CN111588845A - 一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法 - Google Patents

一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体的说是一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法，通过本发明的耐热保护剂活疫苗耐老化程度高，在37℃条件下保存7天的损失率不超过1个滴度，在2‑8℃条件下保存18个月，疫苗效价降低很少，有效解决了疫苗在运输和保存过程中需要冷冻保存而带来的能源浪费和储存不便的问题；通过制备方法中所使用的高压灭菌柜，通过设置壳体、漏罐和反应罐，有效的实现了耐热保护剂各成分原料的自动化的称取，实现各原料之间的快速溶解和均匀混合，同时可以对反应罐的内部进行自动加热和加压，最终制得耐热保护剂，制作过程全面机械化进行，清洁度较高，减少人为因素的影响，效率较高。

Description

一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制 备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体的说是一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法。
背景技术
现有技术中，市场上常见的高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗需要在-15℃以下保存，这会使疫苗在运输及保存方面增加很多成本，本发明的耐热保护剂活疫苗耐老化效果好，在37℃下保存7天后，效价损失小于1个滴度，在2-8℃下可保存18个月，这会很大程度上降低运输成本及能源浪费。
同时制备方法中是通过人工操作计量偏差较大，且人工配制过程中手的拿捏也会产生污染，效率较低，无法快速的进行批量化生产，为了优化上述制备方法存在的问题，通过改进制备方法，且优化制备疫苗过程中所使用的高压灭菌柜，以解决现有制备方法中存在的生产自动化不足、原料易污染以及生产效率较低等问题。
鉴于此，为了克服上述技术问题，本公司设计研发了一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法，采用了特殊的配方、制备方法以及优化制备方法中所使用的高压灭菌柜，解决了上述技术问题。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，现有技术中，市场上常见的高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗需要在-15℃以下保存，这会使疫苗在运输及保存方面增加很多成本，本发明的耐热保护剂活疫苗耐老化效果好，在37℃下保存7天后，效价损失小于1个滴度，在2-8℃下可保存18个月，这会很大程度上降低运输成本及能源浪费。
同时制备方法中是通过人工操作计量偏差较大，且人工配制过程中手的拿捏也会产生污染，效率较低，无法快速的进行批量化生产，为了优化上述制备方法存在的问题，通过改进制备方法，且优化制备疫苗过程中所使用的高压灭菌柜，以解决现有制备方法中存在的生产自动化不足、原料易污染以及生产效率较低等问题，本发明提出一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，该疫苗由以下重量份的成分组成：
高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)病毒抗原75份和耐热保护剂25份；
所述耐热保护剂是由以下成分组成：明胶1份、胰蛋白胨1份、蔗糖4份、聚乙烯比咯烷酮K301份、甘露醇0.5份、L-谷氨酸钠0.25份、海藻糖1份和注射用水16.25份；
本发明的耐热保护剂能最大限度地减少制品在分装及冻干过程中各种理化因素对病毒活性的损伤，使冻干前后病毒的效价损失较少；本发明的耐热保护剂活疫苗耐老化程度高，在37℃条件下保存7天的损失率不超过1个滴度，在2-8℃条件下保存18个月，疫苗效价降低很少，有效解决了疫苗在运输和保存过程中需要冷冻保存而带来的能源浪费和储存不便的问题。
一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
S1：取明胶、胰蛋白胨、蔗糖、聚乙烯比咯烷酮K30、甘露醇，分别加入到高压灭菌柜中对应的漏罐内，通过控制开关，使得不同漏罐内的以上成分按顺序分别漏入下方的反应罐内，并均溶于反应罐内的注射用水中，充分溶解后补充注射用水至所需要的量；
S2：启动搅拌机构，对反应罐内的各成分组成的混合物进行充分的混合搅拌，调节高压灭菌柜的反应罐内环境，控制温度120℃-125℃、压力14-15磅，进行高压灭菌，要求灭菌时间保持20-30分钟，然后降温、降压，室温条件保存，得到A液；
S3：取L-谷氨酸钠、海藻糖分别加入到高压灭菌柜中另一反应罐上方对应的漏罐内，充分溶解后补充注射用水至所需要的量，通过对应搅拌机构进行混合搅拌，再经过0.22μm滤芯过滤除菌，得到B液；
S4：将A液和B液按1:1比例混合均匀即得到耐热保护剂，然后将合格的病毒液与耐热保护剂按体积比3:1的比例进行混合，2.2ml/瓶进行分装，然后利用冷冻真空干燥机进行冻干，最后得到一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗；合格的病毒液为猪繁殖与呼吸综合征病毒，其培养及收获具体过程为：
细胞的传代及培养：待细胞培养瓶中Marc-145细胞长满单层时，弃掉生长液，用含0.25％胰酶的消化细胞，待培养瓶中消化细胞在倒置显微镜下观察呈圆缩状时，立即向培养瓶中加入细胞生长液，振荡培养瓶，使细胞消化分散成单个细胞，将消化后的细胞按1:3的比例进行生物反应器扩大培养；在生物反应器中采用微载体悬浮培养方式，搅拌转速40rpm/min、溶氧量40％、温度37℃、pH＝7.2、培养96h左右细胞密度不低于2×106cell/ml；
病毒的增殖培养及收获：从-70℃冰箱中取PRRSVJXA1-R株种毒，按MOI＝0.1的量进行接种至生物反应器中，接种后继续培养观察，接种70-74h后，将收获的病毒液冻融1次后经0.22μm滤芯过滤后存于-40℃保存备用；病毒液应进行无菌检验及病毒含量检验：应无菌生产且病毒含量≥107.5TCID50/ml；
配苗：将合格的病毒液与本发明的耐热保护剂按体积比3:1的比例进行混合，2.2ml/瓶进行分装，然后利用冷冻真空干燥机进行冻干；
冻干工艺如下：预冻阶段：常温进箱，2h内将制品温度缓慢降至-42℃并维持2h；一次干燥：保持真空度不变的情况下进行升温，16h内升温至-20℃，维持2h后，之后以5℃/h的速度升温至25℃进行2次干燥，维持6h后盖塞出箱；
其中S1中所使用的高压灭菌柜，包括壳体、漏罐和反应罐；所述壳体为长方体结构设计；所述壳体的内部分别开设有第一空腔和第二空腔，且第一空腔位于第二空腔的前方位置；所述第一空腔和第二空腔之间位置设有挡板；所述壳体的上表面于第一空腔位置开设有送料孔；所述送料孔的数量为二，且左右对称开设；所述壳体的内部上表面于送料孔位置均固连有固定管；所述固定管的内部靠近固定管的下表面位置均转动连接有转动板；所述转动板的上表面均固连有转动柱，且转动柱均转动连接于壳体的上表面；所述壳体的上表面于转动柱位置均固连有第一电机，且第一电机的输出轴与对应转动柱之间均固连接；所述转动板的表面均开设有均匀布置的漏孔；所述漏孔的内部均固连有漏罐，且漏罐的下方位置均为漏斗状结构设计；所述漏罐的底部开口位置均设有控制开关；所述壳体的内部下表面位置于转动盘的正下方位置均固连有固定座；所述固定座的上表面均开设有调节槽；所述调节槽的内部均上下滑动连接有反应罐；所述调节槽的槽底位置均固连有第一伸缩杆，且第一伸缩杆的活塞杆与对应的反应罐的下表面之间均固连接；所述壳体的内部前后端面之间于反应罐位置均固连有导杆，且每个反应罐左右对称设置两个导杆；两个相对的所述导杆之间均共同固连有滑板；所述滑板与壳体的后壁之间均固连有第二伸缩杆；工作时，当制作耐热保护剂时，需要在高温高压下进行持续20分钟的灭菌，这里会用到高压灭菌柜，现有技术的高压灭菌柜，均为简单的密封式结构，通过控制高压灭菌柜内部的压强以实现对其内部环境的有效灭菌，但是在使用高压灭菌柜时，需要反复开合高压灭菌柜的开关门，以将耐热保护剂的盛放罐放入和取出，首先这个过程，会使得空气中的大量细菌进入到高压灭菌柜的内部，对高压灭菌柜的内部造成污染，其次盛放罐取出后其表面也会容易滋生大量的细菌，再次使用并放入高压灭菌柜时，盛放罐也会对高压灭菌柜的内部造成污染，同时人工操作计量偏差较大，且人配制过程中手的拿捏也会产生污染，效率较低，无法快速的进行批量化生产等问题，通过本发明的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，通过该方法中所使用的高压灭菌柜，当需要进行耐热保护剂制作时，首先将各成分的原料至于对应的漏罐的内部，然后启动第一电机，第一电机带动转动柱转动，转动柱进而带动转动板转动，转动板进而带动其表面均匀布置的漏罐转动，然后打开控制开关，漏罐内部的原料下落入反应罐的内部，并通过反应罐下方的压力感应器进行实时的加量反馈，通过第一电机的转动，使得漏罐内部的原料均匀的溶解入反应罐中注射用水的内部，然后第二伸缩杆伸出，第二伸缩杆会带动滑板运动到对应反应罐的正上方位置，此时第一伸缩杆伸出，带动反应罐向上滑动，实现反应罐与滑板之间的贴合密封，通过反应罐内的调压管道反应罐的内部进行压力调节，同时通过反应罐内部的加热系统对反应罐内进行加热，并完成A液和B液的配置，而后一比一自动导出反应罐进行混合；通过本发明有效的实现了耐热保护剂各成分原料的自动化的称取，并使得原料均匀的落入反应罐的注射用水内，实现各原料之间的快速溶解和均匀混合，同时可以对反应罐的内部进行自动加热和加压，最终制得耐热保护剂，制作过程全面机械化进行，清洁度较高，减少人为因素的影响，效率较高。
优选的，所述控制开关包括有气缸、调节杆和调节堵塞；所述漏罐的上表面均固连有横杆；所述横杆的上表面均固连气缸；所述气缸的活塞杆于漏罐的内部位置均固连调节杆；所述调节杆的上表面均固连调节堵塞；工作时，通过设置调节杆，当需要将漏罐内的原料导入到反应罐内时，可以通过控制气缸活塞杆的伸缩，进而带动调节杆上下移动，调节杆进而带动调节堵塞上下移动，通过调节堵塞的移动进而自动控制漏罐下方开口的大小。
优选的，所述滑板的上表面均固连有第二电机，且第二电机的输出轴均穿过滑板并延伸至滑板的下方位置；所述第二电机的输出轴均固连有第三伸缩杆；所述反应罐的内部下表面位置均转动连接有搅动盘；所述搅动盘的上表面于搅动盘的轴线位置均固连有连接柱；所述连接柱的表面均开设有均匀布置的气孔；工作时，通过设置第二电机，第二电机转动会带动第三伸缩杆的转动，通过第三伸缩杆的伸缩可以与连接柱自动断连，当第三伸缩杆与连接柱之间连接时，第三伸缩杆会带动搅动盘转动，搅动盘的转动可以促进对反应罐内部原料之间混合，通过连接柱表面开设的气孔，可以不断的导出气体，进一步提高原料的混合效率。
优选的，所述反应罐的侧壁内部均开设有环形控温腔；所述控温腔远离反应罐轴线的一侧侧面均固连有均匀布置的加热板；工作时，通过在反应罐的侧壁内开设环形控温腔，通过环形控温腔的内部设置均匀布置的加热板，且加热板位于远离反应罐轴线的一侧侧壁，通过加热板的加热，对环形控温腔内部的导热液进行快速的加热，通过控制环形控温腔内部的压强，可以控制导热液的沸点温度，通过导热液的热传导，实现对反应罐内部原料溶液的加热，且完成加热后，为了快速进行降温，可以将热的导热液快速更换为冷的导热液，实现对反应罐的快速降温，提高生产效率。
优选的，两个所述反应罐的上表面均开设有环形槽；所述环形槽的内部均安装有环形密封垫；所述环形密封垫的上表面均为三重凸环密封结构设计；工作时，由于反应罐工作时，其内部需要大幅增压，过高的压强对反应罐和滑板之间的密封性提出了更高的要求，为了解决该问题，通过设置密封垫，通过在滑板与反应罐之间设置密封垫，且密封垫的上表面进行三重凸环密封结构设计，大幅提高了密封的效果，减少了高压下的气流泄露风险。
优选的，两个所述滑板的内部均开设有隔热腔；两个所述隔热腔的内部均固连有隔热棉；工作时，通过在滑板的内部开设隔热腔，且隔热腔的内部设置隔热棉，可以有效的减少反应罐内部的热量通过滑板向上传导，使得滑板上方的温度大幅升高，一方面造成了能源的浪费，另一方面会对漏罐内部的原料持续加热，对原料质量产生影响，同时工作人员在向漏罐的内部加料时，高温也容易烫伤人员。
本发明的有益效果如下：
1.本发明所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法，通过本发明的耐热保护剂活疫苗耐老化程度高，在37℃条件下保存7天的损失率不超过1个滴度，在2-8℃条件下保存18个月，疫苗效价降低很少，有效解决了疫苗在运输和保存过程中需要冷冻保存而带来的能源浪费和储存不便的问题。
2.本发明所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗及其制备方法，通过制备方法中所使用的高压灭菌柜，通过设置壳体、漏罐和反应罐，有效的实现了耐热保护剂各成分原料的自动化的称取，并使得原料均匀的落入反应罐的注射用水内，实现各原料之间的快速溶解和均匀混合，同时可以对反应罐的内部进行自动加热和加压，最终制得耐热保护剂，制作过程全面机械化进行，清洁度较高，减少人为因素的影响，效率较高。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步说明。
图1是本发明的方法流程图
图2是本发明所使用的高压灭菌柜的外观图；
图3是本发明所使用的高压灭菌柜的立体图；
图4是本发明所使用的高压灭菌柜的俯视图；
图5是图4中A-A处的截面视图；
图6是图5中B处局部放大视图；
图中：壳体1、滑板11、第二伸缩杆12、隔热腔13、漏罐2、转动板21、转动柱22、第一电机23、气缸24、调节杆25、调节堵塞26、反应罐3、第一伸缩杆31、第二电机32、第三伸缩杆33、搅动盘34、气孔35、环形控温腔36、加热板37、环形密封垫38。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
如图1至图6所示，本发明所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，该疫苗由以下重量份的成分组成：
高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)病毒抗原75份和耐热保护剂25份；
所述耐热保护剂是由以下成分组成：明胶1份、胰蛋白胨1份、蔗糖4份、聚乙烯比咯烷酮K301份、甘露醇0.5份、L-谷氨酸钠0.25份、海藻糖1份和注射用水16.25份；
本发明的耐热保护剂能最大限度地减少制品在分装及冻干过程中各种理化因素对病毒活性的损伤，使冻干前后病毒的效价损失较少；本发明的耐热保护剂活疫苗耐老化程度高，在37℃条件下保存7天的损失率不超过1个滴度，在2-8℃条件下保存18个月，疫苗效价降低很少，有效解决了疫苗在运输和保存过程中需要冷冻保存而带来的能源浪费和储存不便的问题。
一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
S1：取明胶、胰蛋白胨、蔗糖、聚乙烯比咯烷酮K30、甘露醇，分别加入到高压灭菌柜中对应的漏罐2内，通过控制开关，使得不同漏罐2内的以上成分按顺序分别漏入下方的反应罐3内，并均溶于反应罐3内的注射用水中，充分溶解后补充注射用水至所需要的量；
S2：启动搅拌机构，对反应罐3内的各成分组成的混合物进行充分的混合搅拌，调节高压灭菌柜的反应罐3内环境，控制温度120℃-125℃、压力14-15磅，进行高压灭菌，要求灭菌时间保持20-30分钟，然后降温、降压，室温条件保存，得到A液；
S3：取L-谷氨酸钠、海藻糖分别加入到高压灭菌柜中另一反应罐3上方对应的漏罐2内，充分溶解后补充注射用水至所需要的量，通过对应搅拌机构进行混合搅拌，再经过0.22μm滤芯过滤除菌，得到B液；
S4：将A液和B液按1:1比例混合均匀即得到耐热保护剂，然后将合格的病毒液与耐热保护剂按体积比3:1的比例进行混合，2.2ml/瓶进行分装，然后利用冷冻真空干燥机进行冻干，最后得到一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗；合格的病毒液为猪繁殖与呼吸综合征病毒，其培养及收获具体过程为：
细胞的传代及培养：待细胞培养瓶中Marc-145细胞长满单层时，弃掉生长液，用含0.25％胰酶的消化细胞，待培养瓶中消化细胞在倒置显微镜下观察呈圆缩状时，立即向培养瓶中加入细胞生长液，振荡培养瓶，使细胞消化分散成单个细胞，将消化后的细胞按1:3的比例进行生物反应器扩大培养；在生物反应器中采用微载体悬浮培养方式，搅拌转速40rpm/min、溶氧量40％、温度37℃、pH＝7.2、培养96h左右细胞密度不低于2×106cell/ml；
病毒的增殖培养及收获：从-70℃冰箱中取PRRSVJXA1-R株种毒，按MOI＝0.1的量进行接种至生物反应器中，接种后继续培养观察，接种70-74h后，将收获的病毒液冻融1次后经0.22μm滤芯过滤后存于-40℃保存备用；病毒液应进行无菌检验及病毒含量检验：应无菌生产且病毒含量≥107.5TCID50/ml；
配苗：将合格的病毒液与本发明的耐热保护剂按体积比3:1的比例进行混合，2.2ml/瓶进行分装，然后利用冷冻真空干燥机进行冻干；
冻干工艺如下：预冻阶段：常温进箱，2h内将制品温度缓慢降至-42℃并维持2h；一次干燥：保持真空度不变的情况下进行升温，16h内升温至-20℃，维持2h后，之后以5℃/h的速度升温至25℃进行2次干燥，维持6h后盖塞出箱；
其中S1中所使用的高压灭菌柜，包括壳体1、漏罐2和反应罐3；所述壳体1为长方体结构设计；所述壳体1的内部分别开设有第一空腔和第二空腔，且第一空腔位于第二空腔的前方位置；所述第一空腔和第二空腔之间位置设有挡板；所述壳体1的上表面于第一空腔位置开设有送料孔；所述送料孔的数量为二，且左右对称开设；所述壳体1的内部上表面于送料孔位置均固连有固定管；所述固定管的内部靠近固定管的下表面位置均转动连接有转动板21；所述转动板21的上表面均固连有转动柱22，且转动柱22均转动连接于壳体1的上表面；所述壳体1的上表面于转动柱22位置均固连有第一电机23，且第一电机23的输出轴与对应转动柱22之间均固连接；所述转动板21的表面均开设有均匀布置的漏孔；所述漏孔的内部均固连有漏罐2，且漏罐2的下方位置均为漏斗状结构设计；所述漏罐2的底部开口位置均设有控制开关；所述壳体1的内部下表面位置于转动盘的正下方位置均固连有固定座；所述固定座的上表面均开设有调节槽；所述调节槽的内部均上下滑动连接有反应罐3；所述调节槽的槽底位置均固连有第一伸缩杆31，且第一伸缩杆31的活塞杆与对应的反应罐3的下表面之间均固连接；所述壳体1的内部前后端面之间于反应罐3位置均固连有导杆，且每个反应罐3左右对称设置两个导杆；两个相对的所述导杆之间均共同固连有滑板11；所述滑板11与壳体1的后壁之间均固连有第二伸缩杆12；工作时，当制作耐热保护剂时，需要在高温高压下进行持续20分钟的灭菌，这里会用到高压灭菌柜，现有技术的高压灭菌柜，均为简单的密封式结构，通过控制高压灭菌柜内部的压强以实现对其内部环境的有效灭菌，但是在使用高压灭菌柜时，需要反复开合高压灭菌柜的开关门，以将耐热保护剂的盛放罐放入和取出，首先这个过程，会使得空气中的大量细菌进入到高压灭菌柜的内部，对高压灭菌柜的内部造成污染，其次盛放罐取出后其表面也会容易滋生大量的细菌，再次使用并放入高压灭菌柜时，盛放罐也会对高压灭菌柜的内部造成污染，同时人工操作计量偏差较大，且人配制过程中手的拿捏也会产生污染，效率较低，无法快速的进行批量化生产等问题，通过本发明的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，通过该方法中所使用的高压灭菌柜，当需要进行耐热保护剂制作时，首先将各成分的原料至于对应的漏罐2的内部，然后启动第一电机23，第一电机23带动转动柱22转动，转动柱22进而带动转动板21转动，转动板21进而带动其表面均匀布置的漏罐2转动，然后打开控制开关，漏罐2内部的原料下落入反应罐3的内部，并通过反应罐3下方的压力感应器进行实时的加量反馈，通过第一电机23的转动，使得漏罐2内部的原料均匀的溶解入反应罐3中注射用水的内部，然后第二伸缩杆12伸出，第二伸缩杆12会带动滑板11运动到对应反应罐3的正上方位置，此时第一伸缩杆31伸出，带动反应罐3向上滑动，实现反应罐3与滑板11之间的贴合密封，通过反应罐3内的调压管道反应罐3的内部进行压力调节，同时通过反应罐3内部的加热系统对反应罐3内进行加热，并完成A液和B液的配置，而后一比一自动导出反应罐3进行混合；通过本发明有效的实现了耐热保护剂各成分原料的自动化的称取，并使得原料均匀的落入反应罐3的注射用水内，实现各原料之间的快速溶解和均匀混合，同时可以对反应罐3的内部进行自动加热和加压，最终制得耐热保护剂，制作过程全面机械化进行，清洁度较高，减少人为因素的影响，效率较高。
作为本发明的一种实施方式，所述控制开关包括有气缸24、调节杆25和调节堵塞26；所述漏罐2的上表面均固连有横杆；所述横杆的上表面均固连气缸24；所述气缸24的活塞杆于漏罐2的内部位置均固连调节杆25；所述调节杆25的上表面均固连调节堵塞26；工作时，通过设置调节杆25，当需要将漏罐2内的原料导入到反应罐3内时，可以通过控制气缸24活塞杆的伸缩，进而带动调节杆25上下移动，调节杆25进而带动调节堵塞26上下移动，通过调节堵塞26的移动进而自动控制漏罐2下方开口的大小。
作为本发明的一种实施方式，所述滑板11的上表面均固连有第二电机32，且第二电机32的输出轴均穿过滑板11并延伸至滑板11的下方位置；所述第二电机32的输出轴均固连有第三伸缩杆33；所述反应罐3的内部下表面位置均转动连接有搅动盘34；所述搅动盘34的上表面于搅动盘34的轴线位置均固连有连接柱；所述连接柱的表面均开设有均匀布置的气孔35；工作时，通过设置第二电机32，第二电机32转动会带动第三伸缩杆33的转动，通过第三伸缩杆33的伸缩可以与连接柱自动断连，当第三伸缩杆33与连接柱之间连接时，第三伸缩杆33会带动搅动盘34转动，搅动盘34的转动可以促进对反应罐3内部原料之间混合，通过连接柱表面开设的气孔35，可以不断的导出气体，进一步提高原料的混合效率。
作为本发明的一种实施方式，所述反应罐3的侧壁内部均开设有环形控温腔36；所述控温腔远离反应罐3轴线的一侧侧面均固连有均匀布置的加热板37；工作时，通过在反应罐3的侧壁内开设环形控温腔36，通过环形控温腔36的内部设置均匀布置的加热板37，且加热板37位于远离反应罐3轴线的一侧侧壁，通过加热板37的加热，对环形控温腔36内部的导热液进行快速的加热，通过控制环形控温腔36内部的压强，可以控制导热液的沸点温度，通过导热液的热传导，实现对反应罐3内部原料溶液的加热，且完成加热后，为了快速进行降温，可以将热的导热液快速更换为冷的导热液，实现对反应罐3的快速降温，提高生产效率。
作为本发明的一种实施方式，两个所述反应罐3的上表面均开设有环形槽；所述环形槽的内部均安装有环形密封垫38；所述环形密封垫38的上表面均为三重凸环密封结构设计；工作时，由于反应罐3工作时，其内部需要大幅增压，过高的压强对反应罐3和滑板11之间的密封性提出了更高的要求，为了解决该问题，通过设置密封垫，通过在滑板11与反应罐3之间设置密封垫，且密封垫的上表面进行三重凸环密封结构设计，大幅提高了密封的效果，减少了高压下的气流泄露风险。
作为本发明的一种实施方式，两个所述滑板11的内部均开设有隔热腔13；两个所述隔热腔13的内部均固连有隔热棉；工作时，通过在滑板11的内部开设隔热腔13，且隔热腔13的内部设置隔热棉，可以有效的减少反应罐3内部的热量通过滑板11向上传导，使得滑板11上方的温度大幅升高，一方面造成了能源的浪费，另一方面会对漏罐2内部的原料持续加热，对原料质量产生影响，同时工作人员在向漏罐2的内部加料时，高温也容易烫伤人员。
具体工作流程如下：
工作时，当需要进行耐热保护剂制作时，首先将各成分的原料至于对应的漏罐2的内部，然后启动第一电机23，第一电机23带动转动柱22转动，转动柱22进而带动转动板21转动，转动板21进而带动其表面均匀布置的漏罐2转动，然后打开控制开关，漏罐2内部的原料下落入反应罐3的内部，并通过反应罐3下方的压力感应器进行实时的加量反馈，通过第一电机23的转动，使得漏罐2内部的原料均匀的溶解入反应罐3中注射用水的内部，然后第二伸缩杆12伸出，第二伸缩杆12会带动滑板11运动到对应反应罐3的正上方位置，此时第一伸缩杆31伸出，带动反应罐3向上滑动，实现反应罐3与滑板11之间的贴合密封，通过反应罐3内的调压管道反应罐3的内部进行压力调节，同时通过反应罐3内部的加热系统对反应罐3内进行加热，并完成A液和B液的配置，而后一比一自动导出反应罐3进行混合；通过设置调节杆25，当需要将漏罐2内的原料导入到反应罐3内时，可以通过控制气缸24活塞杆的伸缩，进而带动调节杆25上下移动，调节杆25进而带动调节堵塞26上下移动，通过调节堵塞26的移动进而自动控制漏罐2下方开口的大小；通过设置第二电机32，第二电机32转动会带动第三伸缩杆33的转动，通过第三伸缩杆33的伸缩可以与连接柱自动断连，当第三伸缩杆33与连接柱之间连接时，第三伸缩杆33会带动搅动盘34转动，搅动盘34的转动可以促进对反应罐3内部原料之间混合，通过连接柱表面开设的气孔35，可以不断的导出气体，进一步提高原料的混合效率；通过在反应罐3的侧壁内开设环形控温腔36，通过环形控温腔36的内部设置均匀布置的加热板37，且加热板37位于远离反应罐3轴线的一侧侧壁，通过加热板37的加热，对环形控温腔36内部的导热液进行快速的加热，通过控制环形控温腔36内部的压强，可以控制导热液的沸点温度，通过导热液的热传导，实现对反应罐3内部原料溶液的加热，且完成加热后，为了快速进行降温，可以将热的导热液快速更换为冷的导热液，实现对反应罐3的快速降温；通过设置密封垫，通过在滑板11与反应罐3之间设置密封垫，且密封垫的上表面进行三重凸环密封结构设计，大幅提高了密封的效果；通过在滑板11的内部开设隔热腔13，且隔热腔13的内部设置隔热棉，可以有效的减少反应罐3内部的热量通过滑板11向上传导，使得滑板11上方的温度大幅升高，一方面造成了能源的浪费，另一方面会对漏罐2内部的原料持续加热，对原料质量产生影响，同时工作人员在向漏罐2的内部加料时，高温也容易烫伤人员。
表1耐热保护剂配方比例表
Figure BDA0002521327210000111
实施例1
使用表1中配方1耐热保护剂制得的疫苗用无血清DMEM细胞培养液稀释为1头份/ml，再做10倍系列稀释，取10-3、10-4、10-5、10-6共4个稀释度，分别接种至已长成良好单层、弃去细胞培养液的96孔Marc-145细胞培养板，每个稀释度接种6孔，每孔0.1ml，同时设正常细胞对照。置37℃、含5％CO2培养箱中吸附1h后，每孔补加含4％新生牛血清的DMEM细胞培养液0.1ml，置37℃、含5％CO2培养箱中培养观察5日，根据Reed-Muench法计算TCID50，每头份病毒含量应≥105.5TCID50，测定冻干前后病毒含量变化，同时进行疫苗保存期试验，将疫苗及常规疫苗分别放置于2-8℃下保存，定期取出几瓶测定性状、真空度、剩余水分以及病毒含量。
实施例2
使用表1中配方2耐热保护剂制得的疫苗用无血清DMEM细胞培养液稀释为1头份/ml，再做10倍系列稀释，取10-3、10-4、10-5、10-6共4个稀释度，分别接种至已长成良好单层、弃去细胞培养液的96孔Marc-145细胞培养板，每个稀释度接种6孔，每孔0.1ml，同时设正常细胞对照。置37℃、含5％CO2培养箱中吸附1h后，每孔补加含4％新生牛血清的DMEM细胞培养液0.1ml，置37℃、含5％CO2培养箱中培养观察5日，根据Reed-Muench法计算TCID50，每头份病毒含量应≥105.5TCID50，测定冻干前后病毒含量变化，同时进行疫苗保存期试验，将疫苗及常规疫苗分别放置于2-8℃下保存，定期取出几瓶测定性状、真空度、剩余水分以及病毒含量。
实施例3
使用表1中配方3常规疫苗对照组用无血清DMEM细胞培养液稀释为1头份/ml，再做10倍系列稀释，取10-3、10-4、10-5、10-6共4个稀释度，分别接种至已长成良好单层、弃去细胞培养液的96孔Marc-145细胞培养板，每个稀释度接种6孔，每孔0.1ml，同时设正常细胞对照。置37℃、含5％CO2培养箱中吸附1h后，每孔补加含4％新生牛血清的DMEM细胞培养液0.1ml，置37℃、含5％CO2培养箱中培养观察5日，根据Reed-Muench法计算TCID50，每头份病毒含量应≥105.5TCID50，测定冻干前后病毒含量变化，同时进行疫苗保存期试验，将疫苗及常规疫苗分别放置于2-8℃下保存，定期取出几瓶测定性状、真空度、剩余水分以及病毒含量。
表2冻干前后病毒含量
组别 冻干前(TCID<sub>50</sub>) 冻干后(TCID<sub>50</sub>)
1组 10<sup>6.6</sup> 10<sup>6.4</sup>
2组 10<sup>6.6</sup> 10<sup>6.5</sup>
常规疫苗对照组 10<sup>6.5</sup> 10<sup>6.16</sup>
表3冻干样品在2-8℃保存不同时间性状、真空度、剩余水分以及病毒含量结果
Figure BDA0002521327210000121
Figure BDA0002521327210000131
表4冻干样品37℃保存不同时间性状、真空度、剩余水分以及病毒含量结果
Figure BDA0002521327210000132
Figure BDA0002521327210000141
冻干前后病毒含量见表2，表中数据表明采用耐热保护剂的猪繁殖与呼吸综合征活疫苗冻干前后病毒含量损失最大为0.15个滴度，常规保护剂冻干前后病毒含量损失达到0.34个滴度，从表3中可以看出，本发明耐热保护剂配方冻干的疫苗在2～8℃保存条件下，均可以保存18个月，从表4中可以看出，本发明耐热保护剂配方冻干的疫苗在37℃保存条件下，均可以保存7日，与常规保护剂冻干疫苗的保存期相比，有很大的优势。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (7)

1.一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：该疫苗由以下重量份的成分组成：
高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)病毒抗原75份和耐热保护剂25份；
所述耐热保护剂是由以下成分组成：明胶1份、胰蛋白胨1份、蔗糖4份、聚乙烯比咯烷酮K301份、甘露醇0.5份、L-谷氨酸钠0.25份、海藻糖1份和注射用水16.25份。
2.一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：
S1：取明胶、胰蛋白胨、蔗糖、聚乙烯比咯烷酮K30、甘露醇，分别加入到高压灭菌柜中对应的漏罐(2)内，通过控制开关，使得不同漏罐(2)内的以上成分按顺序分别漏入下方的反应罐(3)内，并均溶于反应罐(3)内的注射用水中，充分溶解后补充注射用水至所需要的量；
S2：启动搅拌机构，对反应罐(3)内的各成分组成的混合物进行充分的混合搅拌，调节高压灭菌柜的反应罐(3)内环境，控制温度120℃-125℃、压力14-15磅，进行高压灭菌，要求灭菌时间保持20-30分钟，然后降温、降压，室温条件保存，得到A液；
S3：取L-谷氨酸钠、海藻糖分别加入到高压灭菌柜中另一反应罐(3)上方对应的漏罐(2)内，充分溶解后补充注射用水至所需要的量，通过对应搅拌机构进行混合搅拌，再经过0.22μm滤芯过滤除菌，得到B液；
S4：将A液和B液按1:1比例混合均匀即得到耐热保护剂，然后将合格的病毒液与耐热保护剂按体积比3:1的比例进行混合，2.2ml/瓶进行分装，然后利用冷冻真空干燥机进行冻干，最后得到一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗；
其中S1中所使用的高压灭菌柜，包括壳体(1)、漏罐(2)和反应罐(3)；所述壳体(1)为长方体结构设计；所述壳体(1)的内部分别开设有第一空腔和第二空腔，且第一空腔位于第二空腔的前方位置；所述第一空腔和第二空腔之间位置设有挡板；所述壳体(1)的上表面于第一空腔位置开设有送料孔；所述送料孔的数量为二，且左右对称开设；所述壳体(1)的内部上表面于送料孔位置均固连有固定管；所述固定管的内部靠近固定管的下表面位置均转动连接有转动板(21)；所述转动板(21)的上表面均固连有转动柱(22)，且转动柱(22)均转动连接于壳体(1)的上表面；所述壳体(1)的上表面于转动柱(22)位置均固连有第一电机(23)，且第一电机(23)的输出轴与对应转动柱(22)之间均固连接；所述转动板(21)的表面均开设有均匀布置的漏孔；所述漏孔的内部均固连有漏罐(2)，且漏罐(2)的下方位置均为漏斗状结构设计；所述漏罐(2)的底部开口位置均设有控制开关；所述壳体(1)的内部下表面位置于转动盘的正下方位置均固连有固定座；所述固定座的上表面均开设有调节槽；所述调节槽的内部均上下滑动连接有反应罐(3)；所述调节槽的槽底位置均固连有第一伸缩杆(31)，且第一伸缩杆(31)的活塞杆与对应的反应罐(3)的下表面之间均固连接；所述壳体(1)的内部前后端面之间于反应罐(3)位置均固连有导杆，且每个反应罐(3)左右对称设置两个导杆；两个相对的所述导杆之间均共同固连有滑板(11)；所述滑板(11)与壳体(1)的后壁之间均固连有第二伸缩杆(12)。
3.根据权利要求2所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于：所述控制开关包括有气缸(24)、调节杆(25)和调节堵塞(26)；所述漏罐(2)的上表面均固连有横杆；所述横杆的上表面均固连气缸(24)；所述气缸(24)的活塞杆于漏罐(2)的内部位置均固连调节杆(25)；所述调节杆(25)的上表面均固连调节堵塞(26)。
4.根据权利要求3所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于：所述滑板(11)的上表面均固连有第二电机(32)，且第二电机(32)的输出轴均穿过滑板(11)并延伸至滑板(11)的下方位置；所述第二电机(32)的输出轴均固连有第三伸缩杆(33)；所述反应罐(3)的内部下表面位置均转动连接有搅动盘(34)；所述搅动盘(34)的上表面于搅动盘(34)的轴线位置均固连有连接柱；所述连接柱的表面均开设有均匀布置的气孔(35)。
5.根据权利要求4所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于：所述反应罐(3)的侧壁内部均开设有环形控温腔(36)；所述控温腔远离反应罐(3)轴线的一侧侧面均固连有均匀布置的加热板(37)。
6.根据权利要求4所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于：两个所述反应罐(3)的上表面均开设有环形槽；所述环形槽的内部均安装有环形密封垫(38)；所述环形密封垫(38)的上表面均为三重凸环密封结构设计。
7.根据权利要求5所述的一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于：两个所述滑板(11)的内部均开设有隔热腔(13)；两个所述隔热腔(13)的内部均固连有隔热棉。
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