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，具体包括以下实施例：
实施例1
步骤1：设备的清理及相关检查：在微尘环境中，使用蒸馏水对参与操作的设备和相关器械进行清洗，表面完全洁净后，采用棉质消毒毛巾将相关器械擦拭干净，放置备用；
步骤2：一枝蒿的量取与预处理：获取500克一枝蒿，使用破壁装置对其进行粉碎，然后对粉碎后的物料过筛并且对过筛的物料进行干燥；
步骤3：一枝蒿的相关处理：将粉碎预处理好的一枝蒿放入无铅密封泡酒玻璃坛中使用60％乙醇溶液浸泡24小时，将溶液蒸发至乙醇完全蒸出，用石油醚脱脂三次之后将一枝蒿总黄酮的粗提取液全部转移至容量瓶中；
步骤4：相关溶液基本处理过程：对上述粗提取液加入60％乙醇溶液定容，然后作为待测样品溶液，取1mL待测液置于容量瓶中，用蒸馏水补充至3mL；
步骤5：总黄酮浓度的基本测定：各容量瓶中加入5％硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.5mL，摇匀，放置6min，加4％氢氧化钠溶液5.0mL，加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测吸光度，然后求得一枝蒿总黄酮浓度，最后计算总黄酮提取量；
步骤6：一枝蒿黄酮吸附的基本操作：已预处理好的AB-8树脂柱中，缓慢加入pH值为6一枝蒿黄酮提取液进行吸附；
步骤7：一枝蒿黄酮解吸的基本操作：待流出液全部流出后洗去水溶性杂质，以0.6mL/min的流速缓慢加入70％乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干得纯化一枝蒿总黄酮。
实施例2
步骤1：设备的清理及相关检查：在微尘环境中，使用蒸馏水对参与操作的设备和相关器械进行清洗，表面完全洁净后，采用棉质消毒毛巾将相关器械擦拭干净，放置备用；
步骤2：一枝蒿的量取与预处理：获取500克一枝蒿，使用破壁装置对其进行粉碎，然后对粉碎后的物料过筛并且对过筛的物料进行干燥；
步骤3：一枝蒿的相关处理：将粉碎预处理好的一枝蒿放入无铅密封泡酒玻璃坛中使用60％乙醇溶液浸泡24小时，将溶液蒸发至乙醇完全蒸出，用石油醚脱脂三次之后将一枝蒿总黄酮的粗提取液全部转移至容量瓶中；
步骤4：相关溶液基本处理过程：对上述粗提取液加入60％乙醇溶液定容，然后作为待测样品溶液，取1mL待测液置于容量瓶中，用蒸馏水补充至3mL；
步骤5：总黄酮浓度的基本测定：各容量瓶中加入5％硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.5mL，摇匀，放置6min，加4％氢氧化钠溶液5.0mL，加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测吸光度，然后求得一枝蒿总黄酮浓度，最后计算总黄酮提取量；
步骤6：一枝蒿黄酮吸附的基本操作：已预处理好的AB-8树脂柱中，缓慢加入pH值为7一枝蒿黄酮提取液进行吸附；
步骤7：一枝蒿黄酮解吸的基本操作：待流出液全部流出后洗去水溶性杂质，以2.0mL/min的流速缓慢加入70％乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干得纯化一枝蒿总黄酮。
实施例3
步骤1：设备的清理及相关检查：在微尘环境中，使用蒸馏水对参与操作的设备和相关器械进行清洗，表面完全洁净后，采用棉质消毒毛巾将相关器械擦拭干净，放置备用；
步骤2：一枝蒿的量取与预处理：获取500克一枝蒿，使用破壁装置对其进行粉碎，然后对粉碎后的物料过筛并且对过筛的物料进行干燥；
步骤3：一枝蒿的相关处理：将粉碎预处理好的一枝蒿放入无铅密封泡酒玻璃坛中使用60％乙醇溶液浸泡24小时，将溶液蒸发至乙醇完全蒸出，用石油醚脱脂三次之后将一枝蒿总黄酮的粗提取液全部转移至容量瓶中；
步骤4：相关溶液基本处理过程：对上述粗提取液加入60％乙醇溶液定容，然后作为待测样品溶液，取1mL待测液置于容量瓶中，用蒸馏水补充至3mL；
步骤5：总黄酮浓度的基本测定：各容量瓶中加入5％硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.5mL，摇匀，放置6min，加4％氢氧化钠溶液5.0mL，加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测吸光度，然后求得一枝蒿总黄酮浓度，最后计算总黄酮提取量；
步骤6：一枝蒿黄酮吸附的基本操作：已预处理好的AB-8树脂柱中，缓慢加入pH值为8一枝蒿黄酮提取液进行吸附；
步骤7：一枝蒿黄酮解吸的基本操作：待流出液全部流出后洗去水溶性杂质，以3.4mL/min的流速缓慢加入70％乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干得纯化一枝蒿总黄酮。
通过步骤6和步骤7的设置，经过AB-8大孔树脂对一枝蒿内部总黄酮的处理，能精准获得一枝蒿内部较多的黄酮类物质，从而使得提取物中黄酮含量有较大提高，并且操作时间较短，方便后续进一步对黄酮提取物进行开发，解决了现有的一枝蒿总黄酮在进行纯化时，工艺手段较为原始，工作人员的操作步骤十分繁琐，导致工作人员操作时间较长，生产效率非常低下的问题，通过步骤5的设置，使得总黄酮浓度在进行纯化前就能够得到测定，方便了后续操作对物体内部总黄酮数据的分析与判断，提高了工作人员的工作积极性，通过对一枝蒿的相关处理，使得黄酮提取量占比较高，通过步骤1、步骤2和步骤3的联合设置，通过对设备的清洗和消毒，有效的避免了因为灰尘等杂物对实验的精确性造成影响，通过对一枝蒿的预处理，能够最大量的获得一枝蒿内部的黄酮，并且方便操作。
对比实验
现有生产厂家根据权利要求1，可以获得三种一枝蒿总黄酮，对三种一枝蒿总黄酮进行全面的洁净处理后，将三种一枝蒿总黄酮与普通工艺获得的一枝蒿总黄酮的进行操作时间和提取率的对比实验，由表知，经过实验室测试对三个实施例中操作时间，得知实施例中最长的是38小时，较对比例时间缩短14小时，提取率最低的是78％，较对比例高10％。
表1：操作时间和提取率与对比例对比表
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1：设备的清理及检查：在微尘环境中，使用蒸馏水对参与操作的设备和相关器械进行清洗，表面完全洁净后，采用棉质消毒毛巾将相关器械擦拭干净，放置备用；
步骤2：一枝蒿的量取与预处理：获取500克一枝蒿，使用破壁装置对其进行粉碎，然后对粉碎后的物料过筛并且对过筛的物料进行干燥；
步骤3：一枝蒿的相关处理：将粉碎预处理好的一枝蒿放入无铅密封泡酒玻璃坛中使用60％乙醇溶液浸泡24小时，将溶液蒸发至乙醇完全蒸出，用石油醚脱脂三次之后将一枝蒿总黄酮的粗提取液全部转移至容量瓶中；
步骤4：相关溶液基本处理过程：对上述粗提取液加入60％乙醇溶液定容，然后作为待测样品溶液，取1mL待测液置于容量瓶中，用蒸馏水补充至3mL；
步骤5：总黄酮浓度的基本测定：各容量瓶中加入5％硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.5mL，摇匀，放置6min，加4％氢氧化钠溶液5.0mL，加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测吸光度，然后求得一枝蒿总黄酮浓度，最后计算总黄酮提取量；
步骤6：一枝蒿黄酮吸附的基本操作：已预处理好的AB-8树脂柱中，缓慢加入pH值为6-8一枝蒿黄酮提取液进行吸附；
步骤7：一枝蒿黄酮解吸的基本操作：待流出液全部流出后洗去水溶性杂质，以0.6mL/min-3.4mL/min的流速缓慢加入70％乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干得纯化一枝蒿总黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：所述步骤1中，纯净水能够代替蒸馏水，棉质毛巾使用前消毒方式为紫外线。
3.根据权利要求1所述的一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：所述步骤2中，采用医用破壁装置进行粉碎，筛子采用40目筛。
4.根据权利要求1所述的一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：所述步骤3中，玻璃坛必须采用无铅材质玻璃坛。
5.根据权利要求1所述的一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：所述步骤3中，溶液蒸发时需要进行搅拌，容量瓶的容积为500mL。
6.根据权利要求1所述的一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：所述步骤5中，容量瓶的容积为10mL，移液时采用移液枪进行操作。
7.根据权利要求1所述的一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：所述步骤5中，容量瓶放置时底部垫有隔热防护垫，采用紫外可见分光光度计进行测试吸光度。
8.根据权利要求1所述的一种一枝蒿总黄酮的纯化工艺，其特征在于：所述步骤7中，采用去离子水洗去水溶性杂质。
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200904 |
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