CN111560012A - 一种作为irak抑制剂的化合物 - Google Patents

一种作为irak抑制剂的化合物 Download PDF

Info

Publication number
CN111560012A
CN111560012A CN202010091244.0A CN202010091244A CN111560012A CN 111560012 A CN111560012 A CN 111560012A CN 202010091244 A CN202010091244 A CN 202010091244A CN 111560012 A CN111560012 A CN 111560012A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
cycloalkyl
alkyl
radical
aryl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010091244.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111560012B (zh
Inventor
野国中
李世强
冯焱
王朝东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan LL Science and Technology Development Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Meiyue Biotech Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Meiyue Biotech Development Co Ltd filed Critical Shanghai Meiyue Biotech Development Co Ltd
Publication of CN111560012A publication Critical patent/CN111560012A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111560012B publication Critical patent/CN111560012B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及适用于治疗癌症和与白细胞介素‑1受体相关激酶(IRAK)相关的炎性疾病的化合物，具体地是一种作为IRAK4抑制剂的化合物及其制备方法和用途，更具体地是式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐及其制备方法和用途。本发明中所披露的化合物对IRAK4激酶有良好的抑制作用，并且对其他激酶具有良好的选择性。

Description

一种作为IRAK抑制剂的化合物
本申请要求享有2019年2月14日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为201910114646.5，发明名称为“一种作为IRAK抑制剂的化合物”的中国发明专利在先申请的优先权。该申请的全文通过引用的方式结合于本申请中。
技术领域
本发明涉及适用于治疗癌症和与白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK)相关的炎性疾病的化合物，并且更具体地是一种作为IRAK4抑制剂的化合物及其制备方法和用途。
背景技术
白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK)是存在于细胞内的一类丝/苏氨酸蛋白激酶家族，有四个成员：IRAK1，IRAK2，IRAK-M和IRAK4。这四者共同特征是具有典型的N-末端死亡结构域，该结构域介导与MyD88-家族衔接蛋白和位于中心的激酶结构域之间的相互作用，其中IRAK1和IRAK4具有激酶活性。IRAK4是Toll样受体(TLR)/白介素-1受体(IL-1R)介导的炎症信号转导通路下游的关键因子，TLR细胞外部分识别病原特异性分子(如脂多糖，多肽，病毒DNA等)，与配体结合后，细胞内部分招募MyD88等形成复合体，激活IRAK1自磷酸化，进而活化下游丝氨酸/苏氨酸激酶TAK1，激活NF-κB及MAPK信号通路，随后产生促炎细胞因子、趋化因子和破坏性酶，最终导致产生炎症反应，介导先天性免疫。IL-1R参与宿主防御和造血，是连接先天免疫和获得性免疫的桥梁(Flannery,et.al.Biochem.Pharmacol.,2010,80(12):1981-1991)。
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性、炎性、系统性的自身免疫性疾病，以关节和关节组织非化脓性炎症为主要特征，主要表现为关节滑膜炎，终致关节的软骨、韧带、肌腱等各种组织以及多脏器损害。研究显示，在RA患者中有多种免疫细胞参与并介导了自身免疫性炎症，其中包括T/B淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。同时也有大量研究证明细胞因子与RA疾病直接关联，如白介素类(IL-1/IL-6等)，TNF-α等。
研究表明，在LPS或CpG诱导的人白细胞中，IRAK4抑制剂能够有效地阻断促炎细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)的产生；在胶原蛋白诱导关节炎的小鼠模型中，IRAK4抑制剂能够显著抑制TNF的释放，从而控制疾病的进程；在MyD88依赖性炎症性痛风小鼠模型中，IRAK4抑制剂能够剂量依赖性地阻断白细胞浸润(Priscilla N,et.al.J.Exp.Med.,2015,13(212):2189-2201)。
因此可以认为，IRAK4依赖性的TLR/IL-1R信号通路的过度激活与类风湿性关节炎发生发展密切相关，另多项研究也证实，IRAK4酶活化与以下疾病的发生发展密切相关，如肿瘤、痛风、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、代谢综合症、动脉粥样硬化、心肌梗死、脓血症、炎症性肠病、哮喘和过敏等疾病(Chaudhary D,et.al.,J.Med.Chem.2015,58(1):96-110)。有必要开发药理活性或其相关性能得到改善的IRAK4抑制剂。
发明内容
为了改善上述问题，本发明提供如下式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0002383806240000021
其中，R1选自H、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个Ra取代的下列基团：C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基、5-20元杂芳基、-COOC1-40烷基、-COC1-40烷基、-NHC1-40烷基或-N(C1-40烷基)2；
Ra选自羟基、氨基、C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、-COOC1-40烷基或-COC1-40烷基；
m选自1、2或3；
R2选自无取代或任选被一个、两个或更多个Rb取代的下列基团：C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基、5-20元杂芳基、-C6-20芳基3-20元杂环基、-C6-20芳基C3-20环烷基、-5-20元杂芳基3-20元杂环基或-5-20元杂芳基C3-20环烷基；
Rb选自卤素、＝O、羟基、氨基、C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、-COOC1-40烷基、-COC1-40烷基、-NHC1-40烷基、-N(C1-40烷基)2、-NHC3-20环烷基或-NH(3-20元杂环基)；当所述-C6-20芳基3-20元杂环基上的3-20元杂环基被C3-20环烷基取代时，其可以与3-20元杂环基构成螺环；
R3选自H、无取代或任选被一个、两个或更多个Rc取代的下列基团：C1-40烷基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基或5-20元杂芳基；
Rc选自卤素、氰基、羟基、氨基、-SO2-C1-40烷基、-SO2-C3-20环烷基、无取代或任选被一个、两个或更多个Rd取代的下列基团：C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基或3-20元杂环基；
Rd选自卤素、氰基、羟基或氨基。
根据本发明优选的实施方案，R1选自无取代或任选被一个、两个或更多个羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基或C3-12环烷基取代的下列基团：C1-12烷基、C1-12烷氧基或-N(C1-12烷基)2；
m选自1、2或3；
R2选自无取代或任选被一个、两个或更多个如下基团取代的C6-12芳基、5-12元杂芳基、-C6-12芳基3-12元杂环基、-C6-12芳基C3-12环烷基、-5-12元杂芳基3-12元杂环基或-5-12元杂芳基C3-12环烷基：卤素、＝O、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C3-12环烷基、3-12元杂环基或-N(C1-12烷基)2；当所述-C6-12芳基3-12元杂环基上的3-12元杂环基被C3-12环烷基取代时，其可以与3-12元杂环基构成螺环；
R3选自无取代或任选被一个、两个或更多个如下基团取代的C1-12烷基或C3-12环烷基：羟基、氰基、C1-12烷基、-C1-12烷基羟基、-C1-12烷基氰基、-SO2-C1-12烷基、-SO2-C3-12环烷基、C3-12环烷基、3-12元杂环基。
优选地，R1选自如下基团：
Figure BDA0002383806240000031
优选地，R2选自如下基团：
Figure BDA0002383806240000032
优选地，R3选自如下基团：
Figure BDA0002383806240000033
Figure BDA0002383806240000041
其中，
Figure BDA0002383806240000042
处表示连接位点。
作为实例，式(I)所示的化合物选自如下化合物：
Figure BDA0002383806240000043
Figure BDA0002383806240000051
Figure BDA0002383806240000061
本发明还提供如上式(I)所示化合物的制备方法，包括：
Figure BDA0002383806240000062
R1、R2、R3、m具有如上所述的定义；
式(II)所示的化合物与化合物R2-COOH反应生成式(I)所示的化合物。
本发明还提供一种药物组合物，其包含式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐。
优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。
优选地，所述药物组合物为IRAK4抑制剂。
优选地，所述IRAK4抑制剂用于预防和/或治疗肿瘤、痛风、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、代谢综合症、动脉粥样硬化、心肌梗死、脓血症、炎症性肠病、哮喘和过敏等疾病。
本发明还提供式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防与白细胞介素-1受体相关激酶的疾病或病症的药物中的用途。
优选地，所述与白细胞介素-1受体相关激酶的疾病或病症选自肿瘤、痛风、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、代谢综合症、动脉粥样硬化、心肌梗死、脓血症、炎症性肠病、哮喘、类风湿性关节炎、败血症、自身免疫性疾病和过敏等疾病。
本发明还提供一种与白细胞介素-1受体相关疾病的预防和/或治疗方法，包括向有此需要的个体施用治疗有效量的上述药物组合物。
有益效果
本发明中所披露的化合物结构对IRAK4激酶有良好的抑制作用，并且对其他激酶具有良好的选择性；部分化合物在动物体内显示出良好的暴露量和滞留时间；在LPS诱导的人PBMC中细胞因子TNF-α显示了良好的抑制作用；在LPS诱导的Balb/c雌性小鼠释放TNF-a的体内模型中也显示出良好的效果。
术语定义和说明
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的含义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的含义相同。
本申请说明书和权利要求书记载的数值范围，当该数值范围被定义为“整数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数。例如，“0～10的整数”应当理解为记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数。当该数值范围被定义为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点、该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“0～10的数”应当理解为不仅记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。“更多个”表示三个或三个以上。
应当理解，可在参考文献(包括Carey and Sundberg"ADVANCED ORGANICCHEMISTRY4TH ED."Vols.A(2000)and B(2001),Plenum Press,New York)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UV/Vis光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本申请的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，CH2O等同于OCH2。
术语“卤素”包括F、Cl、Br或I。
术语“C1-40烷基”应理解为表示具有1～40个碳原子的直链或支链饱和一价烃基，优选为C1-10烷基。“C1-10烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2、3、4、5、6个碳原子(“C1-6烷基”)，例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基，更特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C1-3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
术语“C3-20环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～20个碳原子，优选“C3-10环烷基”。术语“C3-10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。所述C3-10环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。
术语“3-20元杂环基”意指饱和或不饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子，优选“3-10元杂环基”。术语“3-10元杂环基”意指饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个，优选1-3个选自N、O和S的杂原子。所述杂环基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个、两个或更多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基、1,3-苯并噁唑基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基。根据本发明，所述杂环基是无芳香性的。
术语“C6-20芳基”应理解为表示具有6～20个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环，优选“C6-14芳基”。术语“C6-14芳基”应理解为表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C6芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C10芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C13芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C14芳基”)，例如蒽基。
术语“5-20元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5～20个环原子且包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子，例如“5-14元杂芳基”。术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3各独立选自N、O和S的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的或吡啶并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基，吡唑并[1,5-a]吡啶基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
除非另有说明，杂环基、杂芳基或亚杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，吡啶基或亚吡啶基包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基。
上述对术语“烷基”，如“C1-40烷基”的定义同样适用于含有“C1-40烷基”的其他术语，例如术语“C1-40烷氧基”等。
术语“-C6-20芳基3-20元杂环基”表示C6-20芳基并3-20元杂环基结构，其中C6-20芳基、3-20元杂环基具有如上所述定义。
术语“-C6-20芳基C3-20环烷基”表示C6-20芳基并C3-20环烷基结构，其中C6-20芳基、C3-20环烷基具有如上所述定义。
术语“-5-20元杂芳基3-20元杂环基”表示5-20元杂芳基并3-20元杂环基结构，其中5-20元杂芳基、3-20元杂环基具有如上所述定义。
术语“-5-20元杂芳基C3-20环烷基”表示5-20元杂芳基并C3-20环烷基结构，其中5-20元杂芳基、C3-20环烷基具有如上所述定义。
本文所用的有关术语“个体”是指患有疾病、病症或病况等的个体，包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实施例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人的灵长类动物(例如黑猩猩和其它猿类和猴)；家畜，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非人哺乳动物的实施例包括但不限于鸟类和鱼类等。在本文提供的一个有关方法和组合物的实施方式中，所述哺乳动物为人。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括缓解、减轻或改善疾病或病症症状，预防其它症状，改善或预防导致症状的潜在代谢原因，抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的发展，缓解疾病或病症，使疾病或病症好转，缓解由疾病或病症导致的症状，或者中止疾病或病症的症状，此外，该术语包含预防的目的。该术语还包括获得治疗效果和/或预防效果。所述治疗效果是指治愈或改善所治疗的潜在疾病。此外，对与潜在疾病相关的一种或多种生理症状的治愈或改善也是治疗效果，例如尽管患者可能仍然受到潜在疾病的影响，但观察到患者情况改善。就预防效果而言，可向具有患特定疾病风险的患者施用所述组合物，或者即便尚未做出疾病诊断，但向出现该疾病的一个、两个或更多个生理症状的患者施用所述组合物。
本文所使用术语“治疗有效量”是指服用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个、两个或更多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物系统的任何其它所需变化。例如，用于治疗的“有效量”是在临床上提供显著的病症缓解效果所需的包含本文公开化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。
本文所用术语“施用”等是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、外用和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术，例如在Goodman and Gilman,The PharmacologicalBasis of Therapeutics,current ed.；Pergamon；and Remington's,PharmaceuticalSciences(current edition),Mack Publishing Co.,Easton,Pa中讨论的那些。在优选的实施方式中，本文讨论的化合物和组合物通过口服施用。
本文针对制剂、组合物或成分所用术语“可接受的”是指对接受治疗的受试者的一般健康情况没有长期的有害影响。
本文所用术语“药学上可接受的”是指不影响本申请化合物的生物活性或性质的物质(如辅料，例如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。
所述药学上可接受的辅料包括但不限于载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂。
本文所用术语“载体”是指相对无毒的化学化合物或试剂，其有助于将化合物引入到细胞或组织中。
本文所用术语“药学上可接受的盐”是指保留了指定化合物的游离酸和游离碱的生物效力，并且在生物学或其它方面上没有不良作用的盐。本申请化合物还包括药学上可以接受的盐，例如硝酸盐、盐酸盐、硫酸盐或磷酸盐等。药学上可接受的盐是指把母体化合物中的碱基基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱基基团例如胺(氨)基的无机或有机酸盐类。本申请药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂系统中反应。合适的盐列举在Remingtong’sPharmaceutical Scicences,17thed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)中，例如盐酸盐。
除特别指示外，本申请中的盐指用有机酸/无机酸形成的酸式盐，以及用有机碱/无机碱形成的碱式盐。另外，当式(I)化合物的碱性官能团是吡啶或咪唑(但不限制于吡啶或咪唑)，酸性官能团是羧酸(但不限制于羧酸)时就会形成两性离子(内盐)，内盐也包括在本申请中的盐内。
本文所用术语“多晶型物”或“多晶形”是指以不同的晶格形式存在的本申请化合物。
本文所使用的术语“同位素标记物”是指有同位素标记的本申请化合物。
本文使用的“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。式(I)化合物含有不对称或手性中心，因此，存在不同的立体异构形式。式(I)的所有立体结构和混合物一样，包括外消旋混合物，作为目前申请的一部分。非对映体混合物能够分离成单独的非对映体，基于它们不同的物理化学性质，采用众所周知的手段，例如，对映异构体的拆分可通过与适当的光学活性物质(例如手性醇或Mosher`s莫氏酰氯)反应转换为非对映异构体，将其分离并转化(如水解)为相对应的单一的异构体。式(I)中的一些化合物可能是阻转异构体(如取代芳基)也是本申请中的一部分。对映异构体也可利用手性色谱柱分离。式(I)中的化合物可能存在着不同的互变异构形式，这些形式都包含在本申请范围内。例如，酮-烯醇和亚胺-烯胺形式的化合物。
具体实施方式
下文将结合具体实施例对本发明的通式化合物及其制备方法和应用做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
实施例1化合物047的制备
Figure BDA0002383806240000111
室温下依次将化合物47a(20mg,0.07mmol)，化合物47b(14mg,0.09mmol)，TBTU(35mg,0.10mmol)和DIEA(37mg,0.28mmol)加入到8mL THF中。加完后混合体系室温搅拌过夜，将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN：H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速15mL/min)得到白色固体产品(即化合物047)10mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.29(s,1H),8.87(s,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.86(s,1H),7.35(d,J＝7.2Hz,1H),7.08(s,1H),7.01(t,J＝7.6Hz,1H),5.01-4.98(m,1H),4.83(t,J＝8.8Hz,2H),3.99(s,3H),3.23(t,J＝8.8Hz,2H),2.78-2.71(m,2H),2.66-2.59(m,3H),1.25(s,6H).LCMS:Rt＝3.738min,[M+H]+＝422.2.
实施例2化合物048的制备
Figure BDA0002383806240000121
室温下依次将化合物48a(20mg,0.07mmol)，化合物48b(20mg,0.09mmol)，TBTU(35mg,0.10mmol)和DIEA(37mg,0.28mmol)加入到5mL THF中。加完后混合体系室温搅拌过夜，将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN：H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速15mL/min)纯化得到白色固体产品(即化合物048)10mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.34(s,1H),8.80(s,1H),7.91-7.87(m,2H),7.26-7.23(m,1H),7.11(s,1H),5.03-4.99(m,1H),4.01(s,3H),2.79-2.71(m,2H),2.68-2.60(m,3H),1.25(s,6H).LCMS:Rt＝4.075min,[M+H]+＝460.2.
实施例3化合物018的制备
Figure BDA0002383806240000122
室温下依次将化合物18a(25mg,0.1mmol)，化合物18b(20.8mg,0.12mmol)，TBTU(48mg,0.15mmol)和DIPEA(51.6mg,0.4mmol)加入到5毫升四氢呋喃中，室温搅拌过夜。反应液加3毫升水淬灭，然后用5毫升乙酸乙酯萃取，有机相浓缩蒸干。残留物经过高效液相制备色谱柱纯化(CH3CN：H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速15mL/min)得到黄色固体(即化合物018)32mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.02(s,1H),9.05(dd,J1＝4.0Hz,J2＝1.2Hz,1H),9.02(s,1H),8.97(dd,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz,1H),8.34(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.2Hz,1H),8.01(dd,J1＝7.6Hz,J2＝1.6Hz,1H),7.85(s,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(dd,J1＝7.6Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.06(s,1H),4.53(t,J＝7.2Hz,2H),4.10(s,3H),3.06(s,1H),2.18(t,J＝7.2Hz,2H),1.31(s,6H).LCMS:Rt＝3.572min,[M+H]+＝405.2.
实施例4化合物019的制备
Figure BDA0002383806240000123
室温下依次将TBTU(48mg,0.15mmol)和DIPEA(52mg,0.40mmol)加入到化合物19a(25mg,0.10mmol)和化合物19b(21mg,0.12mmol)的6mL THF中，加完后混合体系室温搅拌过夜。将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到白色固体产品(即化合物019)32mg。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.20(s,1H),9.24(d,J＝1.6Hz,1H),9.17(d,J＝1.6Hz,1H),8.85(s,1H),8.82(dd,J1＝7.6Hz,J2＝1.6Hz,1H),8.38-8.36(m,1H),8.29(s,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),4.51(s,1H),4.44-4.40(m,2H),4.09(s,3H),2.05-2.01(m,2H),1.16(s,6H).LCMS:Rt＝3.635min,[M+H]+＝406.2.
实施例5化合物003的制备
Figure BDA0002383806240000131
室温下将化合物3a(150mg,0.98mmol)加入到5mL化合物3b中，置换氮气，混合体系回流搅拌过夜，冷却至室温，反应液浓缩蒸干，残留物用MTBE(5mL)打浆得到棕色固体产品(化合物3c)125mg。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.87(s,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(t,J＝15.6Hz,1H).
室温下依次将化合物3d(25mg,0.1mmol)，化合物3c(18mg,0.11mmol)，TBTU(48mg,0.15mmol)和DIEA(52mg,0.40mmol)加入到5mL THF中。加完后混合体系室温搅拌过夜，将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到白色固体产品(即化合物003)18mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ11.34(s,1H),8.93(s,1H),8.35-8.32(m,2H),7.86(s,1H),7.79-7.77(m,1H),7.59-7.55(m,1H),7.05(s,1H),4.53(t,J＝14.4Hz,2H),4.05(s,3H),3.00(s,1H),2.17(t,J＝14.0Hz,2H),1.31(s,6H).LCMS:Rt＝3.585min,[M+H]+＝395.2.
实施例6化合物004的制备
Figure BDA0002383806240000132
室温下将化合物4a(500mg,3.3mmol)加入到10mL化合物4b中，置换氮气，混合体系回流搅拌过夜，冷却至室温，反应液浓缩蒸干，残留物用MTBE(10mL)打浆得到灰色固体产品(即化合物4c)460mg。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.85(s,1H),8.07-8.05(m,1H),7.96-7.93(m,1H),7.51(t,J＝15.6Hz,1H).
室温下依次将化合物4d(25mg,0.1mmol)，化合物4c(18mg,0.11mmol)，TBTU(48mg,0.15mmol)和DIEA(52mg,0.40mmol)加入到5mL THF中。加完后混合体系室温搅拌过夜，将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到白色固体产品(即化合物004)8mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.71(s,1H),8.88(s,1H),8.27-8.24(m,2H),7.98(d,J＝14.4Hz,1H),7.87(s,1H),7.55(t,J＝16.4Hz,1H),7.06(s,1H),4.54(t,J＝14.4Hz,2H),4.04(s,3H),2.17(t,J＝14.4Hz,2H),1.31(s,6H).LCMS:Rt＝3.311min,[M+H]+＝395.2.
实施例7化合物006的制备
Figure BDA0002383806240000141
将碳酸钾(2.74g,19.8mmol)，碘化钠(2.97g,19.8mmol)加入到化合物6a(3g,18mmol)和化合物6b(4.51g,27mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应液在25℃下搅拌16h，加水50mL，乙酸乙酯萃取(50mL*3)，合并的有机相减压浓缩。残留物用硅胶色谱柱纯化(PE/EA＝5/1)得到无色油状产品(即化合物6c)4.3g。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝7.2Hz,1H),7.09(t,J＝8.0Hz,1H),4.57(s,2H),4.32-4.27(m,2H),3.89(s,3H),2.36(s,3H),1.32(t,J＝6.8Hz,3H).
将化合物6c(4.3g,0.017mmol)溶解在80mL甲醇，10mL水的混合溶液中，再加入氢氧化钾(2.87g,0.051mmol)，反应液60℃搅拌2小时。反应结束后，用稀盐酸调pH<7，过滤，滤饼干燥后得到白色固体产品(即化合物6d)3.24g。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.87(br s,2H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.11(t,J＝7.2Hz,1H),4.49(s,2H),2.29(s,3H).
将高锰酸钾(20g，0.13mmol)慢慢加入到化合物6d(5.3g，0.025mmol)的H2O(30mL)溶液中，反应液105℃搅拌16小时，反应液过滤，滤液旋干，在0℃下，用盐酸调pH＝1，过滤，滤饼用冰水洗涤后干燥得到产物(即化合物6e)0.64g。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.10(br s,2H),7.87(d,J＝7.6Hz,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),4.60(s,2H).
将化合物6e(0.84g，3.5mmol)和醋酸钾(0.34g，3.5mmol)加入到醋酸酐(5mL)，醋酸(3mL)的混合溶液中，氮气保护下反应130℃搅拌5小时，反应液减压浓缩，加30mL水，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)，有机相经硫酸钠干燥，旋干得黄色固体(即化合物6f)250mg。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.18(br s,1H),8.31(s,1H),7.91(d,J＝7.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,1H),2.39(s,3H).
将化合物6f(20mg,0.09mmol)溶解在0.5mL浓盐酸，5mL水，20mL的甲醇混合溶液中，反应液85℃搅拌3h。冷却加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(15mL*4)，有机相干燥后减压浓缩得到黄色固体产品(即化合物6g)16mg。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.18(br s,1H),8.18(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(d,J＝7.6Hz,1H),7.24(t,J＝7.6Hz,1H),4.90(s,2H).
将化合物6g(185mg,1.04mmol)，化合物6i(259mg,1.04mmol)，EDCI(239mg,1.25mmol)依次溶解在5mL的吡啶中，反应液30℃搅拌16h。减压浓缩，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(15mL*4)，经高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到黄色固体产品(即化合物006)260mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.04(s,1H),8.86(s,1H),8.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(t,J＝7.6Hz,2H),7.32(t,J＝7.6Hz,1H),7.04(s,1H),4.88(s,2H),4.54(t,J＝7.2Hz,2H),4.00(s,3H),2.18(t,J＝7.2Hz,2H),1.31(s,6H).LCMS:Rt＝3.078min,[M+H]+＝410.1.
实施例8化合物049的制备
Figure BDA0002383806240000151
室温下向化合物49a(100mg,0.57mmol)的10mL吡啶中依次加化合物49b(103mg,0.63mmol)和EDCI(131mg,0.68mmol)，45℃下搅拌过夜，反应结束后，水洗，乙酸乙酯萃取后，经硅胶柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝100：1)得到灰白色产物(即化合物49c)170mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.55(s,1H),9.02(s,1H),8.04(t,J＝8.0Hz,2H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.24(s,1H),7.03(t,J＝7.6Hz,1H),4.81(t,J＝8.4Hz,2H),3.35(t,J＝8.8Hz,2H),2.78(s,6H).
将化合物49c(140mg,0.43mmol)，化合物49d(136mg,0.48mmol)和碳酸铯(170mg,0.52mmol)依次加入到20mL DMF中，在氮气保护下90℃搅拌过夜。没有反应完全，反应液冷却至室温，然后补加化合物49d(61mg,0.215mmol)，95℃下搅拌12h。反应结束后冷却经水洗，乙酸乙酯萃取，合并的有机相减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到白色固体(即化合物049)24mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.69(s,1H),8.90(s,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(s,1H),7.47(s,1H),7.36(d,J＝7.2Hz,1H),7.01(t,J＝7.6Hz,1H),5.03-4.99(m,1H),4.81(t,J＝8.4Hz,2H),3.34(t,J＝8.8Hz,2H),2.79-2.72(m,8H)，2.67-2.61(m,3H),1.21(s,6H).LCMS:Rt＝3.360min,[M+H]+＝435.2.
实施例9化合物008的制备
Figure BDA0002383806240000161
25℃下将钯碳(600mg，wet 10％)加入到化合物8a(40g,180mmol)的甲醇溶液(300mL)中。加完后抽气三次并充入氢气，混合体系在氢气球下25℃搅拌2天。抽滤，减压浓缩得到黄色固体(即化合物8b)26g。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.84(s,1H),7.99(s,1H),7.85(s,1H),6.98(s,1H),6.00(s,2H),3.85(s,3H).
0℃下将化合物8b(192mg,1.01mmol)，化合物8c(150mg,0.914mmol)和EDCI(263mg,1.37mmol)加入到10mL吡啶中，反应在15℃搅拌18h，将反应液浓缩蒸干，加入3mL水搅拌15分钟后过滤，减压蒸干，得到黄色固体产品(即化合物8d)155mg。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.37(s,1H),11.21(s,1H),8.85(s,1H),8.20(d,J＝10.4Hz,2H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(dd,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz,1H),7.00(t,J＝7.6Hz,1H),4.80(t,J＝8.4Hz,2H),3.93(s,3H),3.33-3.29(m,2H).
15℃下将化合物8d(140mg,0.415mmol)溶解到5mL四氢呋喃中，零下30℃向混合液中加入甲基溴化镁(1.38mL,4mmol)并在此温度下搅拌2小时。零下30℃下向反应液中加入5mL饱和氯化铵溶液淬灭，然后每次用10mL乙酸乙酯萃取两次，合并有机相浓缩蒸干残留物用硅胶柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得到无色油状物(即化合物8e)70mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.67(s,1H),8.57(s,1H),8.03(s,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(s,1H),7.36(dd,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz,1H),7.00(t,J＝7.6Hz,1H),4.73(t,J＝8.8Hz,2H),3.30(t,J＝8.8Hz,2H),1.74(s,6H).
15℃下依次将化合物8e(50mg,0.148mmol)，化合物8f(95.5mg,0.37mmol)和DIEA(114.5mg,0.888mmol)加入到7mL甲苯中，130℃搅拌72小时后反应液直接减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到黄色固体产品(即化合物008)40mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.80(s,1H),8.56(s,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(s,1H),7.67(s,1H),7.34(dd,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz,1H),6.98(t,J＝7.6Hz,1H),4.72(t,J＝8.4Hz,2H),4.56(t,J＝7.2Hz,2H),3.29(t,J＝8.8Hz,2H),2.71(s,1H),2.18(t,J＝7.2Hz,2H),2.07(s,1H),1.74(s,6H),1.30(s,6H).LCMS:Rt＝3.175min,[M+H]+＝424.2.
实施例10化合物009的制备
Figure BDA0002383806240000171
冰浴下将三氯化铝(4.1g,31.8mmol)加入到化合物9a(2g,10.4mmol)的DCM(50mL)溶液中，反应液在50℃条件下搅拌16h，冷却，加水100mL，DCM萃取(30mL*4)，合并的有机相饱和碳酸氢钠洗(15mL*3)和饱和食盐水洗(15mL*2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。残留物用硅胶色谱柱纯化(PE/EA＝3/1)得到黄色固体产品1.5g(即化合物9b)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.12(s,1H),10.82(s,1H),8.46(s,1H),8.16(s,1H),7.06(s,1H).
冰浴下将PPh3(1.1g,4.18mmol)加入到化合物9b(500mg,2.79mmol)和化合物9c(220mg,3.07mmol)的THF(15mL)溶液中，反应液搅拌15min后，DIAD(840mg,4.18mmol)慢慢滴加到反应液中，反应在25℃搅拌16h，反应液减压浓缩，残留物用硅胶色谱柱纯化(PE/EA＝3/1)得到黄色固体产品(即化合物9d)400g。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.30(s,1H),8.39(s,1H),8.17(s,1H),7.18(s,1H),4.05(d,J＝9.2Hz,2H),1.28-1.23(m,1H),0.61-0.57(m,2H),0.40-0.37(m,2H).
25℃下将Pd/C(150mg，10％)加入到化合物9d(400mg，1.72mmol)的乙酸乙酯(20mL)溶液中，反应25℃在一个氢气球压力下搅拌12小时，反应液过滤，减压浓缩，得到黄色固体产品(即化合物9e)300mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.81(s,1H),6.96(s,1H),6.74(s,1H),3.85(d,J＝6.8Hz,2H),1.35-1.31(m,1H),0.68-0.64(m,2H),0.40-0.36(m,2H).
25℃下将TBTU(355mg，1.11mmol)和DIPEA(380mg，2.92mmol)加入到化合物9e(150mg，0.73mmol)和化合物9f(145mg，0.88mmol)的THF(15mL)溶液中，反应25℃搅拌12小时，反应液减压浓缩，残留物用硅胶色谱柱纯化(PE/EA＝3/1到DCM/MeOH＝30/1)得到黄色固体产品(即化合物9g)150mg。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.80(br s,1H),10.35(s,1H),8.87(s,1H),7.96(s,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.49-7.47(m,1H),7.05-7.00(m,2H),4.87-4.83(m,2H),4.00(d,J＝7.2Hz,2H),3.34-3.30(m,2H),1.45-1.40(m,1H),0.73-0.69(m,2H),0.46-0.42(m,2H).
25℃下将碳酸铯(333mg,1.02mmol)加到化合物9g(140mg,0.40mmol)和化合物9h(113mg,0.44mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应液90℃搅拌12h。冷却加入水(15mL)，乙酸乙酯萃取(15mL*4)，有机相减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到白色固体产品(即化合物009)35mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.38(s,1H),8.93(s,1H),8.03(d,J＝7.6Hz,1H),7.81(s,1H),7.35(d,J＝6.8Hz,1H),7.01(t,J＝7.6Hz,1H),6.93(s,1H),4.81(t,J＝8.8Hz,2H),4.51(t,J＝7.2Hz,2H),3.92(d,J＝6.8Hz,2H),3.32(t,J＝8.8Hz,2H),3.06(s,1H),2.15(t,J＝7.2Hz,2H),1.43-1.40(m,1H),1.29(s,6H),0.73-0.69(m,2H),0.48-0.45(m,2H).LCMS:Rt＝3.254min,[M+H]+＝436.3.
实施例11化合物016的制备
Figure BDA0002383806240000181
25℃下将DIPEA(4.0g,3.8mmol)加入到化合物16a(1.5g，7.7mmol)和化合物16b(4.0g，15.5mmol)的80mL的甲苯溶液中，反应液130℃搅拌48小时，冷却，反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到黄色固体(即化合物16c)1.0g。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.21(s,1H),8.08(s,1H),7.09(s,1H),4.57(t,J＝7.6Hz,2H),3.96(s,3H),2.35(s,1H),2.19(t,J＝7.6Hz,2H),1.32(s,6H).
25℃下将300mg的Pd/C加入到化合物16c(1.0g,0.90mmol)的乙酸乙酯(20mL)溶液中，反应在一个氢气球压力下搅拌12h，反应液过滤，减压浓缩，得到黄色固体产品(即化合物16d)700mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.58(s,1H),6.91(s,1H),7.73(s,1H),4.46(t,J＝7.2Hz,2H),3.90(s,3H),2.13(t,J＝7.2Hz,2H),1.26(s,6H).
25℃下将EDCI(46mg,0.24mmol)加到化合物16d(40mg,0.16mmol)和化合物16e(31mg,0.19mmol)的Py(4mL)溶液中，反应液25℃搅拌12h，减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,流速:15ml/min)纯化得到黄色固体产品(即化合物016)40mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ13.36(s,1H),8.93(s,1H),8.10-8.06(m,2H),7.84(s,1H),7.75(d,J＝8.8Hz,1H),7.33-7.27(m,1H),7.04(s,1H),6.72(s,1H),4.52(d,J＝7.2Hz,2H),4.06(s,3H),3.25(s,1H),2.17(t,J＝7.2Hz,2H),1.31(s,6H).LCMS:Rt＝3.575min,[M+H]+＝394.2.
实施例12化合物020的制备
Figure BDA0002383806240000191
将化合物20a(30mg,0.12mmol)，化合物20b(21.6mg,0.12mmol)和EDCI(46.2mg,0.24mmol)依次加入到8mL吡啶中，10摄氏度下搅拌16小时。反应完全后将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到白色固体(化合物020)30mg，收率：37％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.39(s,1H),8.87(s,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.82(s,1H),7.05-6.96(m,3H),4.54-4.50(m,4H),4.39-4.37(m,2H),3.98(s,3H),2.97(s,1H),2.16(t,J＝7.2Hz,2H),1.30(s,6H).LCMS:Rt＝3.488min,[M+H]+＝412.2。
实施例13化合物056的制备
Figure BDA0002383806240000192
15摄氏度下依次将化合物56a(20mg,0.072mmol)，化合物56b(12mg,0.072mmol)和EDCI(21mg,0.109mmol)加入到吡啶(3mL)中，加完后混合体系在15摄氏度搅拌18小时。将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到白色固体(化合物056)30mg，收率79.5％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ13.36(s,1H),8.95(s,1H),8.13(s,1H),8.09(d,J＝7.2Hz,1H),7.89(s,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,1H),7.33(t,J＝7.2Hz,1H),7.13(s,1H),6.75(s,1H),5.02-5.00(m,1H),4.08(s,3H),2.78-2.73(m,2H),2.67-2.60(m,3H),1.31(s,1H),1.25(s,6H).LCMS:Rt＝3.775min,[M+H]+＝420.2。
实施例14化合物058的制备
Figure BDA0002383806240000201
15摄氏度下依次将化合物58a(1.1g,5.7mmol)和钯碳(600mg,10％)加入到45mL乙酸乙酯中，15摄氏度混合液在氢气保护下搅拌18h，反应完毕后用硅藻土滤掉钯碳，滤液减压浓缩得到灰色固体产品870mg(化合物58b)，收率93.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.43(s,1H),7.65(s,1H),6.82(d,J＝8.8Hz,2H),4.49(s,2H),3.83(s,3H).
15摄氏度下依次将化合物58b(240mg,1.47mmol)，化合物58c(254.7mg,1.47mmol)和EDCI(423mg,2.20mmol)加入到吡啶(8mL)中，反应液在15摄氏度搅拌18小时。将反应液浓缩蒸干，残留物用硅胶柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到黄色固体产品360mg(化合物58d)，收率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.07(s,1H),9.06(s,1H),9.06-9.04(m,1H),8.95-8.83(m,1H),8.36-8.34(m,1H),8.04(d,J＝6.8Hz,1H),7.99(s,1H),7.75(t,J＝7.2Hz,1H),7.58-7.55(m,1H),6.99(s,1H),4.12(s,3H).
15摄氏度下依次将化合物58d(200mg,0.609mmol)和化合物58e(208mg,0.73mmol)和碳酸铯(400mg,1.218mmol)加到的DMF(10mL)中，反应液90摄氏度搅拌18h。将反应液浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到白色固体产品44mg(化合物058)，收率17％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.02(s,1H),9.07-9.05(m,1H),9.02(s,1H),8.96(d,J＝7.2Hz,1H),8.34-8.32(m,1H),8.02-7.99(m,1H),7.88(s,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.57-7.51(m,1H),6.99(s,1H),5.03-4.99(m,1H),4.12(s,3H),2.80-2.73(m,2H),2.67-2.61(m,3H),1.25(s,6H).LCMS:Rt＝3.802,[M+H]+＝431.2.
实施例15化合物064的制备
Figure BDA0002383806240000211
15摄氏度下将EDCI(184mg，0.96mmol)加入到化合物64a(130mg，0.64mmol)和化合物64b(122mg，0.70mmol)的吡啶(6mL)中，反应15摄氏度搅拌18小时，反应液减压浓缩,得到的粗品通过硅胶柱色谱柱纯化(DCM/MeOH＝100/1到20/1)得到黄色固体产品(化合物64c)150mg，收率65％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ13.84(s,1H),9.20(s,1H),9.08(dd,J＝4.0Hz,1.6Hz,1H),9.00(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),8.32(dd,J＝8.0Hz,1.2Hz,1H),8.02-7.99(m,2H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.54-7.51(m,1H),6.91(s,1H),4.01(d,J＝7.2Hz,2H),1.27-1.24(m,1H),0.78-0.73(m,2H),0.51-0.48(m,2H).
15摄氏度下将碳酸铯(341mg,1.05mmol)加到化合物64c(150mg,0.42mmol)和化合物64d(143mg,0.50mmol)的DMF(8mL)中，反应液90摄氏度搅拌18h。冷却加入水(15mL)，乙酸乙酯萃取(15mL*4),合并的有机相减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到白色固体产品(化合物064)33mg,产率17％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ13.88(s,1H),9.11-9.07(m,2H),8.99(dd,J＝7.6Hz,1.6Hz,1H),8.32(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),8.01(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),7.88(s,1H),7.74(t,J＝8.8Hz,1H),7.55-7.52(m,1H),7.08(s,1H),5.02-4.99(m,1H),4.03(d,J＝7.2Hz,2H),2.78-2.73(m,2H),2.67-2.60(m,3H),1.58-1.53(m,1H),1.37(s,6H),0.77-0.72(m,2H),0.51-0.49(m,2H).LCMS:Rt＝3.263min,[M+H]+＝471.3.
实施例16化合物041的制备
Figure BDA0002383806240000212
13摄氏度下依次将化合物41a(170mg,0.53mmol)，化合物41b(143mg,0.53mmol)和碳酸铯(351mg,1.069mmol)加入到DMF(10mL)中，反应液90摄氏度搅拌18h。反应液减压浓缩蒸干，残留物用高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到黄色固体(化合物041)45mg，收率21％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.02(s,1H),9.06-9.04(m,1H),9.02(s,1H),8.98-8.96(m,1H),8.34-8.32(m,1H),8.02-8.00(m,1H),7.88(s,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.57-7.54(m,1H),7.07(s,1H),4.58-4.54(m,2H),4.11(s,3H),2.33-2.30(m,2H),1.40(s,6H).LCMS:Rt＝4.064min,[M+H]+＝414.1.
实施例17化合物080的制备
Figure BDA0002383806240000221
15摄氏度下，化合物80a(4g,17.9mmol)溶于POCl3(50mL)中,置换氮气，120摄氏度反应2小时，冷却至室温，减压浓缩，残留物溶于乙酸乙酯(40mL)，饱和碳酸氢钠(15mL*3)洗，饱和NaCl(100mL)洗，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩得黄色固体产品3.5g(化合物80b),收率81％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.95(d,J＝4.0Hz,1H),8.27-8.22(m,2H),7.88(d,J＝4.0Hz,1H),7.38-7.64(m,1H).
15摄氏度下，化合物80b(1g,4.1mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入甲醇钠(1.8g,33.2mmol)，置换氮气，70摄氏度反应18小时，冷却至室温，减压浓缩，残留物用水(50mL)打浆，得到黄色固体产品850mg(化合物80c)，收率86％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.85(d,J＝8.0Hz,1H),8.18-8.11(m,2H),7.46(t,J＝16.0Hz,1H),7.16-7.14(m,1H),4.07(s,3H).
化合物80c(850mg,3.6mmol)溶于DMSO/MeOH(10mL/5mL)中，加入Et3N(1.3mL,9.5mmol)和Pd(dppf)Cl2(155mg,0.2mmol)，加完后抽气三次并充入一氧化碳，混合体系在一氧化碳气球下，95摄氏度搅拌16小时。冷却至25摄氏度，加入100mL水，乙酸乙酯(50mL*3)萃取,无水MgSO4干燥，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝20-60％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得白色固体326mg(化合物80d)，收率38％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):8.88(s,1H),8.36-8.34(s,1H),8.00-7.99(m,1H),7.53-7.49(m,1H),6.79-6.78(m,1H),4.05-4.04(m,6H).
依次将化合物80d(261mg,1.2mmol)和LiOH·H2O(151mg,3.6mmol)加入到THF/H2O(10mL/3mL)中,置换氮气。加完后混合体系30℃搅拌16小时。加水(50mL)，用1N NaOH调节pH至10，乙酸乙酯(20mL*1)萃取后，水相用1N HCl缓慢调节pH至7，抽滤，减压干燥得到白色固体产品218mg(化合物80e),收率89％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):8.78-8.73(m,2H),8.46-8.43(s,1H),7.70-7.66(m,1H),6.91-6.89(m,1H),4.14(s,3H).
将EDCI(135mg,0.70mmol)加入到化合物80e(105mg,0.52mmol)和化合物80f(117mg,0.47mmol)的5mL吡啶溶液中。加完后混合体系15摄氏度搅拌16小时。反应液浓缩旋干，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝20-60％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到黄色固体产品81mg(化合物080),收率40％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):14.22(s,1H),9.01(s,1H),8.93(d,J＝8.0Hz,1H),8.86(d,J＝4.0Hz,1H),8.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.84(s,1H),7.67(t,J＝16Hz,1H),7.05(s,1H),6.87(d,J＝4.0Hz,1H),4.53(t,J＝16.0Hz,2H),4.06(d,J＝8.0Hz,6H),2.17(t,J＝16.0Hz,2H),1.31(s,6H).LCMS:Rt＝3.900,[M+H]+＝435.2.
实施例18化合物066的制备
Figure BDA0002383806240000231
25摄氏度下将碳酸铯(508mg,1.56mmol)加入到化合物66a(200mg,0.62mmol)和化合物66b(266mg,0.94mmol)的DMF(4mL)中，加完后混合体系加热到90摄氏度并搅拌18小时。反应完毕后冷却，过滤，减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到黄色固体(化合物066)50mg，收率18％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.04(s,1H),9.06-9.04(m,1H),9.03(s,1H),8.98-8.96(m,1H),8.34-8.32(m,1H),8.02-7.99(m,1H),7.88(s,1H)，7.74(t,J＝7.6Hz,1H)，7.57-7.54(m,1H)，7.11(s,1H)，4.42-4.41(m,1H)，4.11(s,3H),2.28-2.15(m,4H),1.90-1.87(m,2H),1.76-1.65(m,2H),1.45(s,1H),1.41(s,3H).LCMS:Rt＝3.428min,[M+H]+＝431.3.
实施例19化合物067的制备
Figure BDA0002383806240000232
20摄氏度下将碳酸铯(508mg,1.56mmol)加入到化合物67a(200mg,0.62mmol)和化合物67b(355mg,1.25mmol)的DMF(8mL)中，加完后混合体系加热到90摄氏度并搅拌18小时。反应完毕后冷却，过滤，减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝20-60％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到黄色固体16mg(化合物067)，收率6％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.02(s,1H),9.05-9.04(m,1H),9.02(s,1H),8.97-8.95(m,1H),8.33-8.31(m,1H),8.01-7.98(m,1H),7.89(s,1H)，7.73(t,J＝7.6Hz,1H)，7.56-7.53(m,1H)，7.09(s,1H)，4.36-4.30(m,1H)，4.11(s,3H),2.38-2.28(m,2H),2.13-2.11(m,2H),1.89-1.85(m,2H),1.68-1.60(m,2H),1.49(s,1H),1.33(s,3H).LCMS:Rt＝3.522min,[M+H]+＝431.2.
实施例20化合物068的制备
Figure BDA0002383806240000241
零下40摄氏度将化合物68a(50g,186.6mmol)的四氢呋喃(500mL)溶液缓慢滴加到甲基溴化镁(110mL,336.2mmol)的四氢呋喃(500mL)溶液中，在此温度下搅拌4小时。合并批次反应液用500mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取(300mL*3),有机相浓缩蒸干，残留物通过硅胶柱(PE/EA＝5/1)纯化得到化合物68b(15g，白色固体，收率14％)和化合物68c(2.1g，黄色油状物，收率2％)。
化合物68b：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.79(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),4.50-4.43(m,1H),2.45(s,3H),1.93-1.75(m,2H),1.74-1.64(m,4H),1.44-1.26(m,2H),1.19(s,3H)；
化合物68c：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.79(d,J＝8.0Hz,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),4.69(s,1H),2.45(s,3H),1.89-1.81(m,2H),1.74-1.66(m,4H),1.49-1.41(m,2H),1.24(s,3H).
25摄氏度下将三氯化铝(4.9g,37.2mmol)加入到化合物68d(2.4g,12.4mmol)的二氯甲烷(120mL)溶液中，氮气保护，加热到58摄氏度搅拌16小时。反应液倒入150mL冰水中，DCM萃取(100mL*1)，水相再用EA萃取(100mL*3)，有机相浓缩蒸干，残留物用DCM(30mL)打浆得到黄色固体产品2.0g(化合物68e)，收率91％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.11(s,1H),10.81(s,1H),8.46(s,1H),8.16(s,1H),7.07(s,1H).
0摄氏度下将化合物68e(1.0g,5.58mmol)，PPh3(2.19g,8.37mmol)和DIAD(1.69g,8.37mmol)溶在30mL的THF溶液中，化合物68f(1.18g,6.70mmol)慢慢加入到反应液中，反应在0度搅拌30min后，升温至25摄氏度搅拌16h,反应完成后，反应液浓缩蒸干，残留物通过硅胶柱(PE/EA＝2/1)纯化得到黄色固体产品1.0g(化合物68g)，收率54％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.47(s,1H),8.32(s,1H),8.16(s,1H),7.13(s,1H),4.26(t,J＝5.2Hz,2H),4.09(t,J＝5.2Hz,2H),0.90(s,9H),0.10(s,6H).
25摄氏度下将50mg的Pd/C加入到化合物68g(200mg,0.59mmol)的乙酸乙酯(20mL)溶液中，反应在一个氢气球压力下搅拌16h，反应液过滤，减压浓缩，得到红色固体产品170mg(化合物68h)，收率93％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.32(s,1H),7.58(s,1H),6.75(d,J＝13.6Hz,2H),4.43(s,2H),3.99(t,J＝4.4Hz,2H),3.89(t,J＝4.8Hz,2H),0.80(s,9H),0.00(s,6H).
25摄氏度下将EDCI盐酸盐(576mg,3.03mmol)加到化合物68h(620mg,2.02mmol)和化合物68i(349mg,2.02mmol)吡啶(10mL)溶液中，反应液25摄氏度搅拌16小时。反应液浓缩蒸干，残留物通过硅胶柱(PE/EA＝1/1)纯化得到红色固体产品(化合物68j)722mg，收率77％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.87(s,1H),12.87(s,1H),9.27-9.25(m,1H),9.03(s,1H),8.85-8.83(m,1H),8.70-8.68(m,1H),8.34-8.32(m,1H),8.04(s,1H),7.88(t,J＝9.2Hz,1H),7.81-7.78(m,1H),7.19(s,1H),4.39(t,J＝4.0Hz,2H),4.20(t,J＝4.4Hz,2H),0.76(s,9H),0.00(s,6H).
25摄氏度下将碳酸铯(1.1g,3.24mmol)加入到化合物68j(500mg，1.08mmol)和化合物68b(460mg，1.62mmol)的10mL的DMF溶液中，反应液90摄氏度搅拌16小时。反应液加到50mL水中，乙酸乙酯萃取(30mL*3)，有机相减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝30-55％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到黄色固体(化合物068)70mg，收率14％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.87(s,1H),9.31(t,J＝6.4Hz,1H),8.97(s,1H),8.80(t,J＝6.0Hz,1H),8.65-8.63(m,1H),8.33(s,1H),8.28(d,J＝7.2Hz,1H),7.84(t,J＝8.0Hz,1H),7.79-7.75(m,1H),7.14(s,1H),5.06(t,J＝5.6Hz,1H),4.47(s,1H),4.45-4.38(m,1H),4.25(t,J＝4.4Hz,2H),4.03-3.99(m,2H),2.08-1.99(m,4H),1.70-1.56(m,4H),1.24(s,3H).LCMS:Rt＝3.215min,[M+H]+＝461.3.
实施例21化合物069的制备
使用和实施例20类似的方法合成了化合物069：
Figure BDA0002383806240000251
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.79(s,1H),9.19-9.18(m,1H),8.93(s,1H),8.82-8.79(m,1H),8.68-8.64(m,1H),8.34(s,1H),8.29(d,J＝6.8Hz,1H),7.87-7.79(m,2H),7.17(s,1H),4.47(s,1H),4.43-4.40(m,1H),4.35(t,J＝4.4Hz,2H),3.92(t,J＝4.0Hz,2H),3.36(s,3H),2.07-2.02(m,4H),1.69-1.56(m,4H),1.24(s,3H).LCMS:Rt＝3.390min,[M+H]+＝475.2.
实施例22、23化合物070、071的制备
Figure BDA0002383806240000261
13℃下将化合物70a(500mg,1.56mmol)溶于10mL DMF中，依次加入化合物70b(660mg,2.18mmol),Cs2CO3(1.28g,3.92mmol)，升温至90℃，反应5h后反应液加水(30mL)淬灭，并用EA(30mL*2)萃取，有机相被减压浓缩，剩余粗品由柱层析(EA:PE：DCM＝1/1/1)纯化，得到黄色固体(化合物70c)300mg，收率20.9％。LCMS:Rt＝1.59min,[M+H]+＝459.2。
25℃下将70c(50mg,0.11mmol)溶于10mL HCl/THF(v/v＝1/1,2ml)中，反应16h。反应液加碳酸氢钠(2mL)淬灭，并用EA(10mL*2)萃取，有机相被减压浓缩，得到黄色固体41mg(化合物70d)，收率90.7％。LCMS:Rt＝1.424min,[M+H]+＝415.2。
0摄氏度下将化合物70d(200mg,0.48mmol)溶于10mL MeOH中，后加入NaBH4(27.5mg,0.72mmol),反应升温至25摄氏度，搅拌18h后，反应液加水(10mL)淬灭，并用DCM/MEOH(10/1)萃取，有机相被减压浓缩，后由高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝20-70％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化，得到Rt＝7.53min的化合物070(88mg,黄色固体)和Rt＝9.64min的化合物071(17mg，黄色固体)。
化合物070：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.04(s,1H),9.07-9.05(m,1H),9.02(s,1H),8.97(dd,J＝7.6Hz,1H)，8.33(dd,J＝8.4Hz,1H)，8.01(dd,J＝7.2Hz,1H)，7.85(s,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.57-7.54(m,1H),7.09(s,1H),4.36(s,1H),4.11(s,3H),3.82(s,1H),2.30(d,J＝6.8Hz,2H),2.19(d,J＝6.8Hz,2H),2.09-2.05(m,2H),1.55(t,J＝11.2Hz,2H).LCMS:Rt＝8.786min,[M+H]+＝417.2。
化合物071：1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ14.03(s,1H),9.06(d,J＝2.8Hz,1H),9.03(s,1H),8.97(d,J＝7.6Hz,1H)，8.33(d,J＝8.0Hz,1H)，8.00(d,J＝8.0Hz,1H)，7.91(s,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.57-7.54(m,1H),7.10(s,1H),4.38(d,J＝3.6Hz,1H),4.13(d,J＝14Hz,4H),2.40-2.33(m,2H),2.11(d,J＝2.8Hz,2H),2.07(d,J＝3.6Hz,2H),1.77(t,J＝14.0Hz,2H).LCMS:Rt＝5.831min,[M+H]+＝417.2。
实施例24化合物072的制备
Figure BDA0002383806240000271
将化合物72a(200mg,1.14mmol)，化合物72b(197mg,1.14mmol)，EDCI(262mg,1.36mmol)依次溶解到10mL吡啶中，25摄氏度下反应16小时。反应完毕后向反应液中加入水(20mL)，然后用乙酸乙酯(15mL×2)萃取，减压浓缩，残留物用硅胶柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝60：1)得到浅黄色固体380mg(化合物72c)，收率：81％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ13.96(s,1H),9.13(s,1H),9.02(d,J＝6.4Hz,2H),8.34(d,J＝8.4Hz,1H),8.02(d,J＝7.6Hz,2H),7.76(t,J＝7.6Hz,1H),7.56(q,J＝4.0Hz,1H),2.90(s,6H).
18摄氏度下将化合物72c(200mg,0.6mmol)，化合物72d(257mg,0.91mmol)和碳酸铯(591mg,1.81mmol)加入到DMF(10mL)中，加完后混合体系加热到90摄氏度并搅拌18小时。反应完毕后加10mL水淬灭反应，用40mL乙酸乙酯萃取两次，有机相减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)得到浅黄色固体(化合物072)41mg，收率12.2％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.02(s,1H),9.04-8.98(m,3H),8.33(d,J＝8.0Hz,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(s,1H),7.75(t,J＝8.0Hz,1H),7.55(q,J＝4.0Hz,1H)，7.46(s,1H)，4.43-4.41(m,1H)，2.89(s,6H),2.27-2.16(m,4H),1.91-1.87(m,2H),1.76-1.70(m,2H),1.25(s,3H).LCMS:Rt＝3.072min,[M+H]+＝444.3.
实施例25化合物073的制备
Figure BDA0002383806240000272
18摄氏度下将化合物72c(190mg,0.57mmol)，化合物72e(407mg,1.44mmol)和碳酸铯(561mg,1.72mmol)加入到DMF(10mL)中，加完后混合体系加热到90摄氏度并搅拌18小时。反应完毕后加10mL水淬灭反应，用40mL乙酸乙酯萃取两次，有机相减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)得到浅黄色固体17mg(化合物073)，收率6.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ13.99(s,1H),9.04-8.98(m,3H),8.33(d,J＝8.0Hz,1H),8.01(d,J＝6.8Hz,1H),7.91(s,1H),7.75(t,J＝8.0Hz,1H),7.55(q,J＝4.0Hz,1H)，7.44(s,1H)，4.36-4.34(m,1H)，2.93(s,6H),2.36-2.31(m,2H),2.14-2.10(m,2H),1.89-1.86(m,2H),1.69-1.65(m,2H),1.33(s,3H).LCMS:Rt＝3.230min,[M+H]+＝444.3.
实施例26化合物074的制备
Figure BDA0002383806240000281
0摄氏度下将74a(700mg,4.19mmol)溶解到10mL四氢呋喃中，在0摄氏度下慢慢将LiHMDS(4.82mL,4.82mmol)慢慢滴加进去，0摄氏度下搅拌60分钟后向反应液中慢慢加碘甲烷(595g,4.19mmol)，此温度下反应1小时。反应完毕后向反应液中加入氯化铵饱和溶液(10mL)淬灭反应，然后用乙酸乙酯(15mL×2)萃取，减压浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝7：1)得到无色油状物化合物(74b)485mg。收率：64％。
0摄氏度下依次将化合物74b(485mg,2.68mmol)和3M HCl(15mL,45mmol)加入到四氢呋喃(15mL)溶液中，50摄氏度搅拌5小时。反应完毕后，向反应液中加入3M氢氧化钠溶液调节PH＝8，然后用二氯甲烷(20mL×2)萃取，减压浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到无色油状物化合物(74c)420mg。收率：100％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.25-4.16(m,2H),3.96-3.91(m,2H),3.82-3.76(m,2H)，3.31-3.23(m,2H)，3.00(s,3H).
15摄氏度下将化合物74c(530mg,3.81mmol)溶解到10mL乙醇中，零下70摄氏度将硼氢化钠(152mg,4mmol)的乙醇(2mL)溶液滴入到反应液中，零下70摄氏度搅拌1小时。反应完毕后向反应液中加入8mL水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(15mL×2)萃取，有机相减压浓缩，残留物用硅胶色谱柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到淡黄色油状物(74d)480mg。收率：89％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.60-3.52(m,1H),2.03-1.97(m,4H),1.76-1.64(m,2H),1.54-1.31(m,6H).
18摄氏度下依次将化合物74d(480mg,3.4mmol)，TsCl(778.8mg,4.08mmol)，DMAP(502.4mg,4.08mmol)和三乙胺(0.95mL)加入到二氯甲烷(15mL)中，在18摄氏度下搅拌反应18小时。反应完毕后将反应液浓缩蒸干，残留物用硅胶色谱柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到白色固体(74e)900mg。收率：89％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.80(d,J＝8Hz,2H),7.35(d,J＝8Hz,2H),4.46-4.40(m,1H),2.45(s,3H),2.02-1.91(m,4H),1.90-1.80(m,2H),1.37-1.29(m,5H).
18摄氏度下将化合物74e(242mg,0.817mmol)，化合物74f(200mg,0.628mmol)和碳酸铯(516mg,1.57mmol)加入到DMF(8mL)中，加完后混合体系加热到90摄氏度并搅拌18小时。反应完毕后加10mL水淬灭反应，用40mL乙酸乙酯萃取两次，有机相减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)得到黄色固体60mg，进一步用硅胶制备板纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到40mg黄色固体(化合物074)，收率9.8％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.05(s,1H),9.06-9.05(m,1H),9.02(s,1H),8.98-8.96(m,1H),8.34(d,J＝8.4Hz,1H),8.02(d,J＝8Hz,1H),7.88(s,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.57-7.54(m,1H),7.09(s,1H),4.55-4.51(m,1H),4.11(s,3H),2.49-2.41(m,2H),2.29-2.21(m,2H),2.04-1.90(m,4H),1.46(s,3H).LCMS:Rt＝4.082min,[M+H]+＝440.2.
实施例27化合物075的制备
Figure BDA0002383806240000291
18摄氏度下依次将化合物75b(450mg,1.41mmol)，75a(357mg,1.84mmol)，DBU(279.6mg,1.84mmol)和DIEA(546mg,4.23mmol)加入到15mL甲苯中，120摄氏度搅拌24小时。将反应液浓缩蒸干，残留物通过高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV：214nm，Flowrate15mL/min)纯化得到250mg黄色固体(化合物75c)，收率34.5％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.08(s,1H),9.04(s,2H),8.98-8.95(m,1H),8.34-8.32(m,1H),8.02-8.00(m,2H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.57-7.54(m,1H),7.03(s,1H)，4.62(d,J＝9.6Hz,2H),4.36(d,J＝9.6Hz,2H),4.12(s,3H),3.36(s,2H),1.47(s,9H).
零下10摄氏度下将HCl/EA(10mL,2M)慢慢滴加到化合物75c(250mg,0.488mmol)的乙酸乙酯(7mL)溶液中，零下10摄氏度搅拌4小时。将反应液中白色固体滤出。将固体加少量水溶解到调节PH＝8，用乙酸乙酯萃取后浓缩旋干得到目标产物白色固体(化合物75d)160mg，收率41％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.10(s,1H),9.06-9.04(m,2H),8.98(d,J＝7.6Hz,1H),8.35(d,J＝9.6Hz,1H),8.03-8.00(m,2H),7.75(t,J＝8.4Hz,1H),7.58-7.55(m,1H),7.03(s,1H),4.73-4.70(m,1H),4.42-4.37(m,2H),4.12(s,3H),3.97-3.95(m,1H),3.47(s,2H).
将化合物75d(40mg,0.097mmol)溶解到5mL二氯甲烷中，0摄氏度下依次加入TEA(29.4mg，0.29mmol)和化合物75e(16mg，0.136mmol)，反应液18摄氏度搅拌1小时。反应液浓缩蒸干，残余物通过高效液相制备色谱柱(CH3CN:H2O(0.1％NH4HCO3)＝5-95％,UV:214nm,Flowrate:15ml/min)纯化得到黄色固体(化合物075)30mg,收率63％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ14.11(s,1H),9.06-9.05(m,2H),8.98(d,J＝7.2Hz,1H),8.35-8.33(m,1H),8.03-8.01(m,2H),7.75(t,J＝7.6Hz,1H),7.58-7.55(m,1H),7.02(s,1H),4.68(d,J＝9.2Hz,2H),4.34(d,J＝9.2Hz,2H),4.13(s,3H),3.45(s,2H),3.00(s,3H).LCMS:Rt＝3.088min,[M+H]+＝491.1.
实施例28化合物076的制备
化合物076可通过和075类似的方法合成
Figure BDA0002383806240000301
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ14.11(s,1H),9.06-9.05(m,2H),8.98(d,J＝7.2Hz,1H),8.36-8.33(m,1H),8.04-8.02(m,2H),7.75(t,J＝7.6Hz,1H),7.58-7.55(m,1H),7.03(s,1H),4.69(d,J＝9.2Hz,2H),4.32(d,J＝9.2Hz,2H),4.13(s,3H),3.44(s,2H),3.11-3.06(m,2H),1.42(t,J＝7.6Hz,3H).LCMS:Rt＝3.189min,[M+H]+＝505.2.
实施例29化合物077的制备
化合物077可通过和075类似的方法合成
Figure BDA0002383806240000302
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.11(s,1H),9.05(s,2H),8.98(d,J＝7.2Hz,1H),8.35(d,J＝8.4Hz,1H),8.03(d,J＝8.4Hz,1H),8.01(s,1H),7.75(t,J＝7.6Hz,1H),7.58-7.55(m,1H),7.03(s,1H),4.73(d,J＝7.2Hz,2H),4.31(d,J＝7.2Hz,2H),4.13(s,3H),3.43(s,2H),3.23-3.18(m,1H),1.41(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:Rt＝3.528min,[M+H]+＝519.2.
实施例30化合物078的制备
化合物078可通过和075类似的方法合成
Figure BDA0002383806240000303
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ14.11(s,1H),9.05(s,2H),8.98(d,J＝7.2Hz,1H),8.35(d,J＝8.4Hz,1H),8.03(d,J＝7.2Hz,1H),8.01(s,1H),7.75(t,J＝7.2Hz,1H),7.58-7.55(m,1H),7.03(s,1H),4.68(d,J＝9.6Hz,2H),4.31(d,J＝9.2Hz,2H),4.13(s,3H),3.46(s,2H),2.46-2.40(m,1H),1.24-1.20(m,2H),1.11-1.06(m,2H).LCMS:Rt＝3.421min,[M+H]+＝517.2.
参考如上实施例的方法还合成了下表中的化合物，各化合物的表征数据列于表中：
化合物编号 质谱(M+H) 化合物编号 质谱(M+H)
001 396.2 034 445.2
002 434.1 035 469.2
005 432.2 036 467.2
007 409.2 037 433.2
010 438.2 038 431.2
011 436.2 039 403.2
012 460.2 040 404.2
013 458.2 042 415.2
014 424.2 043 421.2
015 422.2 044 472.2
017 395.2 045 415.2
021 463.2 046 443.2
022 406.2 050 464.2
023 434.2 051 462.2
024 405.2 052 486.2
025 443.2 053 484.2
026 404.2 054 450.2
027 404.2 055 448.2
028 441.2 057 421.2
029 419.2 059 446.2
030 418.2 060 419.2
031 433.2 061 435.2
032 445.2 062 420.2
033 447.2 063 431.2
。
【生物学评价】
测试例1.测定本发明实施例化合物对人IRAK4激酶活性的抑制作用
主要试验材料
ATP(Sigma，货号：A7699-1G)
DMSO(Sigma，货号D2650)
EDTA(Sigma，货号：E5134)
HEPES(Sigma，货号：V900477-500G)
DTT(Sigma，货号：D0632-25g)
Brij-35(Sigma，货号：B4184)
96孔板(Corning，货号：3365)
384孔板(Corning，货号：3573)
实验步骤
化合物在ATP的Km浓度时对IRAK4抑制活性，在下文描述的IRAK4 MSA(Mobility-Shift Assay，微流体芯片技术的迁移率检测技术)中进行测量。
使用N-末端GST(谷胱甘肽-S-转移酶)和人IRAK4的重组融合蛋白作为酶(GST-IRAK4，激酶IRAK4(Carna，货号：09-145))，终浓度为1nM；ATP终浓度为37μM；用于激酶反应的底物为5-FAM(5-羧基荧光素)标记的多肽(5-FAM-IPTSPITTTYFFFKKK-COOH)，底物肽FAM-P8(GL Biochem，货号：112396)，终浓度为5μM。
在该试验中，用100％DMSO配制成500μM的化合物溶液，并用100％DMSO 4倍稀释10个浓度梯度，再用化合物缓冲液(50mM HEPES，pH 7.5，0.00015％Brij-35)进一步稀释10倍，配成含10％DMSO的化合物中间稀释溶液，化合物终浓度在10μM-0.04nM范围内，转移5μL至黑色384孔板中。
将激酶IRAK4用激酶缓冲液(50mM HEPES，pH 7.5，0.00015％Brij-35，2mM DTT)稀释成2.5nM的IRAK4溶液，并转移10μL至384孔板中，与化合物共孵育10-15分钟。
将底物和ATP分别用反应缓冲液(50mM HEPES，pH 7.5，0.00015％Brij-35，10mMMgCl2)稀释成12.5μM和92.5μM。转移10μL至384孔板，起始反应，并于28℃反应1小时。转移25μL50mM EDTA至384孔板，终止反应。
用Caliper EZ Reader(PerkinElmer)读取底物磷酸化的转化率，从而计算化合物对IRAK4的抑制率，用XL-fit软件计算IC50，结果如下表所示：
本发明示例性的实施例化合物对人IRAK4激酶活性的抑制IC50值如下表所示：
Figure BDA0002383806240000321
Figure BDA0002383806240000331
并且，本发明其他实施例化合物对人IRAK4激酶活性的抑制IC50值优选为80nM以下，还优选60nM以下，更优选40nM以下。
结论：本发明化合物对人IRAK4活性具有明显的抑制作用。
测试例2.测定本发明示例性的实施例化合物对LPS诱导的人PBMC中细胞因子TNF-α的抑制作用
主要试验材料
新鲜人PBMC(赛笠生物科技)
RPMI 1640培养基(Gibco，目录号A10491-01)
胎牛血清(Gibco，目录号10091-148)
青霉素/链霉素(Gibco，目录号15140-122)
LPS(Sigma，目录号L2630)
Human TNF-αELISA Kit(碧云天，目录号PT518)
DMSO(Sigma，目录号D8418)
实验步骤
体外LPS(脂多糖)诱导的人PBMC(外周血单核细胞)中细胞因子产生，考察发明的化合物对于人PBMC中诱导性细胞因子产生的功效。
新鲜的人PBMC购买自上海赛笠生物科技有限公司。收到PBMC后，立即在室温下450×g离心10分钟并弃去上清液，将PBMC重悬于完全培养基RPMI 1640(Gibco，目录号A10491-01)，10％胎牛血清(Gibco，目录号10091-148)，100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素(Gibco，目录号15140-122)中。
测定也是在完全培养基中进行。将PBMC以1×105个细胞/孔的细胞密度接种到96孔细胞培养板。将本发明化合物进行一系列稀释，稀释在等溶的100％DMSO中，并以20μM至0.002nM范围内的8个不同浓度应用于测定中，使得最终的DMSO浓度为0.25％DMSO。在实际刺激前，将细胞与配制的发明化合物在37℃预孵育30分钟。为了诱导细胞因子分泌，用0.1μg/mL LPS(Sigma，Escherichia coli O111:B4，目录号L2630)在37℃刺激细胞4小时。然后在室温下450×g离心10分钟后移取细胞培养后的上清液。
细胞上清液中分泌的TNF-α的量使用Human TNF-αELISA Kit(碧云天，目录号PT518)按照制造商的说明书进行测定。
吸光度A450的读值用酶标仪SpectraMax i3x(Molecular Device)检测，从而计算化合物对的抑制率，用GraphPad Prism 7.0软件计算IC50。
多个本发明示例性的实施例化合物对LPS诱导的人PBMC中细胞因子TNF-α的抑制IC50值为300nM以下，优选200nM以下，还优选100nM以下，还优选80nM以下，例如60nM以下。
测试例3.本发明示例性的实施例化合物对大鼠的PK分析测试
本发明优选实施例的小鼠药物代谢动力学试验，采用雄性SPF级的SD大鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)进行。
给药方式：单次灌胃口服给药或单次静脉注射
取样点：给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24小时
样品处理：静脉采血0.2mL，血液样本采集后置于冰上，离心分离血浆(离心条件：8000转/分钟，6分钟，4℃)。收集的血浆分析前存放于-80℃。
内标工作液：吸取一定量的浓度为645,000ng/mL的甲苯磺丁脲内标储备液至一定体积的容量瓶中，用甲醇定容至刻度后混匀，制得浓度为50ng/mL的内标工作溶液。
样品前处理：取50μL血浆样品至1.5mL离心管中，加入250μL内标溶液(空白不加内标补加相同体积的甲醇)，涡旋混匀，14000转/分钟离心5分钟，取200μL上清液加入到96孔进样板中，LC-MS/MS进样分析。
液相条件：
色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm(50mm×2.10mm)
移动相：A液为0.1％甲酸水溶液，B液为0.1％甲酸乙腈溶液
流速：0.5mL/min
数据处理系统为Analyst软件(美国应用生物系统公司，软件版本号1.5.5)。
结果表明，本发明实施例化合物具有令人满意的药代性能。
测试例4、本发明示例性的实施例化合物对LPS诱导的Balb/c雌性小鼠释放TNF-α的抑制作用
将雌性Balb/c(17～19g,上海吉辉)小鼠随机分成若干组，每组4只，组别包括正常对照+溶媒组、模型+溶媒组、模型+阳性药组及其它模型+测试药组。正常对照组动物接受腹腔注射生理盐水(10ml/kg)，模型动物接收LPS刺激(Sigma货号L2630,腹腔注射,10mL/kg，0.2mg/kg)。实验中测试药依次加入DMSO,Solutol,10mM PBS制成所需给药浓度的溶液或浊液，溶媒各成分DMSO、Solutol、10mM PBS的终体积比为5:15:80。各实验组按设定剂量在LPS(或saline)刺激前5h进行相应的灌胃给药(10ml/kg)，各组动物在刺激后1.5h用CO2安乐死，进行心脏采血。所得全血不抗凝，于湿冰中静置1.5h后2000g,4℃离心10min分离血清。血清-80℃冻存备TNFα测定。TNFα的定量通过TNFαELISA试剂盒(碧云天，货号：PT512)，按制造商的使用说明书完成测定。
Figure BDA0002383806240000341
Figure BDA0002383806240000351
检测结果表明多个化合物对TNF-α的抑制作用均超过50％，优选超过60％，还优选超过70％，更优选超过80％。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0002383806230000011
其中，R1选自H、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个Ra取代的下列基团：C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基、5-20元杂芳基、-COOC1-40烷基、-COC1-40烷基、-NHC1-40烷基或-N(C1-40烷基)2；
Ra选自羟基、氨基、C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、-COOC1-40烷基或-COC1-40烷基；
m选自1、2或3；
R2选自无取代或任选被一个、两个或更多个Rb取代的下列基团：C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基、5-20元杂芳基、-C6-20芳基3-20元杂环基、-C6-20芳基C3-20环烷基、-5-20元杂芳基3-20元杂环基或-5-20元杂芳基C3-20环烷基；
Rb选自卤素、＝O、羟基、氨基、C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、-COOC1-40烷基、-COC1-40烷基、-NHC1-40烷基、-N(C1-40烷基)2、-NHC3-20环烷基或-NH(3-20元杂环基)；当所述-C6-20芳基3-20元杂环基上的3-20元杂环基被C3-20环烷基取代时，其可以与3-20元杂环基构成螺环；
R3选自H、无取代或任选被一个、两个或更多个Rc取代的下列基团：C1-40烷基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基或5-20元杂芳基；
Rc选自卤素、氰基、羟基、氨基、-SO2-C1-40烷基、-SO2-C3-20环烷基、无取代或任选被一个、两个或更多个Rd取代的下列基团：C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基或3-20元杂环基；
Rd选自卤素、氰基、羟基或氨基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1选自无取代或任选被一个、两个或更多个羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基或C3-12环烷基取代的下列基团：C1-12烷基、C1-12烷氧基或-N(C1-12烷基)2；
m选自1、2或3；
R2选自无取代或任选被一个、两个或更多个如下基团取代的C6-12芳基、5-12元杂芳基、-C6-12芳基3-12元杂环基、-C6-12芳基C3-12环烷基、-5-12元杂芳基3-12元杂环基或-5-12元杂芳基C3-12环烷基：卤素、＝O、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C3-12环烷基、3-12元杂环基或-N(C1-12烷基)2；当所述-C6-12芳基3-12元杂环基上的3-12元杂环基被C3-12环烷基取代时，其可以与3-12元杂环基构成螺环；
R3选自无取代或任选被一个、两个或更多个如下基团取代的C1-12烷基或C3-12环烷基：羟基、氰基、C1-12烷基、-C1-12烷基羟基、-C1-12烷基氰基、-SO2-C1-12烷基、-SO2-C3-12环烷基、C3-12环烷基、3-12元杂环基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R1选自如下基团：
Figure FDA0002383806230000021
R2选自如下基团：
Figure FDA0002383806230000022
R3选自如下基团：
Figure FDA0002383806230000023
Figure FDA0002383806230000031
其中，
Figure FDA0002383806230000032
处表示连接位点。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，式(I)所示的化合物选自如下化合物：
Figure FDA0002383806230000033
Figure FDA0002383806230000041
Figure FDA0002383806230000051
Figure FDA0002383806230000061
5.权利要求1-4任一项所述化合物的制备方法，其特征在于，包括：
Figure FDA0002383806230000062
R1、R2、R3、m具有权利要求1-4任一项所述的定义；
式(II)所示的化合物与化合物R2-COOH反应生成式(I)所示的化合物。
6.一种药物组合物，其包含权利要求1-4任一项所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。
8.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为IRAK4抑制剂；
优选地，所述IRAK4抑制剂用于预防和/或治疗肿瘤、痛风、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、代谢综合症、动脉粥样硬化、心肌梗死、脓血症、炎症性肠病、哮喘和过敏等疾病。
9.权利要求1-4任一项所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防与白细胞介素-1受体相关激酶的疾病或病症的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述与白细胞介素-1受体相关激酶的疾病或病症选自肿瘤、痛风、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、代谢综合症、动脉粥样硬化、心肌梗死、脓血症、炎症性肠病、哮喘、类风湿性关节炎、败血症、自身免疫性疾病和过敏等疾病。
CN202010091244.0A 2019-02-14 2020-02-13 一种作为irak抑制剂的化合物 Active CN111560012B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2019101146465 2019-02-14
CN201910114646 2019-02-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111560012A true CN111560012A (zh) 2020-08-21
CN111560012B CN111560012B (zh) 2023-06-23

Family

ID=72072964

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010091244.0A Active CN111560012B (zh) 2019-02-14 2020-02-13 一种作为irak抑制剂的化合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111560012B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111793064A (zh) * 2019-04-02 2020-10-20 上海美悦生物科技发展有限公司 一种作为irak抑制剂的化合物及其制备方法和用途
CN112142661A (zh) * 2020-09-02 2020-12-29 苏州康润医药有限公司 3-氨基喹啉-5-羧酸甲酯的合成方法
WO2022194252A1 (zh) * 2021-03-19 2022-09-22 上海美悦生物科技发展有限公司 一种化合物的多晶型及其制备方法和应用
CN117209489A (zh) * 2023-05-30 2023-12-12 杭州邦顺制药有限公司 Irak激酶抑制剂
WO2024017381A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 深圳众格生物科技有限公司 一种抑制irak4活性的化合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017108744A1 (de) * 2015-12-22 2017-06-29 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Neue substituierte indazole, verfahren zu ihrer herstellung, pharmazeutische präparate die diese enthalten, sowie deren verwendung zur herstellung von arzneimitteln
CN107406416A (zh) * 2014-11-26 2017-11-28 拜耳医药股份有限公司 新型取代的吲唑、其制备方法、包含其的药物制剂及其用于制备药物的用途
WO2020135513A1 (zh) * 2018-12-25 2020-07-02 上海美悦生物科技发展有限公司 一种作为irak抑制剂的化合物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107406416A (zh) * 2014-11-26 2017-11-28 拜耳医药股份有限公司 新型取代的吲唑、其制备方法、包含其的药物制剂及其用于制备药物的用途
WO2017108744A1 (de) * 2015-12-22 2017-06-29 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Neue substituierte indazole, verfahren zu ihrer herstellung, pharmazeutische präparate die diese enthalten, sowie deren verwendung zur herstellung von arzneimitteln
WO2020135513A1 (zh) * 2018-12-25 2020-07-02 上海美悦生物科技发展有限公司 一种作为irak抑制剂的化合物

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111793064A (zh) * 2019-04-02 2020-10-20 上海美悦生物科技发展有限公司 一种作为irak抑制剂的化合物及其制备方法和用途
CN112142661A (zh) * 2020-09-02 2020-12-29 苏州康润医药有限公司 3-氨基喹啉-5-羧酸甲酯的合成方法
CN112142661B (zh) * 2020-09-02 2022-04-12 苏州康润医药有限公司 3-氨基喹啉-5-羧酸甲酯的合成方法
WO2022194252A1 (zh) * 2021-03-19 2022-09-22 上海美悦生物科技发展有限公司 一种化合物的多晶型及其制备方法和应用
TWI836379B (zh) * 2021-03-19 2024-03-21 大陸商上海美悦生物科技發展有限公司 化合物的多晶型及其製備方法和應用
WO2024017381A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 深圳众格生物科技有限公司 一种抑制irak4活性的化合物及其应用
CN117209489A (zh) * 2023-05-30 2023-12-12 杭州邦顺制药有限公司 Irak激酶抑制剂

Also Published As

Publication number Publication date
CN111560012B (zh) 2023-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113651814B (zh) Kras突变蛋白抑制剂
CN109195602B (zh) 用作免疫调节剂的对称或半对称化合物
ES2957233T3 (es) Inhibidores de quinasa tipo receptor de activina
CN114846015B (zh) 用作t细胞激活剂的经取代的杂芳基化合物
CN111560012A (zh) 一种作为irak抑制剂的化合物
CN105732636B (zh) 杂芳化合物及其在药物中的应用
TWI677499B (zh) Ｐｄｅ９抑制劑及其用途
TW202144345A (zh) Ｋｒａｓ突變蛋白抑制劑
WO2021143680A1 (zh) 杂芳基类衍生物及其制备方法和用途
CN110234646A (zh) 靶向PROTAC的Tau蛋白及相关使用方法
CN105566321B (zh) 杂芳化合物及其在药物中的应用
TWI762769B (zh) 肽醯精胺酸脫亞胺酶抑制劑及其用途
CN111499612B (zh) 一种作为irak抑制剂的化合物及其制备方法和用途
WO2014113191A1 (en) Hedgehog pathway signaling inhibitors and therapeutic applications thereof
KR101762981B1 (ko) 기분 장해 치료제
CN103476768A (zh) 6,5-杂环炔丙醇化合物及其用途
CN114341127A (zh) 作为hpk1抑制剂的氨基吡嗪化合物及其用途
CN110563722A (zh) 吡啶或哒嗪并环化合物及其应用
CN112135826B (zh) 氨基降茨烷衍生物及其制备方法与应用
WO2023280237A1 (zh) 一种磷酸酶降解剂的合成和应用
CN111793064B (zh) 一种作为irak抑制剂的化合物及其制备方法和用途
CN117561058A (zh) Cdk2抑制剂及其使用方法
WO2023241684A1 (zh) Pde4b抑制剂
KR20230035036A (ko) 이중 키나제-브로모도메인 억제제
TW202110848A (zh) 取代的稠合雙環類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20240827

Address after: 430075 C2-2, R & D zone, Wuhan National biological industry base, No. 666, Gaoxin Avenue, Donghu New Technology Development Zone, Wuhan City, Hubei Province

Patentee after: WUHAN LL SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co.,Ltd.

Country or region after: China

Address before: 200120 block a, 5th floor, building 1, 3333 Shenjiang Road, Pudong New Area, Shanghai

Patentee before: SHANGHAI MEIYUE BIOTECH DEVELOPMENT Co.,Ltd.

Country or region before: China