CN111607598A - 大豆DDT结构域基因GmDDT1的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了大豆DDT结构域基因GmDDT1及其应用。大豆GmDDT1蛋白编码基因GmDDT1，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1。将构建的植物过量表达载体pMDC83‑GmDDT1在拟南芥的野生型中进行异源表达，发现转基因植株总氨基酸含量显著提高。表明该基因可以作为目的基因导入植物，通过对GmDDT1基因的过表达，提高转基因植物果实品质。可见，本发明所述的大豆GmDDT1蛋白编码基因GmDDT1可在通过基因工程提高果实氨基酸含量，从而改善大豆的品质，具有重要的应用价值。

Description

大豆DDT结构域基因GmDDT1的应用

技术领域

本发明属于植物基因工程领域，涉及一个DDT结构域基因GmDDT1的应用，具体涉及来源于大豆在种子中高表达并与生长发育相关的DDT结构域基因GmDDT1在调控植物子氨基酸含量以及对非生物胁迫的响应相关方面的应用。

背景技术

ISWI染色质重塑复合体最初是从果蝇中被鉴定出来的，此后酵母Itc1，果蝇NURF301和ACF1，以及人ACF1等包含有DDT结构域的蛋白被鉴定为不同的ISWI复合体组分(Tsukiyama et al.,1995；Ito et al.,1997；Ito et al.,1999；Gelbart et al.,2001；Bozhenok et al.,2002)。这些DDT蛋白相对保守的是DDT结构域，其他区域差别较大。例如果蝇的DDT蛋白NURF301和ACF1不仅包含有DDT和WAC结构域，还含有PHD结构域和Bromo结构域，而酵母的DDT蛋白Itc1仅含有DDT和WAC结构域。在拟南芥中，已经鉴定出至少12个编码DDT结构域蛋白的基因，基于序列相似性可以将其分为五个亚家族(I至V类)。DDT结构域一般与WHIM基序一起介导与核小体接头DNA和ISWI蛋白的SLIDE结构域相互作用。在真核生物中，DDT蛋白与ISWI蛋白之间相互作用的机制已经在果蝇(Fyodorov et al.,2002)，拟南芥(Li et al.,2012)和人类(Erdel et al.,2010)等几种代表性的物种中都有了相关的报道，但是对于DDT结构域蛋白具有提高植物氨基酸含量的研究尚未见报道。

本研究通过对大豆子叶折叠突变体(cco)的初步定位结果，并结合基因在各组织中的表达量情况以及拟南芥同源基因注释，筛选出一个DDT结构域基因，并命名为GmDDT1。通过生物信息学方法分析该基因的序列以及蛋白质信息。利用荧光定量PCR技术检测GmUBC1基因组织器官以及在各种非生物胁迫处理(盐碱、干旱、低温、ABA)下的表达特性。采用酵母双杂技术探究蛋白互作情况。并构建了植物表达载体转化拟南芥，发现过表达GmDDT1转基因拟南芥种子氨基酸含量显著提高，为进一步研究GmDDT1基因功能奠定了基础。

发明内容

本发明的目的在于提供公开一个DDT结构域基因GmDDT1。

本发明的另一目的是提供该基因在植物种子氨基酸含量的基因工程应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现:

大豆DDT结构域基因GmDDT1，核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

本发明所述的大豆DDT结构域基因GmDDT1编码的蛋白质，其氨基酸序列为SEQ IDNO.2。

含有本发明所述的大豆DDT结构域基因GmDDT1的表达载体。

本发明所述的大豆DDT结构域基因GmDDT1在植物种子氨基酸含量的基因工程应用。

所述的GmDDT1转基因拟南芥种子氨基酸含量提高。

使用GmDDT1构建植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或诱导型启动子。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选,可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的选择性标记基因(GUS基因、GFP基因等)或者抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物、潮霉素标记物等)的抗性基因。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以表型性状筛选转化植株。

携带有本发明GmDDT1的植物表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织,并将转化的植物组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是水稻、小麦、玉米等单子叶植物,也可以是烟草、拟南芥、大豆、油菜、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜蓿等双子叶植物。

有益效果:

本发明中GmDDT1属于DDT结构域家族，该家族基因具有一个保守的DDT结构域。通过组织表达分析发现，GmDDT1基因在所有大豆组织中均有表达，但在7d种子和13d种子中表达最高，在13d荚中表达最低。而且在胁迫处理材料中，基因的表达量在干旱、低温、激素JA、ABA处理下表达量均有不同程度的变化，均能响应不同处理。亚细胞定位显示GmDDT1蛋白定位于细胞核中。利用酵母双杂交技术在大豆叶片和荚文库中筛选与GmDDT1互作的蛋白，鉴定到两个来源于叶片文库，即ISWI染色质重塑复合物ATP酶Glyma15g10370、编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的基因Glyma08g47570和一个来源于荚文库的ISWI染色质重塑复合物ATP酶Glyma13g28720。拟南芥中过表达GmDDT1，发现与对照野生型拟南芥相比，转基因拟南芥种子各组分氨基酸含量和总氨基酸含量提高。本发明公开了该基因在促使植株果实氨基酸含量提高现象的发生。可以通过定向地改造作物的果实氨基酸含量，为农作物提高品质。

利用植物过表达载体pMDC83-GmDDT1，将本发明的GmDDT1导入植物体内,可以调控植株果实发育，获得转基因植株。

附图说明

下面结合附图及实施例对本发明做进一步说明。

图1 GmDDT1基因的组织表达分析。

采用实时荧光定量PCR技术对GmDDT1在大豆“南农94-16”以及cco的不同组织表达进行研究，大豆不同组织分别为叶、茎、花、7d荚、13d荚、7d种子、13d种子、子叶。

图2 GmDDT1在胁迫处理下的表达量变化

A为15％PEG干旱处理；B为250mMNaCl处理；C为4℃低温处理；D为100μM ABA处理。

图3 GmDDT1的亚细胞定位(A)d35s::GFP；(B)d35s::GmDDT1-GFP；

图4 GmDDT1互作蛋白的回转验证结果

A:酵母叶文库，B:酵母荚文库；阳性对照：转pGADT7-T和pGBKT7-53质粒；阴性对照：pGADT7-T和pGBKT7-lam质粒。

图5转基因拟南芥的PCR鉴定。

图6转基因拟南芥和野生型拟南芥氨基酸含量检测

*表示0.01<p<0.05水平下显著差异；**表示p<0.01水平下极显著差异；

具体实施方式

下面结合附图和实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用到的引物，均在首次出现时标明，其后所用相同引物，均以首次标明的内容相同。

实施例1大豆GmDDT1及其编码基因的克隆与鉴定

根据phytozome网站预测的GmDDT1序列信息设计引物，以大豆子叶折叠突变体cco开花后7d种子的cDNA为模板PCR扩增。

上游引物GmDDT1-F1:ggatcttccagagat ATGGCCAACGGATCCCCT；(SEQ ID NO.3)

下游引物GmDDT1-R1:ctgccgttcgacgatTCAGTAATCATTGTCTTCATCTTTC。(SEQ IDNO.4)

应用PCR方法，从大豆种子总RNA中扩增GmDDT1基因。取大豆开花后7d种子，用研钵研碎，加入盛有裂解液的1.5mL EP管，充分振荡后，再移入玻璃匀浆器内。匀浆后移至1.5mLEP管中，采用植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN DP404)进行总RNA提取。用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量，然后在分光光度计上测定RNA含量。以获得的总RNA为模板,按照Takara公司提供的反转录试剂盒的说明书进行反转录，合成cDNA第一链。进行PCR扩增反应。PCR反应体系为:2μl cDNA(0.05μg)、上、下游引物各2μl(10μM)、25μl 2×Phanta Max Buffer、1μldNTP(10mM)和1U Phanta Max Super-Fidelity DNA聚合酶(Vazyme),用超纯水补足50μl。PCR程序如下：在Bio-RAD PTC200型PCR仪上进行,其程序为94℃预变性3min；94℃变性15s，58℃退火15s，72℃延伸45s,共30个循环；然后72℃延伸5min终止反应，4℃保存。PCR产物回收将其克隆至pMD19-T载体，测序后获得具有完整编码区的大豆基因GmDDT1的cDNA序列SEQID NO.1，全长2148bp，编码SEQ ID NO.2所示的715个氨基酸。根据phytozome网站下载GmDDT1基因的氨基酸序列信息，GmDDT1编码715个氨基酸，利用NCBI网站预测基因的保守结构域，基因在107-158位具有一个DDT结构域。

实施例2 GmDDT1在大豆不同器官中的表达特征

提取大豆突变体cco和“南农94-16”叶、茎、花、7d荚、13d荚、7d种子、13d种子、子叶的RNA，反转成cDNA进行qRT-PCR分析。

总RNA的提取同实施例1。以大豆组成型表达基因Tubulin为内参基因，其扩增引物为Tubulin正向引物序列:GGAGTTCACAGAGGCAGAG(SEQ ID NO.5)，Tubulin反向引物序列:CACTTACGCATCACATAGCA(SEQ ID NO.6)。以来自大豆不同组织或器官的cDNA为模板，进行实时荧光定量PCR分析。GmDDT1的扩增引物为:GmDDT1-F2:GAACCTGCGGTCGATGTG(SEQ IDNO.7),GmDDT1-R2:CAACCCAATGCCACCAAT(SEQ ID NO.8)。结果(图1)分析表明GmDDT1在7d种子和13d种子中表达相对较高，表明GmUBC1可能与大豆种子发育相关。

实施例3 GmDDT1在胁迫处理下的表达量变化

以不同间隔时间，不同非生物胁迫处理后的大豆叶片的cDNA为模板，进行荧光定量分析GmDDT1在不同胁迫处理后的表达量变化。结果如图3所示，在低温处理后的2h和4h，处理材料中GmDDT1基因与对照相比均显著下调(图2A)。干旱处理时，GmDDT1基因在PEG处理0.5h时，表达量极显著高于对照；而在PEG处理2h时，基因表达量却极显著低于对照材料(图2B)。在NaCl处理3h时，GmDDT1基因的表达量下降，而在6h时，与对照材料相比，又极显著上升(图2C)。在ABA处理3h时，处理材料中目的基因的表达量极显著低于对照,但处理6h时表达量又急剧上升，极显著高于对照材料(图2D)，说明GmDDT1基因响应低温、盐胁迫以及ABA激素处理。

实施例4 GmDDT1的亚细胞定位

利用烟草瞬时表达系统对GmDDT1基因进行亚细胞定位研究。首先将GmDDT1基因的CDS序列(不含终止密码子)连接到P2载体上，获得d35S::GmDDT1-GFP融合表达载体，然后通过注射法分别将空载和重组载体转入烟草叶片中，培养48h后在激光共聚焦显微镜下观察，通过报告基因所产生的绿色荧光信号来确定GmDDT1在细胞中的位置。结果如图3，转入空载质粒在整个细胞中都有分布，GmDDT1:GFP融合蛋白分布于细胞核中，表明GmDDT1可能在细胞核中发挥功能。

实施例5 GmDDT1基因互作蛋白的筛选

为了研究GmDDT1对大豆生长发育的分子机理，利用本实验室已经构建好的大豆叶片组织文库(张晋玉，2016)和荚组织文库，通过酵母双杂交筛选与GmDDT1互作的蛋白。共鉴定到两个来源于叶片文库基因，即ISWI染色质重塑复合物ATP酶Glyma15g10370、编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的基因Glyma08g47570和一个来源于荚文库的ISWI染色质重塑复合物ATP酶Glyma13g28720(图4)。

实施例6 GmDDT1的基因工程

以连接到pMD19-T载体上的全长GmDDT1 cDNA质粒为模板，用CDS序列引物加载体接头序列GmDDT1-F3(SEQ ID NO.9)：caggtcgactctagaggatccgccaccATGGCCAACGGATCCCCT；GmDDT1-R3(SEQ ID NO.10)：gggaaattcgagctcggtaccTCAGTAATCATTGTCTTCATCTTTC。50ul体系进行PCR扩增，利用同源重组方法将胶回收产物连接pMDC83过表达载体，转化DH5α大肠杆菌感受态，涂布于具有Kana抗性的LB固体培养基上，37℃培养12-16h后挑单克隆，菌检阳性的送测序，测序正确的菌液提质粒，命名为pMDC83-GmDDT1。之后转化根癌农杆菌EHA105感受态，得到pMDC83-GmDDT1农杆菌菌液。

用蘸花法侵染拟南芥获得转基因拟南芥株系，提取初步筛选得到具有潮霉素抗性的转基因拟南芥的基因组DNA，PCR扩增结果显示15个转基因株系均有片段大小正确的扩增条带(图5)，表明GmDDT1成功整合到拟南芥基因组中，15个株系均为GmDDT1转基因株系。

对GmDDT1转基因拟南芥进行进行氨基酸含量检测。将其种子分别收集于2mL离心管中，并将其置于30℃烘箱进行1周以上的烘干处理，之后用液氮在研钵中研磨后进行转基因种子氨基酸含量的测定。经过充分研磨后，称量每个样品，使其重量达到0.1g左右，然后加入5mL HCl进行浸提与过滤，并使其定容至10mL。用移液枪向其中吸取500μL样品并同时加入500μL 4％磺基水杨酸，充分混匀后，置于离心机15000rpm离心15min，用滤膜过滤上清液，加置氨基酸分析仪(L-8900)的上机瓶，测出各氨基酸含量。在22℃、长日照的生长条件下，GmDDT1转基因拟南芥与野生型WT相比，转基因拟南芥株系种子氨基酸含量显著提高(图6)。

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 大豆DDT结构域基因GmDDT1的应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2148

<212> DNA

<213> 大豆(Glycine max)

<400> 1

atggccaacg gatcccctcc ttcagttccc ggccaacgat cctcgccgga acccaatcct 60

ccgaaccatg tctccgattc gaaggaggaa accgccgccg ctcctcctcc gcccaccacc 120

aggagcaccc gcccctcccg cgcgtgcacc atgcgcgccg cctctcgcct ccattcctcg 180

ccggcgccgg taaagaagga ggcgcctgcg aagaaggagg attcgccgcc accgccgccg 240

tcgcaatgca gcaagatcgt gactccgctg gtggagccac cgtcgccgtc gcagttgccg 300

cggtggaacc tgcggtcgat gtgggagttc gcttccgtgc tgaatttcat gcatctgttt 360

aggcctcttt tgaatatctc gttggaattc tctgcagaag agttcgagac agctcttctt 420

acccccaacg agactttgtt tcatatacat atgcctttgc taaaggcaat ccctcctatt 480

acacgaatgg cactcacacg cgatacttgg ataaccgtat tatgcaggaa attgagagat 540

tggtggcatt gggttgccga tggggatctt ccaattgttg cttcacatgg ggtggagatt 600

gaagaatata aatcacttga tccaggggtc cgtgttgtca tcttaaaagc attatgtgac 660

attcgtgtgg agcaagaaga tatccgaagt tatattgaca actcaattaa acacggtgtt 720

cagctttcaa cattccgtaa agagcgtatt ggaggtgatt cacatggaat ttcttattgg 780

tatgaagatg accccattat tggtcatagg ttgtatcgag aaaaaaggaa aactgaagtg 840

gttcaaatga agaaagggaa accaagaggt tcccaggttc tttctaatac atcataccag 900

tgggaagcag ttgctaccaa ttttgatgaa tttgaagatg tttctgagaa gcttttctca 960

agtaaaaaca gaacagaggc ttccatggga aaaaagctga agatagacat gcttcctgaa 1020

attgagaaag ttcacaagaa aaaggagaag ttgctgaaaa agcaacacag acaagctctt 1080

ctgcttgaga attacttggt tgttgacggg cttggtcctg ggcgttctct tcgtgacagg 1140

aaacctgtta cctacacttt tgatgattat gatcggtcaa tcaatgaggc aattaaagta 1200

accaagcaga aacagccatc tccagaatgt atgcccagga gagaatcagt agcaaaagct 1260

gaagctttgt ctaatggtaa atatggtcct ccacatgcca cacaagatcg gaattttggt 1320

ataccatctc cagaatcatc tgattctgat gatgacaaag aagataatga aactgacaac 1380

ttggatcgaa gcaatcgtca aagacggaga cctaaacggt attcagaaag agagtttgtt 1440

gaagcagtat cagataatga ggcagacttc gacagtgatg atgatattgt tggagaagcc 1500

gtatatgatg aagaatatct caagaaacgc aagcagaaaa ggatgtcttc tagtagctct 1560

gaaggagatg aagaatatca gtgggacgaa tacaatgttg aagatgaaga agaagaagat 1620

gatgacgacg atgacgattc cttgagcatc agtgaggata gtgacaagcc tcgtaaggtc 1680

aaacagctgc agttgcatgg tcgtacaagg agagaaacca aactcaggtc tgtgggtgag 1740

atacaatcgg gtctaagacg tagtaagagg gcaactaaaa atcgtataaa ttaccgacaa 1800

tgtgaggtat cagaatcaga aacagagttt atcaaatctg agaagtctaa ttcatcagct 1860

gatcactcag atcccaatga gaatggtgaa tacatgatgg aaagtgaaga ttcagatgac 1920

agtgataatg aagaacaaga aatgaaagta gatgaccctg ttacatatcc tgcagtagaa 1980

gagaatgaac aaaaccagcc tcctgaaaaa ttaagtagtc ctggtcagga ggaagttgag 2040

agcagcacag gaaagagacg cttccttgat ttgaatgagc ttgcccctag cactggtttc 2100

gatgatggtc cgaacacaat aatgaaagat gaagacaatg attactga 2148

<210> 2

<211> 715

<212> PRT

<213> 大豆(Glycine max)

<400> 2

Met Ala Asn Gly Ser Pro Pro Ser Val Pro Gly Gln Arg Ser Ser Pro

1 5 10 15

Glu Pro Asn Pro Pro Asn His Val Ser Asp Ser Lys Glu Glu Thr Ala

20 25 30

Ala Ala Pro Pro Pro Pro Thr Thr Arg Ser Thr Arg Pro Ser Arg Ala

35 40 45

Cys Thr Met Arg Ala Ala Ser Arg Leu His Ser Ser Pro Ala Pro Val

50 55 60

Lys Lys Glu Ala Pro Ala Lys Lys Glu Asp Ser Pro Pro Pro Pro Pro

65 70 75 80

Ser Gln Cys Ser Lys Ile Val Thr Pro Leu Val Glu Pro Pro Ser Pro

85 90 95

Ser Gln Leu Pro Arg Trp Asn Leu Arg Ser Met Trp Glu Phe Ala Ser

100 105 110

Val Leu Asn Phe Met His Leu Phe Arg Pro Leu Leu Asn Ile Ser Leu

115 120 125

Glu Phe Ser Ala Glu Glu Phe Glu Thr Ala Leu Leu Thr Pro Asn Glu

130 135 140

Thr Leu Phe His Ile His Met Pro Leu Leu Lys Ala Ile Pro Pro Ile

145 150 155 160

Thr Arg Met Ala Leu Thr Arg Asp Thr Trp Ile Thr Val Leu Cys Arg

165 170 175

Lys Leu Arg Asp Trp Trp His Trp Val Ala Asp Gly Asp Leu Pro Ile

180 185 190

Val Ala Ser His Gly Val Glu Ile Glu Glu Tyr Lys Ser Leu Asp Pro

195 200 205

Gly Val Arg Val Val Ile Leu Lys Ala Leu Cys Asp Ile Arg Val Glu

210 215 220

Gln Glu Asp Ile Arg Ser Tyr Ile Asp Asn Ser Ile Lys His Gly Val

225 230 235 240

Gln Leu Ser Thr Phe Arg Lys Glu Arg Ile Gly Gly Asp Ser His Gly

245 250 255

Ile Ser Tyr Trp Tyr Glu Asp Asp Pro Ile Ile Gly His Arg Leu Tyr

260 265 270

Arg Glu Lys Arg Lys Thr Glu Val Val Gln Met Lys Lys Gly Lys Pro

275 280 285

Arg Gly Ser Gln Val Leu Ser Asn Thr Ser Tyr Gln Trp Glu Ala Val

290 295 300

Ala Thr Asn Phe Asp Glu Phe Glu Asp Val Ser Glu Lys Leu Phe Ser

305 310 315 320

Ser Lys Asn Arg Thr Glu Ala Ser Met Gly Lys Lys Leu Lys Ile Asp

325 330 335

Met Leu Pro Glu Ile Glu Lys Val His Lys Lys Lys Glu Lys Leu Leu

340 345 350

Lys Lys Gln His Arg Gln Ala Leu Leu Leu Glu Asn Tyr Leu Val Val

355 360 365

Asp Gly Leu Gly Pro Gly Arg Ser Leu Arg Asp Arg Lys Pro Val Thr

370 375 380

Tyr Thr Phe Asp Asp Tyr Asp Arg Ser Ile Asn Glu Ala Ile Lys Val

385 390 395 400

Thr Lys Gln Lys Gln Pro Ser Pro Glu Cys Met Pro Arg Arg Glu Ser

405 410 415

Val Ala Lys Ala Glu Ala Leu Ser Asn Gly Lys Tyr Gly Pro Pro His

420 425 430

Ala Thr Gln Asp Arg Asn Phe Gly Ile Pro Ser Pro Glu Ser Ser Asp

435 440 445

Ser Asp Asp Asp Lys Glu Asp Asn Glu Thr Asp Asn Leu Asp Arg Ser

450 455 460

Asn Arg Gln Arg Arg Arg Pro Lys Arg Tyr Ser Glu Arg Glu Phe Val

465 470 475 480

Glu Ala Val Ser Asp Asn Glu Ala Asp Phe Asp Ser Asp Asp Asp Ile

485 490 495

Val Gly Glu Ala Val Tyr Asp Glu Glu Tyr Leu Lys Lys Arg Lys Gln

500 505 510

Lys Arg Met Ser Ser Ser Ser Ser Glu Gly Asp Glu Glu Tyr Gln Trp

515 520 525

Asp Glu Tyr Asn Val Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Asp Asp Asp Asp

530 535 540

Asp Asp Ser Leu Ser Ile Ser Glu Asp Ser Asp Lys Pro Arg Lys Val

545 550 555 560

Lys Gln Leu Gln Leu His Gly Arg Thr Arg Arg Glu Thr Lys Leu Arg

565 570 575

Ser Val Gly Glu Ile Gln Ser Gly Leu Arg Arg Ser Lys Arg Ala Thr

580 585 590

Lys Asn Arg Ile Asn Tyr Arg Gln Cys Glu Val Ser Glu Ser Glu Thr

595 600 605

Glu Phe Ile Lys Ser Glu Lys Ser Asn Ser Ser Ala Asp His Ser Asp

610 615 620

Pro Asn Glu Asn Gly Glu Tyr Met Met Glu Ser Glu Asp Ser Asp Asp

625 630 635 640

Ser Asp Asn Glu Glu Gln Glu Met Lys Val Asp Asp Pro Val Thr Tyr

645 650 655

Pro Ala Val Glu Glu Asn Glu Gln Asn Gln Pro Pro Glu Lys Leu Ser

660 665 670

Ser Pro Gly Gln Glu Glu Val Glu Ser Ser Thr Gly Lys Arg Arg Phe

675 680 685

Leu Asp Leu Asn Glu Leu Ala Pro Ser Thr Gly Phe Asp Asp Gly Pro

690 695 700

Asn Thr Ile Met Lys Asp Glu Asp Asn Asp Tyr

705 710 715

<210> 3

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggatcttcca gagatatggc caacggatcc cct 33

<210> 4

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ctgccgttcg acgattcagt aatcattgtc ttcatctttc 40

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggagttcaca gaggcagag 19

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

cacttacgca tcacatagca 20

<210> 7

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gaacctgcgg tcgatgtg 18

<210> 8

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

caacccaatg ccaccaat 18

<210> 9

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

caggtcgact ctagaggatc cgccaccatg gccaacggat cccct 45

<210> 10

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gggaaattcg agctcggtac ctcagtaatc attgtcttca tctttc 46

Claims (3)

1.大豆GmDDT1蛋白编码基因Glyma.05G031300在提高植物氨基酸含量中的应用；所述的大豆GmDDT1蛋白编码基因Glyma.05G031300核苷酸序列为：SEQ ID NO.1。

2.权利要求1所述的大豆GmDDT1蛋白编码基因Glyma.05G031300在通过基因工程改造后转基因拟南芥氨基酸含量显著提高。

3.权利要求2所述的重组表达载体在通过基因工程增加果实氨基酸含量，进而提高转基因植物果实品质方面的应用。

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