WO2021197452A1 - 含氮杂芳类衍生物自由碱的晶型 - Google Patents

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WO2021197452A1
WO2021197452A1 PCT/CN2021/085155 CN2021085155W WO2021197452A1 WO 2021197452 A1 WO2021197452 A1 WO 2021197452A1 CN 2021085155 W CN2021085155 W CN 2021085155W WO 2021197452 A1 WO2021197452 A1 WO 2021197452A1
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alkyl
cycloalkyl
thio
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詹小兰
呙临松
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上海翰森生物医药科技有限公司
江苏豪森药业集团有限公司
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    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Definitions

  • the invention belongs to the field of biomedicine, and specifically relates to a crystal form of a nitrogen-containing heteroaromatic derivative free base and a preparation method and application thereof.
  • SHP-2 (Src homology-2 domain-containing phosphatase 2), also known as PTPN11 (tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11), is encoded by the PTPN11 gene and belongs to protein tyrosine phosphatase (protein tyrosine phosphatase, PTPs) family.
  • SHP-2 is widely expressed in various tissues and cells of the body, participates in cell signal transduction, and regulates cell growth, differentiation, migration, metabolism, gene transcription and immune response Wait.
  • SHP-2 has three main components: SH-2 domain (N-SH2 and C-SH2), PTP active domain, and C-terminal (containing tyrosine phosphorylation site).
  • SH2 domain is highly conserved and is the binding site for phosphotyrosine, and mediates the binding of the PTP domain to its ligand.
  • SHP-2 has two main states in the body: inactivation and activation.
  • the inactivated state the N-SH2 within SHP-2 binds to the PTP domain, and because the PTP domain is occupied, SHP-2 is inactivated.
  • N-SH2 specifically binds to the phosphorylated tyrosine residue ligand, the PTP domain is re-exposed and SHP-2 resumes its activity.
  • SHP-2 can also form dimers in the body, which can also cause SHP-2 inactivation.
  • SHP-2 mainly functions by regulating signal pathways such as ERK/MAPK, JAK-STAT, PI3K/AKT, Hippo, Wnt/ ⁇ -catenin, etc., so as to maintain organism development and homeostasis.
  • Specific studies have shown that SHP-2 participates in the activation of the ERK/MAPK pathway by directly binding to receptor tyrosine kinases (RTKs) or scaffolds.
  • RTKs receptor tyrosine kinases
  • activated SHP-2 can also recruit GRB2/SOS and indirectly promote the activation of the RAS signaling pathway.
  • SHP-2 is also involved in signal transduction that inhibits immune response.
  • SHP-2 and SHP-1 can bind to and activate immunosuppressive receptors (such as PD-1), blocking T cell activation.
  • SHP-2 mutation is closely related to many diseases. The study found that: SHP- 2 Mutations.
  • SHP-2 mutation sites mostly occur in N-SH2 and PTP active regions, which relieve the mutual inhibition of N-CH2/PTP domains and produce highly active SHP-2, such as Cys459Sermutant, E76Kmutant and other mutations will affect SHP-2 activity.
  • highly active SHP-2 is closely related to inflammation, liver cirrhosis, and the toxin CagA secreted by Helicobacter pylori, which can lead to tumor regeneration and development, which is equivalent to a proto-oncogene. With the deepening of the understanding of SHP-2, SHP-2 has been used as a tumor treatment target for drug development.
  • the PCT patent discloses the structure of a series of nitrogen-containing heteroaromatic derivative inhibitors.
  • the product is characterized by long-term stability and high bioavailability.
  • the present invention has carried out a comprehensive study on the free base of the above substances, and is committed to obtaining the most suitable crystal form.
  • the purpose of the present invention is to provide a crystal form of the compound represented by general formula (I), the structure of which is as shown in formula (I):
  • R 1 is selected from hydrogen, halogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 hydroxyalkyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6- 12 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein the C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 hydroxyalkyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 Membered heterocyclic group, C 6-12 aryl group and 5-12 membered heteroaryl group, optionally further substituted by deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, oxo, C 1-6 alkyl, C 1-6 deuterated alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 haloalkoxy, C 2-6 alkenyl, C 2-6 Substituted by one or more substituents in alkynyl, C 3-8 cycl
  • R 2 is selected from hydrogen, amino or C 1-6 alkyl
  • R 3 is selected from hydrogen, halogen, amino, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 hydroxyalkyl, C 3-8 cycloalkyl or 3-12 membered heterocycle Group, wherein the C 1-6 alkyl group, C 1-6 alkoxy group, C 1-6 hydroxyalkyl group, C 3-8 cycloalkyl group and 3-12 membered heterocyclic group are optionally further deuterated , Halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, oxo, C 1-6 alkyl, C 1-6 deuterated alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1 -6 hydroxyalkyl, C 1-6 haloalkoxy, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C 6-12 aryl And one or more substituents in the 5-12 membered heteroaryl group;
  • R 4 is selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 deuterated alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy , C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 haloalkoxy, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6-12 aryl or 5-12 membered heteroaryl;
  • R 5 and R 6 are each independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 deuterated alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 1-6 hydroxyalkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6-12 Aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein said C 1-6 alkyl, C 1-6 deuterated alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 Haloalkoxy, C 1-6 hydroxyalkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6-12 aryl and 5-12 membered heteroaryl, Optionally further substituted by deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano
  • R 5 and R 6 are linked to form a C 3-8 cycloalkyl group, a 3-12 membered heterocyclic group, a C 6-12 aryl group or a 5-12 membered heteroaryl group, wherein the C 3-8 ring Alkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6-12 aryl and 5-12 membered heteroaryl, optionally further selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, oxo Group, C 1-6 alkyl, C 1-6 deuterated alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 haloalkoxy, C One or more substitutions of 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6-12 aryl and 5-12 membered heteroaryl Substituted by the group.
  • said R 1 is selected from hydrogen, halogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 3-8 cycloalkyl or 3-12 membered heterocyclic group , wherein the C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 3-8 cycloalkyl and 3-12 membered heterocyclic group are optionally further substituted by deuterium, halogen, hydroxy, oxo, C 1-6 alkyl and C 3-8 cycloalkyl substituted by one or more substituents; more preferably hydrogen, halogen, C 1-3 alkyl, C 1-3 hydroxyalkyl, C 3-6 Cycloalkyl or 3-6 membered heterocyclic group, wherein said C 1-3 alkyl group, C 1-3 hydroxyalkyl group, C 3-6 cycloalkyl group and 3-6 membered heterocyclic group, optionally further Substituted by one or more substituents of deuterium, halogen, C 1-6 alkyl, C
  • the R 2 is selected from hydrogen, amino or C 1-6 alkyl; preferably hydrogen, amino or C 1-3 alkyl; more preferably hydrogen, amino, methyl, ethyl Or propyl; more preferably hydrogen, amino or methyl.
  • said R 3 is selected from hydrogen, halogen, amino, C 1-6 alkyl, C 3-8 cycloalkyl or 3-12 membered heterocyclic group, wherein said C 1-6 alkyl, C 3-8 cycloalkyl and 3-12 membered heterocyclic group, optionally further substituted by one or more substituents of deuterium, halogen, oxo group; preferably hydrogen, halogen, amino , C 1-3 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or 3-6 membered heterocyclic group, wherein said C 1-3 alkyl, C 3-6 cycloalkyl and 3-6 membered heterocyclic group Optionally further substituted by one or more substituents in deuterium, halogen, and oxo; more preferably amino, chlorine, cyclopropyl, azetidinyl, tetrahydropyrrolyl, morpholinyl,
  • said R 4 is selected from hydrogen, halogen, C 1-6 alkyl or C 3-8 cycloalkyl; preferably hydrogen, halogen, C 1-3 alkyl or C 3- 6 cycloalkyl; more preferably hydrogen, fluorine, chlorine, methyl or cyclopropyl.
  • said R 5 and R 6 are each independently selected from hydrogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 2-6 alkenyl or C 3-8 ring Alkyl group, wherein said C 1-6 alkyl group, C 1-6 haloalkyl group, C 2-6 alkenyl group and C 3-8 cycloalkyl group are optionally further substituted by deuterium, halogen, C 1-6 alkyl group Is substituted by one or more substituents; preferably hydrogen, C 1-3 alkyl, C 2-4 alkenyl or C 3-6 cycloalkyl, wherein said C 1-3 alkyl, C 2- 4 Alkenyl and C 3-6 cycloalkyl, optionally further substituted by one or more substituents in deuterium, halogen, and C 1-3 alkyl; more preferably hydrogen, methyl, ethyl, isopropyl , Vinyl, cyclopropyl,
  • R 5 and R 6 are linked to form a C 3-8 cycloalkyl, 6-12 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein the C 3-8 cycloalkyl, 6-12 aryl and 5-12 membered heteroaryl, optionally further substituted by one or more substituents selected from deuterium, halogen or C 1-6 alkyl; preferably C 3-6 cycloalkyl, phenyl or 5-6 Membered heteroaryl group, wherein the C 3-6 cycloalkyl group, phenyl group and 5-6 membered heteroaryl group are optionally further selected from one or more of deuterium, halogen or C 1-3 alkyl Substituent substituted; further preferred
  • Ring A is selected from C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl;
  • R a is selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxy, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 deuterated alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, , C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 haloalkoxy, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclic group, C 6- 12 aryl or 5-12 membered heteroaryl; and
  • x 0, 1, 2 or 3.
  • the ring A is a phenyl group.
  • the present invention also provides a method for preparing the crystal form of the compound represented by general formula (I), which specifically includes the following steps:
  • the suspension density is preferably 50-200 mg/mL;
  • step 2) Shake the suspension obtained in step 1) at 0-40°C for 1-10 days;
  • step 2) The suspension obtained in step 2) is quickly centrifuged to remove the supernatant, and the remaining solids are placed in a vacuum drying oven at 40°C and dried to a constant weight to obtain the target product;
  • the poor solvent in step 1) is selected from acetone, ethyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, toluene, isopropanol, n-butyl Alcohol, isobutanol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, n-propanol, tert-butanol, 2-butanone or 3-pentanone; preferably 3-pentanone, Acetonitrile, dichloromethane or 1,4-dioxane.
  • the present invention also provides a method for preparing the crystal form of the compound represented by general formula (I), which specifically includes the following steps:
  • step 2) Add an anti-solvent to the solution obtained in step 1) at 0-25°C, and stir until a solid precipitates;
  • step 2) The suspension obtained in step 2) is quickly centrifuged to remove the supernatant, and the remaining solids are placed in a vacuum drying oven at 40°C and dried to a constant weight to obtain the target product;
  • the benign solvent in step 1) is selected from methanol, acetone, ethyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, toluene, isopropanol, normal Butanol, isobutanol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, n-propanol, tert-butanol, 2-butanone or 3-pentanone; preferably N,N- Dimethylformamide or acetonitrile.
  • the anti-solvent in step 2) is selected from heptane, water, methyl tert-butyl ether, toluene or isopropyl ether; preferably water.
  • the compound (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyridine (Azin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystal form A
  • X-ray powder diffraction pattern at 2 ⁇ is 9.0°, 15.2°, 20.2 ° and 23.0° have diffraction peaks; further include diffraction peaks at 2 ⁇ of .7°, 12.3°, 15.4°, 19.8°, 23.5° and 27.1°; further include 2 ⁇ at 4.5°, 13.7°
  • the compound (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyridine (Azin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystal form B, X-ray powder diffraction pattern at 2 ⁇ is 7.9°, 14.6° and 16.2 ° has diffraction peaks; also includes diffraction peaks at 2 ⁇ of 18.1°, 19.2°, 20.2°, 24.7°, and 26.8°; further includes diffraction peaks at 2 ⁇ of 14.9°, 27.2°, 28.1° and 30.5° Peaks; further comprising diffraction peaks at 2 ⁇ of 13.9°, 15.6°, 16.9° and 19.8°; most preferably, its XRPD pattern is basically as shown in Figure 3.
  • the compound of the present invention (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1
  • DSC spectrum of the crystalline form B of 3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine is basically shown in Figure 4; and the TGA spectrum is basically shown in Figure 5.
  • the compound (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyridine (Azin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystal form C
  • X-ray powder diffraction pattern at 2 ⁇ is 9.4°, 14.5° and 20.3 ° has diffraction peaks; also includes diffraction peaks at 2 ⁇ of 22.2°, 22.7°, 22.9° and 26.2°; further includes 2 ⁇ of 8.2°, 14.9°, 23.8°, 27.5°, 28.1°, 29.3°
  • the compound (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyridine The crystalline form D of azin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine, the X-ray powder diffraction pattern at 2 ⁇ is 5.1°, 13.4° and 18.3 ° has diffraction peaks, including diffraction peaks at 2 ⁇ of 18.0°, 19.9°, 20.7°, and 22.6°; further including 2 ⁇ of 13.7°, 16.8°, 17.7°, 19.0°, 22.3°, and 27.5° There are diffraction peaks at the position; furthermore, it also includes diffraction peaks at the 2 ⁇ of 16.1°, 22.9°, 24.9°, 25.5°, and 28.9°.
  • the compound (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyridine The crystalline form E of azin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine, the X-ray powder diffraction pattern at 2 ⁇ is 8.4°, 15.3° and 18.3 ° has diffraction peaks; also includes diffraction peaks at 2 ⁇ of 20.7°, 22.5°, 26.7°, and 27.6°; further includes 2 ⁇ of 13.5°, 14.6°, 15.8°, 16.0°, 16.9°, 19.2° Diffraction peaks at, 20.4°, 24.0°, 24.4°, 25.5°, 28.2°, 28.9°, 31.8°, and 32.2°; furthermore, the 2 ⁇ is 5.2°, 9.5°, 10.4°, 17.2°
  • the object of the present invention is also to provide compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-ring
  • the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl) is provided Form A of 2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine.
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form A of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine has a diffraction peak at 20.0 ⁇ 0.2° in 2 ⁇ ; or a diffraction peak at 19.4 ⁇ 0.2°; or at 17.1 Diffraction peak at ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 22.6 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 10.7 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 25.6 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 12.7 ⁇ 0.2° Peak; or a diffraction peak at 24.5 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 19.1 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 18.4 ⁇ 0.2°; preferably including any 2-5 of the above-mentioned diffraction peaks, or
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form A has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form A of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine optionally also includes 2 ⁇ of 19.1 ⁇ 0.2°, 18.4 ⁇ 0.2°, 6.2 ⁇ 0.2°, 31.5 ⁇ 0.2° , 29.2 ⁇ 0.2°, 20.6 ⁇ 0.2°, 21.4 ⁇ 0.2°, one or more diffraction peaks; preferably at least any 2-3, or 4-5, or 6-7 of them are included; more preferably, Including any 2 locations, 3 locations, 4 locations, 5 locations, 6 locations, 7 locations;
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form A has diffraction peaks at the following positions 2 ⁇ : 20.0 ⁇ 0.2°, 19.4 ⁇ 0.2°, 17.1 ⁇ 0.2°, 22.6 ⁇ 0.2°, 25.6 ⁇ 0.2°, 24.5 ⁇ 0.2°, 18.4 ⁇ 0.2° and 19.1 ⁇ 0.2°;
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form A has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form A has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • Cu-K ⁇ radiation is used, and the characteristic X-ray diffraction peaks expressed in 2 ⁇ angles and interplanar spacing d are shown in Table 6.
  • the compound of the present invention (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8-
  • the crystalline form A of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine, its X-ray powder diffraction pattern is basically shown in Figure 12; its DSC pattern is shown in Figure 13; its TGA pattern is shown in Figure 14. Show.
  • the crystal form A of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a solvent-containing or solvent-free crystal form, wherein the solvent is selected from water, methanol, Acetone, ethyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, 2-methyl-tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, toluene, isopropanol, n-butanol, isobutyl Alcohol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide, n-propanol,
  • the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl) contains 0.2-3, preferably 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 or 3, more preferably 0.5, 1, 2 or 3.
  • the crystal form A of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a non-solvent crystal form, preferably an anhydrous crystal form.
  • the crystal form A of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a hydrate crystal form, and the number of water is 0.2-3, preferably 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 or 3, more preferably 0.5, 1, 2 or 3.
  • the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl) is provided Form B of 2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine.
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine has a diffraction peak at 20.2 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 22.2 ⁇ 0.2°; or at 12.2 Diffraction peak at ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 25.1 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 21.5 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 18.5 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 17.8 ⁇ 0.2° Peak; or a diffraction peak at 20.0 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 28.6 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 5.1 ⁇ 0.2°; preferably including any 2-5 of the above-mentioned diffraction peaks, or 3-5
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine contains at least one or more of 2 ⁇ of 20.2 ⁇ 0.2°, 22.2 ⁇ 0.2°, 12.2 ⁇ 0.2° Diffraction peaks preferably include 2 of them, more preferably 3; optionally, it may further include 2 ⁇ of 25.1 ⁇ 0.2°, 21.5 ⁇ 0.2°, 18.5 ⁇ 0.2°, 17.8 ⁇ 0.2°, 20.0 ⁇ 0.2 At least one, preferably including 2, 3, 4 or 5 of them;
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form B has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form B of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine optionally also includes 2 ⁇ of 28.6 ⁇ 0.2°, 5.1 ⁇ 0.2°, 14.3 ⁇ 0.2°, 24.5 ⁇ 0.2° , 13.2 ⁇ 0.2°, 12.4 ⁇ 0.2°, 29.2 ⁇ 0.2°, one or more diffraction peaks; preferably at least any 2-3, or 4-5, or 6-7 of them are included; more preferably, Including any 2 locations, 3 locations, 4 locations, 5 locations, 6 locations, 7 locations;
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form B has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form B has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form B has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • Cu-K ⁇ radiation is used, and the characteristic X-ray diffraction peaks expressed in 2 ⁇ angles and interplanar spacing d are shown in Table 7.
  • the compound of the present invention (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8-
  • the crystalline form B of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine has an X-ray powder diffraction pattern as shown in Fig. 15; and its DSC pattern is shown in Fig. 16.
  • the crystal form B of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a solvent-containing or solvent-free crystal form, wherein the solvent is selected from water, methanol, Acetone, ethyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, 2-methyl-tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, toluene, isopropanol, n-butanol, isobutyl Alcohol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide, n-propanol,
  • the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl) contains 0.2-3, preferably 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 Or 3, more preferably 0.5, 1, 2 or 3.
  • the crystal form B of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a non-solvent crystal form, preferably an anhydrous crystal form.
  • the crystal form B of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a hydrate crystal form, and the number of water is 0.2-3, preferably 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 or 3, more preferably 0.5, 1, 2 or 3.
  • the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl) is provided Form C of 2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine.
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form C of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine has a diffraction peak at 2 ⁇ of 17.8 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 19.8 ⁇ 0.2°; or at 26.1 Diffraction peak at ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 18.2 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 24.0 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 22.8 ⁇ 0.2°; or diffraction peak at 10.5 ⁇ 0.2° Peak; or a diffraction peak at 21.5 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 17.5 ⁇ 0.2°; or a diffraction peak at 21.8 ⁇ 0.2°; preferably including any 2-5 of the above-mentioned diffraction peaks, or
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form C of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine contains at least one or more of 2 ⁇ of 17.8 ⁇ 0.2°, 19.8 ⁇ 0.2°, 26.1 ⁇ 0.2° Diffraction peaks preferably include 2 of them, more preferably 3; optionally, it may further include 2 ⁇ of 18.2 ⁇ 0.2°, 24.0 ⁇ 0.2°, 22.8 ⁇ 0.2°, 10.5 ⁇ 0.2°, 21.5 ⁇ 0.2 At least one, preferably including 2, 3, 4 or 5 of them;
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form C has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystalline form C of spiro[4.5]dec-2-en-1-amine optionally also includes 2 ⁇ of 17.5 ⁇ 0.2°, 21.8 ⁇ 0.2°, 19.5 ⁇ 0.2°, 22.3 ⁇ 0.2°
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form C has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form C has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form C has diffraction peaks at the following positions in 2 ⁇ :
  • Cu-K ⁇ radiation is used, and the characteristic X-ray diffraction peaks expressed in 2 ⁇ angles and interplanar spacing d are shown in Table 8.
  • the compound of the present invention (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8-
  • the crystalline form C of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine has an X-ray powder diffraction pattern as shown in Fig. 17; and its DSC pattern is shown in Fig. 18.
  • the crystal form C of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a solvent-containing or solvent-free crystal form, wherein the solvent is selected from water, methanol, Acetone, ethyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, 2-methyl-tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, toluene, isopropanol, n-butanol, isobutyl Alcohol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide, n-propanol,
  • the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl) contains 0.2-3, preferably 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 or 3, more preferably 0.5, 1, 2 or 3.
  • the crystal form C of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a non-solvent crystal form, preferably an anhydrous crystal form.
  • the crystal form C of -2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine is a hydrate crystal form, and the number of water is 0.2-3, preferably 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 or 3, more preferably 0.5, 1, 2 or 3.
  • the relative peak intensity of the top ten diffraction peak positions and the corresponding positions of the diffraction peaks have a 2 ⁇ error of ⁇ 0.2° ⁇ 0.5°. , Preferably ⁇ 0.2° ⁇ 0.3°, most preferably ⁇ 0.2°.
  • the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)- The relative peak intensities of the X-ray powder diffraction patterns of 2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine of crystal form A, crystal form B and crystal form C are among the top ten.
  • the 2 ⁇ errors of the diffraction peak positions corresponding to those in Figure 1, Figure 4 and Figure 6 are ⁇ 0.2° ⁇ 0.5°, preferably ⁇ 0.2° ⁇ 0.3°, and most preferably ⁇ 0.2°.
  • the invention also provides a preparation compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-ring
  • the method for the crystal form of propyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine specifically includes the following steps:
  • step 2) Shake the suspension obtained in step 1) at a certain temperature for a certain time, the temperature is preferably 0-60°C, and the time is preferably 1-10 days;
  • step 2) The suspension obtained in step 2) is quickly centrifuged to remove the supernatant, and the remaining solids are placed in a vacuum drying oven at 40°C and dried to a constant weight to obtain the target product;
  • the poor solvent is selected from acetone, ethyl acetate, isopropyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, Toluene, isopropanol, n-butanol, isobutanol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, n-propanol, tert-butanol, 2-butanone, 3-pentanol Ketone, methyl tert-butyl ether or water, preferably acetone, ethyl acetate, isopropyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane
  • step 2) Add an anti-solvent to the solution obtained in step 1) at a certain temperature, and stir until a solid precipitates, and the temperature is preferably 0-25°C;
  • step 2) The suspension obtained in step 2) is quickly centrifuged to remove the supernatant, and the remaining solids are placed in a vacuum drying oven at 40°C and dried to a constant weight to obtain the target product;
  • the benign solvent is selected from methanol, acetone, ethyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, toluene, isopropyl Alcohol, n-butanol, isobutanol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, n-propanol, tert-butanol, 2-butanone, 3-pentanone and N- One or more of methylpyrrolidone, preferably N-methylpyrrolidone;
  • the anti-solvent is selected from heptane, water, methyl tert-butyl ether, toluene or isopropyl ether;
  • step 2) The solution obtained in step 1) is quickly placed at a low temperature, and stirred until a solid precipitates, and the temperature is preferably -10 to 5°C;
  • step 2) The suspension obtained in step 2) is quickly centrifuged to remove the supernatant, and the remaining solids are placed in a vacuum drying oven at 40°C and dried to a constant weight to obtain the target product;
  • the benign solvent is selected from methanol, acetone, ethyl acetate, acetonitrile, ethanol, 88% acetone, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, benzene, toluene, isopropyl Alcohol, n-butanol, isobutanol, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, n-propanol, tert-butanol, 2-butanone, 3-pentanone and N- One or more of methylpyrrolidone, preferably 2-methyltetrahydrofuran.
  • the object of the present invention is also to provide a pharmaceutical composition, which contains a therapeutically effective amount of the compound represented by the general formula (I) or compound (S)-1'-(6-amino-5-((2- Amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystal Type, and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
  • the object of the present invention is also to provide a pharmaceutical composition, which contains a therapeutically effective amount of the compound represented by the general formula (I) or compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino) -3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine crystal form, and one One or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
  • a pharmaceutical composition which contains a therapeutically effective amount of the compound represented by the general formula (I) or compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino) -3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine crystal form, and one One or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
  • the object of the present invention is also to provide the compound (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl) in the crystal form of the compound represented by the general formula (I)) Thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine and its pharmaceutical composition are used in the preparation of SHP-2 inhibitor drugs In the application.
  • the object of the present invention is also to provide the compound (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)sulfide) in the crystal form of the compound represented by the general formula (I) (Pyrazine-2-yl)-2-cyclopropyl-8-azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine and the application of its pharmaceutical composition in the preparation of SHP-2 inhibitor drugs.
  • Figure 1 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -DSC chart of the crystalline form A of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine.
  • Figure 2 shows (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -TGA diagram of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystalline form A.
  • Figure 3 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 XRPD diagram of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystalline form B.
  • Figure 4 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -DSC chart of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystalline form B.
  • Figure 5 shows (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -TGA diagram of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystalline form B.
  • Figure 6 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -DSC chart of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine form C.
  • Figure 7 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -TGA diagram of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine form C.
  • Figure 8 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -DSC chart of the crystalline form D of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine.
  • Figure 9 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -TGA diagram of the crystalline form D of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine.
  • Figure 10 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -DSC chart of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystalline form E.
  • Figure 11 is (S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-fluoropyrazin-2-yl)-1,3 -TGA diagram of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine crystalline form E.
  • Figure 12 is (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8- XRPD diagram of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine form A.
  • Figure 13 is (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8- DSC chart of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine form A.
  • Figure 14 is (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8- TGA diagram of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine form A.
  • Figure 15 is (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8- XRPD diagram of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine form B.
  • Figure 16 is (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8- DSC chart of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine form B.
  • Figure 17 is (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8- XRPD diagram of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine form C.
  • Figure 18 is (S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-2-cyclopropyl-8- DSC chart of azaspiro[4.5]dec-2-en-1-amine form C.
  • alkyl refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group, which is a straight or branched chain group containing 1 to 20 carbon atoms, preferably an alkyl group containing 1 to 8 carbon atoms, more preferably 1 to 6 carbon atoms
  • the alkyl group is most preferably an alkyl group of 1 to 3 carbon atoms.
  • Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1 ,2-Dimethylpropyl, 2,2-Dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2- Methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3 -Dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2 -Methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhe
  • Alkyl groups may be substituted or unsubstituted. When substituted, substituents may be substituted at any available attachment point.
  • the substituents are preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkanes Group, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkane Oxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio, oxo, carboxy, or carboxylate group, preferably methyl, ethyl, isopropyl, tert-butyl, haloalkyl in the present invention , Deuterated alkyl, alkoxy-substituted alkyl, hydroxy-substituted alkyl and cyano-substit
  • cycloalkyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon substituent.
  • the cycloalkyl ring contains 3 to 20 carbon atoms, preferably 3 to 8 carbon atoms, more preferably 3 to 6 Carbon atoms.
  • Non-limiting examples of monocyclic cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatriene
  • Polycyclic cycloalkyls include spiro, fused and bridged cycloalkyls, preferably cyclopropyl, cyclobutyl, cyclohexyl, cyclopentyl and cycloheptyl.
  • the cycloalkyl ring may be fused to an aryl, heteroaryl or heterocycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a cycloalkyl group, non-limiting examples include indanyl, tetrahydronaphthalene Group, benzocycloheptanyl, etc. Cycloalkyl groups may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituents are preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio, oxo, carboxy, or carboxylate.
  • heterocyclyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon substituent containing 3 to 20 ring atoms, one or more of which is selected from nitrogen, oxygen or S(O) m (where m is an integer of 0 to 2) heteroatoms, but does not include the ring part of -OO-, -OS- or -SS-, and the remaining ring atoms are carbon. It preferably contains 3 to 12 ring atoms, of which 1 to 4 are heteroatoms; more preferably contains 3 to 8 ring atoms; most preferably contains 3 to 8 ring atoms.
  • Non-limiting examples of monocyclic heterocyclic groups include oxetanyl, pyrrolidinyl, pyrrolidone, imidazolidinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothienyl, dihydroimidazolyl, dihydrofuranyl, dihydropyrrolidinyl Azolyl, dihydropyrrolyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, homopiperazinyl, pyranyl, etc., preferably oxetanyl, pyrrolidonyl, tetrahydrofuranyl, Pyrazolidinyl, morpholinyl, piperazinyl and pyranyl.
  • Polycyclic heterocyclic groups include spiro, condensed and bridged heterocyclic groups; the spiro, condensed and bridged heterocyclic groups involved are optionally connected to other groups through a single bond, or through a ring Any two or more of the above atoms are further connected to other cycloalkyl groups, heterocyclic groups, aryl groups and heteroaryl groups.
  • the heterocyclic group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio, oxo, carboxy, or carboxylate.
  • groups which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio,
  • aryl refers to a 6 to 14-membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (that is, rings sharing adjacent pairs of carbon atoms) with a conjugated ⁇ -electron system, preferably 6 to 10 members, such as benzene Base and naphthyl. Phenyl is more preferred.
  • the aryl ring may be fused to a heteroaryl, heterocyclic or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is an aryl ring.
  • the aryl group may be substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, Alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycle Alkylthio, carboxy, or carboxylate.
  • groups are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, Alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycle Alkylthio, carboxy, or carboxylate.
  • heteroaryl refers to a heteroaromatic system containing 1 to 4 heteroatoms and 5 to 14 ring atoms, where the heteroatoms are selected from oxygen, sulfur, and nitrogen.
  • the heteroaryl group is preferably 5 to 10 members, more preferably 5 or 6 members, such as imidazolyl, furyl, thienyl, thiazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, pyrrolyl, triazolyl, tetrazolyl , Pyridyl, pyrimidinyl, thiadiazole, oxadiazole, pyrazinyl, etc., preferably oxazolyl, oxadiazole, tetrazole, triazole, thienyl, imidazolyl, pyridyl, pyrazole Group, pyrimidinyl or thiazolyl; more selected oxazolyl, oxadiazole, tetrazole, triazole
  • the heteroaryl ring may be fused to an aryl, heterocyclic or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a heteroaryl ring.
  • Heteroaryl groups may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituents are preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio, carboxyl or carboxylate.
  • groups are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio, carboxyl or carb
  • alkoxy refers to -O- (alkyl) and -O- (unsubstituted cycloalkyl), where the definition of alkyl is as described above.
  • An alkoxy group having 1 to 8 carbon atoms is preferred, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms is more preferred, and an alkoxy group having 1 to 3 carbon atoms is most preferred.
  • Non-limiting examples of alkoxy groups include: methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy.
  • the alkoxy group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio, carboxyl or carboxylate.
  • groups are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkane Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , Heterocycloalkylthio, carboxyl or carboxy
  • Haloalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more halogens, wherein the alkyl group is as defined above.
  • Haloalkoxy refers to an alkoxy group substituted with one or more halogens, where alkoxy is as defined above.
  • Hydroalkyl refers to an alkyl group substituted with a hydroxy group, where the alkyl group is as defined above.
  • alkenyl refers to alkenyl, also known as alkenyl, where the alkenyl may be further substituted with other related groups, such as: alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkyl Amino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio Group, carboxyl group or carboxylate group.
  • Halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • Amino refers to -NH 2 .
  • Cyano refers to -CN.
  • Niro refers to -NO 2 .
  • THF tetrahydrofuran
  • EtOAc refers to ethyl acetate
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • LDA lithium diisopropylamide
  • DMAP refers to 4-dimethylaminopyridine.
  • EtMgBr refers to ethyl magnesium bromide
  • HSu refers to N-hydroxysuccinimide
  • EDCl refers to 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride.
  • IPA refers to isopropanol.
  • MeOH means methanol
  • DMF N, N-dimethylformamide
  • DIPEA N,N-diisopropylethylamine
  • HEPES 4-hydroxyethylpiperazine ethanesulfonic acid
  • X is selected from A, B, or C
  • X is selected from A, B and C
  • X is A, B or C
  • X is A, B and C
  • other terms all express the same Meaning, which means that X can be any one or more of A, B, and C.
  • Substituted refers to one or more hydrogen atoms in the group, preferably up to 5, more preferably 1 to 3 hydrogen atoms, independently of each other, substituted with a corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and those skilled in the art can determine (by experiment or theory) possible or impossible substitutions without too much effort. For example, an amino group or a hydroxyl group having free hydrogen may be unstable when combined with a carbon atom having an unsaturated (e.g., olefinic) bond.
  • Stepoisomerism includes geometric isomerism (cis-trans isomerism), optical isomerism, and conformational isomerism.
  • the hydrogen atoms described in the present invention can be replaced by its isotope deuterium, and any hydrogen atom in the example compounds of the present invention can also be replaced by a deuterium atom.
  • “Pharmaceutical composition” means a mixture containing one or more of the compounds described herein or their physiologically/pharmaceutically acceptable salts or prodrugs and other chemical components, as well as other components such as physiological/pharmaceutically acceptable carriers And excipients.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to promote the administration to the organism, which is beneficial to the absorption of the active ingredient and thus the biological activity.
  • “Pharmaceutically acceptable salt” refers to the salt of the compound of the present invention, which is safe and effective when used in mammals, and has due biological activity.
  • X-ray powder diffraction pattern refers to the experimentally observed diffraction pattern or the parameters derived from it.
  • the X-ray powder diffraction pattern is characterized by the peak position (abscissa) and peak intensity (ordinate).
  • the experimental error depends on the conditions of the instrument, the preparation of the sample, and the purity of the sample.
  • the X-ray diffraction pattern usually changes with the conditions of the instrument.
  • the appropriate error tolerance of XRPD can be: 2 ⁇ 0.5°; 2 ⁇ 0.4°; 2 ⁇ 0.3°; 2 ⁇ 0.2°.
  • the relative intensity of the X-ray diffraction pattern may also change with changes in experimental conditions, so the order of peak intensities cannot be used as the only or decisive factor.
  • the overall peak angle will be shifted, and a certain shift is usually allowed. Therefore, those skilled in the art can understand that any crystal form that has the same or similar characteristic peaks as the characteristic peaks of the spectrum of the present invention falls within the scope of the present invention.
  • TGA thermogravimetric analysis
  • DSC differential scanning calorimetry
  • HPLC refers to high performance liquid chromatography (HPLC) experiments.
  • PK refers to pharmacokinetic (PK) experiments.
  • the structure of the compound of the present invention is determined by nuclear magnetic resonance (NMR) or/and liquid-mass spectrometry (LC-MS).
  • NMR chemical shift ( ⁇ ) is given in units of parts per million (ppm).
  • the NMR was measured by Bruker AVANCE-400 nuclear magnetic instrument, and the solvent was deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6 ), deuterated methanol (CD 3 OD) and deuterated chloroform (CDCl 3 ), and the internal standard was four Methylsilane (TMS).
  • the liquid mass spectrometry LC-MS was measured with an Agilent 1200 Infinity Series mass spectrometer.
  • HPLC determination uses Agilent 1200DAD high pressure liquid chromatograph (Sunfire C18 150 ⁇ 4.6mm chromatographic column) and Waters 2695-2996 high pressure liquid chromatograph (Gimini C 18 150 ⁇ 4.6mm chromatographic column).
  • the thin layer chromatography silica gel plate uses Yantai Huanghai HSGF254 or Qingdao GF254 silica gel plate.
  • the specification used for TLC is 0.15mm ⁇ 0.20mm, and the specification used for thin layer chromatography separation and purification products is 0.4mm ⁇ 0.5mm.
  • Column chromatography generally uses Yantai Huanghai silica gel 200-300 mesh silica gel as the carrier.
  • the starting materials in the examples of the present invention are known and can be bought on the market, or can be synthesized by using or following methods known in the art.
  • the first step preparation of 3-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)propionic acid (2-ethyl)hexyl ester
  • 3-Chloro-4-iodopyridine-2-amine 800mg, 3.15mmol
  • 3-mercaptopropionic acid-2-ethylhexyl (687mg, 3.15mmol) were dissolved in 1,4-dioxane (7mL ), place in a microwave reaction tube, add DIPEA (813mg, 6.3mmol), palladium acetate (35mg, 0.16mmol) and Xantphos (109mg, 0.19mmol), after bubbling nitrogen for 3 minutes, microwave heating to 100°C for 1 hour .
  • reaction solution was cooled, the reaction solution was diluted with 20 mL of ethyl acetate, filtered through Celite to remove insoluble materials, and the filtrate was spin-dried and purified by column chromatography (15-25% ethyl acetate/petroleum ether) to obtain a brown solid product (1.03g, yield 95%).
  • Step 2 Preparation of 3-((2-amino-3-cyclopropylpyridin-4-yl)thio)propionic acid (2-ethyl)hexyl ester
  • the third step Preparation of 2-amino-3-cyclopropylpyridine-4-thiolate potassium
  • Step 4 Preparation of 3-((2-amino-3-cyclopropylpyridin-4-yl)thio)-6-chloropyrazine-2-amine
  • reaction solution was heated to 110°C in microwave for 1 hour; after the reaction solution was cooled to room temperature, it was diluted with 20 mL of ethyl acetate, filtered through Celite, the filtrate was spin-dried, and column chromatography (50 ⁇ 70% ethyl acetate/ Petroleum ether) was purified to obtain a brown solid product (50 mg, yield 24%).
  • Example 2 was prepared with reference to the experimental program of Example 1.
  • the first step preparation of 3-((2,3-dichloropyridin-4-yl)thio)propionic acid (2-ethyl)hexyl ester
  • reaction solution was cooled, the reaction solution was diluted with 20 mL of ethyl acetate, filtered through Celite to remove insoluble materials, the filtrate was spin-dried and column chromatography (10-15% ethyl acetate/petroleum ether) was used to obtain a brown oil ( 1.29g, yield 97%).
  • Step 2 Preparation of 3-((3-chloro-2-cyclopropylpyridin-4-yl)thio)propionic acid (2-ethyl)hexyl ester
  • the third step Preparation of 3-chloro-2-cyclopropylpyridine-4-thiolate potassium
  • reaction solution was heated to 110°C in microwave for 1 hour; after the reaction solution was cooled to room temperature, it was diluted with 20 mL of ethyl acetate, filtered through Celite, and the filtrate was spin-dried by column chromatography (10-20% ethyl acetate/petroleum Ether) to obtain an off-white solid product (135 mg, yield 80%).
  • Step 5 Preparation of tert-butyl 1-carbonyl-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1'-carboxylate
  • the precipitated solid was filtered with diatomaceous earth, the obtained filtrate was separated into layers, the ethyl acetate layer was dried with anhydrous magnesium sulfate, and column chromatography (20-30% ethyl acetate/petroleum ether) was used to obtain a brown oily product (2.20g) , Yield 59%).
  • the ninth step (S)-1'-(6-amino-5-((3-chloro-2-cyclopropylpyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-1,3- Preparation of dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine
  • Example 4 was prepared with reference to the experimental program of Example 1.
  • the first step Preparation of 3-((3-amino-5-chloropyrazin-2-yl)thio)propionic acid (2-ethyl)hexyl ester
  • reaction solution was filtered, the filter cake was washed twice with ethyl acetate (30 mL), and the filtrate was concentrated and purified by column chromatography [eluent: petroleum ether ⁇ petroleum ether/ethyl acetate (90:10)] to obtain 3-((3 -Amino-5-chloropyrazin-2-yl)thio)propionic acid (2-ethyl)hexyl ester (5.5g, yield 82%) brown oil.
  • the third step Preparation of 3-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-6-chloropyrazine-2-amine
  • 3-Amino-5-chloropyrazine-2-thiol 500mg, 3.1mmol
  • 3-chloro-4-iodopyridine-2-amine 789mg, 3.1mmol
  • tris(dibenzylideneacetone) dipalladium 142mg, 0.16mmol
  • 4,5-bis(diphenylphosphine)-9,9-dimethylxanthene 179mg, 0.31mmol
  • N,N-diisopropylethylamine 1.2g, 9.3 mmol
  • reaction solution was concentrated and purified by column chromatography [eluent: dichloromethane-dichloromethane/methanol (99:1)] to obtain 1 g of crude product. It was slurried with ethanol (5 mL) and filtered to obtain 3-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-6-chloropyrazine-2-amine (580 mg, yield 65%) as a gray solid.
  • the fifth step N-((S)-1'-(6-amino-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-1,3 -Dihydrospiro[indene-2,4'-piperidin]-1-yl)-2-methylpropane-2-sulfenamide
  • N-((S)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidin]-1-yl)-2-methylpropane-2-sulfenamide hydrochloride 150mg, 0.37mmol
  • 3-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-6-chloropyrazine-2-amine 100mg, 0.35mmol
  • potassium carbonate 335mg, 2.43mmol
  • reaction solution was concentrated and purified by column chromatography [eluent: dichloromethane ⁇ dichloromethane/methanol (97:3)] to obtain N-((S)-1'-(6-amino-5-((2- Amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-yl)-2-methyl Propane-2-sulfenamide (100 mg, yield 52%) purple solid.
  • Step 1 Preparation of 2-chloro-5-((3-chloro-2-cyclopropylpyridin-4-yl)thio)pyrazine
  • reaction solution was heated to 110°C in microwave for 1 hour; after the reaction solution was cooled to room temperature, it was diluted with 20 mL of ethyl acetate, filtered through Celite, and the filtrate was spin-dried by column chromatography (10-20% ethyl acetate/petroleum Ether) to give a pale yellow oil (120 mg, yield 74%).
  • Step 1 Preparation of tert-butyl (5-bromo-1,3,4-thiadiazol-2-yl) carbamate
  • the third step preparation of 4-((2-chlorothiazol-4-yl)methyl)piperidine-1,4-dicarboxylic acid 1-(tert-butyl)-4-ethyl ester
  • Step 4 Preparation of 2-chloro-6-carbonyl-4,6-dihydrospiro[cyclopenta[d]thiazole-5,4'-piperidine]-1'-carboxylic acid tert-butyl ester
  • the tert-butyl 2-chloro-6-carbonyl-4,6-dihydrospiro[cyclopenta[d]thiazole-5,4'-piperidine]-1'-carboxylate (1.2g, 3.5mmol) was dissolved in THF (10mL), Ti(OEt) 4 (10mL) was added, heated to 95°C under nitrogen protection, and stirred for 10 hours. After cooling to room temperature, the reaction solution was diluted with ethyl acetate (200 mL). Under stirring, water (20 mL) was added, and stirring was continued until turbidity. Anhydrous sodium sulfate was added to the mixture until the solid in the mixture was sandy. Filtration and concentration of the filtrate to obtain the crude product.
  • the ninth step (S)-1'-(6-amino-5-((3-chloro-2-cyclopropylpyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl)-4,6- Preparation of dihydrospiro[cyclopenta[d]thiazole-5,4'-piperidine]-6-amine
  • Step 2 Preparation of 2-ethylhexyl 3-((2-(azetidin-1-yl)-3-chloropyridin-4-yl)thio)propionate
  • Step 4 Preparation of 3-((2-(azetidine-1-yl)-3-chloropyridin-4-yl)thio)-6-chloropyrazine-2-amine
  • the seventh step (S)-1'-(6-amino-5-((2-(azetidine-1-yl)-3-chloropyridin-4-yl)thio)pyrazin-2-yl )-1,3-Dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1-amine
  • the first step the preparation of 3-((3-chloro-2-morpholinopyridin-4-yl)thio)propionic acid (2-ethyl)hexyl ester
  • the third step Preparation of 6-chloro-3-((3-chloro-2-morpholinopyridin-4-yl)thio)pyrazine-2-amine
  • Example 12 The preparation method of Example 12 refers to the experimental protocol of Example 11.
  • Example 13 The preparation method of Example 13 refers to the experimental protocol of Example 11.
  • Example 14 refers to the experimental protocol of Example 11.
  • Example 15 refers to the experimental protocol of Example 11.
  • Example 16 refers to the experimental protocol of Example 11.
  • Example 17 The preparation method of Example 17 refers to the experimental program of Example 6.
  • Example 18 refers to the experimental program of Example 6.

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Abstract

本发明涉及一种含氮杂芳类衍生物自由碱的晶型。具体涉及一种具有通式(I)化合物自由碱的晶型、制备方法和含有治疗有效量的该晶型的药物组合物，及其作为蛋白酪氨酸磷酸酶-2C(SHP2)抑制剂，在治疗白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、乳癌、肺癌及其结肠癌等疾病或病症的用途。

Description

含氮杂芳类衍生物自由碱的晶型 技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种含氮杂芳类衍生物自由碱的晶型及其制备方法和应用。
背景技术
SHP-2(Src homology-2 domain-containing phosphatase 2)，又称PTPN11(tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11)，由PTPN11基因编码，隶属于蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase，PTPs)家族。作为细胞因子、生长因子及其他胞外刺激因素的下游信号分子，SHP-2广泛表达于机体各组织和细胞，参与细胞信号转导，调节细胞生长、分化、迁移、代谢、基因转录和免疫应答等。
SHP-2主要有3个组成部分：SH-2结构域(N-SH2和C-SH2)、PTP活性结构域、C-末端(含酪氨酸磷酸化位点)。其中SH2结构域高度保守，是磷酸酪氨酸结合位点，并介导PTP结构域与其配体的结合。
SHP-2在机体内主要有2种状态：失活与激活。在失活状态下，SHP-2内部N-SH2与PTP结构域相互结合，由于PTP结构域被占领，使SHP-2失活。而当N-SH2与磷酸化酪氨酸残基配体特异性结合时，PTP结构域重新暴露，SHP-2恢复活性。据最新研究表明，SHP-2还能在体内形成二聚体，同样也可导致SHP-2失活。
SHP-2主要通过调节ERK/MAPK、JAK-STAT、PI3K/AKT、Hippo、Wnt/β-catenin等信号通路发挥功能，以此维持生物体发育和体内动态平衡。具体研究表明，SHP-2通过直接与酪氨酸激酶受体(receptor tyrosine kinase,RTKs)或scaffold结合，参与激活ERK/MAPK通路。除此之外，活化的SHP-2还能招募GRB2/SOS，间接促进RAS信号通路的激活。此外，SHP-2还参与抑制免疫反应的信号传导，如SHP-2与SHP-1能够结合并激活免疫抑制受体(如PD-1)，阻断T细胞激活。
作为一类重要的细胞信号因子，SHP-2突变与多种疾病密切相关。研究发现：在神经母细胞瘤、AML(4％)、乳腺癌、NSCLC(10％)、肺腺癌(30％)、食道癌、头颈部肿瘤、黑色素瘤和胃癌中，发现存在SHP-2突变。
SHP-2的突变位点多发生在N-SH2、PTP活性区域，解除了N-CH2/PTP结构域的相互抑制，产生高活性的SHP-2，如Cys459Ser mutant、E76K mutant等突变均会影响SHP-2活性。有研究表明，高活性的SHP-2与炎症、肝硬化、幽门螺旋杆菌所分泌的毒素CagA等密切相关，能够导致肿瘤的再生与发展，相当于原癌基因。随着对SHP-2认识的不断深入，SHP-2已经作为肿瘤治疗靶点进行 药物的开发。
目前已有多个SHP-2的变构抑制剂进入临床研究阶段，如Novartis公司开发的TNO-155，Revolution Medicine公司开发的RMC-4630，以及北京加科思的JAB-3068都已经进入临床I期研究阶段。但还没有一款开发上市的SHP-2抑制剂用于制备治疗努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、食道癌、头颈部肿瘤、肺癌及其结肠癌。因此迫切需要开发一类成药性好的SHP-2抑制剂药物。
PCT专利(申请号：PCT/CN2019/110314)中公开了一系列含氮杂芳类衍生物抑制剂的结构，在后续的研发中，为了产物易于处理、过滤和干燥，寻求适合的便于储存、产品长期稳定、生物利用度高等特点，本发明对上述物质的自由碱进行了全面的研究，致力于得到最适合的晶型。
发明内容
专利PCT/CN2019/110314所涉及的所有内容均以引证的方式添加到本发明中。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示化合物的晶型，其结构如式(I)所示：
Figure PCTCN2021085155-appb-000001
其中：
R 1选自氢、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R 2选自氢、氨基或C 1-6烷基；
R 3选自氢、卤素、氨基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基或3-12元杂环基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基和3-12元杂环基，任选进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12 元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R 4选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基；
R 5和R 6各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 1-6羟烷基、C 2-6烯基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 1-6羟烷基、C 2-6烯基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
或者，R 5和R 6链接形成一个C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述R 1选自氢、卤素、C 1-6烷基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基或3-12元杂环基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基和3-12元杂环基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氧代基、C 1-6烷基和C 3-8环烷基中的一个或多个取代基所取代；更优选氢、卤素、C 1-3烷基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基或3-6元杂环基，其中所述的C 1-3烷基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基和3-6元杂环基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氧代基、C 1-3烷基和C 3-6环烷基中的一个或多个取代基所取代；进一步优选氢、氟、溴、甲基、羟乙基、
Figure PCTCN2021085155-appb-000002
Figure PCTCN2021085155-appb-000003
在本发明进一步优选的实施方式中，所述R 2选自氢、氨基或C 1-6烷基；优选氢、氨基或C 1-3烷基；更优选氢、氨基、甲基、乙基或丙基；进一步优选氢、氨基或甲基。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述R 3选自氢、卤素、氨基、C 1-6烷基、C 3-8环烷基或3-12元杂环基，其中所述的C 1-6烷基、C 3-8环烷基和3-12元杂环基，任选进一步被氘、卤素、氧代基中的一个或多个取代基所取代；优选氢、 卤素、氨基、C 1-3烷基、C 3-6环烷基或3-6元杂环基，其中所述的C 1-3烷基、C 3-6环烷基和3-6元杂环基任选进一步被氘、卤素、氧代基中的一个或多个取代基所取代；进一步优选氨基、氯、环丙基、氮杂环丁基、四氢吡咯基、吗啡啉基、
Figure PCTCN2021085155-appb-000004
在本发明进一步优选的实施方式中，所述R 4选自氢、卤素、C 1-6烷基或C 3-8环烷基；优选氢、卤素、C 1-3烷基或C 3-6环烷基；进一步优选氢、氟、氯、甲基或环丙基。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述R 5和R 6各自独立地选自氢、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 2-6烯基或C 3-8环烷基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 2-6烯基和C 3-8环烷基，任选进一步被氘、卤素、C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；优选氢、C 1-3烷基、C 2-4烯基或C 3-6环烷基，其中所述的C 1-3烷基、C 2-4烯基和C 3-6环烷基，任选进一步被氘、卤素、C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；进一步优选氢、甲基、乙基、异丙基、乙烯基、环丙基、
Figure PCTCN2021085155-appb-000005
Figure PCTCN2021085155-appb-000006
或者，R 5和R 6链接形成一个C 3-8环烷基、6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 3-8环烷基、6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被选自氘、卤素或C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；优选C 3-6环烷基、苯基或5-6元杂芳基，其中所述的C 3-6环烷基、苯基和5-6元杂芳基，任选进一步被选自氘、卤素或C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；进一步优选
Figure PCTCN2021085155-appb-000007
Figure PCTCN2021085155-appb-000008
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物结构如式(II)所示：
Figure PCTCN2021085155-appb-000009
其中：
环A选自C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-10芳基或5-12元杂芳基；
R a选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、 C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基；且
x为0、1、2或3。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述环A为苯基。
本发明还提供一种制备通式(I)所示化合物的晶型的方法，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱，用不良性溶剂混悬，得到混悬液；悬浮密度优选为50～200mg/mL；
2)将步骤1)所得混悬液在0～40℃下振摇1～10天；
3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重得到目标产物；
其中：
所述步骤1)的不良性溶剂选自丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮；优选3-戊酮、乙腈、二氯甲烷或1,4-二氧六环。
本发明还提供一种制备通式(I)所示化合物的晶型的方法，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱，用良性溶剂溶解；
2)在0～25℃下向步骤1)所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出；
3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重得到目标产物；
其中：
所述步骤1)的良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮；优选N，N-二甲基甲酰胺或乙腈。
所述步骤2)的反溶剂选自庚烷、水、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚；优选水。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型A，X-射线粉末衍射图谱在2θ为9.0°、15.2°、20.2°和23.0°处具有衍射峰；进一步还包含在2θ为.7°、12.3°、15.4°、19.8°、23.5°和27.1°处具有衍射峰；更进一步还包含在2θ为4.5°、13.7°、14.6°、16.8°、18.1°、21.5°、27.7°和28.2°处具有衍射峰。
使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表1 所示。
表1
Figure PCTCN2021085155-appb-000010
本发明所述的化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型A，其DSC图谱基本如图1所示；其TGA图谱基本如图2所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型B，X-射线粉末衍射图谱在2θ为7.9°、14.6°和16.2°处具有衍射峰；还包含在2θ为18.1°、19.2°、20.2°、24.7°和26.8°处具有衍射峰；进一步还包含在2θ为14.9°、27.2°、28.1°和30.5°处具有衍射峰；更进一步还包含在2θ为13.9°、15.6°、16.9°和19.8°处具有衍射峰；最优选地，其XRPD图谱基本如图3所示，。
使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表2所示。
表2
Figure PCTCN2021085155-appb-000011
本发明所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型B，其DSC图谱基本如图4所示；其TGA图谱基本如图5所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型C，X-射线粉末衍射图谱在2θ为9.4°、14.5°和20.3°处具有衍射峰；还包含在2θ为22.2°、22.7°、22.9°和26.2°处具有衍射峰；进一步还包含在2θ为8.2°、 14.9°、23.8°、27.5°、28.1°、29.3°、30.2°和31.7°处具有衍射峰；更进一步还包含在2θ为12.0°、16.4°、25.5°、28.6°、34.8°和35.4°处具有衍射峰。
使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表3所示。
表3
Figure PCTCN2021085155-appb-000012
本发明所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型C，其DSC图谱基本如图6所示；其TGA图谱基本如图7所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型D，X-射线粉末衍射图谱在2θ为5.1°、13.4°和18.3°处具有衍射峰，还包含在2θ为18.0°、19.9°、20.7°和22.6°处具有衍射峰；进一步还包含在2θ为13.7°、 16.8°、17.7°、19.0°、22.3°和27.5°处具有衍射峰；更进一步还包含在2θ为16.1°、22.9°、24.9°、25.5°和28.9°处具有衍射峰。
使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表4所示。
表4
Figure PCTCN2021085155-appb-000013
本发明所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型D，其DSC图谱基本如图8所示；其TGA图谱基本如图9所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型E，X-射线粉末衍射图谱在2θ为8.4°、15.3°和18.3°处具有衍射峰；还包含在2θ为20.7°、22.5°、26.7°和27.6°处具有衍射峰；进一步还包含在2θ为13.5°、14.6°、15.8°、16.0°、16.9°、19.2°、20.4°、24.0°、24.4°、25.5°、28.2°、28.9°、31.8°和32.2°处具有衍射峰；更进一步还包含在2θ为5.2°、9.5°、10.4°、17.2°、17.7°、19.5°、20.0°、26.3°、28.7°、30.5°、31.0°和34.1° 处具有衍射峰。
使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表5所示。
表5
Figure PCTCN2021085155-appb-000014
本发明所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型E，其DSC图谱基本如图10所示；其TGA图谱基本如图11所示。
本发明的目的还在于提供化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型。
在本发明进一步优选的实施方式中，提供化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为20.0±0.2°处具有衍射峰；或者在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在17.1±0.2°处具有衍射峰；或者在22.6±0.2°处具有衍射峰；或者在10.7±0.2°处具有衍射峰；或者在25.6±0.2°处具有衍射峰；或者在12.7±0.2°处具有衍射峰；或者在24.5±0.2°处具有衍射峰；或者在19.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.4±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
例如，所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
20.0±0.2°和19.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°和17.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°和17.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°和22.6±0.2°处；
或者，22.6±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，10.7±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°和17.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°和22.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°和22.6±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°和22.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、10.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2° 处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和10.7±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°、31.5±0.2°、29.2±0.2°、20.6±0.2°、21.4±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
例如，所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、12.7±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2° 和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和29.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°、31.5±0.2°、29.2±0.2°、20.6±0.2°、21.4±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
例如，所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和22.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、19.1±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、 19.1±0.2°、18.4±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°、31.5±0.2°、29.2±0.2°、20.6±0.2°、21.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°、27.4±0.2°、33.1±0.2°、14.5±0.2°中的一处或多处具有衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者7-8处，或者10-12处，或者15-18处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、8处、10处、12处、16处、18处有衍射峰；
例如，所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和22.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和10.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和25.6±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和12.7±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2° 和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和19.1±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和18.4±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、6.2±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、19.1±0.2°、6.2±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和6.2±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、6.2±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处；
或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、24.5±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°、21.1±0.2°、15.8±0.2°和31.5±0.2°处。
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表6所示。
表6
Figure PCTCN2021085155-appb-000015
Figure PCTCN2021085155-appb-000016
本发明化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A，其X-射线粉末衍射图谱基本如图12所示；其DSC图谱如图13所示；其TGA图谱如图14所示。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A为含溶剂或不含溶剂的晶型，其中所述的溶剂选自水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮、正庚烷、庚烷、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、环己烷、甲基叔丁基醚和异丙醚中的一种或多种。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A含溶剂的个数为为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A为非溶剂晶型，优选为无水晶型。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A为水合物晶型，水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明进一步优选的实施方式中，提供化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为20.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在12.2±0.2°处具有衍射 峰；或者在25.1±0.2°处具有衍射峰；或者在21.5±0.2°处具有衍射峰；或者在18.5±0.2°处具有衍射峰；或者在17.8±0.2°处具有衍射峰；或者在20.0±0.2°处具有衍射峰；或者在28.6±0.2°处具有衍射峰；或者在5.1±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
例如，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
20.2±0.2°合22.2±0.2°处；
或者，20.2±0.2°和12.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°和12.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°和25.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°和25.1±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、25.1±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°和25.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和25.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、18.5±0.2°和17.8±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和17.8±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和17.8±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和17.8±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和20.0±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和20.0±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和17.8±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°、24.5±0.2°、13.2±0.2°、12.4±0.2°、29.2±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
例如，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和5.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°和24.5±0.2°处；
20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°和13.2±0.2°处；
20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°和12.4±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°、24.5±0.2°、13.2±0.2°、12.4±0.2°、29.2±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
例如，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和25.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和17.8±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和20.0±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和22.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、18.5±0.2°和28.6±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和28.6±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和28.6±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和5.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和5.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和28.6±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、5.1±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、5.1±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、5.1±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2和28.6±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、5.1±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、5.1±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、5.1±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°、5.1±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°、5.1±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°和24.5±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8 ±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°、24.5±0.2°、13.2±0.2°、12.4±0.2°、29.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°、16.9±0.2°、30.5±0.2°、15.5±0.2°中的一处或多处具有衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者7-8处，或者10-12处，或者15-18处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、8处、10处、12处、16处、18处有衍射峰；
例如，所述晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和25.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和18.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和17.8±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和20.0±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°、10.8±0.2°和9.9±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、10.8±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和22.2±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和22.2±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和28.6±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和22.2±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和28.6±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和28.6±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和5.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和5.1±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、10.8 ±0.2°、9.9±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°和9.9±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°、9.9±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、5.1±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和14.3±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、5.1±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和24.5±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、5.1±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2°、28.6±0.2°、10.8±0.2°、9.9±0.2°和13.2±0.2°处；
或者，12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°、9.9±0.2°和13.2±0.2°处。
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表7所示。
表7
Figure PCTCN2021085155-appb-000017
本发明化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B，其X-射线粉末衍射图谱基本如图15所示；其DSC图谱如图16所示。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B为含溶剂或不含溶剂的晶型，其中所述的溶剂选自水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮、正庚烷、庚烷、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、环己烷、甲基叔丁基醚和异丙醚中的一种或多种。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B含溶剂的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B为非溶剂晶型，优选为无水晶型。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶 -4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型B为水合物晶型，水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明进一步优选的实施方式中，提供化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为17.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.8±0.2°处具有衍射峰；或者在26.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.2±0.2°处具有衍射峰；或者在24.0±0.2°处具有衍射峰；或者在22.8±0.2°处具有衍射峰；或者在10.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.5±0.2°处具有衍射峰；或者在17.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
例如，所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
17.8±0.2°和19.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°和26.1±0.2°处；
或者，19.8±0.2°和26.1±0.2°处；
或者，26.1±0.2°和18.2±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°和26.1±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°和18.2±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°和18.2±0.2°处；
或者，26.1±0.2°、18.2±0.2°和24.0±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和18.2±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°和24.0±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°和24.0±0.2°处；
或者，26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和22.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°和24.0±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和22.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和10.5±0.2°处；
或者，26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和10.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和22.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和10.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和10.5±0.2°处；
或者，26.1±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和22.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和10.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和10.5±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°、22.3±0.2°、24.3±0.2°、14.5±0.2°、30.1±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
例如，所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和21.8±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和14.5±0.2°处；
或者，19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和14.5±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°、22.3±0.2°、24.3±0.2°、14.5±0.2°、30.1±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
例如，所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和18.2±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和24.0±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和22.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和10.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和17.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和17.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和17.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和21.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和21.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、21.8±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、21.8±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、21.8±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、17.5±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、21.8±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、17.5±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、21.8±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、17.5±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、21.8±0.2°和24.3±0.2°处。
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5 ±0.2°、21.5±0.2、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°、22.3±0.2°、24.3±0.2°、14.5±0.2°、30.1±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°、24.8±0.2°、13.2±0.2°、12.5±0.2°中的一处或多处具有衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者7-8处，或者10-12处，或者15-18处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、8处、10处、12处、16处、18处有衍射峰；
例如，所述晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和18.2±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和24.0±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和22.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和10.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和21.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和17.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和17.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和17.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和21.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和21.8±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、21.8±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和19.5±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、21.8±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和22.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和24.3±0.2°处；
或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、21.8±0.2°、23.4±0.2°、12.0±0.2°和24.3±0.2°处。
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表8所示。
表8
Figure PCTCN2021085155-appb-000018
本发明化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C，其X-射线粉末衍射图谱基本如图17所示；其DSC图谱如图18所示。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C为含溶剂或不含溶剂的晶型，其中所述的溶剂选自水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、 88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮、正庚烷、庚烷、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、环己烷、甲基叔丁基醚和异丙醚中的一种或多种。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C含溶剂的个数为为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C为非溶剂晶型，优选为无水晶型。
在本发明优选的实施方案中，所述化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型C为水合物晶型，水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明进一步优选的实施方式中，所述晶型的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置分别与对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优先±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°。
在本发明进一步优选的实施方式中，化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型A、晶型B和晶型C的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置分别与图1、图4和图6对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优先±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°。
本发明还提供一种制备化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型的方法，具体包括如下步骤：
1)称取适量的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺自由碱，用不良溶剂混悬，悬浮密度优选为50～200mg/mL；
2)将步骤1)所得混悬液在一定温度下振摇一定时间，温度优选0～60℃，时间优选1～10天；
3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重得到目标产物；
其中：
所述的不良性溶剂选自丙酮、乙酸乙酯、醋酸异丙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、 2-丁酮、3-戊酮、甲基叔丁基醚或水，优选丙酮、乙酸乙酯、醋酸异丙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、甲苯、异丙醇、2-丁酮、3-戊酮、甲基叔丁基醚和水中的一种或多种；
或者，具体包括如下步骤：
1)称取适量的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺自由碱，用良溶剂溶解；
2)在一定温度下向步骤1)所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出，温度优选0～25℃；
3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重得到目标产物；
其中：
所述的良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮和N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种，优选N-甲基吡咯烷酮；
所述的反溶剂选自庚烷、水、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚；
或者，具体包括如下步骤：
1)称取适量的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺自由碱，用良溶剂加热溶解；
2)将步骤1)所得溶液迅速置于低温下，搅拌至固体析出，温度优选-10～5℃；
3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重得到目标产物；
其中：
所述的良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮和N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种，优选2-甲基四氢呋喃。
本发明的目的还在于提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的所述通式(I)所示化合物或化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的目的还在于提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的所述通式(I)所示化合物或化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的目的还在于提供了所述通式(I)所示化合物晶型化合物(S)-1'-(6- 氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺以及其药物组合物在制备SHP-2抑制剂药物中的应用。
本发明的目的还在于提供了所述通式(I)所示化合物晶型化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺以及其药物组合物在制备SHP-2抑制剂药物中的应用。
以上所述的用途，其中所述的应用为在制备治疗努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、食管癌、头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌及其结肠癌等疾病或病症的用途；优选非小细胞肺癌、食管癌和头颈部肿瘤。
附图说明
图1为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型A的DSC图示。
图2为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型A的TGA图示。
图3为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B的XRPD图示。
图4为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B的DSC图示。
图5为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B的TGA图示。
图6为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型C的DSC图示。
图7为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型C的TGA图示。
图8为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型D的DSC图示。
图9为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型D的TGA图示。
图10为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型E的DSC图示。
图11为(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型E的TGA图示。
图12为(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A的XRPD图示。
图13为(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A的DSC图示。
图14为(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A的TGA图示。
图15为(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型B的XRPD图示。
图16为(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型B的DSC图示。
图17为(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型C的XRPD图示。
图18为(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型C的DSC图示。
具体实施方式
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本发明优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基、羟基取代的烷基和氰基取代的烷基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至8个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环 己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基，优选环丙基、环丁基、环己基、环戊基和环庚基。所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子；最优选包含3至8个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括氧杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基等，优选氧杂环丁烷基、吡咯烷酮基、四氢呋喃基、吡唑烷基、吗啉基、哌嗪基和吡喃基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基；其中涉及到的螺环、稠环和桥环的杂环基任选与其他基团通过单键相连接，或者通过环上的任意两个或者两个以上的原子与其他环烷基、杂环基、芳基和杂芳基进一步并环连接。杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环。芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、噁二唑、吡嗪基等，优选为噁唑基、噁二唑、四氮唑、三氮唑基、噻吩基、咪唑基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基或噻唑基；更有选噁唑基、噁二唑、四氮唑、三氮唑基、噻吩基、吡啶基、噻唑基和嘧啶基。所述 杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。优选含有1至8个碳原子的烷氧基，更优选1至6个碳原子的烷氧基，最更优选1至3个碳原子的烷氧基。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“烯基”指链烯基，又称烯烃基，其中所述的烯基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH 2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO 2。
“THF”指四氢呋喃。
“EtOAc”指乙酸乙酯。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“LDA”指二异丙基胺基锂。
“DMAP”指4-二甲氨基吡啶。
“EtMgBr”指乙基溴化镁。
“HOSu”指N-羟基琥珀酰亚胺。
“EDCl”指1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
“IPA”指异丙醇。
“MeOH”指甲醇。
“EtOH”指乙醇。
“DMF”指N、N-二甲基甲酰胺。
“DIPEA”指N，N-二异丙基乙胺。
“HEPES”指4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
“X选自A、B、或C”、“X选自A、B和C”、“X为A、B或C”、“X为A、B和C”等不同用语均表达了相同的意义，即表示X可以是A、B、C中的任意一种或几种。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“立体异构”包含几何异构(顺反异构)、旋光异构、构象异构三类。
本发明所述的氢原子均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢原子也均可被氘原子取代。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
X-射线粉末衍射图谱(XRPD)，是指实验观测到的衍射图或源自其的参数，通过峰位置(横坐标)及峰强度(纵坐标)表征X-射线粉末衍射图谱。本领域技术人员能够理解，其中的实验误差取决于仪器的条件、样品的准备和样品的纯度。特别是，本领域技术人员公知，X射线衍射图通常会随着仪器的条件而有所改变，本领域技术人员应理解XRPD合适的误差容限可以为：2θ±0.5°；2θ±0.4°；2θ±0.3°；2θ±0.2°。特别需要指出的是，X射线衍射图的相对强度也可能随着实验条件的变化而变化，所以峰强度的顺序不能作为唯一或决定性因素。另外，由于样品高度等实验因素的影响，会造成峰角度的整体偏移，通常允许一定的偏移。因而，本领域技术人员可以理解的是，任何具有与本发明图谱的特征峰相同或相似的晶型均属于本发明的范畴之内。
“TGA”是指热重分析(TGA)实验。
“DSC”是指差示扫描量热法(DSC)实验。
“HPLC”是指高效液相色谱(HPLC)实验。
“PK”是指药物代谢动力学(PK)实验。
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
一、化合物的制备
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，氘代甲醇(CD 3OD)和氘代氯仿(CDCl 3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200 Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C 18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
实施例1
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000019
第一步：3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000020
将3-氯-4-碘吡啶-2-胺(800mg，3.15mmol)，3-巯基丙酸-2-乙基己酯(687mg，3.15mmol)溶于1,4-二氧六环(7mL)，置于微波反应管中，加入DIPEA(813mg，6.3mmol)、醋酸钯(35mg，0.16mmol)以及Xantphos(109mg，0.19mmol)，氮气鼓泡3分钟后，微波加热至100℃反应1小时。待反应液冷却后，将反应液用20mL乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤除去不溶物，滤液旋干后柱层析纯化(15～25％乙酸乙酯/石油醚)，得棕色固体产物(1.03g，产率95％)。
MS m/z(ESI):345.1[M+H] +.
第二步：3-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000021
将3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯(500mg，1.45mmol)溶于甲苯和水的(甲苯/水＝10mL/1mL)混合溶剂，置于封管中，加入环丙基三氟硼酸钾(280mg，1.89mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(52mg，0.145mmol)、醋酸钯(16mg，0.073mmol)以及碳酸铯(1.41g，4.35mmol)，氮气鼓泡3分钟后，加热至100℃反应5小时。待反应液冷却至室温，向反应液中加入20mL饱和NH 4Cl溶液，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)；乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥，柱层析(50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得棕色油状产物(220mg，产率43％)。
MS m/z(ESI):350.1[M+H] +.
第三步：2-氨基-3-环丙基吡啶-4-硫醇酸钾的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000022
将3-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯(220mg，0.63mmol)溶于10mL乙醇中，加入叔丁醇钾(74mg，0.66mmol)，室温搅拌1小时。将反应液浓缩至干，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):165.1[M-H] -.
第四步：3-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000023
将2-氨基-3-环丙基吡啶-4-硫醇酸钾(128mg，0.63mmol)、2-氨基-3-溴-6-氯吡嗪(149mg，0.72mmol)溶于7mL 1,4-二氧六环，置于微波反应管中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(33mg，0.036mmol)、Xantphos(42mg，0.072mmol)以及DIPEA(279mg，2.16mmol)，氮气鼓泡3分钟。将反应液微波加热至110℃反应1小时；待反应液冷却至室温后，用20mL乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤后，滤液旋干，柱层析(50～70％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得棕色固体产物(50mg，产率24％)。
MS m/z(ESI):294.1[M+H] +.
第五步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000024
取(S)-1-(((R)-叔丁基亚硫酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(69mg，0.17mmol)溶于3mL二氯甲烷，加入1mL三氟乙酸，室温下反应1小时。将此反应液浓缩至干，用5mL DMF溶解后，加入碳酸钾(352mg，2.55mmol)、3-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(50mg，0.17mmol)，氮气保护下加热至100℃反应12小时。待反应液冷却后，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)；乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×3)，无水硫酸钠干燥后柱层析(75～80％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得油状产物(20mg，产率21％)。
MS m/z(ESI):564.1[M+H] +.
第六步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000025
将(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20mg，0.035mmol)溶于5mL二氯甲烷，加入1mL 4M HCl的二氧六环溶液，于室温反应1小时。将反应液浓缩至干，用5mL甲醇溶解后，用7M NH 3的甲醇溶液调节pH至碱性，将此反应液旋干后柱层析(0～10％MeOH in DCM)，所得粗品用薄层层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：1)得棕色固体产物(9.0mg，产率56％)。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ7.90(d,J＝5.4Hz,1H),7.61(s,1H),7.40–7.33(m,1H),7.27–7.16(m,3H),6.57(d,J＝5.4Hz,1H),4.28(d,J＝13.6Hz,2H),3.96(s,1H),3.30–3.19(m,2H),3.15(d,J＝15.7Hz,1H),2.81(d,J＝15.7Hz,1H),1.90–1.78(m,2H),1.82–1.70(m,1H),1.58(d,J＝13.5Hz,1H),1.43(d,J＝13.1Hz,1H),1.26–1.15(m,2H),0.94–0.85(m,2H).
MS m/z(ESI):460.1[M+H] +.
实施例2
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000026
实施例2参考实施例1实验方案制备。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ7.88(d,J＝5.5Hz,1H),7.60(s,1H),7.38–7.30(m,1H),7.25–7.15(m,3H),6.54(d,J＝5.5Hz,1H),4.26(d,J＝13.7Hz,2H),3.95(s,1H),3.28–3.17(m,2H),3.13(d,J＝15.6Hz,1H),2.79(d,J＝15.6Hz,1H),1.88–1.74(m,2H),1.80–1.70(m,1H),1.56(d,J＝13.7Hz,1H),1.43(d,J＝13.1Hz,1H),1.24–1.13(m,2H),0.93–0.83(m,2H).
MS m/z(ESI):479.1[M+H] + ，481.1[M+2+H] +.
实施例3
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000027
第一步：3-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000028
将2,3-二氯-4-碘吡啶(1.0g，3.65mmol)，3-巯基丙酸-2-乙基己酯(0.88g，4.03mmol)溶于7mL 1,4-二氧六环，置于微波反应管中，加入DIPEA(0.95g，7.34mmol)、醋酸钯(41mg，0.18mmol)以及Xantphos(127mg，0.22mmol)，氮气鼓泡3分钟后，微波加热至100℃反应1小时。待反应液冷却后，将反应液用20mL乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤除去不溶物，滤液旋干后柱层析(10～15％乙酸乙酯/石油醚)，得棕色油状物(1.29g，产率97％)。
MS m/z(ESI):364.1[M+H] +.
第二步：3-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000029
将3-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯(1.29g，3.54mmol)溶于甲苯和水的(甲苯/水＝20mL/2mL)混合溶剂，置于封管中，加入环丙基三氟硼酸 钾(624mg，4.25mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(95mg，0.267mmol)、醋酸钯(40mg，0.178mmol)以及碳酸铯(3.43g，3.54mmol)，氮气鼓泡3分钟后，加热至100℃反应5小时。待反应液冷却至室温，向反应液中加入20mL饱和NH 4Cl溶液，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)；乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥，柱层析(5～8％乙酸乙酯/石油醚)，得黄色油状物(600mg，产率45％)。
MS m/z(ESI):370.1[M+H] +.
第三步：3-氯-2-环丙基吡啶-4-硫醇酸钾的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000030
将2-乙基己基3-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)丙酸酯(600mg，1.62mmol)溶于15mL乙醇中，加入叔丁醇钾(190mg，1.70mmol)，室温搅拌1小时。将反应液浓缩至干，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):186.1[M+H] +。
第四步：6-氯-3-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000031
将3-氯-2-环丙基吡啶-4-硫醇酸钾(120mg，0.54mmol)、2-氨基-3-溴-6-氯吡嗪(112mg，0.54mmol)溶于5mL 1,4-二氧六环，置于微波反应管中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(25mg，0.027mmol)、Xantphos(31mg，0.054mmol)以及DIPEA(209mg，1.62mmol)，氮气鼓泡3分钟。将反应液微波加热至110℃反应1小时；待反应液冷却至室温后，用20mL乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤后，滤液旋干柱层析(10～20％乙酸乙酯/石油醚)，得灰白色固体产物(135mg，产率80％)。
MS m/z(ESI):313.1[M+H] +.
第五步：叔丁基1-羰基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000032
将1-茚酮(5.14g，38.9mmol)、N,N-双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(9.42g，38.9mmol)溶于100mL DMF中，冰浴下分批加入60％氢化钠(3.89g，97.3mmol)。 将反应液转至油浴，氮气保护下加热至60℃反应过夜。待反应液冷却后，向反应液中加入250mL饱和氯化钠溶液，用乙酸乙酯萃取(150mL×2)；乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗涤(100mL×3)，无水MgSO 4干燥后，柱层析(10～20％乙酸乙酯/石油醚)，得棕色油状物粗品(2.80g，产率23％)。
MS m/z(ESI):202.1[M-Boc+H] +.
第六步：(R,E)-1-((叔丁基亚硫酰基)亚氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000033
将钛酸四乙酯(40mL)加热至90℃，加入1-羰基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(2.80g，9.27mmol)、(R)-(+)-叔丁基亚磺酰胺(3.36g，27.8mmol)；氮气保护下90℃反应24小时。待反应完毕后将反应液倒入400mL乙酸乙酯中，搅拌下缓慢加入400mL饱和氯化钠溶液，并于室温搅拌20分钟。用硅藻土将析出的固体过滤，所得滤液分层后将乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，柱层析(20～30％乙酸乙酯/石油醚)，得棕色油状产物(2.20g，产率59％)。
MS m/z(ESI):405.1[M+H] +.
第七步：(S)-1-(((R)-叔丁基亚硫酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000034
将(R,E)-1-((叔丁基亚硫酰基)亚氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(2.20g，5.44mmol)溶于30mL四氢呋喃，置于-78℃，于此温度下分批加入硼氢化钠(308mg，8.16mmol)，氮气保护下令反应液逐渐升温至室温并搅拌过夜。向反应液中加入200mL饱和氯化钠溶液，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗涤(100mL)，无水硫酸钠干燥后，柱层析(20～35％乙酸乙酯/石油醚)，得棕色泡沫状固体(1.21g，产率54％)。
MS m/z(ESI):407.1[M+H] +.
第八步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000035
取(S)-1-(((R)-叔丁基亚硫酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(100mg，0.25mmol)溶于3mL二氯甲烷，加入1mL三氟乙酸，室温下反应1小时。将此反应液浓缩至干，用5mL DMF溶解后，加入碳酸钾(517mg，3.75mmol)、6-氯-3-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺(78mg，0.25mmol)，氮气保护下加热至100℃反应12小时。待反应液冷却后，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)；乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×3)，无水硫酸钠干燥后柱层析(50％乙酸乙酯/石油醚)，得油状产物(26mg，产率18％)。
MS m/z(ESI):583.1[M+H] +.
第九步：(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000036
将(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(26mg，0.044mmol)溶于5mL二氯甲烷，加入1mL 4M HCl的二氧六环溶液，于室温反应1小时。将反应液浓缩至干，用5mL甲醇溶解后，用7M NH 3的甲醇溶液调节pH至碱性，将此反应液旋干后柱层析(5～8％MeOH in DCM)，得淡黄色固体产物(12mg，产率57％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.03(d,J＝5.2Hz,1H),7.67(s,1H),7.44–7.37(m,1H),7.24(dd,J＝6.4,3.9Hz,3H),6.39(d,J＝5.2Hz,1H),4.85(s,2H),4.21–4.13(m,2H),4.07(s,1H),3.23–3.21(m,2H),3.13(d,J＝15.8Hz,1H),2.79(d,J＝15.7Hz,1H),2.57–2.48(m,1H),1.88–1.73(m,2H),1.63–1.56(m,1H),1.50–1.42(m,1H),1.09–1.00(m,4H).
MS m/z(ESI):479.1[M+H] +.
实施例4
(2R)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)螺[二环[3.1.0]己烷-3,4'-哌啶]-2-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000037
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ7.73–7.67(m,1H),7.65–7.60(m,1H),6.08–6.01(m,1H),4.53–4.41(m,2H),3.63–3.51(m,2H),3.14(p,J＝9.6Hz,1H),2.41–2.33(m,1H),1.56–1.40(m,3H),1.44–1.35(m,1H),1.39–1.19(m,4H),0.89–0.81(m,2H),0.76–0.60(m,2H),0.44–0.28(m,2H).
MS m/z(ESI):424.1[M+H] +.
实施例4参考实施例1实验方案制备。
实施例5
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000038
第一步：3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000039
3-溴-6-氯吡嗪-2-胺(4g,20mmol)，3-巯基丙酸(2-乙基)己酯(5.2g,24mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(916mg,1mmol),4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(1.16g,2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(5.12g,40mmol)在二氧六环(35mL)中100℃搅拌18小时。过滤反应液，滤饼用乙酸乙酯(30mL)洗两次，浓缩滤液后柱层析[洗脱剂:石油醚～石油醚/乙酸乙酯(90:10)]纯化得到3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯(5.5g,产率82％)棕色油状物。
MS m/z(ESI):146.1[M+H] +，148.1[M+2+H] +.
第二步：3-氨基-5-氯吡嗪-2-硫醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000040
往2-乙基己基3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸酯(5.5g,15.9mmol)的乙醇(100mL)溶液中加叔丁醇钾(2.7g,23.9mmol)，加完室温搅拌3小时。旋掉大约50mL乙醇，再把剩下的反应液倒入氯化铵水溶液(100mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃取两遍，二氯甲烷(100mL)萃取两遍，浓缩有机相，然后柱层析[洗脱剂:二 氯甲烷～二氯甲烷/甲醇(95:5)]纯化得到3-氨基-5-氯吡嗪-2-硫醇(1.8g,产率70％)墨绿色固体。
MS m/z(ESI):162.0[M+H] +，164.0[M+2+H] +
第三步：3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000041
3-氨基-5-氯吡嗪-2-硫醇(500mg,3.1mmol)，3-氯-4-碘吡啶-2-胺(789mg,3.1mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(142mg,0.16mmol)，4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(179mg,0.31mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.2g,9.3mmol)在二氧六环(10mL)中130℃微波搅拌1小时。浓缩反应液，柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇(99:1)]纯化得到粗品1g。用乙醇(5mL)打浆，过滤得到3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(580mg,产率65％)灰色固体。
MS m/z(ESI):288.0[M+H] +，290.0[M+2+H] +.
第四步：N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000042
往叔-丁基(1S)-1-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(150mg,0.37mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液里加三氟乙酸(1mL)，加完室温搅拌2小时。浓缩反应液得到N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺盐酸盐(150mg,产率100％)淡黄色固体。
MS m/z(ESI):307.2[M+H] +.
[α] 20 D＝1.773.
第五步：N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000043
N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺盐酸盐(150mg,0.37mmol)，3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(100mg,0.35mmol)和碳酸钾(335mg,2.43mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中100℃搅拌18小时。 浓缩反应液，柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇(97:3)]纯化得到N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg,产率52％)紫色固体。
MS m/z(ESI):558.1[M+H] +，560.2[M+2+H] +.
第六步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000044
N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg，0.18mmol)，N-溴代琥珀酰亚胺(64mg，0.36mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中室温搅拌18小时后，将反应液浓缩得粗品，柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇(95:5)]纯化得到(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(80mg,产率84％)土黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72-7.64(m,1H),7.36(d,J＝4Hz,1H),7.27-7.16(m,3H),6.58(s,2H),6.33(s,2H),5.80(d,J＝4Hz,1H),3.99(s,1H),3.94-3.83(m,2H),3.17(d,J＝4Hz,1H),3.14-2.98(m,3H),2.77-2.64(m,1H),1.97-1.74(m,2H),1.55(d,J＝12Hz,1H).
MS m/z(ESI):532.0[M+H] +,534.0[M+2+H] +.
实施例6
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000045
第一步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000046
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-溴吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(30mg,0.056mmol)，三甲基环三硼氧烷(789mg,3.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(4mg,0.0056mmol)，和碳酸钾(15mg,0.11 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中130℃微波搅拌1小时。浓缩反应液，高效液相色谱分离纯化得到(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.7mg,产率3％)灰色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.73-7.62(m,1H),7.35(d,J＝4Hz,1H),7.28-7.16(m,3H),6.57(s,2H),6.32(s,2H),5.78(d,J＝4Hz,1H),3.97(s,1H),3.94-3.81(m,2H),3.15(d,J＝4Hz,1H),3.12-2.95(m,3H),2.75-2.64(m,1H),2.41(s,3H),1.99-1.75(m,2H),1.58(d,J＝12Hz,1H).
MS m/z(ESI):468.1[M+H] +，470.1[M+2+H] +.
实施例7
(S)-1'-(5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000047
第一步：2-氯-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000048
将3-氯-2-环丙基吡啶-4-硫醇酸钾(120mg，0.54mmol)、2-溴-5-氯吡嗪(104mg，0.54mmol)溶于5mL二氧六环，置于微波反应管中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(25mg，0027mmol)、Xantphos(31mg，0.054mmol)以及DIPEA(209mg，1.62mmol)，氮气鼓泡3分钟。将反应液微波加热至110℃反应1小时；待反应液冷却至室温后，用20mL乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤后，滤液旋干柱层析(10～20％乙酸乙酯/石油醚)，得淡黄色油状物(120mg，产率74％)。
MS m/z(ESI):298.0[M+H] +.
第二步：(R)-N-((S)-1'-(5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000049
取叔丁基(S)-1-(((R)-叔丁基亚硫酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧 酸酯(81mg，0.20mmol)溶于3mL二氯甲烷，加入1mL三氟乙酸，室温下反应1小时。将此反应液浓缩至干，用5mL DMF溶解后，加入碳酸钾(373mg，2.70mmol)、2-氯-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪(55mg，0.18mmol)，氮气保护下加热至100℃反应12小时。待反应液冷却后，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)；乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×3)，无水硫酸钠干燥后柱层析(50％乙酸乙酯/石油醚)，得油状产物(48mg，产率47％)。
MS m/z(ESI):568.1[M+H] +.
第三步：(S)-1'-(5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000050
将(R)-N-((S)-1'-(5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(48mg，0.085mmol)溶于5mL二氯甲烷，加入1mL 4M HCl的二氧六环溶液，于室温反应1小时。将反应液浓缩至干，用5mL甲醇溶解后，用7M NH 3的甲醇溶液调节pH至碱性，将此反应液旋干后柱层析(0～10％MeOH in DCM)，得淡黄色固体产物(23mg，产率58％)。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.36(s,1H),8.30(s,1H),7.98(d,J＝5.3Hz,1H),7.42(d,J＝6.8Hz,1H),7.32–7.21(m,3H),6.43(d,J＝5.3Hz,1H),4.44–4.29(m,2H),4.14(s,1H),3.41–3.30(m,2H),3.19(d,J＝15.9Hz,1H),2.96(d,J＝15.9Hz,1H),2.60–2.49(m,1H),1.90–1.76(m,2H),1.67–1.54(m,2H),1.09–0.99(m,4H).
MS m/z(ESI):464.1[M+H] +.
实施例8
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000051
第一步：叔-丁基(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基甲酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000052
将乙基2-氯噻唑-4-羧酸酯(9.0g，46.97mmol)溶于150mL甲醇中，室温搅拌，加入NaBH 4(7.1g,分三批加入)，搅拌直至原料消失。然后，将反应液缓慢加入搅动的食盐水中，淬灭反应液，将其中的溶剂蒸出，乙酸乙酯萃取(200mL)萃取三次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝3：1)纯化得到无色油状液体目标产物(2-氯噻唑-4-基)甲醇(4.2g，产率60％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.11(s,1H),4.71(s,2H),2.22(s,1H).
MS m/z(ESI):150.0[M+H] +，152.0[M+2+H] +.
第二步：(2-氯噻唑-4-基)甲基甲磺酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000053
将(2-氯噻唑-4-基)甲醇(2.6g，17.4mmol)溶于40mL二氯甲烷中，氮气保护下，冰水浴条件下，滴加甲磺酰氯(1.6mL,20.88mmol,d＝1.48g/mL)，冰水浴条件下搅拌30min。反应结束，将反应液滴加到饱和氯化钠(100mL)中，二氯甲烷(100mL)萃取三次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到白色固体目标产物(2-氯噻唑-4-基)甲基甲磺酸酯(3.9g，产率97％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.35(s,1H),5.25(s,2H),3.07(s,3H).
第三步：4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔-丁基)-4-乙酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000054
将哌啶-1,4-二羧酸1-(叔-丁基)-4-乙酯(4.8g，18.59mmol)溶于THF(40mL)中，氮气保护下，冷却到-60℃，滴加二异丙基氨基锂(12.7mL，25.35mmol),滴加完毕，反应液在-60℃到-50℃条件下，搅拌30min。然后滴加(2-氯噻唑-4-基)甲基甲磺酸酯的THF(15mL)溶液。滴加完毕，在-60℃条件下搅拌30min，然后缓慢升温到室温搅拌2小时。反应结束，将反应液滴加到饱和食盐水(150mL)中。乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩浓缩得到粗品，柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝3：1)纯化得到黄色液体目标产物4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔-丁基)-4-乙酯(3.7g，产率56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ6.79(s,1H),4.14(dd,J＝7.1,3.1Hz,2H),3.91–3.85(m,2H),2.92(s,2H),2.86(dd,J＝16.3,13.6Hz,2H),2.10(d,J＝13.5Hz,2H),1.53(s,2H),1.44(s,9H),1.25–1.22(m,3H).
MS m/z(ESI):289[M-100+H] +.
第四步：2-氯-6-羰基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000055
将4-乙基4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔-丁基)-4-乙酯(4.1g，10.6mmol)溶于THF(40mL)中，氮气保护下，冷却到-70℃，滴加二异丙基氨基锂(13.4mL，26.5mmol),滴加完毕，反应液在-70℃条件下，搅拌30min。反应结束，将反应液滴加到饱和食盐水(150mL)中，乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝3：1)纯化得到黄色固体目标产物叔-丁基2-氯-6-羰基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(1.2g，产率33％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ4.15(s,4H),3.05(s,2H),2.06–1.93(m,2H),1.60(d,J＝12.7Hz,2H),1.48(s,9H).
MS m/z(ESI):243[M-100+H] +.
第五步：(R,Z)-6-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000056
将叔-丁基2-氯-6-羰基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(1.2g，3.5mmol)溶于THF(10mL)中，加入Ti(OEt) 4(10mL)，氮气保护下，加热到95℃条件下，搅拌10小时。冷却到室温，用乙酸乙酯(200mL)稀释反应液，搅拌条件下，加入水(20mL)，继续搅拌至浑浊，往其中加入无水硫酸钠，至混合物中固体呈沙状。过滤，滤液浓缩得到粗品，柱层析(PE/EA＝5：1)纯化得到黄色固体目标产物(R,Z)-6-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.1g，产率75％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ4.13(dd,J＝22.7,15.6Hz,4H),2.92(d,J＝2.9Hz,2H),2.05(s,2H),1.57(s,2H),1.48(s,9H),1.29–1.22(m,9H).
MS m/z(ESI):346[M-100+H] +.
第六步：(S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸酯和叔-丁基(S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨 基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000057
将(R,Z)-6-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(600mg，1.35mmol)溶于无水THF(10mL)中，置于50mL三口瓶中，氮气保护下，冷却到-70℃，滴加BH 3/THF(4.0mL，D＝1M)，滴加完毕，缓慢升温至室温，搅拌10小时。将反应液滴加到水中，用碳酸氢钠饱和溶液条件至pH＝9,乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，柱层析(PE/EA＝1：1)纯化得到黄色液体目标产物叔-丁基(S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(112mg，产率20％)和黄色液体(S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(56mg，产率9％)。
MS m/z(ESI):414.0[M+H] +；
MS m/z(ESI):448.1[M+H] + ，450.1[M+H+2] +.
第七步：(R)-N-((S)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000058
将(S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(112mg，0.27mmol)溶于无水CH 2Cl 2(5mL)中，加入三氟乙酸(1.0mL)，室温搅拌2小时，浓缩反应液得到黄色液体粗品(R)-N-((S)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(67mg，产率76％)。
MS m/z(ESI):314.0[M+H] +.
第八步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000059
将(R)-N-((S)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(67mg，0.21mmol)，6-氯-3-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺(78mg,0.25mmol)和DIPEA(0.4mL)溶于DMF(2.0mL),加热到110℃，搅拌10小时。将反应液溶于乙酸乙酯(100mL)，水洗(50mL)两次，饱和食盐水(50mL)洗三次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，柱层析(EtOAc)纯化得到黄色液体目标产物(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(30mg，产率19％)。
MS m/z(ESI):590.0[M+H] +.
第九步：(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000060
将(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(30mg，0.05mmol)溶于无水甲醇(3.0mL)中，加入盐酸/1,4-二氧六环(1.0mL)，室温搅拌0.5小时，浓缩反应液得到粗品，溶于水中，用碳酸氢钠饱和溶液调节pH＝10,二氯甲烷(50mL)萃取两次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，制备HPLC纯化得到黄色固体目标产物(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺(3.4mg，产率49％)。
1H NMR(500MHz,CDCl 3)δ8.77(s,1H),8.48(s,1H),7.45(d,J＝9.7Hz,2H),4.45(s,1H),3.38(d,J＝61.4Hz,4H),2.91(s,2H),2.22(s,1H),1.92(s,1H),1.71(s,1H),1.52(s,2H),1.33–0.92(m,8H).
MS m/z(ESI):486[M+H] +.
实施例9
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000061
第一步：(R)-N-((S)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000062
将(S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(56mg，0.13mmol)溶于无水CH 2Cl 2(5mL)中，加入三氟乙酸(1.0mL)，室温搅拌2小时，浓缩反应液得到黄色液体粗品(R)-N-((S)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(40mg，产率100％)。
MS m/z(ESI):348.0[M+H] +.
第二步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000063
将(R)-N-((S)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(40mg，0.1mmol)，6-氯-3-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺(15mg,0.05mmol)和DIPEA(0.1mL)溶于DMF(0.8mL)，加热到110℃，搅拌10小时。将反应液溶于乙酸乙酯(100mL)，水洗(50mL)两次，饱和食盐水(50mL)三次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，柱层析(EtOAc)纯化得到黄色液体目标产物(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8.2mg，产率26％)。
MS m/z(ESI):624.1[M+H] +.
第三步：(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000064
将(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8.2mg，0.01mmol)溶于无水甲醇(2.0mL)中，加入盐酸/二氧六环(0.5mL)，室温搅拌0.5小时，浓缩反应液得到粗品，溶于水中，用碳酸氢钠饱和溶液调节pH＝10,二氯甲烷(50mL)萃取两次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，制备HPLC纯化得到黄色固体目标产物(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺(1.5mg，产率22％)。
1H NMR(500MHz,CDCl 3)δ8.48(s,1H),7.45(d,J＝10.3Hz,2H),4.71(s,1H),3.41(d,J＝74.5Hz,4H),2.92(s,2H),2.16(d,J＝56.0Hz,2H),1.74(s,1H),1.52(s,2H),1.26(d,J＝15.5Hz,4H),1.03(d,J＝39.0Hz,4H).
MS m/z(ESI):520.1[M+H] +.
实施例10
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000065
第一步：2-乙基己基3-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫代)丙酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000066
将2,3-二氯-4-碘吡啶(2.0g，7.31mmol)，2-乙基己基3-巯基丙酸酯(1.8g，8.24mmol)，醋酸钯(82mg，0.37mmol)，Xantphos(254mg，0.44mmol)，二异丙基乙胺(1.9g，14.70mmol)于15mL二氧六环,氮气下100℃搅拌5h，冷至室温，加乙酸乙酯，过滤，浓缩至干，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3：1)纯化得到目标产物2-乙基己基3-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫代)丙酸酯(910mg，产率34％)。
MS m/z(ESI):364.1[M+H] +
第二步：2-乙基己基3-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000067
2-乙基己基3-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫代)丙酸酯(200mg，0.55mmol)，氮杂环丁烷(63mg，1.10mmol)，1,4-二氧六环(5mL),于120℃下微波搅拌3h。浓缩至干，加水，二氯甲烷提取，浓缩至干，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3：1)得到产物(130mg，产率62％)。
MS m/z(ESI):385.1[M+H] +.
第三步：2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-硫醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000068
3-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基己)酯(130mg，0.34mmol)，叔丁醇钾(38mg，0.34mmol)于无水乙醇(5mL)中,室温搅拌1h，浓缩至干得到产物，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):201.0[M+H] +.
第四步：3-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000069
2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-硫醇(上一步所得)、3-溴-6-氯吡嗪-2-胺(84mg，0.40mmol)、Pd 2(dba) 3(15mg，0.016mmol)、Xantphos(20mg，0.035mmol)，二异丙基乙胺(87mg，0.67mmol)加于5mL 1,4-二氧六环中,氮气下100℃搅拌过夜，冷至室温，浓缩至干，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1：1)纯化得到浅黄色固体(71mg,产率64％)。
MS m/z(ESI):328.0[M+H] +.
第五步：(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000070
(S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(100mg，0.25mmol)溶于二氯甲烷(1mL)，加1mL三氟乙酸，室温搅拌1h，浓缩至干得到油状物，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):307.1[M+H] +.
[α] 20 D＝1.773.
第六步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000071
3-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(71mg，0.22mmol)、(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(上一步反应所得)、碳酸钾(299mg，2.16mmol)于DMF(5mL)中，氮气下100℃微波搅拌2h，加水，乙酸乙酯提取。无水硫酸钠干燥，浓缩至干得到油状物，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):598.2[M+H] +.
第七步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000072
(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(上一步反应所得)溶于甲醇(5mL)，加4M HCl/1,4-二氧六环(5mL)室温搅拌1h，浓缩至干，柱层析纯化得到目标产物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(8.7mg，收率8％)。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.69(d,J＝5.4Hz,1H),7.58(s,1H),7.42–7.32(m,1H),7.28–7.14(m,3H),5.97(d,J＝5.5Hz,1H),4.35–4.16(m,6H),3.96(s,1H),3.28–3.19(m,2H),3.15(d,J＝15.7Hz,1H),2.81(d,J＝15.7Hz,1H),2.32(q,J＝7.5Hz,2H),1.80(dtd,J＝32.3,12.6,4.3Hz,2H),1.58(d,J＝13.4Hz,1H),1.42(d,J＝13.4Hz,1H),1.31(d,J＝16.2Hz,1H).
MS m/z(ESI):494.1[M+H] +.
实施例11
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000073
第一步：3-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000074
将3-((2,3-二氯吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯(200mg，0.55mmol)，吗啉(96mg，1.10mmol)和1,4-二氧六环(5mL)于120℃下微波搅拌8h。浓缩至干，加水，二氯甲烷提取。浓缩至干，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3：1)得到产物(152mg，产率67％)。
MS m/z(ESI):415.2[M+H] +.
第二步：3-氯-2-吗啉代吡啶-4-硫醇钾的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000075
3-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)丙酸(2-乙基)己酯(100mg，0.24mmol)，叔丁醇钾(27mg，0.24mmol)于无水乙醇(5mL)中室温搅拌1h。浓缩至干得到产物，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):231.0[M+H] +.
第三步：6-氯-3-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000076
将3-氯-2-吗啉代吡啶-4-硫醇钾(上一步所得)、3-溴-6-氯吡嗪-2-胺(60mg，0.29mmol)、Pd 2(dba) 3(11mg，0.012mmol)、Xantphos(14mg，0.024mmol)和二异丙基乙胺(62mg，0.48mmol)于5mL二氧六环中，氮气下100℃搅拌过夜。冷至室温，浓缩至干，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1：1)纯化得到浅黄色固体(60mg,产率70％)。
MS m/z(ESI):358.0[M+H] +.
第四步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000077
将6-氯-3-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-胺(60mg，0.22mmol)、(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(76mg，0.25mmol)、碳酸钾(231mg，1.67mmol)溶于DMF(5mL)中，氮气下100℃微波搅拌2h，加水，乙酸乙酯提取。无水硫酸钠干燥，浓缩至干得到油状物，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):628.2[M+H] +.
第五步：(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000078
(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(上一步反应所得)溶于甲醇(5mL)，加4M HCl/1,4-二氧六环(5mL)，室温搅拌1h，浓缩至干，柱层析纯化得到目标产物(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(6mg，2步收率5％)。
MS m/z(ESI):524.1[M+H] +.
实施例12
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-(3,3-二氟吖丁啶-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000079
实施例12的制备方法参考实施例11实验方案。
MS m/z(ESI):530.1[M+H] +,532.1[M+2+H] +.
实施例13
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000080
实施例13的制备方法参考实施例11实验方案。
MS m/z(ESI):508.1[M+H] +,510.1[M+2+H] +.
实施例14
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000081
实施例14的制备方法参考实施例11实验方案。
MS m/z(ESI):508.1[M+H] +,510.1[M+2+H] +.
实施例15
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1-甲基-4,6-二氢-1H-螺[环戊二烯并[d]咪唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000082
实施例15的制备方法参考实施例11实验方案。
MS m/z(ESI):498.1[M+H] +,500.1[M+2+H] +.
实施例16
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-(吖丁啶-1-基)-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-甲基-2,6-二氢-4H-螺[环戊二烯并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-4-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000083
实施例16的制备方法参考实施例11实验方案。
MS m/z(ESI):498.1[M+H] +,500.1[M+2+H] +.
实施例17
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000084
实施例17的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):538.1[M+H] +,540.1[M+2+H] +.
实施例18
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000085
实施例18的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):522.1[M+H] +,524.1[M+2+H] +.
实施例19
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000086
实施例19的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):529.1[M+H] +,531.1[M+2+H] +.
实施例20
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000087
实施例20的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):513.1[M+H] +,515.1[M+2+H] +.
实施例21
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-1-甲基-4,6-二氢-1H-螺[环戊二烯并[d]咪唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000088
实施例21的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):526.1[M+H] +,528.1[M+2+H] +.
实施例22
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-甲基-2,6-二氢-4H-螺[环戊二烯并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-4-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000089
实施例22的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):526.1[M+H] +,528.1[M+2+H] +.
实施例23
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000090
实施例23的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):529.1[M+H] +,531.1[M+2+H] +.
实施例24
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-吗啉代吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-甲基-2,6-二氢-4H-螺[环戊二烯并[c]吡唑-5,4'-哌啶]-4-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000091
实施例24的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):542.1[M+H] +,544.1[M+2+H] +.
实施例25
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000092
实施例25的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):484.1[M+H] +,486.1[M+2+H] +.
实施例26
(S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000093
实施例26的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):470.1[M+H] +,472.1[M+2+H] +.
实施例27
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000094
实施例27的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):436.1[M+H] +.
实施例28
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-环丙基-3-甲基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000095
实施例28的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):450.1[M+H] +.
实施例29
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-环丙基-3-氟吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000096
实施例29的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):454.1[M+H] +.
实施例30
(S)-1-(4-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)吖丁啶-2-酮的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000097
实施例30的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):508.1[M+H] +,510.1[M+2+H] +.
实施例31
(S)-1-(4-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000098
实施例31的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):522.1[M+H] +,524.1[M+2+H] +.
实施例32
(S)-1-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2-环丙基吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000099
第一步：(S)-1-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2-环丙基吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000100
0℃下，往(S)-3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-(2-环丙基吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(50mg,0.10mmol)的THF(10mL)溶液里滴加乙基溴化镁(0.1mL,0.30mmol,3M)和钛酸四异丙酯(43mg,0.15mmol)，升至室温搅拌 5小时。用饱和NH 4Cl水溶液淬灭反应，用二氯甲烷(3*20mL)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，制备HPLC纯化得到(S)-1-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2-环丙基吡啶-4-基)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇(5mg,产率10％)白色固体。
MS m/z(ESI):500.1[M+H] +.
实施例33
(S)-1-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000101
实施例33的制备方法参考实施例32实验方案。
MS m/z(ESI):534.1[M+H] +,536.1[M+2+H] +.
实施例34
(S)-1-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000102
实施例34的制备方法参考实施例32实验方案。
MS m/z(ESI):509.1[M+H] +,511.1[M+2+H] +.
实施例35
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000103
第一步：叔-丁基4-烯丙基-4-甲酰基哌啶-1-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000104
在0℃下，往叔-丁基4-甲酰基哌啶-1-羧酸酯(30g,14.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(300mL)中加叔丁醇锂(13.5g,16.9mmol)，加完搅拌30分钟，再加烯丙基溴(19g,16.2mmol)，加完0℃搅拌2小时。把反应液倒入氯化铵水溶液(1L)里，用乙酸乙酯萃取(1L×2)，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到2％]纯化得到无色油状产物叔-丁基4-烯丙基-4-甲酰基哌啶-1-羧酸酯(15g,产率42％)。第二步：叔-丁基4-烯丙基-4-(1-羟基烯丙基)哌啶-1-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000105
在-78℃下，往叔-丁基4-烯丙基-4-甲酰基哌啶-1-羧酸酯(25g,99mmol)的四氢呋喃(300mL)溶液中滴加乙烯基氯化镁(65mL,123.5mmol)，加完慢慢升至室温搅拌30分钟。把反应液倒入氯化铵水溶液(1L)里，用乙酸乙酯萃取(1L×2)，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到5％]纯化得到无色油状产物叔-丁基4-烯丙基-4-(1-羟基烯丙基)哌啶-1-羧酸酯(25g,产率90％)。
第三步：叔-丁基4-丙烯酰-4-烯丙基哌啶-1-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000106
在0℃下往叔-丁基4-烯丙基-4-(1-羟基烯丙基)哌啶-1-羧酸酯(25g,89mmol)的二氯甲烷(400mL)溶液里加戴斯马丁试剂(41.5g,98mmol)，加完40℃搅拌1小时。把反应液慢慢倒入碳酸氢钠/亚硫酸钠水溶液(1/1,1L)里，用二氯甲烷萃取(1L×2)，二氯甲烷层用饱和氯化钠水溶液(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后旋干，再加正庚烷(200mL)，搅拌5分钟，过滤掉不溶物，浓缩滤液得到无色油状产物叔-丁基4-丙烯酰-4-烯丙基哌啶-1-羧酸酯(24.8g,产率100％)，快速投下一步。
第四步：叔-丁基1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000107
叔-丁基4-丙烯酰-4-烯丙基哌啶-1-羧酸酯(24.8g,89mmol)和二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)(三环己基膦)钌(II)(1.2g,1.4mmol)在甲苯(700mL)中90℃搅拌2小时。待反应液冷却后，浓缩反应液，柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到20％]纯化得到红黑色固体产物叔-丁基1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(13g,产率58％)。
MS m/z(ESI):252.1[M+H] +.
第五步：叔-丁基2-溴-1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000108
往叔-丁基1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(13g,51.8 51.8mmol)的乙腈(300mL)溶液里加吡啶氮氧化物(11g,116mmol)，再加N-溴代丁二酰亚胺(28g,157mmol)，加完80℃搅拌18小时。待反应液冷却后，浓缩反应液，柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到20％]纯化得到黄色固体产物叔-丁基2-溴-1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(4.2g,产率25％)。
MS m/z(ESI):330.1[M+H] +，332.1[M+2+H] +.
第六步：叔-丁基2-环丙基-1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000109
叔-丁基2-溴-1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(4.2g,12.8mmol)，环丙基三氟硼酸钾(3.79g,25.6mmol)，碳酸铯(12.5g,38.4mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(731mg,0.9mmol)在二氧六环(100mL)和水(10mL)中100℃搅拌18小时。往反应液里加水淬灭(150mL)，用乙酸乙酯(150mL×2)萃取，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到12％]纯化得到黄色油状产物叔-丁基2-环丙基-1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(1g,产率27％)。
MS m/z(ESI):292.2[M+H] +
第七步：叔-丁基(R,Z)-1-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000110
叔-丁基2-环丙基-1-羰基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(1g,3.4mmol)和(R)-(+)-叔丁基亚磺酰胺(2g,17.2mmol)在钛酸四乙酯(30mL)中100℃搅拌18小时。冷却后，往反应液里加乙酸乙酯(100mL)，再倒入水(150mL)中，有大量白色固体析出，通过硅藻土过滤，分液，有机相旋干，柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到50％]纯化得到黄色油状产物叔-丁基(R,Z)-1-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(190mg,产率14％)。
MS m/z(ESI):395.2[M+H] +.
第八步：叔-丁基(S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000111
-78℃往叔-丁基(R,Z)-1-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(210mg,0.53mmol)的四氢呋喃(10mL)滴加二异丁基氢化铝(0.9mL,1mmol)，加完搅拌15分钟。在-78℃用十水硫酸钠淬灭反应，搅拌10分钟，过滤反应液，把滤液浓缩后柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到5％]纯化得到无色油状产物叔-丁基(S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(105mg,产率50％)。
MS m/z(ESI):397.2[M+H] +.
第九步：(S)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000112
往叔-丁基(S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-羧酸酯(105mg,0.27mmol)的甲醇(3mL)溶液里加盐酸二氧六环(15mL,60mmol)，加完室温搅拌1小时。旋干反应液得到白色固体产物(S)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺(105mg,产率100％)。
MS m/z(ESI):193.2[M+H] +.
第十步：(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000113
3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(76mg,0.26mmol)，(S)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺(80mg,0.2mmol)和碳酸钾(167mg,1.2mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中100℃搅拌7小时。往反应液里加水(60mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后爬板[洗脱剂:二氯甲烷/甲醇＝7/1]纯化得到黄色油状产物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺(37mg,产率41％)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.67–7.51(m,2H),5.92(d,J＝8Hz,1H),5.27(s,1H),4.26–4.04(m,2H),3.33(s,1H),3.27–3.08(m,2H),2.44–2.18(m,2H), 1.81–1.69(m,1H),1.68–1.47(m,2H),1.42–1.24(m,2H),0.81–0.60(m,2H),0.57–0.28(m,2H).
MS m/z(ESI):444.1[M+H] +，446.1[M+2+H] +.
实施例36
(S)-8-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000114
第一步：3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000115
2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇酸钾(1g，2.64mmol)，2-溴-5-氯吡嗪(597mg，3.11mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(284mg，0.311mmol)、氯[(4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(360mg，0.622mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(1.2g，9.33mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中90℃微波搅拌1小时，旋干后柱层析[洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚从0％到30％]纯化得到白色固体产物3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-胺(250mg，产率35％)。
MS m/z(ESI):273.0[M+H] +，275.0[M+2+H] +。
第二步：(S)-8-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000116
3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)吡啶-2-胺(100mg,0.368mmol)，(S)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺盐酸盐(105mg,0.265mmol)和碳酸钾(254mg,1.84mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中100℃搅拌6小时。往反应液加水(40mL)，用乙酸乙酯(40mL*2)萃取，浓缩有机相，薄层层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到黄色固体产物(S)-8-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺(40mg，产率35％)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.29(d,J＝16Hz,2H),7.60(d,J＝4Hz,1H),5.93(d,J＝4Hz,1H),5.31(s,1H),4.34–4.14(m,2H),3.43–3.35(m,2H),3.28–3.21(m,1H),2.45–2.21(m,2H),1.86–1.49(m,3H),1.44–1.22(m,2H),0.82–0.61(m,2H),0.58–0.30(m,2H).
MS m/z(ESI):429.1[M+H] +，431.1[M+2+H] +.
实施例37
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-甲基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000117
实施例37的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):432.1[M+H] +,434.1[M+2+H] +.
实施例38
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-乙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000118
实施例38的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):446.1[M+H] +,448.1[M+2+H] +.
实施例39
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-异丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000119
实施例39的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):460.1[M+H] +,462.1[M+2+H] +.
实施例40
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000120
实施例40的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):458.1[M+H] +,460.1[M+2+H] +.
实施例41
(S)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(6-氨基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000121
实施例41的制备方法参考实施例32实验方案。
MS m/z(ESI):500.1[M+H] +,502.1[M+2+H] +.
实施例42
(R)-1-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-基)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000122
实施例42的制备方法参考实施例32实验方案。
MS m/z(ESI):459.1[M+H] +,461.1[M+2+H] +.
实施例43
(S)-1-(3-(1-氨基-2-甲基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000123
实施例43的制备方法参考实施例32实验方案。
MS m/z(ESI):473.1[M+H] +,475.1[M+2+H] +.
实施例44
(S)-1-(3-(1-氨基-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)环丙烷-1-醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000124
实施例44的制备方法参考实施例32实验方案。
MS m/z(ESI):499.1[M+H] +,501.1[M+2+H] +.
实施例45
(S)-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000125
第一步：2-乙基己基3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000126
3-氯-4-碘吡啶-2-胺(3g，11.8mmol)，2-乙基己基3-巯基丙酸酯(2.9g，14.2mmol)，醋酸鈀(132mg，0.59mmol)，4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(683mg,1.18mmol)和N，N-二异丙基乙胺(561mg,4.3mmol)在二氧六环(80mL)中100℃搅拌18小时。过滤反应液，浓缩滤液后柱层析[洗脱剂:石油醚～石油醚/乙酸乙酯60:40)]纯化得到2-乙基己基3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸酯淡黄色固体(3.8g,产率94％)。
MS m/z(ESI):345.1[M+H] +，347.0[M+2+H] +.
第二步：2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钾的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000127
往2-乙基己基3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)丙酸酯(500mg,1.5mmol)的乙醇(30mL)溶液中加叔丁醇钾(174mg,1.53mmol)，加完40℃搅拌2小时。浓缩反应液得到2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钾(500mg)黄色固体，粗品直接投下一步。
MS m/z(ESI):161.0[M+H] +，163.0[M+2+H] +.
第三步：乙基6-溴-3-((S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000128
6-溴-3-氯-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(840mg,3mmol)，(S)-N-(1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)特戊酰茚二酮酰胺三氟乙酸盐(1.5g,3.6mmol)和碳酸钾(1.7g,12mmol)在乙腈(40mL)中55℃搅拌18小时。过滤反应液，浓缩滤液后柱层析[洗脱剂:石油醚～石油醚/乙酸乙酯60:40)]纯化得到6-溴-3-((S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯黄色固体(1.5g,产率91％)。
MS m/z(ESI):549.2[M+H] +，551.2[M+2+H] +.
第四步：6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000129
6-溴-3-((S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(798mg,1.45mmol)，2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钾(500mg,1.45mmol，粗品)，三(二亚苄基丙酮)二钯(66mg,0.073mmol)，4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(84mg,0.145mmol)和N，N-二异丙基乙胺(561mg,4.35mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中100℃微波搅拌1.5小时。过滤反应液，滤液浓缩后柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇(98.5:1.5)]纯化得到6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯黄色固体(500mg,产率55％)。
MS m/z(ESI):629.1[M+H] +，631.1[M+2+H] +.
第五步：(R)-N-((S)-1'-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000130
0℃往6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-1-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(500mg,0.795mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液里滴加四氢锂铝(0.7mL，2.5M)，0℃搅拌30分钟。用十水硫酸钠淬灭反应，搅拌10分钟。通过硅藻土过滤，滤饼用四氢呋喃(50mL)洗两遍，浓缩滤液，柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇(95:5)]纯化得到(R)-N-((S)-1'-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺黄色固体(220mg,产率47％)。
MS m/z(ESI):587.1[M+H] +，589.1[M+2+H] +.
第六步：(S)-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000131
往(R)-N-((S)-1'-(5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(220mg,0.375mmol)的甲醇(3mL)溶液里加盐酸二氧六环(20mL，4.0M)，室温搅拌30分钟。浓缩反应液，再加甲醇(10mL)溶解，氨水调碱，旋干后柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇(1％NH3-H2O)(95:5)]纯化得到(S)-(3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(115mg,产率63％)白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.59(d,J＝4Hz,1H),7.41–7.34(m,1H),7.27–7.16(m,3H),5.89(d,J＝4Hz,1H),4.64(s,2H),4.00(s,1H),3.88(d,J＝12Hz,2H),3.28–3.20(m,2H),3.14(d,J＝16Hz,1H),2.82(d,J＝16Hz,1H),2.48(s,3H),2.01–1.85(m,2H),1.67–1.58(m,1H),1.52–1.43(m,1H).
MS m/z(ESI):483.2[M+H] +，485.2[M+2+H] +.
实施例46
(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(6-氨基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000132
第一步：乙基6-溴-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000133
将(R)-N-((S)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(470mg，1.5mmol，1.0eq)，乙基6-溴-3-氯-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯(398mg,1.43mmol,0.95eq)和碳酸钾(1.04g,7.5mmol,5.0eq)溶于DMF(4.0mL)中。氮气保护下，加热到60℃，搅拌反应3小时。反应结束，浓缩除去DMF，粗品柱层析纯化(100％EtOAc in Petro ether)，得到黄色固体产物乙基6-溴-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯(600mg，产率72％)。
MS m/z(ESI):556.1[M+H] +,558.1[M+H+2] +.
第二步：乙基6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000134
将乙基6-溴-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯(600mg，1.08mmol，1.0eq),2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇酸钾(536mg，2.70mmol，2.5eq)溶于10mL DMF，置于微波反应管中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(50mg，0.054mmol，0.05eq)、Xantphos(62mg，0.11mmol，0.1eq)以及DIPEA(419mg，3.24mmol，3.0eq)，氮气鼓泡3分钟。将反应液微波加热至105℃反应75min；待反应液冷却至室温 后，用20mL乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤后，浓缩，粗品柱层析纯化(10％MeOH in CH 2Cl 2)，得黄色固体产物乙基6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯(360mg，产率52％)。
MS m/z(ESI):636.0[M+H] +,638.0[M+H+2] +.
第三步：乙基6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000135
将乙基6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯(360mg，0.57mmol，1.0eq)溶于40mL无水THF，氮气置换保护下。冷却到0℃，滴加LiAlH 4的四氢呋喃溶液(0.6mL,1.14mmol,2.0eq.，D＝2M)。滴加完毕，缓慢升到室温搅拌3小时。反应结束，将反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释，冷却到0℃，滴加2mL水，加入4mL 15％氢氧化钠水溶液，然后再加入6mL水，升到室温搅拌30分钟，加入适量无水硫酸钠，搅拌15分钟，过滤除去固体，滤液浓缩，粗品柱层析纯化(10％MeOH in CH 2Cl 2)，得到黄色固体产物乙基6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯(150mg，产率44％)。
MS m/z(ESI):594.1[M+H] +,596.1[M+H+2] +.
第四步：(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(6-氨基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000136
将乙基6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-((S)-6-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-羧酸酯(150mg，0.25mmol，1.0eq)溶于MeOH(5mL)，加入盐酸的二氧六环溶液(1.0mL,4M)，于室温反应1小时。将反应液浓缩至干，用5mL甲醇溶解后，用7M NH 3的甲醇溶液调节pH至碱性，浓缩反应液，先用正相柱纯化(10％MeOH in  CH 2Cl 2)，然后用反相柱纯化(30％MeCN in H 2O(0.1％NH 3.H 2O))，得灰色固体目标化合物(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(6-氨基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇(52mg，产率42％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.93(s,1H),7.62(s,1H),6.31(s,1H),5.72(s,1H),5.41(s,1H),4.45(s,2H),3.98(s,1H),3.84(s,2H),2.76(dd,J＝47.2,16.9Hz,4H),2.37(s,3H),1.60(dd,J＝165.2,116.4Hz,7H).
MS m/z(ESI):490.1[M+H] +,492.1[M+H+2] +.
实施例47
(S)-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-(6-氨基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噁唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000137
实施例47的制备方法参考实施例46实验方案。
MS m/z(ESI):474.1[M+H] +,476.1[M+2+H] +.
实施例48
(R)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-亚甲基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000138
实施例48的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):418.1[M+H] +,420.1[M+2+H] +.
实施例49
(S,E)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-亚乙基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000139
实施例49的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):432.1[M+H] +,434.1[M+2+H] +.
实施例50
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-(丙烷-2-亚基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000140
实施例50的制备方法参考实施例1实验方案。
MS m/z(ESI):446.1[M+H] +,448.1[M+2+H] +.
实施例51
(S,E)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-亚乙基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000141
实施例51的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):446.1[M+H] +,448.1[M+2+H] +.
实施例52
(R)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-亚甲基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000142
实施例52的制备方法参考实施例6实验方案。
MS m/z(ESI):432.1[M+H] +,434.1[M+2+H] +.
实施例53
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000143
第一步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢 螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000144
3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(200mg,0.694mmol)，(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(350mg,0.833mmol，[α] 20 D＝1.773)和碳酸钾(479mg,3.47mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中100℃搅拌8小时。待反应液冷却后，加入40mL水，用乙酸乙酯萃取(40mL×2)；乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇从0％到3％]纯化得到橘黄色固体产物(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(200mg,产率52％)。
MS m/z(ESI):558.2[M+H] +。
第二步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000145
往(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(188mg，0.337mmol)的甲醇(5mL)溶液里加盐酸二氧六环溶液(20mL,80mmol)，室温搅拌1小时。将反应液浓缩至干，用5mL甲醇溶解后，氨水调节pH至碱性，浓缩后柱层析[洗脱剂:二氯甲烷～二氯甲烷/甲醇从0％到7.5％]纯化得到白色固体产物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(130mg,产率85％)。
MS m/z(ESI):454.2[M+H] +。
第三步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000146
在-10℃下往(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(100mg,0.22mmol)的乙腈(10mL)溶液里加N-氟代双苯磺酰胺(69mg,0.22mmol)，加完慢慢升至室温，搅拌7小时。旋干反应液，薄层层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到土黄色固体产物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(28mg,产率27％)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.62(d,J＝4Hz,1H),7.42–7.33(m,1H),7.26–7.15(m,3H),6.00(d,J＝4Hz,1H),4.67–4.54(m,2H),4.30(d,J＝16Hz,2H),3.97(s,1H),3.16(d,J＝16Hz,1H),2.82(d,J＝16Hz,1H),1.95–1.78(m,2H),1.65–1.53(m,1H),1.48–1.38(m,1H).
MS m/z(ESI):472.1[M+H] +，474.1[M+2+H] +.
[α] 20 D＝-36.893.
实施例54
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺
Figure PCTCN2021085155-appb-000147
第一步：3-溴-2-(氯甲基)吡啶的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000148
将(3-溴吡啶-2-基)甲醇(7.5g,40mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，反应液均匀混合后，在冰浴条件下滴加SOCl 2(9.5g,80mmol)，搅拌1小时。反应液减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到无色液体目标化合物3-溴-2-(氯甲基)吡啶(5g，产率：61％)。
MS m/z(ESI):205.9[M+H] +.
第二步：1-(叔-丁基)4-甲基4-((3-溴吡啶-2-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000149
将1-(叔-丁基)4-甲基哌啶-1,4-二羧酸酯(7.7g，31.7mmol)、LDA(18.3mL，36.6mmol)加入THF(20mL)中，反应液在-60℃条件下反应1小时，3-溴-2-(氯甲 基)吡啶(5g,24.4mmol)加入反应液中，温度不变条件下继续反应2小时，减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色固体目标化合物1-(叔-丁基)4-甲基4-((3-溴吡啶-2-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸酯(9g，产率：89％)。
MS m/z(ESI):413.0[M+H] +.
第三步：叔-丁基5-羰基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000150
向1-(叔-丁基)4-甲基4-((3-溴吡啶-2-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸酯(9g，21.84mmol)中加入THF(100mL)，反应液温度降至-78℃后，缓慢将正丁基锂溶液(1.6N，17mL)滴入反应液中，在-78℃下继续反应1小时，加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色固体目标化合物叔-丁基5-羰基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(3g，产率：45％)。
MS m/z(ESI):303.1[M+H] +.
第四步：叔-丁基(R,Z)-5-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000151
将叔-丁基5-羰基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(3g,9.93mmol),(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.6g,29.8mmol)加入钛酸乙酯(50mL)中，反应液搅拌均匀，在110℃条件下反应13小时，反应温度降至常温，缓慢滴加水(100mL),有固体产生，再加入乙酸乙酯(200mL)，过滤，有机相减压浓缩，所得目标化合物叔-丁基(R,Z)-5-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(3g,产率：75％)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):406.1[M+H] +.
第五步：叔-丁基(S)-5-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-5,7-二氢螺[戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000152
将叔-丁基(R,Z)-5-((叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)亚氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(3g,7.41mmol)加入THF(40mL)中，在温度降至0℃条件下，向反应液中缓慢滴加BH 3(7.5mL,2N in THF)，滴加完毕后，保持温度，反应2小时。向反应液滴加甲醇(10mL)。减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色固体目标化合物叔-丁基(S)-5-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-5,7-二氢螺[戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(2.5g，产率83％)。
MS m/z(ESI):408.1[M+H] +.
第六步：(S)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000153
将叔-丁基(S)-5-(((R)-叔-丁基亚硫酰基<亚磺酰>)氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸酯(2.5g,6.14mmol)、盐酸二氧六环(10mL,4N)加入CH 2Cl 2(40mL)中，反应液在室温下，搅拌3小时，减压浓缩，所得目标化合物(S)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(1.5g)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):204.1[M+H] +.
第七步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000154
将(S)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(1.5g,7.39mmol)、3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-溴吡嗪-2-胺(3.7g,11.09mmol)、碳酸铯(7.2g,22.17mmol)加入DMF(50mL)中，在90℃条件下，反应13小时。反应液减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色固体目标化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(1g，产率29％)。
MS m/z(ESI):455.1[M+H] +,457.1[M+H+2] +.
第八步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000155
将(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(600mg,1.32mmol)、NFSI(830mg,2.64mmol)加入THF(10mL)中。反应液在室温反应3小时，减压浓缩，所得粗品用快速硅胶柱层析分离纯化得到白色固体目标化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(90mg，产率14％)。
MS m/z(ESI):473.0[M+H] +,475.1[M+H+2] +.
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.33(d,J＝4.8Hz,1H),7.82(d,J＝7.2Hz,1H),7.62(d,J＝5.6Hz,1H),7.28-7.25(m,1H),6.01(d,J＝5.6Hz,1H),4.35-4.31(m,2H),4.03(s,1H),3.36-3.31(m,2H),3.25-3.21(m,1H),2.92(d,J＝16.8Hz,1H),1.98-1.84(m,2H),1.64-1.60(m,1H),1.42-1.39(m,1H).
实施例55
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000156
第一步：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000157
将(R)-N-((S)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(260mg，0.83mmol，1.0eq)，3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺(227mg,0.79mmol,0.95eq)和碳酸钾(574mg,4.15mmol,5.0eq)溶于 DMF(2mL)中。氮气保护下，加热到105℃，搅拌反应10小时。反应结束，浓缩除去DMF，粗品柱层析(8％MeOH in CH 2Cl 2)，得到黄色固体产物(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(340mg，产率76％)。
MS m/z(ESI):565.1[M+H] +,567.1[M+H+2] +。
第二步：((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000158
将(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((3-氯-2-环丙基吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(340mg，0.60mmol，1.0eq)溶于MeOH(5mL)，加入HCl的二氧六环溶液(1.0mL,4M)，于室温反应1小时。将反应液浓缩至干，用5mL甲醇溶解后，用7M NH 3的甲醇溶液调节pH至碱性，浓缩反应液，先用正相柱纯化(10％MeOH in CH 2Cl 2)，然后用反相柱纯化(40％MeCN in H 2O(0.1％NH 3.H 2O)，得到灰色固体目标化合物((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺(220mg，产率80％)。
MS m/z(ESI):461.1[M+H] +,463.1[M+H+2] +。
第三步：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000159
将((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺(220mg，0.48mmol，1.0eq)溶于无水DMF(2mL)和无水MeCN(10mL)中，氮气置换三次，氮气保护下分批加入试剂N-氟-N-(苯磺酰)苯磺酰胺(159mg,0.5mmol,1.05eq.)。加料完毕，室温搅拌3小时，反应液滴加到搅拌的MeOH(50mL)中，后加入1mL水。将反应液浓缩，得到粗品，用制备HPLC纯化得到灰色固体产物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-6-胺(40mg，产率 17％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.96(s,1H),7.67(d,J＝5.3Hz,1H),6.28(s,2H),6.17(s,2H),5.86(d,J＝5.4Hz,1H),4.10(s,2H),3.98(s,1H),2.81(dd,J＝52.7,15.2Hz,4H),1.88(s,2H),1.75–1.52(m,4H).
19F NMR(376MHz,DMSO)δ-88.17(s).
MS m/z(ESI):479.0[M+H] +,481.0[M+H+2] +.
实施例56
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000160
第一步：(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000161
在25℃下，往(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺(35mg,0.085mmol)的四氢呋喃(18mL)溶液里加N-氟代双苯磺酰胺(40mg,0.128mmol)，加完搅拌1小时。TLC显示没反应完，补加N-氟代双苯磺酰胺(27mg,0.085mmol)，加完继续搅拌1小时。TLC显示没反应完，再补加N-氟代双苯磺酰胺(27mg,0.085mmol)，搅拌1小时。TLC显示有杂质出现，反应液用盐酸(40mL,0.5N)萃灭，用乙酸乙酯(20mL*2)洗涤，水相用碳酸钠调节至pH约为8，乙酸乙酯(30mL*2)萃取，旋干有机相，制备色谱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到浅黄色固体(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺(28mg,产率：27％)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.61(d,J＝8Hz,1H),5.99(d,J＝8Hz,1H),5.36(s,1H),4.31–4.13(m,2H),3.45(s,1H),3.30–3.15(m,2H),2.43–2.24(m,2H),1.89–1.48(m,5H),0.84–0.65(m,2H),0.57–0.36(m,2H).
MS m/z(ESI):462.1[M+H] +，474.1[M+2+H] +.
实施例57
(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-2-甲基-8-氮杂螺 [4.5]癸-2-烯-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000162
实施例57的制备方法参考实施例53实验方案。
MS m/z(ESI):436.1[M+H] +,438.1[M+2+H] +.
实施例58
(S)-(3-(1-氨基-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-8-基)-6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-5-甲基吡嗪-2-基)甲醇的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000163
实施例58的制备方法参考实施例45实验方案。
MS m/z(ESI):473.1[M+H] +,475.1[M+2+H] +.
实施例59
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的制备
Figure PCTCN2021085155-appb-000164
实施例59的制备方法参考实施例53实验方案。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.66–7.54(m,2H),7.42–7.33(m,1H),7.29–7.16(m,3H),5.93(d,J＝5.5Hz,1H),4.37–4.19(m,2H),3.98(s,1H),3.29–3.20(m,2H),3.15(d,J＝16Hz,1H),2.83(d,J＝16Hz,1H),1.91–1.68(m,2H),1.65–1.53(m,1H),1.50–1.39(m,1H).
MS m/z(ESI):454.1[M+H] +,456.1[M+2+H] +.
二、化合物生物学测试评价
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
测试例1、本发明化合物对SHP-2激酶活性抑制作用的测定
实验目的：
本测试的目的是测量化合物对SHP-2全长蛋白变构活性的抑制能力。
实验仪器：离心机(5810R)购自Eppendorf公司，移液器购自Eppendorf或Rainin公司，酶标仪购自美国BioTek公司，型号为SynergyH1全功能酶标仪。
实验方法：使用Homogeneous Full Length SHP-2 Assay Kit(BPS Bioscience，#79330)进行体外SHP-2活性检测。首先在96孔低吸附微孔板(NUNC，#267342)中加入18μL的Master Mix，即在终浓度为1×的反应缓冲液中包含0.5μM的SHP-2 activating Peptide和5mM的DTT，离心后再加入每孔5μL的待测化合物/DMSO(终DMSO含量为1％，V/V，将待测化合物在DMSO中溶解成1mM，进行三倍系列稀释，10个浓度，反应体系终浓度范围从1μM至0.05nM)，将SHP-2在1×的反应缓冲液中稀释至终浓度为0.06nM后，加入反应微孔板中，每孔2μL，在反应板上设置全活性对照(化合物只加DMSO)和全抑制对照(不加SHP-2)离心后在室温下孵育该反应混合物60分钟。
孵育结束后，加入每孔25μL的Substrate solution，包含终浓度为10μM的Substrate和5mM的DTT，离心后室温继续孵育30分钟。反应结束后，在Synergy H1全功能酶标仪(Biotek)酶标仪上设置激发波长340nm，发射波长455nM，增益值75进行读数。
实验数据处理方法：
根据全活性对照和全抑制对照作为Max和Min的数值，通过反应板上阳性对照孔(DMSO对照孔)和阴性对照孔(不添加激酶)计算使用化合物处理的孔的百分比抑制比率数据{％抑制率＝100-[(测试化合物-Min平均值)/(Max平均值-Min平均值)]×100}。使用GraphPad prism拟合百分比抑制率和十点浓度数据至4参数非线性逻辑公式计算出测试化合物的IC 50值。
实验结论：
通过以上方案得出本发明所示的实施例化合物在SHP-2激酶活性试验中显示出如下表2.1的生物活性，
表2.1：化合物对SHP-2激酶活性抑制相对IC 50值
Figure PCTCN2021085155-appb-000165
Figure PCTCN2021085155-appb-000166
以上数据显示，本发明所示的实施例化合物在SHP-2激酶活性抑制方面具有良好的活性。
测试例2、本发明化合物对KYSE520细胞增殖抑制活性的测定
该测试例的目的是为了测定本发明中的化合物对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用。化合物对肿瘤细胞增殖抑制活性通过CellTiter-Glo的方法进行测定，并得出化合物抑制细胞增殖活性的半数抑制浓度IC 50。在96孔细胞培养板(Corning，#3610)中每孔接种2000个细胞，90μL的细胞悬液，将培养板于培养箱培养过夜(37℃，5％CO 2)。次日向培养板细胞中加入梯度稀释的待测化合物溶液(终DMSO含量为0.1％，V/V，反应体系终浓度范围从100μM至45nM)，每孔10μL。同时在反应板上设置全活性对照(化合物只加DMSO)和全抑制对照(不加细胞)，将培养板在培养箱孵育3天(37℃，5％CO 2)。
孵育结束后在细胞培养板中每孔加入50μL CellTiter-Glo试剂，室温静置10分钟。于Synergy H1全功能酶标仪(Biotek)酶标仪上读取化学发光信号值。根据全活性对照和全抑制对照作为Max和Min的数值，计算使用化合物处理的孔的百分比抑制比率数据{％抑制率＝100-[(测试化合物-Min平均值)/(Max平均值-Min平均值)]×100}。使用GraphPad prism拟合百分比抑制率和8点浓度数据至4参数非线性逻辑公式计算出测试化合物的IC 50值。
通过以上方案得出：本发明所示的化合物在KYSE520细胞增殖抑制活性试验中显示出约0.1nM至200nM(IC 50)的生物活性。
在一些实施方案中，本发明的化合物对于KYSE520细胞增殖抑制活性的IC 50小于约200nM、优选化合物小于约100nM、进一步优选小于约10nM、更优选小于约1nM，本发明所列示的化合物中最优选小于1nM。
测试例3、本发明化合物对NCI-H358细胞增殖抑制活性的测定
实验目的：该测试例的目的是为了测定本发明中的化合物对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用。
实验仪器：离心机(5810R)购自Eppendorf公司，二氧化碳培养箱购自Thermo公司，生物安全柜购自上海博讯公司，移液器购自Eppendorf或Rainin公司，酶标仪购自美国BioTek公司，型号为SynergyH1全功能酶标仪。
实验方法：在96孔细胞培养板(Corning，#3610)中每孔接种3000个细胞，90μL的细胞悬液，将培养板于培养箱培养过夜(37℃，5％CO 2)。次日向培养板细胞中加入梯度稀释的待测化合物溶液(终DMSO含量为0.2％，V/V，反应体系终浓度范围从10μM至4.5nM)，每孔10μL。同时在反应板上设置全活性对照(化合物只加DMSO)和全抑制对照(不加细胞)，将培养板在培养箱孵育3天(37℃，5％CO 2)。
孵育结束后在细胞培养板中每孔加入50μL CellTiter-Glo试剂，室温静置10分钟。于Synergy H1全功能酶标仪(Biotek)酶标仪上读取化学发光信号值。根据全活性对照和全抑制对照作为Max和Min的数值，计算使用化合物处理的孔的百分比抑制比率数据{％抑制率＝100-[(测试化合物-Min平均值)/(Max平均值-Min平均值)]×100}。使用GraphPad prism拟合百分比抑制率和8点浓度数据至4参数非线性逻辑公式计算出测试化合物的IC 50值。
实验数据处理方法：
通过于板上溶媒对照孔计算使用实施例化合物处理的孔的百分比抑制数据{％抑制率＝100-(测试化合物值/溶媒对照值)×100}。使用GraphPad prism拟合不同浓度和相应百分比抑制率数据至4参数非线性逻辑公式计算出IC 50值。
实验结论：
通过以上方案得出本发明所示的实施例化合物对NCI-H358细胞的增殖抑制的活性试验中显示出如下表2.2的生物活性。
表2.2：化合物对NCI-H358细胞增殖抑制活性的IC 50值
Figure PCTCN2021085155-appb-000167
Figure PCTCN2021085155-appb-000168
以上数据显示，本发明所示的实施例化合物在NCI-H358细胞增殖抑制活性方面具有良好的活性。
测试例4、小鼠药代动力学测定
4.1.研究目的：
以Balb/c小鼠为受试动物，研究化合物实施例36、实施例46、实施例53、实施例54和实施例55，口服给药在小鼠体内(血浆)的药代动力学行为。
4.2.试验方案
4.2.1试验药品：
本发明实施例36、实施例46、实施例53、实施例54和实施例55，自制；
4.2.2试验动物：
Balb/c小鼠，雄性，购自上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006 N0.311620400001794)。
4.2.3药物配制：
称取5g羟乙基纤维素(HEC，CMC-Na，粘度：800-1200Cps)，溶于1000mL纯净水，加入10g Tween80。混合均匀成澄清溶液。
称取1.2mg实施例36、实施例46、实施例53、实施例54和实施例55，分别加入4-mL玻璃瓶，加入2.4mL该溶液，超声10分钟，得到无色澄清溶液，浓度为0.5mg/mL。
4.2.4给药：
Balb/c小鼠，雄性；禁食一夜后分别口服给药，剂量为5mg/kg，给药体积10mL/kg。
4.2.5样品采集：
于给药前和给药后0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、24h采血，血液置于EDTA-2K试管中，4℃6000rpm离心6min分离血浆，于负80℃保存；给 药后4h进食。
4.2.6测定结果：
应用LCMS/MS方法得到最后测定结果见表2.3
表2.3：化合物的小鼠药代动力学参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000169
以上数据显示：5mg/kg剂量下，本发明实施例化合物显示出良好的代谢活性。
测试例5、大鼠药代动力学测定
5.1.研究目的：
以SD大鼠为受试动物，研究实施例36、实施例46、实施例53、实施例54、实施例55和实施例59，口服给药在大鼠体内(血浆)的药代动力学行为。
5.2.试验方案
5.2.1试验药品：
本发明实施例36、实施例46、实施例53、实施例54、实施例55和实施例59，自制。
5.2.2试验动物：
SD大鼠每组3只，雄性。上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006 N0.311620400001794)。
5.2.3药物配制：
称取5g羟乙基纤维素(HEC，CMC-Na，粘度：800-1200Cps)，溶于1000mL纯净水，加入10g Tween80。混合均匀成澄清溶液。
称取3.9mg实施例36、实施例46、实施例53、实施例54、实施例55和实施例59，分别溶于该溶液中，摇匀，超声15分钟，得到无色澄清溶液，浓度为0.5mg/mL。
5.2.4给药：
SD大鼠每组3只，雄性，禁食一夜后分别口服给药，剂量为5mg/kg，给药体积10mL/kg。
5.2.5样品采集：
于给药前和给药后0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,6.0h,8.0h,24.0h颈静脉采血0.2mL，置于EDTA-2K试管中，4℃6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存； 给药后4h进食。
5.3实验结果：应用LCMS/MS方法得到最后测定结果，见表2.4
表2.4：本发明化合物的大鼠药代动力学参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000170
实验结论：表中数据显示，在口服给药剂量为5mg/kg时，本发明的实施例化合物在大鼠血浆中都达到相对较高的暴露量；另外，实施例59在大鼠药代动力学实验中观察到肛周污染，说明实施例59有胃肠道毒性。
测试例6、MiaPaca 2移植瘤模型上对肿瘤的抑制实验
6.1实验目的：
以BALB/c裸小鼠为受试动物，采用人胰腺癌细胞MiaPaca 2异种移植瘤(CDX)模型进行体内药效实验，评价受试化合物抗肿瘤作用。
6.2实验仪器与试剂：
6.2.1仪器：
超净工作台(BSC-1300II A2，上海博讯实业有限公司医疗设备厂)
CO 2培养箱(Thermo-311，Thermo)
离心机(Centrifuge 5720R，Eppendorf)
全自动细胞计数仪(Countess II，Life Technologies)
移液器(10-20μL，Eppendorf)
显微镜(Ts 2，尼康)
游标卡尺(CD-6”AX，日本三丰)
细胞培养瓶(T25/T75/T225，Corning)
恒温水槽(HWS12，上海一恒科学)
6.2.2试剂：
DMEM(11995-065，Gibco)
胎牛血清(FBS)(10091-148，Gibco)
0.25％胰蛋白酶(25200-056，Gibco)
青链霉素双抗(P/S)(SV30010，GE)
磷酸盐缓冲液(PBS)(10010-023，Gibco)
Matrigel(356234，Corning)
Gln(25030-081，Gibco)
6.3实验操作：
从细胞库中取出MiaPaca 2细胞，复苏后加入DMEM培养基(含10％FBS、1％Glu、1％P/S)置于CO 2培养箱中培养(培养箱温度为37℃，CO 2浓度为5％)。待细胞铺满培养瓶底部80-90％后传代，传代后细胞继续置于CO 2培养箱中培养。重复该过程直到细胞数满足体内药效接种需求量，开始收集对数生长期的细胞，用全自动细胞计数仪计数，根据计数结果用PBS和Matrigel(体积比为1：1)重悬细胞，制成细胞悬液(密度8×10 7/ml)，置于冰盒中待用。
使用动物为BALB/c裸小鼠，雌性，6-8周龄，体重约为18-22克。将小鼠保持在一个无特殊病原体的环境中，且在单个通风笼中，每笼5只小鼠。所有的笼子、垫料和水在使用前进行消毒，所有动物可以自由获取标准认证的商业实验室饮食。实验开始前用一次性大小鼠通用耳标标记裸鼠，接种前用75％医用酒精消毒接种部位皮肤，每只小鼠在右后背皮下接种0.1ml(含8*10 6个细胞)MiaPaca2肿瘤细胞。当平均肿瘤体积达到100-200mm 3时开始分组给药。受试化合物每日经口灌胃给药，给药剂量、给药频次及实验结束时各组药效情况见表5。每周两次用游标卡尺测量肿瘤体积(mm 3)，计算公式为：V＝0.5*D*d*d，其中D和d分别是肿瘤的长径和短径。抗肿瘤药效是通过化合物处理过的动物的平均肿瘤增加体积除以未处理过动物的平均肿瘤增加体积来确定。抑瘤率计算公式为：TGI(％)＝1-[(Vt-V0)给药组/(Vt-V0)溶剂对照组]*100％。实验结束后将所有动物安乐死。
6.4实验结果：
表2.5：化合物的移植瘤小鼠药效参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000171
注：括号中的数据表示，该实施例对应Vehicle QD x 3w组(即对照组)在相应时间(即 分别为0天和21天)的肿瘤体积
实验结论：以上数据显示，口服连续给药21天后，本发明实施例化合物在3-10mg/kg QD给药条件下都能显著抑制MiaPaca 2裸小鼠移植瘤生长。
测试例7、荷瘤小鼠药代动力学测定
7.1.研究目的:
以MiaPaca 2荷瘤小鼠为受试动物，研究化合物实施例化合物53在6mg/kg剂量下口服给药在小鼠体内(血浆，肿瘤组织和肠道)的药代动力学行为。
7.2.试验方案
7.2.1试验药品：
本发明实施例化合物53，自制。
7.2.2试验动物：
MiaPaca 2荷瘤小鼠24只，雌性。每个时间点3只(0h、1h、2h、4h、6h、8h、16h、24h)。上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2018-0006。
7.2.3药物配制：
称取5g羟甲基纤维素，溶于1000mL纯净水，加入10g Tween80。混合均匀成澄清溶液。
称取4.57mg实施例化合物53，22.6mg溶于该溶液中，摇匀，超声15分钟，得到均匀混悬液，浓度为0.6mg/mL。
7.2.4给药：
MiaPaca 2荷瘤小鼠禁食后分别按体重p.o.(0h点动物不给药)，剂量为6mg/kg，给药体积10mL/kg。
7.2.5样品采集：
小鼠给药前和给药后，CO 2处死，心脏采血0.5ml，置于EDTA-2K试管中，4℃ 6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存；肿瘤组织称重后，置于2mL离心管中，于-80℃保存。十二指肠、回肠、结肠组织取适量长度用剪刀剪开，去除内容物并用PBS清洗2遍，用吸水纸吸干水分后称重，置于2mL离心管中，于-80℃保存。
7.3实验结果：应用LCMS/MS方法得到最后测定结果，见表2.6：
表2.6：本发明化合物的小鼠药代动力学参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000172
实验结论：如表中数据所显示，6mg/kg剂量下，本发明实施例化合物在小鼠肿瘤里的暴露量达到很高的水平，在肿瘤里的暴露量明显高于血液里。而从Tmax和MRT可以看出来，化合物在肿瘤里的浓度是一个逐渐增加的过程，而且T1/2更长，说明化合物会逐渐蓄积在肿瘤里，并一直在肿瘤里保持较高的浓度，从而保证更好的抑瘤效果。
测试例8、hERG钾离子通道抑制活性测试
8.1细胞准备
8.1.1 CHO-hERG细胞培养于175cm 2培养瓶中，待细胞密度生长到60～80％，移走培养液，用7mL PBS洗一遍，然后加入3mL Detachin消化。
8.1.2待消化完全后加入7mL培养液中和，然后离心，吸走上清液，再加入5mL培养液重悬，以确保细胞密度为2～5×10 6/mL。
8.2溶液配制
表2.7：细胞内液和外液的组成成分
Figure PCTCN2021085155-appb-000173
8.3电生理记录过程
单细胞高阻抗封接和全细胞模式形成过程全部由Qpatch仪器自动完成，在获得全细胞记录模式后，细胞钳制在-80毫伏，在给予一个5秒的+40毫伏去极化刺激前，先给予一个50毫秒的-50毫伏前置电压，然后复极化到-50毫伏维持5秒，再回到-80毫伏。每15秒施加此电压刺激，记录2分钟后给予细胞外液记录5分钟，然后开始给药过程，化合物浓度从最低测试浓度开始，每个测试浓度给予2.5分钟，连续给完所有浓度后，给予阳性对照化合物3M Cisapride。每个浓度至少测试3个细胞(n≥3)。
8.4化合物准备
8.4.1将20mM的化合物母液用细胞外液进行稀释，取5μL 20mM的化合物母液加入2495μL细胞外液，500倍稀释至40μM，然后在含0.2％DMSO的细胞外液中依次进行3倍连续稀释得到需要测试的最终浓度。
8.4.2最高测试浓度为40μM，依次分别为40，13.33，4.44，1.48，0.49，0.16μM共6个浓度。
8.4.3最终测试浓度中的DMSO含量不超过0.2％，此浓度的DMSO对hERG钾通道没有影响。
8.5数据分析
实验数据由XLFit软件进行分析。
8.6质量控制
环境：湿度20～50％，温度22～25℃
试剂：所用实验试剂购买于Sigma公司，纯度>98％
报告中的实验数据必须满足以下标准：
全细胞封接阻抗>100MΩ
尾电流幅度>400pA
药理学参数：
多浓度Cisapride对hERG通道的抑制效应设为阳性对照。
8.7实验结果
实施例化合物在多浓度对hERG电流的抑制结果：
表2.8：实施例在多浓度对hERG电流的抑制结果
实施例编号 hERG(uM)
实施例6 5.24
实施例35 6.17
实施例36 2.34
实施例46 18.78
实施例53 4.51
实施例55 21.91
实验结论：药物对于心脏hERG钾离子通道的抑制是药物导致QT延长综合症的主要原因。从实验结果可以看出，本发明实施例化合物对于心脏hERG钾离子通道没有明显抑制作用，可以避免高剂量时的心脏毒副作用。
测试例9、小鼠药代动力学测定
9.1.研究目的：
以Balb/c Mouse为受试动物，研究化合物实施例53和实施例59，单次静脉注射给药在Mouse体内(血浆)的药代动力学行为。
9.2.试验方案
9.2.1试验药品：
本发明实施例53和实施例59，自制；
9.2.2试验动物：
Balb/c小鼠，雄性，购自上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006 N0.311620400001794)。
9.2.3药物配制：
含10％Solutol HS15水溶液：取Solutol HS15 10g，加入注射用纯化水，搅拌使溶解后，用注射用纯化水稀释至100mL，摇匀，即得；
含20％HP-β-CD水溶液：取HP-β-CD 20g，加入注射用纯化水，搅拌使溶解后，用注射用纯化水稀释至100mL，摇匀，即得；
混合0.5mL的DMSO，8.5mL的20％HP-β-CD水溶液和1mL的10％Solutol HS15水溶液，摇匀，得澄清溶液。
称取0.234mg实施例53和实施例59，加入1.17mL的该溶液，超声使溶解，得澄清溶液，用0.22μm的水系滤器过滤，取滤液为iv给药制剂。浓度为0.2mg/mL。
9.2.4给药：
Balb/c Mouse，雄性；禁食一夜后分别静脉注射给药，剂量为1mg/kg，给药体积5mL/kg。
9.2.5样品采集：
于给药前和给药后0min,5min，15min,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,8.0h,24.0h采血，血液置于EDTA-2K试管中，4℃6000rpm离心6min分离血浆，于负80℃保存；给药后4h进食。
9.3实验结果：应用LCMS/MS方法得到最后测定结果见表2.9
表2.9：化合物的小鼠药代动力学参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000174
实验结论：1mg/kg剂量下，本发明实施例化合物在小鼠体内显示出良好的代谢特征。
测试例10、大鼠药代动力学测定
10.1.研究目的：
以SD大鼠为受试动物，研究实施例53和实施例59，单次静脉注射给药在大鼠体内(血浆)的药代动力学行为。
10.2.试验方案
10.2.1试验药品：
本发明实施例53和实施例59，自制。
10.2.2试验动物：
SD大鼠每组3只，雄性。上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006 N0.311620400001794)。
10.2.3药物配制：
含10％Solutol HS15水溶液：取Solutol HS15 10g，加入注射用纯化水，搅拌使溶解后，用注射用纯化水稀释至100mL，摇匀，即得；
含20％HP-β-CD水溶液：取HP-β-CD 20g，加入注射用纯化水，搅拌使溶解后，用注射用纯化水稀释至100mL，摇匀，即得；
混合0.5mL的DMSO，8.5mL的20％HP-β-CD水溶液和1mL的10％Solutol HS15水溶液，摇匀，得澄清溶液。
称取0.78mg实施例53和实施例59，加入3.9mL的该溶液，超声使溶解，得澄清溶液，用0.22μm的水系滤器过滤，取滤液为iv给药制剂。浓度为0.2mg/mL。
10.2.4给药：
SD大鼠每组3只，雄性，禁食一夜后分别静脉注射给药，剂量为1mg/kg，给药体积5mL/kg。
10.2.5样品采集：
于给药前和给药后0min,5min,15min,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,8.0h,24.0h颈静脉采血0.2mL，置于EDTA-2K试管中，4℃ 6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存；给药后4h进食。
10.3实验结果：应用LCMS/MS方法得到最后测定结果，见表2.10
表2.10：本发明化合物的大鼠药代动力学参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000175
实验结论：1mg/kg剂量下，本发明实施例化合物在大鼠体内显示出良好的代谢特征。
测试例11、小鼠耐受性测定
11.1.研究目的：
以Balb/c小鼠为受试动物，研究化合物实施例53和实施例59，口服给药在雌雄小鼠中的耐受性。
11.2.试验方案
11.2.1试验药品：
本发明实施例53和实施例59，自制；
11.2.2试验动物：
Balb/c小鼠，雄性9只，雌性9只，购自上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK(沪)2013-0006 N0.311620400001794)。
11.2.3药物配制：
称取5g羟乙基纤维素(HEC，CMC-Na，粘度：800-1200Cps)，溶于1000mL纯净水，加入10g Tween80。混合均匀成澄清溶液。
称取41.0mg实施例53和25.9mg实施例59，分别加入100-mL玻璃瓶，加入41.0mL和25.9mL该溶液，超声10分钟，得到无色澄清溶液，浓度为1mg/mL。
11.2.4给药：
Balb/c小鼠，雄性3只，雌性3只；禁食一夜后分别口服给药，剂量为10mg/kg，给药体积10mL/kg。
11.2.5数据收集：
于给药前和给药后每天称量小鼠体重，观察异常反应；给药后4h进食。
11.2.6测定结果：
应用天平称量得到最后结果见表2.11。
表2.11：小鼠体重变化对比
Figure PCTCN2021085155-appb-000176
实验结论：以上数据显示，10mg/kg剂量下，本发明实施例化合物显示出良好的小鼠耐受性，而实施例59表现出稀便，便血，体重明显下降等特征，耐受性较差。
总之，本发明提供了一系列具有新颖结构的高活性，高选择性SHP2激酶抑制剂；在大鼠和小鼠上都显示出很好的药代动力学性质，在Miapaca2荷瘤小鼠 模型上也体现出了良好的药效；有很大的潜力被开发成针对肿瘤类疾病的单药或联合用药类药物。
三、(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型研究
1.1实验仪器
1.1.1物理化学检测仪器的一些参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000177
1.2仪器和液相分析条件
1.2.1仪器与设备
仪器名称 型号
分析天平 Sartorius BSA224S-CW
纯水机 Milli-Q Plus，Millipore
高效液相色谱仪 Agilent1260
泵 Agilent G1311B
进样器 G1329B
柱温箱 G1316A
检测器 G1315D
1.2.2色谱条件
色谱柱：Waters Xbridge C18(4.6mm*150mm,3.5μm)
流速：1mL/min
柱温：40℃
检测波长：275nm
进样体积：5.0μL
运行时间：30min
稀释剂：DMSO
流动相：A：水(0.05％三氟乙酸)；B：乙腈(0.05％三氟乙酸)
T(min) A(％) B(％)
0.00 90 10
15.00 70 30
25.00 30 70
25.01 90 10
30.00 90 10
2.(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的不同晶型的制备
2.1 (S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A的制备
将5g(S)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺盐酸盐加入到75mL NMP，氮气保护，调整温度20-30℃；加入3.17g NaHCO 3，搅拌10min；加入4.35g 3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-6-氯吡嗪-2-胺和5.2g K 2CO 3，氮气鼓泡30min；升温至85℃，并搅拌8h，冷却至室温，加入120mL DCM，150mL纯水；搅拌后分液，120mL DCM萃取一次；合并有机相，纯水洗5次洗去NMP，15％氯化钠水溶液洗一次，每次各180mL；加入0.75g活性碳至DCM相中，搅拌1h；过滤，用30mL THF淋洗，滤液中加入1g巯基硅胶，搅拌3h，过滤，THF 30ml淋洗，滤液浓缩至干得到9g黄色油状固体；加入30mL(EA/MTBE＝1/1)，加热至50℃打浆0.5h，自然降温至20℃，搅拌4h，过滤，MTBE淋洗，真空干燥得到3.6g淡黄色固体。经检测分析，其有如表6所示的XRPD射线衍射数据，如图12所示的XRPD图，如图13所示的DSC图及如图14所示的TGA图。
2.2 (S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型B的制备
称量约20mg的(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A，加入0.6mL2-甲基-四氢呋喃于70℃下加热溶清，快速放入2℃下搅拌12h析出固体。最后固体快速离心，去除上清液，40℃真空干燥，得到(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2- 环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型B。经检测分析，其有如表7所示的XRPD射线衍射数据，如图15所示的XRPD图及如图16所示的DSC图。
2.3 (S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型C的制备
称量约20mg的(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A到2mL的玻璃瓶中，加入200μLNMP室温搅拌溶清，然后加入0.6mL异丙醚混浊，室温搅拌12h后析出较多固体，最后固体快速离心，去除上清液，40℃真空干燥，得到(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型C。经检测分析，其有如表8所示的XRPD射线衍射数据，如图17所示的XRPD图及如图18所示的DSC图。
3.(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的不同晶型的筛选及稳定晶型确认实验
3.1实验目的：
通过多晶筛选，找到比较稳定的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型。
3.2实验方法及结果
(1)浆料转化试验
称量约20mg化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A到2mL的玻璃瓶中，分别加入10-200μL对应的有机溶剂，统一在50℃下振摇4天，若样品溶清，则转至室温搅拌。最终将混悬液快速离心，去除上清液，40℃真空干燥，得到的固体检测XRPD、DSC及TGA，并进行比较。实验结果：如表3.1所示。
表3.1浆料转化试验结果
溶剂 晶型
MeOH A
EtOH A
ACN A
EA A
IPA A
DCM A
H 2O A
Toluene A
IPAC A
以上结果显示：化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2- 基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在上述溶剂中打浆均未发生转晶，晶型A较稳定。
(2)冷却法、挥发法试验
称取一定量的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A到2mL的玻璃瓶中，选择一些良溶剂加热使其溶清，将溶清的溶液冷却或加入反溶剂，搅拌看是否有固体析出，若出现固体则快速离心，去除上清液，40℃真空干燥。若未出现固体则室温敞口挥干溶剂。最后将得到的固体分别检测XRPD、DSC及TGA，并进行比较。实验结果：如表3.2所示。
表3.2冷却法、挥发法试验
溶剂 冷却 反溶剂 挥发结果
2-Me-THF 晶型B - -
MeOH 无固体析出 - 晶型A
DCM 无固体析出 - 晶型A
THF 无固体析出 加异丙醚仍无固体析出 晶型A
88％Acetone 无固体析出 - 晶型A
以上结果显示：采用2-Me-THF为溶剂快速冷却法可得到化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型B，采用MeOH、DCM、THF和88％Acetone为溶剂快速冷却无固体析出，继续挥发仍然得到晶型A。
(3)溶析结晶法试验
称取一定量的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A到2mL的玻璃瓶中，选择一些溶剂将其溶清，作为良溶剂，再选一些溶剂为反溶剂，滴入溶液中，搅拌看是否有固体析出，若出现固体则快速离心，去除上清液，40℃真空干燥，得到的固体分别检测XRPD、DSC及TGA，并进行比较。实验结果：如表3.3所示。
表3.3溶析结晶法试验
Figure PCTCN2021085155-appb-000178
以上结果显示：采用溶析结晶筛选得到化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A和晶型C。
3.3实验结论：
通过打浆，改变结晶溶剂、结晶方式共得到三种晶型的(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺，分别为晶型A、晶型B和晶型C。通过对比不同晶型的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的DSC图谱，可以判断出晶型A的热力学稳定性更好，且为无水合物。
4.固体稳定性实验
4.1实验目的：
考察化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在高温60℃、室温高湿92.5％RH及高温高湿50℃75％RH条件下的物理化学稳定性，为化合物贮存提供依据。
4.2实验方案：
取化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A约2mg，于高温60℃、室温高湿92.5％RH及高温高湿50℃75％RH条件下，考察5天、10天、20天、30天，用HPLC，外标法测定含量，并采用色谱峰面积归一化法计算有关物质的变化。
4.3实验结果：稳定性结果如表3.4所示：
表3.4固体稳定性结果
Figure PCTCN2021085155-appb-000179
4.4实验结论：
以上数据显示：化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在高温60℃、室温高湿92.5％RH及高温高湿50℃75％RH条件下均较稳定，杂质增加均小于0.15％。
5.引湿性实验
5.1实验目的
考察化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在不同相对湿度条件下的引湿性，为化合物晶型筛选与贮存提供依据。
5.2实验方案：
将化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A置不同相对湿度的饱和水蒸气中，使化合物与水蒸气达到动态平衡，并计算平衡后化合物吸湿增重的百分数。
5.3实验结果：
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在RH80％条件下吸湿增重约0.544％，略有引湿性。经0-95％相对湿度条件下吸湿与解吸湿循环1次，化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A的XRPD谱图未发生改变，即晶型未发生转变。
6.不同介质中溶解度实验
6.1实验目的
比较化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在pH 1～8的缓冲液(pH＝1、2的盐酸缓冲液、pH＝3、4的邻苯二甲酸缓冲液以及pH＝5、6、7、8的磷酸盐缓冲液)、水、人工模拟胃液(FaSSGF)、禁食人工模拟肠液(FaSSIF)及非禁食人工模拟肠液(FeSSIF)等媒介中溶解度大小，为可成药性评估提供依据。
6.2实验方案：
将约2mg化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A混悬到不同介质中2小时，用HPLC，外标法测定化合物37℃下的热力学溶解度。
6.3实验结果：如表3.5所示：
表3.5不同介质中溶解度实验
溶媒 晶型A溶解度(mg/mL)
pH 1.0 >1.648
pH 2.0 >1.485
pH 3.0 0.700
pH 4.0 0.446
pH 5.0 0.223
pH 6.0 0.401
pH 7.0 0.062
pH 8.0 0.017
H 2O 0.005
FaSSGF >1.707
FaSSIF 0.088
FeSSIF 0.432
6.4实验结论：
对比化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在不同介质中的溶解度，晶型A在酸性条件下溶解度较好。
7.转晶考察实验
7.1实验目的：
通过压力转晶和研磨转晶实验，考察化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A是否会发生晶型转变。
7.2实验方案：
称取一定量的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A，使用压片机压成片子，然后将片子捣碎成粉末，表征XRPD。
称取一定量的化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A使用研钵强力研磨15min，表征XRPD。
7.3实验结论：
通过对比XRPD图谱可知，化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A在压片和研磨之后均未发生转晶，晶型A较稳定。
8.大鼠药代动力学研究
8.1实验目的：
研究化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A单次口服给药在大鼠体内(血浆)的药代动力学行为，并计算口服给药的生物利用度。
8.2实验仪器和试剂：
8.2.1仪器：
Figure PCTCN2021085155-appb-000180
8.2.2试剂：
试剂 供应商 批号 备注
DMSO Vetech WXBD0293V  
Acetonitrile Sigma-Aldrich WXBD0232V  
Methyl Alcohol Sigma-Aldrich WXBC6573V  
Formic Acid Fisher Scientific 193497  
Dexamethasone 索莱宝 822A0523 Internal Standard
HP-β-CD 山东滨州智源生物科技有限公司 20190517  
HPMC K4M Damas-beta P1575251  
8.3实验动物：
动物种属 供应商 质量合格证编号
SD大鼠(7周，体重180-200g) 昭衍(苏州)新药研究中心有限公司 202009863
8.4受试化合物：
化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A，自制。
8.5实验方案：
将化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A，用含0.5％的HPMC K4M的水溶液混悬均匀后，灌胃，大鼠给药，平行三只大鼠，给药剂量均为10mg/kg为混悬液。
8.6实验结果：
表3.6大鼠药代实验结果
Figure PCTCN2021085155-appb-000181
8.7实验结论：
从表中大鼠药代实验结果可以看出，10mg/kg剂量下，本发明化合物(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺晶型A表现出良好的代谢性质。
四、(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的晶型研究
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的无定形形式(实施例53)放大生产
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺和THF加入反应釜，再加入N-氟代双苯磺酰胺(NFSI)，室温反应2 小时，加入2L的0.5mol/L的盐酸溶液，再加入2L的EA搅拌萃取，分液，有机相中加入3L的0.25mol/L的盐酸溶液，再加入11L的EA搅拌萃取，分液，合并水相，舍去有机相，水相中加入1.5L*2的EA萃取除杂后，水相加入2.65L的THF，搅拌，加入碳酸钠固体调节PH＝9～10，分液，水相用1.5L的2-甲基四氢呋喃萃取，合并有机相，干燥、过滤、浓缩，得73.4g黄褐色固体，固体加入四氢呋喃溶清，依次用EA：PE＝20％，60％，含有0.005％三乙胺的EA，甲醇：DCM＝5％(甲醇中含有5％的三乙胺)淋洗得到产品，减压浓缩缓冲液，得41.1g黄色固体，备用。
1.1实验仪器
1.1.1物理化学检测仪器的一些参数
Figure PCTCN2021085155-appb-000182
1.2仪器和液相分析条件
1.2.1仪器与设备
仪器名称 型号
分析天平 Sartorius BSA224S-CW
纯水机 Milli-Q Plus，Millipore
高效液相色谱仪 Agilent1260
泵 Agilent G1311B
进样器 G1329B
柱温箱 G1316A
检测器 G1315D
1.2.2色谱条件
色谱柱：ZORBAX(SB-C8，3.5μm，4.6*75mm)
流速：1mL/min
柱温：40℃
检测波长：275nm
进样体积：5.0μL
运行时间：13min
稀释剂：ACN-水(v/v，1:1)
流动相：A：水(0.05％三氟乙酸)；B：乙腈(0.05％三氟乙酸)
T(min) A(％) B(％)
0.00 90 10
3.00 70 30
10.00 40 60
10.10 90 10
13.00 90 10
1.(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的不同晶型的制备
1.1 (S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型A的制备
称取10mg(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺无定型到2mL的玻璃瓶中，加入100μL 3-戊酮在室温下搅拌24h。体系先溶清后搅拌析出固体。最后离心去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重，得到(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型A。经检测分析，其有如表1所示的XRPD射线衍射数据、如图1所示的DSC图及如图2所示的TGA图。
1.2 (S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B的制备
称取20mg(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺无定型到2mL的玻璃瓶中，加入200μL乙腈室温下溶清，在室温下向体系中缓慢加入400μL H 2O。加H 2O过程中边搅拌，很快析出固体。室温搅拌2h后离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重，得到(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B。经检测分析，其有如表2所示的XRPD射线衍射数据、如图4所示的DSC图及如图5所示的TGA图。
1.3 (S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型C的制备
称取20mg(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺无定型到2mL的玻璃瓶中，加入50μL二氯甲烷室温下溶清，在室温下搅拌24h有固体析出，快速离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重，得到(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型C。经检测分析，其有如表3所示的XRPD射线衍射数据、如图6所示的DSC图及如图7所示的TGA图。
1.4 (S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型D的制备
称取20mg(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺无定型到2mL的玻璃瓶中，加入50μL 1，4-二氧六环室温下溶清。在室温下搅拌24h有固体析出，快速离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重，得到(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型D。经检测分析，其有如表4所示的XRPD射线衍射数据、如图8所示的DSC图及如图9所示的TGA图。
1.5 (S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型E的制备
称取20mg(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺无定型到2mL的玻璃瓶中，加入100μL DMF室温下溶清。在室温下向体系中缓慢加入400μL H 2O。加H 2O过程中边搅拌，很快析出固体。室温搅拌2h后离心，去除上清液，剩余固体放入40℃真空干燥箱中烘干至恒重，得到(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型E。经检测分析，其有如表5所示的XRPD射线衍射数据、如图10所示的DSC图及如图11所示的TGA图。
2.固体稳定性实验
2.1实验目的：
考察(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的无定型、晶型A及晶型B在光照条件下，化合物的物理 化学稳定性，为晶型筛选与化合物贮存提供依据。
2.2实验方案：
取(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的无定型、晶型A及晶型B各约2mg，于光照箱(5000lx±500lx)中，考察5天、10天，用HPLC，外标法测定含量，并采用色谱峰面积归一化法计算有关物质的变化。
2.3实验结果：
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺不同晶型物理化学稳定性结果如表4.1所示：
表4.1不同晶型物理化学稳定性结果
Figure PCTCN2021085155-appb-000183
以上数据显示：(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺无定型在光照条件下10天总杂增量为19.34％，而(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型A及晶型B在光照条件下10天总杂增量小于2％。
2.4实验结论：
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺制备成晶体后有助于改善其在光照条件下的稳定性。
3引湿性实验
3.1实验目的
考察化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B在不同相对湿度条件下的引湿性，为化合物晶型筛选与贮存提供依据。
3.2实验方案：
将(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B置不同相对湿度的饱和水蒸气中，使化合物与水蒸气达到动态平衡，并计算平衡后化合物吸湿增重的百分数。
3.3实验结果：
(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B在RH80％条件下吸湿增重约1.639％，略有引湿性。经0-95％相对湿度条件下吸湿与解吸湿循环1次，(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基) 硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B的XRPD谱图并未发生改变，即晶型未转变。
4.不同介质中溶解度实验
4.1实验目的
比较(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B在水、人工模拟胃液(SGF)、禁食人工模拟肠液(FaSSIF)及非禁食人工模拟肠液(FeSSIF)等媒介中溶解度大小，为可成药性评估提供依据。
4.2实验方案：
将约2mg(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型B混悬到不同介质中24小时，用HPLC，外标法测定化合物37℃下的热力学溶解度。
4.3实验结果：如表4.2所示
表4.2不同介质中溶解度实验
样品名称 晶型B溶解度(mg/mL)
Fa 0.170
Fe 0.064
SGF 2.050
water 0.001
5.多晶筛选及稳定晶型确认实验
5.1实验目的：
通过多晶筛选，找到比较稳定的(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺晶型。
5.2实验方案：
选择有一定溶解度的有机溶剂、水，将(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺悬浮于溶剂体系中，室温搅拌打浆1周后，离心，弃掉上清液，固体在40℃条件真空干燥(-0.1Mpa)过夜后，测定固体的XRPD、DSC及TGA，并进行比较。
5.3实验结果：
通过打浆，改变结晶溶剂、结晶方式等共得到五种晶型的(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺，分别为晶型A、晶型B、晶型C、晶型D及晶型E。通过对比不同晶型的(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺的DSC图谱，可以判断出晶型B为这五种晶型中热力学最稳定晶型。

Claims (23)

  1. 一种通式(I)所示化合物的晶型：
    Figure PCTCN2021085155-appb-100001
    其中：
    R 1选自氢、卤素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
    R 2选自氢、氨基或C 1-6烷基；
    R 3选自氢、卤素、氨基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基或3-12元杂环基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基和3-12元杂环基，任选进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
    R 4选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基；
    R 5和R 6各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 1-6羟烷基、C 2-6烯基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 1-6羟烷基、C 2-6烯基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
    或者，R 5和R 6链接形成一个C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被选自氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代。
  2. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，R 1选自氢、卤素、C 1-6烷基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基或3-12元杂环基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6羟烷基、C 3-8环烷基和3-12元杂环基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氧代基、C 1-6烷基和C 3-8环烷基中的一个或多个取代基所取代；R 1更优选氢、卤素、C 1-3烷基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基或3-6元杂环基，其中所述的C 1-3烷基、C 1-3羟烷基、C 3-6环烷基和3-6元杂环基，任选进一步被氘、卤素、羟基、氧代基、C 1-3烷基和C 3-6环烷基中的一个或多个取代基所取代；R 1进一步优选氢、氟、溴、甲基、羟乙基、
    Figure PCTCN2021085155-appb-100002
  3. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，R 2选自氢、氨基或C 1-6烷基；优选氢、氨基或C 1-3烷基；更优选氢、氨基、甲基、乙基或丙基。
  4. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，R 3选自氢、卤素、氨基、C 1-6烷基、C 3-8环烷基或3-12元杂环基，其中所述的C 1-6烷基、C 3-8环烷基和3-12元杂环基，任选进一步被氘、卤素、氧代基中的一个或多个取代基所取代；R 3优选氢、卤素、氨基、C 1-3烷基、C 3-6环烷基或3-6元杂环基，其中所述的C 1-3烷基、C 3-6环烷基和3-6元杂环基，任选进一步被氘、卤素、氧代基中的一个或多个取代基所取代；R 3进一步优选氨基、氯、环丙基、氮杂环丁基、四氢吡咯基、吗啡啉基、
    Figure PCTCN2021085155-appb-100003
  5. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于：R 4选自氢、卤素、C 1-6烷基或C 3-8环烷基；优选氢、卤素、C 1-3烷基或C 3-6环烷基；进一步优选氢、氟、氯、甲基或环丙基。
  6. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于：R 5和R 6各自独立地选自氢、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 2-6烯基或C 3-8环烷基，其中所述的C 1-6烷基、C 1-6卤 代烷基、C 2-6烯基和C 3-8环烷基，任选进一步被氘、卤素、C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；优选R 5和R 6各自独立地选自氢、C 1-3烷基、C 2-4烯基或C 3-6环烷基，其中所述的C 1-3烷基、C 2-4烯基和C 3-6环烷基，任选进一步被氢氘、卤素、C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；进一步优选R 5和R 6各自独立地选自氢、甲基、乙基、异丙基、乙烯基、环丙基、
    Figure PCTCN2021085155-appb-100004
    或者，R 5和R 6链接形成一个C 3-8环烷基、6-12芳基或5-12元杂芳基，其中所述的C 3-8环烷基、6-12芳基和5-12元杂芳基，任选进一步被选自氢、氘、卤素或C 1-6烷基中的一个或多个取代基所取代；优选R 5和R 6链接形成一个C 3-6环烷基、苯基或5-6元杂芳基，其中所述的C 3-6环烷基、苯基和5-6元杂芳基，任选进一步被选自氘、卤素或C 1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；进一步优选R 5和R 6链接形成
    Figure PCTCN2021085155-appb-100005
    Figure PCTCN2021085155-appb-100006
  7. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述化合物结构如式(II)所示：
    Figure PCTCN2021085155-appb-100007
    其中：
    环A选自C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-10芳基或5-12元杂芳基；
    R a选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6氘代烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6羟烷基、C 1-6卤代烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基或5-12元杂芳基；且
    x为0、1、2或3。
  8. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述环A为苯基。
  9. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述化合物结构如下：
    Figure PCTCN2021085155-appb-100008
    Figure PCTCN2021085155-appb-100009
  10. 根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述化合物选自(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺，或(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺。
  11. 根据权利要求10所述的晶型，所述化合物(S)-1'-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-氟吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺包括晶型A、B、C、D和E，其中，
    所述晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为9.0°、15.2°、20.2°和23.0°处具有衍射峰，优选地，进一步还包含在2θ为9.7°、12.3°、15.4°、19.8°、23.5°和27.1°处具有衍射峰，更优选地，进一步还包含在2θ为4.5°、13.7°、14.6°、16.8°、18.1°、21.5°、27.7°和28.2°处具有衍射峰，
    更优选地，其DSC图谱基本如图1所示，或其TGA图谱基本如图2所示；
    所述晶型B，X-射线粉末衍射图谱在2θ为7.9°、14.6°和16.2°处具有衍射峰，优选地，还包含在2θ为18.1°、19.2°、20.2°、24.7°和26.8°处具有衍射峰，更优选地，进一步还包含在2θ为14.9°、27.2°、28.1°和30.5°处具有衍射峰，进一步优选地，进一步还包含在2θ为13.9°、15.6°、16.9°和19.8°处具有衍射峰，最优选地，其XRPD图谱基本如图3所示，
    优选地，其DSC图谱基本如图4所示，或其TGA图谱基本如图5所示；
    所述晶型C，X-射线粉末衍射图谱在2θ为9.4°、14.5°和20.3°处具有衍射峰，优选地，还包含在2θ为22.2°、22.7°、22.9°和26.2°处具有衍射峰，更优选地，进一步还包含在2θ为8.2°、14.9°、23.8°、27.5°、28.1°、29.3°、30.2°和31.7°处具有衍射峰，进一步优选地，进一步还包含在2θ为12.0°、16.4°、25.5°、28.6°、34.8°和35.4°处具有衍射峰，
    更优选地，其DSC图谱基本如图6所示，或其TGA图谱基本如图7所示；
    所述晶型D，X-射线粉末衍射图谱在2θ为5.1°、13.4°和18.3°处具有衍射峰，优选地，还包含在2θ为18.0°、19.9°、20.7°和22.6°处具有衍射峰，更优选地，进一步还包含在2θ为13.7°、16.8°、17.7°、19.0°、22.3°和27.5°处具有衍射峰，进一步优选地，进一步还包含在2θ为16.1°、22.9°、24.9°、 25.5°和28.9°处具有衍射峰，
    更优选地，其DSC图谱基本如图8所示，或其TGA图谱基本如图9所示；
    所述晶型E，X-射线粉末衍射图谱在2θ为8.4°、15.3°和18.3°处具有衍射峰，优选地，还包含在2θ为20.7°、22.5°、26.7°和27.6°处具有衍射峰，更优选地，进一步还包含在2θ为13.5°、14.6°、15.8°、16.0°、16.9°、19.2°、20.4°、24.0°、24.4°、25.5°、28.2°、28.9°、31.8°和32.2°处具有衍射峰，进一步优选地，进一步还包含在2θ为5.2°、9.5°、10.4°、17.2°、17.7°、19.5°、20.0°、26.3°、28.7°、30.5°、31.0°和34.1°处具有衍射峰，
    更优选地，其DSC图谱基本如图10所示，或其TGA图谱基本如图11所示。
  12. 根据权利要求10所述的晶型，其特征在于，所述(S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-2-环丙基-8-氮杂螺[4.5]癸-2-烯-1-胺的晶型包括晶型A、晶型B和晶型C，其中：
    晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为20.0±0.2°处具有衍射峰；或者在19.4±0.2°处具有衍射峰；或者在17.1±0.2°处具有衍射峰；或者在22.6±0.2°处具有衍射峰；或者在10.7±0.2°处具有衍射峰；或者在25.6±0.2°处具有衍射峰；或者在12.7±0.2°处具有衍射峰；或者在24.5±0.2°处具有衍射峰；或者在19.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.4±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为20.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在12.2±0.2°处具有衍射峰；或者在25.1±0.2°处具有衍射峰；或者在21.5±0.2°处具有衍射峰；或者在18.5±0.2°处具有衍射峰；或者在17.8±0.2°处具有衍射峰；或者在20.0±0.2°处具有衍射峰；或者在28.6±0.2°处具有衍射峰；或者在5.1±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为17.8±0.2°处具有衍射峰；或者在19.8±0.2°处具有衍射峰；或者在26.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.2±0.2°处具有衍射峰；或者在24.0±0.2°处具有衍射峰；或者在22.8±0.2°处具有衍射峰；或者在10.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.5±0.2°处具有衍射峰；或者在17.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处。
  13. 根据权利要求12所述的晶型，其特征在于，晶型A的X-射线粉末衍射 图谱至少包含位于2θ为20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
    例如，晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和25.6±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和12.7±0.2°处；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
    例如，晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和18.5±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和17.8±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和17.8±0.2°处；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
    例如，晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和22.8±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和10.5±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和10.5±0.2°处。
  14. 根据权利要求12所述的晶型，其特征在于，晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°、31.5±0.2°、29.2±0.2°、20.6±0.2°、21.4±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
    例如，晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°和18.4±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、 12.7±0.2°、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°和31.5±0.2°处；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°、24.5±0.2°、13.2±0.2°、12.4±0.2°、29.2±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
    例如，晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和5.1±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°和14.3±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°和24.5±0.2°处；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°、22.3±0.2°、24.3±0.2°、14.5±0.2°、30.1±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
    例如，晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和21.8±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°和19.5±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°和22.3±0.2°处。
  15. 根据权利要求12所述的晶型，其特征在于，晶型A的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2、19.1±0.2°、18.4±0.2°、6.2±0.2°、31.5±0.2°、29.2±0.2°、20.6±0.2°、21.4±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
    例如，晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和22.6±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°和10.7±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°和19.1±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°和19.1±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、19.1±0.2°和6.2±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2、19.1±0.2°和6.2±0.2°处；
    或者，20.0±0.2°、19.4±0.2°、17.1±0.2°、22.6±0.2°、10.7±0.2°、25.6±0.2°、12.7±0.2°、24.5±0.2、18.4±0.2°和6.2±0.2°处；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°、5.1±0.2°、14.3±0.2°、24.5±0.2°、13.2±0.2°、12.4±0.2°、29.2±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
    例如，晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和25.1±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°和21.5±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°和28.6±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°和28.6±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、5.1±0.2°和14.3±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、28.6±0.2°和14.3±0.2°处；
    或者，20.2±0.2°、22.2±0.2°、12.2±0.2°、25.1±0.2°、21.5±0.2°、18.5±0.2°、17.8±0.2°、20.0±0.2、5.1±0.2°和14.3±0.2°处；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、17.5±0.2°、21.8±0.2°、19.5±0.2°、22.3±0.2°、24.3±0.2°、14.5±0.2°、30.1±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
    例如，晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为以下位置处有衍射峰：
    17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和18.2±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°和24.0±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°和17.5±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°和17.5±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、17.5±0.2°和19.5±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、21.8±0.2°和19.5±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、17.5±0.2°和19.5±0.2°处；
    或者，17.8±0.2°、19.8±0.2°、26.1±0.2°、18.2±0.2°、24.0±0.2°、22.8±0.2°、10.5±0.2°、21.5±0.2、21.8±0.2°和19.5±0.2°处。
  16. 根据权利要求12所述的晶型，其特征在于，晶型A的X-射线粉末衍射图谱如图12所示，或者，晶型A具有如图13所示的DSC图谱，或者，具有如图14所示的TGA图谱；
    晶型B的X-射线粉末衍射图谱如图15所示，或者，晶型B具有如图16所示的DSC图谱；
    晶型C的X-射线粉末衍射图谱如图17所示，或者，晶型C具有如图18所示的DSC图谱。
  17. 根据权利要求1～16任一项所述的晶型，其特征在于，晶型的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置分别与对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优选±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°。
  18. 一种制备权利要求1-17任意一项所述晶型的方法，具体包括如下步骤：
    1)称取适量的自由碱，用不良性溶剂混悬，得到混悬液；悬浮密度优选为50～200mg/mL；
    2)将步骤1)所得混悬液在0～40℃下振摇1～10天；
    3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，干燥、得到目标产物；
    其中：
    所述步骤1)的不良性溶剂选自丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮；优选3-戊酮、乙腈、二氯甲烷或1,4-二氧六环。
  19. 一种制备权利要求1-17任意一项所述晶型的方法，具体包括如下步骤：
    1)称取适量的自由碱，用良性溶剂溶解；
    2)向步骤1)所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出；
    3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，干燥、得到目标产物；
    其中：
    所述步骤1)的良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮或3-戊酮；优选N，N-二甲基甲酰胺或乙腈。
    所述步骤2)的反溶剂选自庚烷、水、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚；优选水。
  20. 一种制备权利要求1-17任一项所述晶型的方法，具体包括如下步骤：
    1)称取适量的自由碱，用不良溶剂混悬；
    2)将步骤1)所得混悬液在一定温度下振摇一定时间；
    3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体干燥至恒重得到目标产物；
    其中：
    所述的不良性溶剂选自丙酮、乙酸乙酯、醋酸异丙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮、甲基叔丁基醚和水中的一种或多种，优选丙酮、乙酸乙酯、醋酸异丙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、甲苯、异丙醇、2-丁酮、3-戊酮、甲基叔丁基醚和水中的一种或多种；
    或者，具体包括如下步骤：
    1)称取适量的自由碱，用良溶剂溶解；
    2)在一定温度下向步骤1)所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出；
    3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体干燥至恒重得到目标产物；
    其中：
    所述的良溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮和N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种，优选N-甲基吡咯烷酮；
    所述的反溶剂选自庚烷、水、甲基叔丁基醚、甲苯或异丙醚；
    或者，具体包括如下步骤：
    1)称取适量的自由碱，用良溶剂加热溶解；
    2)将步骤1)所得溶液迅速降温，搅拌至固体析出；
    3)将步骤2)所得混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体干燥至恒重得到目标产物；
    其中：
    所述的良溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮和N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种，优选2-甲基四氢呋喃。
  21. 一种药物组合物，其含有治疗有效量的权利要求1-17中任一项所述的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
  22. 根据权利要求1-17中任一项所述的晶型，以及权利要求21所述的药物组合物在制备SHP-2抑制剂药物中的应用。
  23. 根据权利要求22所述的应用，其中所述的应用为在制备治疗努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、食管癌、头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌及其结肠癌疾病或病症的药物中的用途；优选非小细胞肺癌、食管癌或头颈部肿瘤。
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