WO2021143680A1 - 杂芳基类衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

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WO2021143680A1
WO2021143680A1 PCT/CN2021/071297 CN2021071297W WO2021143680A1 WO 2021143680 A1 WO2021143680 A1 WO 2021143680A1 CN 2021071297 W CN2021071297 W CN 2021071297W WO 2021143680 A1 WO2021143680 A1 WO 2021143680A1
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amino
compound
pyrazolo
alkyl
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黄贤贵
郭阳辉
仇宗兴
别平彦
廖伟伟
晏青燕
沈卫超
曹海
邢庆娜
王鑫
曹琪
孟力陈
吴诺毅
李文朋
叶成
胡泰山
陈磊
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浙江海正药业股份有限公司
上海昂睿医药技术有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the invention relates to a new heteroaryl derivative, a preparation method thereof, a pharmaceutical composition containing the derivative, and its use as a therapeutic agent, especially as an SHP2 allosteric inhibitor.
  • Src homology domain-2 phosphatase is one of the important members of the protein tyrosine phosphatase (PTP) family. It is encoded by the protein tyrosine phosphatase non-receptor type 11 (PTPN11) gene, which catalyzes the tyrosine in protein Dephosphorylation of amino acids.
  • the N-terminus of SHP2 contains two SH2 domains, which control the subcellular localization and functional regulation of SHP2.
  • the C-terminus contains a catalytically active PTP domain and two tyrosine related to its activity. Acid residues.
  • SHP2 is in a state of self-inhibition. When stimulated by growth factors, cytokines, or inflammatory factors, such as platelet-derived growth factors PDGF and FGF, the catalytic sites are exposed, leading to the degradation of the SHP2 enzyme. activation.
  • SHP2 is widely present in the human body and participates in rat sarcoma (RAS)-extracellular signal-related kinase (ERK), phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)-protein kinase B and NF-KB, and activates fibroblast growth factor, epidermis
  • RAS rat sarcoma
  • ERK extracellular signal-related kinase
  • PI3K phosphatidylinositol 3-kinase
  • NF-KB NF-KB
  • Many signaling pathways such as growth factors and mitogen-activated protein kinase (MAPK/ERK) downstream of the insulin receptor regulate cell proliferation, differentiation, migration and apoptosis.
  • MAPK/ERK mitogen-activated protein kinase
  • SHP2 activating mutations of SHP2 are closely related to the occurrence of Noonan syndrome, leopard spot syndrome, monocytic leukemia, melanoma, solid tumors, cardiovascular diseases, immune disorders, fibrosis or visual disturbances.
  • SHP2 The overexpression of SHP2 can increase the risk of chronic myeloid leukemia, mastocytosis, malignant glioma, lung cancer, breast cancer and other cancers, indicating that SHP2 plays an important role in different types of cancer and different stages of cancer. Due to the multiple functions of SHP2 in tumors, the research on SHP2 target inhibitors also brings new hope and direction for tumor treatment.
  • SHP2 inhibitors can be divided into competitive inhibitors (including allostericin, phenylpyrazole hydrazine sulfonate and NSC-87877) and non-competitive inhibitors (including indole salicylic acid) according to their different mechanisms of action. And furosemide) and irreversible inhibitors (including antimony sodium gluconate and cryptotanshinone). It is reported that cryptotanshinone as an irreversible inhibitor of SHP2 can inhibit the proliferation of rhabdomyosarcoma, melanoma, colon cancer and breast cancer in vitro In vivo studies have shown that it can inhibit the proliferation of mouse prostate cancer, and whether it can further become a clinically effective drug still needs to be verified by many experiments.
  • the compound RMC-4630 developed by REVOLUTION Medicines Inc has entered clinical phase II for the treatment of solid tumors. It also includes the preclinical RMC-4550, and three clinical phase I compounds JAB-3068, JAB -3312 and TNO-155, developed by Jacobio Pharmaceuticals Co Ltd and Novartis AG, respectively, including Novartis preclinical drug SHP-099; REVOLUTION Medicines Inc and Novartis AG have published a series of SHP2 inhibition Drug patents, including WO-2019075265, WO-2018136265, WO-2018136264, WO-2017216706 and WO-2018013597, etc. Although the research of SHP2 has made some progress, there are still no effective drugs on the market, so It is necessary to continue research and development of new SHP2 inhibitors.
  • the present invention provides a new type of heteroaryl compound represented by general formula (AI) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof:
  • Y is selected from chemical bond or -S-;
  • V is selected from -N- or -CH-; or; when Z is selected from -O-; V is selected from -N-;
  • Q and T are each independently selected from N or CH; wherein at least one of Q and T is selected from N;
  • Ring A is selected from an aryl group, a heteroaryl group or a bicyclic condensed ring, wherein the aryl group is a monocyclic aryl group, the heteroaryl group is a 5- to 6-membered monocyclic heteroaryl group, and the bicyclic condensed ring It is preferably a condensed ring of an aryl group or a heteroaryl group and a monocyclic heterocyclic group or a monocyclic cycloalkyl group;
  • R 1 is the same or different, each independently selected from hydrogen atom, alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, cyano group, halogen, nitro group, cycloalkyl group, heterocyclic group, -OR 5 , -C(O)R 5 , -SO 2 R 5 , -NR 6 R 7 , -SO 2 NR 6 R 7 , -NHSO 2 R 5 or -C(O)NR 6 R 7 , wherein the alkyl, alkenyl, alkynyl, Cycloalkyl or heterocyclyl is optionally further substituted by one or more selected from halogen, nitro, cyano, alkyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -OR 5 , -C( O)R 5 , -C(O)OR 5 , -OC(O)R 5 , -SO 2 R 5 , -NR 6 R 7 , -SO 2
  • R 2 is selected from cyano, tetrazolyl, -C(O)R 5 , -C(O)OR 5 or -C(O)NR 6 R 7 ;
  • R 3 and R 4 form a group together with the N atom to which they are attached:
  • G and M are each independently selected from N or CR j ;
  • G and M are each independently selected from C;
  • Ring B is selected from cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl;
  • E is selected from NR k , (CR p R q ) p , O or S;
  • F is selected from (CR p R q ) q ;
  • J is selected from CR p R q ;
  • K is selected from NR k , (CR p R q ) r , O or S;
  • r is 0 or 1;
  • R m , R n , R p and R q are the same or different, and are each independently selected from R A ;
  • R p and R q together with the connected carbon atoms form R B ;
  • R c and R d are the same or different, and are each independently selected from a hydrogen atom, a halogen, an alkyl group or -OR 5 , wherein the alkyl group is optionally further substituted by a hydroxyl group, a halogen, an alkoxy group, a cycloalkyl group or -NR 6 R 7 is substituted by a substituent;
  • R c and Rd together with the connected carbon atoms form R B ;
  • R j and R k are the same or different, and are each independently selected from a hydrogen atom or an alkyl group
  • R 5 , R 6 and R 7 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group, or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, cycloalkyl group, heterocyclic group, aryl group Or heteroaryl is optionally further substituted by one or more selected from hydroxyl, amino, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -C (O)R 8 , -C(O)OR 8 , -OC(O)R 8 , -SO 2 R 8 , -NR 9 R 10 , -C(O)NR 9 R 10 , -SO 2 NR 9 R 10 or -NR 9 C(O)R 10 substituted by a substituent;
  • R 6 and R 7 together with the N atom to which they are attached form a 3- to 8-membered heterocyclic group, wherein the 3- to 8-membered heterocyclic ring contains one or more N, O, S or SO 2 atoms, and The 3- to 8-membered heterocyclic ring is optionally further substituted with one or more substituents selected from hydroxyl, halogen, amino, alkyl or alkoxy;
  • R 8 , R 9 and R 10 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, cycloalkyl group, heterocyclic group, aryl group
  • the group or heteroaryl group is optionally further substituted by one or more selected from hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, carboxyl or carboxyl group. Substituted by the substituent of the acid ester group;
  • n 0, 1, 2, 3, 4 or 5;
  • n is selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • p is selected from 1 or 2.
  • the compound of general formula (AI) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof is the compound of general formula (AII) or its Stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof,
  • the compound of general formula (AI) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof is the compound of general formula (I) or its Stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof,
  • the compound of general formula (AI) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof is the compound of general formula (II) or its Stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof,
  • Ring A, m, R 1 , R 3 and R 4 are as defined in the general formula (AI).
  • methyl, cycloalkyl, phenyl or heteroaryl group is optionally further substituted by one or more selected from methylsulfonyl, hydroxyl, amino, halogen , Haloalkyl, alkoxy, haloalkoxy, pyridyl or pyrimidinyl substituents; wherein the heteroaryl group is preferably pyridyl, pyrimidinemethylbenzopyrazolyl, pyrrolyl, furanyl, Thienyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiazolyl, benzimidazolyl, benzofuranyl or benzoxazolyl;
  • R 5 is as described in the general formula (AI).
  • the compound of general formula (I) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof is the compound of general formula (III) or its Stereoisomers, tautomers or their pharmaceutically acceptable salts:
  • Ring B is selected from phenyl, 3 to 8 membered cycloalkyl, 4 to 8 membered heterocyclic group or 5 to 6 membered heteroaryl;
  • E is selected from NR k , (CR p R q ) p , O or S;
  • F is selected from (CR p R q ) q ;
  • R n is selected from a hydrogen atom, a methyl group or -CH 2 OH;
  • R p and R q are each independently selected from hydrogen atom, halogen, amino, C 1 -C 4 alkyl, hydroxy C 1 -C 4 alkyl, amino C 1 -C 4 alkyl or -OR 5 ;
  • rings A, G, M, m, n, R 1 to R 2 , R 5 , R k and R g are as described in the general formula (I).
  • the compound of general formula (I) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof is the compound of general formula (IV) or its Stereoisomers, tautomers or their pharmaceutically acceptable salts:
  • Ring B is selected from phenyl, 3 to 8 membered cycloalkyl, 4 to 8 membered heterocyclic group or 5 to 6 membered heteroaryl;
  • J is selected from CR p R q ;
  • K is selected from NR k , (CR p R q ) r , O or S;
  • r is 0 or 1;
  • R n is selected from a hydrogen atom, a methyl group or -CH 2 OH;
  • R p and R q are each independently selected from hydrogen atom, halogen, amino, C 1 -C 4 alkyl, hydroxy C 1 -C 4 alkyl, amino C 1 -C 4 alkyl or -OR 5 ;
  • rings A, G, M, m, n, R 1 to R 2 , R 5 , R k and R g are as described in the general formula (I).
  • the compound of general formula (I) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof is the compound of general formula (V) or its Stereoisomers, tautomers or their pharmaceutically acceptable salts:
  • Ring B is selected from phenyl, 3 to 8 membered cycloalkyl, 4 to 8 membered heterocyclic group or 5 to 6 membered heteroaryl;
  • R c and R d together with the connected atoms form a 3-8 membered cycloalkyl group
  • R n is selected from a hydrogen atom, a methyl group or -CH 2 OH;
  • rings A, G, M, m, n, R 1 to R 2 and R g are as described in the general formula (I).
  • the compound of general formula (AI) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof is the compound of general formula (VI) or its Stereoisomers, tautomers or their pharmaceutically acceptable salts:
  • R w and R v are the same or different, and are each independently selected from a hydrogen atom, a halogen, a hydroxyl group, an alkyl group or an alkoxy group;
  • Each R z is the same or different and is independently selected from a hydrogen atom or an alkyl group
  • Ring K is selected from non-existent, cycloalkyl, aryl or heteroaryl, wherein the cycloalkyl, aryl or heteroaryl is optionally further selected by one or more selected from hydroxyl, amino, halogen, nitro , Cyano, alkyl, alkoxy, haloalkyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -C(O)R 8 , -C(O)OR 8 , -OC(O) R 8 , -SO 2 R 8 , -NR 9 R 10 , -C(O)NR 9 R 10 , -SO 2 NR 9 R 10 or -NR 9 C(O)R 10 substituents;
  • w 0, 1 or 2;
  • u 0, 1, 2 or 3;
  • the compound of general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) or (VI) or its stereoisomers A isomer, a tautomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R 5 is selected from a hydrogen atom or an alkyl group.
  • the compound of general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) or (VI) or its stereoisomers Forms, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein ring A is selected from phenyl, pyridyl or pyrimidinyl.
  • the compound of the general formula (III), (IV) or (V) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof wherein R g is the same or Different, each independently selected from hydrogen atom, F, Cl, Br, amino, hydroxyl, cyano, nitro, methoxy, ethoxy, methyl, ethyl, ethynyl, vinyl, -NHCH 3 or -N(CH 3 ) 2 ;
  • the compound of general formula (AI) is selected from:
  • the present invention provides a method for preparing a compound of general formula (I) or its stereoisomers or tautomers, the method comprising:
  • the compound of general formula (Ia) and NHR 3 R 4 undergo a nucleophilic substitution reaction under basic conditions to obtain the compound of general formula (Ib); the compound of general formula (Ib) and the compound of general formula (Ic) are used on a palladium catalyst and a basic
  • the Suzuki reaction is carried out under conditions, and the obtained compound is optionally further deprotected to obtain a compound of general formula (I);
  • Y is selected from chemical bonds
  • X 1 is selected from a leaving group, and the leaving group is selected from halogen or -SO 2 R t ;
  • X 2 is selected from halogen
  • R t is selected from alkyl groups
  • the present invention provides a method for preparing a compound of general formula (I) or its stereoisomers or tautomers, the method comprising:
  • the compound of general formula (Ia) and the compound of general formula (Ic) undergo Suzuki reaction under palladium catalyst and basic conditions to obtain compound of general formula (Id); compound of general formula (Id) and NHR 3 R 4 under basic conditions Carry out a nucleophilic substitution reaction, and the obtained compound may optionally be further deprotected to obtain a compound of general formula (I);
  • Y is selected from chemical bonds
  • X 1 is selected from a leaving group, and the leaving group is selected from halogen or -SO 2 R t ;
  • X 2 is selected from halogen
  • R t is selected from alkyl groups
  • the present invention provides a compound represented by the general formula (Ia) or its stereoisomers or tautomers, which is an intermediate for preparing the compound of the general formula (I):
  • X 1 is selected from a leaving group, and the leaving group is selected from halogen or -SO 2 R t ;
  • X 2 is selected from halogen
  • R t is selected from alkyl groups
  • R 2 is selected from cyano, tetrazolyl, -C(O)R 5 , -C(O)OR 5 or -C(O)NR 6 R 7 ;
  • R 5 , R 6 and R 7 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group, or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, cycloalkyl group, heterocyclic group, aryl group Or heteroaryl is optionally further substituted by one or more selected from hydroxyl, amino, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -C (O)R 8 , -C(O)OR 8 , -OC(O)R 8 , -SO 2 R 8 , -NR 9 R 10 , -C(O)NR 9 R 10 , -SO 2 NR 9 R 10 or -NR 9 C(O)R 10 substituted by a substituent;
  • R 6 and R 7 together with the N atom to which they are attached form a 3- to 8-membered heterocyclic group, wherein the 3- to 8-membered heterocyclic ring contains one or more N, O, S or SO 2 atoms, and The 3- to 8-membered heterocyclic ring is optionally further substituted with one or more substituents selected from hydroxyl, halogen, amino, alkyl or alkoxy;
  • R 8 , R 9 and R 10 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, cycloalkyl group, heterocyclic group, aryl group
  • the group or heteroaryl group is optionally further substituted by one or more selected from hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, carboxyl or carboxyl group.
  • the ester group is substituted by the substituent.
  • the present invention provides a method for preparing compound (Ia) of general formula (Ia) or its stereoisomers or tautomers, the method comprising:
  • the amino group of the compound of the general formula (Ie) is protected to obtain the compound of the general formula (If); the compound of the general formula (If) undergoes a coupling reaction under the action of a palladium catalyst to obtain the compound of the general formula (Ig); ) The compound removes the protective group PG of the amino group to obtain the compound of the general formula (Ih); the compound of the general formula (Ih) undergoes a halogenation reaction to obtain the compound of the general formula (Ia);
  • PG is the protecting group of N, preferably
  • X 3 is selected from halogen
  • the present invention provides a pharmaceutical composition containing an effective dose of the general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) ) Or the compound described in (VI) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, and pharmaceutically acceptable carriers, excipients or combinations thereof.
  • the present invention provides a compound of general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) or (VI) or its stereoisomers, mutual Use of a variant isomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in the preparation of an SHP2 allosteric inhibitor.
  • the present invention also provides a compound of general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) or (VI) or its stereoisomers, Use of a tautomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in the preparation of a medicament for the treatment of diseases mediated by SHP2, wherein the diseases mediated by SHP2 are preferably cancer, cancer metastasis, Cardiovascular disease, immune disorder, fibrosis or visual disturbance; wherein the disease mediated by SHP2 is preferably selected from Noonan syndrome, leopard spot syndrome, juvenile myelomonocytic leukemia, neuroblastoma, melanoma , Acute myeloid leukemia, breast cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, head cancer, neuroblastoma, squamous cell carcinoma of the head and neck, gastric cancer, anaplastic large cell lymphoma and glioblastoma.
  • the diseases mediated by SHP2 are
  • the present invention further provides a compound of general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) or (VI) or its stereoisomers, Use of a tautomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in the preparation of a medicament for treating cancer, cancer metastasis, cardiovascular disease, immune disorder, fibrosis or visual disturbance.
  • a compound of general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) or (VI) or its stereoisomers Use of a tautomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in the preparation of a medicament for treating cancer, cancer metastasis, cardiovascular disease, immune disorder, fibrosis or visual disturbance.
  • the present invention provides a compound of general formula (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), (V) or (VI) or its stereoisomers, mutual Mutants or their pharmaceutically acceptable salts, or their pharmaceutical compositions are used in the preparation and treatment of Noonan syndrome, leopard spot syndrome, juvenile myelomonocytic leukemia, neuroblastoma, melanoma, acute myeloid leukemia, Use in medicine for breast cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, head cancer, neuroblastoma, head and neck squamous cell carcinoma, gastric cancer, anaplastic large cell lymphoma and glioblastoma.
  • the present invention provides a method for inhibiting SHP2 receptor in vitro, which comprises combining said SHP2 receptor with general formulas (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV), ( V) or (VI) the compounds or their stereoisomers, tautomers or their pharmaceutically acceptable salts, or their pharmaceutical compositions are contacted.
  • the present invention provides a method for treating diseases mediated by SHP2, the method comprising administering to a patient in need of treatment an effective dose of the general formulas (AI), (AII), (I), (II), (III), (IV) ), (V) or (VI) the compound or its stereoisomer, tautomer or its pharmaceutically acceptable salt, or its pharmaceutical composition; wherein the SHP2-mediated disease is preferably Cancer, cancer metastasis, cardiovascular disease, immune disorder, fibrosis or visual disturbance; wherein SHP2-mediated disease is more preferably selected from Noonan syndrome, leopard spot syndrome, juvenile myelomonocytic leukemia, neuroblastoma, Melanoma, acute myeloid leukemia, breast cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, head cancer, neuroblastoma, squamous cell carcinoma of the head and neck, gastric cancer, anaplastic large cell lymphoma and glioblastoma.
  • the SHP2-mediated disease is preferably Cancer,
  • Alkyl when regarded as a group or a part of a group means to include a C 1 -C 20 linear or branched aliphatic hydrocarbon group. It is preferably a C 1 -C 10 alkyl group, more preferably a C 1 -C 6 alkyl group.
  • alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-di Methylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1 -Ethyl-2-methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethyl Butyl, 1,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl Wait. Alkyl groups can be substituted or unsubstituted.
  • Alkenyl refers to an alkyl group as defined above composed of at least two carbon atoms and at least one carbon-carbon double bond. Representative examples include, but are not limited to, vinyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-, 2- or 3-butenyl, etc. Alkenyl groups can be optionally substituted or unsubstituted.
  • Alkynyl refers to an aliphatic hydrocarbon group containing one carbon-carbon triple bond, which can be straight or branched. Preferred are C 2 -C 10 alkynyl groups, more preferably C 2 -C 6 alkynyl groups, and most preferably C 2 -C 4 alkynyl groups. Examples of alkynyl groups include, but are not limited to, ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-, 2-, or 3-butynyl, and the like. Alkynyl groups can be substituted or unsubstituted.
  • Cycloalkyl refers to saturated or partially saturated monocyclic, fused, bridged, and spirocyclic carbocyclic rings. It is preferably a C 3 -C 12 cycloalkyl group, more preferably a C 3 -C 8 cycloalkyl group, and most preferably a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • Examples of monocyclic cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptyl Alkenyl, cyclooctyl, etc., preferably cyclopropyl and cyclohexenyl. Cycloalkyl groups can be optionally substituted or unsubstituted.
  • “Spirocycloalkyl” refers to a 5- to 18-membered polycyclic group with two or more cyclic structures, and the single rings share one carbon atom (called a spiro atom) with each other.
  • the ring contains one or more A double bond, but none of the rings have a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system. It is preferably 6 to 14 yuan, more preferably 7 to 10 yuan.
  • the spirocycloalkyls are classified into monospiro, dispiro or polyspirocycloalkyls, preferably monospiro and dispirocycloalkyls, preferably 4-membered/5-membered, 4-membered Yuan/6 Yuan, 5 Yuan/5 Yuan or 5 Yuan/6 Yuan.
  • spirocycloalkyl include, but are not limited to: spiro[4.5]decyl, spiro[4.4]nonyl, spiro[3.5]nonyl, spiro[2.4]heptyl.
  • “Fused cycloalkyl” refers to a 5- to 18-membered, all-carbon polycyclic group containing two or more cyclic structures sharing a pair of carbon atoms with each other.
  • One or more rings may contain one or more double bonds, However, none of the rings has a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system, preferably 6 to 12 members, more preferably 7 to 10 members.
  • it can be classified into bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic condensed cycloalkyls, preferably bicyclic or tricyclic, and more preferably 5-membered/5-membered or 5-membered/6-membered bicyclic alkyl.
  • fused cycloalkyl include but are not limited to: bicyclo[3.1.0]hexyl, bicyclo[3.2.0]hept-1-enyl, bicyclo[3.2.0]heptyl, Decahydronaphthyl or tetradecahydrophenanthryl.
  • “Bridged cycloalkyl” refers to a 5- to 18-membered, all-carbon polycyclic group containing two or more cyclic structures that share two carbon atoms that are not directly connected to each other.
  • One or more rings may contain one or An aromatic system with multiple double bonds, but none of the rings having fully conjugated ⁇ electrons, is preferably 6 to 12 members, and more preferably 7 to 10 members. It is preferably 6 to 14 yuan, more preferably 7 to 10 yuan.
  • bridged cycloalkyl include, but are not limited to: (1s,4s)-bicyclo[2.2.1]heptyl, bicyclo[3.2.1]octyl, (1s,5s)-di Ring o[3.3.1]nonyl, bicyclo[2.2.2]octyl, (1r,5r)-bicyclo[3.3.2]decyl.
  • Heterocyclyl “heterocyclic” or “heterocyclic” are used interchangeably in this application and all refer to non-aromatic heterocyclic groups, in which one or more ring-forming atoms are heteroatoms, such as oxygen, Nitrogen, sulfur atoms, etc., including monocyclic, polycyclic, fused, bridged, and spirocyclic rings. It preferably has a 5- to 7-membered monocyclic ring or a 7- to 10-membered bi- or tricyclic ring, which may contain 1, 2 or 3 atoms selected from nitrogen, oxygen and/or sulfur.
  • heterocyclyl examples include, but are not limited to, morpholinyl, oxetanyl, thiomorpholinyl, tetrahydropyranyl, 1,1-dioxo-thiomorpholinyl, piperidine Group, 2-oxo-piperidinyl, pyrrolidinyl, 2-oxo-pyrrolidinyl, piperazin-2-one, 8-oxa-3-aza-bicyclo[3.2.1]octyl, Piperazinyl,
  • the heterocyclic group may be substituted or unsubstituted.
  • “Spiroheterocyclic group” refers to a polycyclic group with 5 to 18 members, two or more cyclic structures, and the single rings share one atom with each other.
  • the ring contains 1 or more double bonds, but no A ring has a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system, where one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen, or S(O) n (where n is selected from 0, 1 or 2) heteroatoms, and the remaining ring atoms are carbon. It is preferably 6 to 14 yuan, more preferably 7 to 10 yuan.
  • the spirocyclic alkyl group is classified into a single spiro heterocyclic group, a dispiro heterocyclic group or a polyspiro heterocyclic group, preferably a single spiro heterocyclic group and a dispiro heterocyclic group. More preferably, it is a 4-membered/4-membered, 4-membered/5-membered, 4-membered/6-membered, 5-membered/5-membered, or 5-membered/6-membered monospiro heterocyclic group.
  • spiroheterocyclyl include, but are not limited to: 1,7-dioxaspiro[4.5]decyl, 2-oxa-7-azaspiro[4.4]nonyl, 7-oxo Heterospiro[3.5]nonyl, 5-oxaspiro[2.4]heptyl,
  • “Fused heterocyclic group” refers to an all-carbon polycyclic group containing two or more ring structures that share a pair of atoms with each other. One or more rings may contain one or more double bonds, but no ring has a complete A conjugated ⁇ -electron aromatic system in which one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or S(O) n (where n is selected from 0, 1 or 2) heteroatoms, and the remaining ring atoms are carbon. It is preferably 6 to 14 yuan, more preferably 7 to 10 yuan.
  • bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic fused heterocyclic groups preferably bicyclic or tricyclic, more preferably 5-membered/5-membered or 5-membered/6-membered bicyclic fused heterocyclic group.
  • fused heterocyclyl include, but are not limited to: octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrolyl, octahydro-1H-isoindolyl, 3-azabicyclo[3.1. 0]hexyl, octahydrobenzo[b][1,4]dioxine and
  • “Bridged heterocyclic group” refers to a 5- to 14-membered, 5- to 18-membered, polycyclic group containing two or more cyclic structures that share two atoms that are not directly connected to each other.
  • One or more rings may Aromatic systems containing one or more double bonds, but none of the rings have fully conjugated ⁇ electrons, where one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or S(O) n (where n is selected from 0, 1 or 2) Heteroatoms, the rest of the ring atoms are carbon. It is preferably 6 to 14 yuan, more preferably 7 to 10 yuan.
  • bridging heterocyclyl include but are not limited to: 2-azabicyclo[2.2.1]heptyl, 2-azabicyclo[2.2.2]octyl, 2-azabicyclo[2.2.2]octyl, 2-azabicyclo[2.2.1]heptyl Cyclo[3.3.2]decyl,
  • Aryl refers to a carbocyclic aromatic system containing one or two rings, wherein the rings can be joined together in a fused manner.
  • aryl includes monocyclic or bicyclic aryl groups, such as phenyl, naphthyl, and tetrahydronaphthyl aromatic groups. Aryl groups can be substituted or unsubstituted.
  • Heteroaryl refers to an aromatic 5- to 6-membered monocyclic ring or 8- to 10-membered bicyclic ring, which may contain 1 to 4 atoms selected from nitrogen, oxygen, and/or sulfur.
  • heteroaryl include, but are not limited to, furyl, pyridyl, 2-oxo-1,2-dihydropyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, thienyl, isoxazolyl , Oxazolyl, oxadiazolyl, imidazolyl, pyrrolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, 1,2,3-thiadiazolyl, benzoin Dioxolyl, benzothienyl, benzimidazolyl, indolyl, isoindolyl, 1,3-dioxo-iso
  • Heteroaryl groups can be substituted or unsubstituted.
  • “Fused ring” refers to a polycyclic group in which two or more ring structures share a pair of atoms with each other.
  • One or more rings may contain one or more double bonds, but at least one ring does not have complete conjugation.
  • at least one ring has a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system, wherein the ring atoms are selected from 0, one or more ring atoms selected from nitrogen, oxygen or S(O) n ( Wherein n is selected from the heteroatoms of 0, 1 or 2), and the remaining ring atoms are carbon.
  • the condensed ring preferably includes a bicyclic or tricyclic condensed ring, wherein the bicyclic condensed ring is preferably a condensed ring of an aryl group or a heteroaryl group and a monocyclic heterocyclic group or a monocyclic cycloalkyl group. It is preferably 7 to 14 yuan, more preferably 8 to 10 yuan. Examples of "fused rings" include, but are not limited to:
  • Alkoxy refers to a (alkyl-O-) group. Among them, the alkyl group is defined in this article. C 1 -C 6 alkoxy groups are preferred. Examples thereof include, but are not limited to: methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, tert-butoxy and the like.
  • Halogen refers to fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • Amino refers to -NH 2 .
  • Cyano refers to -CN.
  • Niro refers to -NO 2 .
  • Carboxy refers to -C(O)OH.
  • Carboxylic acid ester group refers to -C(O)O-alkyl or -C(O)O-cycloalkyl, wherein the definitions of alkyl and cycloalkyl are as described above.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • BOC means tert-butoxycarbonyl
  • TFA trifluoroacetic acid
  • Ts means p-toluenesulfonyl.
  • Hydrochloroxy C 1 -C 4 alkyl refers to a C 1 -C 4 alkyl substituted with a hydroxy group.
  • Amino C 1 -C 4 alkyl refers to a C 1 -C 4 alkyl substituted with an amino group.
  • leaving group is an atom or functional group that is detached from a larger molecule in a chemical reaction. It is a term used in nucleophilic substitution and elimination reactions. In the nucleophilic substitution reaction, the reactant attacked by the nucleophile is called the substrate, and the atom or group of atoms that breaks away from the substrate molecule with a pair of electrons is called the leaving group. A group that is easy to accept electrons and has a strong ability to withstand negative charges is a good leaving group. When the pKa of the conjugate acid of the leaving group is smaller, the leaving group is more easily detached from other molecules.
  • Common leaving groups include, but are not limited to, halogen, methylsulfonyl, -OTs or -OH.
  • Substituted refers to one or more hydrogen atoms in the group, preferably up to 5, more preferably 1 to 3 hydrogen atoms, independently of each other, substituted with a corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and those skilled in the art can determine (by experiment or theory) possible or impossible substitutions without too much effort. For example, an amino group or a hydroxyl group having free hydrogen may be unstable when combined with a carbon atom having an unsaturated (e.g., olefinic) bond.
  • R 5 , R 6 and R 7 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group or a heterocyclic group, wherein the alkyl group, a cycloalkyl group or a heterocyclic group is optionally further selected from one or more Hydroxy, amino, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -C(O)R 8 , -C(O)OR 8 , Substituents of -OC(O)R 8 , -SO 2 R 8 , -NR 9 R 10 , -C(O)NR 9 R 10 , -SO 2 NR 9 R 10 or -NR 9 C(O)R 10 Replaced by
  • R 6 and R 7 together with the N atom to which they are attached form a 3- to 8-membered heterocyclic group, wherein the 3- to 8-membered heterocyclic ring contains one or more N, O, S or SO 2 atoms, and The 3- to 8-membered heterocyclic ring is further substituted with one or more substituents selected from hydroxyl, halogen, amino, alkyl or alkoxy;
  • R 8 , R 9 and R 10 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, cycloalkyl group, heterocyclic group, aryl group
  • the group or heteroaryl group is optionally further substituted by one or more selected from hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, carboxyl or carboxyl group.
  • the ester group is substituted by the substituent.
  • “Pharmaceutically acceptable salts” refer to certain salts of the above compounds that can maintain the original biological activity and are suitable for medical use.
  • the pharmaceutically acceptable salt of the compound represented by the general formula (I) may be a metal salt or an amine salt formed with a suitable acid.
  • “Pharmaceutical composition” means a mixture containing one or more of the compounds described herein or their physiologically pharmaceutically acceptable salts or prodrugs and other chemical components, as well as other components such as physiologically pharmaceutically acceptable carriers and excipients. Shape agent. The purpose of the pharmaceutical composition is to promote the administration to the organism, facilitate the absorption of the active ingredient and thus exert the biological activity.
  • the present invention provides a method for preparing a compound of general formula (I) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, the method comprising:
  • the compound of general formula (Ia) and NHR 3 R 4 undergo a nucleophilic substitution reaction under basic conditions to obtain the compound of general formula (Ib); the compound of general formula (Ib) and the compound of general formula (Ic) are used on a palladium catalyst and a basic
  • the Suzuki reaction is carried out under conditions, and the obtained compound is optionally further deprotected to obtain a compound of general formula (I);
  • Y is selected from chemical bonds
  • X 1 is selected from a leaving group, and the leaving group is selected from halogen or -SO 2 R t ;
  • X 2 is selected from halogen
  • R t is selected from alkyl groups
  • the present invention provides a method for preparing a compound of general formula (I) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, the method comprising:
  • the compound of general formula (Ia) and the compound of general formula (Ic) undergo Suzuki reaction under palladium catalyst and basic conditions to obtain compound of general formula (Id); compound of general formula (Id) and NHR 3 R 4 under basic conditions Carry out a nucleophilic substitution reaction, and the obtained compound may optionally be further deprotected to obtain a compound of general formula (I);
  • Y is selected from chemical bonds
  • X 1 is selected from a leaving group, and the leaving group is selected from halogen or -SO 2 R t ;
  • X 2 is selected from halogen
  • R t is selected from alkyl groups
  • the present invention provides a method for preparing a compound of general formula (II) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, the method comprising:
  • the compound of general formula (IIa) and NHR 3 R 4 undergo nucleophilic substitution reaction under basic conditions to obtain the compound of general formula (IIb); the compound of general formula (IIb) and the compound of general formula (Ic) are combined with a palladium catalyst and a basic
  • the Suzuki reaction is carried out under conditions, and the obtained compound is optionally further deprotected to obtain a compound of general formula (IIc); the compound of general formula (IIc) is hydrolyzed under sodium hydroxide solution to obtain a compound of general formula (II);
  • X 1 is selected from a leaving group, and the leaving group is selected from halogen or -SO 2 R t ;
  • X 2 is selected from halogen
  • R t is selected from alkyl groups
  • Ring A, m, R 1 , R 3 and R 4 are as defined in the general formula (II).
  • the present invention provides a method for preparing a compound of general formula (II) or its stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, the method comprising:
  • the compound of general formula (IIa) and the compound of general formula (Ic) are subjected to Suzuki reaction under palladium catalyst and basic conditions to obtain compound of general formula (IId); compound of general formula (IId) and NHR 3 R 4 under basic conditions Carry out a nucleophilic substitution reaction to obtain a compound of general formula (IIc); the compound of general formula (IIc) is hydrolyzed under sodium hydroxide solution to obtain a compound of general formula (II);
  • X 1 is selected from a leaving group, and the leaving group is selected from halogen or -SO 2 R t ;
  • X 2 is selected from halogen
  • R t is selected from alkyl groups
  • Ring A, m, R 1 , R 3 and R 4 are as defined in the general formula (II).
  • the mass spectrum is measured by an LC/MS instrument, and the ionization method can be ESI or APCI.
  • the thin layer chromatography silica gel plate uses Yantai Huanghai HSGF254 or Qingdao GF254 silica gel plate, the size of the silica gel plate used for thin layer chromatography (TLC) is 0.15mm ⁇ 0.2mm, and the size of the thin layer chromatography separation and purification product is 0.4mm. ⁇ 0.5mm.
  • CD 3 OD Deuterated methanol.
  • DMSO-d 6 Deuterated dimethyl sulfoxide.
  • the argon atmosphere means that the reaction flask is connected to an argon balloon with a volume of about 1L.
  • the compound was purified using silica gel column chromatography eluent system and thin layer chromatography, wherein the eluent system was selected from: A: petroleum ether and ethyl acetate system; B: dichloromethane and methanol system; C: two Chloromethyl: ethyl acetate; the volume ratio of the solvent varies according to the polarity of the compound, and a small amount of acidic or alkaline reagents, such as acetic acid or triethylamine, can also be added for adjustment.
  • A petroleum ether and ethyl acetate system
  • B dichloromethane and methanol system
  • C two Chloromethyl: ethyl acetate
  • the volume ratio of the solvent varies according to the polarity of the compound, and a small amount of acidic or alkaline reagents, such as acetic acid or triethylamine, can also be added for adjustment.
  • the residue obtained was prepared for liquid phase separation (Separation column AKZONOBELKromasil; 250 ⁇ 21.2mm ID; 5 ⁇ m, 20mL/min; flow Phase A: 0.05% TFA+H 2 O, mobile phase B: CH 3 CN) to obtain the target product 6-(4-amino-4-methylpiperidin-1-yl)-3-(2,3-di Chlorophenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-carboxamide 2 (10 mg), yield: 13.80%.
  • the tert-butyl (4-phenylpiperidin-4-yl) carbamate 6a (117.62mg, 425.59 ⁇ mol), 3-bromo-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d] Pyrimidine-4-nitrile 1d (100 mg, 386.90 ⁇ mol) and N,N-diisopropylethylamine (150.01 mg, 1.16 mmol, 191.68 ⁇ L) were added to N-methylpyrrolidone (5 mL). Heat to 110°C and react for 1 hour.
  • 6-(4-Amino-4-phenylpiperidin-1-yl)-3-(2,3-dichlorophenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-carbonitrile 6d (89.94 mg, 193.68 ⁇ mol) was added to a mixed solution of methanol (1.00 mL), aqueous sodium hydroxide solution (5M, 1.00 mL) and 30% hydrogen peroxide (0.5 mL), and reacted at room temperature for 3 hours.
  • 6-(4-Amino-4-phenylpiperidin-1-yl)-3-(2,3-dichlorophenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-carbonitrile 6d (50mg, 107.68 ⁇ mol) was added to 3mL of concentrated hydrochloric acid, heated to reflux, and reacted for 1 hour.
  • aqueous phase was extracted with ethyl acetate (30 mL ⁇ 2).
  • the organic phases were combined and washed with saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. , Concentrated under reduced pressure, the residue obtained was further analyzed and purified by silica gel column chromatography (eluent: system A) to obtain 4-cyano-4-(2,6-difluorophenyl)piperidine-1-carboxylic acid Tert-butyl ester 11b (0.67g), yield: 20.81%.
  • 6-(4-amino-4-(2,6-difluorophenyl)piperidin-1-yl)-3-bromo-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine -4-Nitrile 11f (150mg, 345.43 ⁇ mol), (2,3-dichlorophenyl)boronic acid 1g (263.66mg, 1.38mmol), 2-dicyclohexylphosphorus-2',6'-diisopropoxy -1,1'-biphenyl (64.48mg, 138.17 ⁇ mol), methanesulfonic acid (2-dicyclohexylphosphino-2',6'-diisopropoxy-1,1'-biphenyl) ( 2-amino-1,1'-biphenyl-2-yl)palladium (57.85mg, 69.09 ⁇ mol) and potassium phosphate (219.97mg, 1.04mmol) were added
  • reaction solution was added with 10 mL of water and 10 mL of ethyl acetate, separated and extracted, the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (10 mL ⁇ 2), the organic phases were combined, and the organic phase was washed with 10 mL of saturated brine, and reduced pressure After concentration, the residue obtained was further separated and purified by silica gel column chromatography (eluent: system A) to obtain (1-(3-(3-amino-2-chlorophenyl)-4-cyano-1H-pyridine) T-butyl azolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl)-4-methylpiperidin-4-yl]carbamate 12d (51 mg), yield: 58.11%.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (30 mL ⁇ 2), and the organic phases were combined. Wash with saturated brine, dry with anhydrous sodium sulfate, and concentrate under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Trifluoroacetic acid (1mL) was added dropwise to 4-amino-4-(2-chlorophenyl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 23e (200mg, 643 ⁇ mol) in 3mL dichloromethane solution, and stirred at room temperature for 1 hour It was concentrated under reduced pressure to obtain 4-(2-chlorophenyl)piperidin-4-amine 23f, which was directly used for the next reaction without purification.
  • aqueous phase was extracted with ethyl acetate (30 mL ⁇ 2), and the organic phases were combined. Wash with saturated brine, dry with anhydrous sodium sulfate, and concentrate under reduced pressure. The residue obtained is further analyzed and purified by silica gel column chromatography (eluent: system A) to obtain the product 4-(4-chlorophenyl)-4 -Cyanopiperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 24b (2.4 g), yield: 74.6%.
  • Potassium hydroxide (840mg, 15.0mmol) and tert-butyl 4-(4-chlorophenyl)-4-cyanopiperidine-1-carboxylate 24b (2.40g, 7.48mmol) were added to dimethyl sulfoxide (15mL ) In the solution, slowly add hydrogen peroxide (30%, 6.5mL) dropwise to the reaction solution, and stir for 1 hour after the addition is complete.
  • Trifluoroacetic acid (1mL) was added dropwise to 4-amino-4-(4-chlorophenyl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 24d (200mg, 643 ⁇ mol) in 3mL dichloromethane solution, and stirred at room temperature for 1 hour , Concentrated under reduced pressure to obtain 4-(4-chlorophenyl)piperidin-4-amine 24e, which was directly used for the next reaction without purification.
  • 6-(4-amino-4-(4-chlorophenyl)piperidin-1-yl)-3-(2,3-dichlorophenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d] 24 g (95 mg, 190 ⁇ mol) of pyrimidine-4-nitrile was added to 3 mL of concentrated hydrochloric acid and heated to reflux for 1 hour.
  • aqueous phase was extracted with ethyl acetate (30 mL ⁇ 2), and the organic phases were combined. Washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The residue obtained was further analyzed and purified by silica gel column chromatography (eluent: system A) to obtain the product 4-(3-chlorophenyl)-4 -Cyanopiperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 25b (2.19 g), yield: 68.3%.
  • Trifluoroacetic acid (1mL) was added dropwise to 4-amino-4-(3-chlorophenyl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 25d (200mg, 643 ⁇ mol) in 3mL dichloromethane solution, and stirred at room temperature for 1 hour After concentration under reduced pressure, 4-(3-chlorophenyl)piperidin-4-amine 25e was obtained, which was directly used for the next reaction without purification.
  • 6-(4-amino-4-(3-chlorophenyl)piperidin-1-yl)-3-(2,3-dichlorophenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d] 25 g (75 mg, 150 ⁇ mol) of pyrimidine-4-nitrile was added to 3 mL of concentrated hydrochloric acid, and heated to reflux for 1 hour.
  • 6-(4-amino-4-(1H-indazol-5-yl)piperidin-1-yl)-3-bromo-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-carbonitrile 26g (120mg, 273.80 ⁇ mol), (2,3-dichlorophenyl)boronic acid 1g (208.98mg, 1.10mmol), methanesulfonic acid (2-dicyclohexylphosphino-2',6'-diisopropoxy -1,1'-biphenyl)(2-amino-1,1'-biphenyl-2-yl)palladium (45.85mg, 54.76 ⁇ mol), 2-dicyclohexylphosphorus-2',6'-di Isopropoxy-1,1'-biphenyl (51.04mg, 109.52 ⁇ mol) and potassium phosphate (174.13mg, 821.39 ⁇ mol) were added to 5.5mL of mixed
  • the residue obtained is prepared for liquid phase separation (separation column AKZONOBELKromasil; 250 ⁇ 21.2mm ID; 5 ⁇ m, 20mL/min; mobile phase A: 0.05% TFA+H 2 O, mobile phase B: CH 3 CN), the product 6-(4-amino-4-(1H-indazol-5-yl)piperidin-1-yl)-3-(2 ,3-Dichlorophenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-carboxamide 26 (19 mg), yield: 17.84%.
  • the 4-phenylpiperidin-4-amine 27b (144.25mg, 818.43 ⁇ mol), 3-iodo-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-carbonitrile 27a (250mg, 818.43 ⁇ mol) and N,N-diisopropylethylamine (317.32mg, 2.46mmol) were added to 3mL of N,N-dimethylacetamide, heated to 90°C, stirred for 2 hours, after the reaction, cooled to At room temperature, pour into ice water and a solid precipitates out. Stir for 10 minutes.
  • reaction solution was poured into 100 mL of ice water, stirred for 0.5 hours, and the solid was collected, then slurried with petroleum ether, filtered, and dried to obtain the solid.
  • the mother liquor was extracted with ethyl acetate, dried with anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • the obtained residue was further analyzed and purified by silica gel column chromatography (eluent: system A) to obtain 1-benzyl-4-(2-fluorophenyl)piperidine-4-carbonitrile 32c (4.1g), yield : 94.11%.
  • N,N-diisopropylethylamine (737.60mg, 5.71mmol, 943.22 ⁇ L), (4-(2-fluorophenyl)piperidin-4-yl) tert-butyl carbamate 32g (560mg, 1.90mmol) )
  • 3-bromo-6-chloro-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-4-carbonitrile 1d (491.70mg, 1.90mmol) to the N,N-dimethylacetamide (3mL) solution
  • heating at 100°C and stirring for 1 hour After the reaction, the mixture was poured into 100 mL of water and extracted with ethyl acetate (50 mL ⁇ 3).
  • reaction solution was added with 20 mL of water and ethyl acetate (20 mL ⁇ 3) for extraction, washed with saturated sodium chloride solution (20 mL), the organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to prepare liquid phase separation (Separation column AKZONOBELKromasil; 250 ⁇ 21.2mm ID; 5 ⁇ m, 20mL/min; mobile phase A: 0.05% TFA+H 2 O, mobile phase B: CH 3 CN) to obtain 4-cyano-4-(2-( Trifluoromethyl)phenyl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 33b (410 mg), yield: 12.16%.
  • 6-(4-Amino-4-(2-(trifluoromethyl)phenyl)piperidin-1-yl)-3-(2,3-dichlorophenyl)-1H-pyrazolo[3, 4-d]pyrimidine-4-carbonitrile combines 6-(4-amino-4-(2-(trifluoromethyl)phenyl)piperidin-1-yl)-3-bromo-1H-pyrazolo[3 ,4-d)pyrimidine-4-carbonitrile 33f (190mg, 407.50 ⁇ mol), (2,3-dichlorophenyl)boronic acid 1g (311.04mg, 1.63mmol), methanesulfonic acid (2-dicyclohexylphosphino- 2',6'-diisopropoxy-1,1'-biphenyl)(2-amino-1,1'-biphenyl-2-yl)palladium (68.25mg, 81.50 ⁇ mol), 2-di Cyclohex
  • Potassium hydroxide (527.29mg, 9.40mmol) and tert-butyl 4-carbamoyl-4-(pyridin-4-ylmethyl)piperidine-1-carboxylate 35c (667mg, 2.09mmol) were added to acetonitrile (2mL ) And water (2 mL), add 1,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin (328.40 mg, 1.15 mmol) in batches under a water bath, and stir at room temperature for 1 hour.
  • Potassium hydroxide (988.17mg, 17.61mmol) was added to 4-carbamoyl-4-(pyridin-3-ylmethyl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 36c (1.25g, 3.91mmol) in acetonitrile (In a mixed solution of 3 mL) and water (3 mL), 1,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin (615.44 mg, 2.15 mmol) was added in batches under a water bath, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • Potassium hydroxide (1.58g, 28.18mmol) was added to tert-butyl 4-carbamoyl-4-(pyridin-2-ylmethyl)piperidine-1-carboxylate 37c (2g, 6.26mmol) in acetonitrile (6mL ) And water (6 mL), add 1,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin (984.70 mg, 3.44 mmol) in batches under a water bath, and stir at room temperature for 1 hour.
  • tert-butyl 4-cyano-4-(pyridin-2-yl)piperidine-1-carboxylate 38b (3.27g, 11.38mmol) and potassium hydroxide (1.28g, 22.76mmol) to dimethyl sulfoxide (8.12 mL), slowly add hydrogen peroxide (8.12 mL) dropwise, warm to room temperature, and react for 30 minutes. 100 mL of water was added to the reaction solution, a large amount of solids were precipitated out and filtered to obtain tert-butyl 4-carbamoyl-4-(pyridin-2-yl)piperidine-1-carboxylate 38c (1.3 g), yield: 37.41%.
  • 6-(4-Amino-4-(pyridin-2-yl)piperidin-1-yl)-3-(2,3-dichlorophenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d] 38 g (26.27 mg, 55.87 ⁇ mol) of pyrimidine-4-nitrile, sodium hydroxide (0.5 mL), and hydrogen peroxide (0.5 mL) were added to the methanol (1 mL) solution in sequence, and stirred at room temperature for 1 hour.

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Abstract

本发明涉及杂芳基类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(AI)所示的杂芳基类衍生物、其制备方法及其可药用的盐，以及它们作为治疗剂，特别是SHP2变构抑制剂的用途，其中通式(AI)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

杂芳基类衍生物及其制备方法和用途 技术领域
本发明涉及一种新的杂芳基类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为SHP2变构抑制剂的用途。
背景技术
Src同源域-2磷酸酶(SHP2)是蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族的重要成员之一，由蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11(PTPN11)基因编码，催化蛋白质中酪氨酸的去磷酸化反应。SHP2的N端包含2个SH2结构域，这两个SH2结构域控制着SHP2的亚细胞定位和功能调节，C端包含1个具有催化活性的PTP结构域和2个与其活性相关的的酪氨酸残基。正常情况下，SHP2处于自抑制的状态，当受到生长因子、细胞因子或炎症因子等刺激时，如在血小板源性生长因子PDGF和FGF等刺激下，使得催化位点暴露，导致SHP2的酶的活化。
SHP2在人体内广泛存在，参与大鼠肉瘤(RAS)-胞外信号相关激酶(ERK)，磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B和NF-KB,激活成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及胰岛素受体下游丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)等多条信号通路，进而调节细胞的增殖、分化、迁移和凋亡。目前已经发现SHP2的激活突变与努南综合征、豹斑综合征、单核细胞白血病、黑色素瘤、实体瘤、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱的发生有着密不可分的联系，SHP2的过表达会增加慢性粒细胞白血病、肥大细胞增多症、恶性胶质瘤、肺癌、乳腺癌等癌症的风险，表明SHP2在不同类型的癌症及癌症的不同阶段有着重要的作用。由于SHP2在肿瘤中的多种功能，针对SHP2靶点抑制剂的研究也为肿瘤的治疗带来新的希望和方向。
SHP2抑制剂按照作用机制的不同，可以分为竞争性抑制剂(包括变构霉素、苯基吡唑肼基磺酸盐和NSC-87877)、非竞争性抑制剂(包括吲哚水杨酸和呋莫素酮)和不可逆性抑制剂(包括葡萄酸锑钠和隐丹参酮)，据报道隐丹参酮作为SHP2不可逆性抑制剂，在体外可抑制横纹肌肉瘤、黑色素瘤、结肠癌和乳腺癌的增殖，体内研究则表明其可抑制小鼠前列腺癌的增殖，其是否能够进一步成为临床有效的药物还需要诸多试验验证。
目前REVOLUTION Medicines Inc公司研发的化合物RMC-4630已经进入临床Ⅱ期，用于实体瘤的治疗，同时还包括处于临床前的RMC-4550，另外还有3个临床Ⅰ期的化合物JAB-3068、JAB-3312和TNO-155，分别由加科思(Jacobio Pharmaceuticals Co Ltd)和诺华(Novartis AG)研发，同时包括诺华临床前药物SHP-099；REVOLUTION Medicines Inc和Novartis AG已经公开了一系列的SHP2抑制剂专利，其中包括WO-2019075265、WO-2018136265、WO-2018136264、WO-2017216706和WO-2018013597等，虽然SHP2的研究已经取得一定的进展，但是目前仍未有行之有效的药物上市，所以仍有必要继续研究和开发新的SHP2抑制剂。
发明内容
针对上述的技术问题，本发明提供一种通式(AI)所示的一类新的杂芳基类化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure PCTCN2021071297-appb-000001
其中：
Y选自化学键或-S-；
当Z选自-NH-时；V选自-N-或-CH-；或者；当Z选自-O-时；V选自-N-；
Q和T各自独立地选自N或CH；其中Q和T中至少一个选自N；
环A选自芳基、杂芳基或双环稠合环，其中所述芳基为单环芳基，所述杂芳基为5至6元单环杂芳基，所述的双环稠合环优选为芳基或杂芳基与单环杂环基或单环环烷基的稠合环；
R 1相同或不同，各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、氰基、卤素、硝基、环烷基、杂环基、-OR 5、-C(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、硝基、氰基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7的取代基所取代；
R 2选自氰基、四氮唑基、-C(O)R 5、-C(O)OR 5或-C(O)NR 6R 7；
R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成4～11元杂环基，优选为5～11元杂环基，其中所述的杂环基内含有一个或多个N、O、S或SO 2原子，并且杂环基上任选进一步被一个或多个选自卤素、硝基、氰基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CH 2R 5、-CH(OH)R 5、-CH 2OR 5、＝O、-OR 5、-SR 5、-SOR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7的取代基所取代，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
或者，R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成基团：
Figure PCTCN2021071297-appb-000002
Figure PCTCN2021071297-appb-000003
为单键或双键；
当
Figure PCTCN2021071297-appb-000004
表示单键时，G和M各自独立地选自N或CR j；
当
Figure PCTCN2021071297-appb-000005
表示双键时，G和M各自独立地选自C；
环B选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
E选自NR k、(CR pR q) p、O或S；
F选自(CR pR q) q；
条件是，当E选自(CR pR q) p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NR k、O或S时，q为1；
J选自CR pR q；
K选自NR k、(CR pR q) r、O或S；
r为0或1；
R m、R n、R p和R q相同或不同，各自独立地选自R A；
或者，R p和R q与相连接的碳原子一起形成R B；
R c和R d相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、烷基或-OR 5，其中所述的烷基任选进一步被羟基、卤素、烷氧基、环烷基或-NR 6R 7的取代基所取代；
或者，R c和R d与相连接的碳原子一起形成R B；
R g相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR 6R 7的取代基所取代；
或者，两个R g与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O；
R j和R k相同或不同，各自独立地选自氢原子或烷基；
R A相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR 6R 7的取代基所取代；
R B相同或不同，各自独立地选自3～10元环烷基或3～10元杂环基，其中所述的环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、氰基、硝基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7的取代基所取代；
R 5、R 6和R 7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
或者，R 6和R 7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO 2原子，并且3～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R 8、R 9和R 10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
m为0、1、2、3、4或5；
n选自0，1，2，3或4；
p选自1或2。
在本发明的优选方案中，通式(AI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure PCTCN2021071297-appb-000006
其中：环A、m、Z、R 1～R 4的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(AI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure PCTCN2021071297-appb-000007
其中：环A、Y、m、R 1～R 4的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(AI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure PCTCN2021071297-appb-000008
其中：环A、m、R 1、R 3和R 4的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(AI)、(AII)、(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成4～8元单环杂环基，优选为5～6元单环杂环基，更优选为哌啶基，其中所述的单环杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、环烷基、苯基、卤代苯基、杂芳基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；其中所述的甲基、环烷基、苯基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自甲磺酰基、羟基、氨基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、吡啶基或嘧啶基的取代基所取代；其中所述的杂芳基优选为吡啶基、嘧啶甲基苯并吡唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基或苯并噁唑基；
R 5的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(AI)、(AII)、(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成7～11元螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；R 5的定义如通式(AI)中所述；优选地，其中所述的螺杂环基选自：
Figure PCTCN2021071297-appb-000009
R a相同或不同，各自独立地选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2或-OR 5；或者，两个R a与相连接的同一个碳原子一起形成C＝O；t为1、2或3；R 5的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(AI)、(AII)、(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成7～11元桥杂环基，其中所述的桥杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；R 5的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(I)或(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成7～11元稠杂环基，其中所述的稠杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；R 5的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure PCTCN2021071297-appb-000010
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
E选自NR k、(CR pR q) p、O或S；
F选自(CR pR q) q；
条件是，当E选自(CR pR q) p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NR k、O或S时，q为1；
R m选自氨基、-CH 2NH 2或-NHC(＝NH)NH 2；
R n选自氢原子、甲基或-CH 2OH；
R p和R q各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C 1-C 4烷基、羟基C 1-C 4烷基、氨基C 1-C 4烷基或-OR 5；
Figure PCTCN2021071297-appb-000011
环A、G、M、m、n、R 1～R 2、R 5、R k和R g的定义如通式(I)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(IV)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure PCTCN2021071297-appb-000012
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
J选自CR pR q；
K选自NR k、(CR pR q) r、O或S；
r为0或1；
R m选自氨基、-CH 2NH 2或-NHC(＝NH)NH 2；
R n选自氢原子、甲基或-CH 2OH；
R p和R q各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C 1-C 4烷基、羟基C 1-C 4烷基、氨基C 1-C 4烷基或-OR 5；
Figure PCTCN2021071297-appb-000013
环A、G、M、m、n、R 1～R 2、R 5、R k和R g的定义如通式(I)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure PCTCN2021071297-appb-000014
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
R c和R d与相连接的原子一起形成3～8元环烷基；
R m选自氨基、-CH 2NH 2或-NHC(＝NH)NH 2；
R n选自氢原子、甲基或-CH 2OH；
Figure PCTCN2021071297-appb-000015
环A、G、M、m、n、R 1～R 2和R g的定义如通式(I)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(AI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure PCTCN2021071297-appb-000016
其中：
L 1选自不存在、-(C＝O)-、-(CR wR v) u-，其中任意的一个-(CR wR v)-任选进一步被-N(R z)-、-O-、-S-、-SO-、-SO 2-所替代；
每个R w和R v相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、烷基或烷氧基；
每个R z相同或不同，各自独立选自氢原子或烷基；
环E选自4～11元含N的单环杂环基、4～11元含N的稠杂环基或4～11元含N的桥杂环基，其中所述的单环杂环基、稠杂环基、桥杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基、-OR 5或＝O的取代基所取代；
环K选自不存在，环烷基、芳基或杂芳基，其中所述的环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、环烷 基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
其中-L 1-环K和-(CH 2) W-NH 2连接于环E的同一个碳原子上；
w为0，1或2；
u为0，1，2或3；
环A、Z、Q、T、m、R 1～R 2、R 5、R 8～R 10的定义如通式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 1选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、三氟甲基、环丙氧基、乙炔基、乙烯基、-NHCH 3或-N(CH 3) 2。
在本发明的优选方案中，通式(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 2选自-C(O)NH 2或-C(O)OH。
在本发明的优选方案中，通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 5选自氢原子或烷基。
在本发明的优选方案中，通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环A选自苯基、吡啶基或嘧啶基。
在本发明的优选方案中，通式(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环B选自：
Figure PCTCN2021071297-appb-000017
在本发明的优选方案中，通式(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R g相同或不同，各自独立地选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、乙炔基、乙烯基、-NHCH 3或-N(CH 3) 2；
或者，两个R g与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O。
在本发明的优选方案中，通式(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环E选自
Figure PCTCN2021071297-appb-000018
在本发明的优选方案中，通式(AI)所述的化合物选自：
Figure PCTCN2021071297-appb-000019
Figure PCTCN2021071297-appb-000020
Figure PCTCN2021071297-appb-000021
Figure PCTCN2021071297-appb-000022
Figure PCTCN2021071297-appb-000023
Figure PCTCN2021071297-appb-000024
Figure PCTCN2021071297-appb-000025
Figure PCTCN2021071297-appb-000026
Figure PCTCN2021071297-appb-000027
或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。
进一步，本发明提供一种制备通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure PCTCN2021071297-appb-000028
通式(Ia)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到通式(Ib)化合物；通 式(Ib)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到通式(I)化合物；
其中：
Y选自化学键；
X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
X 2选自卤素；
R t选自烷基；
环A，m和R 1～R 4的定义如通式(I)中所述。
更进一步，本发明提供一种制备通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure PCTCN2021071297-appb-000029
通式(Ia)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到通式(Id)化合物；通式(Id)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到通式(I)化合物；
其中：
Y选自化学键；
X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
X 2选自卤素；
R t选自烷基；
环A，m和R 1～R 4的定义如通式(I)中所述。
更进一步，本发明提供一种通式化合物(Ia)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体，其为制备通式(I)化合物的中间体：
Figure PCTCN2021071297-appb-000030
其中：
X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
X 2选自卤素；
R t选自烷基；
R 2选自氰基、四氮唑基、-C(O)R 5、-C(O)OR 5或-C(O)NR 6R 7；
R 5、R 6和R 7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
或者，R 6和R 7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO 2原子，并且3～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R 8、R 9和R 10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代。
更进一步，本发明提供一种制备通式化合物(Ia)或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure PCTCN2021071297-appb-000031
将通式(Ie)化合物的氨基进行保护，得到通式(If)化合物；通式(If)化合物在钯类催化剂的作用下进行偶联反应，得到通式(Ig)化合物；通式(Ig)化合物脱掉氨基的保护基PG，得到通式(Ih)化合物；通式(Ih)化合物进行卤代反应，得到通式(Ia)化合物；
其中：
PG为N的保护基，优选为
Figure PCTCN2021071297-appb-000032
X 3选自卤素；
X 1、X 2和R 2的定义如通式(Ia)中所述。
更进一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
本发明提供一种通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备SHP2变构抑制剂中的用途。
本发明还提供一种通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗由SHP2介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由SHP2介导的疾病优选为癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱；其中所述的由SHP2介导的疾病优选选自努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤。
本发明进一步提供一种通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱的药物中的用途。
本发明提供一种通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤的药物中的用途。
本发明提供一种体外抑制SHP2受体的方法，其中包括将所述的SHP2受体与通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物相接触。
本发明提供一种治疗由SHP2介导的疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的通式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物；其中所述的SHP2介导的疾病优选为癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱；其中SHP2介导的疾病更优选选自努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤。
发明的详细说明
除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括C 1-C 20直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为C 1-C 10烷基，更优选为C 1-C 6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基 可以是取代或未取代的。
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，代表性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。烯基可以是任选取代的或未取代的。
“炔基”是指含有一个碳碳三键的脂肪烃基团，可为直链也可以带有支链。优先选择的是C 2-C 10的炔基，更优选C 2-C 6炔基，最优选C 2-C 4炔基。炔基基团的实施例包括，但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。炔基可以是取代或未取代的。
“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环、桥环和螺环的碳环。优选为C 3-C 12环烷基，更优选为C 3-C 8环烷基，最优选为C 3-C 6环烷基。单环环烷基的实施例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环己烯基。环烷基可以是任选取代的或未取代的。
“螺环烷基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：螺[4.5]癸基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：二环[3.1.0]己基、二环[3.2.0]庚-1-烯基、二环[3.2.0]庚基、十氢化萘基或十四氢菲基。
“桥环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：(1s,4s)-二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二环o[3.3.1]壬基、二环[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二环[3.3.2]癸基。
“杂环基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子是杂原子，如氧、氮、硫原子等，包括单环、多环、稠环、桥环和螺环。优选具有5至7元单环或7至10元双-或三环，其可以包含1，2或3个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吗啉基，氧杂环丁烷基，硫代吗啉基，四 氢吡喃基，1，1-二氧代-硫代吗啉基，哌啶基，2-氧代-哌啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，哌嗪-2-酮，8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、哌嗪基、
Figure PCTCN2021071297-appb-000033
杂环基可以是取代或未取代的。
“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O) n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1,7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基、5-氧杂螺[2.4]庚基、
Figure PCTCN2021071297-appb-000034
“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O) n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢-1H-异吲哚基，3-氮杂二环[3.1.0]己基，八氢苯并[b][1,4]二噁英(dioxine)和
Figure PCTCN2021071297-appb-000035
“桥杂环基”指5至14元，5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O) n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。“桥杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基，2-氮杂二环[2.2.2]辛基、2-氮杂二环[3.3.2]癸基、
Figure PCTCN2021071297-appb-000036
“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括单环或双环的芳基，比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。芳基可以是取代或未取代的。
“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或8至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氢吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，异噁唑基，噁唑基，噁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，异噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并间二氧杂环戊烯基，苯并噻吩基、苯并咪唑基，吲哚基，异吲哚基，1，3-二氧代-异吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并异噻唑基，苯并噁唑基、苯并异噁唑基、
Figure PCTCN2021071297-appb-000037
杂芳基可以是取代或未取代的。
“稠合环”是指两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但至少一个环不具有完全共轭的π电子的芳香系统，同时，至少一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中环原子中选自0个、一个或多个环原子选自氮、氧或S(O) n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。稠合环优选包括双环或三环的稠合环，其中双环稠合环优选为芳基或杂芳基与单环杂环基或单环环烷基的 稠合环。优选为7至14元，更优选为8至10元。“稠合环”的实施例包括但不限于：
Figure PCTCN2021071297-appb-000038
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C 1-C 6的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“氨基”指-NH 2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO 2。
“苄基”和“Bn”指-CH 2-苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O-烷基或-C(O)O-环烷基，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“BOC”指叔丁氧基羰基。
“TFA”指三氟醋酸。
“Ts”指对甲苯磺酰基。
“羟基C 1-C 4烷基”指羟基取代的C 1-C 4烷基。
“氨基C 1-C 4烷基”指氨基取代的C 1-C 4烷基。
“离去基团(leaving group)”，或称离去基，在化学反应中从一较大分子中脱离的原子或官能基，是亲核取代反应与消除反应中应用的术语。在亲核取代反应中，被亲核试剂进攻的反应物称为底物(substrate)，而从底物分子中带着一对电子断裂出去的原子或原子团称为离去基团。易接受电子、承受负电荷能力强的基团是好的离去基团。当离去基团共轭酸的pKa越小，离去基团越容易从其他分子中脱离。原因是因为当其共轭酸的pKa越小，相应离去基团不需和其他原子结合，以阴离子(或电中性离去基团)的形式存在的趋势也就增强。常见的离去基团包括但不限于卤素、甲磺酰基、-OTs或-OH。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、疏基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝O、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7的取代基所取代；
R 5、R 6和R 7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基或杂环基，其中所述烷基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
或者，R 6和R 7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO 2原子，并且3～8元杂环上进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R 8、R 9和R 10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代。
“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。通式(I)所表示的化合物的可药用的盐可以为金属盐、与合适的酸形成的胺盐。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合 物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure PCTCN2021071297-appb-000039
通式(Ia)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到通式(Ib)化合物；通式(Ib)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到通式(I)化合物；
其中：
Y选自化学键；
X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
X 2选自卤素；
R t选自烷基；
环A，m和R 1～R 4的定义如通式(I)中所述。
本发明提供了一种通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure PCTCN2021071297-appb-000040
通式(Ia)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到通式(Id)化合物；通式(Id)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到通式(I)化合物；
Y选自化学键；
X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
X 2选自卤素；
R t选自烷基；
环A，m和R 1～R 4的定义如通式(I)中所述。
本发明提供了一种通式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure PCTCN2021071297-appb-000041
通式(IIa)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到通式(IIb)化合物；通式(IIb)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到通式(IIc)化合物；通式(IIc)化合物在氢氧化钠溶液条件下水解，得到通式(II)化合物；
其中：
X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
X 2选自卤素；
R t选自烷基；
环A，m，R 1，R 3和R 4定义如通式(II)中所述。
本发明提供了一种通式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure PCTCN2021071297-appb-000042
通式(IIa)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到通式(IId)化合物；通式(IId)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到通式(IIc)化合物；通式(IIc)化合物在氢氧化钠溶液条件下水解，得到通式(II)化合物；
其中：
X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
X 2选自卤素；
R t选自烷基；
环A，m，R 1，R 3和R 4定义如通式(II)中所述。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
实施例给出了式(I)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。 1H NMR图谱是用Bruker仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。 1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式可为ESI或APCI。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原 料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。
CD 3OD：氘代甲醇。
CDCl 3：氘代氯仿。
DMSO-d 6：氘代二甲基亚砜。
氩气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气气球。
实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系选自：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；C：二氯甲烷：乙酸乙酯；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。
实施例1
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
Figure PCTCN2021071297-appb-000043
第一步
6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将氰化四丁基铵1a(2.81g,10.48mmol)、4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶1b(1.8g,9.52mmol)和三乙烯二胺(213.65mg,1.90mmol)依次加入到二氯甲烷(30mL)中，室温条件下持续搅拌2小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，向体系中加入少量三乙胺，得到6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1c (741mg)，产率：43.33％。
MS m/z(ESI):179.9[M+1]
第二步
3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1c(200mg,1.11mmol)，N-溴代琥珀酰亚胺(218.06mg,1.23mmol)依次加入到乙腈(4mL)中，加热至90℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，得到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(280mg)，产率：97.26％。
MS m/z(ESI):257.7[M+1]
第三步
N-[1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(200mg,773.81μmol)，N-(4-甲基-4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯1e(248.74mg,1.16mmol)和二异丙基乙胺(600.04mg,4.64mmol,810.87uL)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(3mL)中，加热至110℃，反应6小时。反应结束后，向反应液中加入30mL乙酸乙酯和15mL水，分液萃取，分去水层，有机相依次以饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂：B体系)，得到N-[1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯1f(230mg)，产率：68.12％。
MS m/z(ESI):436.1[M+1]
第四步
N-[1-[4-氰基-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将N-[1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯1f(230mg,527.15μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(150.89mg,790.73μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(88.25mg,105.43μmol)，磷酸钾(335.27mg,1.58mmol)和2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(98.26mg,210.86μmol)依次加入到6mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝5：1)，加热至120℃，反应6小时。反应结束后，将反应液中加入15mL水和30mL的乙酸乙酯，分液萃取，有机相通过饱和食盐水10mL洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-[1-[4-氰基-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯1h(143mg)，产率：53.99％。
MS m/z(ESI):502.0[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将N-[1-[4-氰基-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-甲基-4-哌啶基]氨基甲 酸叔丁酯1h(140mg,278.67μmol)，三氟乙酸(1.53g,13.42mmol,1mL)依次加入到二氯甲烷(3mL)中，室温反应6小时。反应结束后，向反应液中缓慢滴加饱和碳酸钠溶液，调节pH＝8，减压浓缩，残余物中加入30mL乙酸乙酯和15mL水分液萃取，有机相使用饱和食盐水10mL洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到目标产物6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1(70mg)，产率：47.92％。
MS m/z(ESI):401.9[M+1]
实施例2
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000044
第一步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1(65mg,125.90μmol)和6M的氢氧化钠溶液(0.5mL)依次加入到2mL乙醇中，加热至80℃，反应3小时。反应结束后，在反应液中缓慢滴加三氟醋酸，调节pH＝5，减压浓缩，得到的残余物制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到目标产物6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺2(10mg)，产率：13.80％。
MS m/z(ESI):421.9[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.56(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),7.38-7.31(m,2H),4.64-4.60(m,2H),3.59-3.52(m,2H),1.89-1.82(m,4H),1.51(s,3H).
实施例3和实施例4
6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈3
6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺4
Figure PCTCN2021071297-appb-000045
第一步
(R)-N-((3S,4S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(300mg,1.16mmol)、二异丙基乙胺(750mg,5.8mmol,1.0mL)和(R)-2-甲基-N-((3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)丙烷-2-亚磺酰胺三氟乙酸盐3a(478mg,1.74mmol)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中，加热至110℃，反应2小时。反应结束后，向反应液中加入30mL乙酸乙酯和15mL水，分液萃取，分去水层，有机相依次以饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂：B体系)，得到产物(R)-N-((3S,4S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺3b(230mg)，产率：40％。
MS m/z(ESI):495.9[M+1]
第二步
(R)-N-((3S,4S)-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
氩气保护下，将(R)-N-((3S,4S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺3b(230mg,463μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(142mg,745μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(77mg,93μmol)、磷酸钾(295mg,1.39mmol)和2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(87mg,186μmol)依次加入到6mL1,4-二氧六环和水的混合溶液中(V 1,4-二氧六环：V 水＝5：1)，加热至100℃，反应6小时。反应结束后，将反应液中加入15mL水 和30mL的乙酸乙酯，分液萃取，有机相通过饱和食盐水10mL洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物(R)-N-((3S,4S)-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺3c(74mg)，产率：28％。
MS m/z(ESI):561.9[M+1]
第三步
6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(R)-N-((3S,4S)-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺3c(74mg,132μmol)和溴代丁二酰亚胺(26mg,145μmol)依次加入到1mLN,N-二甲基甲酰胺中，室温反应2小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈3(20mg)，产率：33％。
MS m/z(ESI):457.9[M+1]
第四步
6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈3(20mg,43.6μmol)和6M氢氧化钠溶液(0.5mL)依次加入到2mL乙醇中，加热至80℃，反应1小时。反应结束后，在反应液中缓慢滴加三氟醋酸，调节pH＝5，减压浓缩，得到的残余物制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到目标产物6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺4(4.5mg)，产率：22％。
MS m/z(ESI):475.9[M+1]
实施例5
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000046
Figure PCTCN2021071297-appb-000047
第一步
4,6-二氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
将3,4-二氢-2H-吡喃(14.69g,174.60mmol)、4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶1b(11g,58.20mmol)和对甲基苯磺酸(1.00g,5.82mmol)加入到四氢呋喃(100mL)中，加热至60℃，反应2小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4,6-二氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶5a(14.2g)，产率：89.3％。
MS m/z(ESI):272.9[M+1]
第二步
6-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
氩气保护下，将4,6-二氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶5a(2g,7.32mmol)、四三苯基膦钯(845.79mg,732.28μmol)和氰化锌(1.72g,14.65mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加热110℃，反应2小时。反应结束后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(50mL)，充分溶解后过滤掉不溶物，滤液减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈5b(0.8g)，产率：41.4％。
第三步
6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
室温下，将6-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈5b(1g,3.79mmol)加到三氟乙酸(10mL)和水(1mL)中。室温反应4小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A： 0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1c(321mg)，产率：47.1％。
MS m/z(ESI):179.9[M+1]
第四步
3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将溴代丁二酰亚胺(475.77mg,2.67mmol)和6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1c(320mg,1.78mmol)加到乙腈(10mL)中，加热回流反应2小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(380mg)，产率：82.5％。
MS m/z(ESI):259.8[M+1]
第五步
(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
室温下，将(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的三氟乙酸盐5c(110.87mg,361.75μmol,)、N,N-二异丙基乙胺(127.51mg,986.60μmol,162.93μL)和3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(85mg,328.87μmol)加到N-甲基吡咯烷酮(5mL)，加热到100℃，反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5d(151mg)，产率：86.9％。
MS m/z(ESI):527.8[M+1]。
第六步
(R)-N-((S)-1'-(4-氰基-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
氩气保护下，将(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5d(150mg,283.84μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(162.49mg,851.52μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(52.98mg,113.54μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(47.54mg,56.77μmol)和磷酸钾(180.75mg,851.52μmol)依次加到12mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝5：1)。加热至100℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(4-氰基-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5e(115mg)，产率：68.14％。
MS m/z(ESI):593.8[M+1]
第七步
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(R)-N-((S)-1'-(4-氰基-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5e(115mg,193.42μmol)加入到盐酸二氧六环溶液(5mL)中，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到粗品(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈5f(94mg)，产率：92.2％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):472.9[M-16]
第八步
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
室温下，将(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈5f(94mg,155.52μmol)加到氢氧化钠水溶液(5M,1mL)、30％的双氧水(1mL)和甲醇(1mL)的混合溶液中，室温反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺5(21mg)，产率：20.4％。
MS m/z(ESI):508.1[M+1]
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.24(s,3H),8.12(s,1H),7.65-7.70(m,2H),7.50-7.55(m,1H),7.30-7.42(m,5H),4.52-5.00(m,2H),4.39(s,1H),3.18-3.35(m,3H),3.00-3.10(m,1H),1.65-1.82(m,2H),1.47-1.60(m,2H)。
实施例6
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000048
Figure PCTCN2021071297-appb-000049
第一步
(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将(4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯6a(117.62mg,425.59μmol)、3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(100mg,386.90μmol)和N,N-二异丙基乙胺(150.01mg,1.16mmol,191.68μL)加到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中。加热到110℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.1％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯6b(153mg)，产率：79.35％。
MS m/z(ESI):497.8[M+1]。
第二步
(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯6b(153mg,307.00μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(175.74mg,920.99μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(57.30mg,122.80μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(51.41mg,61.40μmol)和磷酸钾(195.50mg,920.99μmol)依次加到11mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝10：1)。加热至100℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯6c(128mg)，产率：73.86％。
MS m/z(ESI):563.8[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯6c(120mg,212.59μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)中，室温反应1小时，减压浓缩，得到粗品6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈6d(89.94mg)，产率：91.3％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):447.1[M-16]
第四步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈6d(89.94mg,193.68μmol)加入到甲醇(1.00mL)、氢氧化钠水溶液(5M,1.00mL)和30％的双氧水(0.5mL)混合溶液中，室温反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺6(18mg)，产率：14.65％。
MS m/z(ESI):481.9[M+1]
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.25-8.50(m,3H),8.05-8.23(m,1H),7.60-7.80(m,4H),7.50-7.60(m,2H),7.38-7.50(m,3H),4.15-4.60(m,4H),1.93-2.18(m,2H),1.20-1.50(m,2H)。
实施例7
6-(内型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000050
Figure PCTCN2021071297-appb-000051
第一步
(内型-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将(内型-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯7a(144mg,636μmol)、3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580μmol)和N,N-二异丙基乙胺(225mg,1.74mmol)加到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中。加热到110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(内型-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯7b(150mg)，产率：57.7％。
MS m/z(ESI):448.0[M+1]。
第二步
(内型-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(内型-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯7b(150mg,335μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(255mg,1.34mmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(62.5mg,134μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(56mg,67μmol)和磷酸钾(213mg,1.00mmol)依次加到12mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝5：1)。加热至100℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(内型-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯7c(45mg)，产率：26.1％。
MS m/z(ESI):513.8[M+1]
第三步
6-(内型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(内型-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯7c(45mg,87.75μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)中，室温反应1小时，减压浓缩，得到粗品6-(内型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3- 二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈7d(35.9mg)，产率：99％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):413.6[M+1]
第四步
6-(内型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(内型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈7d(35.9mg,86.6μmol)加入到甲醇(1.00mL)、氢氧化钠水溶液(5M,1.00mL)和30％的双氧水(0.5mL)混合溶液中，室温反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(内型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺7(18mg)，产率：48％。
MS m/z(ESI):431.9[M+1]
实施例8
6-(外型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000052
第一步
(外型-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将(外型-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯8a(144mg,636μmol)、3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580μmol)和N,N-二异丙基乙胺(225mg, 1.74mmol)加到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中。加热到110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(外型-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯8b(90mg)，产率：34.6％。
MS m/z(ESI):448.0[M+1]
第二步
(外型-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(外型-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯8b(90mg,200μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(153mg,0.8mmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(37mg,80μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(33mg,40μmol)和磷酸钾(127mg,0.6mmol)依次加到12mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝5：1)。加热至100℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(外型-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯8c(25mg)，产率：24.3％。
MS m/z(ESI):513.8[M+1]
第三步
6-(外型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(外型-8-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯8c(25mg,49μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)中，室温反应1小时，减压浓缩，得到粗品6-(外型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈8d(20mg)，产率：98％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):413.6[M+1]
第四步
6-(外型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(外型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈8d(20mg,48μmol)加入到甲醇(1.00mL)、氢氧化钠水溶液(5M,1.00mL)和30％的双氧水(0.5mL)混合溶液中，室温反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(外型-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H- 吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺8(9mg)，产率：43.5％。
MS m/z(ESI):431.9[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.02-8.14(m,1H),7.87(br,3H),7.55-7.73(m,2H),7.30-7.47(m,2H),4.90-5.16(br,1H),4.49-4.76(br,1H),3.16-3.27(m,1H),2.29-2.48(m,2H),2.06-2.23(m,2H),1.83-2.01(m,2H),1.56-1.80(m,2H).
实施例9
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
Figure PCTCN2021071297-appb-000053
第一步
将(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈5f(63mg,128.47μmol)加到5mL盐酸水溶液中，加热回流，反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸9(21mg)，产率：25.43％。
MS m/z(ESI):509.1[M+1]
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.64(s,1H),8.24(s,3H),7.63-7.75(m,1H),7.49-7.54(m,1H),7.40-7.48(m,2H),7.28-7.40(m,3H),4.47-4.88(m,2H),4.39(s,1H),3.18-3.40(m,3H),3.00-3.10(m,1H),1.61-1.82(m,2H),1.44-1.60(m,2H).
实施例10
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
Figure PCTCN2021071297-appb-000054
第一步
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈6d(50mg,107.68μmol)加入到3mL的浓盐酸中，加热回流，反应1小时。反应结束后，加碳酸钾溶液调节pH为9-10，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸10(21mg)，产率：32.65％。
MS m/z(ESI):465.8[M-16]
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.70(s,1H),8.25-8.45(m,3H),7.68-7.76(m,3H),7.50-7.60(m,2H),7.40-7.50(m,3H),4.15-4.50(m,2H),3.43-3.60(m,2H),2.54-2.64(m,2H),2.00-2.15(m,2H).
实施例11
6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000055
Figure PCTCN2021071297-appb-000056
第一步
4-氰基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
0℃下，将氢化钠(2.40g,59.92mmol)加入到2-(2,6-二氟苯基)乙腈11a(1.53g,9.99mmol)和N,N-双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.66g,10.99mmol)的15mL的N,N-二甲基甲酰胺中，冰浴下，搅拌1小时，加热至60℃，搅拌16小时，反应结束后，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相后用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氰基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯11b(0.67g)，产率：20.81％。
MS m/z(ESI):222.8[M-99]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(233.25mg,4.16mmol)和4-氰基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯11b(0.67g,2.08mmol)加入到二甲基亚砜(5mL)溶液中，冰浴下，将双氧水(2mL，30％)慢慢滴加到反应液中，滴加完毕后升至室温，搅拌30分钟，反应结束后，向反应液中加入水(100mL)，析出白色固体，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥，得到4-氨基甲酰基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯11c(0.64g)，产率：90.47％。
MS m/z(ESI):285.1[M-55]
第三步
4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将[双(三氟乙酰氧基)碘]苯(985.51mg,2.29mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯11c(0.64g,1.88mmol)20mL的混合溶液中(乙腈：水＝1：1)，室温搅拌16小时，反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯11d(251mg)，产率：30.83％。
MS m/z(ESI):239.9[M-72]
第四步
4-(2,6-二氟苯基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯11d(270mg,691.61μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)中，室温反应1小时，减压浓缩，得到4-(2,6-二氟苯基)哌啶-4-胺11e(138.85mg)，产率：94.7％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):160.1[M-52]
第五步
6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
室温下，将4-(2,6-二氟苯基)哌啶-4-胺11e(138.85mg,425.59μmol)、3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(100mg,386.90μmol)和N,N-二异丙基乙胺(150mg,1.16mmol)加到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中。加热到110℃，搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11f(181mg)，产率：85.33％。
MS m/z(ESI):417.0[M-15]
第六步
6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
氩气保护下，将6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11f(150mg,345.43μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(263.66mg,1.38mmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(64.48mg,138.17μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(57.85mg,69.09μmol)和磷酸钾(219.97mg,1.04mmol)依次加到11mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝10：1)。加热至100℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11g(130mg)，产率：61.26％。
MS m/z(ESI):483.0[M-15]
第七步
6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11g(50mg,81.39μmol)加入到甲醇(1.00mL)、氢氧化钠水溶液(5M,1.00mL)和30％的双氧水(0.5mL)混合溶液中，室温反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,6-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺11(15mg)，产率：35.7％。
MS m/z(ESI):517.8[M+1]
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.50-8.70(m,3H),8.16(s,1H),7.55-7.70(m,3H),7.37-7.42(m,2H),7.22-7.33(m,2H),4.00-4.60(m,2H),3.60-3.90(m,2H),2.62-2.81(m,2H),2.00-2.25(m,2H).
实施例12
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3-溴-2-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000057
第一步
(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(800mg,3.10mmol)，(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯12a(729.65mg,3.40mmol)和二异丙基乙胺(1.20g,9.29mmol,1.53mL)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中，加热至110℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯12b(810mg)，产率：59.98％。
MS m/z(ESI):435.9[M+1]
第二步
(1-(3-(3-氨基-2-氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯12b(100mg,181.71μmol)，2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯胺12c(138.21mg,545.13μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基 -1,1'-联苯-2-基)钯(30.42mg,36.34μmol)，磷酸钾(55.43mg,261.15μmol)和2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(33.92mg,72.68μmol)依次加入到11mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝10：1)，加热回流，反应16小时。反应结束后，将反应液中加入10mL水和10mL的乙酸乙酯，分液萃取，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，有机相通过饱和食盐水10mL洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(3-氨基-2-氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯12d(51mg)，产率：58.11％。
MS m/z(ESI):482.9[M+1]
第三步
(1-(3-(3-溴-2-氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(1-(3-(3-氨基-2-氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯12d(51mg,105.60μmol)和溴化亚铜(30.30mg,211.20μmol)加到5mL乙腈中，冰水浴冷却到0-10℃，加入亚硝酸叔丁酯(22.0mg,211.20μmol)，反应2小时，反应结束后，用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，有机相通过饱和食盐水10mL洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(3-溴-2-氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯12e(42mg)，产率：72.73％。
MS m/z(ESI):545.8[M+1]
第四步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3-溴-2-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(3-溴-2-氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯12e(42mg,76.80μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)中，室温反应1小时，减压浓缩，得到粗品6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3-溴-2-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈12f，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):446.0[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3-溴-2-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3-溴-2-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈12f(50mg,81.39μmol)加入到甲醇(1.00mL)、氢氧化钠水溶液(5M,1.00mL)和30％的双氧水(0.5mL)混合溶液中，室温反应3小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3-溴-2-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺12(2.1mg)，产率：4.4％。
MS m/z(ESI):463.8[M+1]
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.11(s,1H),8.01(s,3H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(s,1H), 7.35-7.48(m,1H),7.23-7.35(m,1H),4.30-4.55(m,2H),3.48-3.55(m,2H),1.68-1.79(m,4H),1.41(s,3H).
实施例13～实施例21
参考实施例6第一步至第四步的操作步骤，采用不同的原料，得到实施例13-实施例21化合物。
Figure PCTCN2021071297-appb-000058
Figure PCTCN2021071297-appb-000059
实施例22
2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000060
第一步
2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶22a(1g,5.32mmol)，四三苯基膦钯(614.32mg,531.88μmol)和氰化锌(1.25g,10.64mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，氩气置换 后加热110℃搅拌4小时。反应结束后，滤液减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈22b(850mg)，产率：89.49％。
MS m/z(ESI):178.9[M+1]
第二步
5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈22b(850mg,4.76mmol)加到乙腈(20mL)溶液中，加入溴代丁二酰亚胺(1270mg,7.14mmol)，加热回流搅拌2小时。反应结束后，滤液减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈22c(1.05g)，产率：85.68％。
MS m/z(ESI):256.8[M+1]
第三步
(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，于100mL的单口圆底烧瓶中加入(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯12a(174.79mg,815.61μmol)，N-甲基吡咯烷酮(10mL)和N,N-二异丙基乙胺(301.17mg,2.33mmol,384.83μL)并摇晃1分钟后，加入5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈22c(200mg,776.78μmol)，加热到110℃，搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22d(186mg)，产率：55.01％。
MS m/z(ESI):434.9[M+1]
第四步
(1-(5-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，向50mL的两口圆底烧瓶中加入(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22d(186mg,427.27μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(326.13mg,1.71mmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(79.75mg,170.91μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(71.56mg,85.45μmol)和磷酸钾(272.09mg,1.28mmol)，最后加入11mL的混合溶液(1,4-二氧六环:水＝10:1)，氩气置换三次，100℃加热反应16小时。反应结束后，减压浓缩后加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相后用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22e(159mg)，产率：74.22％。
MS m/z(ESI):500.9[M+1]
第五步
2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将(1-(5-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22e(159mg,317.11μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)溶液中，室温搅拌1小时，反应结束后，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈22f，未经纯化，直接投下一步反应。
MS m/z(ESI):400.7[M+1]
第六步
2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈22f(160mg,310.49μmol)溶于甲醇(1.00mL)，氢氧化钠水溶液(5M，1.00mL)和30％的双氧水(0.5mL)中，反应液室温搅拌0.5小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺22(48mg)，产率：28.99％。
MS m/z(ESI):418.8[M+1]
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.0-7.80(m,4H),7.54-7.48(m,1H),7.48-7.43(m,1H),7.33-7.28(m,3H),4.45-4.35(m,2H),3.45-3.35(m,2H),1.78-1.65(m,4H),1.41(s,3H).
实施例23
6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
Figure PCTCN2021071297-appb-000061
第一步
4-(2-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯
冰水浴下，将氢化钠(2.40g,60mmol,60％)加入到2-(2-氯苯基)乙腈23a(1.52g,10mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯23b(2.66g,11mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中，搅拌1小时，加热至60℃搅拌过夜。反应完全后，降至室温，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗产品，粗品用100mL混合溶剂打浆(乙酸乙酯:石油醚＝10:90)，过滤，干燥得到产物4-(2-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯23c(2.1g)，产率：65.5％。
MS m/z(ESI):338.1[M+18]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(735mg,13.1mmol)和4-(2-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯23c(2.1g,6.55mmol)加入到二甲亚砜(15mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,6.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，向反应液中加入50mL水，析出黄色固体，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥得到产物4-氨基甲酰基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯23d(1.9g)，产率：85.7％。
MS m/z(ESI):282.9[M-55]
第三步
4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氨基甲酰基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯23d(1.9g,5.61mmol)加入到氢氧化钾(1.42g,25.23mmol)的乙腈(10mL)和水(40mL)混合溶液中，分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(882mg,3.08mmol)，室温下搅拌1小时。反应完全后，加入亚硫酸钠(70.6mg,0.56mmol)，搅拌15分钟，加入乙酸乙酯(20mL)和磷酸钾(1.31g,6.17mmol)，分液，水相用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水溶液洗涤，干燥，浓缩得4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯23e(1.62g)，产率：93.0％。
MS m/z(ESI):311.0[M+1]
第四步
4-(2-氯苯基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1mL)滴加到4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯23e(200mg,643μmol)的3mL二氯甲烷溶液中，室温搅拌1小时，减压浓缩，得到4-(2-氯苯基)哌啶-4-胺23f，未经纯化，直接投下一步反应。
MS m/z(ESI):211.0[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将二异丙基乙基胺(91.4mg,707μmol)和上述粗品4-(2-氯苯基)哌啶-4-胺23f加入到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580μmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)溶液 中，加热至100℃搅拌1小时。反应完全后，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到产物6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈23g(200mg)，产率：65.4％。
MS m/z(ESI):414.8[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈23g(200mg,462μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(353mg,1.85mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(77mg,92μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(86mg,185μmol)和磷酸钾(294mg,1.39mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈23h(90mg)，产率：39.0％。
MS m/z(ESI):480.8[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
将6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈23h(90mg,180μmol)加入到3mL浓盐酸中，加热回流1小时。反应完全后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸23(12mg)，产率：10％。
MS m/z(ESI):516.8[M+1]
1HNMR(400MHz,CD 3OD)δ7.72-7.82(m 1H),7.57-7.67(m,2H),7.46-7.56(m,2H),7.33-7.45(m,2H),4.21-4.52(m,2H),3.78-4.03(m,2H),2.87-3.04(m,2H),2.23-2.39(m,2H).
实施例24
6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
Figure PCTCN2021071297-appb-000062
Figure PCTCN2021071297-appb-000063
第一步
4-(4-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯
冰水浴下，将氢化钠(2.41g,60.2mmol,60％)加入到2-(4-氯苯基)乙腈24a(1.52g,10mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯23b(2.67g,11mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中，搅拌1小时，加热至60℃搅拌过夜。反应完全后，降至室温，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物4-(4-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯24b(2.4g)，产率：74.6％。
MS m/z(ESI):338.1[M+18]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(840mg,15.0mmol)和4-(4-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯24b(2.40g,7.48mmol)加入到二甲亚砜(15mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,6.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，向反应液中加入50mL水，析出黄色固体，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥得到产物4-氨基甲酰基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯24c(2.2g)，产率：86.8％。
MS m/z(ESI):283.1[M-55]
第三步
4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氨基甲酰基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯24c(1.0g,2.95mmol)加入到氢氧化钾(745mg,13.3mmol)的乙腈(2.5mL)和水(10mL)混合溶液中，分批加入二溴海因(464mg,1.62mmol)，室温下搅拌1小时。反应完全后，加入亚硫酸钠(37.8mg,0.3mmol)，搅拌15分钟，加入乙酸乙酯(5mL)和磷酸钾(688mg,3.25mmol)，分液，水相用乙酸乙酯(5mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水溶液洗涤，干燥，浓缩得4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯24d(0.85g)，产率：92.7％。
MS m/z(ESI):237.9[M-72]
第四步
4-(4-氯苯基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1mL)滴加到4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯24d(200mg,643μmol)的3mL二氯甲烷溶液中，室温搅拌1小时，减压浓缩，得到4-(4-氯苯基)哌啶-4-胺24e，未经纯化，直接投下一步反应。
MS m/z(ESI):211.0[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将二异丙基乙基胺(91.4mg,707μmol)和上述粗品4-(4-氯苯基)哌啶-4-胺24e加入到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580μmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)溶液中，加热至100℃搅拌1小时。反应完全后，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到产物6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈24f(225mg)，产率：73.5％。
MS m/z(ESI):414.8[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈24f(225mg,519.99μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(396.89mg,2.08mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(87.08mg,104.00μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(97.06mg,207.99μmol)和磷酸钾(331mg,1.56mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈24g(95mg)，产率：36.6％。
MS m/z(ESI):480.8[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
将6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈24g(95mg,190μmol)加入到3mL浓盐酸中，加热回流1小时。反应完全后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸24(15mg)，产率：8.8％。
MS m/z(ESI):516.8[M+1]
实施例25
6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
Figure PCTCN2021071297-appb-000064
第一步
4-(3-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯
冰水浴下，将氢化钠(2.4g,60mmol,60％)加入到2-(3-氯苯基)乙腈25a(1.52g,10mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯23b(2.66g,11mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中，搅拌1小时，加热至60℃搅拌过夜。反应完全后，降至室温，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物4-(3-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯25b(2.19g)，产率：68.3％。
MS m/z(ESI):338.1[M+18]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(770mg,13.7mmol)和4-(3-氯苯基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯25b(2.2g,6.86mmol)加入到二甲亚砜(15mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,6.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，向反应液中加入50mL水，析出黄色固体，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥得到产物4-氨基甲酰基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯25c(2.28g)，产率：98.1％。
MS m/z(ESI):260.9[M+23]
第三步
4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氨基甲酰基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯25c(2.28g,6.73mmol)和双(三氟乙酰氧基)碘苯(3.18g,7.40mmol)加入到氢氧化钾(566mg,10mmol)的乙腈(15mL)和水(15mL)混合溶液中，室温反应过夜。反应完全后，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯25d(0.9g)，产率：43.1％。
MS m/z(ESI):237.9[M-72]
第四步
4-(3-氯苯基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1mL)滴加到4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯25d(200mg,643μmol)的3mL二氯甲烷溶液中，室温搅拌1小时，减压浓缩，得到4-(3-氯苯基)哌啶-4-胺25e，未经纯化，直接投下一步反应。
MS m/z(ESI):211.0[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将二异丙基乙基胺(91.4mg,707μmol)和上述粗品4-(3-氯苯基)哌啶-4-胺25e加入到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580μmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)溶液中，加热至100℃搅拌1小时。反应完全后，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到产物6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈25f(230mg)，产率：75.2％。
MS m/z(ESI):414.8[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈25f(100mg,231μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(176mg,924μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(38.7mg,46.2μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(43mg,92μmol)和磷酸钾(147mg,693μmol加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈25g(75mg)，产率：65.1％。
MS m/z(ESI):480.8[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
将6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈25g (75mg,150μmol)加入到3mL浓盐酸中，加热回流1小时。反应完全后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸25(7mg)，产率：4.7％。
MS m/z(ESI):516.8[M+1]
实施例26
6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000065
第一步
1-苄基-4-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)哌啶-4-醇
将5-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑26a(321.16mg,1.70mmol,根据专利WO 2017060326自制)加到5mL的四氢呋喃中，冷却到-78℃，滴加正丁基锂(2.5M,783.22μL)，在-78℃搅拌0.5小时，加入1-苄基哌啶-4-酮26b(321.16mg,1.70mmol)，在-78℃搅拌1小时，升温到-20℃，反应结束后，加入饱和氯化铵溶液猝灭反应，乙酸乙酯(10mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：体系A)纯化，得到1-苄基-4-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)哌啶-4-醇26c(350mg)，产率：68.49％。
MS m/z(ESI):392.1[M+1]
第二步
N-(1-苄基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-基)甲酰胺
将1-苄基-4-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)哌啶-4-醇26c(1g,2.55mmol)加到10mL的三氟乙酸中，冷却到-15℃，依次加入三甲基氰硅烷(1.01g,10.22mmol,1.28mL)和2mL浓硫酸，慢慢升到室温，搅拌过夜。反应结束后，将反应液倒入冰水中用6N的氢氧化钠溶液调节pH为7-8，二氯甲烷(30mL×3)萃取，干燥过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：体系B)纯化，得到N-(1-苄基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-基)甲酰胺26d(530mg)，产率：62.05％。
MS m/z(ESI):335.1[M+1]
第三步
1-苄基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-胺
将N-(1-苄基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-基)甲酰胺26d(530mg,1.58mmol)和1mL的浓盐酸加到2mL的甲醇中，加热到80℃，反应2小时，冷至室温后，减压浓缩，得到1-苄基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-胺26e(450mg)，产率：92.67％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):307.0[M+1]
第四步
4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-胺
将1-苄基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-胺26e(500mg,1.63mmol)和氢氧化钯/碳(180mg,1.63mmol)加到15mL甲醇中，抽真空置换三次，室温搅拌过夜，反应结束后，反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-胺26f(200mg)，产率：56.67％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):200.0[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-4-胺26f(80.33mg,371.43μmol)、3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(80mg,309.52μmol)和N,N-二异丙基乙胺(120.01mg,928.57μmol)加到2mL的N,N-二甲基乙酰胺，加热到95℃，反应2小时，反应结束后，冷却到室温，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：体系B)纯化，得到6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈26g(120mg)，产率：88.46％。
MS m/z(ESI):421.1[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈26g(120mg,273.80μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(208.98mg,1.10mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(45.85mg,54.76μmol)、2-二环己基磷 -2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(51.04mg,109.52μmol)和磷酸钾(174.13mg,821.39μmol)依次加入到5.5mL的混合溶液中(1,4-二氧六环:水＝10:1)，氩气置换三次，升温到100℃，搅拌过夜，反应结束后，冷到室温，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：体系B)纯化，得到6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈26h(80mg)，产率：57.93％。
MS m/z(ESI):487.0[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈26h(80mg,158.61μmol)和氢氧化钾(17.80mg,317.23μmol)加到2mL的二甲基亚砜中，冰水浴下加入1mL的双氧水，升到室温，搅拌3小时。反应结束后，加入少量三氟乙酸调节pH值为7-8，减压浓缩，得到的残留物制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到产物6-(4-氨基-4-(1H-吲唑-5-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺26(19mg)，产率：17.84％。
MS m/z(ESI):505.1[M-16]
实施例27
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000066
第一步
3-碘-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1c(290mg,1.62mmol)和碘代丁二酰亚胺(726.69mg,3.23mmol)加到10mL的二氯乙烷中，加热到80℃，反应4小时，反应结束后，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：体系A)纯化，得到3-碘-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27a(250mg)，产率：50.68％。
第二步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将4-苯基哌啶-4-胺27b(144.25mg,818.43μmol)、3-碘-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27a(250mg,818.43μmol)和N,N-二异丙基乙胺(317.32mg,2.46mmol)加到3mL的N,N-二甲基乙酰胺中，加热到90℃，搅拌2小时，反应结束后，冷却到室温，倒入冰水中有固体析出，搅拌10分钟，收集固体，真空干燥，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27c(300mg)，产率：82.32％。
MS m/z(ESI):428.8[M-16]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27c(150mg,336.88μmol)、(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硼酸27d(157.82mg,842.21μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(56.42mg,67.38μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(62.79mg,134.75μmol)和磷酸钾(214.26mg,1.01mmol)依次加入到3.3mL的混合溶液中(1,4-二氧六环:水＝10:1)，氩气置换三次，加热到100℃，反应2小时，反应结束后，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：体系B)纯化，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27e(40mg)，产率：25.76％。
MS m/z(ESI):443.8[M-16]
第四步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-羟基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27e(40mg,86.78μmol)和2mL的4M的盐酸二氧六环溶液加到1mL的二氯甲烷中，加热到50℃，搅拌4小时，反应完全后，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-羟基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27f(30mg)，产率：77.35％。
MS m/z(ESI):429.9[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-羟基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27f(30mg,67.13μmol)加到1.5mL的三氯氧磷中，加热到110℃，搅拌过夜，反应结束后，冷却至室温，将反应夜倒入冰水中，搅拌0.5小时，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27g(30mg)，产率：96.04％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):448.1[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27g(30mg,64.47μmol)、氢氧化钠(5.16mg,128.94μmol)和0.5mL的双氧水加到1mL的二甲基亚砜中，室温搅拌1小时，反应结束后，加入少量的三氟乙酸调节pH为7-8，减压浓缩，得到的残留物制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到产物6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺27(4.1mg)，产率：10.01％。MS m/z(ESI):482.8[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.36(d,J＝4.9Hz,1H),7.72(d,J＝7.7Hz,2H),7.58(t,J＝7.6Hz,2H),7.50(s,1H),7.44(d,J＝4.8Hz,1H),4.69(d,J＝14.2Hz,2H),3.47(t,J＝12.2Hz,2H),2.77(d,J＝13.8Hz,2H),2.15(ddd,J＝14.2,10.9,3.8Hz,2H)。
实施例28
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000067
第一步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27e溶在甲醇(10mL)中，依次加入氢氧化钠(99.82mg,2.50mmol)和双氧水(1mL)，室温 再搅拌2小时。反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备分离得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺28(32mg)，产率：10.38％。
MS m/z(ESI):478.9[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.06-8.12(m,1H),7.72(d,J＝7.8Hz,2H),7.57(t,J＝7.6Hz,2H),7.51(d,J＝7.2Hz,1H),6.99-7.05(m,1H),4.68(d,J＝14.2Hz,2H),4.01(d,J＝1.3Hz,3H),3.46(t,J＝12.2Hz,2H),2.77(d,J＝14.0Hz,2H),2.08-2.23(m,2H).
实施例29
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-氯-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000068
第一步
(1-(3-(2-氯-3-甲基苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯6b(100mg,200.65μmol)、(2-氯-3-甲基苯基)硼酸29a(136.77mg,802.61μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(33.60mg,40.13μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(37.40mg,80.26μmol)和磷酸钾(212.69mg,1.00mmol)依次加到11mL的混合溶液中(1,4-二氧六环：水＝10：1)，加热至130℃，反应3小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(2-氯-3-甲基苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯29b(100mg)，产率：91.61％。
MS m/z(ESI):543.9[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-氯-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(2-氯-3-甲基苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲 酸叔丁酯29b(100mg,183.81μmol)和三氟乙酸(0.5mL)加到二氯甲烷中(1.5mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-氯-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈29c(81mg)，产率：99.27％，产物未经纯化，直接投入下一步反应。
MS m/z(ESI):426.9[M-16]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-氯-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-氯-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈29c(81mg,182.46μmol)和氢氧化钠(43.79mg,1.09mmol)加到甲醇(2mL)中，加入双氧水(0.2mL)，室温搅拌2小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备分离得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-氯-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺29(50mg)，产率：47.37％。
MS m/z(ESI):462.2[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.72(d,J＝7.8Hz,2H),7.57(t,J＝7.6Hz,2H),7.50(d,J＝7.3Hz,1H),7.34(d,J＝7.1Hz,1H),7.21-7.30(m,2H),4.67(d,J＝14.4Hz,2H),3.45(t,J＝12.0Hz,2H),2.76(d,J＝13.9Hz,2H),2.40(s,3H),2.16(td,J＝10.2,5.0Hz,2H).
实施例30
1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000069
第一步
(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯6c(200mg,354.32μmol)，叠氮化钠(230.31mg,3.54mmol)，氯化铵(191.33mg,3.54 mmol)加到N,N-二甲基甲酰胺中(3mL)。加热到130℃，反应6小时。反应完成后，冷到室温，再向反应液加入适量的水淬灭反应，有固体析出，过滤干燥，得到(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯30a(150mg)，产率：69.69％，产物未经纯化，直接投入下一步反应。
MS m/z(ESI):607.2[M+1]
第二步
1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-胺
将(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯30a(150mg,246.92μmol)和三氟乙酸(0.5mL)加到二氯甲烷(2mL)中，室温搅拌2小时。反应结束后，减压浓缩，制备分离得到1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-(1H-四唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-胺30(24mg)，产率：15.33％。
MS m/z(ESI):507.1[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.73(d,J＝7.9Hz,2H),7.59(q,J＝8.1,7.6Hz,3H),7.51(d,J＝7.3Hz,1H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),4.73(d,J＝14.1Hz,2H),3.49(t,J＝12.1Hz,2H),2.78(d,J＝14.0Hz,2H),2.18(td,J＝11.0,10.6,5.5Hz,2H).
实施例32
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000070
Figure PCTCN2021071297-appb-000071
第一步
1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-腈
在冰水浴下，将氢化钠(3.55g,88.80mmol)加入到2-(2-氟苯基)乙腈32a(2g,14.80mmol)和N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺32b(3.78g,16.28mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，冰浴下搅拌1小时，加热到60℃，搅拌16小时。反应结束后，将反应液倒入100mL的冰水中，搅拌0.5小时，收集固体，再用石油醚打浆，过滤，干燥得到固体，母液用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-腈32c(4.1g)，产率：94.11％。
MS m/z(ESI):295.0[M+1]
第二步
1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(1.56g,27.86mmol)和1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-腈32c(4.1g,13.93mmol)加入二甲基亚砜(10mL)溶液中，将双氧水(10mL)慢慢滴加到反应液中，滴加完毕后，室温搅拌5小时。反应结束后，向反应液中加入水(50mL),析出黄色固体，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥，得到1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-甲酰胺32d(3.1g)，产率：71.25％。MS m/z(ESI):313.1[M+1]
第三步
1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-胺
将氢氧化钾(2.51g,44.66mmol)加入到1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-甲酰胺32d(3.1g,9.92mmol)的乙腈(20mL)和水(30mL)的混合溶液中，水浴下分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(1.56g,5.46mmol)，室温搅拌1小时。反应结束后，加入亚硫酸钠(125.04mg,992.38μmol)，室温搅拌15分钟，加入乙酸乙酯(50mL)，磷酸钾(1.32g,10.92mmol)，分液，水相用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，用氯化钠溶液洗涤，干燥，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-胺32e(2.4g)，产率：85.05％。
MS m/z(ESI):285.1[M+1]
第四步
(1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-胺32e(2.4g,8.44mmol)，氢氧化钠(405.11mg,10.13mmol)，二叔丁基二碳酸酯(3.68g,16.88mmol)加到水(5mL)和1,4-二氧六环(10mL)混合溶液中，室温搅拌3小时。反应结束后，过滤，滤液用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32f(1.9g)，产率：58.55％。
MS m/z(ESI):385.1[M+1]
第五步
(4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-苄基-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32f(900mg,2.34mmol)和10％钯碳(450mg)加到甲醇(30mL)中，氢气常温常压氢化18小时。反应结束后，硅藻土过滤除去Pd/C，用甲醇淋洗，减压浓缩，得到(4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32g(689mg)，产率：99.99％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):295.0[M+1]
第六步
(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将N,N-二异丙基乙胺(737.60mg,5.71mmol,943.22μL)、(4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32g(560mg,1.90mmol)和3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(491.70mg,1.90mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)溶液中，加热100℃，搅拌1小时。反应结束后，混合液倒入100mL的水中，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32h(600mg)，产率：61.08％。
MS m/z(ESI):516.1[M+1]
第七步
(1-(3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32h(250mg,484.15μmol)，(3-氯-2-甲氧基-4-吡啶基)硼酸27d(272.17mg,1.45mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(162.17mg,193.66μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(180.49mg,387.32μmol)，磷酸钾(513.20mg,2.42mmol)加到1,4-二氧六环(6mL)和水(0.6mL)的混合溶液中，氩气置换三次，加热至130℃，反应4.5小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32i(160mg)，产率：57.07％。
MS m/z(ESI):578.9[M+1]
第八步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32i(30mg,51.81μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈32j，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):462.1[M-16]
第九步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将上述粗品6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈32j溶在甲醇(3mL)中，依次加入氢氧化钠(10.36mg,258.92μmol)和双氧水(0.3mL)，室温再搅拌2小时。反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺32(7mg)，产率：27.2％。
MS m/z(ESI):497.2[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.01(d,J＝5.0Hz,1H),7.61(s,1H),7.47(dd,J＝5.9,2.0Hz,1H),7.17-7.32(m,2H),6.94(d,J＝5.1Hz,1H),4.35-4.45(m,2H),3.92(s,3H),3.64(ddd,J＝13.6,9.7,3.1Hz,2H),2.64-2.73(m,2H),2.06-2.15(m,2H).
实施例33
6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000072
Figure PCTCN2021071297-appb-000073
第一步
4-氰基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将1-氟-2-(三氟甲基)苯基33a(1.56g,9.51mmol)、4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2g,9.51mmol)和1M双(三甲基硅烷基)氨基钾的四氢呋喃溶液(2.85g,14.27mmol)加到20mL甲苯中，加热至70℃，反应过夜。反应结束后，反应液中加入20mL水和乙酸乙酯(20mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氰基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33b(410mg)，产率：12.16％。
MS m/z(ESI):255.1[M-99]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(129.52mg,2.31mmol)和4-氰基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33b(409mg,1.15mmol)加入到二甲基亚砜(2mL)中，水浴条件下缓慢滴加双氧水(0.8mL)，升至室温，反应30分钟。反应结束后，反应液加入100mL水，析出大量固体，过滤除去液体，得到4-氨基甲酰基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33c(400mg)，产率：93.07％。
MS m/z(ESI):317.1[M-55]
第三步
4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(13.56mg,241.69μmol)和4-氨基甲酰基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33c(20mg,53.71μmol)加到乙腈(5mL)和水(5mL)的混合溶液中，在水浴下分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(8.45mg,29.54μmol)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33d(18.5mg)，产率：100％。
MS m/z(ESI):289.1[M-55]
第四步
4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33d(199mg,577.87μmol)和0.5mL的三氟乙酸加入到2mL的二氯甲烷溶液中，继续反应1小时。反应结束后，减压浓缩， 得到4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-胺33e(141mg)，产率：99.9％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):228.1[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(136mg,526.19μmol)加到N-甲基吡咯烷酮(2mL)中，加入N,N-二甲基乙酰胺(203.47mg,1.57mmol)和4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-胺33e(141mg,577.26μmol)，加热至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33f(190mg)，产率：77.65％。
MS m/z(ESI):449.0[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈将6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33f(190mg,407.50μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(311.04mg,1.63mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(68.25mg,81.50μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(76.06mg,163.00μmol)和磷酸钾(259.62mg,1.22mmol)加入到1,4-二氧六环(8mL)和水(0.8mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应16小时。反应完全后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33g(75mg)，产率：34.57％。
MS m/z(ESI):515.0[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠(0.5mL)加入到6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33g(55mg,103.32μmol)的甲醇(1mL)溶液中，随后加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺33(2mg)，产率：3.5％。
MS m/z(ESI):550.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.58(s,1H),8.48(s,2H),8.14(s,1H),7.97(t,J＝8.1Hz,2H),7.85(t,J＝7.7Hz,1H),7.73(t,J＝7.7Hz,1H),7.61-7.68(m,2H),7.40(d,J＝4.3Hz, 2H),4.24(s,2H),3.75(s,2H),2.67(s,2H),2.22(s,2H).
实施例34
6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸
Figure PCTCN2021071297-appb-000074
将6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33g(20mg,37.57μmol)加到浓盐酸(0.7mL)中，密封，加热至100℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸34(3mg)，产率：14.4％。
MS m/z(ESI):551.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.67(s,1H),8.50(s,2H),7.97(d,J＝7.9Hz,2H),7.82(s,1H),7.71(dd,J＝6.3,3.4Hz,3H),7.45(q,J＝3.4,2.6Hz,2H),4.15(s,2H),3.73(s,2H),2.67(s,2H),2.20(s,2H).
实施例35
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000075
Figure PCTCN2021071297-appb-000076
第一步
4-氰基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐35a(1.06g,4.19mmol)、4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(800mg,3.80mmol)和N,N-二异丙基乙胺(639.22mg,4.95mmol)加到甲苯(2mL)中，室温搅拌15分钟，冷却至0℃，逐滴加入1M双(三甲基硅烷基)氨基钾的四氢呋喃溶液(834.83mg,4.19mmol)，后升至室温反应16小时。反应结束后，加入20mL饱和氯化钠溶液，以乙酸乙酯(20mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氰基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯35b(630mg)，产率：54.94％。
MS m/z(ESI):302.0[M+1]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(234.58mg,4.18mmol)、4-氰基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯35b(630mg,2.09mmol)加入到二甲基亚砜(2.3mL)中，水浴条件下缓慢滴加双氧水(1mL)，升至室温，反应30分钟。反应结束后，加入100mL水，以乙酸乙酯(20mL×2)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯35c(667mg)，产率：99.90％，未经纯化，直接进行下一步反应。MS m/z(ESI):320.0[M+1]
第三步
4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(527.29mg,9.40mmol)和4-氨基甲酰基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯35c(667mg,2.09mmol)加到乙腈(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，在水浴下分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(328.40mg,1.15mmol)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯35d(500mg)，产率：82.17％。
MS m/z(ESI):292.2[M+1]
第四步
4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯35d(200mg,686.37μmol)和0.5mL的三氟乙酸加入到2mL的二氯甲烷中，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到4-(吡啶 -4-基甲基)哌啶-4-胺35e(131mg)，产率：99.78％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):192.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(147.51mg,570.74μmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(221.29mg,1.71mmol)，4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-4-胺35e(131mg,684.89μmol)，加热至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈35f(120mg)，产率：50.88％。
MS m/z(ESI):413.1[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈35f(70.17mg,169.79μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(129.59mg,679.14μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(28.43mg,33.96μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(31.69mg,67.91μmol)和磷酸钾(108.17mg,509.36μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应16小时。反应完全后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈35g(15mg)，产率：18.43％。
MS m/z(ESI):479.1[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加入到6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈35g(17.04mg,35.54μmol)的甲醇(1mL)溶液中，随后加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺35(1mg)，产率：5.66％。MS m/z(ESI):497.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.57(s,1H),8.63(d,J＝4.9Hz,1H),8.12(s,1H),7.99(s,1H),7.66(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝4.8Hz,2H),7.21(s,1H),6.66(s,1H),5.32(s,2H),1.92-2.11(m,4H),1.79(d,J＝30.8Hz,4H),1.45(s,2H).
实施例36
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000077
第一步
4-氰基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将3-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐36a(1.98g,7.85mmol)、4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g,7.13mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.20g,9.27mmol)加到4mL的甲苯中，室温搅拌15分钟，冷却至0℃，逐滴加入1M双(三甲基硅烷基)氨基钾的四氢呋喃溶液(1.57g,7.85mmol)，后升至室温反应16小时。反应结束后，加入20mL饱和氯化钠溶液，以乙酸乙酯(20mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氰基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯36b(1.18g)，产率：54.89％。
MS m/z(ESI):302.0[M+1]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(439.37mg,7.83mmol)、4-氰基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯36b(1.18g,3.92mmol)加入到二甲基亚砜(6.81mL)中，水浴条件下缓慢滴加双氧水(2.7mL)，升至室温，反应30分钟。反应结束后，加入100mL水，以乙酸乙酯(20mL×2)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯36c(1.25g)，产率：100％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):320.0[M+1]
第三步
4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(988.17mg,17.61mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯36c(1.25g,3.91mmol)的乙腈(3mL)和水(3mL)的混合溶液中，在水浴下分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(615.44mg,2.15mmol)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯36d(700mg)，产率：61.38％。
MS m/z(ESI):292.2[M+1]
第四步
4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯36d(200mg,686.37μmol)和0.5mL的三氟乙酸加到2mL的二氯甲烷中，反应1小时。反应结束后，直接减压浓缩，得到4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-4-胺36e(131mg)，产率：99.78％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):192.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(147.51mg,570.74μmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(221.29mg,1.71mmol)，4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-4-胺36e(131.00mg,684.89μmol)，加热至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈36f(80mg)，产率：33.92％。
MS m/z(ESI):413.1[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈36f(80.19mg,194.04μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(148.11mg,776.16μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(32.50mg,38.81μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(36.22mg,77.62μmol)和磷酸钾(123.62mg,582.12μmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应16小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈36g(12mg)，产率：12.90％。
MS m/z(ESI):479.1[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加入到6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3- 二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈36g(11.02mg,22.99μmol)的甲醇(1mL)溶液中，随后加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺36(1mg)，产率：8.74％。MS m/z(ESI):497.1[M+1]
实施例37
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000078
第一步
4-氰基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-(溴甲基)吡啶氢溴酸盐37a(2.65g,10.46mmol)、4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2g,9.51mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.60g,12.36mmol)加到2mL的甲苯中，室温搅拌15分钟，冷却至0℃，逐滴加入1M双(三甲基硅烷基)氨基钾的四氢呋喃溶液(2.09g,10.46mmol)，后升至室温反应1小时。反应结束后，加入20mL饱和氯化钠溶液，以乙酸乙酯(20mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氰基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯37b(1.4g)，产率：48.84％。
MS m/z(ESI):302.0[M+1]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(703.74mg,12.54mmol)、4-氰基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯37b (1.89g,6.27mmol)加入到二甲基亚砜(10.9mL)中，水浴条件下缓慢滴加双氧水(4.3mL)，升至室温，反应30分钟。反应结束后，加入100mL水，以乙酸乙酯(20mL×2)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯37c(2g)，产率：99.85％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):320.0[M+1]
第三步
4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(1.58g,28.18mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯37c(2g,6.26mmol)的乙腈(6mL)和水(6mL)的混合溶液中，在水浴下分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(984.70mg,3.44mmol)，室温搅拌1小时。减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯37d(1.3g)，产率：71.25％。
MS m/z(ESI):292.2[M+1]
第四步
4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯37d(219mg,751.58μmol)和0.5mL的三氟乙酸加到2mL的二氯甲烷中，反应1小时。反应结束后，直接减压浓缩，得到4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺37e(143.76mg)，产率：100.00％，未经纯化，直接进行下一步反应。MS m/z(ESI):192.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(161.03mg,623.02μmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，随后加入N,N-二异丙基乙胺(241.56mg,1.87mmol)，4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-胺37e(143.0mg,747.63μmol)，加热至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈37f(200mg)，产率：77.68％。
MS m/z(ESI):413.1[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈37f(200.48mg,485.10μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(370.27mg,1.94mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(81.24mg,97.02μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(90.54mg,194.04μmol)和磷酸钾(309.06mg,1.46mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应16小 时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈37g(30mg)，产率：12.90％。
MS m/z(ESI):479.1[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加入到6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈37g(30mg,62.58μmol)的甲醇(1mL)溶液中，随后加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺37(1mg)，产率：3.21％。
MS m/z(ESI):497.1[M+1]
实施例38
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000079
第一步
4-氰基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
氩气下，将氢化钠(1.39g,53.45mmol)加入2-(吡啶-2-基)乙腈38a(1.80g,15.27mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液中，冷却至0℃，分批加入双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(4.07g,16.80mmol)，继续搅拌1小时，加热至60℃，反应16小时。反应结束后，冷却至室温，加入40mL饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氰基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯38b(3.27g)，产 率：74.51％。
MS m/z(ESI):231.9[M-55]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氰基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯38b(3.27g,11.38mmol)和氢氧化钾(1.28g,22.76mmol)加入到二甲基亚砜(8.12mL)中，缓慢滴加双氧水(8.12mL)，升至室温，反应30分钟。反应液加入100mL水，析出大量固体，过滤，得到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯38c(1.3g)，产率：37.41％。
MS m/z(ESI):306.2[M+1]
第三步
4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(1.07g,19.16mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯38c(1.3g,4.26mmol)的乙腈(3.4mL)和水(13.7mL)的混合溶液中，在水浴下分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(669.46mg,2.34mmol)，室温搅拌16小时。反应结束后，加入亚硫酸钠室温搅拌15分钟，加入乙酸乙酯50mL，再加入磷酸钾，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，得到4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯38d(1.18g)，产率：100％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):278.1[M+1]
第四步
4-(吡啶-2-基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯38d(180mg,648.97μmol)加入到二氯甲烷(4mL)中，随后加入三氟乙酸(1mL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到4-(吡啶-2-基)哌啶-4-胺38e(115.03mg)，产率：100％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):178.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(130mg,502.97μmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中，随后加入N,N-二异丙基乙胺(195.01mg,1.51mmol)，4-(吡啶-2-基)哌啶-4-胺38e(89.15mg,502.97μmol)，加热至110℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈38f(150mg)，产率：74.70％。
MS m/z(ESI):398.9[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈38f(150mg, 375.71μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(286.77mg,1.50mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(62.92mg,75.14μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(70.13mg,150.28μmol)和磷酸钾(239.37mg,1.13mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应16小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈38g(26mg)，产率：14.87％。
MS m/z(ESI):464.9[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈38g(26.27mg,55.87μmol)和氢氧化钠(0.5mL)、双氧水(0.5mL)依次加入甲醇(1mL)溶液中，室温搅拌1小时。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺38(5mg)，产率：18.51％。
MS m/z(ESI):482.9[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.75(d,J＝4.8Hz,1H),7.97(t,J＝7.8Hz,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.61(dd,J＝7.4,1.9Hz,1H),7.48(dd,J＝7.6,4.9Hz,1H),7.34-7.44(m,2H),4.21(d,J＝25.2Hz,4H),2.58-2.69(m,2H),2.17(dd,J＝13.9,7.4Hz,2H).
实施例39
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2,3-二氯苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000080
Figure PCTCN2021071297-appb-000081
第一步
螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-酮
将5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯39a(600mg,1.98mmol)加入到二氯甲烷(4mL)中，继续反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-酮39b(401mg)，产率：99.92％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):202.9[M+1]
第二步
3-溴-6-(5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(300mg,1.16mmol)、N,N-二异丙基乙胺(750.05mg,5.80mmol)和螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-酮39b(399.08mg,1.97mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺中(2mL)，加热至90℃，反应1小时。反应完全后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-溴-6-(5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈39c(350mg)，产率：71.08％。MS m/z(ESI):424.0[M+1]
第三步
(R,Z)-N-(1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-亚烷基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-溴-6-(5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈39c(369mg,869.76μmol)、(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(316.25mg,2.61mmol)加入到四氢呋喃(2mL)中，100℃条件下反应16小时。反应结束后，加入水，以乙酸乙酯(30mL×2)萃取，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到(R,Z)-N-(1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-亚烷基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39d(458mg)，产率：99.84％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):527.1[M+1]
第四步
(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将9-硼双环[3.3.1]壬烷(0.5M,5.21mL)加入(R,Z)-N-(1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-亚烷基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39d(458mg,868.35μmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中，室温搅拌2小时。反应结束后，加入50mL水， 乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39e(300mg)，产率：65.25％。
MS m/z(ESI):529.2[M+1]
第五步
(R)-N-((S)-1'-(3-((2,3-二氯苯基)巯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39e(150mg,283.31μmol)、2,3-二氯苯硫醇39f(76.10mg,424.97μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(15.57mg,17.00μmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(16.39mg,28.33μmol)和N,N-二异丙基乙胺(73.23mg,566.62μmol)加入到1,4-二氧六环(4mL)中，氮气置换，加热至100℃，反应3小时。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(3-((2,3-二氯苯基)巯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39g(125mg)，产率：70.30％。
MS m/z(ESI):627.1[M+1]
第六步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2,3-二氯苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(R)-N-((S)-1'-(3-((2,3-二氯苯基)巯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39g(125mg,199.17μmol)的二氯甲烷(4mL)溶液，慢慢滴加到盐酸甲醇溶液中(4M,199.17μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2,3-二氯苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈39h(104mg)，产率：99.76％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):522.8[M+1]
第七步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2,3-二氯苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠溶液(0.25mL)加入到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2,3-二氯苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈39h(104mg,198.69μmol)的甲醇(2mL)溶液中，加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌30分钟。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(S)-6-(5- 氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2,3-二氯苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺39(3mg)，产率：2.13％。
MS m/z(ESI):541.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.34(s,1H),8.54(d,J＝5.0Hz,1H),8.30(s,2H),8.24(s,1H),7.91(d,J＝5.0Hz,1H),7.88(s,1H),7.63(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.44(d,J＝7.6Hz,1H),7.35(dd,J＝7.7,4.9Hz,2H),4.46(d,J＝5.5Hz,1H),3.27(d,J＝16.6Hz,2H),3.07-3.21(m,2H),1.73(d,J＝14.2Hz,2H),1.54(d,J＝13.2Hz,2H).
实施例40
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000082
第一步
(R)-N-((S)-1'-(3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39e(150mg,283.31μmol)、(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硼酸40a(216.35mg,1.13mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(47.45mg,56.66μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(52.88mg,113.32μmol)和磷酸钾(180.41mg,849.93μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)中，氮气置换，加热至100℃，反应7小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺40b(80mg)，产率：47.41％。
MS m/z(ESI):596.2[M+1]
第二步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑 并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(R)-N-((S)-1'-(3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺40b(80mg,134.31μmol)的二氯甲烷(4mL)溶液，慢慢滴加到盐酸甲醇溶液中(4M,134.31μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈40c(66mg)，产率：99.99％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):492.2[M+1]
第三步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠溶液(1.31mL)加入到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈40c(66mg,134.29μmol)的甲醇(952.38μL)溶液中，随后加入双氧水(238.10μL)，室温搅拌30分钟。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺40(10mg)，产率：14.6％。
MS m/z(ESI):510.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.76(d,J＝4.6Hz,1H),8.55(d,J＝4.9Hz,1H),8.28-8.43(m,3H),8.13(s,1H),7.91(t,J＝7.9Hz,2H),7.73(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),7.58(s,1H),7.36(dd,J＝7.6,5.1Hz,1H),4.74(s,2H),4.47(d,J＝5.4Hz,1H),3.26-3.34(m,3H),3.16(d,J＝16.9Hz,1H),1.76(d,J＝13.8Hz,2H),1.57(d,J＝13.3Hz,2H).
实施例41
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000083
Figure PCTCN2021071297-appb-000084
第一步
3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-6-(5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-(5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈39c(150mg,353.56μmol)、3-氯-2-(环丙氧基)吡啶-4-硫醇41a(142.61mg,707.12μmol,根据专利WO2018013597自制)、碘化亚铜(33.67mg,176.78μmol)、铜(22.47mg,353.56μmol)和碳酸钾(146.60mg,1.06mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，氮气置换，加热至130℃，反应17小时。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-6-(5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈41b(60mg)，产率：31.14％。
MS m/z(ESI):545.2[M+1]
第二步
(R,Z)-N-(1'-(3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-亚烷基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-6-(5-氧代-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈41b(60mg,110.09μmol)、(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(40.03mg,330.27μmol)加入到钛酸四乙酯(2.00mL)中，加热至100℃，反应3小时。反应结束后，加入20mL水，以乙酸乙酯(30mL×2)萃取，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到(R,Z)-N-(1'-(3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-亚烷基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺41c(71mg)，产率：99.50％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):648.2[M+1]
第三步
(R)-N-((S)-1'-(3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将9-硼双环[3.3.1]壬烷(0.5M,657.20μL)加入(R,Z)-N-(1'-(3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-亚烷基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺41c(71mg,109.53μmol)的四氢呋喃(1mL)溶液中，室温搅拌2小时。 反应结束后，加入50mL水，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺41d(40mg)，产率：56.16％。
MS m/z(ESI):650.3[M+1]
第四步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(R)-N-((S)-1'-(3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺41d(40mg,61.52μmol)的二氯甲烷(3.94mL)溶液，慢慢滴加到盐酸甲醇溶液(4M,61.52μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈41e(33mg)，产率：98.24％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):546.2[M+1]
第五步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠(0.15mL)加入到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈41e(33mg,60.43μmol)的甲醇(1.5mL)溶液中，随后加入双氧水(0.3mL)，室温搅拌30分钟。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((3-氯-2-环丙氧基吡啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺41(11mg)，产率：32.2％。
MS m/z(ESI):563.9[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.54(d,J＝5.0Hz,1H),8.29(s,2H),8.12(s,1H),7.86-7.97(m,2H),7.81(s,1H),7.35(t,J＝6.3Hz,1H),6.55(d,J＝5.4Hz,1H),4.46(s,1H),4.32(s,1H),3.31(d,J＝13.4Hz,2H),3.25(s,1H),3.14(d,J＝16.9Hz,2H),2.67(s,1H),2.33(s,1H),1.73(d,J＝14.2Hz,2H),1.55(d,J＝12.9Hz,2H),0.67-0.84(m,4H).
实施例42
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸乙酯
Figure PCTCN2021071297-appb-000085
第一步
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸乙酯
将(R)-N-((S)-1'-(4-氰基-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5e(130mg,218.65μmol)加入到浓盐酸(3mL)和乙醇(3mL)中，加热至100℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酸乙酯42(20mg)，产率：17％。
MS m/z(ESI):537.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.29(s,3H),7.72-7.85(m,1H),7.51(d,J＝5.0Hz,3H),7.37(d,J＝4.8Hz,2H),7.33(d,J＝6.6Hz,1H),4.60(d,J＝25.5Hz,2H),4.39(d,J＝6.1Hz,1H),3.91(d,J＝7.3Hz,2H),3.22(d,J＝16.4Hz,1H),3.07(s,1H),1.63-1.83(m,2H),1.56(s,2H),1.24(s,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例43
6-(4-氨基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000086
Figure PCTCN2021071297-appb-000087
第一步
((甲基磺酰基)甲基)锂
将(甲基磺酰基)甲烷43a(300mg,3.19mmol)加入到四氢呋喃(4mL)中，氮气置换，-20℃条件下滴加正丁基锂的正己烷溶液(2.5M,1.66mL)，-20℃继续反应1小时，反应结束后，得到((甲基磺酰基)甲基)锂43b，无需处理进行下一步。
第二步
4-((叔丁基亚磺酰基)氨基)叔丁基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯43c(384mg,1.27mmol，根据WO2007125321专利自制而得)加入到四氢呋喃(3mL)中，-20℃条件下滴加入上述反应体系中，继续反应1小时。反应结束后，滴加饱和氯化铵溶液，反应液以乙酸乙酯(30mL×2)萃取，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-((叔丁基亚磺酰基)氨基)叔丁基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯43d(120mg)，产率：23.83％。
MS m/z(ESI):397.3[M+1]
第三步
2-甲基-N-(4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)丙烷-2-亚磺酰胺
将4-((叔丁基亚磺酰基)氨基)叔丁基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯43d(120mg,302.60μmol)加入到二氯甲烷(2.5mL)中，室温条件下加入三氟乙酸(0.5mL)，反应2小时。反应结束后，减压浓缩，得到2-甲基-N-(4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)丙烷-2-亚磺酰胺43e(89.71mg)，产率：100.00％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):297.2[M+1]
第四步
N-(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(76.67mg,296.63μmol)、2-甲基-N-(4-((甲 基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)丙烷-2-亚磺酰胺43e(87.94mg,296.63μmol)和N,N-二异丙基乙胺(191.68mg,1.48mmol)加入N,N-二甲基乙酰胺(2mL)中，升温至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺43f(70mg)，产率：45.52％。
MS m/z(ESI):518.0[M+1]
第五步
N-(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将N-(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺43f(70mg,135.02μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(103.06mg,540.07μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(22.61mg,27.00μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(25.20mg,54.01μmol)和磷酸钾(86.02mg,405.05μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应16小时。反应完全后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到N-(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺43g(60mg)，产率：76％。
MS m/z(ESI):584.1[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将N-(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺43g(10mg,17.11μmol)加入到二氯甲烷(2mL)中，滴加盐酸甲醇溶液(4M,17.11μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈43h(8.22mg)，产率：100.00％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):479.8[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠溶液(0.15mL)加入到6-(4-氨基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈43h(8.22mg,17.11μmol)的甲醇(1mL)溶液中，加入双氧水(0.3mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-((甲基磺酰基)甲基)哌啶-1- 基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺43(7mg)，产率：82.15％。
MS m/z(ESI):498.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.60(s,1H),8.27(s,2H),8.16(s,1H),7.61-7.73(m,2H),7.40(d,J＝4.9Hz,2H),4.58(s,1H),4.31(s,1H),3.90(s,2H),3.64(s,2H),3.19(s,3H),2.13(d,J＝13.6Hz,2H),1.85(s,2H).
实施例44
6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000088
第一步
4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯
室温下，将4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯44a(19.85g,94.4mmol)，5-氟-2-甲氧基吡啶(3.0g,23.6mmol)和1M双(三甲基硅烷基)氨基钾的四氢呋喃溶液(35.4mL)依次加入到四氢呋喃(40mL)溶液中，氩气保护，100℃搅拌1小时，反应完全后，降至室温，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)，减压浓缩，加入乙酸乙酯(30mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯44b(680mg)，产率：9.1％。
MS m/z(ESI):318.0[M+1]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(240mg,4.3mmol)和4-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯44b(680mg,2.14mmol)加入到二甲基亚砜(2mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,1mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，向反应液中加入50mL水，析出黄色固体，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥得到产物4-氨基甲酰基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯44c(370mg)，产率：51.5％。
MS m/z(ESI):335.9[M+1]
第三步
4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将[双(三氟乙酰氧基)碘]苯(522mg,1.21mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯44c(370mg,1.1mmol)的乙腈(2mL)溶液中，室温下搅拌2小时。反应完全后，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL),用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯44d(170mg)，产率：50.1％。
MS m/z(ESI):307.8[M+1]
第四步
4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1mL)滴加到4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯44d(170mg,553μmol)的3mL二氯甲烷溶液中，室温搅拌1小时，减压浓缩，得到4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-4-胺44e，未经纯化，直接投下一步反应。
MS m/z(ESI):191.2[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将N,N-二异丙基乙胺(225mg,1.74mmol)和上述粗品4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-4-胺44e加入到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580μmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)溶液中，加热至100℃搅拌1小时。反应完全后，反相色谱纯化(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到产物6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈44f(150mg)，两步反应产率：63.2％。
MS m/z(ESI):411.8[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈44f(150mg,349μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(266.7mg,1.4mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(58.5mg,69.9μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(65.2mg,139.8μmol)和磷酸钾(222.5mg,1.05mmol)加入到1,4-二 氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈44g(30mg)，产率：17.3％。
MS m/z(ESI):477.8[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(6.8mg,121μmol)和6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈44g(30mg,61μmol)加入到二甲基亚砜(1mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,0.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节pH至3-4，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺44(5mg)，产率：16％。
MS m/z(ESI):512.8[M+1]
实施例45
6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000089
第一步
4-(6-氯吡啶-3-基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯
冰水浴下，将氢化钠(3.6g,90.0mmol,60％)加入到2-(6-氯吡啶-3-基)乙腈45a(2.29g,15mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.99g,16.5mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中，搅拌1小时，加热至60℃搅拌过夜。反应完全后，降至室温，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物4-(6-氯吡啶-3-基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯45b(0.9g)，产率：18.7％。
MS m/z(ESI):322.0[M+1]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(314mg,5.6mmol)和4-(6-氯吡啶-3-基)-4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯45b(0.9g,2.8mmol)加入到二甲基亚砜(4mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,2mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，向反应液中加入50mL水，析出黄色固体，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥得到产物4-氨基甲酰基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯45c(0.9g)，产率：94.7％。
MS m/z(ESI):340.0[M+1]
第三步
4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将[双(三氟乙酰氧基)碘]苯(1.25g,2.91mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯45c(0.9g,2.65mmol)的乙腈(10mL)溶液中，室温下搅拌2小时。反应完全后，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL),乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯45d(0.4g)，产率：48.4％。
MS m/z(ESI):311.9[M+1]
第四步
4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1mL)滴加到4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯45d(300mg,962μmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，室温搅拌1小时，减压浓缩，得到4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-4-胺45e，未经纯化，直接投下一步反应。
MS m/z(ESI):212.0[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将N,N-二异丙基乙胺(300mg,2.32mmol)和上述粗品4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-4-胺45e加入到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(200mg,774μmol)的N-甲基吡咯烷酮(5 mL)溶液中，加热至100℃搅拌1小时。反应完全后，C 18反相色谱柱纯化(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈45f(280mg)，产率：83.4％。
MS m/z(ESI):415.8[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈45f(280mg,646μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(493mg,2.58mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(108mg,129μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(121mg,258μmol)和磷酸钾(411mg,1.94mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈45g(120mg)，产率：37.2％。
MS m/z(ESI):481.8[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(8.1mg,144μmol)和6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈45g(36mg,72μmol)加入到二甲基亚砜(1mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,0.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节pH至3-4，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(6-氯吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺45(12mg)，产率：32％。
MS m/z(ESI):516.8[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.76(d,J＝4.0Hz,1H),8.54(br,3H),8.09-8.20(m,2H),7.62-7.76(m,3H),7.35-7.44(m,2H),4.11-4.67(m,2H),3.40-3.70(m,2H),2.55-2.72(m,2H),2.02-2.20(m,2H).
实施例46
6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000090
第一步
4-氰基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
在冰水浴中，将双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(4g,16.52mmol)和2-(4-甲氧基苯基)乙腈46a(2.21g,15.02mmol)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(35mL)中，将60％氢化钠(3g,75.09mmol)分批加入至上述混合溶液。随后加热至60℃反应5小时。降至室温，加水(100mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氰基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯46b(1.78g)，产率：37.5％。
MS m/z(ESI):217.1[M-99]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氰基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯46b(1.78g,5.63mmol)和氢氧化钾(631.34mg,11.25mmol)依次加入到二甲基亚砜(8mL)中，逐滴加入双氧水(4mL)，持续搅拌1小时。加入大量水(50mL)，有白色固体析出，过滤，干燥，得到4-氨基甲酰基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯46c(1.45g)，产率：77.1％。
MS m/z(ESI):279.0[M-55]
第三步
4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将1,3-二溴-5,5-二甲基海因(619.88mg,2.17mmol)、氢氧化钾(1.09g,19.51mmol)和4-氨基甲酰基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯46c(1.45g,4.34mmol)依次加入到乙腈(10mL)和水(10mL)的混合溶液中，室温下搅拌2小时。减压蒸馏，C 18反相色谱柱纯化(C 18 分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯46d(1.18g，产率：88.8％。
MS m/z(ESI):234.1[M-72]
第四步
4-(4-甲氧基苯基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯46d(818mg,2.67mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，缓慢加入三氟乙酸(6.56g,57.51mmol)，室温搅拌过夜。反应完成后，减压浓缩，得到4-(4-甲氧基苯基)哌啶-4-胺46e，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):190.1[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将上述粗品4-(4-甲氧基苯基)哌啶-4-胺46e、3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(689.12mg,2.67mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.38g,10.66mmol)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(8mL)中，置换氩气3次，100℃条件下持续搅拌4小时。加入水(30mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈46f(1.1g)，产率：96.3％。
MS m/z(ESI):411.0[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈46f(1.1g,2.57mmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(1.96g,10.27mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(430.14mg,513.68μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(479.39mg,1.03mmol)和磷酸钾(2.18g,10.27mmol)依次1,4-二氧六环(12mL)和水(1.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入水(10mL)，以乙酸乙酯萃取三次(100mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈46g(400mg)，产率：31.5％。
MS m/z(ESI):476.9[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈46g(300mg,606.83μmol)和氢氧化钾(68.10mg,1.21mmol)依次加入到二甲基亚砜(4mL)中，逐滴加入双氧水(1mL)。室温下持续搅拌1小时后，加入水(20mL)，有淡黄色固体析 出。用稀盐酸中和，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺46(200mg)，产率：64.6％。
MS m/z(ESI):495.1[M-16]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.62-7.66(m,2H),7.58(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),7.33-7.40(m,2H),7.08-7.12(m,2H),4.72-4.75(m,2H),3.85(s,3H),3.33-3.40(m,2H),2.72-2.76(m,2H),2.08-2.16(m,2H).
实施例47
6-(4-氨基-4-(4-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000091
第一步
6-(4-氨基-4-(4-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(4-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺46(50mg,97.58μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，缓慢滴加三溴化硼(5mL，1.0M二氯甲烷溶液)。室温下反应2小时。反应结束后，加入冰水(100mL)，二氯甲烷萃取(100mL×3)，合并有机相，减压浓缩。制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(4-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺47(15mg)，产率：30.9％。
MS m/z(ESI):481.1[M-16]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.58(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),7.52-7.55(m,2H),7.33-7.40(m,2H),6.94-6.96(m,2H),4.72-4.76(m,2H),3.32-3.38(m,2H),2.71-2.75(m,2H),2.06-2.13(m,2H).
实施例48
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000092
第一步
4-氰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-(2-甲氧基苯基)乙腈48a(1g,6.79mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.81g,7.47mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)，分批加入60％氢化钠(1.06g,26.51mmol)，搅拌40分钟后加热至70℃，反应过夜。降至室温，加水(100mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯48b(1.7g)，产率：79.1％。
MS m/z(ESI):217.0[M-99]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(283.75mg,5.06mmol)和4-氰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯48b(0.8g,2.53mmol)溶于二甲基亚砜(5mL)中，缓慢滴加双氧水(5mL)。室温反应过夜。加入大量水(50mL),析出黄色固体。过滤，用水洗涤滤饼，干燥，得到4-氨基甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯48c(400mg)，产率：47.3％。
MS m/z(ESI):279.0[M-55]
第三步
4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(302.02mg,5.38mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯48c(400mg,1.20mmol)的乙腈(2mL)和水(3mL)的混合溶液中，分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(188.10mg,657.88μmol)，室温下搅拌1小时。加入水(100mL)和磷 酸钾(279.30mg,1.32mmol)，搅拌15分钟，加入乙酸乙酯(20mL)和亚硫酸钠(15.07mg,119.61μmol)，分液，水相用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相并用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，干燥，减压浓缩，得到4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯48d(366mg)，产率：99.6％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):234.1[M-72]
第四步
4-(2-甲氧基苯基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯48d(366mg,1.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，缓慢加入三氟乙酸(3g,26.31mmol)，室温搅拌过夜。反应完成后，减压浓缩，得到4-(2-甲氧基苯基)哌啶-4-胺48e，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):190.1[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(283.17mg,1.10mmol)，上述粗品4-(2-甲氧基苯基)哌啶-4-胺48e和N,N-二异丙基乙胺(566.37mg,4.38mmol)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(3mL)中，氩气置换后，100℃条件下搅拌2小时。加入水(30mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到产物6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈48f(360mg)，产率：70.8％。
MS m/z(ESI):411.0[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈48f(360mg,840.56μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(641.58mg,3.36mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(140.77mg,168.11μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(156.89mg,336.22μmol)和磷酸钾(713.70mg,3.36mmol)依次1,4-二氧六环(4mL)和水(0.4mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，降至室温后，加入水(20mL)，以乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈48g(160mg)，产率：38.5％。
MS m/z(ESI):477.1[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈 48g(160mg,323.64μmol)和氢氧化钾(36.32mg,647.28μmol)依次加入到二甲基亚砜(5mL)中，水浴下逐滴加入双氧水(0.5mL)。室温条件下搅拌1小时后，加入水(20mL)，有淡黄色固体析出。用稀盐酸中和，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺48(90mg)，产率：54.4％。
MS m/z(ESI):495.1[M-16]
实施例49
6-(4-氨基-4-(2-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000093
第一步
6-(4-氨基-4-(2-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺48(20mg,39μmol)溶于二氯甲烷(6mL)，滴加三溴化硼(488.92mg,1.95mmol)。反应完成后，加入二氯甲烷(40mL)和水(50mL)萃取，水相用二氯甲烷萃取(40mL×3)，合并有机相，减压浓缩。制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺49(3mg)，产率：15.4％。
MS m/z(ESI):481.0[M-16]
实施例50
6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000094
第一步
4-氰基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-(3-甲氧基苯基)乙腈50a(2g,13.59mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.62g,14.95mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(12mL)，分批加入60％氢化钠(2.17g,54.36mmol)，搅拌40分钟后，加热至70℃，反应过夜。降至室温，加水(100mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氰基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯50b(3.8g)，产率：88.3％。
MS m/z(ESI):217.0[M-99]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(709.37mg,12.64mmol)和4-氰基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯50b(2.00g,6.32mmol)溶于二甲基亚砜(10mL)中，缓慢滴加双氧水(2mL)，室温反应过夜。反应结束后，向反应液中加入水(50mL),析出黄色固体，过滤，用水洗涤滤饼，干燥，得到4-氨基甲酰基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯50c(1.7g)，产率：80.4％。
MS m/z(ESI):279.0[M-55]
第三步
4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(1.28g,22.88mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯50c(1.7g,5.08mmol)的乙腈(6mL)和水(9mL)的混合溶液中，分批加入1,3-二溴 -5,5-二甲基海因(799.43mg,2.80mmol)，室温下搅拌1小时。加入水(20mL)和磷酸钾(1.19g,5.59mmol)，搅拌15分钟，加入乙酸乙酯(50mL)和亚硫酸钠(64.05mg,508.36μmol)，分液，水相用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯50d(1.0g)，产率64.2％。
MS m/z(ESI):234.1[M-72]
第四步
4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯50d(1g,3.26mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，缓慢加入三氟乙酸(5g,43.85mmol)，室温搅拌过夜。反应完成后，减压浓缩，得到4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-胺50e，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):190.1[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-胺50e(300mg,1.45mmol)，3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(375.88mg,1.45mmol)和N,N-二异丙基乙胺(751.82mg,5.82mmol)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(5mL)中，氩气置换，在100℃条件下持续搅拌4小时。反应完成后加入水(30mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到产物6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈50f(550mg)，产率：88.3％。
MS m/z(ESI):411.0[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈50f(0.55g,1.28mmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(980.19mg,5.14mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(215.07mg,256.84μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(239.70mg,513.68μmol)和磷酸钾(1.09g,5.14mmol)依次加入1,4-二氧六环(7mL)和水(0.7mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，降至室温，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈50g(290mg)，产率：46.0％。
MS m/z(ESI):477.1[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈50g(290.00mg,586.60μmol)和氢氧化钾(65.83mg,1.17mmol)依次加入到二甲基亚砜(4mL)中，逐滴加入双氧水(1mL)。室温下搅拌1小时后，加入水(20mL)，有淡黄色固体析出。用稀盐酸中和，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺50(210mg)，产率：70％。
MS m/z(ESI):495.1[M-16]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.58(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),7.50(t,J＝8.0Hz,1H),7.33-7.40(m,2H),7.26-7.29(m,1H),7.24(t,J＝2.0Hz,1H),7.08(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),4.66-4.69(m,2H),3.87(s,3H),3.46-3.51(m,2H),2.72-2.75(m,2H),2.10-2.19(m,2H).
实施例51
6-(4-氨基-4-(3-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000095
第一步
6-(4-氨基-4-(3-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺50(80mg,156.13μmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，冰浴下缓慢滴加三溴化硼(5mL，1.0M二氯甲烷溶液)，室温下反应2小时。加入冰水(20mL)，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(3-羟基苯基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺51(15mg)，产率：19.3％。
MS m/z(ESI):481.1[M-16]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.57-7.59(m,1H),7.33-7.40(m,3H),7.12-7.17(m,2H),6.90(d J＝8.0Hz,1H),4.67-4.71(m,2H),3.47(t,J＝12.0Hz,2H),2.69-2.73(m,2H),2.09-2.16(m,2H).
实施例52
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000096
第一步
1-苄基-4-环丙基哌啶-4-甲酰胺
室温，将氢氧化钾(1.31g,23.30mmol)加入1-苄基-4-环丙基哌啶-4-腈52a(280mg,1.17mmol，根据专利WO 2003042174自制而得)的叔丁醇(20mL)溶液中，升至110℃，反应过夜。减压浓缩，反应液中加入20mL水，二氯甲烷(30mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到1-苄基-4-环丙基哌啶-4-甲酰胺52b(300mg)，产率：99.1％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):259.2[M+1]
第二步
1-苄基-4-环丙基哌啶-4-胺
将氢氧化钾(293.19mg,5.23mmol)加入1-苄基-4-环丙基哌啶-4-甲酰胺52b(300mg,1.16mmol)的乙腈(2mL)和水(6mL)溶液中，加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(249.00mg,870.89μmol)，室温反应1.5小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到1-苄基-4-环丙基哌啶-4-胺52c(200mg)，产率：74.77％。
MS m/z(ESI):231.2[M+1]
第三步
4-环丙基哌啶-4-胺
将钯碳(72.66mg,520.95μmol)加入1-苄基-4-环丙基哌啶-4-胺52c(200mg,868.25μmol)的甲醇(20mL)溶液中，氢气置换，室温反应3小时。反应结束后，硅藻土过滤，减压浓缩，得到4-环丙基哌啶-4-胺52d(121.7mg)，产率：99.96％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):141.1[M+1]
第四步
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(224.32mg,867.89μmol)、4-环丙基哌啶-4-胺52d(121.7mg,867.89μmol)和N,N-二异丙基乙胺(336.50mg,2.60mmol)依次加入N,N-二甲基乙酰胺(2.5mL)，加热至100℃，反应1小时。反应结束后，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈52e(180mg)，产率：57.26％。
MS m/z(ESI):345.0[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈52e(90mg,248.46μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(165.94mg,869.62μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(20.81mg,24.85μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(23.19mg,49.69μmol)和磷酸钾(158.22mg,745.39μmol)依次加入1,4-二氧六环(6mL)和水(0.6mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应过夜。反应完全后，反应液中加入20mL水,乙酸乙酯(20mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈52f(15mg)，产率：14.09％。
MS m/z(ESI):411.1[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠(7.00mg,175.10μmol)加入6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈52f(15mg,35.02μmol)的甲醇(2mL)溶液中，滴加双氧水(0.2mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺52(2.04mg)，产率：13％。
MS m/z(ESI):446.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.10(s,1H),7.96(s,3H),7.57-7.73(m,2H),7.39(d,J＝4.9Hz,2H),4.20(s,2H),3.80(s,2H),1.68(s,4H),1.23(s,1H),0.43-0.65(m,4H).
实施例53
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000097
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将N,N-二异丙基乙胺(1.40g,10.83mmol)加入4-苯基哌啶-4-胺27b(318mg,1.80mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中，搅拌30秒，加入5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈22c(464.53mg,1.80mmol)，加热至120℃，反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53a(50mg)，产率：6.98％。
MS m/z(ESI):380.2[M-16]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53a(50mg,125.86μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(84.06mg,440.51μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(10.54mg,12.59μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(11.75mg,25.17μmol)和磷酸钾(80.15mg,377.58μmol)依次加入1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53b(50mg)，产率：85.74％。MS m/z(ESI):446.1[M-16]
第三步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠(21.58mg,539.54μmol)加入2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53b(50mg,107.91μmol)的甲醇(3mL)溶液中，加入双氧水(0.3mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺53(13.14mg)，产率：25％。
MS m/z(ESI):481.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.85(s,1H),8.33(s,3H),7.93(s,1H),7.70(d,J＝7.7Hz,2H),7.39-7.62(m,5H),7.30(d,J＝5.5Hz,3H),4.33(d,J＝13.7Hz,2H),3.90(s,2H),3.44(t,J＝11.5Hz,2H),2.08(t,J＝11.3Hz,2H).
实施例54
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000098
第一步
3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)丙酸甲酯
将三(二亚苄基丙酮)二钯(473.65mg,517.25μmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(598.58mg,1.03mmol)、N,N-二异丙基乙胺(4.01g,31.03mmol)和4-溴嘧啶-2-胺54a(1.8g, 10.34mmol)加到1,4-二氧六环(30mL)溶液中，氩气置换，加入3-硫烷基丙酸甲酯(1.31g,10.86mmol)，氩气置换一次，加热至85℃反应3小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)丙酸甲酯54b(2.1g)，产率：95.19％。
MS m/z(ESI):214.1[M+1]
第二步
2-氨基嘧啶-4-硫醇钠
室温，将甲醇钠(506.62mg,9.38mmol)加入3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)丙酸甲酯54b(1g,4.69mmol)的甲醇(6mL)溶液中，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，得到2-氨基嘧啶-4-硫醇钠54c(670mg)，产率：96.08％。
MS m/z(ESI):128.1[M+1]
第三步
(R)-N-((S)-1'-(3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将2-氨基嘧啶-4-硫醇钠54c(120mg,804.56μmol)、(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺39e(340.78mg,643.65μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(73.68mg,80.46μmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(93.11mg,160.91μmol)和N,N-二异丙基乙胺(311.95mg,2.41mmol)加到1,4-二氧六环(3mL)溶液中，氩气置换，加热至100℃，反应过夜。反应结束后，反应液中加入20mL水，二氯甲烷(30mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到(R)-N-((S)-1'-(3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺54d(140mg)，产率：37％。
MS m/z(ESI):576.2[M+1]
第四步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将浓盐酸(17.73mg,486.36μmol)加入(R)-N-((S)-1'-(3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺54d(70mg,121.59μmol)的甲醇(3mL)溶液中，室温搅拌2小时，减压浓缩，得到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈54e(57mg)，产率：99.42％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):472.2[M+1]
第五步
(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫基)-1H-吡唑
并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠(24.18mg,604.40μmol)加入(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈54e(57mg,120.88μmol)的甲醇(3mL)溶液中，滴加双氧水(0.4mL)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到(S)-6-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-((2-氨基嘧啶-4-基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺54(7.2mg)，产率：12％。
MS m/z(ESI):490.2[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.48(d,J＝5.2Hz,1H),7.91(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(d,J＝6.8Hz,1H),7.25-7.41(m,1H),6.59(d,J＝6.8Hz,1H),4.81-4.85(m,2H),4.45(s,1H),3.33(q,J＝14.9,14.3Hz,2H),3.16(s,2H),1.65-1.81(m,2H),1.57(d,J＝13.3Hz,1H),1.34-1.48(m,1H).
实施例55
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000099
第一步
4-氰基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢化钠(3.56g,88.88mmol)分批加入2-(吡啶-3-基)乙腈55a(3g,25.39mmol)、双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(6.76g,27.93mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(35mL)溶液中，升温至60℃，反应过夜。反应结束后，加入40mL饱和氯化铵淬灭反应，乙酸乙酯(40mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到4-氰基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯55b(6.6g)，产率：90.44％。
MS m/z(ESI):288.2[M+1]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(781.05mg,13.92mmol)加入4-氰基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯55b(2g,6.96mmol)的二甲基亚砜(12mL)溶液中，慢慢滴加双氧水(5mL)。反应结束后，加入10mL水，继续搅拌1小时，过滤，得到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯55c(1.8g)，产率：84.69％。
MS m/z(ESI):306.2[M+1]
第三步
4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将[双(三氟乙酰氧基)碘]苯(1.24g,2.88mmol)加入4-氨基甲酰基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯55c(800.00mg,2.62mmol)的乙腈(12mL)和水(12mL)溶液中，室温反应过夜。反应结束后，加入40mL碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯55d(726mg)，产率：99.91％。
MS m/z(ESI):278.2[M+1]
第四步
4-(吡啶-3-基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1mL)加入4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯55d(150mg,540.81μmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中，室温搅拌40分钟，减压浓缩，得到4-(吡啶-3-基)哌啶-4-胺55e(95.86mg)，产率：100.00％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):178.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将N,N-二异丙基乙胺(314.86mg,2.44mmol)和3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(125.94mg、487.25μmol)加入4-(吡啶-3-基)哌啶-4-胺55e(95mg,535.98μmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)溶液中，加热至110℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈55f(130mg)，产率：66.83％。
MS m/z(ESI):399.0[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈55f(130mg,325.61μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(248.53mg,1.30mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(54.53mg,65.12μmol)、2-二环己基磷 -2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(60.78mg,130.25μmol)和磷酸钾(207.45mg,976.84μmol)依次加入1,4-二氧六环(8mL)和水(0.8mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈55g(10mg)，产率：6.60％。
MS m/z(ESI):465.1[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠溶液(0.5mL)、双氧水(0.5mL)依次加入6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈55g(10mg,21.49μmol)的甲醇(1mL)溶液中，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺55(2.19mg)，产率：21％。
MS m/z(ESI):483.1[M+1]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.99(s,1H),8.74(s,1H),8.28(d,J＝8.3Hz,1H),7.71(s,1H),7.61(dd,J＝7.5,2.0Hz,1H),7.32-7.50(m,2H),4.67(d,J＝14.2Hz,2H),3.57(t,J＝12.0Hz,2H),2.82(d,J＝13.8Hz,2H),2.15-2.37(m,2H).
实施例56
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000100
第一步
4-氰基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢化钠(1.36g,33.96mmol)分批加入2-(吡啶-4-基)乙腈56a(1.5g,9.70mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(25mL)溶液中，升温至60℃反应过夜。反应结束后，加入40mL饱和氯化铵淬灭反应，乙酸乙酯(40mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到4-氰基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯56b(1.65g)，产率：59.18％。
MS m/z(ESI):288.2[M+1]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(644.37mg,11.48mmol)加入4-氰基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯56b(1.65g,5.74mmol)的二甲基亚砜(15mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(5mL)，剧烈放热，可用部分冰水冷却，室温反应1小时。反应结束后，析出大量固体，过滤，得到产物4-氨基甲酰基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯56c(1.08g)，产率：61.59％。
MS m/z(ESI):306.2[M+1]
第三步
4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(892.99mg,15.92mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯56c(1.08g,3.54mmol)的乙腈(2.5mL)和水(10mL)的混合溶液中，在水浴下分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(758.41mg,2.65mmol)，室温搅拌1小时。反应完全后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯56d(980mg)，产率：99％。
MS m/z(ESI):278.2[M+1]
第四步
4-(吡啶-4-基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1mL)加入4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯56d(250mg,901.35μmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中，室温搅拌40分钟。反应结束后，减压浓缩，得到4-(吡啶-4-基)哌啶-4-胺56e(159.76mg)，产率：100.00％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):178.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将N,N-二异丙基乙胺(486.11mg,3.76mmol)加入4-(吡啶-4-基)哌啶-4-胺56e(160mg,902.70μmol)的N,N-二甲基乙酰胺(3mL)溶液中，加入3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(194.43mg,752.25μmol)，加热至80℃，反应1.5小时。反应完全后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈56f(274mg)，产率：91.23％。MS m/z(ESI):399.1[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-(2,3二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈56f(122mg,305.58μmol)、(2,3二氯苯基)硼酸1g(291.55mg,1.53mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(51.18mg,61.12μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(57.04mg,122.23μmol)和磷酸钾(194.68mg,916.73μmol)依次加入1,4-二氧六环(8mL)和水(0.8mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-(2,3二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈56g(60mg)，产率：42.2％。
MS m/z(ESI):465.1[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠溶液(0.5mL)和双氧水(0.5mL)依次加入6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-(2,3二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈56g(60mg,128.94μmol)的甲醇(1mL)溶液中，室温搅拌1.5小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)-3-(2,3二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺56(16.22mg)，产率：26％。
MS m/z(ESI):483.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.74(d,J＝5.2Hz,2H),8.58(s,3H),8.14(s,1H),7.61-7.78(m,4H),7.40(d,J＝4.8Hz,2H),4.27(s,2H),3.81(s,2H),2.47(s,2H),2.09(s,2H).
实施例57
6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000101
第一步
3-苯基哌啶-4-胺
将三氟乙酸(1.5mL)和4-氨基-3-苯基哌啶-1-甲酸叔丁酯57a(350mg,1.27mmol，根据专利WO2019169153自制而得)加到二氯甲烷(6mL)溶液中，室温搅拌40分钟，减压浓缩，得到3-苯基哌啶-4-胺57b(223.21mg)，产率：99％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):177.1[M+1]
第二步
6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将N,N-二异丙基乙胺(400.03mg,3.10mmol)加入3-苯基哌啶-4-胺57b(223mg,1.26mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(3mL)溶液中，加入3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(200mg,773.81μmol)，加热至70℃反应1.5小时。反应结束后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈57c(180mg)，产率：58.41％。
MS m/z(ESI):398.1[M+1]
第三步
6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈57c(180mg,451.97μmol)、(2,3-二氯苯基)硼酸1g(344.98mg,1.81mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(75.69mg,90.39μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(84.36mg,180.79μmol)和磷酸钾(287.95mg,1.36mmol)依次加入1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，120℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，C 18反相色谱柱分离(C 18分离柱20-45μm；流动相A：H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈57d(21mg)，产率：10.01％。
MS m/z(ESI):464.1[M+1]
第四步
6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钠溶液(0.5mL)加入6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈57d(21mg,45.22μmol)的甲醇(2mL)溶液中，加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌1.5小时。反应结束后，减压浓缩，制备液相色谱纯化(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-3-苯基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺57(3.6mg)，产率：16.5％。
MS m/z(ESI):482.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.11(s,1H),7.86(s,1H),7.58-7.77(m,2H),7.41(dt,J＝20.8,8.0Hz,4H),4.26(s,1H),3.77(s,1H),3.20(q,J＝13.4,12.6Hz,2H),2.80(s,1H),2.17(d,J＝12.4Hz,1H),1.98(s,1H),1.59(s,1H).
实施例58
6-(4-氨基-4-乙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2021071297-appb-000102
第一步
(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-乙基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580μmol)，(4-乙基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯58a(133mg,580μmol)和N,N-二异丙基乙胺(300mg,2.32mmol,385μL)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(3mL)中，氩气置换，加热至100℃，反应4小时。反应完全后，降至室温，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-乙基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯58b(250mg)，产率：96％。
MS m/z(ESI):449.9[M+1]
第二步
(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-乙基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-乙基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯58b(250mg,555μmol)，(2,3-二氯苯基)硼酸1g(424mg,2.22mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(93mg,111μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(104mg,222μmol)和磷酸钾(471mg,2.22mmol)依次加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中。氩气置换三次，130℃加热反应24小时。反应结束后，减压浓缩，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-乙基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯58c(250mg)，产率：87％。
MS m/z(ESI):516.2[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-乙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(2,3-二氯苯基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-乙基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯58c(250mg,484μmol)溶于二氯甲烷(5mL)，缓慢加入三氟乙酸(5.00g,43.9mmol)，室温搅拌过夜。反应完成后，加入乙酸乙酯(80mL)，用饱和碳酸氢钠(100mL×3)溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-乙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈58d(140mg)，产率：69％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):416.1[M+1]
第四步
6-(4-氨基-4-乙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-乙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈58d(140mg,336μmol)和氢氧化钾(38mg,673μmol)依次加入到二甲基亚砜中(4mL)，缓慢滴加双氧水(30％,1mL)，在室温条件下持续搅拌1小时。反应完成后，加入少量水，有淡黄色固体析出，过滤得到固体。制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H 2O，流动相B：CH 3CN)，得到6-(4-氨基-4-乙基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺58(15mg)，产率：10.3％。MS m/z(ESI):433.9[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.57-7.59(m,1H),7.33-7.40(m,2H),4.37-4.41(m,2H),3.76-3.82(m,2H),2.66(s,4H),1.90-1.99(m,4H),1.79-1.86(m,2H),1.06(t,J＝7.6Hz,3H).
生物学评价
测试例1、本发明化合物对SHP2变构抑制活性测定
以下方法用于测定本发明化合物在体外条件下对重组人源全长SHP2活性的抑制程度。SHP2通过二-酪氨酰-磷酸化肽与其Src同源2(SH2)结构域的结合而变构激活。后者的激活步骤导致SHP2的自抑制界面释放，随后使得SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)活化，可用于底物识别和反应催化。
将实验流程简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为贮存液。反应在384孔Small VolumeTM HiBase微孔板(Greiner，784075)中进行，首先向孔中加入SHP2(signalchem，P38-20G-10ug)和SHP-2Activating Peptide(IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222)(BPS，79319-1)，终浓度分别为0.5nM和0.5uM，继而加入待测化合物，浓度范围为0.00004-10uM，于25℃孵育60分钟。随后向反应中DiFMUP(Thermo，D6567)，于25℃孵育30分钟。孵育结束后，使用微量板读数仪(BMG)读数，激发和发射波长分别为340nm和450nm。通过与对照组(0.1％DMSO)的荧光强度比值进行比较，计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物的IC 50值，见表1。
表1本发明化合物对全长SHP2酶活性抑制的IC 50数据
化合物编号 SHP2/IC 50(nM)
SHP-099 128
2 29
5 1
6 4
7 14
8 5
9 1
10 7
11 17
12 8
13 10
15 24
17 4
23 2
24 5
25 5
27 7
29 3
30 3
32 10
38 27
46 3
51 3
53 11
结论：从表1可以看出，本发明的化合物对SHP2酶具有较好的变构抑制作用。
备注：SHP-099的结构(根据WO2015107493制备而得)如下：
Figure PCTCN2021071297-appb-000103
测试例2、本发明化合物对NCI-H23细胞增殖抑制测定
以下方法用于测定本发明化合物对NCI-H23细胞增殖的影响。NCI-H23(含有KRAS G12C突变)购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，培养于含10％胎牛血清、100U青霉素，100μg/mL链霉素和1mM Sodium Pyruvate的RPMI 1640培养基中。细胞活力 通过
Figure PCTCN2021071297-appb-000104
Luminescent Cell Viability Assay试剂盒(Promega，货号G7573)进行测定。
实验方法按照试剂盒说明书的步骤操作，简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为10mM贮存液，随后以培养基进行稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在10000nM-1.52nM。将处于对数生长期的细胞以1000个细胞每孔的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO 2培养箱中培养过夜，随后加入受试化合物后继续培养120小时。培养结束后，向每孔加入50μL体积的CellTiter-Glo检测液，震荡5分钟后静置10分钟，随后在酶标仪上使用Luminescence模式读取样品各孔发光值。通过与对照组(0.3％DMSO)的数值进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物抑制细胞增殖的IC 50值，见表2。
表2本发明化合物对NCI-H23细胞增殖抑制的IC 50数据
实施例编号 IC 50(nM)/NCI-H23
RMC-4550 240
5 143
6 61
9 13
27 167
从表2可以得出，本发明的化合物对NCI-H23具有较好的抑制作用。
备注：RMC-4550的结构(根据WO2018013597制备而得)如下：
Figure PCTCN2021071297-appb-000105
测试例3、本发明化合物对NCI-H358细胞增殖抑制测定
以下方法用于测定本发明化合物对NCI-H358细胞增殖的影响。NCI-H358细胞(含有KRAS G12C突变)购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，培养于含10％胎牛血清、100U青霉素，100μg/mL链霉素和1mM Sodium Pyruvate的RPMI 1640培养基中。细胞活力通过
Figure PCTCN2021071297-appb-000106
Luminescent Cell Viability Assay试剂盒(Promega，货号G7573)进行测定。
实验方法按照试剂盒说明书的步骤操作，简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为10mM贮存液，随后以培养基进行稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在10000nM-1.52nM。将处于对数生长期的细胞以1000个细胞每孔的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO 2培养箱中培养过夜，随后加入受试化合物后继续培养120小时。培养结束后，向每孔加入50μL体积的CellTiter-Glo检测液，震荡5分钟后静置10分钟，随后在酶标仪上使用Luminescence模式读取样品各孔发光值。通过与对照组(0.3％DMSO)的数值 进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物抑制细胞增殖的IC 50值，见表3。
表3本发明化合物对NCI-H23和NCI-H358细胞增殖抑制的IC 50数据
实施例编号 IC 50(nM)/NCI-H358
RMC-4550 80
5 27
6 19
27 37
从表3可以得出，本发明的化合物对NCI-H358具有较好的抑制作用。
测试例4药代动力学测试
1、实验目的
以ICR小鼠为受试动物，采用LC/MS/MS法测定灌胃给予本发明化合物5和化合物6，测定其不同时刻血浆中的药物浓度，研究本发明化合物在小鼠体内的药代动力学特征。
2、实验方案
2.1实验药品与动物；
化合物5和化合物6
ICR小鼠，雄性，29.0～33.8g，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。
2.2药物配制
称取适量药物，加入适量羧甲基纤维素钠(CMC-Na，含0.5％Tween 80)中，涡旋振荡、超声制备1mg/kg悬浮液；
2.3给药
ICR小鼠，每个待测化合物灌胃组(每组9只)，禁食过夜后灌胃给药(PO，给药剂量10mg/kg，给药体积10mL/kg)，给药4小时后进食。
3、操作
于给药前和给药后0.083小时、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时和24小时经颈静脉采约0.2mL血液，肝素钠抗凝。血液样本采集后置于冰上，离心分离血浆(离心条件：1500g，10分钟)。收集的血浆分析前存放于–40～–20℃。
用LC-MS/MS测定灌胃给药后小鼠血浆中待测化合物含量。
4、药代动力学参数结果
本发明的化合物的药代动力学参数如下表4所示。
表4化合物小鼠药代动力学参数
Figure PCTCN2021071297-appb-000107
Figure PCTCN2021071297-appb-000108
结论：本发明化合物5和化合物6的血药浓度和曲线下面积均较高，具有较好的药代动力学性质。
测试例5小鼠药代动力学测试
1、实验目的
以ICR小鼠为受试动物，采用LC/MS/MS法测定灌胃给予本发明化合物27，测定其不同时刻血浆中的药物浓度，研究本发明化合物在小鼠体内的药代动力学特征。
2、实验方案
2.1实验药品与动物；
化合物27
ICR小鼠，雄性，29.0～33.8g，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。
2.2药物配制
称取适量药物化合物27，加入适量羧甲基纤维素钠(CMC-Na，含0.5％Tween 80)中，涡旋振荡、超声制备0.5mg/kg悬浮液；
2.3给药
ICR小鼠，每个待测化合物灌胃组(每组9只)，禁食过夜后灌胃给药(PO，化合物27给药剂量为剂量5mg/kg，给药体积10mL/kg)，给药4小时后进食。
3、操作
于给药前和给药后0.083小时、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时经颈静脉采约0.2mL血液，肝素钠抗凝。血液样本采集后置于冰上，离心分离血浆(离心条件：1500g，10分钟)。收集的血浆分析前存放于–40～–20℃。
用LC-MS/MS测定灌胃给药后小鼠血浆中待测化合物含量。
4、药代动力学参数结果
本发明的化合物的药代动力学参数如下表5所示。
表5化合物小鼠药代动力学参数
Figure PCTCN2021071297-appb-000109
Figure PCTCN2021071297-appb-000110
结论：本发明化合物27的血药浓度和曲线下面积均较高，具有较好的药代动力学性质。
测试例6本发明化合物在NCI-H358荷瘤BALB/c裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用测试
1.实验目的
评价测试实施例27化合物在NCI-H358细胞株皮下移植BALB/c裸小鼠动物模型中的抗肿瘤作用和安全性评价。
2.受试物配制
溶媒对照组给予DMA:Solutol HS 15:Saline＝5:10:85(v/v/v)；
称取适量的实施例27化合物，加入适量的DMA(二甲基乙酰胺)充分溶解后，依次加入Solutol HS 15和生理盐水(Saline)，(DMA:Solutol HS 15:Saline＝5:10:85(v/v/v))涡旋混匀，配置浓度为3mg/mL。
3.实验动物
BALB/c nude小鼠，雌性，6-7周(肿瘤细胞接种时的小鼠周龄)，12只。购自江苏集萃药康生物科技有限公司。
4.细胞培养
NCI-H358细胞培养在含10％胎牛血清、1％丙酮酸钠和1％谷氨酰胺的RPMI 1640培养液中。收集指数生长期的NCI-H358细胞，细胞重悬于PBS中至适合浓度用于裸鼠皮下肿瘤接种。
5.动物造模和随机分组
12只雌性BALB/c裸小鼠背部右侧皮下接种约3×106NCI-H358细胞。待肿瘤平均体积达到约100-200mm 3时，根据肿瘤大小随机分组，每组6只。各组动物按下表每天固定时间根据动物体重给予受试物1天1次(qd)，口服给药(po)，连续10天，并记录每天体重。6.动物给药和观察
肿瘤接种后，常规监测包括了肿瘤生长及治疗对动物正常行为的影响，具体内容有实验动物的活动性，摄食和饮水情况，体重增加或降低情况，眼睛、被毛及其它异常情况。
相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤抑制率(T/C)和肿瘤抑制百分率(IR)计算公式如下：
(1)肿瘤体积TV(tumor volume)＝1/2×a×b 2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽；
(2)相对肿瘤体积RTV(relative tumor volume)＝V t/V 0，其中V 0为分组给药时(即d0)所测得的肿瘤体积，V t为每一次测量时的肿瘤体积；
(3)相对肿瘤增殖率T/C(％)＝T RTV/C RTV×100％，其中T RTV为治疗组的RTV，C RTV为对照组的RTV；
(4)肿瘤生长抑制率TGI(％)＝(1-T/C)×100％；其中，T和C分别为治疗组和对照组某一特定时间点的相对肿瘤体积。
7.结果
表6本发明化合物对人非小细胞肺癌细胞NCI-H358荷瘤小鼠肿瘤生长抑制率(TGI％)
Figure PCTCN2021071297-appb-000111
在30mg/kg剂量下，本发明实施例27化合物对NCI-H358荷瘤BALB/c裸鼠皮下移植瘤具有明显的生长抑制作用，且体重无明显变化，安全性高。

Claims (29)

  1. 一种通式(AI)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100001
    其中：
    Y选自化学键或-S-；
    当Z选自-NH-时；V选自-N-或-CH-；或者；当Z选自-O-时；V选自-N-；
    Q和T各自独立地选自N或CH；其中Q和T中至少一个选自N；
    环A选自芳基、杂芳基或双环稠合环，其中所述芳基为单环芳基，所述杂芳基为5至6元单环杂芳基，所述的双环稠合环优选为芳基或杂芳基与单环杂环基或单环环烷基的稠合环；
    R 1相同或不同，各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、氰基、卤素、硝基、环烷基、杂环基、-OR 5、-C(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、硝基、氰基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7的取代基所取代；
    R 2选自氰基、四氮唑基、-C(O)R 5、-C(O)OR 5或-C(O)NR 6R 7；
    R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成4～11元杂环基，优选为5～11元杂环基，其中所述的杂环基内含有一个或多个N、O、S或SO 2原子，并且杂环基上任选进一步被一个或多个选自卤素、硝基、氰基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CH 2R 5、-CH(OH)R 5、-CH 2OR 5、＝O、-OR 5、-SR 5、-SOR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7的取代基所取代，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
    或者，R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成基团：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100002
    Figure PCTCN2021071297-appb-100003
    为单键或双键；
    当
    Figure PCTCN2021071297-appb-100004
    表示单键时，G和M各自独立地选自N或CR j；
    当
    Figure PCTCN2021071297-appb-100005
    表示双键时，G和M各自独立地选自C；
    环B选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
    E选自NR k、(CR pR q) p、O或S；
    F选自(CR pR q) q；
    条件是，当E选自(CR pR q) p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NR k、O或S时，q为1；
    J选自CR pR q；
    K选自NR k、(CR pR q) r、O或S；
    r为0或1；
    R m、R n、R p和R q相同或不同，各自独立地选自R A；
    或者，R p和R q与相连接的碳原子一起形成R B；
    R c和R d相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、烷基或-OR 5，其中所述的烷基任选进一步被羟基、卤素、烷氧基、环烷基或-NR 6R 7的取代基所取代；
    或者，R c和R d与相连接的碳原子一起形成R B；
    R g相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR 6R 7的取代基所取代；
    或者，两个R g与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O；
    R j和R k相同或不同，各自独立地选自氢原子或烷基；
    R A相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR 6R 7的取代基所取代；
    R B相同或不同，各自独立地选自3～10元环烷基或3～10元杂环基，其中所述的环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、氰基、硝基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-OR 5、-C(O)R 5、-C(O)OR 5、-OC(O)R 5、-SO 2R 5、-NR 6R 7、-SO 2NR 6R 7、-NHC(＝NH)NH 2、-NHSO 2R 5或-C(O)NR 6R 7的取代基所取代；
    R 5、R 6和R 7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
    或者，R 6和R 7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO 2原子，并且3～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
    R 8、R 9和R 10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
    m为0、1、2、3、4或5；
    n选自0，1，2，3或4；
    p选自1或2。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
    Figure PCTCN2021071297-appb-100006
    其中：环A、m、Z、R 1～R 4的定义如权利要求1中所述。
  3. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
    Figure PCTCN2021071297-appb-100007
    其中：环A、Y、m、R 1～R 4的定义如权利要求1中所述。
  4. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
    Figure PCTCN2021071297-appb-100008
    其中：环A、m、R 1、R 3和R 4的定义如权利要求1中所述。
  5. 根据权利要求1～4中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
    R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成4～8元单环杂环基，优选为5～6元单环杂环基，更优选为哌啶基，其中所述的单环杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、环烷基、苯基、卤代苯基、杂芳基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；其中所述的甲基、环烷基、苯基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自甲磺酰基、羟基、氨基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、吡啶基或嘧啶基的取代基所取代；其中所述的杂芳基优选为吡啶基、嘧啶甲基苯并吡唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基或苯并噁唑基；
    R 5的定义如权利要求1中所述。
  6. 根据权利要求1～4中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
    R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成7～11元螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；
    R 5的定义如权利要求1中所述。
  7. 根据权利要求6所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所述的螺杂环基选自：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100009
    R a相同或不同，各自独立地选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2或-OR 5；
    或者，两个R a与相连接的同一个碳原子一起形成C＝O；
    t为1、2或3；
    R 5的定义如权利要求1中所述。
  8. 根据权利要求1～4中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
    R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成7～11元桥杂环基，其中所述的桥杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；
    R 5的定义如权利要求1中所述。
  9. 根据权利要求1～4中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
    R 3和R 4与其相连接的N原子一起形成7～11元稠杂环基，其中所述的稠杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH 2NH 2、-CH 2OH、-NHC(＝NH)NH 2、＝O或-OR 5的取代基所取代；
    R 5的定义如权利要求1中所述。
  10. 根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100010
    其中：
    环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
    E选自NR k、(CR pR q) p、O或S；
    F选自(CR pR q) q；
    条件是，当E选自(CR pR q) p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NR k、O或S时，q为1；
    R m选自氨基、-CH 2NH 2或-NHC(＝NH)NH 2；
    R n选自氢原子、甲基或-CH 2OH；
    R p和R q各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C 1-C 4烷基、羟基C 1-C 4烷基、氨基C 1-C 4烷基或-OR 5；
    Figure PCTCN2021071297-appb-100011
    环A、G、M、m、n、R 1～R 2、R 5、R k和R g的定义如权利要求3中所述。
  11. 根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(IV)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100012
    其中：
    环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
    J选自CR pR q；
    K选自NR k、(CR pR q) r、O或S；
    r为0或1；
    R m选自氨基、-CH 2NH 2或-NHC(＝NH)NH 2；
    R n选自氢原子、甲基或-CH 2OH；
    R p和R q各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C 1-C 4烷基、羟基C 1-C 4烷基、氨基C 1-C 4烷基或-OR 5；
    Figure PCTCN2021071297-appb-100013
    环A、G、M、m、n、R 1～R 2、R 5、R k和R g的定义如权利要求3中所述。
  12. 根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100014
    其中：
    环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
    R c和R d与相连接的原子一起形成3～8元环烷基；
    R m选自氨基、-CH 2NH 2或-NHC(＝NH)NH 2；
    R n选自氢原子、甲基或-CH 2OH；
    Figure PCTCN2021071297-appb-100015
    环A、G、M、m、n、R 1～R 2和R g的定义如权利要求3中所述。
  13. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(VI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100016
    其中：
    L 1选自不存在、-(C＝O)-、-(CR wR v) u-，其中任意的一个-(CR wR v)-任选进一步被-N(R z)-、-O-、-S-、-SO-、-SO 2-所替代；
    每个R w和R v相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、烷基或烷氧基；
    每个R z相同或不同，各自独立选自氢原子或烷基；
    环E选自4～11元含N的单环杂环基、4～11元含N的稠杂环基或4～11元含N的桥杂环基，其中所述的单环杂环基、稠杂环基、桥杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基、-OR 5或＝O的取代基所取代；
    环K选自不存在，环烷基、芳基或杂芳基，其中所述的环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
    其中-L 1-环K和-(CH 2) W-NH 2连接于环E的同一个碳原子上；
    w为0，1或2；
    u为0，1，2或3；
    环A、Z、Q、T、m、R 1～R 2、R 5、R 8～R 10的定义如权利要求1中所述。
  14. 根据权利要求1～4、10～13任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 1选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、三氟甲基、环丙氧基、乙炔基、乙烯基、-NHCH 3或-N(CH 3) 2。
  15. 根据权利要求10～13任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 2选自-C(O)NH 2或-C(O)OH。
  16. 根据权利要求1～15任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R 5选自氢原子或烷基。
  17. 根据权利要求1～4、10～13任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环A选自苯基、吡啶基或嘧啶基。
  18. 根据权利要求10～12任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环B选自：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100017
  19. 根据权利要求10～12任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R g相同或不同，各自独立地选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、乙炔基、乙烯基、-NHCH 3或-N(CH 3) 2；
    或者，两个R g与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O。
  20. 根据权利要求13所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环E选自
    Figure PCTCN2021071297-appb-100018
  21. 根据权利要求1～20中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所述的化合物选自：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100019
    Figure PCTCN2021071297-appb-100020
    Figure PCTCN2021071297-appb-100021
    Figure PCTCN2021071297-appb-100022
  22. 一种制备根据权利要求3所述的通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100023
    通式(Ia)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到通式(Ib)化合物；通式(Ib)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到通式(I)化合物；
    其中：
    Y选自化学键；
    X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
    X 2选自卤素；
    R t选自烷基；
    环A，m和R 1～R 4的定义如权利要求3中所述。
  23. 一种制备根据权利要求3所述的通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100024
    通式(Ia)化合物与通式(Ic)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到通式(Id)化合物；通式(Id)化合物与NHR 3R 4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到通式(I)化合物；
    其中：
    Y选自化学键；
    X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
    X 2选自卤素；
    R t选自烷基；
    环A，m和R 1～R 4的定义如权利要求3中所述。
  24. 一种通式化合物(Ia)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体，其为制备通式(I)化合物的中间体：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100025
    其中：
    X 1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO 2R t；
    X 2选自卤素；
    R t选自烷基；
    R 2选自氰基、四氮唑基、-C(O)R 5、-C(O)OR 5或-C(O)NR 6R 7；
    R 5、R 6和R 7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R 8、-C(O)OR 8、-OC(O)R 8、-SO 2R 8、-NR 9R 10、-C(O)NR 9R 10、-SO 2NR 9R 10或-NR 9C(O)R 10的取代基所取代；
    或者，R 6和R 7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO 2原子，并且3～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
    R 8、R 9和R 10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中 所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代。
  25. 一种制备根据权利要求24所述的通式化合物(Ia)或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
    Figure PCTCN2021071297-appb-100026
    将通式(Ie)化合物的氨基进行保护，得到通式(If)化合物；通式(If)化合物在钯类催化剂的作用下进行偶联反应，得到通式(Ig)化合物；通式(Ig)化合物脱掉氨基的保护基PG，得到通式(Ih)化合物；通式(Ih)化合物进行卤代反应，得到通式(Ia)化合物；
    其中：
    PG为N的保护基，优选为
    Figure PCTCN2021071297-appb-100027
    X 3选自卤素；
    X 1、X 2和R 2的定义如权利要求24中所述。
  26. 一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的根据权利要求1～21中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
  27. 根据权利要求1～21中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求26所述的药物组合物在制备SHP2变构抑制剂中的用途。
  28. 根据权利要求1～21中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求26所述的药物组合物在制备治疗由SHP2介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由SHP2介导的疾病优选为癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱。
  29. 根据权利要求28所述的用途，其中所述的由SHP2介导的疾病选自努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤。
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