CN111562328A - 高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质 - Google Patents

高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质 Download PDF

Info

Publication number
CN111562328A
CN111562328A CN202010443753.5A CN202010443753A CN111562328A CN 111562328 A CN111562328 A CN 111562328A CN 202010443753 A CN202010443753 A CN 202010443753A CN 111562328 A CN111562328 A CN 111562328A
Authority
CN
China
Prior art keywords
liquid chromatography
sample
quinolone
substances
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010443753.5A
Other languages
English (en)
Inventor
韦石
于娜
张艳艳
考志强
黄玉舟
李丽
朱立蕊
金鑫
王雪莹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Liaoning General Fair Testing Co ltd
Original Assignee
Liaoning General Fair Testing Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Liaoning General Fair Testing Co ltd filed Critical Liaoning General Fair Testing Co ltd
Priority to CN202010443753.5A priority Critical patent/CN111562328A/zh
Publication of CN111562328A publication Critical patent/CN111562328A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/60—Construction of the column
    • G01N30/6052—Construction of the column body
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/64—Electrical detectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/74—Optical detectors

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明涉及一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，包括样品处理、标准工作溶液配置、标准曲线的绘制、定性分析和定量分析；其中样品处理包括以下步骤，步骤1：称取样品，将样品置于离心管中，加入Na2.EDTA、乙腈、甲醇、氯化钠和磷酸盐缓冲溶液，旋涡混匀，并震荡提取上清液，分组加入蒸馏水稀释至100倍、1000倍和10000倍；步骤2：用甲醇对步骤1中稀释后上清液进行洗脱，洗脱液置于试管中40℃氮气浓缩至干，加入甲酸乙腈定容液后，涡旋混匀，过0.22um滤膜备用；由于采用液相色谱串联质谱和高效液相色谱，提高了定性和定量的准确性。

Description

高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺 酮类物质
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质。
背景技术
在兽药注射液中，中药类注射液为了达到使用效果往往存在非法添加抗生素等西药成分的情况。液相色谱串联质谱作和高效液相色谱为高精密分析仪器，常常用来进行兽药成分和含量的检测，液相色谱串联质谱在检测过程中有着良好的定性分析能力，对可能存在的添加成分进行有效的定性分析。高效液相色谱在检测过程中有着高灵敏度，可用于对添加成分的定量分析；但是单独使用这两种设备往往达不到良好的定性或定量效果。
发明内容
(一)要解决的技术问题
鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，采用两种设备共同进行分析检测，前期使用液相色谱串联质谱对样品可能添加的成分进行定性分析，确定是否存在相关的添加成分，而后利用高效液相色谱对样品中添加的成分进行定量检测，发挥两种设备各自的优势，以达到良好的检测效果。
(二)技术方案
为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：
一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，包括以下步骤：
(1)样品处理：
步骤1：称取样品，将样品置于离心管中，加入Na2.EDTA、乙腈、甲醇、氯化钠和磷酸盐缓冲溶液，旋涡混匀，并震荡提取上清液，分组加入蒸馏水稀释至100倍、1000倍和10000倍；
步骤2：用甲醇对步骤1中稀释后上清液进行洗脱，洗脱液置于试管中40℃氮气浓缩至干，加入甲酸乙腈定容液后，涡旋混匀，过0.22um滤膜备用；
(2)标准工作溶液配置：
称取一定量的喹诺酮类物质，进行稀释溶解配置成不同浓度的标准工作液；
(3)标准曲线的绘制：
量取一定量的标准工作溶液，供液高效液相色谱-液相色谱串联质谱测定；绘制标准曲线，获得喹诺酮类物质的定性分析色谱图库；
(4)定性分析：对经过步骤2所述方法处理的待测样品进行一次性液相色谱分析，则可判定为样品中存在对应的待测物：
(5)定量分析：所制备的混合标准工作液进行质谱分析，得到色谱峰面积响应值，作单点或多点校准，用外标法定量；标准工作溶液及样品溶液中喹诺酮类的响应值应在仪器检测的线性范围内，若待测样品溶液浓度超过线性范围时，用乙腈/水溶液稀释后重新测定；
试样中待测物的含量以质量分数X表示，单位为微克每千克(ug/kg),按照下列公式计算：
Figure BDA0002504909440000021
公式中：
X-待测物的含量，单位为微克每千克(ug/kg)；
A-待测物的峰面积；
As-标准溶液中待测物峰面积；
Cs-标准溶液中待测物浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
m-样品的质量，单位为克(g)；
V-溶解残余物的体积，单位为毫升(mL)；
V1-过固相萃取柱的提取液体积，单位为毫升(mL)；
V2-总提取液体积，单位为毫升(mL)；
n-稀释倍数。
可选地，该喹诺酮类物质包括依诺沙星、萘啶酸、诺氟沙星、洛美沙星、恶喹酸、达氟沙星、氟甲喹依诺沙星和西诺沙星中的一种或多种。
可选地，所述定性分析的仪器条件为：多反应监测、电喷雾电离正离子模式；所述定量分析的仪器条件为：二极管阵列检测器，根据物质类别设定检测波长。
可选地，所述色谱柱条件为：C18色谱柱，柱长100mm，柱内径2.1mm，粒度1.7um。
可选地，所述样品处理中震荡25min，以8000r/min转速离心5min。
(三)有益效果
本发明的有益效果是：本发明一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，由于采用液相色谱串联质谱和高效液相色谱，相对于现有技术而言，利用液相色谱串联质谱在定性检测方面的优势对样品中可能存在的非法添加的喹诺酮类物质进行分析，以确定其是否存在该类物质，并确定具体的物质名称，之后利用液相色谱在定量方面的优势对已经确定含有的喹诺酮类物质进行定量检测，以确定其在样品中的非法添加量，提高了定性和定量的准确性。
具体实施方式
为了更好的解释本发明，以便于理解，通过具体实施方式，对本发明作详细描述。
提供这些实施例是为了能够更清楚、透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
实施例：
一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，包括以下步骤：
(1)样品处理：
步骤1：称取样品，将样品置于离心管中，加入Na2.EDTA、乙腈、甲醇、氯化钠和磷酸盐缓冲溶液，旋涡混匀，并震荡提取上清液，分组加入蒸馏水稀释至100倍、1000倍和10000倍，当然本发明不限于此，稀释倍数也可以调整增大或者减小；
步骤2：用甲醇对步骤1中稀释后上清液进行洗脱，洗脱液置于试管中40℃氮气浓缩至干，当然本发明不限于此，氮气温度可以根据实际情况调整，加入甲酸乙腈定容液后，涡旋混匀，过0.22um滤膜备用；
(2)标准工作溶液配置：
称取一定量的喹诺酮类物质，进行稀释溶解配置成不同浓度的标准工作液，喹诺酮类物质可选择依诺沙星、萘啶酸、诺氟沙星、洛美沙星、恶喹酸、达氟沙星、氟甲喹依诺沙星和西诺沙星中的一种或多种，当然本发明不限于此，也可以选定喹诺酮类物质中的其它种类。
(3)标准曲线的绘制：
量取一定量的标准工作溶液，供液高效液相色谱-液相色谱串联质谱测定；绘制标准曲线，获得喹诺酮类物质的定性分析色谱图库；
(4)定性分析：对经过步骤2所述方法处理的待测样品进行一次性液相色谱分析，则可判定为样品中存在对应的待测物：
(5)定量分析：所制备的混合标准工作液进行质谱分析，得到色谱峰面积响应值，作单点或多点校准，用外标法定量；标准工作溶液及样品溶液中喹诺酮类的响应值应在仪器检测的线性范围内，若待测样品溶液浓度超过线性范围时，用乙腈/水溶液稀释后重新测定；
试样中待测物的含量以质量分数X表示，单位为微克每千克(ug/kg),按照下列公式计算：
Figure BDA0002504909440000051
公式中：
X-待测物的含量，单位为微克每千克(ug/kg)；
B-待测物的峰面积；
As-标准溶液中待测物峰面积；
Cs-标准溶液中待测物浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
m-样品的质量，单位为克(g)；
V-溶解残余物的体积，单位为毫升(mL)；
V1-过固相萃取柱的提取液体积，单位为毫升(mL)；
V2-总提取液体积，单位为毫升(mL)；
n-稀释倍数。
定性分析的仪器条件为：
离子源：电喷雾电离(ESI)；扫描方式：正负离子同时扫描；离子源温度：150℃；毛细管电压：3.0kV；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：750L/h；碰撞气流速：0.15mL/min，锥孔反吹气流量：150L/h；
监测方式：多时段-多反应监测(multiple-period MRM)；
所述定量分析的仪器条件为：二极管阵列检测器，根据物质类别设定检测波长。
色谱柱条件为：
C18色谱柱，柱长100mm，柱内径2.1mm，粒度1.7um。
所述样品处理中震荡25min，以8000r/min转速离心5min，当然本发明不限于此，可以根据实际情况进行调整数据参数。
表1为某兽药中检测部分非法添加喹诺酮类物质的浓度水平、信噪比和检出限
Figure BDA0002504909440000052
Figure BDA0002504909440000061
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (5)

1.一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，其特征在于：包括以下步骤：
(1)样品处理：
步骤1：称取样品，将样品置于离心管中，加入Na2.EDTA、乙腈、甲醇、氯化钠和磷酸盐缓冲溶液，旋涡混匀，并震荡提取上清液，分组加入蒸馏水稀释至100倍、1000倍和10000倍；
步骤2：用甲醇对步骤1中稀释后上清液进行洗脱，洗脱液置于试管中40℃氮气浓缩至干，加入甲酸乙腈定容液后，涡旋混匀，过0.22um滤膜备用；
(2)标准工作溶液配置：
称取一定量的喹诺酮类物质，进行稀释溶解配置成不同浓度的标准工作液；
(3)标准曲线的绘制：
量取一定量的标准工作溶液，供液高效液相色谱-液相色谱串联质谱测定；绘制标准曲线，获得喹诺酮类物质的定性分析色谱图库；
(4)定性分析：对经过步骤2所述方法处理的待测样品进行一次性液相色谱分析，则可判定为样品中存在对应的待测物：
(5)定量分析：所制备的混合标准工作液进行质谱分析，得到色谱峰面积响应值，作单点或多点校准，用外标法定量；标准工作溶液及样品溶液中喹诺酮类的响应值应在仪器检测的线性范围内，若待测样品溶液浓度超过线性范围时，用乙腈/水溶液稀释后重新测定；
试样中待测物的含量以质量分数X表示，单位为微克每千克(ug/kg),按照下列公式计算：
Figure FDA0002504909430000011
公式中：
X-待测物的含量，单位为微克每千克(ug/kg)；
A-待测物的峰面积；
As-标准溶液中待测物峰面积；
Cs-标准溶液中待测物浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；
m-样品的质量，单位为克(g)；
V-溶解残余物的体积，单位为毫升(mL)；
V1-过固相萃取柱的提取液体积，单位为毫升(mL)；
V2-总提取液体积，单位为毫升(mL)；
n-稀释倍数。
2.如权利要求1所述高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，其特征在于：该喹诺酮类物质包括依诺沙星、萘啶酸、诺氟沙星、洛美沙星、恶喹酸、达氟沙星、氟甲喹依诺沙星和西诺沙星中的一种或多种。
3.如权利要求1所述高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，其特征在于：所述定性分析的仪器条件为：多反应监测、电喷雾电离正离子模式；所述定量分析的仪器条件为：二极管阵列检测器，根据物质类别设定检测波长。
4.如权利要求1所述高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，其特征在于：所述色谱柱条件为：C18色谱柱，柱长100mm，柱内径2.1mm，粒度1.7um。
5.如权利要求1所述高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，其特征在于：所述样品处理中震荡25min，以8000r/min转速离心5min。
CN202010443753.5A 2020-05-22 2020-05-22 高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质 Pending CN111562328A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010443753.5A CN111562328A (zh) 2020-05-22 2020-05-22 高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010443753.5A CN111562328A (zh) 2020-05-22 2020-05-22 高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111562328A true CN111562328A (zh) 2020-08-21

Family

ID=72072277

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010443753.5A Pending CN111562328A (zh) 2020-05-22 2020-05-22 高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111562328A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050272166A1 (en) * 2004-05-06 2005-12-08 Li Jin Methods and systems for detection, identification and quantitation of macrolides and their impurities
US20080138907A1 (en) * 2004-12-16 2008-06-12 Nippon Meat Packers, Inc. Extractant Solution for Residual Veterinary Agent in Livestock Product or Seafood
CN107202839A (zh) * 2017-05-16 2017-09-26 河南省兽药饲料监察所 一种兽药制剂中122种非处方药物的筛查方法
CN108051534A (zh) * 2017-11-20 2018-05-18 中山大学 一种快速筛查中成药和保健品中非法添加的132种化学药物的方法
CN109557206A (zh) * 2018-12-03 2019-04-02 农业部环境保护科研监测所 一种畜禽粪便中45种抗生素同时精准检测的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050272166A1 (en) * 2004-05-06 2005-12-08 Li Jin Methods and systems for detection, identification and quantitation of macrolides and their impurities
US20080138907A1 (en) * 2004-12-16 2008-06-12 Nippon Meat Packers, Inc. Extractant Solution for Residual Veterinary Agent in Livestock Product or Seafood
CN107202839A (zh) * 2017-05-16 2017-09-26 河南省兽药饲料监察所 一种兽药制剂中122种非处方药物的筛查方法
CN108051534A (zh) * 2017-11-20 2018-05-18 中山大学 一种快速筛查中成药和保健品中非法添加的132种化学药物的方法
CN109557206A (zh) * 2018-12-03 2019-04-02 农业部环境保护科研监测所 一种畜禽粪便中45种抗生素同时精准检测的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
罗成江 等: "氟苯尼考注射液中非法添加二氧丙嗪的检测方法研究", 《中国兽药杂志》 *
董恒涛 等: "超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定地表水中14种喹诺酮类抗生素残留", 《环境化学》 *
黄文静 等: "HPLC和液质联用法测定化妆品中氧氟沙星、环丙沙星和依诺沙星", 《中国公共卫生管理》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108918711B (zh) 一种烟叶中多酚类化合物的检测方法
Wang et al. Simultaneous determination of neochlorogenic acid, chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid and geniposide in rat plasma by UPLC‐MS/MS and its application to a pharmacokinetic study after administration of Reduning injection
CN107462650B (zh) 人体尿液中环境激素的检测方法
CN103235050B (zh) 一种三七总皂苷注射剂的液相色谱检测方法
US20230138381A1 (en) A lc-ms/ms method for measurement of aloesin in rat plasma
CN111272902A (zh) 一种艾地骨化醇血药浓度的检测方法
CN112748198A (zh) 一种液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法装置
CN107192770B (zh) 一种鉴别荆条蜜与糖浆掺假荆条蜜的分析方法
Du et al. Simultaneous qualitative and quantitative analysis of 28 components in Isodon rubescens by HPLC‐ESI‐MS/MS
CN109828071A (zh) 一种同时检测猪肉中9种注水类药物残留的方法
CN111595983B (zh) 一种测定藜芦中化学成分含量的方法
CN108414608B (zh) 一种对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的方法及其专用装置
CN111562328A (zh) 高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质
CN111487329A (zh) 一种同时测定血液和玻璃体液中乙醇非氧化代谢物的方法
CN111307992B (zh) 一种定量检测pm2.5中有机酸的柱前衍生液质联用分析方法
CN114791470A (zh) 一种高效液相色谱串联质谱检测血液中多粘菌素的方法和应用
CN113848263A (zh) 疑似毒品中芬太尼类物质的液相色谱-质谱检测方法
CN113655135A (zh) 一种马兜铃酸i的定量检测方法与限量方法
CN109324139A (zh) 一种烟叶中玉米素核苷液液萃取-液相色谱-串联质谱的测定方法
CN111693620B (zh) 用于判定金水六君煎质量的组合物及检测方法
CN109324140A (zh) 一种烟叶中玉米素核苷固相萃取-液相色谱-串联质谱的测定方法
CN113203805B (zh) 同时测定血液中葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的液相色谱串联质谱方法
CN106404925B (zh) 测定人全血中6种巴比妥类药物的方法
CN115266983B (zh) 一种利用气相色谱质谱法对消毒产品抗、抑菌剂中抗真菌药物进行测定的方法
CN112816584B (zh) 一种人血浆中非达霉素及其代谢物op-1118的生物分析方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200821