TW202308655A - 膦醯衍生物及其組合物和藥學上的應用 - Google Patents
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Abstract
本發明涉及一種通式(I)所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，及其中間體，以及在EGFR相關疾病如癌症中的用途。
B-L-K (I)
Description
本發明涉及一種通式(I)的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，及其中間體和製備方法，以及在EGFR相關疾病如癌症疾病中的用途。
表皮生長因數受體(EGFR)是一種跨膜蛋白酪氨酸激酶，可作為EGF家族成員觸發人類上皮細胞中EGFR訊號通路的受體，從而調節細胞增殖，侵襲，轉移，凋亡和血管生成(Nat.Rev.Cancer,2007,7,169-181；Expert Opin.Ther.Targets,2012,16,15-31.)。人體內EGFR基因的過度表達、突變或擴增致使EGFR活性異常增加，會導致許多惡性腫瘤如食道癌、膠質母細胞瘤、肛門癌、頭頸部上皮癌、乳腺癌、肺癌、特別是非小細胞肺癌(NSCLC)的產生(Cells,2019,8,350-361.)。
PROTAC(proteolysis targeting chimera)分子是一類能夠同時結合靶向蛋白和E3泛素連接酶的雙功能化合物，此類化合物能夠被細胞的蛋白酶體識別，引起靶向蛋白的降解，能夠有效地降低靶向蛋白在細胞中的含量。通過在PROTAC分子引入能結合不同靶向蛋白的配體，使PROTAC技術應用於各種疾病的治療成為可能，該技術近年來同時得到了廣泛的關注(ACS Chem.Biol. 2017,12,892-898；Drug Discovery Today Technol. 2019,31,15-27.)。
開發新型的結合EGFR蛋白和E3泛素連接酶的PROTAC藥物，用於治療與EGFR蛋白相關的疾病，將充滿應用前景。
本發明的目的在於提供一種結構新穎的、藥效好、生物利用度高、更安全、能抑制並降解EGFR的化合物，用於治療與EGFR相關疾病如癌症。
本發明提供一種化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，化合物選自通式(I)所示的化合物，
B-L-K (I)；
在某些實施方案中，L選自鍵或-C1-50烴基-，所述烴基中有0至20個亞甲基單員任選進一步被-Ak-、-Cy-替換；
在某些實施方案中，L選自鍵或-C1-20烴基-，所述烴基中有0至20個亞甲基單員任選進一步被-Ak-、-Cy-替換；
在某些實施方案中，L選自鍵或-C1-10烴基-，所述烴基中有0至10個(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)亞甲基單員任選進一步被-Ak-、-Cy-替換；
在某些實施方案中，每個-Ak-各自獨立地選自Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5；
在某些實施方案中，每個-Ak-各自獨立地選自-(CH2)q-、-(CH2)q-O-、-O-(CH2)q-、-(CH2)q-NRL-、-NRL-(CH2)q-、-(CH2)q-NRLC(=O)-、-NRL(CH2)qC(=O)-、-(CH2)q-C(=O)NRL-、-C(=O)-、-C(=O)-(CH2)q-NRL-、-(C≡C)q-、-CH=CH-、-Si(RL)2-、-Si(OH)(RL)-、-Si(OH)2-、-P(=O)(ORL)-、-P(=O)(RL)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-或者鍵，所述的-CH2-任選進一步被0至2個(例如0、1或2個)選自H、鹵素、OH、CN、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、氰基取代的C1-6烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，每個-Cy-各自獨立地選自Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5；
在某些實施方案中，每個-Cy-各自獨立地選自鍵、4-8員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、7-10員雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述芳基、雜芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜芳基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；
在某些實施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立地選自鍵、4-7員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、7-10員雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述芳基、雜芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜芳基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；
在某些實施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵、4-7員含氮雜單環、4-10員含氮雜並環、5-12員含氮雜螺環、7-10員含氮雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述雜單環、雜並環、雜橋環、雜螺環、環烷基、芳基或雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜單環、雜並環、雜橋環、雜螺環或雜芳基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子，當
雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；
在某些實施方案中，L選自-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Cy5-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Ak5-Cy4-；
在某些實施方案中，L選自-Cy1-、-Cy1-Ak1-、-Cy1-Ak1-Ak2-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-、-Cy1-Ak1-Cy2-、-Cy1-
Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Cy5-、-Ak1-Cy2-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Ak2-Ak3-、-Ak1-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-；
在某些實施方案中，L選自-Cy1-Cy2-、-Cy1-CH2-Cy2-，Cy1、Cy2各自獨立的選自哌嗪、哌啶、氮雜環丁基、氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環已基、氮雜環丁基螺氮雜環已基、環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環已基螺氮雜環已基、環已基螺氮雜環已基、環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環戊基，所述的Cy1、Cy2任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、COOH、CN、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些實施方案中，L選自鍵或表A中的基團，基團左側與B連接；
表A L基團
在某些實施方案中，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自獨立的選自-(CH2)q-、-(CH2)q-O-、-O-(CH2)q-、-(CH2)q-NRL-、-NRL-(CH2)q-、-(CH2)q-NRLC(=O)-、-(CH2)q-C(=O)NRL-、-C(=O)-、-C(=O)-(CH2)q-NRL-、-(C≡C)q-或者鍵，所述的-CH2-任選進一步被0至2個(例如0、1或2個)選自H、鹵素、OH、CN、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自獨立的選自-O-、-OCH2-、-CH2O-、-OCH2CH2-、-CH2CH2O-、-C≡C-、-C(CH3)2-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-N(CH3)-、-NH-、-CH2N(CH3)-、-CH2NH-、-NHCH2-、-CH2CH2N(CH3)-、-CH2CH2NH-、-NHCH2CH2-、-C(=O)-、-C(=O)CH2NH-、-CH2C(=O)NH-、-C(=O)N(CH3)-、-N(CH3)C(=O)-、-C(=O)NH-或-NHC(=O)-；
在某些實施方案中，RL各自獨立的選自H、C1-6烷基、3-7員雜環基、3-7員環烷基、苯基或5-6員雜芳基；
在某些實施方案中，RL各自獨立的選自H或C1-6烷基；
在某些實施方案中，RL各自獨立的選自H或C1-4烷基；
在某些實施方案中，RL各自獨立的自H、甲基或乙基；
在某些實施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵或取代的或者未取代的如下基團之一：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、氮雜環己烯基、哌啶、嗎啉、哌嗪、苯基、環丙基並環丙基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環已基、環戊基並環戊基、環戊基並環已基、環已基並環已基、環丙基螺環丙基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環已基、環已基螺環已基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環已基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環已基、環已基並氮雜環丁基、環已基並氮雜環戊基、環已基並氮雜環已基、環己基並哌啶、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環已基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環已基、氮雜環已基並氮雜環丁基、氮雜環已基並氮雜環戊基、氮雜環已基並氮雜環已基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環已基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環已基、環已基螺氮雜環丁基、環已基螺氮雜環戊基、環已基螺氮雜環已基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環已基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環已基、氮雜環已基螺氮雜
環丁基、氮雜環已基螺氮雜環戊基、氮雜環已基螺氮雜環已基、
、
、
、
、
、
、
、
，當被取代時，任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、COOH、CN、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵或取代的或者未取代的如下基團之一：
、
、
、
、
、
、
或
，當被取代時，任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、CF3、甲基、=O、羥甲基、COOH、CN或NH2的取代基所取代；
在某些實施方案中，K選自
、
、
或
；
在某些實施方案中，K選自
、
、
在某些實施方案中，K選自
、
、
在某些實施方案中，Q各自獨立地選自鍵、-O-、-S-、-CH2-、-NRq-、-CO-、-NRqCO-、-CONRq-或3-12員雜環，所述的雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Q各自獨立地選自-O-、-S-、-CH2-、-NRq-、-CO-、-NRqCO-、-CONRq-或4-7員雜環，所述的雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rq選自H或C1-6烷基；
在某些實施方案中，Rq選自H或C1-4烷基；
在某些實施方案中，Rq選自H、甲基、乙基；
在某些實施方案中，E各自獨立地選自C3-10碳環、C6-10芳環、3-12員雜環或5-12員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，E各自獨立地選自C3-8碳環、苯環、4-7員雜環、8-12員雜環、7-12員雜芳環或5-6員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，E各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、吲哚啉基、異吲哚啉基、1,2,3,4-四氫喹啉基或1,2,3,4-四氫異喹啉基；
在某些實施方案中，E各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、
吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
在某些實施方案中，E各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基；
在某些實施方案中，E各自獨立的選自苯環或吡啶環；
在某些實施方案中，A選自C3-10碳環、C6-10芳環、3-10員雜環或5-10員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，A、H1或H2各自獨立地選自C3-8碳環、苯環、4-7員雜環或5-6員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，A、H1或H2各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
在某些實施方案中，A、H1或H2各自獨立地選自苯基或吡啶基；
在某些實施方案中，F各自獨立地選自C3-20碳環基、C6-20芳基、3-20員雜環基或5-20員雜芳環，所述雜環基或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，F各自獨立地選自3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、5-10員橋環烷基、4-7員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、5-10員雜橋環、C6-14芳環或5-10員雜芳環，所述雜單環、雜並環、雜螺環、雜橋環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，F各自獨立地選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、雙環[1.1.1]戊烷基、6,7-二氫-5H-環戊[c]吡啶基、2,3-二氫-1H-茚基、苯基、萘基、蒽基、菲基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基、嗎啉基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、
呋喃基、噻吩基、噻唑基、2-吡啶酮、苯並噁唑基、吡啶並咪唑基、苯並咪唑基、苯並吡唑基、苯並噻唑基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、苯並吡咯基、苯並吡啶基、苯並吡嗪基、苯並嘧啶基、苯並噠嗪基、苯並三嗪基、吡咯並吡咯基、吡咯並吡啶基、吡咯並嘧啶基、吡咯並噠嗪基、吡咯並吡嗪基、咪唑並嘧啶基、咪唑並吡啶基、咪唑並吡嗪基、咪唑並噠嗪基、吡唑並吡啶基、吡唑並嘧啶基、吡唑並噠嗪基、吡唑並吡嗪基、嘧啶並吡啶基、嘧啶並吡嗪基、嘧啶並噠嗪基、嘧啶並嘧啶基、吡啶並吡啶基、吡啶並吡嗪基、吡啶並噠嗪基、噠嗪並噠嗪基、噠嗪並吡嗪基或吡嗪並吡嗪基；
在某些實施方案中，Rk2各自獨立地選自鍵、-CO-、-SO2-、-SO-或-C(Rk3)2-；
在某些實施方案中，Rk2各自獨立地選自-CO-、-SO2-或-C(Rk3)2-；
在某些實施方案中，Rk1各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基，所述的烷基、烷氧基、環烷基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rk3各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8環烷基或3-8員雜環基，所述的烷基、烷氧基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rk1、Rk3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CF3、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述烷基或烷氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rk1、Rk3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CF3、CN、COOH、CONH2、甲基、乙基、異丙基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基，所述甲基、乙基、異丙基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2的取代基所取代；
在某些實施方案中，兩個Rk3和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-8員碳環或3-8員雜環，兩個Rk1和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-8員碳環或3-8員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，兩個Rk3和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-6員碳環或3-7員雜環，兩個Rk1和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-6員碳環或3-7員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rk4各自獨立地選自H、OH、NH2、CN、CONH2、C1-6烷基、C3-8環烷基或3-8員雜環基，所述的烷基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rk4各自獨立的選自H、OH、NH2、CF3、CN、C1-4烷基；
在某些實施方案中，Rk5各自獨立地選自
、C(CH3)2、CO、CH2、
SO2、
、
、
；
在某些實施方案中，Rk5各自獨立地選自CO、CH2、SO2或
；
在某些實施方案中，Rk6各自獨立地選自CO、CH、SO、SO2、CH2或N；
在某些實施方案中，Rk7各自獨立地選自
、C(CH3)2、CO、CH、N、CH2、O、S、N(CH3)、N(CH2CH3)、N(環丙基)或NH；
在某些實施方案中，Rk7各自獨立地選自
、C(CH3)2、CH2、O、N(CH3)、N(CH2CH3)、N(環丙基)或NH；
在某些實施方案中，Rk7各自獨立地選自CO、CH、N、CH2、O、S、N(CH3)或NH；
在某些實施方案中，Rk7各自獨立地選自CH2、O、N(CH3)或NH；
在某些實施方案中，Rk8各自獨立地選自C、N或CH；
在某些實施方案中，Rk9各自獨立地選自鍵、
、C(CH3)2、CO、CH2、CH2CH2或SO2；
在某些實施方案中，Rk9各自獨立地選自CO、SO2或CH2；
在某些實施方案中，M1選自鍵、-CH2-C(=O)NH-或-C(=O)CH2NH-；
在某些實施方案中，M2選自-NHC(=O)-C1-6烷基、-NHC(=O)-C3-6環烷基或4-10員雜環基，所述的烷基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、NH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，M3選自-NH-或-O-；
在某些實施方案中，Rk10選自C1-6烷基，所述的烷基任選進一步
被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、C1-6烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，G選自6-10員芳環或5-10員雜芳環，所述的芳環或者雜芳環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CF3、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜芳環含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自N、O、S的雜原子；
在某些實施方案中，Rk11各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、SH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-O-C(=O)-C1-6烷基，所述的烷基、烷氧基或烷硫基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rk12、Rk13各自獨立的選自H、C1-6烷基或C3-6環烷基，所述的烷基或環烷基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、NH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rk14選自5-6員雜芳基，所述的雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3、4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CF3、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜芳基含有1至4個(例如1、2、3、4個)選自N、O、S的雜原子；
在某些實施方案中，K選自表K-1所示的結構片段之一；
在某些實施方案中，K選自表K-2所示的結構片段之一；
在某些實施方案中，K選自表K-3所示的結構片段之一；
在某些實施方案中，K選自
、
、
在某些實施方案中，B選自
、
；
在某些實施方案中，B選自
、
、
、
；
在某些實施方案中，B選自如下結構片段之一：
在某些實施方案中，B選自如下結構片段之一：
在某些實施方案中，B選自表B-1所示的結構片段之一；
在某些實施方案中，B選自
；
在某些實施方案中，B選自
、
、
；
在某些實施方案中，L選自-Cy1-CH2-Cy2-，Cy1選自4-6員含氮雜環基(較佳氮雜環丁基、氮雜環戊基、氮雜環己基、哌嗪)，Cy2選自4-6員含氮雜環基(較佳氮雜環丁基、氮雜環戊基、氮雜環己基、哌嗪)；
在某些實施方案中，r3選自0、1、2、3或4；
在某些實施方案中，r4選自0、1或2；
在某些實施方案中，r6選自0、1、2或3；
在某些實施方案中，環W選自C6-10碳環、5至10員雜環、C6-10芳環、5至10員雜芳環，所述的雜環或雜芳環含有1至5個(例如1、2、3、4或5個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，環W選自苯環、萘環、5-6員單環雜芳環、9-10員並環雜芳環或9-10員雜環，所述的雜環或雜芳環含有1至5個(例如1、2、3、4或5個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，
選自
、
、
在某些實施方案中，環V選自4至10員雜環或者C3-10碳環，所述的雜環或者碳環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，環V選自4至6員雜環或者C3-6碳環，所述的雜環或者碳環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，環V選自氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基或哌嗪基，所述的氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基或哌嗪基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，環V選自哌啶、哌嗪，所述哌啶、哌嗪任選進一步被0至2個F取代；
在某些實施方案中，Rb1、Rb2各自獨立的選自H、OH或C1-4烷基；
在某些實施方案中，Rb1、Rb2各自獨立的選自甲基或乙基；
在某些實施方案中，Rb1、Rb2選自甲基；
在某些實施方案中，Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、
CN、C1-4烷基、C2-4炔基C1-4烷氧基、C3-6環烷基、3至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，所述的烷基、炔基、烷氧基、環烷基、苯基、雜環基或雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜環基或雜芳基含有1至3個(例如1、2或3個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙基氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙基氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代的取代基所取代，所述的雜芳基含有1至3個(例如1、2或3個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基，所述的苯基或5至6員雜芳基(例如吡唑、吡咯)任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代，所述的雜芳基含有1至3個(例如1、2或3個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rb4各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述的烷基或烷氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rb4各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、
CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rb4選自H、F、Cl或Br；
在某些實施方案中，Rb5選自H、C1-4烷基，所述的烷基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rb5選自H；
在某些實施方案中，Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基，所述的烷基、炔基、烷氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
在某些實施方案中，Rb7選自4至7員雜環或者C3-7碳環，所述的碳環或雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、氘代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個(例如1、2或3個)選自O、S、N的雜原子；
在某些實施方案中，Rb7選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、
吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述Rb7任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、氘代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；
在某些實施方案中，Rb7選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述Rb7任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、CH2D、CHD2、CD3、甲基、乙基的取代基所取代；
在某些實施方案中，q各自獨立的選自0、1、2、3、4、5或6；
在某些實施方案中，q各自獨立的選自0、1、2、3或4；
在某些實施方案中，q各自獨立的選自0、1或2；
在某些實施方案中，n1、n2、n3各自獨立的選自0、1、2或3；
在某些實施方案中，p1或p2各自獨立的選自0、1、2、3、4或5；
在某些實施方案中，p1或p2各自獨立的選自0、1或2；
任選地，通式(I)所示化合物不為
。
作為本發明的第一種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
B-L-K (I)；
L選自鍵或-C1-50烴基-，所述烴基中有0至20個亞甲基單員任選進一步被-Ak-、-Cy-替換；
每個-Ak-各自獨立地選自-(CH2)q-、-(CH2)q-O-、-O-(CH2)q-、-
(CH2)q-NRL-、-NRL-(CH2)q-、-(CH2)q-NRLC(=O)-、-NRL(CH2)qC(=O)-、-(CH2)q-C(=O)NRL-、-C(=O)-、-C(=O)-(CH2)q-NRL-、-(C≡C)q-、-CH=CH-、-Si(RL)2-、-Si(OH)(RL)-、-Si(OH)2-、-P(=O)(ORL)-、-P(=O)(RL)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-或者鍵，所述的-CH2-任選進一步被0至2個(例如0、1或2)選自H、鹵素、OH、CN、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、氰基取代的C1-6烷基的取代基所取代；
q各自獨立的選自0、1、2、3、4、5或6；
RL各自獨立的選自H、C1-6烷基、3-7員雜環基、3-7員環烷基、苯基或5-6員雜芳基；
每個-Cy-各自獨立地選自鍵、4-8員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、7-10員雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述芳基、雜芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜芳基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；
B選自
、
；
r3選自0、1、2、3或4；
r4選自0、1或2；
r6選自0、1、2或3；
環W選自C6-10碳環、5至10員雜環、C6-10芳環、5至10員雜芳環，所述的雜環或雜芳環含有1至5個例如1、2、3、4或5個)選自O、S、N的雜原子；
環V選自4至10員雜環或者C3-10碳環，所述的雜環或者碳環任
選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；
Rb1、Rb2各自獨立的選自H、OH或C1-4烷基；
Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C2-4炔基C1-4烷氧基、C3-6環烷基、3至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，所述的烷基、炔基、烷氧基、環烷基、苯基、雜環基或雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜環基或雜芳基含有1至3個(例如1、2或3個)選自O、S、N的雜原子；
Rb4各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述的烷基或烷氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
Rb5選自H、C1-4烷基，所述的烷基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基，所述的烷基、炔基、烷氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
Rb7選自4至7員雜環或者C3-7碳環，所述的碳環或雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、氘代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個(例如1、2或3個)選
自O、S、N的雜原子；
K選自
、
、
、
、
、
或
；
Q各自獨立地選自鍵、-O-、-S-、-CH2-、-NRq-、-CO-、-NRqCO-、-CONRq-或3-12員雜環基，所述的雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
Rq選自H或C1-6烷基；
A選自C3-10碳環、C6-10芳環、3-10員雜環或5-10員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
F各自獨立地選自C3-20碳環、C6-20芳環、3-20員雜環或5-20員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
Rk2各自獨立地選自鍵、-CO-、-SO2-、-SO-或-C(Rk3)2-；
Rk1各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基，所述的烷基、烷氧基或環烷基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、
NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6環烷基的取代基所取代；
Rk3各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8環烷基或3-8員雜環基，所述的烷基、烷氧基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
或者兩個Rk3和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-8員碳環或3-8員雜環，兩個Rk1和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-8員碳環或3-8員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
Rk4各自獨立地選自H、OH、NH2、CN、CONH2、C1-6烷基、C3-8環烷基或3-8員雜環基，所述的烷基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
M1選自鍵、-CH2-C(=O)NH-或-C(=O)CH2NH-；
M2選自-NHC(=O)-C1-6烷基、-NHC(=O)-C3-6環烷基或4-10員雜環基，所述的烷基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、NH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
M3選自-NH-或-O-；
Rk10選自C1-6烷基，所述的烷基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、C1-6烷基或C3-6環烷基的取代
基所取代；
Rk11各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、SH、C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6烷硫基或-O-C(=O)-C1-6烷基，所述的烷基、烷氧基或烷硫基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
Rk12、Rk13各自獨立的選自H、C1-6烷基或C3-6環烷基，所述的烷基或環烷基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、NH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
Rk14選自5-6員雜芳基，所述的雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CF3、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜芳基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自N、O、S的雜原子；
G選自6-10員芳環或5-10員雜芳環，所述的芳環或者雜芳環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CF3、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜芳環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自N、O、S的雜原子；
n1、n2、n3各自獨立的選自0、1、2或3；
p1或p2各自獨立的選自0、1、2、3、4或5。
作為本發明的第二種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
L選自-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Cy5-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-
Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Ak5-Cy4-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自獨立的選自-(CH2)q-、-(CH2)q-O-、-O-(CH2)q-、-(CH2)q-NRL-、-NRL-(CH2)q-、-(CH2)q-NRLC(=O)-、-(CH2)q-C(=O)NRL-、-C(=O)-、-C(=O)-(CH2)q-NRL-、-(C≡C)q-或者鍵，所述的-CH2-任選進一步被0至2個(例如0、1或2個)選自H、鹵素、OH、CN、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立地選自鍵、4-7員雜單環、
4-10員雜並環、5-12員雜螺環、7-10員雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述芳基、雜芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜芳基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；
q各自獨立的選自0、1、2、3或4；
RL各自獨立的選自H或C1-6烷基；
其餘基團定義與本發明第一種實施方案相同。
作為本發明的第三種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵、4-7員含氮雜單環、4-10員含氮雜並環、5-12員含氮雜螺環、7-10員含氮雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述雜單環、雜並環、雜橋環、雜螺環、環烷基、芳基或雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜單環、雜並環、雜橋環、雜螺環或雜芳基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；
RL各自獨立的選自H或C1-4烷基；
環W選自苯環、萘環、5-6員單環雜芳環、9-10員並環雜芳環或9-10員雜環，所述的雜環或雜芳環含有1至5個(例如1、2、3、4或5個)選自O、S、N的雜原子；
環V選自4至6員雜環或者C3-6碳環，所述的雜環或者碳環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；
K選自
、
、
、
、
或
；
Q各自獨立地選自-O-、-S-、-CH2-、-NRq-、-CO-、-NRqCO-、-CONRq-
或4-7員雜環基，所述的雜環基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
Rq選自H或C1-4烷基；
Rk1、Rk3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CF3、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述烷基或烷氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2的取代基所取代；
或者兩個Rk3和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-6員碳環或3-7員雜環，兩個Rk1和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-6員碳環或3-7員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
Rk4各自獨立的選自H、OH、NH2、CF3、CN、C1-4烷基；
Rk5各自獨立地選自
、C(CH3)2、CO、CH2、SO2、
、
、
；
Rk6各自獨立地選自CO、CH、SO、SO2、CH2或N；
Rk7各自獨立地選自
、C(CH3)2、CO、CH、N、CH2、O、S、N(CH3)、N(CH2CH3)、N(環丙基)或NH；
Rk8各自獨立地選自C、N或CH；
Rk9各自獨立地選自鍵、
、C(CH3)2、CO、CH2、CH2CH2或SO2；
A、H1或H2各自獨立地選自C3-8碳環、苯環、4-7員雜環或5-6
員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
E各自獨立地選自C3-8碳環、苯環、4-7員雜環、8-12員雜環、7-12員雜芳環或5-6員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
F各自獨立地選自3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、5-10員橋環烷基、4-7員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、5-10員雜橋環、C6-14芳基或5-10員雜芳基，所述雜單環、雜並環、雜螺環、雜橋環或雜芳基含有1至4個(例如1、2、3或4個)選自O、S、N的雜原子；
其餘基團定義與本發明第一、二種實施方案中任意一種相同。
作為本發明的第四種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
RL選自H、甲基或乙基；
q各自獨立的選自0、1或2；
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵或取代的或者未取代的如下基團之一：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、氮雜環己烯基、哌啶、嗎啉、哌嗪、苯基、環丙基並環丙基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環已基、環戊基並環戊基、環戊基並環已基、環已基並環已基、環丙基螺環丙基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環已基、環已基螺環已基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環已基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環已基、環已基並氮雜環丁基、環已基並氮雜環戊基、環已基並氮雜環已基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環已基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、
氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環已基、氮雜環已基並氮雜環丁基、氮雜環已基並氮雜環戊基、氮雜環已基並氮雜環已基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環已基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環已基、環已基螺氮雜環丁基、環已基螺氮雜環戊基、環已基螺氮雜環已基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環已基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環已基、氮雜環已基螺氮雜環丁基、氮雜環已基螺氮雜環戊基、氮雜環已基螺氮雜環已基、
、
、
、
、
、
、
、
或
，當被取代時，任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、COOH、CN、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
環V選自氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基或哌嗪基，所述的氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基或哌嗪基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基的取代基所取代；
Rb1、Rb2各自獨立的選自甲基或乙基；
Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙基氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙基氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代的取代基所取代，所述的雜芳基含有1至3個(例如1、2或3個)選自O、S、N的雜原子；
Rb4各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
Rb5選自H；
Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；
Rb7選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述Rb7任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、氘代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4
烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；
K選自
、
、
、
、
E各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
A各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
F各自獨立地選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、雙環[1.1.1]戊烷基、6,7-二氫-5H-環戊[c]吡啶基、2,3-二氫-1H-茚基、苯基、萘基、蒽基、菲基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基、嗎啉基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、2-吡啶酮、苯並噁唑基、吡啶並咪唑基、苯並咪唑基、苯並吡唑基、苯並噻唑基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、苯並吡咯基、苯並吡啶基、苯並吡嗪基、苯並嘧啶基、苯並噠嗪基、苯並三嗪基、吡咯並吡咯基、吡咯並吡啶基、吡咯並嘧啶基、吡咯並噠嗪基、吡咯並吡嗪基、咪唑並嘧啶基、咪唑並吡啶基、咪唑並吡嗪基、咪唑並噠嗪基、吡唑並吡啶基、吡唑並嘧啶基、吡唑並噠嗪基、吡唑並吡嗪基、嘧啶並吡啶基、嘧啶並吡嗪基、嘧啶並噠嗪基、嘧啶並嘧啶基、吡啶並吡啶基、吡啶並吡嗪基、吡啶並噠嗪基、噠嗪並噠嗪基、噠嗪並吡嗪基或吡嗪並
吡嗪基；
Rk7各自獨立地選自
、C(CH3)2、CH2、O、N(CH3)、N(CH2CH3)、N(環丙基)或NH；
p1或p2各自獨立的選自0、1或2；
其餘基團定義與本發明第一、二、三種實施方案中任意一種相同。
作為本發明的第五種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵或取代的或者未
取代的如下基團之一：
、
、
、
、
、
、
B選自
、
、
、
；
環V選自哌啶、哌嗪，所述哌啶、哌嗪任選進一步被0至2個(例如0、1或2個)F取代；
Rb1、Rb2選自甲基；
K選自表K-1所示的結構片段之一；
其餘基團定義與本發明第一、二、三或四種實施方案中任意一種相同。
作為本發明的第六種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
L選自-Cy1-、-Cy1-Ak1-、-Cy1-Ak1-Ak2-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-、-Cy1-Ak1-Cy2-、-Cy1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-
Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Cy5-、-Ak1-Cy2-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Ak2-Ak3-、-Ak1-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自獨立的選自-O-、-OCH2-、-CH2O-、-OCH2CH2-、-CH2CH2O-、-C≡C-、-C(CH3)2-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-N(CH3)-、-NH-、-CH2N(CH3)-、-CH2NH-、-NHCH2-、-CH2CH2N(CH3)-、-CH2CH2NH-、-NHCH2CH2-、-C(=O)-、-C(=O)CH2NH-、-CH2C(=O)NH-、-C(=O)N(CH3)-、-N(CH3)C(=O)-、-C(=O)NH-或-NHC(=O)-；
其餘基團定義與本發明第一、二、三、四或五種實施方案中任意一種相同。
作為本發明的第七種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
L選自鍵或表A中的基團，其中基團左側與B連接；
其餘基團定義與本發明第一、二、三、四、五或六種實施方案中任意一種相同。
作為本發明的第八種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
B選自如下結構片段之一：
Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基，所述的苯基或5至6員雜芳基任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代，所述的雜芳基含有1至3個(例如1、2、或3個)選自O、S、N的雜原子；
Rb4選自H、F、Cl或Br；
Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
Rb7選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述Rb7任選進一步被0至4個(例如0、1、2、3或4個)選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、CH2D、CHD2、CD3、甲基、乙基的取代基所取代；
K選自表K-2所示的結構片段之一；
其餘基團定義與本發明第一、二、三、四、五、六或七種實施方案中任意一種相同。
作為本發明的第九種實施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，
B選自表B-1所示結構片段之一；
K選自表K-3所示的結構片段之一；
其餘基團定義與本發明第一、二、三、四、五、六、七或八種實施方案中任意一種相同。
本發明涉及一種下述化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中化合物選自表E-1所示結構之一。
本發明涉及一種下述化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中化合物選自實施例1至實施例173的化合物。
本發明涉及一種下述化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中化合物選自
，其中K與表K-2相同。
本發明涉及一種藥物組合物，包括本發明上述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，以及藥學上可接受的載體，任選地包含一種多或多種其它化學治療劑。
本發明涉及一種本發明上述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶或所述藥物組合物在用於製備治療與EGFR活性或表達量相關疾病的藥物中的應用。
本發明涉及一種本發明上述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶或所述藥物組合物在用於製備治療與抑制或降解EGFR相關疾病的藥物中的應用。
本發明涉及的本發明上述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶的應用，其特徵在於，所
述的疾病選自癌症，較佳非小細胞肺癌。
除非有相反的陳述，在說明書和權利要求書中使用的術語具有下述含義。
本發明所述基團和化合物中所涉及的碳、氫、氧、硫、氮或F、Cl、Br、I均包括它們的同位素情況，及本發明所述基團和化合物中所涉及的碳、氫、氧、硫或氮任選進一步被一個或多個它們對應的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氫的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氫)、氚(T，又叫超重氫)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素包括17F和19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
“鹵素”是指F、Cl、Br或I。
“鹵素取代的”是指F、Cl、Br或I取代，包括但不限於1至10個選自F、Cl、Br或I的取代基所取代，1至6個選自F、Cl、Br或I的取代基所取代，1至4個選自F、Cl、Br或I的取代基所取代。“鹵素取代的”簡稱為“鹵代”。
“烷基”是指取代的或者未取代的直鏈或支鏈飽和脂肪族烴基，包括但不限於1至20個碳原子的烷基、1至8個碳原子的烷基、1至6個碳原子的烷基、1至4個碳原子的烷基。非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、新丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基及其各種支鏈異構體；本文中出現的烷基，其定義與本定義一致。烷基可以是一價、二價、三價或四價。
“烴基”是指取代的或者未取代的、直鏈或支鏈的、飽和或不飽和的由碳、氫原子組成的基團。烴基可以是一價、二價、三價或四價。
“雜烷基”指取代的或者未取代的烷基中的1個或多個(包括但不限於2、3、4、5或6個)碳原子被雜原子(包括但不限於N、O或S)替換。非限制性實施例包括-X(CH2)v-X(CH2)v-X(CH2)v-H(v為1至5的整數，X各自獨立
的選自鍵或雜原子，雜原子包括但不限於N、O或S，且至少有1個X選自雜原子，且雜原子中的N或S可被氧化成各種氧化態)。雜烷基可以是一價、二價、三價或四價。
“亞烷基”是指取代的或者未取代的直鏈和支鏈的二價飽和烴基，包括-(CH2)v-(v為1至10的整數)，亞烷基實施例包括但不限於亞甲基、亞乙基、亞丙基和亞丁基等。
“亞雜烷基”是指取代的或者未取代的亞烷基中的1個或多個(包括但不限於2、3、4、5或6個)碳原子被雜原子(包括但不限於N、O或S)替換。非限制性實施例包括-X(CH2)v-X(CH2)v-X(CH2)v-，v為1至5的整數，X各自獨立的選自鍵、N、O或S，且至少有1個X選自N、O或S。
“環烷基”是指取代的或者未取代的飽和的碳環烴基，通常有3至10個碳原子，非限制性實施例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基等。本文中出現的環烷基，其定義如上所述。環烷基可以是一價、二價、三價或四價。
“雜環烷基”是指取代的或者未取代的飽和的含有雜原子的環烴基，包括但不限於3至10個原子、3至8個原子，包含1至3個選自N、O或S的雜原子，雜環烷基的環中選擇性取代的N、S可被氧化成各種氧化態。雜環烷基可以連接在雜原子或者碳原子上，雜環烷基可以連接在芳香環上或者非芳香環上，雜環烷基可以連接有橋環或者螺環，非限制性實施例包括環氧乙基、氮雜環丙基、氧雜環丁基、氮雜環丁基、四氫呋喃基、四氫-2H-吡喃基、二氧戊環基、二氧六環基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基、噁唑烷基、噁嗪烷基、嗎啉基、六氫嘧啶基、哌嗪基。雜環烷基可以是一價、二價、三價或四價。
“烯基”是指取代的或者未取代的直鏈和支鏈的不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳雙鍵，主鏈包括但不限於2至10個、2至6個或2至4個碳原子，烯基實施例包括但不限於乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-
戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；本文中出現的烯基，其定義與本定義一致。烯基可以是一價、二價、三價或四價。
“炔基”是指取代的或者未取代的直鏈和支鏈的一價不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳三鍵，包括但不限於在主鏈包括2至10個碳原子、2至6個碳原子、2至4個碳原子，炔基實施例包括但不限於乙炔基、炔丙基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-甲基-1-丁炔基、2-甲基-1-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、1-甲基-1-戊炔基、2-甲基-1-戊炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、1-辛炔基、3-辛炔基、1-壬炔基、3-壬炔基、1-癸炔基、4-癸炔基等；炔基可以是一價、二價、三價或四價。
“烷氧基”是指取代的或者未取代的-O-烷基。非限制性實施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、正己氧基、環丙氧基和環丁氧基。
“碳環基”或“碳環”是指取代的或未取代的飽和或不飽和的芳香環或者非芳香環，芳香環或者非芳香環可以是3至8員的單環、4至12員雙環或者10至15員三環體系，碳環基可以連接在芳香環上或者非芳香環上，芳香環或者非芳香環任選為單環、橋環或者螺環。非限制性實施例包括環丙烷、環丁烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、1-環戊基-1-烯基、1-環戊基-2-烯基、1-環戊基-3-烯基、環己基、1-環己基-2-烯基、1-環己基-3-烯基、環己烯基、苯環、萘環、
、
、
、
或
。“碳環基”或“碳環”可以是一價、二價、三價或四價。
“雜環基”或“雜環”是指取代的或未取代的飽和或不飽和的芳香環或者非芳香環，芳香環或者非芳香環可以是3至8員的單環、4至12員雙環或者10至15員三環體系，且包含1個或多個(包括但不限於2、3、4或5個)個選自N、O或S的雜原子，雜環基的環中選擇性取代的N、S可被氧化成各種氧化態。雜環基可以連接在雜原子或者碳原子上，雜環基可以連接在芳香環上或者非芳香環上，雜環基可以連接有橋環或者螺環，非限制性實施例包括環氧乙基、氮雜環丙基、氧雜環丁基、氮雜環丁基、1,3-二氧戊環基、1,4-二氧戊環基、1,3-二氧六環基、氮雜環庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、咪唑基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、1,3-二噻基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、二噻戊環基、四氫呋喃基、四氫吡咯基、四氫咪唑基、四氫噻唑基、四氫吡喃基、苯並咪唑基、苯並吡啶基、吡咯並吡啶基、苯並二氫呋喃基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、吡嗪基、吲唑基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、苯並吡咯基、苯並咪唑基、苯並噻唑基、苯並噁唑基、苯並吡啶基、苯並嘧啶基、苯並吡嗪基、哌嗪基、氮雜二環[3.2.1]辛烷基、氮雜二環[5.2.0]壬烷基、氧雜三環[5.3.1.1]十二烷基、氮雜金剛烷基、氧雜螺[3.3]庚烷基、
、
、
、
、
或
。“雜環基”或“雜環”可以是一價、二價、三價或四價。
“螺環”或“螺環基”是指取代的或未取代的單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環基團，螺環體系中環原子的個數包括但不限於含有5至20個、6至14個、6至12個、6至10個，其中一個或多個環可以含有0個或多個(包括
但不限於1、2、3或4)雙鍵，且任選可以含有0至5個選自N、O或S(=O)n的雜原子。
“並環”或“並環基”是指系統中的每個環與體系中的其他環共用毗鄰的一對原子的多環基團，其中一個或多個環可以含有0個或多個(包括但不限於1、2、3或4)雙鍵，且可以是取代的或未取代，並環體系中的各個環可以含0至5個雜原子或含有雜原子的基團(包括但不限於選自N、S(=O)n或O，n為0、1或2)。並環體系中環原子的個數包括但不限於5至20個，5至14個，5至12個，5至10個。非限定性實例包括：
“並環”或“並環基”可以是一價、二價、三價或四價。
“橋環”或“橋環基”是指取代的或未取代的含有任意兩個不直接連接的原子的多環基團，可以含有0個或多個雙鍵，並環體系中的任意環可以含0至5個選自雜原子或含有雜原子的基團(包括但不限於N、S(=O)n或O，其中n為0、1、2)。環原子個數包括但不限於5至20個、5至14個、5至12個或5至10個。非限定性實例包括
“碳螺環”、“螺環碳環基”、“螺碳環基”或者“碳螺環基”是指環體系僅有碳原子組成的“螺環”。本文中出現的“碳螺環”、“螺環碳環基”、“螺碳環基”或者“碳螺環基”，其定義與螺環一致。
“碳並環”、“並環碳環基”、“並碳環基”或者“碳並環基”是指環體系僅有碳原子組成的“並環”。本文中出現的“碳並環”、“並環碳環基”、“並碳環基”或者“碳並環基”，其定義與並環一致。
“碳橋環”、“橋環碳環基”、“橋碳環基”或者“碳橋環基”是指環體系僅有碳原子組成的“橋環”。本文中出現的“碳橋環”、“橋環碳環基”、“橋碳環基”或者“碳橋環基”，其定義與橋環一致。
“雜單環”、“單環雜環基”或“雜單環基”是指單環體系的“雜環基”或“雜環”，本文中出現的雜環基、“單環雜環基”或“雜單環基”，其定義與雜環一致。
“雜並環”、“雜並環基”、“並環雜環基”或“雜並環基”是指含有雜原子的“並環”。本文中出現的雜並環、“雜並環基”、“並環雜環基”或“雜並環基”，其定義與並環一致。
“雜螺環”、“雜螺環基”、“螺環雜環基”或“雜螺環基”是指含有雜原子的“螺環”。本文中出現的雜螺環、“雜螺環基”、“螺環雜環基”或“雜螺環基”，其定義與螺環一致。
“雜橋環”、“雜橋環基”、“橋環雜環基”或“雜橋環基”是指含有雜原
子的“橋環”。本文中出現的雜橋環、“雜橋環基”、“橋環雜環基”或“雜橋環基”，其定義與橋環一致。
“芳基”或“芳環”是指取代的或者未取代的具有單環或稠合環的芳香族烴基，芳香環中環原子個數包括但不限於6至18、6至12或6至10個碳原子。芳基環可以稠合於飽和或不飽和的碳環或雜環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，非限制性實施例包含苯環、萘環、
、
、
、
、
“芳基”或“芳環”可以是一價、二價、三價或四價。當為二價、三價或四價時，連接位點位於芳基環上。
“雜芳基”或“雜芳環”是指取代或未取代的芳香族烴基，且含有1至5個選雜原子或含有雜原子的基團(包括但不限於N、O或S(=O)n，n為0、1、2)，雜芳香環中環原子個數包括但不限於5至15、5至10或5至6個。雜芳基的非限制性實施例包括但不限於吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、咪唑基、苯並吡唑、苯並咪唑、苯並吡啶、吡咯並吡啶等。所述雜芳基環可以稠合於飽和或不飽和的碳環或雜環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包含
、
、
、
、
、
、
和
。本文中出現的雜芳基，其定義與本定義一致。雜芳基可以是一價、二價、三價或四價。當為二價、三價或四價時，連接位點位於雜芳基環上。
“5員環並5員雜芳環”是指5並5員的稠合雜芳環，2個並環中至少有1個環含有1個以上的雜原子(包括但不限於O、S或N)，整個基團具有芳香性，非限制實施例包括了吡咯並吡咯環、吡唑並吡咯環、吡唑並吡唑環、吡咯並呋喃環、吡唑並呋喃環、吡咯並噻吩環、吡唑並噻吩環。
“5並6員雜芳環”是指5並6員的稠合雜芳環，2個並環中至少有1個環含有1個以上的雜原子(包括但不限於O、S或N)，整個基團具有芳香性，非限制實施例包括了苯並5員雜芳基、6員雜芳環並5員雜芳環。
“取代”或“取代的”是指被1個或多個(包括但不限於2、3、4或5個)取代基所取代，取代基包括但不限於H、F、Cl、Br、I、烷基、環烷基、烷氧基、鹵代烷基、硫醇、羥基、硝基、巰基、氨基、氰基、異氰基、芳基、雜芳基、雜環基、橋環基、螺環基、並環基、羥基烷基、=O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2)m-C(=O)-Ra、-O-(CH2)m-C(=O)-Ra、-(CH2)m-C(=O)-NRbRc、-(CH2)mS(=O)nRa、-(CH2)m-烯基-Ra、ORd或-(CH2)m-炔基-Ra(其中m、n為0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、矽烷基或-NRbRc等基團，其中Rb與Rc獨立選自包括H、羥基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、磺醯基、三氟甲磺醯基，作為選擇，Rb與Rc可形成五或六員環烷基或雜環基，Ra、Rd獨立選自芳基、雜芳基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、羰基、酯基、橋環基、螺環基或並環基。
“含有1至5個選自O、S、N的雜原子”是指含有1、2、3、4或5個選自O、S、N的雜原子。
“0至X個選自...取代基所取代”是指被0、1、2、3....X個選自...取代基所取代，X選自1至10之間的任意整數。如“0至4個選自...取代基所取代”是指被0、1、2、3或4個選自...取代基所取代。如“0至5個選自...取代基所取代”是指被0、1、2、3、4或5個選自...取代基所取代。如“雜橋環任選進一步被0至4個選自H或F的取代基所取代”是指雜橋環任選進一步被0、1、2、3或4個選自H或F的取代基所取代。
X-Y員的環(X選自小於Y大於等於3的整數，Y選自4至12之間的任意整數)包括了X+1、X+2、X+3、X+4....Y員的環。環包括了雜環、碳環、芳環、芳基、雜芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環。如“4-7員雜單環”是指4員、5員、6員或7員的雜單環，“5-10員雜並環”是指5員、6員、7員、8員、9員或10員的雜並環。
“任選”或“任選地”是指隨後所描述的事件或環境可以但不必須發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。如：“任選被F取代的烷基”指烷基可以但不必須被F取代，說明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取
代的情形。
“藥學上可接受的鹽”或者“其藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物保持游離酸或者游離鹼的生物有效性和特性，且所述的游離酸通過與無毒的無機鹼或者有機鹼，所述的游離鹼通過與無毒的無機酸或者有機酸反應獲得的鹽。
“藥物組合物”是指一種或多種本發明所述化合物、或者其立體異構體、互變異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶和其它化學組分形成的混合物，其中，“其它化學組分”是指藥學上可接受的載體、賦形劑和/或一種或多種其它治療劑。
藥物組合物以適合於待治療(或預防)的疾病的方式給予。適當的劑量以及合適的給予持續時間和頻率將由諸如患者的狀況、患者的疾病的類型和嚴重程度、活性成分的特定形式以及給予方法的因素來確定。可以使用實驗模型和/或臨床試驗來確定最佳劑量。
在一些實施方案中，本方法涉及給予約0.1μg至約500mg本發明的至少一種化合物/kg受試者體重。更普遍地使用從約10μg至約200mg劑量的本申請公開的化合物，取決於受試者的生理反應。例如，用於治療和/或預防如本申請描述的疾病的本申請描述的化合物的劑量是約0.001至約1mg/kg受試者體重/天，例如約0.001mg、約0.002mg、約0.005mg、約0.010mg、0.015mg、約0.020mg、約0.025mg、約0.050mg、約0.075mg、約0.1mg、約0.15mg、約0.2mg、約0.25mg、約0.5mg、約0.75mg或約1mg/kg體重/天。在一些實施方案中，用於所描述的方法的本申請描述的化合物的劑量是約1至約1000mg/kg所治療的受試者體重/天，約1mg、約2mg、約5mg、約10mg、約15mg、約20mg、約25mg、約50mg、約75mg、約100mg、約150mg、約200mg、約250mg、約500mg、約750mg或約1000mg/天。
“載體”是指不會對生物體產生明顯刺激且不會消除所給予化合物的生物活性和特性的材料。
“賦形劑”是指加入到藥物組合物中以促進化合物給藥的惰性物質。非限制性實施例包括碳酸鈣、磷酸鈣、糖、澱粉、纖維素衍生物(包括微晶纖維素)、明膠、植物油、聚乙二醇類、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑和崩解劑。
“前藥”是指可經體內代謝轉化為具有生物活性的本發明化合物。本發明的前藥通過修飾本發明化合物中的氨基或者羧基來製備，該修飾可以通過常規的操作或者在體內被除去，而得到母體化合物。當本發明的前藥被施予哺乳動物個體時，前藥被割裂形成游離的氨基或者羧基。
“共晶”是指活性藥物成分(API)和共晶形成物(CCF)在氫鍵或其他非共價鍵的作用下結合而成的晶體，其中API和CCF的純態在室溫下均為固體，並且各組分間存在固定的化學計量比。共晶是一種多組分晶體，既包含兩種中性固體之間形成的二員共晶，也包含中性固體與鹽或溶劑化物形成的多員共晶。
“動物”是指包括哺乳動物，例如人、陪伴動物、動物園動物和家畜，較佳人、馬或者犬。
“立體異構體”是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構體，包括順反異構體、對映異構體和構象異構體。
“互變異構體”是指分子中某一原子在兩個位置迅速移動而產生的官能團異構體，如酮式-烯醇式異構和醯胺-亞胺醇式異構等。
“IC50”是對指定的生物過程(或該過程中的某個組分比如酶、受體、細胞等)抑制一半時所需的藥物或者抑制劑的濃度。
以下結合實施例詳細說明本發明的技術方案，但本發明的保護範圍包括但是不限於此。
為了完成本發明的目的，根據本領域技術人員已知的有機合成技術，從市售的化學品和/或化學文獻中描述的化合物開始，製備本文所述反應中使用的化合物“商業上可用的化學品”是從標準的商業來源獲得的，包括上海阿拉丁生化科技股份有限公司，上海麥克林生化科技有限公司，Sigma-Aldrich，阿法埃莎(中國)化學有限公司，梯希愛(上海)化成工業發展有限公司，安耐吉化學，上海泰坦科技股份有限公司，科龍化工，百靈威科技有限公司等。
合成方法一：
Rc1選自鹵素；
Rc2選自H、氨基保護基或者羥基保護基；
Rm1選自離去基團，較佳鹵素、OMs、OTs或OTf，
其餘基團定義與說明書一致；
通式(C-1)化合物通過親核取代反應或者偶聯反應得到通式(C-2)化合物；
通式(C-2)化合物通過親核取代反應、或者偶聯反應、或者還原胺化、或者縮合反應得到通式(C-3)化合物；或者通式(C-2)化合物先通過脫去保護基，再通過親核取代反應、或者偶聯反應、或者還原胺化、或者縮合反應得到通式(C-3)化合物；
通式(C-3)化合物通過還原反應得到通式(C-4)化合物；
通式(C-4)化合物與化合物(C-7)通過親核取代反應或者偶聯反應得到通式(I)化合物。
合成方法二：
Rc2選自H、氨基保護基或者羥基保護基；
Rc3選自H、氨基保護基或者羥基保護基；
其餘基團定義與說明書一致；
通式(C-5)化合物通過親核取代反應、或者偶聯反應、或者還原胺化、或者縮合反應得到通式(C-6)化合物；或者通式(C-5)化合物先通過脫去保護基，再通過親核取代反應、或者偶聯反應、或者還原胺化、或者縮合反應得到通式(C-6)化合物；
通式(C-6)化合物通過親核取代反應或者偶聯反應得到通式(C-3)化合物，或者通式(C-6)化合物先通過脫去保護基、再通過親核取代反應或者偶聯反應得到通式(C-3)化合物；
通式(C-3)化合物通過還原反應得到通式(C-4)化合物；
通式(C-4)化合物與化合物(C-7)通過親核取代反應或者偶聯反應得到通式(I)化合物。
化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或(和)質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)；
MS的測定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))；
HPLC的測定使用Agilent 1260DAD高壓液相色譜儀(Zorbax SB-C18 100×4.6mm,3.5μM)；
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm-0.20mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm-0.5mm；
柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200-300目矽膠為載體。
SEM：
；THP：
；Boc：第三丁氧基羰基；Ms：
；TBS：
；MTBE：甲基第三丁基醚；Bn：
，DIPEA：N,N-二異丙基乙胺；DMAc：N,N-二甲基乙醯胺；DMSO：二甲基亞碸；DCM：二氯甲烷；Cbz：
；NMP：N-甲基吡咯烷酮；DMF：N,N-二甲基甲醯胺；TFA：三氟乙酸
2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮：
EDCI：CAS 25952-53-8 HOBT：CAS 2592-95-2 RuPhosPdG3：CAS 1445085-77-7
Pd(dppf)Cl2．DCM：CAS 95464-05-4
沒有特殊說明，本發明的製備HPLC採用的儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)
沒有特殊說明，本發明的製備純化中用到的溶劑IPA是指異丙醇、CAN指乙腈、DEA指二乙胺。
實施例1：化合物1的製備
第一步：2-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一碳-9-羧酸第三丁酯(1A)
tert-butyl 2-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將4-甲醯基哌啶-1-羧酸苄酯(2.47g,10mmol)，2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯(2.54g,10mmol)混合於二氯甲烷(100mL)中，依次加入醋酸(1.2g,20mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(4.24g,20mmol)，室溫下攪拌過夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N的氫氧化鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=10/1-1/1)得到1A(4.1g，收率：84.5%)。
LCMS m/z=486.2[M+H]+。
第二步：2-(哌啶-4-基甲基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯(1B)
tert-butyl 2-(piperidin-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將1A(4.1g,0.85mmol)溶於甲醇(30mL)中，加入鈀碳(wt%=10%,410mg)，氫氣置換3次，氫氣氛圍(氣球壓強)、室溫下攪拌過夜，過濾，濾液減壓濃縮得到1B(2.96g)。
第三步：1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)
1-bromo-2-fluoro-4-methoxy-5-nitrobenzene
將4-溴-5-氟-2-硝基苯酚(1g，4.24mmol)溶於10mLDMF中，加入碳酸鉀(1.76g，12.72mmol)和碘甲烷(1.2g,8.48mmol)，45℃反應2h。冷卻至室溫，加入30mL水稀釋反應液，減壓抽濾，濾餅為1C(0.95g，收率：90%)。
LCMS m/z=250.0[M+H]+。
第四步：4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)
4-(2-fluoro-4-methoxy-5-nitrophenyl)-1-methyl-1H-pyrazole
氮氣保護，50mL單口瓶瓶中加入1C(500mg，2mmol)和N-甲基吡唑-4-硼酸(CAS：847818-55-7，450mg，3.57mmol)，溶於10mL二氧六環和2mL水中，加入Pd(dppf)Cl2．DCM(160mg，0.2mmol)和碳酸鉀(560mg，4mmol)，氮氣置換三次，100℃反應2h，降溫至室溫，將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化，得1D(400mg，收率80%)。
LCMS m/z=252.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 8.27(d,1H),8.18(s,1H),7.92(s,1H),7.40(d,1H),3.95(s,3H),3.89(s,3H)。
第五步：2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯(1E)
tert-butyl 2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將1B(351mg,1mmol)，1D(301mg,1.2mmol)和碳酸鉀(414mg,3mmol)混合溶於DMSO(10mL)中，120℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到1E(407mg，收率：70%)。
LCMS m/z=583.5[M+H]+。
第六步：2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一烷(1F)
2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane
將1E(407mg,0.7mmol)溶於DCM(10mL)，室溫下加入TFA(3mL)，攪拌3h，減壓濃縮後加入20mL DCM，用1N NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到1F(337mg)。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一烷-9-基)異吲哚啉-1,3-二酮(1G)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)isoindoline-1,3-dione
將1F(337mg,0.7mmol)溶於DMSO(5mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(276mg,1mmol)和DIPEA(0.31g,2.4mmol)，90℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到1G(306mg，收率：59.2%)。
LCMS m/z=739.3[M+H]+。
第八步：5-(2-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(1H)
5-(2-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1G(306mg,4.15mmol)、鐵粉(200mg,3.57mmol)、氯化銨(200mg,3.77mmol)溶於乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃攪拌2h，冷卻至室溫，抽濾，濾液濃縮後得到1H(250mg,86.9%)。
LCMS m/z=355.3[(M+2H)/2]+。
第九步：(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1I)
(6-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)quinoxalin-5-yl)dimethylphosphine oxide
將(6-氨基喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(2.80g,12.66mmol，參見專利WO2020147838)和2,4,5-三氯嘧啶(4.64g,25.32mmol)溶於NMP(15mL)中，加入DIPEA(1.96g,5.19mmol)，氮氣保護下130℃反應6h。冷卻至室溫，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有機層用30mL飽和食鹽水洗滌一次。有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/2-1/0)，得到1I(3g，收率：64%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 13.28(s,1H),9.22-9.16(m,1H),8.82(d,1H),8.76(d,1H),8.37-8.22(m,2H),2.15(s,3H),2.12(s,3H)。
第十步：5-(2-((1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑基-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(化合物1)
5-(2-((1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1H(180mg,0.25mmol)和1I(0.12g,0.33mmol，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(142mg,0.75mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗
產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備產物以飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化游離得到化合物1(53mg，收率：20.1%)。
LCMS m/z=520.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.88(s,1H),11.04(s,1H),9.03-8.91(m,1H),8.86-8.73(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.81(s,1H),7.71-7.44(m,3H),7.33-7.25(m,1H),7.20(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.55-3.39(m,4H),3.14-3.04(m,2H),2.94-2.82(m,1H),2.72-2.51(m,6H),2.37-2.31(m,1H),2.25-2.13(m,3H),2.08-1.94(m,7H),1.81-1.72(m,2H),1.70-1.47(m,7H),1.39-1.28(m,4H)。
實施例2：化合物2的製備
第一步：4-(1-[(苄氧基)羰基]哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(2A)
tert-butyl 4-(1-[(benzyloxy)carbonyl]piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
將哌嗪-1-羧酸第三丁酯(20.00g,107.38mmol)，1-Cbz-4-哌啶酮(20.05g,107.38mmol)和無水硫酸鈉(15.25g,107.38mmol)混合於二氯甲烷(500mL)中，依次加入醋酸(12.90g,214.76mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(45.52g,214.76mmol)，室溫反應2h，加入1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=10/1-1/1)得到2A(39.6g，收率：82%)。
LCMS m/z=404.2[M+H]+。
第二步：4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯(2B)
benzyl 4-(piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
將2A(20.00g,44.61mmol)溶於二氯甲烷(120mL)中，緩慢加入三氟乙酸(40mL)，室溫反應1h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，加入甲基第三丁基醚打漿得到白色固體，再加入200mL二氯甲烷將固體溶解，1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，分液。收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到2B(10.0g，收率：74%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=304.2[M+H]+。
第三步：4-(4-[(1-[(第三丁氧基)羰基]哌啶-4-基)甲基]哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(2C)
benzyl 4-(4-[(1-[(tert-butoxy)carbonyl]piperidin-4-yl)methyl]piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
將2B(10.00g,32.96mmol)，4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(7.03g,32.96mmol)溶於二氯甲烷(120mL)中，依次加入醋酸(3.96g,65.92mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(13.97g,65.92mmol)，室溫反應1h，加入1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到2C(16.14g，收率：98%)。
LCMS m/z=501.1[M+H]+。
第四步：4-[(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸第三丁酯(2D)
tert-butyl 4-[(4-(piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidine-1-carboxylate
將2C(6.00g,11.98mmol)溶於異丙醇(100mL)以及氨甲醇溶液(25mL)混合溶劑中，加入鈀碳(wt%=10%,2.93g)，1atm氫氣置換3次，室溫反應1.5h，矽藻土過濾，二氯甲烷/甲醇(V/V=10/1)洗滌濾餅，濾液減壓濃縮得到2D(4.3g)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=367.3[M+H]+。
第五步：1-環丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)
1-cyclopropyl-2-fluoro-4-methoxy-5-nitrobenzene
氮氣保護下將1C(3.0g,12.0mmol)、環丙基硼酸(2.06g，24.0mmol)、碳酸鉀(4.98g，36.0mmol)和Pd(dppf)Cl2．DCM(880mg，1.2mmol)加入到圓底燒瓶中，加入1,4-二氧六環(40mL)和水(5mL)，100℃反應3h。將反應液冷卻至室溫，矽藻土抽濾，濾液用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，
濃縮，矽膠柱色譜純化(PE：EA=20：1)得到2E(1.8g，收率：70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.55(d,1H),6.75(d,1H),3.93(s,3H),2.07-1.92(m,1H),1.07-0.92(m,2H),0.76-0.64(m,2H)。
第六步：4-[(4-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸第三丁酯(2F)
tert-butyl 4-[(4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidine-1-carboxylate
將2E(0.3g,1.42mmol)和2D(0.78g,2.13mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入碳酸鉀(0.59g,4.26mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)三次。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到2F(0.5g，收率：63%)。
LCMS m/z=558.5[M+H]+。
第七步：1-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-[(哌啶-4-基)甲基]哌嗪(2G)
1-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-[(piperidin-4-yl)methyl]piperazine
將2F(0.5g,0.9mmol)溶於二氯甲烷(6mL)中，室溫下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室溫攪拌2h。減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N氫氧化鈉水溶液調節pH>10。分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，
得到2G(0.38g)粗產物。
第八步：5-(4-[(4-(1-(2-(環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮(2H)
5-(4-[(4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-isoindole-1,3-dione
將2G(0.38g,0.83mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.66mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入20mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-30/1)，得到2H(0.46g，收率：77%)
第九步：5-(4-[(4-(1-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮(2I)
5-(4-[(4-(1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-isoindole-1,3-dione
將2H(0.2g,0.28mmol)溶於乙醇(12mL)和水(3mL)中，升溫至80℃，加入氯化銨(0.22g,4.05mmol)和鐵粉(0.23g,4.05mmol)的混合物，80℃攪拌0.5h。冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，濾液加入10mL飽和
食鹽水，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到2I(190mg)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=684.5[M+H]+。
第十步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹惡啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(化合物2)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將2I(0.19g,0.28mmol)和(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(2J)(0.12g,0.28mmol，參見專利WO2020147838)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物2(100mg，收率：33%)。
LCMS m/z=530.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.64(s,1H),11.05(s,1H),8.92-8.72(m,3H),8.34-8.19(m,2H),7.87(d,1H),7.68-7.58(m,1H),7.36-7.15(m,2H),6.87(s,1H),6.74(s,1H),5.06(dd,1H),4.03(d,2H),3.76(s,3H),3.38-3.18(m,2H),3.02-2.82(m,3H),2.70(t,2H),2.64-2.51(m,6H),2.44-2.25(m,5H),2.18-2.06(m,3H),2.06-1.95(m,7H),1.93-1.74(m,5H),1.69-1.55(m,2H),1.21-1.06(m,2H),0.78-0.66(m,2H),0.47-0.31(m,2H)。
實施例3：化合物3的製備
第一步：9-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(3A)
tert-butyl 9-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將2E(0.3g,1.42mmol)和3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(0.43g,1.69mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入碳酸鉀(0.59g,4.26mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)=10/1-2/1)，得到3A(0.6g，收率：95%)。
LCMS m/z=446.3[M+H]+。
第二步：3-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(3B)
3-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane
將3A(0.6g,1.35mmol)溶於二氯甲烷(6mL)中，室溫下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室溫攪拌2h。減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N氫氧化鈉水溶液調節pH>10。分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到3B(0.4g)粗產物。
第三步：4-((9-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3C)
tert-butyl 4-((9-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將3B(0.4g,1.16mmol)，4-甲醯哌啶-1-羧酸第三丁酯(0.3g,1.39mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，依次加入醋酸(0.14g,2.32mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(0.49g,2.32mmol)，室溫反應1h，加入1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到3C(0.52g，收率：82%)。
LCMS m/z=543.3[M+H]+。
第四步：3-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-9-(哌啶-4-基甲基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一烷(3D)
3-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-9-(piperidin-4-
ylmethyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane
將3C(0.52g,0.96mmol)溶於二氯甲烷(6mL)中，室溫下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室溫攪拌2h。減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N氫氧化鈉水溶液調節pH>10。分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到3D(0.4g)粗產物。
第五步：5-(4-((9-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(3E)
5-(4-((9-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將3D(0.4g,0.90mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.66mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-30/1)，得到3E(0.45g，收率：71%)。
LCMS m/z=699.3[M+H]+。
第六步：5-(4-((9-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(3F)
5-(4-((9-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將3E(0.13g,0.19mmol)溶於乙醇(10mL)和水(2mL)中，升溫至80℃，加入氯化銨(100mg,1.90mmol)和鐵粉(106mg,1.90mmol)的混合物。80℃攪拌1h，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，濾液加入10mL飽和食鹽水，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到3F(120mg)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=669.3[M+H]+。
第七步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-二甲基磷醯)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基)-3,9-二氮螺環[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物3)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將3F(0.12g,0.18mmol)和2J(74mg,0.18mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(102mg,0.54mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)得到粗產物(0.10g)，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物3(58mg，收率：31%)。
LCMS m/z=522.9[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.63(s,1H),11.05(s,1H),8.89-8.71(m,3H),8.32-8.17(m,2H),7.88(d,1H),7.65(d,1H),7.37-7.16(m,2H),6.90
-6.74(m,2H),5.06(dd,1H),4.12-3.97(m,2H),3.77(s,3H),3.04-2.81(m,7H),2.68-2.52(m,2H),2.44-2.30(m,4H),2.21-2.06(m,3H),2.06-1.97(m,7H),1.89-1.73(m,3H),1.69-1.46(m,8H),1.21-1.07(m,2H),0.80-0.60(m,2H),0.51-0.27(m,2H)。
實施例4：化合物4的製備
第一步：4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(4A)
tert-butyl 4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將1D(0.30g,1.19mmol)和2D(0.44g,1.19mmol)溶於DMSO(15mL)中，加入碳酸鉀(0.33g,2.38mmol)，120℃反應4h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)
得到4A(0.28g，收率：40%)。
LCMS m/z=598.5[M+H]+。
第二步：1-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪(4B)
1-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine
將4A(0.30g,0.50mmol)溶於二氯甲烷(12mL)中，緩慢加入三氟乙酸(4mL)，室溫反應1.5h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入50mL二氯甲烷複溶，1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，分液，收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到4B(0.24g)，直接用於下一步。
LCMS m/z=498.4[M+H]+。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(4C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將4B(0.22g,0.45mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(0.12g,0.45mmol)溶於DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.17g,1.35mmol)，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅
水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到4C(0.13g，收率：34%)。
LCMS m/z=754.4[M+H]+。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(4D)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將4C(0.12g,0.15mmol)溶於乙醇(9mL)，加入還原鐵粉(0.04g,0.75mmol)，再滴加氯化銨(0.04g,0.75mmol)的水溶液(3mL)，氮氣保護，80℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到4D(0.11g)。
LCMS m/z=724.5[M+H]+。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物4)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將4D(0.11g,0.16mmol)與1I(0.06g,0.16mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.09g,0.48mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，DCM將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到粗產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物4(36mg，收率：21%)。
LCMS m/z=528.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.02-8.93(m,1H),8.88-8.78(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.65(d,1H),7.61-7.50(m,2H),7.33-7.28(m,1H),7.23(dd,1H),6.84(s,1H),5.06(dd,1H),4.03(d,2H),3.80(s,3H),3.78(s,3H),3.17-3.10(m,2H),3.01-2.93(m,2H),2.90-2.83(m,1H),2.68-2.51(m,8H),2.44-2.34(m,4H),2.27-2.21(m,1H),2.17-2.10(m,2H),2.08-1.95(m,7H),1.88-1.77(m,5H),1.62-1.53(m,2H),1.18-1.08(m,2H)。
實施例5：化合物5的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione
將4,5-二氟鄰苯二甲酸(500mg,2.47mmol)溶解到25mL乙腈中，加入3-氨基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(0.41g,2.49mmol)與N,N'-羰基二咪唑(0.8g，4.94mmol)，回流反應4h。將反應體系減壓濃縮後用矽膠柱色譜分離提純(石油醚/乙酸乙酯(v/v)=2：1)，得5A-1(0.4g，產率：55.0%)。
LCMS m/z=295.2[M+H]+。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(5A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將4B(0.16g,0.54mmol)，5A-1(0.27g,0.54mmol)溶於DMSO
(10mL)中，滴加DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到5A，黃色固體(0.22g，收率：53%)。
LCMS m/z=772.4[M+H]+。
第三步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(5B)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將5A(0.21g,0.27mmol)溶於乙醇(15mL)，加入還原鐵粉(0.07g,1.35mmol)，再滴加氯化銨(0.07g,0.75mmol)的水溶液(5mL)，氮氣保護，80℃反應3h。冷卻至室溫，加入5mL水，再用DCM萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到5B(0.19g)。
LCMS m/z=742.3[M+H]+。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物5)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將5B(0.21g,0.28mmol)與1I(0.10g,0.28mmol)溶於DMF(15mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，DCM將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到粗產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物5(50mg，收率：17%)。
LCMS m/z=537.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.89(s,1H),11.08(s,1H),9.02-8.93(m,1H),8.86-8.80(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.69(d,1H),7.62-7.51(m,2H),7.44(d,1H),6.84(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.78(s,3H),3.61(d,2H),3.14(d,2H),2.94-2.83(m,3H),2.70-2.52(m,8H),2.47-2.34(m,4H),2.30-2.24(m,1H),2.22-2.13(m,2H),2.07-1.98(m,7H),1.89-1.79(m,4H),1.77-1.69(m,1H),1.63-1.53(m,2H),1.33-1.19(m,2H)。
實施例6：化合物6的製備
第一步：4-(4-((1-(1-(第三丁氧基羰基)吡咯烷基-3-基)甲基)哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯(6A)
benzyl 4-(4-((1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)methyl)piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
將2B(0.65g,2.14mmol)，1-Boc-3-吡咯烷甲醛(0.51g,2.57mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，依次加入醋酸(0.26g,4.28mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(0.91g,4.28mmol)，室溫反應1h，加入1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，加入20mL二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到6A(1g，收率：96%)。
第二步：3-((4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯(6B)
tert-butyl 3-((4-(piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將6A(1.00g,2.05mmol)溶於異丙醇(10mL)和7N氨甲醇溶液
(2.5mL)混合溶劑中，加入鈀碳(wt%=10%,0.4g)，1atm氫氣置換3次，室溫反應2h，矽藻土過濾，二氯甲烷/甲醇(V/V=10/1)洗滌濾餅，濾液減壓濃縮得到6B(0.73g)。
LCMS m/z=353.3[M+H]+。
第三步：第三丁基3-((4-(1-(5-(甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(6C)
tert-butyl 3-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將6B(0.73g,2.08mmol)，1D(0.35g,1.39mmol)和碳酸鉀(0.58g,4.17mmol)混合溶於DMSO(10mL)中，120℃攪拌6h。冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到6C(530mg，收率：65%)。
LCMS m/z=584.3[M+H]+。
第四步：1-(1-(1-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(6D)
1-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
將6C(0.53g,0.91mmol)溶於二氯甲烷(6mL)中，室溫下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室溫攪拌2h。減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲
烷，用1N氫氧化鈉水溶液調節pH>10。分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到6D(0.4g)粗產物，直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(6E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(3-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將6D(0.4g,0.83mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.66mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到6E(0.47g，收率：76%)。
第六步：5-(3-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(6F)
5-(3-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將6E(0.2g,0.27mmol)溶於乙醇(12mL)和水(3mL)中，升溫至
80℃，加入氯化銨(0.22g,4.05mmol)和鐵粉(0.23g,4.05mmol)的混合物。此溫度下攪拌1h，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，濾液加入10mL飽和食鹽水，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到6F(190mg)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=710.3[M+H]+。
第七步：5-(3-((4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(化合物6)
5-(3-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將6F(0.19g,0.27mmol)和1I(99mg,0.27mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.15g,0.81mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物6(60mg，收率：21%)。
LCMS m/z=521.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.06-8.77(m,3H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.70-7.47(m,3H),6.94-6.74(m,3H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.78(s,3H),3.59-3.36(m,3H),3.18-3.06(m,3H),2.95-2.81(m,1H),2.72-2.52(m,9H),2.49-2.29(m,6H),2.28-2.19(m,1H),2.17-2.07(m,1H),2.07-1.93(m,7H),1.91-1.68(m,3H),1.66-
1.49(m,2H)。
實施例7：化合物7的三氟乙酸鹽製備
第一步：7-氮雜螺環[3.5]壬-2-酮(7B)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-one
將7A(13.0g,54.32mmol)溶於二氯甲烷(100mL)，室溫下加入三氟乙酸(61.94g,543.2mmol)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入50mL二氯甲烷，加入碳酸氫鈉固體(70g)，抽濾，濾液用無水硫酸鈉乾燥、減壓濃縮，得到7B(7.50g，收率：99%)。
LCMS m/z=140.1[M+H]+。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-氧代-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)異吲哚啉-1,3-二酮(7C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-oxo-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)isoindoline-1,3-dione
將7B(7.50g,53.88mmol)溶於二甲亞碸(100mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(22.32g,80.81mmol)和DIPEA(13.93g,107.78mmol)，100℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入100mL水，攪拌5-10min，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到7C，黃色固體(11.40g，收率：54%)。
LCMS m/z=396.1[M+H]+。
第三步：4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(7D-1)
tert-butyl 4-(piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
100mL反應瓶中依次加入2A(4.91g,12.16mmol)、異丙醇/氨甲醇溶液(v/v=4/1，60mL)和鈀碳(2.5g)，氫氣置換三次後在室溫反應2h，矽藻土抽濾，濾液減壓濃縮，殘留物通過矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=25/1-10/1)得到7D-1(1.26g，收率：38%)。
LCMS m/z=270.1[M+H]+。
第四步：4-(1-(5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(7D)
tert-butyl 4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
將7D-1(1.23g,4.57mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(0.96g,3.80mmol)和碳酸鉀(1.58g,11.41mmol)混合溶於DMSO(20mL)中，120℃攪拌過夜。冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到7D(970mg，收率：62%)。
LCMS m/z=501.5[M+H]+。
第五步：1-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪(7E)
1-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine
將7D(0.31g,0.62mmol)溶於二氯甲烷(10mL)，室溫下加入三氟乙酸(0.71g,6.2mmol)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調節pH=8-9，用二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到7E(0.24g，收率：97%)。
LCMS m/z=401.2[M+H]+。
第六步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)異吲哚啉-1,3-二酮(7F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)isoindoline-1,3-dione
將7E(0.24g,0.60mmol)和7C(0.71g,1.80mmol)溶於1,2-二氯乙烷(10mL)中，依次加入4Å分子篩(200mg)和醋酸(0.05g,0.90mmol)。室溫攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.38g,1.79mol)，室溫過夜反應。反應結束後，直接將反應體系減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到7F(0.23g，收率：49%)。
LCMS m/z=780.4[M+H]+。
第七步：5-(2-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(7G)
5-(2-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將7F(0.23g,0.29mmol)溶於乙醇(5mL)和水(1mL)中，加入氯化銨固體(0.16g,2.99mmol)和鐵粉(0.16g,2.86mmol)，N2置換3次，80℃攪拌1h。反應完後，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，減壓濃縮。將減壓濃縮所得物用二氯甲烷溶解，萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到7G(0.18g，收
率83%)。
LCMS m/z=750.4[M+H]+。
第八步：5-(2-(4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物7)的三氟乙酸鹽
5-(2-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
將7G(0.18g,0.24mmol)和1I(0.09g,0.24mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.14g,0.74mol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物7的三氟乙酸鹽(40mg)。
LCMS m/z=1081.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.96(s,1H),11.05(s,1H),9.02-8.78(m,3H),8.52(s,1H),8.22(s,1H),8.00(s,1H),7.82(s,1H),7.69-7.48(m,3H),7.34(d,1H),7.26(dd,1H),6.82(s,1H),5.06(dd,1H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.72-3.37(m,9H),3.28-3.11(m,5H),2.95-2.81(m,2H),2.74-2.52(m,5H),2.26-
2.16(m,2H),2.14-1.90(m,11H),1.87-1.57(m,6H)。
實施例8：化合物8的製備
第一步：4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(8B)
tert-butyl 4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazine-1-carboxylate
將8A(5.0g,26.84mmol)溶於二甲亞碸(50mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(11.12g,40.26mmol)和DIPEA(6.94g,53.69mmol)，100℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入50mL水，攪拌5-10min，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到8B(8.08g，收率：68%)。
LCMS m/z=443.2[M+H]+。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(8C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將8B(3g,6.78mmol)溶於二氯甲烷(30mL)，室溫下加入三氟乙酸(7.73g,67.8mmol)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，加入碳酸氫鈉固體(20g)，抽濾，濾液用無水硫酸鈉乾燥、減壓濃縮，得到8C粗產物(2.09g)，直接用於下一步。
LCMS m/z=343.1[M+H]+。
第三步：4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(8D)
tert-butyl 4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將8C(2.09g,6.10mmol)和4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(3.91g,18.33mmol)溶於DMAc(40mL)中，依次加入4Å分子篩(300mg)和醋酸(0.55g,9.16mmol)。室溫攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(3.88g,18.31mmol)，室溫過夜反應。反應結束後，用乙酸乙酯(50mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到8D(1.53g，收率：46%)。
LCMS m/z=540.3[M+H]+。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(8E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-
yl)isoindoline-1,3-dione
將8D(1.53g,2.84mmol)溶於二氯甲烷(15mL)，室溫下加入三氟乙酸(3.23g,28.33mmol)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，加入碳酸氫鈉固體(15g)抽濾，濾液用無水硫酸鈉乾燥、減壓濃縮，得到8E(1.13g)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=440.2[M+H]+。
第五步：4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)-[1,4'-聯哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(8F)
tert-butyl 4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將8E(1.13g,2.57mmol)和4-氧代哌啶-1-羧酸第三丁酯(1.54g,7.73mmol)溶於DMAc(20mL)中，依次加入4Å分子篩(200mg)和醋酸(0.23g,3.83mmol)。室溫攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.63g,7.69mmol)，室溫過夜反應。反應結束後，用乙酸乙酯萃取(50mL)，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到8F(1.27g，收率：79%)。
LCMS m/z=623.2[M+H]+。
第六步：5-(4-([1,4'-聯哌啶]-4-基甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(8G)
5-(4-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將8F(1.27g,2.04mmol)溶於二氯甲烷(15mL)，室溫下加入三氟乙酸(2.33g,20.43mmol)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，加入碳酸氫鈉固體(20g)抽濾，濾液用無水硫酸鈉乾燥、減壓濃縮，得到8G(0.98g)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=523.3[M+H]+。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(8H)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將8G(980mg,1.87mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(0.31g,1.23mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入碳酸氫鈉固體(0.32g,3.81mmol)，100℃過夜反應。反應完後，冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到8H(0.24g，收率：17%)。
LCMS m/z=754.4[M+H]+。
第八步：5-(4-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(8I)
5-(4-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將8H(0.24g,0.32mmol)溶於乙醇(5mL)和水(1mL)中，加入氯化銨固體(0.17g,3.18mmol)和鐵粉(0.18g,3.22mmol)，N2置換3次，80℃攪拌1h。反應完後，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，減壓濃縮。將減壓濃縮所得物用二氯甲烷溶解，萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到8I(0.12g，收率52%)。
LCMS m/z=724.4[M+H]+。
第九步：5-(4-((1’-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4’-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物8)
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將8I(0.12g,0.17mmol)和1I(0.06g,0.16mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.095g,0.50mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。
冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物8(60mg，收率：35%)。
LCMS m/z=1055.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.89(s,1H),11.06(s,1H),9.06-8.77(m,3H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.67(d,1H),7.62-7.49(m,2H),7.33(d,1H),7.24(dd,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.48-3.38(m,4H),3.18-3.09(m,2H),2.98-2.82(m,3H),2.69-2.52(m,4H),2.48-2.43(m,3H),2.39-2.27(m,1H),2.22-2.11(m,4H),2.07-1.95(m,7H),1.85-1.41(m,8H),1.19-1.05(m,2H)。
實施例9：化合物9的製備
第一步：9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(9A)
tert-butyl 9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將1D(0.4g,1.59mmol)和3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(0.61g,2.40mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入碳酸鉀(0.88g,6.37mmol)，130℃反應6h。冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL x 3)三次。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到9A(0.35g，收率：45%)。
LCMS m/z=486.2[M+H]+。
第二步：3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(9B)
3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane
將9A(350mg,0.72mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入2N鹽酸的二氧六環溶液(10mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1M的NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到9B(264mg)，直接用於下一步。
第三步：4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷基-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(9C)
tert-butyl 4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將9B(264mg,0.68mmol)和4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(217.5
mg,1.02mmol)溶於DMAc(10mL)中，加入醋酸(40.8mg,0.68mmol)。室溫攪拌30min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(215.3mg,1.02mmol)，室溫過夜反應。加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)得到9C(260mg，收率：66%)。
LCMS m/z=583.3[M+H]+。
第四步：3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-9-(哌啶-4-基甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(9D)的鹽酸鹽
3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-9-(piperidin-4-ylmethyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane；HCl
將9C(260mg,0.45mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入2N鹽酸的二氧六環溶液(6mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(9E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的9D的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(8mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(187.8mg,0.68mmol)和DIPEA(232.7mg,1.8mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾
餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到9E(174mg，收率：52%)。
LCMS m/z=739.3[M+H]+。
第六步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(9F)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將9E(174mg,0.24mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(70mg，1.25mmol)，氯化銨(66.9mg，1.25mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到9F(150mg，收率：88%)。
LCMS m/z=709.4[M+H]+。
第七步：5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物9)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將9F(150mg,0.21mmol)和1I(117.8mg,0.32mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到化合物9(60mg，收率：27%)。
LCMS m/z=1040.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.87(s,1H),11.05(s,1H),9.01-8.89(m,1H),8.87-8.76(m,2H),8.38(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.81(s,1H),7.65(d,1H),7.61-7.48(m,2H),7.30(s,1H),7.27-7.18(m,1H),6.89(s,1H),5.06(dd,1H),4.10-3.97(m,2H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.04-2.77(m,7H),2.70-2.53(m,2H),2.42-2.28(m,4H),2.24-2.09(m,2H),2.06-1.95(m,7H),1.90-1.72(m,3H),1.66-1.46(m,8H),1.21-1.09(m,2H)。
實施例10：化合物10的製備
第一步：2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯(10B)
tert-butyl 2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將10A(2.0g,7.86mmol)溶於DMSO(15mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(2.5g,9.05mmol)和DIPEA(2.77g,21.43mmol)，90℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到10B，黃色固體(3.0g，收率：75%)。
LCMS m/z=511.3[M+H]+。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(10C)的三氟乙酸鹽
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
將10B(3.0g,5.88mmol)溶於二氯甲烷(60mL)中，加入三氟乙酸(4.6g,40mmol)，室溫攪拌3h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：4-((2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(10D)
tert-butyl 4-((2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將10C的三氟乙酸鹽(0.6g)，4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(0.4
g,1.87mol)混合於DMAc(20mL)中，依次加入醋酸(0.12g,2mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(0.42g,2mmol)，室溫下攪拌過夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N氫氧化鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=10/1-1/1)得到10D(0.44g，收率：50%)。
LCMS m/z=608.3[M+H]+。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(哌啶-4-基甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(10E)的三氟乙酸鹽
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(piperidin-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
將化合物10D(0.44g,0.72mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2.3g,20mmol)，室溫攪拌3h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(10F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的10E三氟乙酸鹽粗產物溶於DMSO(15mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(260mg,1.03mmol)和碳酸氫鈉(250mg,3.0mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-
20/1)得到10F(230mg，收率：43%)。
LCMS m/z=739.3[M+H]+。
第六步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(10G)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將10F(230mg,0.31mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(53mg，0.95mmol)，氯化銨(50mg，0.93mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到10G，黃色固體(150mg，收率：68%)。
LCMS m/z=709.3[M+H]+。
第七步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物10)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將10G(150mg,0.21mmol)和1I(95.7mg,0.26mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(97mg,0.51mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到化合物10(30mg，收率：14%)。
LCMS m/z=1040.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.06-8.89(m,1H),8.87-8.76(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.67-7.46(m,3H),7.29(d,1H),7.23(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.77(s,3H),3.51-3.41(m,2H),3.36(s,2H),3.14-3.01(m,2H),2.95-2.80(m,1H),2.69-2.53(m,4H),2.45-2.20(m,6H),2.08-1.93(m,7H),1.81-1.70(m,2H),1.69-1.45(m,7H),1.45-1.20(m,4H)。
實施例11：化合物11的製備
第一步：4-(2-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(11A)
tert-buryl 4-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperidine-1-carboxylate
將10C的三氟乙酸鹽(0.25g)和N-第三丁氧羰基-4-哌啶酮(183mg,0.92mmol)溶於DMAc(10mL)中，加入醋酸(39mg,0.65mmol)。室溫攪拌30min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(192mg,0.91mmol)，室溫過夜反應。加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到11A(250mg，收率：69%)。
LCMS m/z=594.3[M+H]+。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(11B)的鹽酸鹽
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；HCl
將11A(250mg,0.42mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入2N鹽酸的二氧六環溶液(6mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(11C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步11B鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(5mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(158mg,0.63mmol)和碳酸氫鈉(353mg,4.2mmol)，100℃反應5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到11C(140mg，收率：46%)。
LCMS m/z=725.3[M+H]+。
第四步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(11D)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將11C(140mg,0.19mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(53mg，0.95mmol)，氯化銨(51mg，0.95mmol)，氮氣保護，80℃反應1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到11D(120mg，收率：91%)。
LCMS m/z=695.3[M+H]+。
第五步：5-(9-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物11)
5-(9-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-
yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將11D(120mg,0.17mmol)和(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1I)(96mg,0.26mmol，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(97mg,0.51mmol)，氮氣保護下100℃反應16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到化合物11(40mg，收率：23%)。
LCMS m/z=1026.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.88(s,1H),11.05(s,1H),9.04-8.89(m,1H),8.88-8.76(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.79(s,1H),7.65-7.49(m,3H),7.34-7.27(m,1H),7.24(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.51-3.42(m,2H),3.39-3.34(m,2H),3.19-3.09(m,2H),2.95-2.82(m,1H),2.69-2.53(m,6H),2.38-2.26(m,1H),2.08-1.94(m,8H),1.89-1.78(m,2H),1.70-1.34(m,11H)。
實施例12：化合物12的製備
第一步：4-(1-(第三丁氧基羰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12B)
benzyl 4-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
將12A(6.6g，30mmol)，4-氧代哌啶-1-羧酸第三丁酯(6.0g,30mmol)混合於DMAc(220mL)中，依次加入醋酸(1.2g,20mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(8.4g,40mmol)，室溫攪拌過夜。加入500mL二氯甲烷和250mL 1N氫氧化鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=10/1-1/1)得到12B(8g，收率：66%)。
LCMS m/z=404.3[M+H]+。
第二步：4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12C)
benzyl 4-(piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
將12B(8.0g,19.8mmol)溶於二氯甲烷(120mL)中，緩慢加入三氟乙酸(40mL)，室溫反應1h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，加入甲基第三丁基醚打漿得到白色固體，再加入200mL二氯甲烷將固體溶解，1N氫氧化鈉水
溶液調節至鹼性，分液。收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到12C(5.0g，收率：83%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=304.3[M+H]+。
第三步：4-(1-((1-(第三丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12D)
benzyl 4-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
將12C(5.0g,16.5mmol)，4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(3.5g,16.4mmol)混合於DMAc(100mL)中，依次加入醋酸(0.3g,5mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(4.2g,20mmol)，室溫下攪拌過夜。加入500mL二氯甲烷和250mL 1N氫氧化鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=10/1-1/1)得到12D(4.8g，收率：58%)。
LCMS m/z=501.4[M+H]+
第四步：4-((4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(12E)
tert-butyl 4-((4-(piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將12D(4.8g,9.6mmol)溶於甲醇溶液(100mL)中，加入鈀碳(wt%=10%,2.93g)，1atm氫氣置換3次，室溫反應1.5h，將溶液用矽藻土過濾，二氯甲烷/甲醇(V/V=10/1)洗滌濾餅，濾液減壓濃縮得到12E(3.2g)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=367.3[M+H]+。
第五步：4-((4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(12F)
tert-butyl 4-((4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將12E(0.8g,2.18mmol)和1D(0.63g,2.5mmol)溶於DMSO(20mL)中，加入碳酸鉀(0.59g,4.26mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL x 3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到12F(0.4g，收率：31%)。
LCMS m/z=598.4[M+H]+。
第六步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)哌嗪(12G)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)piperazine
將12F(0.4g,0.67mmol)溶於二氯甲烷(6mL)中，室溫下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室溫攪拌2h。減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N氫氧化鈉水溶液調節pH>10。分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到12G(0.30g)粗產物，直接用於下一步。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二
酮(12H)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將12G(0.3g,0.60mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入20mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-15/1)，得到12H(0.28g，收率：62%)。
LCMS m/z=754.3[M+H]+。
第七步：5-(4-((4-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(12I)
5-(4-((4-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將12H(0.28g,0.37mmol)溶於乙醇(12mL)和水(3mL)中，升溫至80℃，加入氯化銨(0.22g,4.11mmol)和鐵粉(0.23g,4.12mmol)的混合物。此溫度下攪拌0.5h，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，濾液加入10mL飽和食鹽水，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到12I(0.19g)粗產物，
直接用於下一步。
LCMS m/z=724.3[M+H]+。
第九步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物12)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將12I(0.19g,0.26mmol)和1I(0.12g,0.33mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化((儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾，得到化合物12的三氟乙酸鹽(32mg)。
LCMS m/z=528.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 13.49(s,1H),10.60(s,1H),8.95-8.68(m,4H),7.95(s,1H),7.91(s,1H),7.67(d,1H),7.63-7.50(m,3H),7.25-7.22(m,1H),7.08-7.01(m,1H),6.70(s,1H),4.96(dd,1H),3.97-3.90(m,2H),3.87-3.70(m,9H),3.37-3.20(m,6H),3.07-2.57(m,13H),2.47-2.34(m,2H),2.21-1.94(m,10H),1.47-1.32(m,2H)。
實施例13：化合物13的製備
第一步：1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯(13A)
tert-butyl 1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidine]-1-carboxylate
將1D(1.0g,3.98mmol)和1-(第三丁氧羰基)-4,4'-聯哌啶(1.28g,4.77mmol)溶於DMSO(50mL)中，加入碳酸鉀(1.10g,7.96mmol)，120℃反應12h。冷卻至室溫，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(30mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物通過矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)=10/1-2/1)，得到13A(1.3g，收率：65%)。
LCMS m/z=500.3[M+H]+。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4,4'-聯
哌啶(13B)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4,4'-bipiperidine
50mL圓底燒瓶中依次加入13A(1.3g，2.60mmol)，氯化氫的1,4-二氧六環溶液(30mL,4mol/L)，室溫反應2h，減壓濃縮，加入1,4-二氧六環(20mL)，氨水(5mL)，室溫攪拌20min，50℃減壓濃縮乾得13B，直接用於下一步反應。
LCMS m/z=400.3[M+H]+。
第三步：4-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(13C)
tert-butyl 4-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將13B(0.5g,1.25mmol)，4-甲醯哌啶-1-羧酸第三丁酯(0.54g,2.53mmol)溶於DMAc(10mL)中，加入一滴醋酸後室溫攪拌1h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.79g,3.73mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相，並依次用水(30mL×2)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到13C(0.62g，收率：83%)。
LCMS m/z=597.4[M+H]+。
第四步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-1'-(哌
啶-4-基甲基)-4,4'-聯哌啶(13D)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-1'-(piperidin-4-ylmethyl)-4,4'-bipiperidine
50mL圓底燒瓶中依次加入13C(0.47g，0.79mmol)，氯化氫的1,4-二氧六環溶液(20mL,4mol/L)，室溫反應2h，減壓濃縮，加入1,4-二氧六環(20mL)，氨水(5mL)，室溫攪拌20min，50℃減壓濃縮乾得13D，直接用於下一步反應。
LCMS m/z=497.3[M+H]+。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(13E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將13D(387mg，0.78mmol)溶於DMSO(10mL)中，室溫下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(258mg,0.93mmol)和DIPEA(504mg,3.90mmol)，100℃反應5h。向反應液中加入30mL水，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合併有機相，有機相用水洗滌(30mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，殘留物通過矽膠柱色譜(DCM：MeOH=15：1)分離純化得到13E(377mg，產率64%)。
LCMS m/z=753.4[M+H]+。
第六步：5-(4-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(13F)
5-(4-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將13E(377mg,0.5mmol)、鐵粉(140mg,2.5mmol)、氯化銨(134mg,2.5mmol)溶於乙醇(10mL)和水(5mL)中，85℃攪拌2h，之後冷卻至室溫，抽濾，濾液濃縮後得到13F(236mg,65%)並直接用於下一步。
LCMS m/z=362.3[(M+2H)/2]+。
第七步：5-(4-((1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物13)的三氟乙酸鹽
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid；
將13F(236mg,0.33mmol)和1I(0.18g,0.49mmol，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮氣保護下100℃
攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化得化合物13的三氟乙酸鹽(100mg)。
LCMS m/z=1054.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.97(s,1H),11.06(s,1H),9.05-8.81(m,1H),8.89-8.74(m,3H),8.51(s,1H),8.21(s,1H),7.98(s,1H),7.83(s,1H),7.68(d,1H),7.64-7.49(m,2H),7.36(d,1H),7.28(dd,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),4.17-4.04(m,2H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.65-3.51(m,2H),3.20-3.09(m,2H),3.09-2.80(m,7H),2.68-2.52(m,4H),2.24-2.10(m,1H),2.10-1.90(m,9H),1.90-1.80(m,2H),1.80-1.68(m,2H),1.61-1.15(m,8H)。
實施例14：化合物14的製備
第一步：2-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(14A)
tert-butyl 2-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將13B(0.5g,1.25mmol)，2-氧代-7氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(0.54g,2.27mmol)溶於DMAe(10mL)中，加入一滴醋酸後室溫攪拌1h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.79g,3.73mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相，並分別用水(30mL×2)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到14A(0.49g，收率：63%)。
LCMS m/z=623.4[M+H]+。
第二步：2-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷(14B)
2-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane
50mL圓底燒瓶中依次加入14A(0.49g，0.79mmol)，氯化氫的1,4-二氧六環溶液(20mL,4mol/L)，室溫反應2h，減壓濃縮，加入1,4-二氧六環(20mL)，氨水(5mL)，室溫攪拌20min，50℃減壓濃縮乾得14B，直接用於下一步反應。
LCMS m/z=523.4[M+H]+。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)異吲哚啉-1,3-二酮(14C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-
pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的14B(402mg 0.77mmol)溶於DMSO(10mL)中，室溫下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(255mg,0.92mmol)和DIPEA(498mg,3.85mmol)，100℃攪拌5h。向反應液中加入30毫升水，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合併有機相，有機相用水洗滌(30mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，殘留物通過矽膠柱色譜(DCM：MeOH=15：1)分離純化得到14C(350mg，產率58%)。
LCMS m/z=779.4[M+H]+。
第四步：5-(2-(1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(14D)
5-(2-(1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將14C(350mg,0.45mmol)、鐵粉(126mg,2.26mmol)、氯化銨(134mg,2.50mmol)溶於乙醇(10mL)和水(5mL)中，85℃攪拌2h，之後冷卻至室溫，抽濾，濾液濃縮後得到14D(144mg,43%)並直接用於下一步。
LCMS m/z=749.6[M+H]+。
第五步：5-(2-(1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)-7-
氮雜螺環[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物14)的三氟乙酸鹽
5-(2-(1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid；
將14D(144mg,0.19mmol)和1I(105mg,0.29mmol，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(165mg,0.87mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化得化合物14的三氟乙酸鹽(80mg)。
LCMS m/z=540.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.96(s,1H),11.06(s,1H),9.38-9.17(m,1H),9.05-8.91(m,1H),8.89-8.77(m,2H),8.49(s,1H),8.21(s,1H),7.99(s,1H),7.83(s,1H),7.67(d,1H),7.63-7.48(m,2H),7.34(d,1H),7.30-7.21(m,1H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.86-3.59(m,7H),3.57-3.30(m,6H),3.22-3.11(m,2H),2.96-2.82(m,1H),2.81-2.65(m,2H),2.65-2.53(m,3H),2.30-2.15(m,2H),2.09-1.90(m,10H),1.83-1.56(m,7H),1.53-1.14(m,7H)。
實施例15：化合物15的製備
第一步：4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)-[1,4'-聯哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(15A)
tert-butyl 4-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將11B(475mg,0.96mmol)和N-第三丁氧羰基-4-哌啶酮(287mg,1.44mmol)溶於DMAc(10mL)中，加入醋酸(58mg,0.96mmol)。室溫攪拌60min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(304mg,1.43mmol)，室溫過夜反應。加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到15A(320mg，收率：49%)。
LCMS m/z=677.3[M+H]+。
第二步：5-(9-([1,4'-聯哌啶]-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(15B)的鹽酸鹽
5-(9-([1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；HCl
將化合物15A(320mg,0.47mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入2N鹽酸的二氧六環溶液(6mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(15C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的化合物15B鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(8mL)中，依次加入1D(163mg,0.65mmol)和碳酸氫鈉(144mg,1.71mmol)，100℃反應6h。冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到15C(160mg，收率：42%)。
LCMS m/z=808.4[M+H]+。
第四步：5-(9-(1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-
[1,4'-聯哌啶]-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(15D)
5-(9-(1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將15C(160mg,0.20mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(56mg，1mmol)，氯化銨(53mg，1mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得15D，黃色固體(120mg，收率：77%)。
LCMS m/z=778.8[M+H]+。
第五步：5-(9-(1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物15)
5-(9-(1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undeean-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將15D(120mg,0.15mmol)和1I(85mg,0.23mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(86mg,0.45mmol)，氮氣保護下100℃攪拌
16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到化合物15(30mg，收率：18%)。
LCMS m/z=555.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.03-8.91(m,1H),8.89-8.77(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.67-7.46(m,3H),7.33-7.26(m,1H),7.22(dd,1H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.50-3.41(m,2H),3.34(s,2H),3.18-3.07(m,2H),3.05-2.82(m,3H),2.69-2.53(m,4H),2.46-2.39(m,2H),2.37-2.07(m,5H),2.07-1.94(m,7H),1.86-1.70(m,4H),1.69-1.32(m,13H)。
實施例16：化合物16的製備
第一步：4-((2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚-5-基)-2,9-二氮螺環[5.5]十一碳-9-基)甲基)-[1,4'-聯哌啶]-1'-羧酸第三丁酯(16A)
tert-butyl 4-((2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將10E的三氟乙酸鹽(0.6g)，4-氧代哌啶-1-羧酸第三丁酯(0.4g,2.0mmol)混合於DMAc(20mL)中，依次加入醋酸(0.12g,2mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(0.42g,2mmol)，室溫下攪拌過夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N氫氧化鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=10/1-1/1)得到16A(0.40g)。
LCMS m/z=691.3[M+H]+。
第二步：5-(9-([1,4'-聯哌啶]-4-基甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(16B)的三氟乙酸鹽
5-(9-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
將化合物16A(0.40g,0.58mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2.3g,20mmol)，室溫攪拌3h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(16C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的16B三氟乙酸鹽粗產物溶於DMSO(15mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(260mg,1.03mmol)和碳酸氫鈉(250mg,3.0mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到16C(230mg，收率：48%)。
LCMS m/z=822.3[M+H]+。
第四步：5-(9-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(16D)
5-(9-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將16C(230mg,0.28mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(53mg，0.95mmol)，氯化銨(50mg，0.93mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到16D(160mg，收率：72%)。
LCMS m/z=792.4[M+H]+。
第五步：5-(9-((1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦醯基)喹喔啉-6-基)氨基)
嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物16)
5-(9-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecam-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將16D(160mg,0.20mmol)和1I(95.7mg,0.26mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(97mg,0.51mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，柱層析得到的產品進一步製備HPLC純化((儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾，然後加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，再用二氯甲烷(50ml)萃取，將有機相減壓濃縮，得到化合物16(20mg，收率：9%)。
LCMS m/z=562.4[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.94(s,1H),11.06(s,1H),9.01-8.91(m,1H),8.88-8.77(m,2H),8.53-8.42(m,1H),8.22(s,1H),8.01-7.82(m,2H),7.70-7.48(m,3H),7.44-7.20(m,2H),6.82(s,1H),5.11-5.02(m,1H),3.82(s,3H),3.77(s,3H),3.69-3.58(m,2H),3.56-2.82(m,18H),2.75-2.53(m,4H),2.16-1.96(m,10H),1.93-1.57(m,10H),1.54-1.45(m,2H)。
實施例17：化合物17的製備
第一步：2-((1'-((苄氧基)羰基)-[1,4'-雙哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯(17A)
tert-butyl 2-((1'-((benzyloxy)carbonyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將1B(702mg,2mmol)，4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(699mg,3mmol)混合於二氯甲烷(100mL)中，依次加入醋酸(180mg,3mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(636mg,3mmol)，室溫下攪拌過夜。加入30mL二氯甲烷和10mL 1N氫氧化鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=10/1-1/1)得到17A(512mg，收率：45%)。
LCMS m/z=569.4[M+H]+。
第二步：2-([1,4'-雙哌啶]-4-基甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧
酸第三丁酯(17B)
tert-butyl 2-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將17A(512mg,0.9mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入鈀碳(wt%=10%,51mg)，氫氣置換3次，氫氣氛圍(氣球壓強)、室溫下攪拌過夜，過濾，濾液減壓濃縮得到17B(390mg)，直接用於下一步。
第三步：第三丁基2-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(17C)
tert-butyl2-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將17B(390mg,0.9mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(301mg,1.2mmol)和碳酸鉀(414mg,3mmol)混合溶於DMSO(10mL)中，120℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到17C(310mg，收率：52%)。
LCMS m/z=666.5[M+H]+。
第四步：2-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(17D)
2-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane
將17C(310mg,0.47mmol)溶於DCM(10mL)，室溫下加入三氟乙酸(3mL)，攪拌3h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到17D(262mg)，直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一碳-9-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(17E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)isoindoline-1,3-dione
將17D(262mg,0.46mmol)溶於DMSO(5mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(276mg,1mmol)和DIPEA(0.31g,2.4mmol)，90℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到17E(210mg，收率：55%)。
第六步：5-(2-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(17F)
5-(2-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物17E(210mg,0.26mmol)、鐵粉(200mg,3.57mmol)、氯化銨(200mg,3.77mmol)溶於乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃攪拌2h，之後冷卻至室溫，抽濾，濾液濃縮後得到17F(150mg,74.3%)。直接用於下一步。
第七步：5-(2-((1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物17)
5-(2-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將17F(70mg,0.09mmol)和(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1I)(0.44g,0.12mmol，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(57mg,0.3mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備產物以飽和
碳酸氫鈉水溶液鹼化游離得到化合物17(23mg，收率：23.3%)。
LCMS m/z=562.4[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.88(s,1H),11.15-10.89(m,1H),9.10-8.89(m,1H),8.88-8.77(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.98(s,1H),7.80(s,1H),7.67-7.46(m,3H),7.31-7.19(m,2H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.57-3.35(m,6H),3.17-3.06(m,2H),2.99-2.80(m,3H),2.71-2.52(m,6H),2.37-1.93(m,14H),1.87-1.42(m,11H),1.31-1.02(m,4H)。
實施例18：化合物18的製備
5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物18)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將4D(0.22g,0.31mmol)與2J(0.13g,0.31mmol)溶於DMF(15mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.18g,0.93mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物18，黃色固體(150
mg，收率：44%)。
LCMS m/z=550.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.68(s,1H),11.05(s,1H),8.89-8.76(m,3H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),7.96(s,1H),7.77(s,1H),7.65(d,1H),7.62-7.50(m,2H),7.31(s,1H),7.23(d,1H),6.82(s,1H),5.06(dd,1H),4.04(d,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.17-3.09(m,2H),3.01-2.94(m,2H),2.91-2.84(m,1H),2.72-2.51(m,8H),2.46-2.30(m,4H),2.29-2.22(m,1H),2.20-2.10(m,2H),2.06-1.96(m,7H),1.87-1.74(m,5H),1.65-1.49(m,2H),1.22-1.05(m,2H)。
實施例19：化合物19的製備
5-(4-((1’-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4’-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物19)的三氟乙酸鹽
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
將8I(0.27g,0.37mmol)和2J(0.153g,0.37mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.213g,1.12mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767
製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物19的三氟乙酸鹽(50mg，黃色固體)。
LCMS m/z=1099.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.72(s,1H),11.08(s,1H),10.13-9.45(m,2H),8.90-8.73(m,3H),8.45(s,1H),8.29(s,1H),7.96(s,1H),7.84-7.75(m,2H),7.62(s,1H),7.57-7.49(m,2H),7.38(dd,1H),6.81(s,1H),5.10(dd,1H),3.82(s,3H),3.77(s,3H),3.70-3.59(m,4H),3.48-2.81(m,14H),2.74-2.52(m,4H),2.22-1.96(m,11H),1.93-1.74(m,3H),1.59-1.43(m,2H)。
實施例20：化合物20的製備
5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物20)的三氟乙酸鹽
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
將9F(150mg,0.21mmol)和2J(132mg,0.32mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(120mg,0.63mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有
機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物20的三氟乙酸鹽(44mg)。
LCMS m/z=542.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.75(s,1H),11.06(s,1H),8.91-8.72(m,3H),8.56-8.47(m,1H),8.29(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.68(d,1H),7.62-7.49(m,2H),7.37(d,1H),7.28(dd,1H),6.89(s,1H),5.07(dd,1H),4.17-4.04(m,2H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.48-3.35(m,2H),3.16-2.76(m,10H),2.68-2.51(m,4H),2.21-2.09(m,1H),2.07-1.91(m,7H),1.90-1.50(m,8H),1.37-1.21(m,3H)。
實施例21：化合物21的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(21A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecam-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將9D(470mg,0.97mmol)粗產物溶於DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(430mg,1.46mmol)和碳酸氫鈉(326mg,3.88mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到21A，黃色固體(600mg，收率：82%)。
LCMS m/z=757.3[M+H]+。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(21B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將21A(200mg,0.26mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(73mg，1.3mmol)，氯化銨(70mg，1.3mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到21B，黃色固體(180mg，收率：95%)。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物 21)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]u11decan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-iluoroisoindoline-1,3-dione
將21B(180mg,0.25mmol)和2J(157mg,0.38mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(143mg,0.75mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷，分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到化合物21(85mg，收率：31%)。
LCMS m/z=551.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.66(s,1H),11.08(s,1H),8.87-8.72(m,3H),8.36(s,1H),8.26(s,1H),7.98(s,1H),7.79(s,1H),7.69(d,1H),7.63-7.48(m,2H),7.43(d,1H),6.88(s,1H),5.10(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.67-3.55(m,2H),2.96-2.76(m,7H),2.68-2.52(m,2H),2.43-2.29(m,4H),2.24-2.14(m,2H),2.06-1.94(m,8H),1.88-1.69(m,3H),1.62-1.50(m,7H),1.32-1.25(m,2H)。
實施例22：化合物22的製備
第一步：1'-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯(21A)
tert-butyl 1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidine]-1-carboxylate
將2E(450mg,2.13mmol)粗產物溶於DMSO(10mL)中，依次加入[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯(859mg,3.2mmol)和碳酸氫鈉(716mg,8.52mmol)，100℃反應6h。冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到22A(800mg，收率：82%)。
LCMS m/z=460.3[M+H]+。
第二步：1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4,4'-聯哌啶(22B)
1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-4,4'-bipiperidine
將22A(800mg,1.74mmol)溶於甲醇(4mL)中，加入2M鹽酸的二氧六環溶液(15mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1M的NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到22B，直接
用於下一步。
第三步：4-((1'-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(22C)
tert-butyl 4-((1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將22B(550mg,1.53mmol)和4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(491mg,2.30mmol)溶於DMAc(15mL)中，加入醋酸(92mg,1.53mmol)。室溫攪拌30min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(485mg,2.29mmol)，室溫過夜反應。加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)得到22C，黃色固體(650mg，收率：76%)。
LCMS m/z=557.5[M+H]+。
第四步：1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-1'-(哌啶-4-基甲基)-4,4'-聯哌啶(22D)的鹽酸鹽
1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-1'-(piperidin-4-ylmethyl)-4,4'-bipiperidine；HCl
將22C(650mg,1.17mmol)溶於甲醇(3mL)中，加入2M鹽酸的二氧六環溶液(10mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第五步：5-(4-((1'-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(22E)
5-(4-((1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的化合物22D的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(453mg,1.64mmol)和碳酸氫鈉(366mg,4.36mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到22E，黃色固體(600mg，收率：72%)。
LCMS m/z=713.4[M+H]+。
第六步：5-(4-((1'-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(22F)
5-(4-((1'-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將22E(200mg,0.28mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(78mg，1.40mmol)，氯化銨(75mg，1.40mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到22F(150mg，收率：78%)。
LCMS m/z=342.3[(M+2H)/2]+。
第七步：5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-
(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物22)的三氟乙酸鹽
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
將22F(150mg,0.22mmol)和2J(136mg,0.33mmol)溶於DMF(8mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(125mg,0.66mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物22的三氟乙酸鹽(83mg)。
LCMS m/z=529.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.72(s,1H),11.06(s,1H),8.94-8.69(m,4H),8.50-8.23(m,2H),7.94-7.81(m,1H),7.68(d,1H),7.36(s,1H),7.31-7.24(m,1H),6.94-6.73(m,2H),5.07(dd,1H),4.16-4.05(m,2H),3.77(s,3H),3.63-3.51(m,2H),3.39-3.28(m,2H),3.08-2.53(m,11H),2.19-1.75(m,15H),1.60-1.25(m,8H),0.78-0.65(m,2H),0.44-0.34(m,2H)。
實施例23：化合物23的三氟乙酸鹽製備
第一步：3-碘-[1,1'-聯苯]-4-胺(23B)
3-iodo-[1,1'-biphenyl]-4-amine
將[1,1'-聯苯]-4-胺(23A)(846mg,5.0mmol)、碘(1.27g,5.0mmol)和碳酸氫鈉(1.26g,15.0mmol)加入到二氯甲烷(20mL)和水(10mL)的混合液中，在室溫下攪拌過夜，反應結束後分離有機層，二氯甲烷萃取水層(3×20mL)，合併有機層，並依次用飽和Na2S2O3溶液(2×20mL)和飽和食鹽水(2×20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/20-1/5)得23B(530mg，收率：36%)。
LCMS m/z=296.0[M+H]+。
第二步：(4-氨基-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23C)
(4-amino-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
氮氣保護下將23B(401mg,1.36mmol)、二甲基氧化膦(117mg,1.50mmol)、磷酸三鉀(318mg,1.50mmol)，醋酸鈀(30mg,0.13mmol)和4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(79mg,0.14mmol)加入到無水DMF(20mL)中，150℃
反應3h，反應結束後冷卻至室溫，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，分離有機相並依次用水(20mL×2)和飽和食鹽水(20mL)洗滌有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/10-1/3)得23C(170mg，收率：51%)。
LCMS m/z=246.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.52-7.44(m,3H),7.45-7.37(m,2H),7.34-7.22(m,2H),6.80(dd,1H),1.82(d,6H)。
第三步：(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)
(4-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
將23C(170mg,0.69mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(315mg,1.38mmol)溶於NMP(10mL)中，加入DIPEA(107mg,0.83mmol)，氮氣保護下130℃，此溫度下攪拌6h。冷卻至室溫，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有機層用30mL飽和食鹽水洗滌。有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/2-1/0)，得到23D(240mg，收率：80%)。
LCMS m/z=436.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 11.37(s,1H),8.66(dd,1H),8.35(s,1H),7.85-7.76(m,1H),7.57-7.35(m,6H),1.89(d,6H)。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物23)的三氟乙酸鹽
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid；
將4D(87mg,0.12mmol)和23D(58mg,0.13mmol，溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(68mg,0.36mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化得化合物23的三氟乙酸鹽(30mg)。
LCMS m/z=562.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.43-8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.73-7.61(m,2H),7.61-7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.40-7.33(m,1H),7.33-7.29(m,1H),7.27-7.13(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.10-3.98(m,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.14-3.04(m,2H),3.04-2.81(m,4H),2.65-2.52(m,6H),2.44-2.30(m,4H),2.25-1.95(m,5H),1.92-1.73(m,11H),1.61-1.45(m,2H),1.21-1.08(m,2H)。
實施例23-1：化合物23的製備
將化合物23的三氟乙酸鹽(60mg)溶於20mL二氯甲烷中，加入20mL水和1mL飽和碳酸氫鈉溶液，分離有機層，水層用二氯甲烷萃取(20mL×2)，
合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得化合物23(42mg)。
LCMS m/z=562.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.10(s,1H),11.05(s,1H),8.31-8.22(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.85(s,1H),7.75-7.61(m,2H),7.61-7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.40-7.32(m,1H),7.30(s,1H),7.27-7.08(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.10-3.93(m,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.14-3.03(m,2H),3.03-2.81(m,4H),2.65-2.52(m,6H),2.44-2.30(m,4H),2.23-1.95(m,5H),1.89-1.72(m,11H),1.59-1.45(m,2H),1.19-1.07(m,2H)。
實施例24：化合物24的製備
第一步：5-(4-((1'-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(24A)
5-(4-((1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將8G(0.84g,1.61mmol)和1-環丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)(226mg,1.07mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入碳酸氫鈉固體(405mg,4.82mmol)，100℃過夜反應。反應完後，冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL
水萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到24A，黃色固體(0.61g，收率：53%)。
LCMS m/z=714.4[M+H]+。
第二步：5-(4-((1'-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(24B)
5-(4-((1'-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將24A(0.61g,0.85mmol)溶於乙醇(5mL)和水(1mL)中，加入氯化銨固體(455mg,8.5mmol)和鐵粉(476mg,8.5mmol)，N2置換3次，80℃攪拌1h。反應完後，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，減壓濃縮。將減壓濃縮所得物用50mL二氯甲烷溶解，萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到24B，黃色固體(0.32g，收率55%)。
LCMS m/z=684.4[M+H]+。
第三步：5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹惡啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物24)
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將24B(0.32g,0.468mmol)和2J(193mg,0.468mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(266mg,1.40mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物24，(60mg，收率：12%)。
LCMS m/z=1059.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.64(s,1H),11.06(s,1H),8.90-8.74(m,3H),8.31-8.22(m,2H),7.87(d,1H),7.67(d,1H),7.32(s,1H),7.27-7.21(m,1H),6.86(s,1H),6.74(s,1H),5.07(dd,1H),3.76(s,3H),3.44-3.41(m,3H),3.34-3.31(m,3H),2.94-2.83(m,3H),2.73-2.64(m,2H),2.63-2.52(m,2H),2.49-2.43(m,4H),2.24-2.07(m,5H),2.06-1.97(m,7H),1.89(s,1H),1.87-1.79(m,2H),1.76-1.60(m,4H),1.56-1.46(m,1H),1.16-1.04(m,2H),0.79-0.66(m,2H),0.44-0.32(m,2H)。
實施例25：化合物25的製備
第一步：5-(9-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(25A)
5-(9-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將11B的鹽酸鹽(728mg)溶於DMSO(10mL)中，依次加入1-環丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)(350mg,1.66mmol)和碳酸氫鈉(353mg,4.2mmol)，100℃反應5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到25A(540mg，收率：60%)。
LCMS m/z=685.3[M+H]+。
第二步：5-(9-(1-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(25B)
5-(9-(1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecam-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將25A(540mg,0.79mmol)溶於乙醇/水(16mL，3：1)中，依次加入鐵粉(530mg，9.5mmol)，氯化銨(510mg，9.5mmol)，氮氣保護，80℃反應1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到25B(250mg，收率：48%)。
LCMS m/z=655.4[M+H]+。
第三步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基))哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物25)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將25B(125mg,0.19mmol)和2J(87mg,0.21mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(110mg,0.57mmol)，氮氣保護下100℃反應16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到化合物25(40mg，收率：25.4%)。
LCMS m/z=515.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.65(s,1H),11.05(s,1H),8.98-8.70(m,3H),8.33-8.20(m,2H),7.86(d,1H),7.63(d,1H),7.36-7.20(m,2H),6.86(s,1H),6.74(s,1H),5.05(dd,1H),3.76(s,3H),3.50-3.43(m,2H),3.39-3.32(m,3H),2.95-2.82(m,1H),2.76-2.53(m,7H),2.14-1.82(m,11H),1.76-1.37(m,12H),0.74-0.64(m,2H),0.44-0.27(m,2H)。
實施例26：化合物26的製備
第一步：4-((4-(4-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(26A)
tert-butyl 4-((4-(4-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將12E(0.8g,2.18mmol)和2E(0.50g,2.4mmol)溶於DMSO(20mL)中，加入碳酸鉀(0.59g,4.26mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)三次。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到26A(0.6g，收率：49%)。
LCMS m/z=558.4[M+H]+。
第二步：1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)哌嗪(26B)
1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-4-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)piperazine
將26A(0.6g,1.07mmol)溶於二氯甲烷(6mL)中，室溫下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室溫攪拌2h。減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N氫氧化鈉水溶液調節pH=10。分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到26B(0.5g)粗產物，直接用於下一步。
第三步：5-(4-((4-(4-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(26C)
5-(4-((4-(4-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將26B(0.5g)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(0.30g,1.08mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入20mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-15/1)，得到26C(0.40g，收率：52%)
LCMS m/z=714.3[M+H]+。
第四步：5-(4-((4-(4-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(26D)
5-(4-((4-(4-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將26C(0.40g,0.58mmol)溶於乙醇(12mL)和水(3mL)中，升溫至80℃，加入氯化銨(0.22g,4.11mmol)和鐵粉(0.23g,4.12mmol)的混合物，80℃攪拌0.5h，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，濾液加入10mL飽和食鹽水，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到26D(0.31g，收率：78%)。
LCMS m/z=684.3[M+H]+。
第五步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦醯基)唑喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物26)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將26D(0.31g,0.45mmol)和1I(0.18g,0.5mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物26(30mg，收率：7%)。
LCMS m/z=508.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.88(s,1H),11.06(s,1H),9.06-8.91(m,1H),8.90-8.80(m,2H),8.33(s,1H),8.17(s,1H),7.89(d,1H),7.65(d,1H),7.31(d,1H),7.23(dd,1H),6.88(s,1H),6.80(s,1H),5.07(dd,1H),4.10-3.98(m,2H),3.77(s,3H),3.09-2.83(m,9H),2.76-2.53(m,6H),2.30-2.09(m,4H),2.08-1.96(m,7H),1.94-1.71(m,7H),1.55-1.39(m,2H),1.22-1.08(m,2H),0.82-0.71(m,2H),0.49-0.40(m,2H)。
實施例27：化合物27的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(27A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將9D的鹽酸鹽(0.27g)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異二氫
吲哚-1,3-二酮(5A-1)(0.16g,0.56mmol)溶於DMSO(15mL)中，滴加DIPEA(0.22g,1.68mmol)，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到27A，黃色固體(0.30g，收率：71%)。
LCMS m/z=757.4[M+H]+。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(27B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將27A(0.30g,0.40mmol)溶於乙醇(15mL)，加入還原鐵粉(0.11g,2.00mmol)，再滴加氯化銨(0.11g,2.00mmol)的水溶液(5mL)，氮氣保護，80℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到27B，黃色固體(0.26g，收率：89%)。
LCMS m/z=727.3[M+H]+。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物27)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-
3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-f1uoroisoindoline-1,3-dione
將27B(0.13g,0.18mmol)與1I(0.07g,0.18mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.10g,0.54mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到化合物27(44mg，收率：23%)。
LCMS m/z=529.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.87(s,1H),11.08(s,1H),9.00-8.92(m,1H),8.87-8.78(m,2H),8.38(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.82(s,1H),7.69(d,1H),7.57(s,2H),7.44(d,1H),6.89(s,1H),5.10(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.66-3.55(m,2H),2.95-2.80(m,7H),2.68-2.53(m,2H),2.41-2.31(m,4H),2.22-2.15(m,2H),2.08-1.97(m,7H),1.88-1.78(m,2H),1.78-1.69(m,1H),1.62-1.50(m,8H),1.33-1.24(m,2H)。
實施例28：化合物28的製備
第一步：5-(9-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物28)
5-(9-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將33F(100mg,0.14mmol)和1I(77mg,0.21mmol)，溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(80mg,0.42mmol)，氮氣保護下100℃反應16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，粗產物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物28(20mg，收率：14%)。
LCMS m/z=1044.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.89(s,1H),11.08(s,1H),9.04-8.91(m,1H),8.83(dd,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.71(d,1H),7.63-7.51(m,2H),7.47(d,1H),6.83(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.23-3.10(m,4H),3.06(s,2H),2.95-2.82(m,1H),2.70-2.52(m,6H),2.41-2.28(m,1H),2.10-1.94(m,7H),1.90-1.41(m,12H),1.34-1.20(m,2H)。
實施例29：化合物29的製備
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨
基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物29)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將5B(0.16g,0.21mmol)與2J(0.09g,0.21mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.12g,0.63mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到化合物29(51mg，收率：22%)。
LCMS m/z=559.4[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.68(s,1H),11.08(s,1H),8.90-8.71(m,3H),8.36(s,1H),8.27(s,1H),7.97(s,1H),7.78(s,1H),7.70(d,1H),7.64-7.49(m,2H),7.44(d,1H),6.82(s,1H),5.10(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.66-3.57(m,2H),3.20-3.10(m,2H),2.94-2.84(m,3H),2.70-2.51(m,8H),2.47-2.10(m,7H),2.07-1.95(m,7H),1.90-1.68(m,5H),1.66-1.43(m,2H),1.31-1.25(m,2H)。
實施例30：化合物30的製備
第一步：5-(3-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨
基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物30)
5-(3-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將6F(0.11g,0.15mmol)與2J(0.06g,0.15mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.09g,0.45mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到化合物30(31mg，收率：19%)。
LCMS m/z=543.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.67(s,1H),11.04(s,1H),8.90-8.75(m,3H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),7.98(s,1H),7.76(s,1H),7.68-7.46(m,3H),6.93-6.79(m,3H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.58-3.48(m,2H),3.44-3.36(m,1H),3.19-3.06(m,3H),2.95-2.81(m,1H),2.75-2.52(m,9H),2.47-2.08(m,8H),2.07-1.96(m,7H),1.91-1.69(m,3H),1.66-1.49(m,2H)。
實施例31：化合物31的製備
第一步：5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物31)
5-(4-((4-(4-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將12I(0.25g,0.34mmol)和2J(0.18g,0.44mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾後的固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物31(30mg，收率：8%)。
LCMS m/z=550.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.68(s,1H),11.05(s,1H),8.88-8.75(m,3H),8.37(s,1H),8.27(s,1H),7.97(s,1H),7.78(s,1H),7.65(d,1H),7.62-7.50(m,2H),7.30(d,1H),7.23(dd,1H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),4.09-3.98(m,2H),3.81(s,3H),3.75(s,3H),3.03-2.82(m,9H),2.69-2.52(m,6H),2.24-2.08(m,3H),2.07-1.96(m,7H),1.93-1.73(m,7H),1.51-1.37(m,2H),1.21-1.08(m,2H)。
實施例32：化合物32的製備
第一步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)
嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物32)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecam-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將11D(100mg,0.14mmol)和2J(0.21g,0.51mmol)DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(87mg,0.46mmol)，氮氣保護下100℃反應16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mmx150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物32(22mg，收率：15%)。
LCMS m/z=1070.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.66(s,1H),11.05(s,1H),8.88-8.73(m,3H),8.34(s,1H),8.26(s,1H),7.95(s,1H),7.76(s,1H),7.67-7.46(m,3H),7.34-7.16(m,2H),6.81(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.51-3.35(m,4H),3.18-3.05(m,2H),2.96-2.81(m,1H),2.69-2.52(m,6H),2.34-2.24(m,1H),2.08-1.94(m,8H),1.89-1.74(m,2H),1.70-1.34(m,11H)。
實施例33：化合物33的製備
第一步：2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯(33A)
tert-butyl 2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(700mg,2.38mmol)溶於DMSO(10mL)中，依次加入2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯(786mg,3.09mmol)和碳酸氫鈉(800mg,9.52mmol)，100℃攪拌4h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到33A，黃色固體(0.6g，收率：48%)。
LCMS m/z=529.3[M+H]+。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(33B)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將33A(600mg,1.14mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入2M鹽酸的二氧六環溶液(6mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮殘留物加入20mL二氯甲烷，用1M的NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到33B(462mg，收率：95%)。
第三步：4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(33C)
tert-butyl 4-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperidine-1-carboxylate
將33B(462mg,1.08mmol)和N-第三丁氧羰基-4-哌啶酮(279mg,1.40mmol)溶於DMAc(8mL)中，加入醋酸(65mg,1.08mmol)。室溫攪拌30min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(342mg,1.61mmol)，室溫過夜反應。加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到33C(400mg，收率：61%)。
LCMS m/z=612.3[M+H]+。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-(哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(33D)的鹽酸鹽
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-(piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；HCl
將33C(400mg,0.65mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入2N鹽酸的二氧六環溶液(6mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(33E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步33D的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(5mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(196mg,0.78mmol)和碳酸氫鈉(202mg,2.4mmol)，100℃反應5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到33E(178mg，收率：37%)。
LCMS m/z=743.3[M+H]+。
第六步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(33F)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將33E(178mg,0.24mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(67mg，1.20mmol)，氯化銨(64mg，1.20mmol)，氮氣保護，80℃反應1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到33F(100mg，收率：58%)。
第七步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物33)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將33F(100mg,0.14mmol)和2J(87mg,0.21mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(80mg,0.42mmol)，氮氣保護下100℃反應16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物33(30mg，收率：20%)。
LCMS m/z=1088.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.66(s,1H),11.09(s,1H),8.90-8.73(m,3H),8.34(s,1H),8.26(s,1H),7.95(s,1H),7.77(s,1H),7.70(d,1H),7.62-7.49(m,2H),7.46(d,1H),6.81(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.24-2.99(m,7H),2.95-2.82(m,1H),2.68-2.51(m,7H),2.36-2.25(m,1H),2.09-1.94(m,7H),1.89-1.39(m,12H)。
實施例34：化合物34的製備
第一步：5-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯(34B)
tert-butyl 5-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrro1o[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
將2-第三丁氧羰基-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯(34A)(1.06g,5mmol)和4-甲醯基哌啶-1-羧酸苄酯(2.47g,10mmol)溶於1,2-二氯乙烷(18mL)中，加入醋酸(600mg,10mmol)。室溫攪拌30min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(3.18g,15mmol)，室溫過夜反應。加入20mL氫氧化鈉水溶液(4N)和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇
(V/V)=100/1-20/1)得到34B(3.55g)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=444.3[M+H]+。
第二步：5-(哌啶-4-基甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯(34C)
tert-butyl 5-(piperidin-4-ylmethyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
將34B(3.55g,5mmol)溶於氨/甲醇(30mL)中，加入鈀碳(wt%=10%,355mg)，氫氣置換3次，氫氣氛圍(氣球壓強)、室溫下攪拌3h，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到34C(474mg，收率：31%)。
LCMS m/z=310.3[M+H]+。
第三步：4-[(4-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸第三丁酯(34D)
tert-butyl 5-((1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrro1o[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
將2E(356mg,1.69mmol)和34C(474mg,1.53mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入碳酸鉀(634mg,4.59mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到34D(766mg)粗產物，直接用於下一步反應。
LCMS m/z=501.3[M+H]+。
第四步：2-((1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)八氫吡咯並[3,4-c]吡咯(34E)的鹽酸鹽
2-((1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole hydrochloride；HCl
向34D(766mg)粗產物加入鹽酸二氧六環溶液(4N，6mL,24mmol)，室溫攪拌5min，然後加入(6mL)，反應液溶清，室溫攪拌5min送LCMS監測反應進程。將反應液減壓濃縮乾，得到34E的鹽酸鹽粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=401.3[M+H]+。
第五步：5-(5-((1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(34F)
5-(5-((1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步34E的鹽酸鹽粗產物和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(422mg,1.53mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入DIPEA(593mg,4.59mmol)，100℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-30/1)，得到34F(611mg，收率：61%)。
LCMS m/z=657.3[M+H]+。
第六步：5-(5-((1-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(34G)
5-(5-((1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將34F(611mg,0.93mmol)溶於甲醇(12mL)和水(3mL)中，升溫至80℃，加入氯化銨(611mg,11.5mmol)和鐵粉(611mg,11mmol)的混合物。此溫度下攪拌0.5h，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，濾液加入10mL飽和食鹽水，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物通過製備板製備得到(DCM/MeOH=10/1)34G(140mg，收率：24%)。
LCMS m/z=627.3[M+H]+。
第七步：5-(5-((1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物34)
5-(5-((1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將34G(0.14g,0.22mmol)和2J(92mg,0.22mmol)溶於DMF(5
mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(127mg,0.67mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物34(35mg，收率：16%)。
LCMS m/z=501.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.64(s,1H),11.04(s,1H),8.90-8.61(m,3H),8.31-8.10(m,2H),7.95-7.78(m,1H),7.65(d,1H),7.03-6.65(m,4H),5.04(dd,1H),3.79-3.63(m,5H),3.29-3.13(m,4H),3.06-2.94(m,2H),2.93-2.80(m,1H),2.74-2.59(m,4H),2.59-2.48(m,4H),2.38-2.27(m,2H),2.12-1.92(m,8H),1.86-1.76(m,2H),1.63-1.53(m,1H),1.37-1.24(m,2H),0.73-0.58(m,2H),0.43-0.20(m,2H)。
實施例35：化合物35的製備
第一步：4-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(35A)
tert-butyl 4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
將4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(7D-1)(0.51g,1.89mmol)，1-環丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)(0.40g,1.89mmol)和碳酸鉀(0.78g，5.67mmol)混合溶於DMSO(15mL)中，120℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到35A(340mg，收率：39%)。
LCMS m/z=461.3[M+H]+。
第二步：1-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪(化合物35B)
1-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine
將35A(0.34g,0.74mmol)溶於DCM(15mL)，室溫下加入三氟乙酸(5mL)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入30mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到35B(265mg)，直接用於下一步。
LCMS m/z=361.3[M+H]+。
第三步：第三丁基3-((4-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(化合物35C)
tert-butyl 3-((4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將35B(0.27g,0.74mmol)，3-甲醯基吡咯烷-1-羧酸第三丁酯(0.18g,0.89mmol)溶於二氯甲烷(15mL)中，依次加入醋酸(0.09g,1.48mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(0.31g,1.48mmol)，室溫反應2h，加入1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1除去雜質，二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1收集產物)得到35C(400mg，收率：99%)。
LCMS m/z=544.3[M+H]+。
第四步：1-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(35D)
1-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
將35C(0.40g,0.74mmol)溶於DCM(15mL)，室溫下加入三氟乙酸(5mL)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入30mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到35D(305mg)，直接用於下一步。
LCMS m/z=444.3[M+H]+。
第五步：5-(3-((4-(1-(2-環丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(35E)
5-(3-((4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將35D(0.31g,0.69mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-2,3-二氫
-1H-異吲哚-1,3-二酮(0.19g,0.69mmol)溶於DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.27g,2.07mmol)，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到35E(365mg，收率：76%)。
LCMS m/z=700.3[M+H]+。
第六步：5-(3-((4-(1-(4-氨基-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(35F)
5-(3-((4-(1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將35E(0.18g,0.26mmol)溶於乙醇(15mL)，加入還原鐵粉(0.07g,1.30mmol)，再滴加氯化銨(0.07g,1.30mmol)的水溶液(5mL)，氮氣保護，80℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到35F(170mg)，直接用於下一步。
LCMS m/z=670.3[M+H]+。
第七步：5-(3-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-環丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物35)
5-(3-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將35F(0.17g,0.25mmol)與2J(0.10g,0.25mmol)溶於DMF(12mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.14g,0.75mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物35(80mg，收率：31%)。
LCMS m/z=523.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.65(s,1H),11.04(s,1H),8.89-8.74(m,3H),8.26(s,1H),8.24(s,1H),7.87(d,1H),7.64(d,1H),6.94-6.83(m,2H),6.81(dd,1H),6.75(s,1H),5.05(dd,1H),3.76(s,3H),3.59-3.45(m,2H),3.44-3.35(m,1H),3.34-3.22(m,2H),3.17-3.09(m,1H),2.93-2.83(m,1H),2.76-2.52(m,9H),2.48-2.27(m,7H),2.17-2.07(m,2H),2.06-1.95(m,7H),1.93-1.82(m,2H),1.80-1.71(m,1H),1.68-1.57(m,2H),0.79-0.64(m,2H),0.46-0.31(m,2H)。
實施例36：化合物36的製備
第一步：5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-
基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物36)
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將13F(315mg,0.44mmol)和23D(224mg,0.51mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(251mg,1.32mmol)，氮氣保護下，100℃反應16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物36(110mg，收率：22%)。
LCMS m/z=561.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.44-8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.74-7.61(m,2H),7.61-7.50(m,3H),7.49-7.33(m,3H),7.30(d,1H),7.36(s,1H),7.27-7.12(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.09-3.97(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.15-3.03(m,2H),3.03-2.81(m,5H),2.64-2.52(m,3H),2.18-2.07(m,2H),2.05-1.96(m,1H),1.89-1.75(m,10H),1.75-1.65(m,2H),1.34-1.04(m,10H)。
實施例37：化合物37的製備
第一步：9-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(37A)
tert-butyl 9-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將化合物4-甲醯哌啶-1-羧酸苄酯(6.0g,24.26mmol)，3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(8.0g,31.45mmol)溶於DMAC(100mL)中，加入十滴(3mL一次性塑膠滴管滴加)醋酸後，室溫攪拌1h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(7.7g,36.33mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相，並依次用水(200mL×2)和飽和食鹽水(200mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到37A(10g，收率：85%)。
LCMS m/z=486.4[M+H]+。
第二步：9-(哌啶-4-基甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(37B)
tert-butyl 9-(piperidin-4-ylmethyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
依次加入37A(4.2g,8.65mmol)、鈀碳(2.5g，10wt%)溶於60mL甲醇中，然後氫氣置換三次後在室溫反應2h，矽藻土抽濾，濾液減壓濃縮，殘留物通過矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=25/1-10/1)得到37B(2.8g，收率：92%)。
LCMS m/z=352.3[M+H]+。
第三步：9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(37C)
tert-butyl 9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將37B(1.6g,4.55mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.49g,5.93mmol)溶於DMSO(20mL)中，加入碳酸氫鈉(1.53g,18.2mmol)，100℃反應6h。冷卻至室溫，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到37C(1.4g，收率：53%)。
LCMS m/z=583.3[M+H]+。
第四步：3-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(37D)的鹽酸鹽
3-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane；HCl
將37C(1.2g,2.06mmol)溶於甲醇(4mL)中，加入2N鹽酸的二氧六環溶液(15mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(37E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的37D的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(683mg,2.47mmol)和碳酸氫鈉(692mg,8.24mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到37E(1.4g，收率：92%)。
LCMS m/z=739.3[M+H]+。
第六步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(37F)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將37E(1.0g,1.35mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(375mg，6.71mmol)，氯化銨(361mg，6.75mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到37F(700mg，收率：73%)。
LCMS m/z=709.4[M+H]+。
第七步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物37)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將37F(200mg,0.28mmol)和23D(148mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃反應16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後
有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物37(84mg，收率：27%)。
LCMS m/z=1108.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),11.05(s,1H),8.45-8.34(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.74-7.62(m,2H),7.61-7.49(m,3H),7.48-7.39(m,2H),7.38-7.27(m,2H),7.25-7.10(m,2H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.53-3.39(m,4H),3.12-2.99(m,2H),2.95-2.80(m,1H),2.64-2.52(m,4H),2.43-2.28(m,4H),2.27-2.17(m,2H),2.07-1.95(m,1H),1.83(d,6H),1.76-1.66(m,2H),1.62-1.43(m,9H),1.35-1.23(m,2H)。
實施例38：化合物38的製備
第一步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物38)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將10G(0.08g,0.11mmol)與23D(0.05g,0.11mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.06g,0.33mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%三氟乙酸))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物38，(30mg，收率：25%)。
LCMS m/z=554.9[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),11.05(s,1H),8.43-8.36(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.76-7.62(m,2H),7.62-7.48(m,3H),7.47-7.39(m,2H),7.37-7.28(m,2H),7.28-7.21(m,1H),7.20-7.12(m,1H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.55-3.33(m,4H),3.15-3.00(m,2H),2.94-2.83(m,1H),2.70-2.51(m,4H),2.49-2.07(m,6H),2.04-1.95(m,1H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.78-1.25(m,13H)。
實施例39：化合物39的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲
基-1H-吡唑-4-基)-4-)硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(39A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將9D的鹽酸鹽(820mg)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異二氫吲哚-1,3-二酮(5A-1)(557mg,1.89mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入N,N-二異丙基乙基胺(413mg,3.2mmol)，90℃反應6h。冷卻至室溫，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-15/1)，得到39A(0.91g，收率：76%)。
LCMS m/z=757.3[M+H]+。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(39B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將39A(910mg,1.2mmol)溶於甲醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(910mg，17mmol)，氯化銨(66.9mg，17.8mmol)，氮氣保護，80℃攪拌
1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到39B(345mg，收率：39%)。
LCMS m/z=727.4[M+H]+。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物39)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將39B(154mg,0.21mmol)和23D(99mg,0.23mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到粗產物。所得粗產物通過製備液相分離純化得到化合物39，(35mg，收率：15%)。
LCMS m/z=563.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.23-10.92(m,2H),8.45-8.34(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.74-7.62(m,2H),7.60-7.49(m,3H),7.48-7.39(m,3H),7.39-7.31(m,1H),7.26-7.11(m,1H),6.89(s,1H),5.09(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.66-3.54(m,2H),2.99-2.69(m,7H),2.65-2.51(m,2H),2.40-2.25(m,4H),2.22-2.12(m,2H),2.07-1.98(m,1H),1.90-1.64(m,9H),1.62-1.39(m,8H),1.32-1.23(m,2H)。
實施例40：化合物40的製備
第一步：(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)
(4-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
將23C(4.3g,17.5mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(6.4g,34.9mmol)溶於50mL NMP中，加入DIPEA(2.7g,20.9mmol)，130℃攪拌3h，冷卻至室溫，加入80mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)=10/1-1/10)，得到40A(5.7g，收率：83%)。
LCMS m/z=392.0[M+H]+。
第二步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物40)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將12I(0.20g,0.28mmol)和40A(0.18g,0.46mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物40(12mg，收率：4%)。
LCMS m/z=540.4[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.54-8.45(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.74-7.68(m,1H),7.67-7.60(m,2H),7.59-7.52(m,2H),7.49-7.42(m,2H),7.39-7.33(m,1H),7.30(d,1H),7.23(dd,1H),7.20-7.13(m,1H),6.86(s,1H),5.06(dd,1H),4.09-3.98(m,2H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.02-2.81(m,9H),2.69-2.53(m,6H),2.26-2.09(m,3H),2.06-1.97(m,1H),1.93-1.73(m,13H),1.49-1.41(m,2H),1.17-1.11(m,2H)。
實施例41：化合物41的製備
5-(4-((1'-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物41)
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將13F(235mg,0.33mmol)和40A(157mg,0.4mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到化合物41(82mg，收率：23%)。
LCMS m/z=539.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.36(s,1H),11.05(s,1H),8.54-8.42(m,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,1H),7.61-7.52(m,3H),7.48-7.33(m,3H),7.30(d,1H),7.26-7.12(m,2H),6.84(s,1H),5.06(dd,1H),4.10-3.97(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.15-3.04(m,2H),3.03-2.79(m,5H),2.64-2.52(m,4H),2.17-1.97(m,3H),1.89-1.65(m,14H),1.37-1.05(m,9H)。
實施例42：化合物42的製備
5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)
嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物42)
5-(4-((4-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將12I(0.20g,0.28mmol)和23D(0.17g,0.39mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物42(12mg，收率：4%)。
LCMS m/z=562.4[(M+2H)/2]+。
實施例43：化合物43的製備
5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物43)
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-
1,3-dione
將8I(180mg,0.249mmol)和23D(109mg,0.25mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(142mg,0.747mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物43的三氟乙酸鹽(84mg)。向化合物43的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物43(60mg，收率：21%)。
LCMS m/z=1123.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.42-8.35(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.72-7.65(m,2H),7.59-7.52(m,3H),7.47-7.42(m,2H),7.39-7.35(m,1H),7.34-7.31(m,1H),7.25(dd,1H),7.22-7.15(m,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.77(d,6H),3.48-3.39(m,4H),3.13-3.06(m,2H),2.95-2.87(m,2H),2.64-2.53(m,4H),2.49-2.45(m,3H),2.20-2.12(m,4H),2.04-1.97(m,2H),1.83(d,6H),1.78-1.71(m,4H),1.62-1.48(m,5H),1.17-1.14(m,2H)。
實施例44：化合物44的製備
5-(2-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物44)
5-(2-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1H(142mg,0.2mmol)和23D(99mg,0.23mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物44(34mg，收率：15.3%)。
LCMS m/z=554.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.04(s,1H),8.47-8.33(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.75-7.50(m,5H),7.48-7.38(m,2H),7.36-7.26(m,2H),7.24-7.06(m,2H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),3.56-3.39(m,4H),3.14-3.00(m,2H),2.97-2.81(m,1H),2.75-2.51(m,6H),2.41-2.11(m,4H),2.04-1.96(m,1H),1.83(d,6H),1.76-1.44(m,9H),1.40-1.23(m,4H)。
實施例45：化合物45的製備
第一步：4-((1-(第三丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(45B)
benzyl 4-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將45A(6.0g,27.24mmol)和4-甲醯哌啶-1-羧酸第三丁酯(11.62g,54.48mmol)溶於DMAc(50mL)中，加入醋酸(3.27g,54.45mmol)，室溫攪拌2h。然後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(17.32g,81.72mmol)，室溫反應過夜。反應結束後，加入100mL乙酸乙酯和200mL水，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到45B，白色固體(6.0g，收率：53%)。
LCMS m/z=418.3[M+H]+。
第二步：4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(45C)的鹽酸鹽
benzyl 4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine-1-carboxylate；HCl
將45B(3.0g,7.18mmol)溶於5mL甲醇，向反應體系加入30mL氯化氫-二氧六環溶液(1M)，室溫反應1h，反應完後，減壓濃縮，得到45C的鹽
酸鹽(2.24g)，直接進行下一步反應。
LCMS m/z=318.2[M+H]+。
第三步：4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(45D)
benzyl 4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將45C的鹽酸鹽粗產物(2.24g)溶於DMSO(20mL)中，分批加入固體碳酸鉀(8.13g,58.8mmol)，攪拌5min，再加入化合物4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.48g,5.89mmol)，100℃反應過夜。反應結束後冷卻至室溫，用50mL乙酸乙酯和200mL水萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到45D(2.28g，收率：58%)。
LCMS m/z=549.3[M+H]+。
第四步：2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌嗪-1-基甲基)哌啶-1-基)苯胺(45E)
2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-(4-(piperazin-1-ylmethyl)piperidin-1-yl)aniline
將化合物45D(2.28g,4.16mmol)溶於20mL甲醇中，加入鈀/碳(44mg)，置換氫氣三次，在氫氣氛圍下，室溫反應過夜。反應完後，抽濾，濾液減壓濃縮得到45E粗產物(1.6g)。
LCMS m/z=385.3[M+H]+。
第五步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)
哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(45F)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45E粗產物(800mg)溶於DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(1.14g,4.13mmol)和DIPEA(538mg,4.16mmol)，100℃反應3h。冷卻至室溫，加入10mL水，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到45F，黃色固體(1.0g，收率：75%)。
LCMS m/z=641.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.98(s,1H),7.89(s,1H),7.68(d,1H),7.36(d,1H),7.22(dd,1H),6.87(s,1H),6.74(s,1H),5.06(dd,1H),3.90(s,3H),3.85(s,3H),3.53-3.42(m,4H),3.08-2.96(m,2H),2.91-2.69(m,3H),2.69-2.54(m,6H),2.41-2.28(m,2H),2.15-2.06(m,1H),1.90-1.78(m,2H),1.77-1.61(m,1H),1.43-1.24(m,2H)。
第六步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物45)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(200mg,0.31mmol)和23D(203mg,0.465mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(177mg,0.93mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物45的三氟乙酸鹽(60mg)，向化合物45的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物45(45mg，收率：14%)。
LCMS m/z=1040.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.30(s,1H),8.13-8.00(m,2H),7.89-7.68(m,4H),7.68-7.55(m,4H),7.55-7.43(m,2H),7.43-7.20(m,3H),5.13(dd,1H),4.25-4.09(m,2H),4.06(s,3H),3.94-3.64(m,6H),3.61-3.46(m,5H),3.39-3.12(m,4H),2.96-2.85(m,2H),2.83-2.67(m,1H),2.57-2.38(m,1H),2.30-2.11(m,3H),2.09-1.85(m,8H)。
實施例46：化合物46的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基))-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(46A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將12G(0.3g,0.60mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(0.25g,0.85mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入20mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-15/1)，得到46A(0.31g，收率：67%)
LCMS m/z=772.4[M+H]+。
第二步：5-(4-((4-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(46B)
5-(4-((4-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將46A(0.3lg,0.40mmol)溶於乙醇(12mL)和水(3mL)中，升溫至80℃，加入氯化銨(0.22g,4.11mmol)和鐵粉(0.23g,4.12mmol)的混合物。此溫度下攪拌0.5h，冷卻至室溫，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷洗滌，濾液加入10mL飽和食鹽水，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到46B粗產物(0.19g),直接用於下一步。
LCMS m/z=742.3[M+H]+。
第三步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物46)
5-(4-((4-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將46B粗產物(0.15g)和23D(0.12g,0.27mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾，將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，分液後有機層用
無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物46(26mg，收率：7%)。
LCMS m/z=571.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.08(s,1H),8.39(s,1H),8.26(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.73-7.70(m,1H),7.68(s,1H),7.59(s,1H),7.55(d,2H),7.48-7.43(m,3H),7.36(t,1H),7.18(m,1H),6.85(s,1H),5.10(dd,1H),3.78(d,3H),3.75(s,3H),3.61(d,2H),2.92-2.83(m,8H),2.66-2.56(m,5H),2.54-2.52(m,1H),2.25-2.14(m,3H),2.09-2.00(m,1H),1.94-1.72(m,13H),1.48-1.39(m,2H),1.33-1.20(m,3H)。
實施例47：化合物47的
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(47A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將37D的鹽酸鹽粗產物(333mg)溶於DMSO(10mL)中，依次加
入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(265mg,0.90mmol)和碳酸氫鈉(232mg,2.76mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到47A(420mg)。
第二步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(47B)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將47A(420mg,0.55mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(154mg，2.75mmol)，氯化銨(147mg，2.75mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到47B(380mg，收率：95%)。
LCMS m/z=727.4[M+H]+。
第三步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物47)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將47B(200mg,0.28mmol)和23D(148mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物47(48mg，收率：15%)。
LCMS m/z=563.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),11.08(s,1H),8.44-8.32(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.75-7.64(m,2H),7.60-7.50(m,3H),7.49-7.39(m,3H),7.39-7.30(m,1H),7.27-7.10(m,1H),6.85(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.28-3.19(m,4H),3.14-2.99(m,2H),2.95-2.82(m,1H),2.68-2.53(m,4H),2.42-2.30(m,4H),2.28-2.16(m,2H),2.08-1.97(m,1H),1.83(d,6H),1.77-1.65(m,2H),1.65-1.44(m,9H),1.34-1.23(m,2H)。
實施例48：化合物48的製備
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物48)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecam-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將37F(235mg,0.33mmol)和40A(157mg,0.4mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物48(82mg，收率：23%)。
LCMS m/z=1064.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.49(s,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,J=8.5Hz,1H),7.62-7.50(m,3H),7.44(t,2H),7.39-7.31(m,1H),7.33-7.26(m,1H),7.26-7.12(m,2H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.55-3.40(m,4H),3.07(d,2H),2.98-2.81(m,1H),2.70-2.53(m,4H),2.36(s,4H),2.29-2.17(m,2H),2.07-1.95(m,1H),1.84(d,6H),1.72(d,2H),1.64-1.45(m,9H),1.38-1.20(m,3H)。
實施例49：化合物49的製備
第一步：5-(2-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一碳-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物49)
5-(2-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1H(142mg,0.2mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(90mg,0.23mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物49(50mg，收率：23.5%)。
LCMS m/z=532.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.56-8.40(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.88(s,1H),7.70(d,1H),7.65-7.49(m,4H),7.42(t,2H),7.35-7.24(m,2H),7.22-7.07(m,2H),6.84(s,1H),5.05(dd,1H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),3.58-3.35(m,4H),3.14-3.02(m,2H),2.94-
2.82(m,1H),2.73-2.52(m,4H),2.42-2.11(m,6H),2.05-1.93(m,1H),1.84(d,6H),1.78-1.46(m,9H),1.45-1.17(m,4H)。
實施例50：化合物50的製備
第一步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二申基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物50)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將46B(0.15g,0.20mmol)和40A(0.13g,0.33mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾，將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物50(30mg，收率：14%)。
LCMS m/z=549.4[(M/2+H)]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.08(s,1H),8.54-
8.44(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.75-7.66(m,2H),7.61(s,1H),7.58-7.51(m,2H),7.50-7.40(m,3H),7.40-7.33(m,1H),7.21-7.09(m,1H),6.86(d,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.67-3.55(m,2H),3.00-2.77(m,10H),2.70-2.52(m,6H),2.18-2.11(m,2H),2.06-1.99(m,1H),1.96-1；65(m,13H),1.50-1.35(m,2H),1.31-1.19(m,2H)。
實施例51：化合物51的製備
第一步：5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基))-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物51)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將39B(100mg,0.138mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(56mg,0.143mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(79mg,0.413mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到粗產物。所得粗產物通過製備液相分離純化得到化合物51，(18ma，收率：12%)。
LCMS m/z=541.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.44-11.32(m,1H),11.21-10.93(m,1H),8.54-8.39(m,1H),8.28(s,1H),8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.75-7.63(m,2H),7.61-7.50(m,3H),7.49-7.40(m,3H),7.39-7.30(m,1H),7.28-7.13(m,1H),6.89(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.65-3.56(m,2H),2.95-2.74(m,7H),2.64-2.52(m,2H),2.37-2.26(m,4H),2.22-2.12(m,2H),2.09-1.98(m,1H),1.87-1.77(m,8H),1.76-1.68(m,1H),1.59-1.45(m,8H),1.31-1.22(m,2H)。
實施例52：化合物52的製備
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物52)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將47B(200mg,0.28mmol)和40A(133mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液
相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物52(56mg，收率：18%)。
LCMS m/z=1082.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.08(s,1H),8.57-8.39(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.76-7.64(m,2H),7.63-7.50(m,3H),7.50-7.40(m,3H),7.40-7.32(m,1H),7.23-7.11(m,1H),6.85(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.28-3.16(m,4H),3.13-3.03(m,2H),2.95-2.82(m,1H),2.68-2.52(m,4H),2.44-2.29(m,4H),2.29-2.17(m,2H),2.08-1.98(m,1H),1.84(d,6H),1.79-1.68(m,2H),1.63-1.47(m,9H),1.35-1.25(m,3H)。
實施例53：化合物53的製備
第一步：5-(4-((1'-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物53)
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將8I(180mg,0.249mmol)和40A(98mg,0.249mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(142mg,0.747mmol)，氮氣保護，100℃反應
過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物53的三氟乙酸鹽(160mg)，向化合物53的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物53(120mg，收率：45%)。
LCMS m/z=1079.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.52-8.45(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.87(s,1H),7.74-7.66(m,2H),7.61-7.53(m,3H),7.48-7.43(m,2H),7.39-7.36(m,1H),7.35-7.33(m,1H),7.25(dd,1H),7.20-7.14(m,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.77(d,6H),3.48-3.40(m,4H),3.14-3.09(m,2H),2.99-2.91(m,2H),2.63-2.55(m,3H),2.49-2.46(m,3H),2.21-2.13(m,4H),2.03-1.96(m,2H),1.84(d,6H),1.80-1.72(m,4H),1.66-1.42(m,6H),1.17-1.13(m,2H)。
實施例54：化合物54的製備
第一步：(2-氨基-5-溴苯基)二甲基氧化膦(54A)
(2-amino-5-bromophenyl)dimethylphosphine oxide
將4-溴-2-碘苯胺(0.5g，1.68mmol)，二甲基氧化膦(0.13g，1.68mmol)，Xant-Phos(4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽，49mg，0.084mmol)和無水磷酸鉀(0.46g，2.18mmol)依次加入到10mL 1,4-二氧六環中，攪拌下加入醋酸鈀(19mg，0.084mmol)。氮氣置換三次，80℃攪拌5h。冷卻至室溫，過濾，濾餅用20mL乙酸乙酯洗滌，合併濾液。減壓濃縮濾液，殘留物加入5mL甲基第三丁基醚打漿，過濾，濾餅乾燥得到54A(0.3g，收率：72%)。
LCMS m/z=248.1[M+H]+。
第二步：(4-氨基-2'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(54B)
(4-amino-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
將54A(0.3g,1.21mmol)和2-氟-苯硼酸(0.34g,2.42mmol)溶於10mL二氧六環和2mL水中，然後向其中加入Pd(dppf)Cl2．DCM(44mg，0.06mmol)和碳酸鉀(670mg，4.84mmol)，氮氣置換三次，100℃反應2h，降溫至室溫，將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化，得54B(140mg，收率44%)。
LCMS m/z=264.1[M+H]+。
第三步：(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(54C)
(4-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
將54B(0.14g,0.53mmol)，5-溴-2,4,-二氯嘧啶(0.24g,1.06mmol)溶於5mL NMP中，加入DIPEA(82mg,0.64mmol)，120℃攪拌2h，冷卻至室溫，加入8mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)=10/1-1/10)，得到54C(0.16g，收率：66%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 11.47(s,1H),8.72-8.66(m,1H),8.36(s,1H),7.75(d,1H),7.52-7.46(m,1H),7.46-7.40(m,1H),7.39-7.33(m,1H),7.28-7.13(m,2H),1.88(d,6H)。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基))嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物54)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將4D(250mg,0.35mmol)和54B(190mg,0.42mmol)溶於1,4-二氧六環(4mL)和NMP(1mL)混合溶液中，加入對甲苯磺酸一水合物(200mg,1.05mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，
減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物54的三氟乙酸鹽，向化合物54的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和10mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物54(120mg，收率：30%)。
LCMS m/z=571.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.13(s,1H),11.05(s,1H),8.47-8.37(m,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),7.98(s,1H),7.82(s,1H),7.71-7.57(m,2H),7.53(s,1H),7.48-7.37(m,2H),7.35-7.02(m,5H),6.80(s,1H),5.06(dd,1H),4.12-3.95(m,2H),3.77(s,3H),3.76(s,3H),3.15-3.04(m,2H),3.03-2.92(m,2H),2.92-2.82(m,1H),2.68-2.51(m,8H),2.46-2.26(m,4H),2.22-2.09(m,3H),2.05-1.94(m,1H),1.91-1.68(m,11H),1.59-1.43(m,2H),1.21-1.08(m,2H)。
實施例55：化合物55的製備
第一步：(2-氨基-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦(55A)
(2-amino-5-cyclopropylphenyl)dimethylphosphine oxide
將54A(2.3g,9.27mmol)和環丙基硼酸(2.39g,27.81mmol)溶於
20mL二氧六環和4mL水中，然後向其中加入三環己基膦(0.52g，1.85mmol)、醋酸鈀(0.21g，0.93mmol)和磷酸鉀(7.87g，37.08mmol)，氮氣置換三次，100℃反應24h，降溫至室溫，將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化，得55A(1.26g，收率65%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.94(d,1H),6.88-6.80(m,1H),6.63-6.57(m,1H),1.82-1.71(m,7H),0.91-0.83(m,2H),0.59-0.51(m,2H)。
第二步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦(55B)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-5-cyclopropylphenyl)dimethylphosphine oxide
將化合物55A(0.26g,1.24mmol)，5-溴-2,4,-二氯嘧啶(0.57g,2.48mmol)溶於5mL NMP中，加入DIPEA(190mg,1.49mmol)，120℃攪拌2h，冷卻至室溫，加入8mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)=10/1-0/10)，殘留物用乙酸乙酯/石油醚(10mL，V/V=1/2)混合溶劑打漿，過濾，濾餅減壓乾燥得到55B(0.28g，收率：56%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 11.20(s,1H),8.45-8.39(m,1H),8.30(s,1H),7.24-7.19(m,1H),7.06-7.00(m,1H),1.93-1.79(m,7H),1.05-0.96(m,2H),0.78-0.65(m,2H)。
第三步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物55)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)
piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將4D(200mg,0.28mmol)和55B(130mg,0.33mmol)溶於DMF(4mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物55的三氟乙酸鹽，向化合物55的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和10mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物55(90mg，收率：29%)。
LCMS m/z=544.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.05(s,1H),10.84(s,1H),8.19-8.05(m,3H),7.96(s,1H),7.86(s,1H),7.65(d,1H),7.57(s,1H),7.32-7.10(m,3H),6.79(s,1H),6.55-6.34(m,1H),5.06(dd,1H),4.11-3.95(m,2H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.18-3.06(m,2H),3.02-2.81(m,3H),2.70-2.51(m,8H),2.45-2.30(m,4H),2.29-2.09(m,3H),2.05-1.96(m,1H),1.89-1.68(m,12H),1.64-1.50(m,2H),1.21-1.05(m,2H),0.96-0.86(m,2H),0.57-0.43(m,2H)。
實施例56：化合物56的製備
第一步：5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(56A)
Methyl5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinate
將4B(0.22g,0.44mmol)，5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(0.08g,0.52mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入碳酸鉀(0.15g,1.09mmol)，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入40mL飽和碳酸氫鈉水溶液，再加入50ml乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到56A(0.18g，收率：65%)。
LCMS m/z=633.3[M+H]+。
第二步：5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸(56B)
5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinic acid
將56A(0.18g,0.28mmol)溶於四氫呋喃(12mL)和水(4mL)的混合
溶液中，加入一水氫氧化鋰(0.05g，1.19mmol)，室溫反應4h，反應結束後反應液中加入稀鹽酸(2mol/L)調節pH=7，減壓濃縮得到56B粗產物(0.18g)，直接用於下一步。
LCMS m/z=619.3[M+H]+。
第三步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基))哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-醯胺(56C)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinamide
將56B(0.18g)，3-氨基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(0.06g,0.36mmol)溶於DMF(10mL)中，加入DIPEA(0.10g,0.77mmol)和HATU(0.14g,0.37mmol)，室溫反應3h，反應結束後，加入40mL飽和碳酸氫鈉水溶液，再加入50ml乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-10/1)得到56C(0.15g，兩步收率：74%)。
LCMS m/z=729.4[M+H]+。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-醯胺(56D)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將56C(0.15g,0.21mmol)溶於乙醇(9mL)和水(3mL)，加入鐵粉(0.04g,0.72mmol)，再滴加氯化銨(0.04g,0.75mmol)，氮氣保護，80℃反應3h，反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，然後加入20ml飽和碳酸氫鈉水溶液，再用二氯甲烷(20ml)萃取兩次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到56D，白色固體(0.12g)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=699.4[M+H]+。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-甲醯胺(化合物56)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將56D(0.12g)與23D(0.08g,0.18mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(0.09g,0.47mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。將製備所得凍乾，將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取分液後有
機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到化合物56(8mg，收率：3%)。
LCMS m/z=549.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.39(s,1H),8.31-8.25(m,2H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.87-7.80(m,2H),7.70(dd,1H),7.60-7.51(m,3H),7.49-7.33(m,4H),7.23-7.14(m,1H),6.83(s,1H),4.82-4.65(m,1H),3.93(d,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.10(d,2H),2.86(t,2H),2.80-2.73(m,1H),2.64-2.52(m,6H),2.45-2.32(m,4H),2.23-2.12(m,4H),2.04-1.97(m,1H),1.89-1.75(m,10H),1.60-1.48(m,3H),1.22-1.18(m,3H)。
實施例57：化合物57的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3),9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(57A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecam-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物9D的鹽酸鹽(820mg)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(523mg,1.9mmol)溶於DMSO(20mL)中，加入N,N-二異丙基乙基胺(612mg,4.74mmol)，90℃反應6h。冷卻至室溫，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)三次。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-15/1)，得到57A(0.39g，收率：33%)。
LCMS m/z=739.4[M+H]+。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(57B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將57A(390mg,0.53mmol)溶於甲醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(390mg，6.98mmol)，氯化銨(390mg，7.29mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到57B(270mg，收率：72%)。
LCMS m/z=709.3[M+H]+。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]
十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物57)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將57B(134mg,0.19mmol)和23D(90mg,0.21mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到粗產物，進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到化合物57，(22mg，收率：10.5%)。
LCMS m/z=554.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.17-10.96(m,2H),8.47-8.34(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.73-7.62(m,2H),7.60-7.49(m,3H),7.44(t,2H),7.36(t,1H),7.33-7.10(m,3H),6.89(s,1H),5.06(dd,1H),4.12-3.95(m,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.06-2.71(m,7H),2.68-2.52(m,2H),2.44-2.26(m,4H),2.24-2.10(m,2H),2.06-1.92(m,1H),1.90-1.73(m,9H),1.59-1.44(m,8H),1.23-1.09(m,2H)。
實施例58：化合物58的製備
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物58)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；
將4D(87mg,0.12mmol)和40A(56mg,0.14mmol，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(68mg,0.36mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有固體析出，抽濾收集固體，依次用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)、製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，後向濃縮液中加入20mL二氯甲烷和3mL飽和碳酸氫鈉溶液，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(10mL×2)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得化合物58(15mg，收率：11.6%)。
LCMS m/z=540.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.36(s,1H),11.05(s,1H),8.54-8.44(m,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.86(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,1H),7.59(s,1H),7.58-7.51(m,2H),7.45(t,2H),7.40-7.34(m,1H),7.30(s,1H),7.26-7.20(m,1H),7.20-7.12(m,1H),6.84(s,1H),5.06(dd,5.4Hz,1H),4.10
-3.98(m,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.11(d,3H),3.03-2.82(m,5H),2.68-2.53(m,6H),2.25-2.08(m,4H),2.07-1.95(m,2H),1.88-1.74(m,10H),1.63-1.45(m,3H),1.21-1.07(m,3H)。
實施例59：化合物59的製備
5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物59)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將57B(134mg,0.19mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(81mg,0.21mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到粗產物，進一步用製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物59，(25mg，收
率：12.4%)。
LCMS m/z=532.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.20-10.75(m,1H),8.61-8.39(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.76-7.61(m,2H),7.59-7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.32-7.12(m,3H),6.89(s,1H),5.06(dd,1H),4.14-3.93(m,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.05-2.73(m,7H),2.69-2.51(m,2H),2.43-2.22(m,4H),2.22-2.06(m,2H),2.05-1.94(m,1H),1.89-1.72(m,9H),1.65-1.45(m,8H),1.20-1.06(m,2H)。
實施例60：化合物60的製備
第一步：9-(1-(第三丁氧基羰基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(60A)
benzyl 9-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
將2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(2.60g,9.02mmol)，N-
BOC-哌啶酮(2.16g,10.82mmol)，無水硫酸鈉(2.56g,18.04mmol)和醋酸(1.08g,18.04mmol)依次加入到二氯甲烷(20ml)中，室溫攪拌下加入三乙醯氧基硼氫化鈉(3.82g,18.04mmol)，加畢，室溫攪拌過夜。用1N氫氧化鈉水溶液調節pH>8，加入30mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化，得到60A(4.3g，收率：98%)。
LCMS m/z=472.3[M+1]+。
第二步：9-(哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(60B)
benzyl 9-(piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
將60B(4.50g,9.54mmol)溶於DCM(30ml)中，加入三氟乙酸(15.30g,134.23mmol)，室溫攪拌2h，減壓濃縮，殘留物加入1N NaOH水溶液調節pH=9-10，有機層減壓濃縮後直接用於下一步。
第三步：9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(60C)
benzyl 9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
將4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.70g,6.77mm0l)，化合物60B(3.27g,8.80mmol)和碳酸鉀(3.74g,27.08mmol)加入到DMSO(20ml)中，120℃攪拌6h。冷卻至室溫，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(50mL×3)。減壓濃縮，殘留物柱層析純化得到60C(2.3g，收率：56%)。
LCMS m/z=603.3[M+1]+。
第四步：9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶
-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(60D)
9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane
將60C(2.20g,3.65mmol)溶於乙酸(6ml)中，室溫下加入溴化氫醋酸溶液(10mL，wt%=33%)，攪拌0.5h。加入30mL MTBE，析出大量固體，過濾，濾餅溶於20mL水中，用20mL乙酸乙酯萃取，有機層棄去，水相加入30mL二氯甲烷，用1N氫氧化鈉水溶液調節pH>8.有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到60D，直接用於下一步。
LCMS m/z=469.3[M+1]+。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-yl)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(60E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將60D(0.4g,0.85mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(0.26g,0.94mmol)溶於DMSO(5ml)中，加入DIPEA(0.22g,1.7mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入10mL水，析出固體，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化得到60E(0.45g，收率：73%)。
第六步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)
哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(60F)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將60E(400mg,0.55mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(310mg，5.5mmol)，氯化銨(290mg，5.5mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液加入20mL二氯甲烷和20mL飽和氯化鈉水溶液萃取，有機層乾燥後減壓濃縮，得到60F(380mg)，直接用於下一步。
第七步：5-(9-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物60)
5-(9-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將60F(140mg,0.20mmol)和40A(78mg,0.20mmol)溶於1,4-二氧六環(4mL)和NMP(1mL)混合溶液中，加入對甲苯磺酸一水合物(110mg,0.60mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，
減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物60的三氟乙酸鹽，向化合物60的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和10mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物60(60mg，收率：28%)。
LCMS m/z=525.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.36(s,1H),11.05(s,1H),8.65-8.32(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.67-7.49(m,4H),7.49-7.40(m,2H),7.39-7.29(m,2H),7.28-7.09(m,2H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.52-3.42(m,2H),3.41-3.34(m,2H),3.18-3.03(m,2H),2.98-2.81(m,1H),2.72-2.50(m,9H),2.09-1.97(m,1H),1.93-1.32(m,18H)。
實施例61：化合物61的製備
第一步：2-苄基9-(第三丁基)2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2,9-二羧酸酯(61A)
2-benzyl 9-(tert-butyl)2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2,9-dicarboxylate
將10A(5.00g,19.66mmol)溶於二氯甲烷(50mL)中，加入三乙胺(4.18g,41.29mmol)，再於冰浴下滴加氯甲酸苄酯(3.42g,20.05mmol)，滴加完畢，室溫反應1h。加水淬滅反應，400mL乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=20/1-5/1)得到61A(6.07g，收率：79%)。
LCMS m/z=333.2[M-55]+。
第二步：2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61B)
benzyl 2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
將61A(2.00g,5.15mmol)溶於二氯甲烷(30mL)中，緩慢加入三氟乙酸(10mL)，室溫反應1h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入50mL二氯甲烷複溶，1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，分液，收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到61B(1.35g)，直接用於下一步。
LCMS m/z=289.2[M+H]+。
第三步：9-((1-(第三丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61C)
benzyl 9-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
將61B(1.35g)，4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(1.00g,4.68mmol)溶於二氯甲烷(50mL)中，依次加入醋酸(0.56g,9.36mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(1.98g,9.36mmol)，室溫反應2h，加入1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1除去雜質，二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1收集產物)得到61C(2.07g，收率：91%)。
LCMS m/z=486.4[M+H]+。
第四步：9-(哌啶-4-基甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61D)
benzyl 9-(piperidin-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
將化合物61C(2.07g,4.26mmol)溶於二氯甲烷(30mL)中，緩慢加入三氟乙酸(10mL)，室溫反應1h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入50mL二氯甲烷複溶，1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，分液，收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到61D(1.64g)，直接用於下一步。
LCMS m/z=386.3[M+H]+。
第五步：9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61E)
benzyl 9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
將61D(1.64g,4.25mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.07g,4.25mmol)和碳酸鉀(2.94g,21.25mmol)混合溶於DMSO(50mL)中，120℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入200rnL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到61E(640mg，收率：24%)。
LCMS m/z=617.3[M+H]+。
第六步：4-(4-((2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺(61F)
4-(4-((2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)aniline
將61E(0.64g,1.04mmol)溶於異丙醇(20mL)以及氨甲醇溶液(5mL)混合溶劑中，加入鈀碳(wt%=10%,0.33g)，1atm氫氣置換3次，室溫反應1.5h，矽藻土過濾，二氯甲烷/甲醇(V/V=10/1)洗滌濾餅，濾液減壓濃縮得到61F(450mg)，直接用於下一步。
LCMS m/z=453.3[M+H]+。
第七步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(61G)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-
dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將61F(0.23g,0.50mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(0.15g,0.50mmol)溶於DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.19g,1.50mmol)，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-10/1)得到61G，(167mg，收率：46%)。
LCMS m/z=727.3[M+H]+。
第八步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物61)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將61G(0.08g,0.11mmol)與(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(0.05g,0.11mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.06g,0.33mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加
入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%三氟乙酸))得到產物，經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物61，(15mg，收率：12%)。
LCMS m/z=563.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),11.08(s,1H),8.43-8.35(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.75-7.62(m,2H),7.60-7.51(m,3H),7.50-7.39(m,3H),7.33(t,1H),7.25-7.07(m,1H),6.84(s,1H),5.10(dd,1H),3.78(s,3H),3.75(s,3H),3.24-3.13(m,2H),3.12-2.97(m,4H),2.94-2.80(m,1H),2.69-2.52(m,4H),2.45-2.14(m,6H),2.08-1.95(m,1H),1.83(d,6H),1.76-1.63(m,4H),1.63-1.38(m,7H),1.35-1.24(m,2H)。
實施例62：化合物62的製備
第一步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物62)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將60F(140mg,0.20mmol)和23D(87mg,0.20mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(110mg,0.60mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二
氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物62的三氟乙酸鹽，向化合物62的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和10mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮得到化合物62(30mg，收率：14%)。
LCMS m/z=547.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.10(s,1H),11.05(s,1H),8.47-8.32(m,1H),8.26(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.86(s,1H),7.69(d,1H),7.63(d,1H),7.60-7.48(m,3H),7.45(t,2H),7.40-7.07(m,4H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.56-3.37(m,4H),3.17-3.04(m,2H),2.95-2.81(m,1H),2.72-2.51(m,9H),2.05-1.95(m,1H),1.92-1.74(m,8H),1.74-1.35(m,10H)。
實施例63：化合物63的製備
第一步：5-(2-(4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物63)
5-(2-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-
dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將7G(0.15g,0.20mmol)與23D(0.10g,0.23mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(0.09g,0.47mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-12/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。將製備所得凍乾，將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物63(30mg，收率：13%)。
LCMS m/z=575.4[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(d,1H),11.05(s,1H),8.39(s,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.85(s,1H),7.69(dd,1H),7.64(d,1H),7.59-7.52(m,3H),7.45(t,2H),7.39-7.34(m,1H),7.31(d,1H),7.23(dd,1H),7.21-7.13(m,1H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.50-3.44(m,2H),3.41-3.36(m,2H),3.29-3.27(m,1H),3.09(d,2H),2.92-2.84(m,1H),2.72-2.65(m,1H),2.63-2.51(m,6H),2.36-2.16(m,5H),2.04-1.95(m,3H),1.87-1.75(m,8H),1.67-1.47(m,9H)。
實施例64：化合物64的製備
第一步：1-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪(64A)
1-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine
將45D(1.4g,2.55mmol)溶解在5mL乙酸中，加入10mL HBr-AcOH，室溫攪拌30min。將反應體系倒入40mL水中，析出固體，過濾，濾餅用150ml二氯甲烷溶解，碳酸氫鈉水洗滌(100mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得64A(1.0g，收率95.2%)。
LCMS m/z=415.3[M+1]+。
第二步：5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯(64B)
methyl 5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)picolinate
將64A(1.0g，2.41mmol)加入30mL二甲基亞碸中，加入5-氟吡啶甲酸甲酯(0.56g，3.61mmol)及三乙胺(1.22g，12.08mmol)，90℃條件下反應3h。冷卻至常溫，加入100mL水，析出固體，過濾，濾餅用二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，過濾，將濾液濃縮至油狀物，用(二氯甲烷/甲醇=10/1)(V/V)作流動相柱層析，得64B(1.0g，收率：81%)。
LCMS m/z=550.3[M+1]+。
第三步：5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶甲酸(64C)
5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)picolinic acid
將64B(1.0g，1.82mmol)加入40mL四氫呋喃和4mL水中，加入氫氧化鋰一水合物(153mg，3.64mmol)，常溫反應18h。用1N HCl調節體系pH至中性，減壓濃縮得64C(1.2g，粗產物)。
LCMS m/z=536.3[M+1]+。
第四步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶甲醯胺(64D)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)picolinamide
將64C(1.2g粗產物)加入30mL DMF中，加入3-氨基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(0.36g，2.20mmol)、DIPEA(1.64g，12.7mmol)和HATU(1.04g，2.74mmol)，常溫反應16h。加入120mL純化水析出固體，抽濾，乾燥，殘渣用(二氯甲烷/甲醇=10/1)(V/V)作流動相柱層析，得64D(1.0g，收率：87.5%)
LCMS m/z=646.2[M+1]+。
第五步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲醯胺(64E)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將64D(1.0g,1.55mmol)溶於THF(10mL)、乙醇(30mL)和水(6mL)的混合液中，加入還原鐵粉(875mg,15.63mmol)以及氯化銨(830mg,15.63mmol)，85℃反應2h，反應液冷卻至室溫，真空濃縮除去溶劑，向殘餘物中加入50mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到64E(0.7g，收率：73%)
LCMS m/z=616.3[M+H]+。
第六步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲醯胺(化合物64)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將64E(350mg,0.57mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(373mg,0.85mmol)，溶於DMF(20mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(325mg,1.71mmol)，100℃攪拌8h。冷卻至室溫，加入200mL飽和碳酸氫鈉水溶液有白色固體析出，抽濾收集固體，濾餅用水沖洗(100ml×3)，二氯甲烷複溶，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)=15：1)純化得化合物64(200mg，收率：35%)。
LCMS m/z=1015.3[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),10.84(s,1H),8.72(d,1H),8.46-8.24(m,3H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.88(t,2H),7.70(dd,1H),7.63-7.50(m,3H),7.49-7.40(m,3H),7.39-7.31(m,1H),7.25-7.12(m,1H),6.85(s,1H),4.81-4.70(m,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.44-3.33(m,4H),3.14-3.02(m,2H),2.86-2.73(m,1H),2.71-2.51(m,7H),2.29(d,2H),2.25-2.13(m,1H),2.07-2.00(m,1H),1.83(d,6H),1.79-1.70(m,2H),1.69-1.54(m,1H),1.39-1.24(m,2H)。
實施例65：化合物65的製備
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物65)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(250mg,0.39mmol)和40A(153mg,0.39mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(223mg,1.17mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物65的三氟乙酸鹽(63mg，黃色固體)。向化合物65的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物65，黃色固體，(45mg，收率：12%)。
LCMS m/z=996.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.27-8.14(m,2H),8.10(s,1H),7.88-7.69(m,4H),7.65-7.55(m,4H),7.55-7.42(m,2H),7.38-7.22(m,3H),5.12(dd,1H),4.22-4.08(m,2H),4.05(s,3H),3.89-3.69(m,6H),3.61-3.47(m,5H),3.37-3.13(m,4H),2.95-2.85(m,2H),2.82-2.65(m,1H),2.56-2.39(m,1H),2.30-2.13(m,3H),2.08-1.86(m,8H)。
實施例66：化合物66的製備
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲醯胺(化合物66)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將64E(350mg,0.57mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(336mg,0.85mmol)，溶於DMF(20mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(325mg,1.71mmol)，100℃攪拌8h。冷卻至室溫，加入200mL飽和碳酸氫鈉水溶液有白色固體析出，抽濾收集固體，濾餅用水沖洗(100ml×3)，二氯甲烷複溶，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)=15：1)純化得化合物66(230mg，收率：41%)。
LCMS m/z=971.3[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.38(s,1H),10.84(s,1H),8.72(d,1H),8.58-8.42(m,1H),8.33(d,1H),8.29(s,1H),8.12(s,1H),8.03(s,1H),7.88(d,2H),7.71(dd,1H),7.64-7.50(m,3H),7.49-7.39(m,3H),7.39-7.29(m,1H),7.27-7.05(m,1H),6.86(s,1H),4.82-4.67(m,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.46-
3.33(m,4H),3.15-3.01(m,2H),2.86-2.72(m,1H),2.70-2.51(m,7H),2.29(d,2H),2.25-2.10(m,1H),2.10-1.97(m,1H),1.84(d,6H),1.80-1.69(m,2H),1.69-1.54(m,1H),1.40-1.25(m,2H)。
實施例67：化合物67的製備
第一步：3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯(67A)
tert-butyl 3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(化合物80B)的鹽酸鹽(1.0g)和3-甲醯基吡咯烷-1-羧酸第三丁酯(0.8g,4.02mmol)溶於DMAc(50mL)中，加入醋酸(1.0g,16.65mmol)，室溫攪拌2h。然後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.0g,4.72mmol)，室溫反應過夜。反應結束後，加入100mL乙酸乙酯和200mL飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌並分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到67A，黃色固體(1.1g，收率：70%)。
LCMS m/z=501.2[M+H]+。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(67B)的鹽酸鹽
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine；HCl
將化合物67A(1.1g,2.20mmol)溶於甲醇(14mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(30mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(67C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的67B的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(683mg,2.47mmol)和碳酸氫鈉(692mg,8.24mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入30mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到67C(0.95g，兩步收率：66%)。
LCMS m/z=657.3[M+H]+。
第四步：5-(3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(67D)
5-(3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-
yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將67C(0.95g,1.45mmol)溶於乙醇/水(20mL，3：1)中，依次加入鐵粉(375mg，6.71mmol)，氯化銨(361mg，6.75mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到67D(700mg，收率：77%)。
LCMS m/z=627.3[M+H]+。
第五步：5-(3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物67)
5-(3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將67D(200mg,0.32mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(148mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，
將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物67(40mg，收率：12%)。
LCMS m/z=513.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),11.04(s,1H),8.45-8.34(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.70(dd,1H),7.65(d,1H),7.60(s,1H),7.55(d,2H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.23-7.11(m,1H),6.91(d,1H),6.87(s,1H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.78(d,6H),3.64-3.48(m,2H),3.48-3.37(m,1H),3.18(dd,1H),3.00-2.77(m,5H),2.71-2.52(m,7H),2.47-2.40(m,2H),2.21-2.09(m,1H),2.07-1.95(m,1H),1.90-1.73(m,7H)。
實施例68：化合物68的製備
第一步：5-(3-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物68)
5-(3-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將67D(200mg,0.32mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(180mg,0.46mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至
室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物68(30mg，收率：10%)。
LCMS m/z=491.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.54-8.45(m,1H),8.27(s,1H),8.12(s,1H),8.05(s,1H),7.89(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,1H),7.62(s,1H),7.55(d,2H),7.45(t,2H),7.34(t,1H),7.21-7.10(m,1H),6.90(d,1H),6.88(s,1H),6.81(dd,1H),5.05(dd,1H),3.78(d,6H),3.61-3.48(m,2H),3.48-3.37(m,1H),3.18(dd,1H),2.97-2.82(m,5H),2.69-2.52(m,7H),2.47-2.40(m,2H),2.21-2.10(m,1H),2.05-1.96(m,1H),1.90-1.73(m,7H)。
實施例69：化合物69的製備
第一步：5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)吡啶-2-甲酸甲酯(69A)
methyl 5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)picolinate
將37D(1.00g,2.07mmol)溶於DMSO(20mL)中，依次加入5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(388mg,2.50mmol)和碳酸鈉(530mg,5.00mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入30mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到69A(0.95g，收率：74%)。
LCMS m/z=618.3[M+H]+。
第二步：5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)吡啶甲酸(69B)
5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)picolinic acid
將69A(0.95g,1.54mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，加入水(2mL)，再加入一水氫氧化鋰(126mg,3.00mmol)，加熱到50℃反應4h。反應結束後，滴加稀鹽酸(2mol/L)調節pH=7，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
LCMS m/z=604.3[M+H]+。
第三步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)吡啶甲醯胺(69C)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-
yl)picolinamide
將上一步所得69B粗產物與3-氨基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(0.30g,1.82mmol)溶於DMF(10mL)中，加入DIPEA(0.50g,3.87mmol)和HATU(0.70g,1.84mmol)，室溫反應3h後，加入40mL飽和碳酸氫鈉水溶液，再加入50ml乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-10/1)得到(69C)(0.73g，兩步收率：66%)。
LCMS m/z=714.3[M+H]。
第四步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲醯胺(69D)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecam-3-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將69C(0.73g,1.02mmol)溶於乙醇/水(20mL，3：1)中，依次加入鐵粉(375mg，6.71mmol)，氯化銨(361mg，6.75mmol)，氮氣保護80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到69D(600mg，收率：86%)。
LCMS m/z=342.8[(M+2H)/2]+。
第五步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-
3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲醯胺(化合物69)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將69D(200mg,0.29mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(148mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物69(45mg,收率：14%)。
LCMS m/z=542.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.42-8.35(m,1H),8.30(d,2H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.87-7.82(m,2H),7.69(dd,1H),7.58-7.52(m,3H),7.47-7.33(m,4H),7.23-7.15(m,1H),6.85(s,1H),4.78-4.68(m,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.42-3.32(m,4H),3.06(d,2H),2.84-2.73(m,1H),2.64-2.52(m,3H),2.36(s,4H),2.24-2.13(m,3H),2.05-1.98(m,1H),1.83(s,3H),1.81(s,3H),1.71(d 2H),1.59-1.49(m,8H),1.32-1.22(m,3H)。
實施例70：化合物70的製備
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲醯胺(化合物70)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將69D(200mg,0.29mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(180mg,0.46mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物70(40mg，收率：13%)。
LCMS m/z=520.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.51-8.45(m,1H),8.32-8.27(m,2H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88-7.82(m,2H),7.71(dd,1H),7.60-7.53(m,3H),7.47-7.32(m,4H),7.21-7.10(m,1H),6.85(s,1H),4.78-4.68(m,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.38-3.33(m,4H),3.07
(d,2H),2.83-2.75(m,1H),2.66-2.53(m,3H),2.42-2.30(m,4H),2.27-2.14(m,3H),2.05-1.99(m,1H),1.85(s,3H),1.82(s,3H),1.72(d,2H),1.59-1.48(m,8H),1.32-1.18(m,3H)。
實施例71：化合物71的製備
第一步：1-碘萘-2-胺(71B)
1-iodonaphthalen-2-amine
將71A(2.00g,13.97mmol)溶於DMSO(30mL)中，室溫下加入NIS(3.14g,13.97mmol)，加畢於20℃反應2h，加入50mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=7/1)得到71B，(2.69g，收率：72%)。
LCMS m/z=270.0[M+H]+。
第二步：(2-氨基萘-1-基)二甲基氧化膦(71C)
(2-aminonaphthalen-1-yl)dimethylphosphine oxide
將71B(2.68g,9.96mmol)，二甲基氧化膦(0.78g,9.96mmol)溶於1,4-二氧六環(80mL)中，加入4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(1.15g,1.99mmol)，醋酸鈀(0.22g,1.00mmol)以及磷酸鉀(4.23g,19.92mmol)，氮氣置換3次，100℃反應5h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到71C，(1.68g，收率：77%)。
LCMS m/z=220.1[M+H]+。
第三步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)萘-1-基)二甲基氧化膦(71D)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)naphthalen-1-yl)dimethylphosphine oxide
將71C(0.87g,3.97mmol)，5-溴-2,4-二氯嘧啶(1.81g,7.94mmol)溶於NMP(25mL)中，滴加DIPEA(1.03g,7.94mmol)，130℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到71D(580mg，收率：36%)。
LCMS m/z=410.0[M+H]+。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((1-(二甲基磷醯基)萘-2-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物71)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((1-(dimethylphosphoryl)naphthalen-2-
yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將71D(0.17g,0.41mmol)與4D(0.30g,0.41mmol)溶於DMF(15mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.23g,1.23mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%三氟乙酸))得到產物，經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物71(30mg，收率：7%)。
LCMS m/z=549.4[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.46(s,1H),11.05(s,1H),8.33-8.24(m,1H),8.20(s,1H),8.10(s,1H),7.93(d,1H),7.89-7.77(m,2H),7.72-7.49(m,4H),7.49-7.33(m,2H),7.34-7.17(m,2H),6.78(s,1H),5.06(dd,1H),4.15-3.99(m,2H),3.79(s,3H),3.72(s,3H),3.16-3.02(m,2H),3.03-2.81(m,3H),2.69-2.51(m,8H),2.45-2.18(m,5H),2.14(d,2H),2.09-1.92(m,7H),1.92-1.73(m,5H),1.63-1.43(m,2H),1.22-1.06(m,2H)。
實施例72：化合物72的製備
第一步：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)萘-1-基)二甲基氧化膦(72A)
(2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)naphthalen-1-yl)dimethylphosphine oxide
將71C(0.87g,3.97mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(1.46g,7.94mmol)溶於NMP(25mL)中，滴加DIPEA(1.03g,7.94mmol)，130℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到72A，(720mg，收率：50%)。
LCMS m/z=366.0[M+H]+。
第二步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((1-(二甲基磷醯基)萘-2-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物72)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((1-(dimethylphosphoryl)naphthalen-2-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將72A(0.15g,0.41mmol)與4D(0.30g,0.41mmol)溶於DMF(15mL)，
加入對甲苯磺酸水合物(0.23g,1.23mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%三氟乙酸))得到產物，經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物72(40mg，收率：9%)。
LCMS m/z=527.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 12.69(s,1H),11.06(s,1H),8.49-8.40(m,1H),8.19-8.03(m,2H),7.97-7.79(m,3H),7.76-7.50(m,4H),7.49-7.32(m,2H),7.30(d,1H),7.27-7.18(m,1H),6.79(s,1H),5.06(dd,1H),4.11-3.97(m,2H),3.80(s,3H),3.72(s,3H),3.14-2.81(m,5H),2.70-2.51(m,8H),2.48-2.18(m,5H),2.14(d,2H),2.10-1.93(m,7H),1.90-1.69(m,5H),1.66-1.45(m,2H),1.21-1.08(m,2H)。
實施例73：化合物73的製備
第一步：2-碘-3,4-二甲基-1-硝基苯(73A)
2-iodo-3,4-dimethyl-1-nitrobenzene
向反應瓶中加入2,3-二甲基-6-硝基苯胺(2,3-dimethyl-6-
nitroaniline)(6.0g,36.14mmol)和鹽酸(30mL,360.14mmol)，0℃下緩慢滴加硝酸鉀(2.99g,43.33mmol)的水(15mL)溶液，在此溫度下攪拌1h後，向其中加入碘化鉀(9.0g,54.22mmol)的水(30mL)溶液，加畢，自然回溫繼續攪拌1h。反應結束後，向其中加入60mL水，乙酸乙酯(60mL x 3)萃取，有機層依次用飽和硫代硫酸鈉溶液(40mL x 2)和飽和食鹽水(40mL x 2)洗滌。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)=10/1)，得到73A(5.3g，收率：53%)。
第二步：(2,3-二甲基-6-硝基苯基)二甲基氧化膦(73B)
(2,3-dimethyl-6-nitrophenyl)dimethylphosphine oxide
氮氣保護下將73A(5.29g,19.09mmol)、二甲基氧化膦(1.94g,24.82mmol)、磷酸鉀(8.1g,38mmol)，醋酸鈀(429mg,1.91mmol)和4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(2.21g,3.82mmol)加入到1,4-二氧六環(150mL)中，100℃反應16h，反應結束後冷卻至室溫，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，水(50mL×2)和飽和食鹽水(20mL)洗滌有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，矽膠柱色譜純化(甲醇/二氯甲烷(V/V)=1/50-1/20)得73B(2.7g，收率：62.3%)。
LCMS m/z=228.1[M+H]+。
第三步：(6-氨基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(73C)
(6-amino-2,3-dimethylphenyl)dimethylphosphine oxide
將73B(2.7g,11.88mmol)溶於乙醇/水(30mL/10mL)中，依次加入鐵粉(5.31g，95mmol)，氯化銨(5.08mg，95mmol)，氮氣保護，80℃攪拌3h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：
二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到73C(1.3g，收率：98.2%)。
LCMS m/z=198.1[M+H]+。
第四步：(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(73D)
(6-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-2,3-dimethylphenyl)dimethylphosphine oxide
將(6-氨基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(73C)(2.5g,12.7mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(4.3g,19.0mmol)溶於DMF(20mL)中，加入碳酸鉀(3.5g,25.4mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入80mL乙酸乙酯和80mL水萃取，有機層用飽和食鹽水(30mL×3)洗滌。有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(甲醇/二氯甲烷(V/V)=1/50-1/20)，得到73D(3.5g，收率：71.2%)。
LCMS m/z=388.0[M+H]+。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(化合物73)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)-3,4-dimethylphenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將4D(250mg,0.35mmol)和73D(160mg,0.42mmol)，溶於1,4-
二氧六環和NMP(4mL/1mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(200mg,1.05mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和30mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物73(70mg，收率：18.6%)。
LCMS m/z=1075.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.91(s,1H),11.05(s,1H),8.11(s,1H),8.03-7.84(m,3H),7.75(s,1H),7.70-7.53(m,2H),7.30(s,1H),7.22(dd,1H),6.85-6.56(m,2H),5.06(dd,1H),4.13-3.94(m,2H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.15-3.03(m,2H),2.96(t,2H),2.91-2.80(m,1H),2.72-2.51(m,8H),2.46-2.31(m,4H),2.28-2.19(m,4H),2.18-2.10(m,2H),2.07(s,3H),2.04-1.95(m,1H),1.93-1.71(m,11H),1.65-1.42(m,2H),1.21-1.03(m,2H)。
實施例74：化合物74的製備
第一步：4-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苄基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(74B)
tert-butyl 4-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)amino)benzyl)piperazine-1-carboxylate
將74A(參照專利WO2017018803合成所得，3g,10.30mmol)和3-溴代哌啶-2,6-二酮(3.96g,20.6mmol)溶於DMSO(30mL)中，加入碳酸氫鈉(4.33g,51.5mmol)，100℃反應6h。冷卻至室溫，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(30mL x 3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物通過矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)=10/1-2/1)，得到74B(2.57g，收率：62%)。
LCMS m/z=403.1[M+H]+。
第二步：3-((3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74C)的鹽酸鹽
3-((3-(piperazin-1-ylmethyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione；HCl
50mL圓底燒瓶中依次加入74B(1.06g，2.63mmol)，氯化氫的1,4-二氧六環溶液(30mL,4mol/L)，室溫反應2h，減壓濃縮乾得74C的鹽酸鹽，直接用於下一步反應。
第三步：3-((3-((4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74D)
3-((3-((4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(0.6g,2.40mmol)，上一步得到的74C的鹽酸鹽和碳酸氫鈉(1.0lg,12mmol)，溶於20mL DMSO中，100℃反應3h，反應結束後冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯，萃取，水層用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相，並依次用水(30mL×2)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到74D(1.0g，收率：71%)。
第四步：3-((3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74E)
3-((3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
氮氣保護，50mL單口瓶瓶中加入74D(202mg，0.38mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(95.7mg，0.76mmol)，溶於20mL二氧六環和4mL水中，加入Pd(dppt)Cl2．DCM(31mg，0.04mmol)和碳酸氫鈉(96mg，1.14mmol)，氮氣置換三次，100℃反應3h，降溫至室溫，將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化，得74E(190mg，收率94%)。
LCMS m/z=534.2[M+H]+。
第五步：3-((3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74F)
3-((3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將74E(190mg，0.36mmol)溶於甲醇(10mL)中，室溫下加入鈀碳10%(190mg)，氫氣下反應2h，反應結束後矽藻土抽濾，濾液濃縮得74F直接用於下一步反應。
LCMS m/z=504.3[M+H]+。
第六步：3-((3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物74)
3-((3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將上一步得到的74F(101mg,0.2mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(105mg,0.24mmol，溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入50mL DCM後加入飽和碳酸氫鈉溶液調節溶液至鹼性，分離二氯甲烷層，水層用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合併二氯甲烷層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得化合物74(15mg，收率8.3%)。
LCMS m/z=452.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),10.76(s,1H),8.46-8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.76-7.64(m,1H),7.58(s,1H),7.56-7.46(m,2H),7.44-7.25(m,3H),7.15(s,1H),7.06(t,1H),6.86(s,1H),6.68(s,1H),6.64-6.53(m,2H),5.80(d,1H),4.38-4.28(m,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.43(s,2H),2.97-2.82(m,4H),2.81-2.69(m,1H),2.67-2.52(m,5H),2.18-2.07(m,1H),1.94-1.75(m,7H)。
實施例75：化合物75的製備
第一步：8-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-1,4-二氧雜-8-氮雜螺環[4.5]癸烷(75A)
8-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-1,4-dioxa-8-azaspiro[4.5]decane
將1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷(1.37g,9.56mmol)，1D(1.2g,4.78mmol)和碳酸鉀(3.30g,23.90mmol)混合溶於DMSO(30mL)中，120℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1)得到75A(1g，收率：56%)。
LCMS m/z=375.1[M+H]+。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-酮(75B)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-
4-one
50mL圓底燒瓶中依次加入75A(1g，2.67mmol)，丙酮(30mL)鹽酸水溶液(3mL,4mol/L)，室溫反應過夜，加入50mL DCM，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH為鹼性，分離有機層，DCM萃取水層(2×30mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得75B，直接用於下一步反應。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.92(s,1H),7.90(s,1H),7.27(s,1H),6.65(s,1H),3.98(s,3H),3.97(s,3H),3.31(t,4H),2.53(t,4H)。
第三步：(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲醇(75C)
(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methanol
將75B(787mg,2.38mmol)，哌啶-4-基甲醇(329mg,2.86mmol)混合於二氯乙烷(50mL)中，加入醋酸(143mg,2.38mmol)，50℃反應2h冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1g,4.72mmol)，室溫下攪拌過夜。加入50mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到75C(430mg，收率：42%)。
LCMS m/z=430.2[M+H]+。
第四步：1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯吡啶]-4-醛(75D)
1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidine]-4-carbaldehyde
將75C(430mg，1.00mmol)和戴斯-馬丁氧化劑(1.27g，3mmol)溶於20mL二氯甲烷中，室溫反應2h，濃縮，矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得75D(150mg，收率35%)。
LCMS m/z=428.3[M+H]+。
第五步：3-(4-(1-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(75F)
3-(4-(1-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)piperidine-2,6-dione
將75E(參照專利WO2021127283合成所得，156mg,0.46mmol)和75D(150mg,0.35mmol)溶於DMAC(10mL)中，依次加入4Å分子篩(200mg)和醋酸(21mg,0.35mmol)，50℃反應2h後冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(148mg,0.70mmol)，室溫下攪拌過夜。反應結束後，加入50ml水淬滅反應，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節到鹼性，用乙酸乙酯萃取(3×50ml)，無水硫酸鈉乾燥，過濾、濃縮、矽膠柱色譜純化(DCM：MeOH：Et3N=10：1：0.01)得到75F(100mg，收率：38%)。
第六步：3-(4-(1-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯
基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(75G)
3-(4-(1-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)piperidine-2,6-dione
將75F(100mg，0.13mmol)溶於甲醇(10mL)中，室溫下加入鈀碳10%(100mg)，氫氣下反應2h，反應結束後矽藻土抽濾，濾液濃縮得75G直接用於下一步反應。
第七步：3-(4-(1-((1'-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-聯哌啶]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(化合物75)
3-(4-(1-((1'-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazo1-1-yl)piperidine-2,6-dione
將75G(85mg,0.12mmol)和23D(63mg,0.14mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(68mg,0.36mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃
縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成；流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入30mL DCM後加入飽和碳酸氫鈉溶液調節溶液至鹼性，分離二氯甲烷層，水層用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合併二氯甲烷層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得化合物75(5mg，收率3.7%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.10(s,1H),8.45-8.33(s,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.70(d,1H),7.62-7.50(m,3H),7.50-7.41(m,3H),7.40-7.33(m,1H),7.20(s,1H),7.08(s,1H),6.95-6.87(m,2H),6.83(s,1H)。δ 4.85(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.46(s,3H),3.10(d,2H),2.99-2.86(m,4H),2.68-2.34(m,5H),2.30-2.05(m,6H),2.05-1.91(m,2H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.79-1.65(m,8H),1.65-1.42(m,4H),1.18-1.03(m,2H)。
實施例76：化合物76的製備
第一步：5-(3-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物76)
5-(3-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將6F(200mg,0.28mmol)和23D(150mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物76(40mg，收率：13%)。
LCMS m/z=555.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.04(s,1H),8.43-8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.70(dd,1H),7.64(d,1H),7.59-7.51(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.23-7.14(m,1H),6.90(d,1H),6.82(dd,2H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.59-3.37(m,4H),3.19-3.03(m,3H),2.94-2.83(m,1H),2.65-2.51(m,10H),2.47-2.32(m,5H),2.25-2.09(m,2H),2.05-1.99(m,1H),1.85-1.73(m,8H),1.60-1.49(m,2H)。
實施例77：化合物77的製備
第一步：4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(77A)
terr-butyl 4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-
nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-earboxylate
將1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(80B)的鹽酸鹽(1.0g)和1-第三丁氧羰基哌啶-4-甲醛(0.8g,3.75mmol)溶於DMAc(50mL)中，加入醋酸(1.0g,16.65mmol)，室溫攪拌2h。然後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.0g,4.72mmol)，室溫反應過夜。反應結束後，加入100mL乙酸乙酯和200mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到化合物(77A)，黃色固體(1.2g，收率：74%)。
LCMS m/z=515.3[M+H]+。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪(77B)的鹽酸鹽
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine；HCl
將77A(1.2g,2.33mmol)溶於甲醇(14mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(30mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(77C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的77B的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(683mg,2.47mmol)和碳酸氫鈉(692mg,8.24mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入30mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到77C(0.90g，兩步收率：58%)。
LCMS m/z=671.3[M+H]+。
第四步：5-(4-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(77D)
5-(4-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77C(0.90g,1.34mmol)溶於乙醇/水(20mL，3：1)中，依次加入鐵粉(375mg，6.71mmol)，氯化銨(361mg，6.75mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到77D(650mg，收率：76%)。
LCMS m/z=641.3[M+H]+。
第五步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物77)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-
yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(200mg,0.31mmol)和23D(150mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物77(50mg，收率：15%)。
LCMS m/z=520.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.28(s,1H),8.25-8.03(m,6H),7.83(s,1H),7.75(d,1H),7.63-7.45(m,5H),7.43-7.27(m,1H),6.98(s,1H),5.23(dd,1H),4.00-3.90(m,5H),3.90-3.71(m,5H),3.71-3.59(m,2H),3.44-3.07(m,8H),2.97-2.89(m,2H),2.87-2.71(m,1H),2.66-2.48(m,1H),2.48-2.32(m,2H),2.32-2.21(m,1H),2.21-2.07(m,2H),2.02(d,6H)。
實施例78：化合物78的製備
第一步：5-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯(78A)
tert-butyl 5-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
將4-甲醯基哌啶-1-羧酸苄酯(2.5g,10.11mmol)，六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯(3.58g,16.88mmol)溶於二氯甲烷(100mL)中，加入醋酸(610mg,10.11mmol)，室溫攪拌1h，繼續加入三乙醯氧基硼氫化鈉(4.29g,20.22mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合併有機相，用水(100mL×2)洗滌後經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到78A(3.7g，收率：82.5%)。
LCMS m/z=444.3[M+H]+。
第二步：5-(哌啶-4-基甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯(78B)
tert-butyl 5-(piperidin-4-ylmethyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
依次加入78A(3.7g,8.34mmol)、鈀碳(1.5g，10wt%)溶於60mL甲醇中，然後氫氣置換三次後在室溫反應3h，矽藻土抽濾，濾液減壓濃縮，得到78B(2.5g，收率：96.8%)。
第三步：5-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯(78C)
tert-butyl 5-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
將78B(2.46g,7.96mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(2.0g,7.96mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入無水碳酸鉀(3.3g,23.88mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)三次。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到78C(0.8g，收率：18%)。
LCMS m/z=541.3[M+H]+。
第四步：2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)八氫吡咯並[3,4-c]吡咯(78D)的鹽酸鹽
2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole；HCl
將78C(800mg,1.48mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(4mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
LCMS m/z=441.3[M+H]+。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(5-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)異吲哚-1,3-二酮(78E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(5-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的78D的鹽酸鹽的粗產物溶於DMSO(6mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(410mg,1.48mmol)和DIPEA(1.15g,8.88mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到78E(318mg，收率：30.8%)。
LCMS m/z=697.3[M+H]+。
第六步：5-(5-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(78F)
5-(5-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物78E(318mg,0.46mmol)溶於乙醇/水(9mL/3mL)中，依次加入鐵粉(210mg，3.68mmol)，氯化銨(200mg，3.68mmol)，氮氣保護，80℃攪拌3h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析
純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-20/1)得到78F(240mg，收率：78%)。
第七步：5-(5-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(化合物78)
5-(5-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物78F(120mg,0.18mmol)和23D(86mg,0.20mmol)溶於1,4-二氧六環(2mL)和NMP(0.5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(93mg,0.54mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物78(20mg，收率：10.4%)。
LCMS m/z=533.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.24-10.92(m,2H),8.50-8.32(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),7.98(s,1H),7.83(s,1H),7.77-7.60(m,2H),7.59-7.45(m,3H),7.39(t,2H),7.25(t,1H),7.22-7.06(m,1H),6.97(d,1H),6.88(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.86-3.65(m,8H),3.30-3.19(m,2H),3.12-2.93(m,4H),2.93-2.82(m,1H),2.71-2.51(m,8H),2.34(d,2H),2.05-1.96(m,1H),1.82(d,6H),1.76-1.63(m,2H),1.60-1.44(m,1H),1.36-1.24(m,2H)。
實施例79：化合物79的製備
第一步：9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(79A)
tert-butyl 9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(1.27g,4.98mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.5g,5.98mmol)和碳酸鉀(2.75g,19.92mmol)混合溶於DMSO(10mL)中，120℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(79A)(2.0g，收率：83%)。
LCMS m/z=486.3[M+H]+。
第二步：3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(79B)
3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecame
將化合物79A(2.0g,4.12mmol)溶於DCM(20mL)，室溫下加入三氟乙酸(6mL)，攪拌3h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到化合物3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(79B)(1.5g)，直接用於下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)異吲哚-1,3-二酮(79C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物79B(1.5g,3.89mmol)溶於DMSO(5mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(1.29g,4.67mmol)和DIPEA(1.01g,7.78mmol)，90℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)異吲哚-1,3-二酮(79C)(1.4g，收率：56.1%)。
LCMS m/z=642.3[M+H]+。
第四步：5-(9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(79D)
5-(9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物79C(1.4g,2.18mmol)、鐵粉(0.97mg,17.44mmol)、氯化銨(0.93mg,17.44mmol)溶於乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃攪拌2h，之後冷卻至室溫，抽濾，濾液濃縮後得到標題化合物5-(9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(79D)(1.0g)，直接用於下一步。
LCMS m/z=612.3[M+H]+。
第五步：5-(9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物79)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將79D(180mg,0.29mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(150mg,0.35mmol)溶於1,4-二氧六環(3mL)和NMP(1mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(165mg,0.87mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相
組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物79(22mg，收率：7.5%)。
LCMS m/z=506.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.13(s,1H),11.06(s,1H),8.45-8.36(m,1H),8.32(s,1H),8.18(s,1H),8.04(s,1H),7.88(s,1H),7.75-7.64(m,2H),7.59-7.50(m,3H),7.50-7.41(m,2H),7.41-7.29(m,2H),7.30-7.16(m,2H),6.92(s,1H),5.07(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.54-3.39(m,4H),2.96-2.78(m,5H),2.69-2.52(m,2H),2.06-1.96(m,1H),1.83(d,6H),1.71-1.51(m,8H)。
實施例80：化合物80的製備
第一步：4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(80A)
tert-butyl 4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
將1D(0.8g,3.18mmol)溶於DMSO(20mL)中，依次加入碳酸鉀(1.3g,9.41mmol)、哌嗪-1-羧酸第三丁酯(712mg,3.82mmol)，100℃反應6h。反
應完後，用50mL乙酸乙酯和200mL水萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到80A(650mg，收率：49%)。
LCMS m/z=418.2[M+H]+。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(80B)的鹽酸鹽
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazine；HCl
將80A(400mg,0.96mmol)溶於甲醇(2mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(6mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(80C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的80B的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(8mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(318mg,1.15mmol)和碳酸氫鈉(323mg,3.84mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到80C(284mg，兩步收率：52%)。
LCMS m/z=574.2[M+H]+。
第四步：5-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪
-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(80D)
5-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將80C(284mg,0.50mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(140mg，2.5mmol)，氯化銨(134mg，2.5mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到80D(260mg，收率：96%)。
LCMS m/z=544.2[M+H]+。
第五步：5-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物80)
5-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將80D(130mg,0.24mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(135mg,0.31mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(137mg,0.72mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，
流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物80(77mg，收率：34%)。
LCMS m/z=943.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.10(s,1H),11.07(s,1H),8.38(s,1H),8.29(s,1H),8.20(s,1H),8.15(s,1H),7.88(s,1H),7.77-7.63(m,3H),7.55(d,2H),7.48-7.40(m,2H),7.41-7.25(m,3H),7.18(s,1H),6.87(s,1H),5.09(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.67-3.54(m,4H),3.05-2.92(m,4H),2.92-2.83(m,1H),2.68-2.54(m,2H),2.06-1.94(m,1H),1.83(d,6H)。
實施例81：化合物81的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(81A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將7E(1.0g,2.50mmol)溶於DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(828mg,3.00mmol)和碳酸氫鈉(692mg,8.24mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入30mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到81A(0.90g，收率：55%)。
LCMS m/z=657.3[M+H]+。
第二步：5-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(81B)
5-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將81A(0.90g,1.37mmol)溶於乙醇/水(20mL，3：1)中，依次加入鐵粉(375mg，6.71mmol)，氯化銨(361mg，6.75mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到81B(700mg，收率：82%)。
LCMS m/z=627.3[M+H]+。
第三步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物81)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將81B(200mg,0.32mmol)和23D(150mg,0.34mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物81(55mg，收率：17%)。
LCMS m/z=513.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.06(s,1H),8.44-8.33(m,1H),8.29(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.75-7.65(m,2H),7.61-7.52(m,3H),7.46(t,2H),7.40-7.33(m,2H),7.32-7.24(m,1H),7.23-7.12(m,1H),6.84(s,1H),5.08(dd,1H),3.79(s,3H),3.77(s,3H),3.52-3.39(m,4H),3.18-3.05(m,2H),2.95-2.80(m,1H),2.75-2.52(m,8H),2.36-2.23(m,1H),2.08-1.99(m,1H),1.88-1.75(m,8H),1.65-1.51(m,2H)。
實施例82：化合物82的製備
第一步：9-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(82B)
tert-butyl 9-(4-((benzyloxy)carbonyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將9-氧代-3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(82A)(1.50g,5.61mmol)和哌嗪-1-羧酸苄酯(1.23g,5.58mmol)溶於DMAc(50mL)中，加入醋酸(1.0g,16.65mmol)，室溫攪拌2h。然後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(2.0g,9.44mmol)，室溫反應過夜。反應結束後，加入100mL乙酸乙酯和200mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=100/1-3/1)得到82B，白色固體(1.6g，收率：61%)。
LCMS m/z=472.3[M+H]+。
第二步：4-(3-氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(82C)的鹽酸鹽
benzyl 4-(3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazine-1-carboxylate；HCl
將82B(1.6g,3.39mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(40mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：4-(3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(82D)
benzyl 4-(3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazine-1-carboxylate
將上一步的82C的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(20mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(851mg,3.39mmol)和碳酸鉀(690mg,5.00mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入30mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到82D(1.0g兩步收率：49%)。
LCMS m/z=603.3[M+H]+。
第四步：2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(9-(哌嗪-1-基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)苯胺(82E)
2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-(9-(piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)aniline
將82D(1.0g,1.66mmol)溶於甲醇(40mL)中，氮氣保護，加入鈀碳(wt%=10%,500mg)，1atm氫氣置換3次，室溫反應1.5h。反應結束後，矽藻土過濾，二氯甲烷/甲醇(V/V=10/1)洗滌濾餅，濾液減壓濃縮得到82E(650mg，收率：89%)。
LCMS m/z=439.3[M+H]+。
第五步：5-(4-(3-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-
3-氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(82F)
5-(4-(3-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將82E(650mg,1.48mmol)溶於DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(552mg,2.00mmol)和碳酸氫鈉(692mg,8.24mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入30mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到82F(400mg，收率：39%)。
LCMS m/z=695.3[M+H]+。
第六步：5-(4-(3-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)吡啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物82)
5-(4-(3-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將82F(200mg,0.29mmol)和23D(148mg,0.34mmol)溶於
DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物82(30mg，收率：9%)。
LCMS m/z=547.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.13(s,1H),11.06(s,1H),8.44-8.35(m,1H),8.30(s,1H),8.18(s,1H),8.02(s,1H),7.87(s,1H),7.75-7.63(m,2H),7.62-7.50(m,3H),7.44(t,2H),7.39-7.30(m,2H),7.25(dd,1H),7.22-7.12(m,1H),6.89(s,1H),5.07(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.50-3.35(m,4H),2.96-2.72(m,5H),2.69-2.51(m,6H),2.34-2.22(m,1H),2.09-1.99(m,1H),1.93-1.71(m,8H),1.68-1.51(m,4H),1.49-1.31(m,4H),1.19-1.03(m,2H)。
實施例83：化合物83的製備
第一步：2-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(83A)
tert-butyl 2-(4-((benzyloxy)carbonyl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-氧代-7-氮雜螺環[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(8.1g,33.84mmol)，哌嗪-1-羧酸苄酯(5g,22.70mmol)溶於1,2-二氯乙烷(100mL)中，加入十滴醋酸後室溫攪拌1h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(9.6g,45.30mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=100/1-1/1)得到83A(9.3g，收率：92%)。
LCMS m/z=444.3[M+H]+。
第二步：4-(7-氮雜螺環[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(83B)的鹽酸鹽；
benzyl 4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazine-1-carboxylate；HCl
將化合物83A(3g,6.76mmol)溶於甲醇(5mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(30mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第三步：4-(7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(83C)
benzyl 4-(7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazine-1-carboxylate
將上一步得到的83B的鹽酸鹽和1D(1.49g,5.93mmol)溶於DMSO(20mL)中，加入碳酸氫鈉(1.53g,18.2mmol)，100℃反應6h。冷卻至室溫，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL x 3)三次。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到83C(2g，收率：59%)。
LCMS m/z=575.3[M+H]+。
第四步：2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(2-(哌嗪-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)苯胺(83D)
2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-(2-(piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)aniline
依次加入83C(1g,1.74mmol)、鈀碳(1g，10wt%)溶於60mL甲醇中，然後氫氣置換三次後在室溫反應2h，矽藻土抽濾，濾液減壓濃縮得到83D(600mg，收率：84%)
LCMS m/z=411.3[M+H]+。
第五步：5-(4-(7-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(83E)
5-(4-(7-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的83D(600mg,1.46mmol)溶於DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(604mg,2.19mmol)和DIPEA(942mg,7.29mmol)，100℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到83E(540mg，收率：55.5%)。
LCMS m/z=667.3[M+H]+。
第六步：5-(4-(7-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物83)
5-(4-(7-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將83E(270mg,0.40mmol)和23D(265mg,0.61mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(230mg,1.21mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備液濃縮，加入50mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節至鹼性，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物83(20mg，收率：5%)。
LCMS m/z=533.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.13(s,1H),11.06(s,1H),8.48-8.35(m,1H),8.31(s,1H),8.18(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.76-7.63(m,2H),7.61-7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.40-7.31(m,2H),7.27(dd,1H),7.22-7.09(m,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.59-3.40(m,4H),2.94-2.83(m,1H),2.82-2.67(m,5H),2.66-2.53(m,2H),2.47-2.25(m,4H),2.10-1.95(m,3H),1.83(d,6H),1.75-1.51(m,6H)。
實施例84：化合物84的製備
第一步：9-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(84A)
tert-butyl 9-(1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(2.75g,11.79mmol)，3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(3.0g,11.79mmol)溶於二氯甲烷(100mL)中，加入醋酸(710mg,11.79mmol)，室溫攪拌1h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(5.0g,23.58mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合併有機相，用水(100mL×2)洗滌後經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到84A(2.5g，收率：45.0%)。
LCMS m/z=472.3[M+H]+。
第二步：9-(哌啶-4-基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(84B)
tert-butyl 9-(piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carhoxylate
將84A(2.5g,5.30mmol)、鈀碳(1.5g，10wt%)溶於60mL甲醇中，然後氫氣置換三次後在室溫反應3h，矽藻土抽濾，濾液減壓濃縮，殘留物通過矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=25/1-10/1)得到84B(1.5g，收率：83.9%)。
第三步：9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(84C)
tert-butyl 9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將84B(1.5g,4.44mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.1g,4.44mmol)溶於DMSO(10mL)中，加入無水碳酸鉀(1.84g,13.32mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(20mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到84C(1.0g，收率：39.6%)。
LCMS m/z=569.3[M+H]+。
第四步：3-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷(84D)的鹽酸鹽
3-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane；HCl
將84C(1.0g,1.76mmol)溶於甲醇(3mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(15mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
LCMS m/z=469.2[M+H]+。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)異吲哚-1,3-二酮(84E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的84D的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(490mg,1.76mmol)和DIPEA(1.14g,8.80mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到84E(600mg，收率：47.0%)。
LCMS m/z=725.4[M+H]+。
第六步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(84F)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-
yl)isoindoline-1,3-dione
將84E(600mg,0.83mmol)溶於乙醇/水(9mL/3mL)中，依次加入鐵粉(370mg，6.64mmol)，氯化銨(360mg，6.64mmol)，氮氣保護，80℃攪拌3h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到84F(520mg，收率：90%)。
第七步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(化合物84)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將84F(220mg,0.32mmol)和23D(150mg,0.35mmol)溶於DMF(3mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(182mg,0.96mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物84(100mg，收率：28.5%)。
LCMS m/z=547.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.48-8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.76-7.62(m,2H),7.61-7.49(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.30(s,1H),7.25-7.08(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.55-3.39(m,4H),3.18-3.01(m,2H),2.97-2.77(m,1H),2.70-2.50(m,8H),2.31-2.16(m,1H),2.06-1.95(m,1H),1.91-1.71(m,8H),1.65-1.41(m,10H)。
實施例85：化合物85的製備
第一步：9-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-3-氮雜螺環[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(85C)
tert-butyl 9-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecane-3-earboxylate
將1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(80B)鹽酸鹽(1.05g粗產物)加入到30mL THF中，加入碳酸氫鈉(806mg，9.60mmol)，
室溫攪拌20min，加入3-Boc-9-氧代-3-氮雜螺[5.5]十一烷(1.28g,4.80mmo1)以及0.3mL醋酸，之後室溫攪拌2h；加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.02g,4.80mmol)，室溫反應16h。加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至鹼性，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=50/1-20/1)得到85C(1.1gg，收率：82%)。
LCMS m/z=569.3[M+1]+。
第二步：9-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷(85D)的三氟乙酸鹽
9-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecane；2,2,2-trifluoroacetate
將85C(1.0g,1.76mmol)溶解在25mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室溫攪拌2h。將反應液減壓濃縮，得到85D的三氟乙酸鹽(1.2g粗產物)。
LC-MS m/z=469.3[M+1]+。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-3-氮雜羅[5.5]十一烷-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(85E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將85D的三氟乙酸鹽(1.2g粗產物)溶於20mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉(740mg,8.81mmol)，室溫攪拌10min，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(585mg，2.12mmol)，反應於80℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，加入200mL水，過濾，收集固體，水洗，固體用DCM溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘餘物通過用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=15/1)得到85E(1.1g，收率：88%)。
LCMS m/z=725.3[M+1]+。
第四步：5-(9-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(85F)
5-(9-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將85E(1.1g,1.52mmol)溶於THF(10mL)、乙醇(30mL)和水(6mL)的混合液中，加入還原鐵粉(827mg,14.77mmol)以及氯化銨(790mg,14.77mmol)，85℃反應2h，反應液冷卻至室溫，真空濃縮除去溶劑，向殘餘物中加入50mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到85F(0.71g，收率：66%)。
LCMS m/z=695.3[M+H]+。
第五步：5-(9-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物85)
5-(9-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將85F(320mg,0.46mmol)和23D(241mg,0.55mmol，溶於DMF(20mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(263mg,1.38mmol)，100℃攪拌8h。冷卻至室溫，加入100mL飽和碳酸氫鈉水溶液有黃色固體析出，抽濾收集固體，濾餅用水沖洗(100ml×3)，二氯甲烷複溶，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)=15：1)純化，得化合物85(180mg，收率：33%)。
LCMS m/z=1094.3[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.51-8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.88(s,1H),7.75-7.62(m,2H),7.62-7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.33-7.10(m,3H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.57-3.40(m,4H),2.94-2.77(m,5H),2.70-2.52(m,6H),2.30-2.20(m,1H),2.08-1.98(m,1H),1.89-1.73(m,8H),1.72-1.64(m,2H),1.63-1.52(m,2H),1.50-1.32(m,4H),1.21-1.06(m,2H)。
實施例86：化合物86的製備
第一步：4-氟-4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(86B)
tert-butyl 4-fluoro-4-formylpiperidine-1-carboxylate
0℃下，將戴斯-馬丁氧化劑(8.48g，20mmol)分批加入至86A(2.33g,10mmol)的二氯甲烷溶液中，室溫攪拌2h，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：PE/EA(V/V)=10/1-1/1)得到86B(2.1g，收率：90.9%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.66(d,1H),4.11-3.85(m,2H),3.17-2.84(m,2H),1.86-1.59(m,4H),1.47-1.35(m,9H)。
第二步：第三丁基4-氟-4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(86C)
tert-butyl 4-fluoro-4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將7E(400mg,1.0mmol)和86B(462mg,2.0mmol)溶於1,2-二氯乙烷(10mL)中，依次加入4Å分子篩(200mg)和醋酸(0.12g,2mmol)。室溫攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.38g,1.79mol)，室溫過夜反應。反應結束後，直接將反應體系減壓濃縮後用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到86C(492mg，收率：80%)。
LCMS m/z=616.3[M+H]+。
第三步：1-((4-氟哌啶-4-基)甲基)-4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪(86D)
1-((4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)-4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine
將86C(492mg,0.8mmol)溶於DCM(15mL)，室溫下加入三氟乙酸(5mL)，攪拌1h，減壓濃縮，殘留物加入30mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到86D(412mg)，直接用於下一步。
LCMS m/z=516.3[M+H]+。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-氟-4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基))-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(86E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-fluoro-4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將86D(412mg,0.8mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(276mg,1mmol)溶於DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.27g,2.07mmol)，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到86E(370mg，收率：60%)。
LCMS m/z=772.3[M+H]+。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(86F)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)-4-tluoropiperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將86E(0.37g,0.48mmol)溶於乙醇(15mL)，加入還原鐵粉(0.07g,1.30mmol)，再滴加氯化銨(0.07g,1.30mmol)的水溶液(5mL)，氮氣保護，80℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到86F(170mg，產率：47.9%)
LCMS m/z=371.7[(M+2H)/2]+。
第六步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪
-1-基)甲基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物86)的三氟乙酸鹽
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)-4-fluoropiperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-tritluoroacetic acid
將86F(0.13g,0.18mmol)與23D(0.08g,0.18mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(0.09g,0.47mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入5mL水和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。將製備所得凍乾得到化合物86的三氟乙酸鹽(10mg)。
LCMS m/z=571.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.29-8.16(m,2H),7.83-7.72(m,3H),7.71-7.59(m,2H),7.55-7.42(m,4H),7.42-7.29(m,3H),7.26(dd,1H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.95-3.79(m,5H),3.68(s,3H),3.62-3.32(m,5H),3.28-3.03(m,6H),2.96-2.45(m,9H),2.17-2.03(m,5H),2.01-1.70(m,10H)。
實施例87：化合物87的製備
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物87)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將5B(150mg,0.20mmol)與23D(96mg,0.22mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-10/1)得到粗產物，進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備液濃縮，加入30mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節至鹼性，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物87(25mg，收率：11%)。
LCMS m/z=571.2[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.08(s,1H),8.47-8.32(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.78-7.63(m,2H),7.62-7.40(m,6H),7.36(t,1H),7.29-7.05(m,1H),6.83(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.68-3.51(m,2H),3.15-3.01(m,2H),2.98-2.80(m,3H),2.71-2.51(m,8H),2.46-2.29(m,4H),2.27-2.11(m,3H),2.10-1.96(m,1H),1.91-1.68(m,11H),1.63-1.45(m,2H),1.35-1.22(m,2H)。
實施例88：化合物88的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-yl)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(88A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
將60D(0.4g,0.85mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(0.26g,0.94mmol)溶於DMSO(5ml)中，加入DIPEA(0.22g,1.7mmol)，90℃攪拌5h，冷卻至室溫，加入10mL水，析出固體，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化得到88A(0.5g，收率：79%)。
第二步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(88B)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將88A(500mg,0.67mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(370mg，6.7mmol)，氯化銨(360mg，6.7mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液加入20mL二氯甲烷和20mL飽和氯化鈉水溶液萃取，有機層乾燥後減壓濃縮，得到88B(260mg)，直接用於下一步。
第三步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物88)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-tluoroisoindoline-1,3-dione
將88B(140mg,0.20mmol)和23D(87mg,0.20mmol)溶於DMF(5mL)溶液中，加入對甲苯磺酸一水合物(110mg,0.60mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters
2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物88的三氟乙酸鹽，向化合物88的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和10mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物88(40mg，收率：18%)。
LCMS m/z=556.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.09(s,1H),8.50-8.32(m,1H),8.26(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.75-7.64(m,2H),7.64-7.51(m,3H),7.51-7.41(m,3H),7.34(t,1H),7.23-7.07(m,1H),6.82(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.22-3.02(m,6H),2.95-2.82(m,1H),2.68-2.50(m,9H),2.07-1.95(m,1H),1.91-1.39(m,18H)。
實施例89：化合物89的製備
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物89)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將10G(0.20g,0.28mmol)與40A(0.11g,0.28mmol)溶於1,4-二氧六環(10mL)與NMP(2mL)混合溶劑，加入對甲苯磺酸水合物(0.16g,0.84mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶
液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%三氟乙酸))得到產物，經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物89，(30mg，收率：10%)。
LCMS m/z=532.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.04(s,1H),8.55-8.40(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.86(s,1H),7.70(dd,1H),7.62(d,1H),7.59-7.47(m,3H),7.42(t,2H),7.36-7.26(m,2H),7.24(dd,1H),7.20-7.05(m,1H),6.85(s,1H),5.05(dd,1H),3.78(s,3H),3.75(s,3H),3.55-3.34(m,4H),3.11-3.00(m,2H),2.95-2.79(m,1H),2.71-2.51(m,4H),2.44-2.16(m,6H),2.04-1.95(m,1H),1.83(d,6H),1.74-1.35(m,11H),1.32-1.25(m,2H)。
實施例90：化合物90的製備
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物90)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(200mg,0.31mmol)和40A(180mg,0.46mmol)溶於DMF
(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物90(50mg，收率：16%)。
LCMS m/z=498.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.32-8.03(m,7H),7.86(s,1H),7.72(d,1H),7.60-7.45(m,5H),7.40-7.23(m,1H),6.98(s,1H),5.21(dd,1H),3.98-3.89(m,5H),3.89-3.72(m,5H),3.72-3.64(m,2H),3.42-3.10(m,8H),2.97-2.89(m,2H),2.85-2.70(m,1H),2.65-2.47(m,1H),2.45-2.32(m,2H),2.32-2.21(m,1H),2.21-2.07(m,2H),2.02(d,6H)。
實施例91：化合物91的製備
第一步：5-(2-(4-(1-(4-(5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)-氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚-1,3-二酮(化合物91)
5-(2-(4-(1-(4-(5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將7G(285mg,0.38mmol)和40A(179mg,0.46mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(217mg,1.14mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。將製備所得凍乾，將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物91(65mg，收率：15%)。
LCMS m/z=1105.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.63-8.39(m,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.86(s,1H),7.71(dd,1H),7.64(d,1H),7.60(s,1H),7.58-7.50(m,2H),7.45(t,2H),7.41-7.34(m,1H),7.33-7.26(m,1H),7.27-7.08(m,2H),6.84(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.52-3.35(m,4H),3.18-3.03(m,2H),2.97-2.79(m,1H),2.76-2.50(m,8H),2.44-2.11(m,6H),2.10-1.91(m,3H),1.91-1.71(m,8H),1.69-1.48(m,8H)。
實施例92：化合物92的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物92)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將81B(200mg,0.32mmol)和40A(180mg,0.46mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物92(40mg，收率：13%)。
LCMS m/z=491.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.55-8.41(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.76-7.65(m,2H),7.65-7.51(m,3H),7.46(t,2H),7.41-7.33(m,2H),7.31-7.11(m,2H),6.85(s,1H),5.08(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.53-3.39(m,4H),3.19-3.05(m,2H),2.97-2.83(m,1H),2.74-2.51(m,8H),2.36-2.22(m,1H),2.08-1.92(m,1H),1.89-1.74(m,8H),1.67-1.53(m,2H)。
實施例93：化合物93的製備
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物93)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將5B(150mg,0.20mmol)與40A(94mg,0.24mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-10/1)得到粗產物，進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備液濃縮，加入30mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節至鹼性，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物93(20mg，收率：9%)。
LCMS m/z=549.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.36(s,1H),11.08(s,1H),8.60-8.38(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.86(s,1H),7.77-7.65(m,2H),7.64-7.51(m,3H),7.51-7.41(m,3H),7.40-7.32(m,1H),7.23-7.06(m,1H),
6.84(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.67-3.51(m,2H),3.15-3.03(m,2H),2.96-2.78(m,3H),2.70-2.51(m,8H),2.47-2.29(m,4H),2.26-2.12(m,3H),2.08-1.98(m,1H),1.91-1.66(m,11H),1.62-1.45(m,2H),1.34-1.18(m,2H)。
實施例94：化合物94的製備
第一步：7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-羧酸第三丁酯(94A)
tert-butyl 7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
將1D(2g,7.96mmol)和2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-羧酸第三丁酯(2.67g,11.80mmol)溶於DMSO(30mL)中，加入碳酸鉀(3.26g,23.59mmol)，120℃反應6h。冷卻至室溫，加入50mL乙酸乙酯和50mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(30mL×3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層
析純化(二氯甲烷：甲醇(V/V)=100/1-20/1)，得到94A(2.47g，收率：68%)。
LCMS m/z=458.3[M+H]+。
第二步：7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷(94B)
7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
將94A(2.47g,5.40mmol)溶於甲醇(5mL)中，加入4N氯化氫的二氧六環溶液(20mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氧六環和2mL氨水，減壓濃縮後得到94B粗產物，直接用於下一步。
第三步：4-((7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(94C)
tert-butyl 4-((7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將上一步得到的94B粗產物和4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(2.30g,10.78mmol)溶於DMAC(30mL)中，加入醋酸(323mg,5.37mmol)。室溫攪拌30min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(3.43g,16.18mmol)，室溫過夜反應。加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅反應，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(3×30mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)得到94C(2.3g，收率：77%)。
LCMS m/z=555.4[M+H]+。
第四步：7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2-(哌啶-4-基甲基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷(94D)的鹽酸鹽
7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2-(piperidin-4-ylmethyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane；HCl
將94C(2.3g,4.15mmol)溶於甲醇(5mL)中，加入4N氯化氫的二氧六環溶液(25mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬-2-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(94E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將上一步的94D的鹽酸鹽粗產物溶於DMSO(30mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(1.46g,4.96mmol)和DIPEA(2.67g,20.7mmol)，100℃攪拌5h。冷卻至室溫，加入30mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到94E(1.8g，收率：60%)。
LCMS m/z=729.3[M+H]+。
第六步：5-(4-((7-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬-2-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(94F)
5-(4-((7-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將94E(700mg,0.96mmol)溶於乙醇/水(20mL，3：1)中，依次加入鐵粉(280mg，5mmol)，氯化銨(335mg，6.26mmol)，氮氣保護，85℃攪拌2h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液濃縮後，加入20mL水稀釋，二氯甲烷萃取(3×30mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到94F(600mg，收率：89%)。
LCMS m/z=699.3[M+H]+。
第七步：5-(4-((7-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,7-二氮螺環[3.5]壬基-2-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物94)
5-(4-((7-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將94F(150mg,0.21mmol)和40A(124mg,0.32mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(120mg,0.63mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep
C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，凍乾，矽膠製備板純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=15/1)得到化合物94(15mg，收率：6.8%)。
LCMS m/z=527.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.38(s,1H),11.08(s,1H),8.61-8.42(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.06(s,1H),7.87(s,1H),7.75-7.64(m,2H),7.62-7.52(m,3H),7.51-7.40(m,3H),7.39-7.32(m,1H),7.23-7.02(m,1H),6.84(s,1H),5.09(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.66-3.52(m,2H),3.20-2.95(m,4H),2.94-2.82(m,3H),2.81-2.68(m,4H),2.65-2.52(m,2H),2.48-2.34(m,2H),2.08-1.93(m,1H),1.92-1.69(m,12H),1.61-1.43(m,1H),1.41-1.25(m,2H)。
實施例95：化合物95的製備
第一步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物95)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將37F(1.7g,2.40mmol)和54C(1.09g,2.40mmol)溶於DMF(15mL)溶液中，加入對甲苯磺酸一水合物(0.91g,4.8mmol)，100℃反應過夜。冷卻
至室溫，加入30mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步用中壓製備反相柱純化(乙腈/水(含0.1% TFA)=3%-40%)，得到化合物95的三氟乙酸鹽製備液，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷攪拌5min後分液萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到化合物95(600mg，收率：22%)。
LCMS m/z=563.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.14(s,1H),11.05(s,1H),8.48-8.36(m,1H),8.33(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.83(s,1H),7.69-7.56(m,2H),7.52(s,1H),7.46-7.34(m,2H),7.34-7.03(m,5H),6.81(s,1H),5.06(dd,1H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),3.54-3.40(m,4H),3.11-2.97(m,2H),2.96-2.79(m,1H),2.69-2.51(m,4H),2.43-2.27(m,4H),2.21(d,2H),2.08-1.96(m,1H),1.80(d,6H),1.73-1.63(m,2H),1.61-1.41(m,9H),1.31-1.17(m,2H)。
實施例96：化合物96的製備
第一步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物96)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(3.5g,5.46mmol)和54C(2.98g,6.55mmol)溶於DMF(50mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(3.1g,16.30mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入100mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步用反相製備柱C18純化；流動相組成：流動相A：水(含0.1% TFA)，流動相B：乙腈。將製備所得固體溶於100mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到化合物96(1.5g，收率：26%)。
LCMS m/z=529.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.33-8.06(m,7H),7.76-7.62(m,2H),7.52-7.37(m,2H),7.37-7.21(m,3H),7.00(s,1H),5.22(dd,1H),4.01-3.90(m,8H),3.90-3.78(m,2H),3.77-3.63(m,2H),3.44-3.15(m,8H),2.96-2.89(m,2H),2.85-2.70(m,1H),2.64-2.50(m,1H),2.46-2.32(m,2H),2.32-2.22(m,1H),2.21-2.05(m,2H),1.99(d,6H)
實施例97：化合物97的製備
第一步：(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)二甲基氧化膦(97A)
(4-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
將54B(4.5g,17.09mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(6.27g,34.18mmol)溶於20mL NMP中，加入DIPEA(2.65g,20.51mmol)，120℃攪拌2h，冷卻至室溫，加入50mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，殘留物加入10mL乙醇和30mL甲基第三丁基醚打漿1h，過濾，濾餅用10mL甲基第三丁基醚洗滌，濾餅減壓乾燥得到97A(4.5g，收率：64%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 11.69(s,1H),8.82-8.76(m,1H),8.24(s,1H),7.76(d,1H),7.52-7.40(m,2H),7.40-7.32(m,1H),7.28-7.14(m,2H),1.88(d,6H)。
第二步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物97)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(3.5g,5.46mmol)和97A(2.69g,6.56mmol)溶於DMF(50mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(3.1g,16.30mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入100mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767
製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備液濃縮，加入100mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節至鹼性，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物97(1.2g，收率：22%)。
LCMS m/z=507.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.37-8.23(m,3H),8.23-8.07(m,4H),7.78-7.62(m,2H),7.52-7.37(m,2H),7.37-7.20(m,3H),7.01(s,1H),5.22(dd,1H),4.00-3.90(m,8H),3.90-3.79(m,2H),3.77-3.67(m,2H),3.45-3.20(m,8H),2.96-2.90(m,2H),2.85-2.71(m,1H),2.65-2.51(m,1H),2.48-2.33(m,2H),2.32-2.22(m,1H),2.21-2.06(m,2H),2.00(d,6H)。
實施例98：化合物98的製備
第一步：5-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物98)
5-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將80D(130mg,0.24mmol)和40A(122mg,0.31mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(137mg,0.72mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲
烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物98(55mg，收率：25%)。
LCMS m/z=899.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.35(s,1H),11.07(s,1H),8.64-8.36(m,1H),8.28(s,1H),8.17(s,1H),8.13(s,1H),7.89(s,1H),7.76-7.64(m,3H),7.61-7.51(m,2H),7.50-7.24(m,5H),7.23-7.04(m,1H),6.88(s,1H),5.09(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.69-3.47(m,4H),3.06-2.83(m,5H),2.70-2.52(m,2H),2.10-1.97(m,1H),1.84(d,6H)。
實施例99：化合物99的製備
第一步：4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(99A)
tert-butyl 4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
將80B的鹽酸鹽(1.05g粗產物)加入到30mL THF中，加入碳酸氫鈉(806mg，9.60mmol)，室溫攪拌20min，加入(955mg,4.80mmol)以及0.3mL醋酸，之後室溫攪拌2h；加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.02g,4.80mmol)，室溫反應16h。加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至鹼性，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=50/1-20/1)得到99A(1.0g，收率：84.6%)。
LCMS m/z=501.3[M+1]+。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(哌啶-4-基)哌嗪(99B)的三氟乙酸鹽
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(piperidin-4-yl)piperazine；2,2,2-trifluoroacetate
將99A(1.0g,2.0mmol)溶解在25mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室溫攪拌2h。將反應液減壓濃縮，得99B的三氟乙酸鹽(1.2g粗產物)。
LC-MS m/z=401.3[M+1]+。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(99C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將99B的三氟乙酸鹽(1.2g粗產物)溶於20mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉(840mg,10.0mmol)，室溫攪拌10min，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(662mg，2.40mmol)，反應於80℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，加入200mL水，過濾，收集固體，水洗，固體用DCM溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物用矽膠柱層析(流動相：DCM/MeOH(V/V)=15/1)純化得到99C(0.72g，收率：55.3%)。
LCMS m/z=657.3[M+1]+。
第四步：5-(4-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(99D)
5-(4-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將99C(0.72g,1.10mmol)溶於THF(10mL)、乙醇(30mL)和水(6mL)的混合液中，加入還原鐵粉(614mg,10.96mmol)以及氯化銨(587mg,10.97mmol)，85℃反應2h，反應液冷卻至室溫，真空濃縮除去溶劑，向殘餘物中加入50mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到99D(0.52g，收率：75.4%)
LCMS m/z=627.3[M+H]+。
第五步：5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-
基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物99)
5-(4-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將99D(250mg,0.40mmol)和23D(260mg,0.60mmol)，溶於DMF(20mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(230mg,1.21mmol)，100℃攪拌8h。冷卻至室溫，加入100mL飽和碳酸氫鈉水溶液有黃色固體析出，抽濾收集固體，濾餅用水沖洗(100mL×3)，二氯甲烷複溶，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)=15：1)純化，得化合物99(120mg，收率：28%)。
LCMS m/z=1026.3[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.06(s,1H),8.45-8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.88(s,1H),7.76-7.64(m,2H),7.61-7.50(m,3H),7.43(t,2H),7.40-7.30(m,2H),7.27(dd,1H),7.22-7.08(m,1H),6.85(s,1H),5.07(dd,1H),4.15-3.96(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.11-2.98(m,2H),2.97-2.77(m,5H),2.71-2.51(m,7H),2.10-1.87(m,3H),1.83(d,6H),1.60-1.41(m,2H)。
實施例100：化合物100的製備
第一步：5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物100)
5-(4-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將99D(250mg,0.40mmol)和40A(188mg,0.48mmol)，溶於DMF(20mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(263mg,1.38mmol)，100℃攪拌8h。冷卻至室溫，加入100mL飽和碳酸氫鈉水溶液有白色固體析出，抽濾收集固體，濾餅用水沖洗(100ml×3)，二氯甲烷複溶，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)=15：1)純化得化合物100(100mg，收率：25%)。
LCMS m/z=982.3[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.36(s,1H),11.06(s,1H),8.65-8.35(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.89(s,1H),7.78-7.65(m,2H),7.64-7.48(m,3H),7.44(t,2H),7.40-7.29(m,2H),7.27(dd,1H),7.22-7.09(m,
1H),6.85(s,1H),5.07(dd,1H),4.19-3.96(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.11-2.96(m,2H),2.95-2.73(m,5H),2.73-2.51(m,7H),2.10-1.88(m,3H),1.84(d,6H),1.61-1.41(m,2H)。
實施例101：化合物101的製備
5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物101)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(2.5g,3.90mmol)和54C(1.77g,3.90mmol)溶於DMF(20mL)溶液中，加入對甲苯磺酸一水合物(1.48g,7.8mmol)，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入30mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步用中壓製備反相柱純化(乙腈/水(含0.1%TFA)=3%-40%)，得到化合物101的三氟乙酸鹽製備液，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷攪拌5min後分液萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到化合物101(1.5g，收率：36%)。
LCMS m/z=529.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.28(s,1H),8.19-
8.07(m,1H),7.93(s,1H),7.87-7.78(m,3H),7.76-7.65(m,1H),7.53-7.41(m,3H),7.40-7.21(m,5H),5.12(dd,1H),4.21-4.07(m,2H),4.03(s,3H),3.89-3.66(m,9H),3.59-3.47(m,2H),3.37-3.15(m,4H),2.94-2.83(m,2H),2.82-2.67(m,1H),2.56-2.40(m,1H),2.31-2.13(m,3H),2.07-1.87(m,8H)。
實施例102：化合物102的製備
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物102)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(2.5g,3.90mmol)和97A(1.6g,3.90mmol)溶於DMF(20mL)溶液中，加入對甲苯磺酸一水合物(1.48g,7.8mmol)，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入30mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步用中壓製備反相柱純化(乙腈/水(含0.1%TFA)=3%-40%)，得到化合物102的三氟乙酸鹽製備液，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷攪拌5min後分液萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到化合物102(1.5g，收率：38%)。
LCMS m/z=507.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.28-8.21(m,1H),8.19(s,1H),7.98(s,1H),7.91-7.77(m,3H),7.74-7.64(m,1H),7.54-7.40(m,3H),7.40-7.21(m,5H),5.12(dd,1H),4.24-4.07(m,2H),4.04(s,3H),3.89-3.69(m,9H),3.61-3.48(m,2H),3.37-3.12(m,4H),2.95-2.84(m,2H),2.83-2.67(m,1H),2.58-2.41(m,1H),2.28-2.11(m,3H),2.06-1.89(m,8H)。
實施例103：化合物103的製備
第一步：4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(103H)
tert-butyl 4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
將1C(30g,120.48mmol)、1-第三丁氧羰基哌嗪(24.65g,132.52
mmol)溶於DMSO(300mL)中，加入碳酸鉀(50g,361.44mmol)，120℃反應6h，反應液傾入攪拌的水中，析出固體，抽濾，水洗3次，濾餅經真空乾燥得到103H，(50g，收率：99%)。
LCMS m/z=360.0[M-55]+。
第二步：1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪(103I)
1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazine
將103H(33g,80mmol)溶於二氯甲烷(100mL)中，緩慢加入三氟乙酸(50mL)，室溫反應3h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入100mL二氯甲烷複溶，2N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，分液，收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到103I(24.5g，收率：98%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=316.0[M+H]+。
第三步：(R)-3-(((甲磺醯基)氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯(103B)
tert-butyl(R)-3-(((methylsulfonyl)oxy)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將103A(第三丁基(R)-3-(羥甲基)吡咯烷-1-羧酸酯)(5.00g,24.84mmol)溶於DCM(50mL)中，加入三乙胺(7.54g,74.52mmol)，冰浴下滴加甲磺醯氯(5.69g,49.68mmol)，加畢於20℃反應2h，加水淬滅反應，200mL二氯甲烷稀釋反應液，0.1N稀鹽酸洗滌3次，碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉洗滌1次，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到103B，(6.90g直接用於下一步)。
LCMS m/z=224.1[M-55]+。
第四步：第三丁基(S)-3-((4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(103C)
tert-butyl(S)-3-((4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-y1)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將103I(5.20g,16.45mmol)，103B(5.51g,19.74mmol)溶於DMF(50mL)中，加入碘化鈉(0.99g,6.58mmol)，碳酸鉀(6.82g,49.35mmol)，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=2/1-純乙酸乙酯)得到103C，(3.30g，收率：40%)。
LCMS m/z=499.1[M+H]+。
第五步：第三丁基(S)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(103D)
tert-butyl(S)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將103C(3.30g,6.6lmmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(1.33g,10.58mmol)溶於1,4-二氧六環(50mL)中，加入Pd(dppf)Cl2．DCM(0.54g,0.66mmol)，碳酸鉀(1.83g,13.22mmol)的水溶液(10mL)，氮氣置換3次，90℃反應5h，反應液冷卻至室溫，加入300mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉水溶液洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=3/1-純乙酸乙酯)得到103D，(2.89g，收率：87%)。
LCMS m/z=501.3[M+H]+。
第六步：(R)-1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-
(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(103E)
(R)-1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
將103D(2.89g,5.77mmol)溶於二氯甲烷(30mL)中，緩慢加入三氟乙酸(10mL)，室溫反應1h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入100mL二氯甲烷複溶，1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，分液，收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到103E(2.26g，收率：98%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=401.3[M+H]+。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((S)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(103F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-((S)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將103E(2.26g,5.64mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(1.87g,6.77mmol)溶於DMSO(30mL)中，滴加DIPEA(2.19g,16.92mmol)，90℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到103F(3.58g，收率：97%)。
LCMS m/z=657.2[M+H]+。
第八步：5-((S)-3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(103G)
5-((S)-3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將103F(3.58g,5.45mmol)溶於乙醇(60mL)，加入還原鐵粉(1.83g,32.70mmol)，再滴加氯化銨(1.75g,32.70mmol)的水溶液(20mL)，氮氣保護，90℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入20mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到103G(3.40g，收率：99%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=627.3[M+H]+。
第九步：5-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物103)
5-((S)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將103G(1.70g,2.71mmol)與23D(1.18g,2.71mmol)溶於DMF(40mL)，加入對甲苯磺酸水合物(1.55g,8.13mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，
反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物103(580mg，收率：21%)。
LCMS m/z=513.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),11.04(s,1H),8.46-8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.74-7.50(m,5H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.26-7.07(m,1H),6.97-6.85(m,2H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.62-3.48(m,2H),3.48-3.36(m,1H),3.23-3.11(m,1H),3.00-2.79(m,5H),2.74-2.51(m,7H),2.47-2.31(m,2H),2.24-2.09(m,1H),2.08-1.94(m,1H),1.91-1.68(m,7H)。
實施例104：化合物104的製備
第一步：(S)-3-(((甲磺醯基)氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸第三丁酯(104B)
tert-butyl(S)-3-(((methylsulfonyl)oxy)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將104A(5.00g,24.84mmol)溶於DCM(50mL)中，加入三乙胺(7.54g,74.52mmol)，冰浴下滴加甲磺醯氯(5.69g,49.68mmol)，20℃反應2h，加水淬滅反應，200mL二氯甲烷稀釋反應液，0.1N稀鹽酸洗滌3次，碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌1次，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到104B(7g，直接用於下一步)。
第二步：第三丁基(R)-3-((4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(化合物104C)
tert-butyl(R)-3-((4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將103I(6.7g,21.19mmol)，104B(7g,25.40mmol)溶於DMF(50mL)中，加入碘化鈉(0.32g,2.12mmol)，碳酸鉀(8.79g,63.57mmol)，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉水溶液洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=2/1-純乙酸乙酯)得到104C，(5g，收率：47%)。
LCMS m/z=499.1[M+H]+。
第三步：第三丁基(R)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(104D)
tert-butyl(R)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
將104C(5g,10.01mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(2.52g,20.02mmol)溶於1,4-二氧六環(50mL)中，加入Pd(dppf)Cl2．DCM(0.82g,1.00mmol)，碳酸鉀(4.15g,30.03mmol)的水溶液(15mL)，氮氣置換3次，100℃反應4h，反應液冷卻至室溫，加入300mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相；石油醚/乙酸乙酯(V/V)=3/1-純乙酸乙酯)得到104D，(5g，收率：99%)。
LCMS m/z=501.3[M+H]+。
第四步：(S)-1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(104E)
(S)-1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
將104D(5g,9.99mmol)溶於二氯甲烷(30mL)中，緩慢加入三氟乙酸(10mL)，室溫反應1h，減壓濃縮除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入100mL二氯甲烷複溶，1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，分液，收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次，合併所有有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到104E(3.8g，收率：95%)，直接用於下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((R)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(104F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-((R)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將104E(3.8g,9.49mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚-1,3-二酮(2.88g,10.44mmol)溶於DMSO(30mL)中，滴加DIPEA(2.45g,18.98mmol)，90℃反應1.5h，反應液冷卻至室溫，加入30mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-12/1)得到104F(3.8g，收率：60%)。
LCMS m/z=657.3[M+H]+。
第六步：5-((R)-3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(104G)
5-((R)-3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將104F(3.8g,5.79mmol)溶於乙醇(60mL)，加入還原鐵粉(3.23g,57.9mmol)，再滴加氯化銨(3.1g,57.9mmol)的水溶液(20mL)，氮氣保護，80℃反應0.5h，反應液冷卻至室溫，過濾，濾餅用100mL二氯甲烷洗滌，加入50mL飽和食鹽水，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到104G(3.8g，收率：100%)，直接用於下一步。
第七步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)
吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物104)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將23D(1.32g,3.03mmol)與104G(1.9g,3.03mmol)溶於DMF(15mL)，加入對甲苯磺酸水合物(1.15g,6.06mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步用中壓製備反相柱純化(乙腈/水(含0.1%TFA)=3%-40%)，得到化合物104的三氟乙酸鹽製備液，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷攪拌5min後分液萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到化合物104(1.0g，收率：32%)。
LCMS m/z=513.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.04(s,1H),8.50-8.34(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.74-7.50(m,5H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.26-7.03(m,1H),6.98-6.85(m,2H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.63-3.47(m,2H),3.47-3.36(m,1H),3.22-3.07(m,1H),2.97-2.76(m,5H),2.71-2.51(m,7H),2.44(d,2H),2.23-2.06(m,1H),2.06-1.93(m,1H),1.91-1.67(m,7H)。
實施例105：化合物105的製備
第一步：4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(105A)
tert-butyl 4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)piperazine-1-carboxylate
將3-(5-溴-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(4.0g,12.4mmol)，哌嗪-1-羧酸第三丁酯(4.0g,21.5mmol)溶於超乾DMF(60mL)中，依次加入碳酸銫(8.1g,24.9mmol)和RuPhosPdG3(1.0g,1.2mmol)，氮氣保護，100℃攪拌16h。反應結束後，加入200mL乙酸乙酯和100mL水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到105A(1.3g，收率：24%)。
LCMS m/z=429.2[M+H]+。
第二步：3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105B)的鹽酸鹽
3-(1-oxo-5-(piperazin-1-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione；HCl
將105A(1.3g,3.0mmol)溶於甲醇(3mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(15mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
LCMS m/z=329.2[M+H]+。
第三步：4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(105C)
tert-butyl 4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將105B的鹽酸鹽粗產物(1.1g)，4-甲醯哌啶-1-羧酸第三丁酯(1.1g,5.16mmol)溶於DMAC(30mL)中，加入醋酸0.1ml，室溫攪拌1h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.1g,5.2mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合併有機相，用水(100mL×2)洗滌後經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到105C(1.0g，兩步收率：63%)。
LCMS m/z=526.3[M+H]+。
第四步：3-(1-氧代-5-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105D)的鹽酸鹽
3-(1-oxo-5-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione；HCl
將105C(1.0g,1.9mmol)溶於甲醇(3mL)中，加入4N鹽酸的二氧六環溶液(15mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
LCMS m/z=426.3[M+H]+。
第五步：3-(5-(4-((1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105E)
3-(5-(4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-
yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
將105D的鹽酸鹽粗產物(900mg)溶於DMSO(25mL)中，依次加入1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(500mg,2.0mmol)和碳酸氫鈉(504mg,6.0mmol)，90℃攪拌3h。冷卻至室溫，加入80mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到105E(700mg，兩步收率：56%)。
LCMS m/z=655.3[M+H]+。
第六步：3-(5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105F)
3-(5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
氮氣保護，50mL單口瓶瓶中加入105E(300mg，0.46mmol)和N-甲基吡唑-4-硼酸(115mg，0.91mmol)，溶於10mL二氧六環和2mL水中，然後向其中加入Pd(dppf)Cl2．DCM(81mg，0.10mmol)和碳酸鉀(168mg，1.2mmol)，氮氣置換三次，80℃反應2h，降溫至室溫，將反應液倒入100ml水中，100ml乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化，得105F(220mg，收率73%)。
LCMS m/z=657.3[M+H]+。
第七步：3-(5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯
基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105G)
3-(5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
將105F(220mg,0.33mmol)、鐵粉(200mg,3.57mmol)、氯化銨(200mg,3.77mmol)溶於乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃攪拌2h，之後冷卻至室溫，抽濾，濾液濃縮後加入30mL水，再用30ml二氯甲烷萃取，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到105G(170mg，收率81%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=627.3[(M+H]+。
第八步：3-(5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(化合物105)
3-(5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
將105G(170mg,0.27mmol)和40A(180mg,0.46mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和30mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，
流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物105(25mg，收率：9.3%)。
LCMS m/z=491.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),10.93(s,1H),8.63-8.41(m,1H),8.30(s,1H),8.11(s,1H),8.04(s,1H),7.88(s,1H),7.71(d,1H),7.64-7.48(m,4H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.26-7.11(m,1H),7.11-7.00(m,2H),6.86(s,1H),5.05(dd,1H),4.41-4.17(m,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.39-3.22(m,4H),3.17-3.00(m,2H),2.98-2.81(m,1H),2.69-2.52(m,6H),2.43-2.16(m,4H),2.02-1.92(m,1H),1.89-1.72(m,8H),1.69-1.53(m,1H),1.45-1.26(m,2H)。
實施例106：化合物106的製備
第一步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物106)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(256mg,0.4mmol)和(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦(55B)(200mg,0.5mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加
入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物106的三氟乙酸鹽，向化合物106的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物106(125mg，收率：31%)。
LCMS m/z=502.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.23(s,1H),7.96-7.75(m,5H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),7.31-7.15(m,2H),6.91(d,1H),5.12(dd,1H),4.22-4.07(m,5H),4.03(s,3H),3.93-3.70(m,6H),3.62-3.48(m,2H),3.39-3.18(m,4H),2.95-2.85(m,2H),2.82-2.67(m,1H),2.63-2.44(m,1H),2.37-2.16(m,3H),2.12-1.88(m,9H),1.19-1.08(m,2H),0.73-0.65(m,2H)。
實施例107：化合物107的製備
第一步：(5-環丙基-2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(107A)
(5-cyclopropyl-2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)phenyl)dimethylphosphine oxide
將55A(10.7g,51.14mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(13.96g,76.71mmol)溶於NMP(40mL)中，加入DIPEA(9.91g,76.71mmol)，氮氣保護下120℃攪拌2h。冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯和50mL水萃取，有機層用50mL飽和食鹽水洗滌3次。有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=1/100-1/20)得107A(15.6g，收率：86%)。
LCMS m/z=356.1[M+H]+。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物107)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(256mg,0.4mmol)和107A(178mg,0.5mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物107的三氟乙酸鹽，向化合物107的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物107(120mg，收率：31.3%)。
LCMS m/z=480.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.13(s,1H),8.02-7.91(m,3H),7.86(s,1H),7.82(d,1H),7.46(s,1H),7.36(s,1H),7.33-7.11(m,2H),6.90(d,1H),5.12(dd,1H),4.23-4.07(m,5H),4.04(s,3H),3.93-3.74(m,6H),3.63-3.48(m,2H),3.39-3.20(m,4H),2.95-2.85(m,2H),2.82-2.65(m,1H),2.63-2.45(m,1H),2.37-2.17(m,3H),2.14-1.88(m,9H),1.18-1.07(m,2H),0.71-0.63(m,2H)。
實施例108：化合物108的製備
第一步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(108B)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)phenyl)dimethylphosphine oxide
將108A(5g,29.56mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(13.47g,59.12mmol)溶於NMP(50mL)中，加入DIPEA(5.73g,44.34mmol)，氮氣保護下120℃，此溫度下攪拌2h。冷卻至室溫，加入300mL乙酸乙酯和300mL水萃取，有機層用150mL飽和食鹽水洗滌。有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-10/1)，得到108B(8.6g，收率：80.6%)
LCMS m/z=360.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.53(s,1H),8.61-8.47(m,1H),8.37-8.21(m,1H),7.76-7.45(m,2H),7.31-7.13(m,1H),1.81(d,6H)。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物108)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；
將45F(2g,3.12mmol)和108B(1.24g,3.43mmol)溶於DMF(30mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(1.78g,9.36mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入100mL水和100mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物108的三氟乙酸鹽，向化合物108的三氟乙酸鹽中加入200mL二氯甲烷和100mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物108(1.1g，收率：36.5%)。
LCMS m/z=964.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.29(s,1H),7.94(s,1H),7.91-7.77(m,4H),7.59(dd,1H),7.46(d,1H),7.39-7.23(m,3H),7.19(t,1H),5.12(dd,1H),4.23-4.08(m,5H),4.05(s,3H),3.97-3.73(m,6H),3.60-3.48(m,2H),3.39-3.15(m,4H),2.95-2.85(m,2H),2.83-2.65(m,1H),2.65-2.46(m,
1H),2.37-2.16(m,3H),2.13-1.88(m,8H)。
實施例109：化合物109的製備
第一步：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(109B)
(2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)phenyl)dimethylphosphineoxide
將108A(5g,29.56mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(10.84g,59.12mmol)溶於NMP(50mL)中，加入DIPEA(5.73g,44.34mmol)，氮氣保護120℃攪拌2h。冷卻至室溫，加入300mL乙酸乙酯和300mL水萃取，有機層用150mL飽和食鹽水洗滌。有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-10/1)，得到109B(8.3g，收率：88%)
LCMS m/z=316.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.82(s,1H),8.49-8.36(m,2H),7.70-7.56(m,2H),7.33-7.18(m,1H),1.82(d,6H)。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物109)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-
3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(3g,4.68mmol)和109B(1.63g,5.15mmol)溶於DMF(30mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(2.67g,14.04mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入100mL水和100mL飽和碳酸氫鈉水溶液，過濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物109的三氟乙酸鹽，向化合物109的三氟乙酸鹽中加入200mL二氯甲烷和100mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物109(1.9g，收率：44.1%)。
LCMS m/z=920.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.20(s,1H),8.01-7.91(m,2H),7.90-7.77(m,3H),7.58(dd,1H),7.46(s,1H),7.39-7.24(m,3H),7.17(t,1H),5.12(dd,1H),4.23-4.09(m,5H),4.06(s,3H),3.96-3.73(m,6H),3.64-3.48(m,2H),3.39-3.16(m,4H),2.96-2.86(m,2H),2.82-2.67(m,1H),2.64-2.47(m,1H),2.36-2.15(m,3H),2.13-1.88(m,8H)。
實施例110：化合物110的製備
第一步：4-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(110A)
tert-butyl 4-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將4-甲醯基哌啶-1-羧酸苄酯(2.47g,10mmol)，第三丁基哌嗪-1-羧酸酯(1.86g,10mmol)混合於二氯甲烷(100mL)中，依次加入醋酸(1.2g,20mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(4.24g,20mmol)，室溫下攪拌過夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N氫氧化鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=10/1-1/1)得到110A(3.54g，收率：85%)。
LCMS m/z=418.2[M+H]+。
第二步：4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(110B)
tert-butyl 4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine-1-carboxylate
將110A(3.54g,8.49mmol)溶於甲醇(50mL)中，加入鈀碳(wt%=10%,500mg)，氫氣置換3次，氫氣氛圍(氣球壓強)、室溫下攪拌過夜，過
濾，濾液減壓濃縮得到110B的粗產物，直接用於下一步。
第三步：1-乙基-4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1H-吡唑(110C)
1-ethyl-4-(2-fluoro-4-methoxy-5-nitrophenyl)-1H-pyrazole
氮氣保護，500mL單口瓶中加入1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(2.49g，10mmol)和1-乙基-1H-吡唑-4-硼酸頻那醇酯(Cas：847818-70-6，3.33g,15mmol)，溶於100mL 1,4-二氧六環和10mL水中，然後向其中加入Pd(dppt)Cl2．DCM(400mg，0.5mmol)和碳酸鉀(4.14g，30mmol)，氮氣置換三次，100℃反應16h，降溫至室溫，將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化，得110C(2.1g，收率80%)。
LCMS m/z=266.1[M+H]+。
第四步：4-((1-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(110D)
tert-butyl 4-((1-(2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將110B(8.49mmol)，110C(2.1g,7.92mmol)和碳酸鉀(3.51g,25.5mmol)混合溶於DMSO(30mL)中，120℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入100mL水和100mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到110D(2.5g，收率：60%)。
LCMS m/z=529.1[M+H]+。
第五步：1-((1-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌
啶-4-基)甲基)哌嗪(110E)的三氟乙酸鹽
1-((1-(2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine；2,2,2-trifluoroacetate
將110D(1.1g,2.0mmol)溶解在5mL二氯甲烷中，加入3mL三氟乙酸，室溫攪拌1h。將反應液減壓濃縮，得到110E的三氟乙酸鹽粗產物，直接用於下一步。
第六步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(110F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1-(2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將110E的三氟乙酸鹽(2.08mmol)的粗產物溶於10mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉(840mg,10.0mmol)，室溫攪拌10min，加入DIPEA(3.45mL，20.8mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(662mg，2.40mmol)，反應於80℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，加入100mL水，過濾，收集固體，水洗，固體用DCM溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗產物。粗產物經過矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=15/1)得到110F(0.73g，收率：51%)。
LCMS m/z=685.3[M+H]+。
第七步：5-(4-((1-(4-氨基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(110I)
5-(4-((1-(4-amino-2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將110F(0.73g,1.07mmol)溶於乙醇(20mL)和水(5mL)的混合液中，加入還原鐵粉(480mg,8.56mmol)以及氯化銨(460mg,8.56mmol)，85℃反應4h，反應液冷卻至室溫，真空濃縮除去溶劑，向殘餘物中加入10mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到110I(620mg，收率：88%)
LCMS m/z=655.4[M+H]+。
第八步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基))-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物110)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將110I(310mg,0.47mmol)和40A(200mg,0.52mmol)，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(268mg,1.41mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入30mL飽和碳酸氫鈉水溶液有黃色固體析出，抽濾收集固體，濾餅用水沖洗(20mL×3)，二氯甲烷複溶，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@
Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(30ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後加入水凍乾得化合物110(120mg，收率：25%)。
LCMS m/z=505.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.07(s,1H),8.60-8.39(m,1H),8.31(s,1H),8.11(s,1H),8.10(s,1H),7.90(s,1H),7.76-7.63(m,2H),7.62-7.51(m,3H),7.44(t,2H),7.40-7.31(m,2H),7.27(d,1H),7.23-7.05(m,1H),6.86(s,1H),5.08(dd,1H),4.06(q,2H),3.80(s,3H),3.56-3.40(m,4H),3.17-3.01(m,2H),2.96-2.80(m,1H),2.70-2.50(m,8H),2.29(d,2H),2.11-1.97(m,1H),1.91-1.72(m,8H),1.72-1.47(m,1H),1.41-1.25(m,5H)。
實施例111：化合物111的製備
第一步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基))-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物111)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將110I(310mg,0.47mmol)和23D(230mg,0.52mmol)，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(268mg,1.41mmol)，100℃攪拌16
h。冷卻至室溫，加入30mL飽和碳酸氫鈉水溶液有黃色固體析出，抽濾收集固體，濾餅用水沖洗(20ml×3)，二氯甲烷複溶，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(30ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後加入水凍乾得化合物111(120mg，收率：24%)。
LCMS m/z=527.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),11.07(s,1H),8.50-8.35(m,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),8.09(s,1H),7.89(s,1H),7.79-7.63(m,2H),7.63-7.50(m,3H),7.44(t,2H),7.41-7.30(m,2H),7.27(d,1H),7.21-7.02(m,1H),6.85(s,1H),5.08(dd,1H),4.06(q,2H),3.79(s,3H),3.57-3.38(m,4H),3.16-3.00(m,2H),2.97-2.79(m,1H),2.71-2.51(m,8H),2.28(d,2H),2.10-1.96(m,1H),1.90-1.69(m,8H),1.69-1.52(m,1H),1.39-1.25(m,5H)。
實施例112：化合物112的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物112)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-
1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將81B(2.3g,3.30mmol)和55B(1.45g,3.63mmol)溶於DMF(20mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(1.88g,9.90mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入100mL飽和碳酸氫鈉水溶液和200mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於100mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物112(1.0g，收率：31%)。
LCMS m/z=495.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.07(s,1H),10.84(s,1H),8.25-8.07(m,3H),7.98(s,1H),7.88(s,1H),7.69(d,1H),7.57(s,1H),7.41-7.13(m,3H),6.80(s,1H),6.57-6.34(m,1H),5.07(dd,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.60-3.40(m,4H),3.20-3.06(m,2H),2.97-2.82(m,1H),2.75-2.55(m,8H),2.40-2.29(m,1H),2.09-1.97(m,1H),1.95-1.85(m,2H),1.85-1.70(m,7H),1.69-1.54(m,2H),0.95-0.81(m,2H),0.57-0.39(m,2H)。
實施例113：化合物113的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-
基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物113)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將81B(2.3g,3.30mmol)和107A(1.29g,3.63mmol)溶於DMF(20mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(1.88g,9.90mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液和200mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於200mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物113(1.1g，收率：32%)。
LCMS m/z=473.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.07(s,1H),8.31-8.19(m,1H),8.15(s,1H),8.07(s,1H),8.00(s,1H),7.89(s,1H),7.69(d,1H),7.59(s,1H),7.41-7.15(m,3H),6.81(s,1H),6.54-6.31(m,1H),5.07(dd,1H),3.85(s,3H),3.78(s,3H),3.54-3.41(m,4H),3.20-3.08(m,2H),2.97-2.82(m,1H),2.76-2.54(m,8H),2.41-2.28(m,1H),2.09-1.97(m,1H),1.95-1.86(m,2H),1.85-1.70(m,7H),1.70-1.55(m,2H),1.01-0.79(m,2H),0.62-0.45(m,2H)。
實施例114：化合物114的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物114)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將81B(2.24g,3.57mmol)與108B(1.29g,3.57mmol)溶於DMF(30mL)，加入對甲苯磺酸水合物(2.04g,10.71mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物114，(1.1g，收率：32%)。
LCMS m/z=475.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.07(s,1H),10.94(s,1H),8.40-8.23(m,1H),8.24-8.08(m,2H),7.95(s,1H),7.84(s,1H),7.69(d,1H),7.59(s,1H),7.55-7.44(m,1H),7.39-7.20(m,2H),7.06-6.86(m,2H),6.80(s,1H),5.07(dd,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.53-3.42(m,4H),3.20-3.05(m,2H),2.96-2.81(m,1H),2.76-2.53(m,8H),2.40-2.27(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.93-1.83(m,2H),1.76(d,6H),1.68-1.50(m,2H)。
實施例115：化合物115的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物115)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將81B(2.24g,3.57mmol)與109B(1.13g,3.57mmol)溶於DMF(30mL)，加入對甲苯磺酸水合物(2.04g,10.71mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮乾燥得化合物115，(780mg，收率：24%)。
LCMS m/z=453.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.21(s,1H),11.07(s,1H),8.55-8.39(m,1H),8.20(s,1H),8.10(s,1H),7.97(s,1H),7.85(s,1H),7.69(d,1H),7.63-7.44(m,2H),7.40-7.20(m,2H),7.08-6.86(m,2H),6.80(s,1H),5.07(dd,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.55-3.36(m,4H),3.21-3.07(m,2H),2.97-2.82(m,
1H),2.75-2.53(m,8H),2.39-2.24(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.94-1.84(m,2H),1.76(d,6H),1.67-1.50(m,2H)。
實施例116：化合物116的製備
第一步：5-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物116)
5-((S)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將103G(1.70g,2.71mmol)與54C(1.23g,2.71mmol)溶於DMF(40mL)，加入對甲苯磺酸水合物(1.55g,8.13mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物116，(750mg，收率：26%)。
LCMS m/z=522.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.14(s,1H),11.05(s,1H),8.51-
8.37(m,1H),8.34(s,1H),8.19(s,1H),8.02(s,1H),7.86(s,1H),7.71-7.48(m,3H),7.48-7.33(m,2H),7.33-7.22(m,2H),7.20-7.00(m,1H),6.96-6.72(m,3H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.63-3.47(m,2H),3.47-3.37(m,1H),3.22-3.10(m,1H),2.96-2.77(m,5H),2.72-2.51(m,7H),2.46-2.36(m,2H),2.21-2.09(m,1H),2.07-1.93(m,1H),1.90-1.69(m,7H)。
實施例117：化合物117的製備
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-2'-氟-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物117)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將54C(1.38g,3.03mmol)與104G(1.9g,3.03mmol)溶於DMF(15mL)，加入對甲苯磺酸水合物(1.15g,6.06mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步用中壓製備反相柱純化(乙腈/水(含0.1%TFA)=3%-40%)，得到化合物117的三氟乙酸鹽製備液，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷攪拌5min後分液萃取，
有機層用無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到化合物117(1.1g，收率：35%)。
LCMS m/z=522.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.14(s,1H),11.04(s,1H),8.57-8.37(m,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.73-7.48(m,3H),7.47-7.34(m,2H),7.34-7.22(m,2H),7.19-7.00(m,1H),6.96-6.69(m,3H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.63-3.48(m,2H),3.47-3.38(m,1H),3.21-3.10(m,1H),3.00-2.76(m,5H),2.73-2.51(m,7H),2.45-2.35(m,2H),2.21-2.09(m,1H),2.08-1.96(m,1H),1.93-1.67(m,7H)。
實施例118：化合物118的製備
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物118)
5-((R)-3-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將104G(250mg,0.40mmol)和40A(200mg,0.53mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色
譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物118(60mg，收率：15%)。
LCMS m/z=982.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.04(s,1H),8.59-8.42(m,1H),8.28(s,1H),8.12(s,1H),8.05(s,1H),7.89(s,1H),7.71(dd,1H),7.67-7.59(m,2H),7.59-7.50(m,2H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.22-7.06(m,1H),6.98-6.86(m,2H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.62-3.48(m,2H),3.48-3.37(m,1H),3.22-3.13(m,1H),3.00-2.78(m,5H),2.73-2.52(m,7H),2.45(d,2H),2.23-2.09(m,1H),2.06-1.96(m,1H),1.90-1.71(m,7H)。
實施例119：化合物119的製備
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物119)
5-((R)-3-((4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將104G(250mg,0.40mmol)和107A(200mg,0.56mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物119(100mg，收率：27%)。
LCMS m/z=473.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.24-10.78(m,2H),8.37-8.20(m,1H),8.16(s,1H),8.07(s,1H),8.01(s,1H),7.90(s,1H),7.65(d,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),6.94-6.76(m,3H),6.58-6.32(m,1H),5.05(dd,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.63-3.47(m,2H),3.47-3.36(m,1H),3.23-3.13(m,1H),3.00-2.77(m,5H),2.75-2.51(m,7H),2.46(d,2H),2.23-2.10(m,1H),2.06-1.94(m,1H),1.86-1.71(m,8H),0.95-0.85(m,2H),0.60-0.46(m,2H)。
實施例120：化合物120的製備
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物120)
5-((R)-3-((4-(4-((5-chloro-4-((2-
(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將104G(250mg,0.40mmol)和109B(200mg,0.63mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於20mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物120(120mg，收率：33%)。
LCMS m/z=906.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.21(s,1H),11.04(s,1H),8.57-8.31(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.98(s,1H),7.86(s,1H),7.70-7.57(m,2H),7.56-7.44(m,1H),7.05-6.93(m,2H),6.92-6.86(m,1H),6.86-6.73(m,2H),5.05(dd,1H),3.82(s,3H),3.81(s,3H),3.63-3.46(m,2H),3.46-3.35(m,1H),3.22-3.11(m,1H),3.01-2.79(m,5H),2.73-2.52(m,7H),2.45(d,2H),2.21-2.08(m,1H),2.06-1.93(m,1H),1.86-1.66(m,8H)。
實施例121：化合物121的製備
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)
氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物121)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將55B(0.26g,0.64mmol)與104G(0.4g,0.64mmol)溶於DMF(5mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.24g,1.28mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.05%氨水))得到化合物121(0.2g，收率：32%)。
LCMS m/z=495.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.33-10.89(m,1H),10.84(s,1H),8.26-8.10(m,3H),7.99(s,1H),7.90(s,1H),7.65(d,1H),7.58(s,1H),7.23(dd,1H),6.98-6.76(m,3H),6.48(s,1H),5.05(dd,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.64-3.36(m,3H),3.25-3.14(m,1H),2.99-2.80(m,5H),2.75-2.51(m,7H),2.48-2.37(m,2H),2.22-2.08(m,1H),2.07-1.93(m,1H),1.88-1.67(m,8H),0.98-0.78(m,2H),0.62-0.37(m,2H)。
實施例122：化合物122的製備
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物122)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將108B(0.23g,0.64mmol)與104G(0.4g,0.64mmol)溶於DMF(5mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.24g,1.28mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物122的三氟乙酸鹽，向化合物122的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和20mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物122(0.18g，收率：30%)。
LCMS m/z=475.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.04(s,1H),10.94(s,1H),8.42-8.28(m,1H),8.25-8.10(m,2H),7.96(s,1H),7.85(s,1H),7.65(d,1H),7.61(s,1H),7.56-7.38(m,1H),7.15-6.87(m,3H),6.87-6.67(m,2H),5.05(dd,1H),3.82(s,3H),3.81(s,3H),3.67-3.36(m,3H),3.22-3.12(m,1H),3.02-2.82(m,5H),2.76-2.51(m,7H),2.47-2.36(m,2H),2.22-2.11(m,1H),2.04-1.94(m,1H),1.88-1.63(m,7H)。
實施例123：化合物123的製備
第一步：5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(123A)
methyl 5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinate
將77B的鹽酸鹽粗產物(由4.43mmol的77A所制得)，5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(1.5g,9.66mmol)溶於DMSO(30mL)中，加入碳酸鉀(3.34g,24.15mmol)，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入100mL水，再加入100mL乙酸乙酯萃取。分離有機層，水層用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合併有機相，依次用50mL水和50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-19/1)得到123A(1.66g，收率：68%)。
LCMS m/z=550.3[M+H]+。
第二步：5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸(123B)
5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinic acid
將123A(1.66g,3.02mmol)溶於四氫呋喃(45mL)和水(15mL)的混合溶液中，加入氫氧化鋰一水合物(0.44g，10.48mmol)，室溫反應16h，反應結束後反應液中加入稀鹽酸(2mol/L)調節pH=7，減壓濃縮得到123B粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=536.3[M+H]+。
第三步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-醯胺(123C)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinamide
將上一步得到的123B粗產物，3-氨基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(0.75g,4.53mmol)溶於DMF(30mL)中，加入DIPEA(1.95g,15.1mmol)和HATU(1.72g,4.53mmol)，室溫反應3h，反應結束後，加入100mL水，再加入100ml乙酸乙酯萃取。分離有機層，水層用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合併有機相，依次用50mL水和50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-19/1)得到123C(1.48g，兩步收率：76.4%)。
LCMS m/z=646.3[M+H]+。
第四步：5-(4-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-醯胺(123D)
5-(4-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-
yl)picolinamide
將123C(1.9g,2.94mmol)溶於乙醇(100mL)和水(30mL)，加入鐵粉(1.64g,29.4mmol)，再加入氯化銨(1.57g,29.4mmol)，氮氣保護，85℃反應2h，反應液冷卻至室溫，通過矽藻土抽濾，濾液二氯甲烷萃取(3×50ml)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到123D，白色固體(1.27g)粗產物，直接用於下一步。
LCMS m/z=616.3[M+H]+。
第五步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-甲醯胺(化合物123)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將123D(265mg)與23D(244mg,0.56mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(245mg,1.29mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，二氯甲烷萃取，真空濃縮；製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向製備液中加入50mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫
酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物123(50mg，收率：8%)。
LCMS m/z=1015.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.39(s,1H),8.34-8.26(m,2H),8.19(s,1H),8.02(s,1H),7.91-7.83(m,2H),7.70(dd,1H),7.62-7.51(m,3H),7.49-7.33(m,4H),7.17(s,1H),6.86(s,1H),4.81-4.64(m,1H),3.95(d,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),2.97-2.70(m,7H),2.59-2.49(m,5H),2.32-2.12(m,3H),2.01-1.97(m,1H),1.88-1.76(m,9H),1.31-1.16(m,2H)。
實施例124：化合物124的製備
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-甲醯胺(化合物124)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
將123D(265mg)與40A(219mg,0.56mmol)溶於DMF(10mL)，加入對甲苯磺酸一水合物(245mg,1.29mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，二氯甲烷萃取，真空濃縮；製備HPLC純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向製備液中加入50mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，萃取，分液後有機層用無水硫
酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物124(80mg，收率：13%)。
LCMS m/z=486.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),10.83(s,1H),8.68(d,1H),8.49(s,1H),8.35-8.25(m,2H),8.12(s,1H),8.04(s,1H),7.93-7.82(m,2H),7.71(dd,,1H),7.61(s,1H),7.56(d,2H),7.50-7.34(m,4H),7.16(s,1H),6.87(s,1H),4.84-4.68(m,1H),3.95(d,2H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.00-2.71(m,7H),2.59-2.50(m,5H),2.31-2.10(m,3H),2.05-2.00(m,1H),1.92-1.72(m,9H),1.31-1.14(m,2H)。
實施例125：化合物125的製備
第一步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物125)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(210mg,0.33mmol)和55B(158mg,0.40mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於40mL二氯甲烷，加入飽
和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物125(100mg，收率：30%)。
LCMS m/z=1004.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.05(s,1H),10.84(s,1H),8.25-8.09(m,3H),7.98(s,1H),7.89(s,1H),7.65(d,1H),7.59(s,1H),7.36-7.28(m,1H),7.27-7.14(m,2H),6.83(s,1H),6.59-6.28(m,1H),5.06(dd,1H),4.11-3.97(m,2H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.05-2.78(m,7H),2.64-2.51(m,6H),2.25(d,2H),2.06-1.95(m,1H),1.95-1.79(m,4H),1.74(d,6H),1.30-1.08(m,2H),0.95-0.83(m,2H),0.56-0.45(m,2H)。
實施例126：化合物126的製備
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物126)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(250mg,0.39mmol)和107A(170mg,0.47mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(223mg,1.17mmol)，氮氣保護下100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮。將濃縮液進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：
水(含0.1% TFA))，將製備所得凍乾。將所得固體溶於40mL二氯甲烷，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到化合物126(80mg，收率：21%)。
LCMS m/z=480.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.30-10.80(m,2H),8.42-7.94(m,4H),7.89(s,1H),7.72-7.53(m,2H),7.42-7.14(m,3H),6.83(s,1H),6.56-6.38(m,1H),5.05(dd,1H),4.13-3.96(m,2H),3.83(s,3H),3.80(s,3H),3.05-2.78(m,7H),2.64-2.51(m,6H),2.25(d,2H),2.06-1.95(m,1H),1.93-1.78(m,4H),1.75(d,6H),1.29-1.08(m,2H),1.00-0.79(m,2H),0.59-0.38(m,2H)。
實施例127：化合物127的製備
第一步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物127)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(600mg,0.94mmol)和108B(372.83mg,1.03mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(536.42mg,2.82mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL水和20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱
層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物127的三氟乙酸鹽，向化合物127的三氟乙酸鹽中加入60mL二氯甲烷和30mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物127(260mg，收率：28.26%)。
LCMS m/z=964.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.05(s,1H),10.94(s,1H),8.40-8.27(m,1H),8.22-8.14(m,2H),7.95(s,1H),7.84(s,1H),7.65(d,1H),7.60(s,1H),7.55-7.41(m,1H),7.36-7.27(m,1H),7.23(dd,1H),7.04-6.90(m,2H),6.82(s,1H),5.06(dd,1H),4.10-3.97(m,2H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),3.07-2.79(m,7H),2.68-2.50(m,6H),2.28-2.17(m,2H),2.09-1.97(m,1H),1.92-1.79(m,3H),1.76(d,6H),1.27-1.08(m,2H)。
實施例128：化合物128的製備
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物128)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將77D(600mg,0.94mmol)和109B(329.84mg,1.04mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(536.42mg,2.82mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL水和20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物128的三氟乙酸鹽，向化合物128的三氟乙酸鹽中加入60mL二氯甲烷和30mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物128(200mg，收率：23.12%)。
LCMS m/z=920.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.21(s,1H),11.05(s,1H),8.58-8.34(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.97(s,1H),7.85(s,1H),7.65(d,1H),7.62(s,1H),7.57-7.40(m,1H),7.31(s,1H),7.28-7.14(m,1H),7.07-6.90(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.23-3.93(m,2H),3.82(s,3H),3.81(s,3H),3.05-2.78(m,7H),2.67-2.50(m,6H),2.24(d,2H),2.08-1.94(m,1H),1.93-1.80(m,3H),1.76(d,6H),1.29-1.08(m,2H)。
實施例129：化合物129的製備
第一步：9-(3-硝基苄基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(129A)
tert-butyl 9-(3-nitrobenzyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(3.0g,11.8mmol)，3-硝基苯甲醛(1.3g,8.6mmol)溶於DMAC(30mL)中，加入醋酸1ml，室溫攪拌1h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(2.1g,10mmol)，室溫反應過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合併有機相，用水(100mL×2)洗滌後經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到129A(3.5g，收率：76%)。
LCMS m/z=390.3[M+H]+。
第二步：9-(3-氨基苄基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯(129B)
tert-butyl 9-(3-aminobenzyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將129A(3.5g,9.0mmol)、鐵粉(5g,89.3mmol)、氯化銨(5g,93.5mmol)溶於乙醇(60mL)和水(20mL)中，80℃攪拌2h，之後冷卻至室溫，抽濾，濾液濃縮後加入60mL水，再用60ml二氯甲烷萃取，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到129B(3.0g，收率93%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=360.3[(M+H]+。
第三步：9-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苄基)-3,9-二氮雜螺[5.5]
十一烷-3-羧酸第三丁酯(129C)
tert-butyl 9-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)amino)benzyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
將129B(3.0g,8.36mmol)和3-溴代哌啶-2,6-二酮(3.96g,20.6mmol)溶於DMSO(40mL)中，加入碳酸氫鈉(4.0g,47.6mmol)，100℃反應6h。冷卻至室溫，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌(30mL x 3)。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物通過矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)=10/1-2/1)，得到129C(2.4g，收率：61%)。
LCMS m/z=471.3[M+H]+。
第四步：3-((3-((3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基哌啶-2,6-二酮(129D)的鹽酸鹽
3-((3-((3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione；HCl
50mL圓底燒瓶中依次加入129C(1.0g，2.1mmol)，氯化氫的1,4-二氧六環溶液(30mL,4mol/L)，室溫反應2h，減壓濃縮乾得129D的鹽酸鹽，直接用於下一步反應。
第五步：3-((3-((9-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(129E)
3-((3-((9-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將化合物1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(0.6g,2.40mmol)，上一步得到的129D的鹽酸鹽和碳酸氫鈉(1.0g,11.9mmol)，溶於20mL DMSO中，100℃反應3h，反應結束後冷卻至室溫，加入50mL水和50mL乙酸乙酯，分離乙酸乙酯層，水層用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到129E(0.8g，兩步收率：63%)。
LCMS m/z=600.2[M+H]+。
第六步：3-((3-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(129F)
3-((3-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
氮氣保護，50mL單口瓶瓶中加入129E(400mg，0.67mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(95.7mg，0.76mmol)，溶於20mL二氧六環和4mL水中，然後向其中加入Pd(dppf)Cl2．DCM(31mg，0.04mmol)和碳酸氫鈉(96mg，1.14mmol)，氮氣置換三次，100℃反應3h，降溫至室溫，將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)，得129F(180mg，收率45%)。
LCMS m/z=602.3[M+H]+。
第七步：3-((3-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(129G)
3-((3-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將129F(180mg，0.30mmol)溶於甲醇(10mL)中，室溫下加入鈀碳10%(180mg)，氫氣下反應2h，反應結束後矽藻土抽濾，濾液濃縮得129G(140mg，收率82%)。
LCMS m/z=572.3[M+H]+。
第八步：3-((3-((9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物129)
3-((3-((9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將上一步得到的129G(140mg,0.25mmol)和23D(140mg,0.32mmol)，溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：
乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入50mL DCM後加入飽和碳酸氫鈉溶液調節溶液至鹼性，分離二氯甲烷層，水層用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合併二氯甲烷層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得化合物129(30mg，收率13%)。
LCMS m/z=486.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.12(s,1H),10.75(s,1H),8.48-8.35(m,1H),8.30(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.68(dd,1H),7.59-7.47(m,3H),7.42(t,2H),7.33(t,1H),7.25-7.10(m,1H),7.03(t,1H),6.88(s,1H),6.65(s,1H),6.60-6.43(m,2H),5.78(d,1H),4.37-4.25(m,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.39-3.32(m,2H),2.86-2.70(m,5H),2.69-2.54(m,1H),2.41-2.22(m,4H),2.17-2.04(m,1H),1.98-1.78(m,7H),1.62-1.37(m,8H)。
實施例130：化合物130的製備
第一步：3-((3-((9-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物130)
3-((3-((9-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將129G(140mg,0.25mmol)和40A(140mg,0.74mmol)，溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(140mg,0.81mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和50mL二氯甲烷分層，有機
層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=100/1-20/1)，粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備液濃縮，加入50mL DCM後加入飽和碳酸氫鈉溶液調節溶液至鹼性，分離二氯甲烷層，水層用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合併二氯甲烷層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得化合物130(20mg，收率8.8%)。
LCMS m/z=464.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),10.75(s,1H),8.52-8.43(m,1H),8.30(s,1H),8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.69(dd,1H),7.60-7.48(m,3H),7.42(t,2H),7.33(t,1H),7.23-7.12(m,1H),7.03(t,1H),6.89(s,1H),6.65(s,1H),6.61-6.45(m,2H),5.78(d,1H),4.36-4.25(s,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.40-3.30(m,2H),2.88-2.69(m,6H),2.65-2.54(m,1H),2.42-2.25(m,4H),2.17-2.07(m,1H),1.96-1.77(m,7H),1.62-1.42(s,7H)。
實施例131：化合物131的製備
第一步：4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(131B)
tert-butyl 4-(4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
將131A(14.1g,10mmol)，1-第三丁氧羰基哌嗪(18.6g,10mmol)，溶於DMF(100mL)中，加入碳酸鉀(34.5g,25mmol)，50℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入100mL水，有黃色固體析出，抽濾，濾餅用石油醚(300mL)打漿，抽濾，濾餅減壓濃縮後得到131B(29.2g，收率：95%)。
LCMS m/z=252.2[M-55]+。
第二步：4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(131C)
tert-butyl 4-(4-aminophenyl)piperazine-1-carboxylate
將131B(11.9g,38.8mmol)、鈀碳(1.2g，10wt%)溶於60mL甲醇與60mL四氫呋喃中，然後氫氣置換三次後，室溫反應8h，矽藻土抽濾，濾液減壓濃縮，得到131C(10.7g，收率：100%)。
LCMS m/z=278.2[M+H]+。
第三步：4-(4-((3-乙氧基-3-氧丙基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(131D)
tert-butyl 4-(4-((3-ethohy-3-oxopropyl)amino)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將乳酸(7.2g,80mmol)滴加到1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一碳-7-烯(12.2g，80mmol)的乙醚(100ml)溶液中，室溫攪拌過夜，減壓濃縮後溶於1,4-二氧六環(200mL)中，依次加入131C(10.7g,38.6mmol)，丙烯酸乙酯(8g,80mmol)，90℃反應24h。反應完後冷卻至室溫，用300mL乙酸乙酯和200mL水萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸
乙酯(V/V)=20/1-4/1)得到131D(7.3g，收率：50%)。
LCMS m/z=378.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.91-6.71(m,2H),6.69-6.39(m,2H),4.08(q,2H),3.61-3.45(m,4H),3.43-3.24(m,2H),3.08-2.80(m,4H),2.57-2.48(m,2H),1.41(s,9H),1.19(t,3H)。
第四步：4-(4-(N-(3-乙氧基-3-氧代丙基)氰胺基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(131E)
tert-butyl4-(4-(N-(3-ethoxy-3-oxopropyl)cyanamido)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將131D(7.3g,19.4mmol)和溴氰(4.24g,40mmol)溶於四氫呋喃(100mL)中，加入碳酸氫鈉(10.08g,120mmol)，氮氣保護，室溫反應3h。反應完後，用200mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到131E(6.5g，收率：83.5%)。
LCMS m/z=403.3[M+H]+。
第五步：4-(4-(1-(3-乙氧基-3-氧丙基)脲基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(131F)
tert-butyl 4-(4-(1-(3-ethoxy-3-oxopropyl)ureido)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將131E(6.5g,16.2mmol)溶於甲苯(100mL)中，依次加入乙醛肟(2.95g,50mmol)，氯化銦(III)四水合物(1.46g,5mmol)，130℃反應3h。冷卻至室
溫，加入100mL乙酸乙酯和100mL飽和碳酸氫鈉水溶液後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-10/1)得到131F(5.6g，82.5%)。
LCMS m/z=421.2[M+H]+。
第六步：4-(4-(2,4-二氧代四氫嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(131G)
tert-butyl 4-(4-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將131F(5.6g,13.3mmol)溶於乙腈(50mL)中，加入苄基三甲基氫氧化銨(40%甲醇溶液)(8.3g,20mmol)，氮氣保護，90℃反應15min。反應完後，冷卻至室溫，用150mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到131G(3.7g，收率：74%)。
LCMS m/z=375.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.64(s,1H),7.11(d,2H),6.86(d,2H),3.74(t,2H),3.63-3.45(m,4H),3.16-3.02(m,4H),2.74(t,2H),1.41(s,9H)。
第七步：1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131H)
1-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將131G(3.7g,9.9mmol)溶於DCM(40mL)，室溫下加入三氟乙酸(10mL)，攪拌3h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=7-8，減壓濃縮後得到131H(2.7g)，直接用於下一步。
第八步：4-((4-(4-(2,4-二氧代四氫嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)
甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(131I)
tert-butyl 4-((4-(4-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將131H(1.37g,5mmol)，1-第三丁氧羰基哌啶-4-甲醛混合於二氯甲烷(20mL)與2ml醋酸中，室溫攪拌10min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(2.12g,10mmol)，室溫下攪拌0.5h。加入100mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=7-8後分層，有機層減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1-10/1)得到131I(1.3g，收率55%)。
LCMS m/z=472.1[M+H]+。
第九步：1-(4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131J)的三氟乙酸鹽
1-(4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione；Trifluoroacetate
將131I(1.3g,2.76mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室溫攪拌3h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第十步：1-(4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131K)
1-(4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將上一步的131J三氟乙酸鹽粗產物溶於DMSO(25mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(828mg,3.3mmol)和碳酸氫鈉(2.77g,33mmol)，100℃攪拌12h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到131K(1.1g，收率：66%)。
LCMS m/z=603.3[M+H]+。
第十一步：1-(4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131L)
1-(4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將131K(1.1g,1.83mmol)溶於乙醇/水(20mL，3：1)中，依次加入鐵粉(530mg，9.5mmol)，氯化銨(500mg，9.3mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到131L，黃色固體(860mg，收率：82.3%)。
LCMS m/z=573.4[M+H]+。
第十二步：1-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物131)
1-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-
1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將131L(200mg,0.35mmol)和107A(178mg,0.5mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物131的三氟乙酸鹽，向化合物131的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物131(80mg，收率：25.6%)。
LCMS m/z=446.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.15(s,1H),8.00-7.89(m,3H),7.86(s,1H),7.66-7.45(m,4H),7.34(s,1H),7.20(d,1H),6.88(d,1H),4.19-3.98(m,10H),3.98-3.69(m,10H),3.44-3.23(m,2H),2.97-2.84(m,2H),2.62-2.45(m,1H),2.37-2.19(m,2H),2.12-1.98(m,2H),1.97-1.81(m,7H),1.15-1.00(m,2H),0.70-0.53(m,2H)。
實施例132：化合物132的製備
第一步：(1-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物132)
1-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將131L(200mg,0.35mmol)和109B(158mg，0.5mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物132的三氟乙酸鹽，向化合物132的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物132(60mg，收率：20.2%)。
LCMS m/z=426.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.20(s,1H),8.00-7.91(m,2H),7.88-7.78(m,2H),7.66-7.47(m,5H),7.42-7.25(m,2H),7.18(t,1H),4.18(s,3H),4.13-4.03(m,7H),3.98-3.77(m,10H),3.43-3.31(m,2H),2.93(t,2H),2.66-2.46(m,1H),2.38-2.21(m,2H),2.15-1.99(m,2H),1.94(d,6H)。
實施例133：化合物133的製備
第一步：1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮(133A)
1-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將131G(2.4g,6.41mmol)溶於DCM(20mL)，室溫下加入三氟乙酸(20mL)，攪拌3h，減壓濃縮，殘留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液調節pH=9-10，分液，有機層減壓濃縮後得到133A粗產物(1.5g)。
第二步：4-(4-(4-(2,4-二氧代四氫嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(133B)
tert-butyl 4-(4-(4-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
將133A(1.5g)，4-氧代哌啶-1-羧酸第三丁酯(1.3g,6.56mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，依次加入醋酸(394mg,6.56mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(1.7g,8.21mmol)，室溫反應過夜，加入1N氫氧化鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到133B(1.2g，收率：48%)。
LCMS m/z=458.3[M+H]+。
第三步：1-(4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(133C)的三氟乙酸鹽
1-(4-(4-(piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione；trifluoroacetic acid
將133B(1.2g,2.62mmol)溶於DCM(15mL)，室溫下加入三氟乙酸(15mL)，室溫攪拌1h，減壓濃縮，殘留物直接用於下一步。
第四步：1-(4-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(133D)
1-(4-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將上一步的133C三氟乙酸鹽粗產物溶於DMSO(10mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(942mg,3.75mmol)和碳酸氫鈉(1.7g,20mmol)，100℃攪拌7h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到133D，黃色固體(0.3g，收率：20%)。
LCMS m/z=589.3[M+H]+。
第五步：1-(4-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(133E)
1-(4-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將133D(0.3g,0.51mmol)溶於乙醇/水(8mL，3：1)中，依次加入鐵粉(142mg，2.55mmol)，氯化銨(136mg，2.55mmol)，氮氣保護，80℃攪拌1h。冷卻至室溫，減壓抽濾，濾液減壓濃縮後，粗產物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到133E(220mg，收率：77%)。
第六步：1-(4-(4-(1-(4-(5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物133)
1-(4-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將133E(90mg,0.16mmol)和107A(76mg,0.21mmol)，溶於DMF(4mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(61mg,0.32mmol)，氮氣保護下100℃過夜反應。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)，殘留物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化得到化合物133的三氟乙酸鹽。將所得固體加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)中並用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮得到化合物133(15mg，白色固體，收率：11%)。
LCMS m/z=439.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.24(s,1H),8.05(s,1H),7.99(s,1H),7.95(dd,1H),7.64-7.54(m,3H),7.52-7.45(m,2H),7.17(d,1H),6.98(s,1H),6.79-6.71(m,1H),4.14(s,3H),4.10-4.00(m,4H),3.97-3.81(m,9H),3.62-3.52(m,1H),3.49-3.37(m,2H),3.14-3.00(m,2H),2.93-2.83(m,2H),2.45-2.32(m,2H),2.19-2.05(m,2H),1.93-1.78(m,7H),1.08-0.97(m,2H),0.55-0.46(m,2H)。
實施例134：化合物134的製備
第一步：1-(4-(4-(1-(4-((5-氯-4-(2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物134)
1-(4-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將133E(90mg,0.16mmol)和109B(76mg,0.24mmol)，溶於DMF(4mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(61mg,0.32mmol)，氮氣保護下100℃過夜反應。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-
20/1)，殘留物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈流動相B：水(含0.1% TFA))純化得到化合物134的三氟乙酸鹽。將所得固體加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)中並用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮得到化合物134(31mg，白色固體，收率：23%)。
LCMS m/z=419.8[(M+H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.23-8.19(m,1H),8.13-8.05(m,3H),7.73-7.67(m,1H),7.67-7.58(m,2H),7.59-7.47(m,3H),7.33-7.25(m,1H),7.21-7.12(m,1H),7.08(s,1H),4.19(s,3H),4.16-4.04(m,4H),4.03-3.88(m,7H),3.74-3.63(m,1H),3.59-3.49(m,1H),3.30-3.17(m,1H),3.04-2.87(m,4H),2.52-2.38(m,1H),2.30-2.13(m,1H),1.95(s,3H),1.91(s,3H),1.89-1.76(m,2H),0.68-0.58(m,2H)。
實施例135：化合物135的製備
第一步：4-(4-(2-甲氧基-2-氧乙基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(135A)
tert-butyl 4-(4-(2-methoxy-2-oxoethyl)phenyl)piperazine-1-
carboxylate
氮氣保護，500mL單口瓶中加入2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(10.0g,43.65mmol)，第三丁基哌嗪-1-羧酸酯(12.2g,65.47mmol)，溶於300mL 1,4-二氧六環中，然後向其中加入S-(-)-1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(2.72g，4.37mmol)，醋酸鈀(0.98g，4.37mmol)和碳酸銫(35.56g，109.13mmol)，氮氣置換三次，100℃反應16h。降溫至室溫，將反應液過濾，除去殘渣，濾液濃縮後加入乙酸乙酯溶解，加入水，然後乙酸乙酯萃取三次。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱層析純化，得135A(9.5g，收率65%)。
LCMS m/z=335.1[M+H]+。
第二步：4-(4-(4-氰基-1-甲氧基-1-氧代丁烷-2-基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(135B)
tert-butyl 4-(4-(4-cyano-1-methoxy-1-oxobutan-2-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將化合物135A(8.0g,23.95mmol)溶於甲苯(80mL)中，加入烯丙基腈(1.93g,28.7mmol)和苄基三甲基氫氧化銨的甲醇溶液(wt%=40%,501mg，1.2mmol)，室溫下攪拌過夜，加入50mL水和100mL乙酸乙酯，萃取分液，收集有機相，減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=6/1-3/1)得到135B(2.2g，收率24%)。
LCMS m/z=388.2[M+H]+。
第三步：4-(4-(5-氨基-1-甲氧基-1,5-二氧戊烷-2-基)苯基)哌嗪-1-羧
酸第三丁酯(135C)
tert-butyl 4-(4-(5-amino-1-methoxy-1,5-dioxopentan-2-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將135B(2.2g,5.68mmol)溶於甲苯(20mL)中，加入乙醛肟(1.0g,17.0mmol)和氯化銦的四水合物(832mg，2.84mmol)，130℃攪拌3h。冷卻至室溫後加入50mL乙酸乙酯和20mL水，萃取分液，收集有機相，加入飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到135C(1.0g，收率43%)。
LCMS m/z=406.3[M+H]+。
第四步：4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(135D)
tert-butyl 4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將135C(1.0g,2.47mmol)溶於乙腈(20mL)中，升溫至60℃，向反應液中滴加苄基三甲基氫氧化銨的甲醇溶液(wt%=40%,2.06g，4.94mmol)，攪拌20min。冷卻至室溫，加入20mL水和50mL二氯甲烷萃取，收集有機層，加入20mL水洗滌，加入無水硫酸鈉乾燥有機相，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-25/1)得到135D(420mg，收率：46%)。
LCMS m/z=374.3[M+H]+。
第五步：3-(4-(哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135E)的鹽酸鹽
3-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione；HCl
將135D(400mg,1.07mmol)溶解在1mL甲醇中，加入4N鹽酸/二氧六環溶液(3mL)，室溫攪拌1h。將反應液減壓濃縮，得到135E的鹽酸鹽粗產物，直接用於下一步。
第六步：4-((4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(135F)
tert-butyl 4-((4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將135E的鹽酸鹽的粗產物溶於10mL甲醇中，加入碳酸氫鈉(180mg,2.14mmol)的水(0.2mL)溶液，室溫攪拌10min，減壓濃縮除盡水分，加入二氯甲烷(20mL)和醋酸(2mL)的混合溶液將其溶解，加入1-第三丁氧羰基哌啶-4-甲醛(227mg,1.07mmol)，室溫下攪拌1h，再向其中加入三乙醯基硼氫化鈉(677mg,3.21mmol)，室溫下繼續攪拌2h。加入20mL二氯甲烷和5mL 1N氫氧化鈉水溶液後分層，收集有機層，減壓乾燥，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到135F(300mg，收率：60%)。
LCMS m/z=471.2[M+H]+。
第七步：3-(4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135G)的鹽酸鹽
3-(4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione；HCl
將135F(300mg,0.64mmol)溶解在0.5mL甲醇中，加入4N鹽酸/二氧六環溶液(3mL)，室溫攪拌1h。將反應液減壓濃縮，得到135G的鹽酸鹽粗產物，直接用於下一步。
第八步：3-(4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135H)
3-(4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將135G的鹽酸鹽粗產物溶於10mL二甲基亞碸中，加入碳酸氫鈉(538mg,6.4mmol)固體，室溫攪拌10min後，繼續加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(161mg,0.64mmol)，100℃反應過夜。將反應液冷卻至室溫，加入30mL乙酸乙酯稀釋後，加水(20mL×3)洗滌，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得粗產物。粗產物經矽膠柱層析純化(流動相：DCM/MeOH(V/V)=15/1)得到135H(180mg，兩步收率：47%)。
LCMS m/z=602.3[M+H]+。
第九步：3-(4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135I)
3-(4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將135H(180mg,0.3mmol)溶於四氫呋喃(12mL)中，加入氯化銨(80mg,1.5mmol)的水(2mL)溶液，加入鋅粉(98mg,1.5mmol)，室溫反應20min，反應液經過矽藻土過濾，濾液中加入10mL飽和碳酸氫鈉溶液，再用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到135I(130mg，收率：74%)。
LCMS m/z=286.7[(M+2H)/2]+。
第十步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物135)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將135I(130mg,0.23mmol)和109B(79mg,0.25mmol)，溶於DMF(3mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(131mg,0.69mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(10ml×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到化合物135)(19mg，收率：10%)。
LCMS m/z=426.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.19(s,1H),10.75(s,1H),8.50-8.36(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.57-7.44(m,1H),7.29-7.12(m,1H),7.11-7.03(m,2H),7.02-6.96(m,1H),6.93-6.86(m,2H),6.81(s,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.73(dd,1H),3.18-3.03(m,
6H),2.73-2.57(m,3H),2.54-2.40(m,5H),2.36-2.22(m,2H),2.20-2.06(m,1H),2.06-1.99(m,1H),1.83-1.71(m,8H),1.69-1.60(m,1H),1.39-1.27(m,2H)。
實施例136：化合物136的製備
第一步：1-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物136)
1-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將131L(200mg,0.35mmol)和40A(156mg,0.4mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物136的三氟乙酸鹽，向化合物136的三氟乙酸鹽中加入20mL二氯甲烷和50mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物136(100mg，收率：30.9%)。
LCMS m/z=928.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.49-8.42(m,1H),
8.42-8.35(m,1H),8.33-8.25(m,1H),8.08-7.99(m,2H),7.99-7.89(m,1H),7.88-7.77(m,6H),7.76-7.69(m,3H),7.60-7.48(m,2H),4.40-3.66(m,20H),3.62-3.46(m,2H),3.19-3.05(m,2H),2.77-2.60(m,1H),2.47-2.33(m,2H),2.28-2.12(m,8H)。
實施例137：化合物137的製備
第一步：1-(4-(4-(1-(4-(5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氫嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮(化合物137)
1-(4-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
將133E(70mg,0.13mmol)和40A(78mg,0.20mmol)，溶於DMF(4mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(49mg,0.26mmol)，氮氣保護下100℃過夜反應。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)，殘留物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈流動相B：水(含0.1% TFA))純化得到化合物137的三氟乙酸鹽。將所得固體加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)中並用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮得到化合物137(17mg，收率：14%)。
LCMS m/z=457.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.21(s,1H),8.10(d,3H),7.69(s,1H),7.62(d,2H),7.59-7.47(m,3H),7.29(t,1H),7.17(t,1H),7.08(s,1H),4.20(s,3H),4.16-4.03(m,5H),4.00-3.86(m,9H),3.54(d,2H),3.24(t,2H),2.93(t,2H),2.46(d,2H),2.29-2.16(m,2H),1.94(d,6H)。
實施例138和實施例139：化合物138和化合物139的製備
取500mg化合物65使用SFC製備分離純化。SFC製備分離條件：儀器：Waters 150 MGM；色譜柱：DAICEL CHIRALCEL AD(250mm×30mm,10μm)；流動相：A for CO2 and B for IPA+ACN(0.1%NH3˙H2O)；梯度：70% phase B等度沖提；流速：100mL/min；背壓：100bar；柱溫：35℃；波長：220nm。
SFC分析條件：儀器：SHIMADZU LC-30AD sfc；色譜柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流動相：A for CO2 and B for IPA+ACN(0.05%DEA)；梯度：B 60%；流速：3mL/min；背壓：100bar；柱溫：35℃；波長：220nm。
經製備分離後，合併相同保留時間的組分，減壓濃縮得到化合物138(220mg)和化合物139(200mg)。
化合物138：
SFC分析條件下保留時間1.6min，
LCMS m/z=498.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.58-8.40(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.78-7.64(m,2H),7.63-7.52(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,2H),7.27(dd,1H),7.22-7.10(m,1H),6.86(s,1H),5.07(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.57-3.39(m,4H),3.15-3.00(m,2H),2.97-2.77(m,1H),2.72-2.51(m,8H),2.35-2.21(m,2H),2.07-1.94(m,1H),1.91-1.71(m,8H),1.70-1.56(m,1H),1.40-1.26(m,2H)。
化合物139：
SFC分析條件下保留時間2.5min，
LCMS m/z=498.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.58-8.41(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.75-7.65(m,2H),7.62-7.51(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,2H),7.28(dd,1H),7.22-7.09(m,1H),6.86(s,1H),5.07(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.55-3.39(m,4H),3.14-3.01(m,2H),2.99-2.79(m,1H),2.69-2.51(m,8H),2.35-2.23(m,2H),2.06-1.96(m,1H),1.90-1.72(m,8H),1.70-1.57(m,1H),1.40-1.26(m,2H)。
實施例140：化合物140的製備
第一步：3-(5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(化合物140)
3-(5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
將105G(300mg,0.48mmol)和109B(228mg,0.72mmol)，溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(182mg,0.96mmol)，氮氣保護下100℃過夜反應。冷卻至室溫，加入20mL飽和碳酸氫鈉水溶液和20mL二氯甲烷萃
取，有機層減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)，殘留物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈流動相B：水(含0.1% TFA))純化得到化合物140的三氟乙酸鹽。將所得固體加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)中並用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮得到化合物140(150mg，收率：35%)。
LCMS m/z=906.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 11.21(s,1H),10.93(s,1H),8.44(s,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.85(s,1H),7.61(s,1H),7.56-7.45(m,2H),7.10-7.04(m,2H),7.04-6.90(m,2H),6.81(s,1H),5.05(dd,1H),4.45-4.14(m,2H),3.81(d,6H),3.09(d,2H),2.90(ddd,1H),2.68-2.54(m,3H),2.29(d,2H),2.03-1.91(m,1H),1.88-1.71(m,8H)。
實施例141：化合物141的製備
第一步：(2-氨基-5-氟苯基)二甲基氧化膦(141A)
(2-amino-5-fluorophenyl)dimethylphosphine oxide
將4-氟-2-碘苯胺(5.00g,21.10mmol)、二甲基氧化膦(2.14g,27.43mmol)、磷酸鉀(6.72g,31.65mmol)、醋酸鈀(0.24g,1.06mmol)、Xant-Phos(0.61g,1.06mmol)和無水硫酸鎂(2.54g,21.1mmol)依次加入到1,4-二氧六環(50ml)中，氮氣置換三次，100℃攪拌8h。冷卻至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，
殘留物柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)=1/1~二氯甲烷/甲醇(V/V)=30/1)得到141A(3g，收率：76%)。
LCMS m/z=188.1[M+H]+。
第二步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦(141B)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-5-fluorophenyl)dimethylphosphine oxide
將141A(1.50g,7.97mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(3.63g,15.94mmol)溶於NMP(10ml)，加入DIPEA(1.24g,9.56mmol)，120℃攪拌1h。冷卻至室溫，加入30mL水和30mL乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌2次。減壓濃縮，殘留物用10mL MTBE打漿，過濾，減壓乾燥得到141B(1.5g，收率：50%)。
LCMS m/z=378.0[M+H]+。
第三步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物141)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(1.20g,1.87mmol)和141B(0.71g,1.87mmol)溶於DMF(10mL)中，加入對甲苯磺酸一水化合物(0.71g,3.74mmol)，100℃攪拌過夜。冷
卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，析出固體，過濾，濾餅乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/3-100/5)。所得殘留物加入8mL乙腈，70℃攪拌1h。過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物141(0.44g，收率：24%)。
LCMS m/z=491.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.06(s,1H),10.78(s,1H),8.30(s,1H),8.17(s,1H),8.16(s,1H),7.98(s,1H),7.82(s,1H),7.68(d,1H),7.61(s,1H),7.44-7.36(m,1H),7.34(d,1H),7.26(d,1H),6.81(s,1H),6.68(s,1H),5.11-5.03(m,1H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.49-3.40(m,4H),3.13-3.02(m,2H),2.95-2.81(m,1H),2.70-2.45(m,8H),2.29(d,2H),2.06-1.97(m,1H),1.78(d,6H),1.84-1.60(m,3H),1.39-1.27(m,2H)。
實施例142：化合物142的製備
第一步：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦(142A)
(2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)-5-fluorophenyl)dimethylphosphine oxide
將141A(1.50g,7.97mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(2.92g,15.94mmol)溶於NMP(10ml)，加入DIPEA(1.24g,9.56mmol)，120℃攪拌1h。冷卻至室溫，加入30mL水和30mL乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌2次。減壓濃縮，殘留物用10mL MTBE打漿，過濾，減壓乾燥得到142A(1.4g，收率：52%)。
LCMS m/z=334.0[M+H]+。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2-氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物142)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將45F(1.20g,1.87mmol)和142A(0.62g,1.87mmol)溶於DMF(10ml)中，加入對甲苯磺酸一水化合物(0.71g,3.74mmol)，100℃攪拌過夜。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，析出固體，過濾，濾餅乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/3-100/5)。所得殘留物加入8mL乙腈，70℃攪拌1h。過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物142(0.8g，收率：45%)。
LCMS m/z=469.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.08-11.03(m,1H),8.42(s,1H),8.17(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.83(s,1H),7.68(d,1H),7.62(s,1H),7.46-7.38(m,1H),7.34(d,1H),7.26(d,1H),6.81(s,1H),6.67(s,1H),5.10-5.03(m,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H)3.49-3.40(m,4H),3.15-3.01(m,2H),2.96-2.79(m,1H),2.70-2.45(m,8H),2.29(d,2H),2.05-1.97(m,1H),1.79(d,6H),1.84-1.60(m,3H),1.41-1.28(m,2H)。
實施例143：化合物143的製備
第一步：4-(1-(苄氧基)羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(143A)
tert-butyl4-(1-((benzyloxy)carbonyl)piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
將N-Cbz-哌啶-4-羧酸(7.80g，29.63mmol)，N-Boc-哌嗪(5.52g，29.63mmol)，HOBT(4.40g，32.59mmol)和二氯甲烷(80mL)加入反應瓶中，冰水浴冷卻下，加入EDCI(8.52g，44.44mmol)，加完室溫反應3h。反應液飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑DCM/CH3OH=50/1至20/1，得143A(10g，收率：78.2%)。
第二步：4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(143B)
tert-butyl 4-(piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
將143A(10g，23.17mmol)，甲醇(100mL)和鈀碳(2g)加入反應瓶中，氫氣換氣三次，室溫反應約18h，鋪適量矽藻土，抽濾，濾餅少量甲醇洗滌，濾液減壓濃縮乾，加入MTBE(50mL)攪拌打漿30min，減壓抽濾，濾餅減壓濃縮乾，得143B(6.30g，收率：91.4%)。
第三步：4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(143C)
tert-butyl 4-(1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
將143B(6.30g，21.18mmol)，1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C，5.30g，21.18mmol)，碳酸鉀(4.39g，31.77mmol)和DMSO(70mL)加入反應瓶中，100℃反應2-3h，將反應液冷卻至室溫，加入甲醇(35mL)，滴入水(200mL)，加完攪拌1h，抽濾，濾餅少量水洗，抽乾後濾餅轉移至反應瓶中，加入MTBE(100mL)，攪拌下滴入石油醚(50mL)，攪拌打漿1h，抽濾，濾餅少量石油醚洗滌，減壓濃縮乾，得143C(10g，收率：89.5%)。
第四步：4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(143D)
tert-butyl 4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
將143C(10g，18.96mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(3.58g，28.44mmol)，Pd(dppf)Cl2．DCM(2.31g，2.84mmol)，碳酸鉀(8.14g，56.88mmol)和1,4-二氧六環(100mL)，水(30mL)加入反應瓶中，氮氣換氣三次，100℃反應3h左右。水浴冷卻，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，攪拌分層，有機層飽和氯化鈉溶液(50mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1，得143D(8.2g，收率：81.81%)。
第五步：(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-
4-基)(哌嗪-1-基)甲酮(143E)
(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)(piperazin-1-yl)methanone
將143D(8.2g，15.51mmol)和DCM(40mL)加入反應瓶中，攪拌下加入三氟乙酸(16mL)，室溫反應過夜，約16h。反應液減壓濃縮乾，殘餘物加入二氯甲烷(50mL)，滴入1N氫氧化鈉溶液調pH 12-13，分層，有機層無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，得143E(6.2g，收率：93.3%)。
第六步：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(143F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將143E(4.0g，9.34mmol)、2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-5-氟-異吲哚-1,3-二酮(2.58g，9.34mmol)、DIPEA(1.81g，14.01mmol)和DMSO(40mL)加入反應瓶中，90℃反應3h，冰水冷卻，加入乙酸乙酯(150mL)和水(100mL)，攪拌5min，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(100mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至20/1，得143F(3g，收率：46.9%)。
第七步：5-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(143G)
5-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將143F(2g，2.92mmol)，鋅粉(0.95g，14.60mmol)，氯化銨(0.78g，14.60mmol)，四氫呋喃(20mL)和水(8mL)加入反應瓶中，室溫反應1h，加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌2min，鋪適量矽藻土，抽濾，二氯甲烷(30mL×2)洗滌，濾液分層，有機層水(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，得143G(黃色固體，1.6g，收率：83.7%)。
第八步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物143)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將143G(0.4g，0.61mmol)，107A(0.22g，0.61mmol)，一水合對甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反應瓶中，100℃反應約18h，冰水冷卻下加入二氯甲烷(30mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(20mL×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1至20/1，得化 合物143(0.23g，收率：38.7%)。
LCMS m/z=487.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.11(s,1H),11.07(s,1H),8.29-8.21(m,1H),8.14(s,1H),8.07(s,1H),7.96(s,1H),7.91(s,1H),7.71(d,1H),7.62(s,1H),7.36(d,1H),7.29-7.20(m,2H),6.82(s,1H),6.53-6.33(m,1H),5.12-5.04(m,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.76-3.63(m,4H),3.58-3.45(m,4H),3.17-3.07(m,2H),2.95-2.67(m,4H),2.64-2.45(m,2H),2.07-2.00(m,1H),1.85-1.72(m,11H),0.95-0.88(m,2H),0.54-0.48(m,2H)。
實施例144：化合物144的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物144)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將143G(0.4g，0.61mmol)，(2-((2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(109B，0.22g，0.61mmol)，一水合對甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反應瓶中，100℃反應約18h後，冰水冷卻下加入二氯甲烷(30mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(20mL×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：
DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1至20/1，得化合物144(0.26g，收率：45.55%)。
LCMS m/z=467.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.22(s,1H),11.07(s,1H),8.50-8.39(m,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.93(s,1H),7.87(s,1H),7.71(d,1H),7.63(s,1H),7.55-7.46(m,1H),7.36(d,1H),7.28-7.22(m,1H),7.05-6.91(m,2H),6.81(s,1H),5.12-5.04(m,1H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),377-3.61(m,4H),3.57-3.43(m,4H),3.17-3.07(m,2H),2.96-2.66(m,4H),2.64-2.45(m,2H),2.08-1.98(m,1H),1.86-1.68(m,10H)。
實施例145：化合物145的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物145)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將143G(0.4g，0.61mmol)，55B(0.24g，0.61mmol)，一水合對甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反應瓶中，100℃反應約18h後，冰水冷卻下加入二氯甲烷(30mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(20mL×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1至20/1，所得
粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備產物以飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化游離得到化合物145(0.06g，收率：9.65%)。
LCMS m/z=509.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.06(s,1H),10.84(s,1H),8.20-8.10(m,3H),7.94(s,1H),7.91(s,1H),7.71(d,1H),7.60(s,1H),7.37(d,1H),7.29-7.19(m,2H),6.81(s,1H),6.54-6.35(m,1H),5.12-5.03(m,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.75-3.63(m,4H),3.58-3.45(m,4H),3.16-3.07(m,2H),2.96-2.67(m,4H),2.65-2.45(m,2H),2.06-1.99(m,1H),1.85-1.71(m,11H),0.94-0.87(m,2H),0.53-0.47(m,2H)。
實施例146：化合物146的製備
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物146)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將143G(0.4g，0.61mmol)，108B(0.22g，0.61mmol)，一水合對甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反應瓶中，100℃反應約18h
後，冰水冷卻下加入二氯甲烷(30mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(20mL×3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1至20/1，所得粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化後的產物以飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化游離得到化合物146(0.09g，收率：15%)。
LCMS m/z=489.6[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.06(s,1H),10.95(s,1H),8.40-8.28(m,1H),8.18(s,2H),7.91(s,1H),7.86(s,1H),7.71(d,1H),7.61(s,1H),7.53-7.44(m,1H),7.36(d,1H),7.29-7.23(m,1H),7.05-6.90(m,2H),6.80(s,1H),5.11-5.03(m,1H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),3.75-3.63(m,4H),3.57-3.45(m,4H),3.16-3.07(m,2H),2.94-2.66(m,4H),2.65-2.45(m,2H),2.05-1.97(m,1H),1.83-1.70(m,10H)。
實施例147：化合物147的製備
第一步：4-氟-4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯(147A)
tert-butyl 4-fluoro-4-formylpiperidine-1-carboxylate
將1-第三丁氧羰基-4-氟-4-(羥甲基)哌啶(14g，60.01mmol)和二氯甲烷(210mL)加入反應瓶中，攪拌溶清後，冰水冷卻下加入戴斯-馬丁試劑(80.91g，120.02mmol)，室溫反應約3h，加入飽和碳酸氫鈉溶液(300mL)，攪拌5min，鋪適量矽藻土，抽濾，濾餅二氯甲烷(100mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮後殘餘物柱層析純化(洗脫劑PE/EA=1/1)得147A(5g，收率：36.03%)。
第二步：苄基4-(1-(第三丁氧基羰基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(147B)
benzyl 4-((1-(tert-butoxycarbonyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將147A(5g，21.62mmol)，苄基-1-哌嗪碳酸酯(4.76g，21.62mmol)和二氯甲烷(100mL)加入反應瓶中，攪拌下加入冰乙酸(2.59g，43.24mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(11.45g，54.05mmol)，室溫過夜反應約18h，加入水(100mL)，攪拌5min，靜置分層，有機層飽和碳酸氫鈉溶液(100mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑PE/EA=2/1，得147B(6.2g，收率：65.84%)。
第三步：4-(4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(147C)
benzyl 4-((4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將147B(6.2g，14.24mmol)和二氯甲烷(30mL)加入反應瓶中，攪拌溶解，滴入三氟乙酸(12mL)，加完室溫反應3h，減壓濃縮乾，殘餘物加入DCM(50mL)，1N氫氧化鈉溶液調pH 12左右，靜置分層；水層DCM(30mL)提取一次，有機層合併，飽和氯化鈉溶液(60mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減
壓濃縮乾，得147C(4.2g，收率：87.93%)。
第四步：苄基4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(147D)
benzyl4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將147C(4.2g，12.52mmol)，1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C，3.13g，12.52mmol)，碳酸鉀(3.46g，25.04mmol)和DMSO(40mL)加入反應瓶中，100℃反應3h左右，冷卻至室溫，加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(50mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮後，矽膠柱層析純化(洗脫劑PE/EA=PE至5/1至3/1至2/1)，得147D(5g，收率：70.63%)。
第五步：苄基4-((4-氟-1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(147E)
Benzyl 4-((4-fluoro-1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
將147D(5g，8.84mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(1.67g，13.26mmol)，Pd(dppf)Cl2．DCM(1.07g，1.33mmol)，碳酸鉀(2.44g，17.68mmol)和1,4-二氧六環(50mL)，水(20mL)加入反應瓶中，氮氣換氣三次，100℃反應3h左右，水浴冷卻，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，攪拌分層，有機層飽和氯化鈉溶液(50mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1，得147E(4.1g，收率：81.85%)。
第六步：4-(4-氟-4-(哌啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺(147F)
4-(4-fluoro-4-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-1-yl)-2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)aniline
將147E(0.5g，0.88mmol)，Pd/C(0.1g)，甲醇(5mL)和冰乙酸(1mL)加入反應瓶中，氫氣換氣三次，室溫氫化反應約20h，鋪適量矽藻土，過濾，濾餅少量甲醇洗滌，濾液減壓濃縮乾，得147F，直接用於下一步。
第七步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(147G)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將147F(0.35g，0.88mmol)，2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-5-氟-異吲哚-1,3-二酮(0.24g，0.88mmol)，DIPEA(0.17g，1.32mmol)和DMSO(5mL)加入反應瓶中，100℃反應3h，冰水冷卻，加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，攪拌5min，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(10mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1，得147G(0.10g，收率：17.45%)。
第八步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物147)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將147G(0.10g，0.15mmol)，(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦(55B，0.06g，0.15mmol)，一水合對甲苯磺酸(0.057g，0.30mmol)和DMF(2mL)加入反應瓶中，100℃反應約18h，水冷卻下加入二氯甲烷(30mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(20mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至30/1，得化合物147(0.09g，收率：58.66%)。
LCMS m/z=511.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.06(s,1H),10.84(s,1H),8.22-8.10(m,3H),7.99(s,1H),7.90(s,1H),7.68(d,1H),7.59(s,1H),7.35(s,1H),7.30-7.19(m,2H),6.83(s,1H),6.48(s,1H),5.07(dd,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.47(s,4H),2.98-2.82(m,5H),2.76-2.52(m,8H),2.09-1.93(m,4H),1.91-1.67(m,8H),0.94-0.83(m,2H),0.56-0.48(m,2H)。
實施例148：化合物148的製備
第一步：3-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯(148A)
tert-butyl 3-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
將80B(3.17g，9.99mmol)和3-氧代氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯(1.71g,9.99mmol)溶於DCM(100mL)中，加入醋酸(1.71mL,29.97mmol)，40℃攪拌1h。然後冷至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(4.23g,19.98mmol)，室溫反應3h。反應結束後，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌並分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-20/1)得到148A(2.42g，收率：51%)。
LCMS m/z=473.2[M+H]+。
第二步：1-(氮雜環丁烷-3-基)-4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(148B)
1-(azetidin-3-yl)-4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazine
將148A(2.40g,5.08mmol)加入燒瓶中，攪拌下緩慢加入4N鹽酸的二氧六環溶液(13mL)，室溫下反應1h，減壓濃縮，向殘留物中加入20mL二氯甲烷和碳酸氫鈉固體(2.13g,25.4mmol)，常溫下攪拌10min後，過濾除去過量的碳酸氫鈉固體，濾液濃縮得到148B(1.5g，收率：79%)。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-yl)氮雜環丁烷-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(148C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(3-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將148B(1.5g，4.03mmol)溶於DMSO(15mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮(1.11g,4.03mmol)和DIPEA(2.0mL,12.09mmol)，90℃攪拌過夜。冷卻至室溫，加入飽和碳酸氫鈉溶液，析出大量固體，過濾，濾餅減壓乾燥後，用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到148C(1.35g，收率：53%)。
LCMS m/z=629.2[M+H]+。
第四步：5-(3-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(148D)
5-(3-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將148C(1.3g,2.07mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，依次加入氯化銨(1.11g，20.7mmol)的水(5mL)溶液，鋅粉(1.35g，20.7mmol)，加畢，40℃攪拌0.5h。反應結束後冷卻至室溫，減壓抽濾，向濾液中加入二氯甲烷(20mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)，萃取分液，有機相經過無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮後得到148D(900mg，收率：73%)。
LCMS m/z=599.2[M+H]+。
第五步：5-(3-(4-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物148)
5-(3-(4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將148D(200mg,0.33mmol)和107A(120mg,0.33mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，黃色固體析出，過濾，得到的固體用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到粗純化的產物。柱層析得到的粗產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向收集的製備液中加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，經過無水硫酸鈉乾燥後濃縮得到化合物148(60mg，收率：20%)。
LCMS m/z=459.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.10(s,1H),11.05(s,1H),8.29-8.23(m,1H),8.13(s,1H),8.07(s,1H),8.00(s,1H),7.89(s,1H),7.66(d,1H),7.62(s,1H),7.22(dd,1H),6.83-6.82(m,2H),6.69(dd,1H),6.51-6.40(m,1H),5.08-5.03(m,1H),4.16(t,2H),3.91-3.88(m,2H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.52-3.44(m,1H),2.99-2.84(m,5H),2.64-2.51(m,6H),2.06-1.96(m,1H),1.87-1.78(m,1H),1.75(d,6H),0.92-0.83(m,2H),0.58-0.41(m,2H)。
實施例149：化合物149的製備
第一步：5-(3-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物149)
5-(3-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將148D(200mg,0.33mmol)和(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(109B)(100mg,0.33mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，黃色固體析出，過濾，得到的固體用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到粗純化的產物。柱層析得到的粗產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向收集的製備液中加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，經過無水硫酸鈉乾燥後濃縮得到化合物149(50mg，收率：17%)。
LCMS m/z=439.6[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.21(s,1H),11.10-10.96(m,1H),8.68-8.64(m,1H),8.52-8.32(m,1H),8.21(s,1H),8.10(s,1H),7.98(s,1H),7.86(s,1H),7.66(d,1H),7.60(s,1H),7.54-7.42(m,1H),7.08-6.94(m,2H),6.85-6.76(m,2H),6.68(dd,1H),5.06(dd,1H),4.15(t,2H),3.96-3.86(m,2H),3.81(d,6H),3.50-3.40(m,1H),2.97-2.80(m,5H),2.59-2.52(m,4H),2.06-1.97(m,1H),1.76(d,6H)。
實施例150：化合物150的製備
第一步：5-(3-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物150)
5-(3-(4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將148D(200mg,0.33mmol)和(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦(55B)(130mg,0.5mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，黃色固體析出，過濾，得到的固體用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到粗純化的產物。柱層析得到的粗產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向收集的製備液中加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，經過無水硫酸鈉乾燥後濃縮得到化合物150(50mg，收率：16%)。
LCMS m/z=481.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.05(s,1H),10.84(s,1H),8.23-8.10(m,3H),7.98(s,1H),7.88(s,1H),7.66(d,1H),7.61(s,1H),7.21(dd,1H),6.85-6.78(m,2H),6.68(dd,1H),6.57-6.37(m,1H),5.06(dd,1H),4.16(t,2H),3.93-3.87(m,2H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.55-3.40(m,1H),2.98-2.80(m,5H),2.63-2.51(m,6H),2.08-1.96(m,1H),1.85-1.79(m,1H),1.74(d,6H),0.95-0.83(m,2H),0.56-0.44(m,2H)。
實施例151：化合物151的製備
第一步：5-(3-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物151)
5-(3-(4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將148D(200mg,0.33mmol)和(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(108B)(120mg,0.33mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，黃色固體析出，過濾，得到的固體用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到粗純化的產物。柱層析得到的粗產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向收集的製備液中加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，經過無水硫酸鈉乾燥後濃縮得到化合物151(50mg，收率：16%)。
LCMS m/z=461.6[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.05(s,1H),10.94(s,1H),8.38-8.27(m,1H),8.20(s,1H),8.18(s,1H),7.96(s,1H),7.85(s,1H),7.66(d,1H),7.59(s,1H),7.53-7.41(m,1H),7.05-6.93(m,2H),6.82(s,2H),6.68(dd,1H),5.06(dd,1H),4.15(t,2H),3.95-3.86(m,2H),3.81(d,6H),3.50-3.41(m,1H),2.96-2.81(m,5H),2.62-2.53(m,4H),2.05-1.95(m,1H),1.75(d,6H)。
實施例152：化合物152的製備
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物152)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將135I(165mg,0.29mmol)和107A(110mg,0.32mmol)，溶於DMF(4mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(170mg,0.87mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，黃色固體析出，過濾，得到的固體用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到粗純化的產物，進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向收集的製備液中加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，經過無水硫酸鈉乾燥後濃縮得到化合物152(50mg，收率：19%)。
LCMS m/z=446.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.19-11.04(m,1H),10.75(s,1H),
8.33-8.21(m,1H),8.14(s,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.88(s,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),7.05(d,2H),6.89(d,2H),6.82(s,1H),6.45(s,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.72(dd,1H),3.18-3.03(m,6H),2.68-2.57(m,3H),2.55-2.51(m,5H),2.34-2.26(m,2H),2.20-2.07(m,1H),2.04-1.94(m,1H),1.85-1.78(m,3H),1.75(d,6H),1.70-1.60(m,1H),1.42-1.26(m,2H),0.93-0.85(m,2H),0.53-0.46(m,2H)。
實施例153：化合物153的製備
第一步：4-(3-氟-4-(2-甲氧基-2-氧乙基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(153B)
tert-butyl 4-(3-fluoro-4-(2-methoxy-2-oxoethyl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
將153A(10.00g,40.48mmol)與N-Boc-哌嗪(11.31g,60.72mmol)溶於1,4-二氧六環(150mL)，加入醋酸鈀(0.91g,4.05mmol)，(S)-BINAP(2.52g,4.05mmol)以及碳酸銫(32.97g,101.20mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，冷卻至
室溫，矽藻土過濾，二氯甲烷洗滌濾餅3次，收集有機相，減壓濃縮，快速柱層析(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=3/1)得到153B(12.30g，收率：86%)
LCMS m/z=297.2[M-55]+。
第二步：4-(4-(4-氰基-1-甲氧基-1-氧代丁-2-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(153C)
tert-butyl 4-(4-(4-cyano-1-methoxy-1-oxobutan-2-yl)-3-fluorophenyl)piperazine-1-carboxylate
將153B(12.60g,35.75mmol)與丙烯腈(2.85g,53.63mmol)溶於甲苯(100mL)，加入苄基三甲基氫氧化銨(0.30g,1.79mmol)，室溫反應16h，500mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，快速柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=3/1)得到153C(5.00g，收率：34%)。
第三步：4-(4-(5-氨基-1-甲氧基-1,5-二氧代戊烷-2-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(153D)
tert-butyl 4-(4-(5-amino-1-methoxy-1,5-dioxopentan-2-yl)-3-fluorophenyl)piperazine-1-carboxylate
將153C(8.70g,21.46mmol)溶於甲苯(80mL)，加入乙醛肟(3.80g,64.38mmol)，以及氯化銦(III)四水合物(3.15g,10.73mmol)，130℃反應2h，反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-20/1)得到153D(4.7g，收率：52%)。
LCMS m/z=368.2[M-55]+。
第四步：4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁
酯(153E)
tert-butyl 4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-fluorophenyl)piperazine-1-carboxylate
將153D(4.70g,11.10mmol)溶於乙腈(50mL)，加入苄基三甲基氫氧化銨(9.28g,22.20mmol)，60℃反應1h，反應液冷卻至室溫，加入500mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到153E(3.4g，收率：78%)。
LCMS m/z=336.1[M-55]+。
第五步：3-(2-氟-4-(哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(153F)
3-(2-fluoro-4-(piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將153E(3.50g,8.94mmol)溶於甲醇(30mL)，室溫下滴加1,4-二氧六環的鹽酸溶液(10mL,4mol/L)，室溫反應3h，減壓濃縮除去溶劑，殘餘物再以300mL二氯甲烷複溶，碳酸氫鈉水溶液調節pH至鹼性，分液，收集有機相，水相經二氯甲烷萃取2次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得153F(2.6g)，直接用於下一步反應。
LCMS m/z=292.2[M+H]+。
第六步：4-((4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(153G)
tert-butyl 4-((4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將153F(2.60g,8.92mmol)，1-第三丁氧羰基哌啶-4-甲醛(1.90g,8.92mmol)溶於二氯甲烷(40mL)中，依次加入醋酸(2.14g,35.68mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(3.78g,17.84mmol)，室溫反應1h，加入碳酸氫鈉水溶液調節至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到153G(3.48g，收率：80%)。
第七步：3-(2-氟-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(153H)
3-(2-fluoro-4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將153G(3.48g,7.12mmol)溶於二氯甲烷(20mL)，室溫下滴加1,4-二氧六環的鹽酸溶液(6mL,4mol/L)，室溫反應3h，減壓濃縮除去溶劑，加入200mL甲醇溶解，加入碳酸鉀固體，攪拌30min，調節pH至鹼性，抽濾，濾餅經二氯甲烷洗滌，合併有機相，減壓濃縮得153H(2.7g，收率：98%)。
LCMS m/z=389.2[M+H]+。
第八步：3-(4-(4-((1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物153Ｉ)
3-(4-(4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
將153H(2.00g,5.15mmol)與1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(1.42g,5.67mmol)溶於DMSO(50mL)，加入碳酸鉀(1.42g,10.30mmol)，100℃反應2h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-20/1)得到153I(2.4g，收率：75%)。
LCMS m/z=618.1[M+H]+。
第九步：3-(2-氟-4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(153J)
3-(2-fluoro-4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將153I(2.40g,3.88mmol)，(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(0.78g,6.21mmol)溶於1,4-二氧六環(80mL)中，加入Pd(dppf)Cl2．DCM(0.32g,0.39mmol)，碳酸鉀(1.07g,7.76mmol)的水溶液(10mL)，氮氣置換3次，80℃反應2h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=3/1-純乙酸乙酯)得到153J(1.58g，收率：66%)。
LCMS m/z=620.3[M+H]+。
第十步：3-(4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(153K)
3-(4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-
yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
將153J(1.63g,2.63mmol)溶於四氫呋喃(30mL)，加入鋅粉(0.86g,13.15mmol)，再滴加氯化銨(0.70g,13.15mmol)的水溶液(5mL)，室溫反應1h，向反應液中加入5mL氨水以及20mL水，用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到153K，(1.5g)，直接用於下一步。
LCMS m/z=590.3[M+H]+。
第十一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物153)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
將153K(0.40g,0.68mmol)與107A(0.24g,0.68mmol)溶於DMF(20mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.39g,2.04mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物153(0.16g，收率：26%)。
LCMS m/z=455.2[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.10(s,1H),10.78(s,1H),8.30-8.22(m,1H),8.14(s,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.88(s,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),7.09(t,1H),6.82(s,1H),6.76-6.72(m,1H),6.71(s,1H),6.45(s,1H),3.89(dd,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.19-3.14(m,4H),3.09(d,2H),2.77-2.67(m,1H),2.63(t,2H),2.54-2.48(m,5H),2.29(d,2H),2.20-2.08(m,1H),2.01-1.92(m,1H),1.85-1.64(m,3H),1.76(s,3H),1.73(s,3H),1.71-1.63(m,1H),1.39-1.29(m,2H),0.93-0.86(m,2H),0.53-0.43(m,2H)。
實施例154：化合物154的製備
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物154)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
將153K(0.40g,0.68mmol)與109B(0.21g,0.68mmol)溶於DMF(20mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.39g,2.04mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物154，(0.17g，收率：30%)。
LCMS m/z=435.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.21(s,1H),10.78(s,1H),8.44(s,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.53-7.46(m,1H),7.09(t,1H),7.02-6.92(m,2H),6.81(s,1H),6.75-6.72(m,1H),6.71(s,1H),3.89(dd,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.19-3.13(m,4H),3.09(d,2H),2.77-2.66(m,1H),2.61(t,2H),2.55-2.45(m,5H),2.28(d,2H),2.20-2.08(m,1H),2.00-1.92(m,1H),1.83-1.72(m,2H),1.78(s,3H),1.74(s,3H),1.70-1.60(m,1H),1.37-1.28(m,2H)。
實施例155：化合物155的製備
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物155)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
將135I(165mg,0.29mmol)和40A(130mg,0.32mmol)，溶於DMF(4mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(170mg,0.87mmol)，100℃攪拌16h。冷卻至室溫，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，黃色固體析出，過濾，得到的固體用矽膠柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)得到的粗產品進一步SFC製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))。向收集的製備液中加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液使得溶液為鹼性，分離有機相，經過無水硫酸鈉乾燥後濃縮得到化合物155(50mg，收率：19%)。
LCMS m/z=464.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.37(s,1H),10.75(s,1H),8.56-8.41(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.62-7.52(m,3H),7.45(t,2H),7.39-7.31(m,1H),7.25-7.13(m,1H),7.06(d,2H),6.90(d,2H),6.86(s,1H),3.78(d,6H),3.75-3.68(m,1H),3.19-3.03(m,6H),2.71-2.57(m,3H),2.56-2.51(m,5H),2.28(d,2H),2.20-2.06(m,1H),2.05-1.95(m,1H),1.84(d,6H),1.78-1.71(m,2H),1.69-1.58(m,1H),1.39-1.26(m,2H)。
實施例156：化合物156的製備
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷醯基)-[1,1'-聯苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物156)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
將153K(0.40g,0.68mmol)與40A(0.27g,0.68mmol)溶於DMF(20mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.39g,2.04mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物156，(0.11g，收率：
17%)。
LCMS m/z=473.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.37(s,1H),10.79(s,1H),8.52-8.44(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.58(d,2H),7.55(s,1H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.25-7.14(m,1H),7.09(t,1H),6.86(s,1H),6.77-6.73(m,1H),6.72(s,1H),3.89(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.20-3.15(m,4H),3.09(d,2H),2.77-2.66(m,1H),2.62(t,2H),2.54-2.48(m,5H),2.28(d,2H),2.20-2.08(m,1H),2.01-1.92(m,1H),1.85(s,3H),1.82(s,3H),1.79-1.72(m,2H),1.67-1.58(m,1H),1.36-1.26(m,2H)。
實施例157：化合物157的製備
第一步：4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯(157B)
tert-butyl 4-(2-fluoro-4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
將157A(10.00g,62.86mmol)與N-Boc-哌嗪(11.71,62.86mmol)溶於DMF(50mL)，加入碳酸鉀(17.38g,125.72mmol)，50℃反應12h，反應液冷卻
至室溫，倒入200mL水中，有黃色固體析出，抽濾，濾餅經水洗3次後，將其複溶到300mL二氯甲烷中，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得157B(20.0g)，直接用於下一步反應。
LCMS m/z=270.1[M-55]+。
第二步：1-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪(157C)
1-(2-fluoro-4-nitrophenyl)piperazine
將157B(20.00g,61.47mmol)溶於二氯甲烷(50mL)，室溫下滴加1,4-二氧六環的鹽酸溶液(20mL,4mol/L)，室溫反應1h，減壓除去溶劑，加少量水使之溶解，氫氧化鈉水溶液調節pH至鹼性，二氯甲烷萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得157C(13.8g，收率：99%)，直接用於下一步反應。
LCMS m/z=226.1[M+H]+。
第三步：第三丁基4-((4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸酯(157D)
tert-butyl 4-((4-(2-fluoro-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將157C(12.8g,56.83mmol)，1-第三丁氧羰基哌啶-4-甲醛(12.12,56.83mmol)溶於二氯甲烷(130mL)中，依次加入醋酸(13.65g,227.32mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(24.09g,113.66mmol)，室溫反應4h，氫氧化鈉水溶液調節反應液至鹼性，分液收集有機相，水相經二氯甲烷萃取3次後與之前有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=1/1除去小極性雜質，二氯甲烷/甲醇(V/V)=20/1)得到157D，(24.0g，收率：99%)。
LCMS m/z=423.2[M+H]+。
第四步：4-((4-(4-氨基-2-氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(157E)
tert-butyl 4-((4-(4-amino-2-fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將157D(12.00g,28.40mmol)溶於乙酸乙酯(250mL)中，加入鈀碳(wt%=10%,5.00g)，1atm氫氣置換3次，30℃反應4h，直接矽藻土過濾除去鈀碳，二氯甲烷洗滌濾餅，合併有機相，減壓濃縮得到157E，(10.9g，收率：98%)，直接用於下一步。
LCMS m/z=393.3[M+H]+。
第五步：4-((4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(157F)
tert-butyl 4-((4-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)amino)-2-fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
150mL封管中，將157E(3.50g,8.92mmol)與化合物3-溴哌啶-2,6-二酮(5.14g,26.76mmol)溶於DMF(60mL)，加入碳酸氫鈉(4.50g,53.52mmol)，密閉，90℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入300mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和食鹽水洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=1/1)得到157F，(2.7g，收率：60%)。
LCMS m/z=504.3[M+H]+。
第六步：3-((3-氟-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-
2,6-二酮(化合物157G)
3-((3-fluoro-4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將157F(2.70g,5.36mmol)溶於二氯甲烷(50mL)，室溫下滴加1,4-二氧六環的鹽酸溶液(15mL,4mol/L)，室溫反應0.5h，減壓濃縮除去溶劑，殘餘物再以200mL甲醇複溶，加入碳酸鉀固體，攪拌30min，調節pH至鹼性，抽濾，濾餅經二氯甲烷洗滌，合併有機相，減壓濃縮得157G(2.16g，收率：99%)。
LCMS m/z=404.2[M+H]+。
第七步：3-((4-(4-((1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(157H)
3-((4-(4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將157G(2.06,5.11mmol)與1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(1.28g,5.11mmol)溶於DMSO(50mL)，加入碳酸氫鈉(2.15g,25.55mmol)，100℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-20/1)得到157H(1.71g，收率：53%)。
LCMS m/z=633.2[M+H]+。
第八步：3-((3-氟-4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物157I)
3-((3-fluoro-4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-
nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將157H(1.81g,2.86mmol)，(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(0.58g,4.58mmol)溶於1,4-二氧六環(40mL)中，加入Pd(dppf)Cl2．DCM(0.23g,0.29mmol)，碳酸鉀(0.79g,5.72mmol)的水溶液(5mL)，氮氣置換3次，80℃反應3h，反應液冷卻至室溫，加入200mL乙酸乙酯稀釋反應液，水洗3次，飽和氯化鈉洗滌1次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)=3/1-純乙酸乙酯)得到157I(0.43g，收率：24%)。
LCMS m/z=635.3[M+H]+。
第九步：3-((4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(157J)
3-((4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將157I(0.43g,0.67mmol)溶於四氫呋喃(18mL)，加入鋅粉(0.22g,3.35mmol)，再滴加氯化銨(0.18g,3.35mmol)的水溶液(3mL)，室溫反應0.5h，向反應液中加入2mL氨水以及10mL水，用二氯甲烷萃取3次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮，得到157J(0.41g)。
LCMS m/z=605.3[M+H]+。
第十步：3-((4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-
基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物157)
3-((4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將157J(0.13g,0.22mmol)與109B(0.07g,0.22mmol)溶於DMF(8mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.13g,0.66mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物157(10mg，收率：5%)。
LCMS m/z=442.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.20(s,1H),10.75(s,1H),8.48-8.39(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.97(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.50(dd,1H),7.04-6.93(m,2H),6.84(d,1H),6.81(s,1H),6.51(dd,1H),6.43(dd,1H),5.78(d,1H),4.29-4.21(m,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.08(d,2H),2.90-2.82(m,4H),2.78-2.68(m,1H),2.66-2.54(m,4H),2.54-2.45(m,2H),2.27(d,2H),2.13-2.05(m,1H),1.90-1.82(m,1H),1.82-1.70(m,9H),1.70-1.60(m,1H),1.31(d,2H)。
實施例158：化合物158的製備
第一步：3-((4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物158)
3-((4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將157J(0.13g,0.22mmol)與107A(0.08g,0.22mmol)溶於DMF(8mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.13g,0.66mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物158(10mg，收率：5%)。
LCMS m/z=462.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.10(s,1H),10.75(s,1H),8.30-8.20(m,1H),8.14(s,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.88(s,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),6.87-6.79(m,2H),6.51(dd,1H),6.48-6.38(m,2H),5.79(d,1H),4.29-4.19(m,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.08(d,2H),2.88(s,4H),2.77-2.68(m,1H),2.67-2.50(m,6H),2.36-2.23(m,2H),2.13-2.05(m,1H),2.04-1.85(m,1H),1.85-1.77(m,4H),1.77(s,3H),1.73(s,3H),1.71-1.61(m,1H),1.40-1.28(m,2H),0.93-0.87(m,2H),0.54-0.48(m,2H)。
實施例159：化合物159的製備
第一步：3-((4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)-4-氟苯基)氨
基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物159)
3-((4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
將157J(0.13g,0.22mmol)與142A(0.07g,0.22mmol)溶於DMF(8mL)，加入對甲苯磺酸水合物(0.13g,0.66mmol)，氮氣保護，100℃反應16h，反應液冷卻至室溫，加入50mL飽和碳酸氫鈉水溶液，有黃色固體析出，抽濾，濾餅水洗3次，二氯甲烷將濾餅複溶，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，柱層析純化(流動相：二氯甲烷/甲醇(V/V)=50/1-15/1)得到產物，進一步製備HPLC純化(流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到產物，產物經碳酸氫鈉水溶液游離後二氯甲烷萃取，濃縮，乾燥得化合物159(12mg，收率：6%)。
LCMS m/z=451.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.06(s,1H),10.76(s,1H),8.41(s,1H),8.18(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.82(s,1H),7.61(s,1H),7.46-7.38(m,1H),6.87-6.78(m,2H),6.75-6.59(m,1H),6.51(dd,1H),6.42(d,1H),5.79(d,1H),4.31-4.20(m,1H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.12-3.04(m,2H),2.91-2.82(m,4H),2.78-2.66(m,1H),2.65-2.52(m,4H),2.49-2.43(m,2H),2.28(d,2H),2.14-2.04(m,1H),2.04-1.73(m,10H),1.70-1.59(m,1H),1.35-1.28(m,2H)。
實施例160：化合物160的製備
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮(160A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
將64A(1.5g，3.62mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮(1.07g，3.62mmol)，DIPEA(0.70g，5.43mmol)和DMSO(15mL)加入反應瓶中，90℃反應3h，冰水冷卻，加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)，攪拌5min，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(100mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化(洗脫劑：DCM/CH3OH=DCM至50/1至20/1)，得160A(1.7g，收率：68.19%)。
第二步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(160B)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將160A(0.5g，0.73mmol)，鋅粉(0.24g，3.63mmol)，氯化銨(0.19g，3.63mmol)，四氫呋喃(6mL)和水(2mL)加入反應瓶中，室溫反應1h，加入二氯甲烷(50mL)和氨水(10mL)，攪拌2min，鋪適量矽藻土，抽濾，適量二氯甲烷洗滌，濾液分層，有機層水(20mL×1)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得160B(0.40g，收率：83.18%)。
第三步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物160)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將160B(0.4g，0.61mmol)，107A(0.22g，0.61mmol)，一水合對甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反應瓶中，100℃反應約18h，冰水冷卻下加入乙酸乙酯(20mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(20mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=50/1至30/1至20/1，所得粗產物用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備產物以飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化游離得到化合物160(0.11g，收率：18.43%)。
LCMS m/z=489.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.15-11.03(m,2H),8.31-8.23(m,1H),8.13(s,1H),8.07(s,1H),7.99(s,1H),7.89(s,1H),7.72(d,1H),7.60(s,1H),7.46(d,1H),7.24(dd,1H),6.82(s,1H),6.45(s,1H),5.10(dd,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.27(s,4H),3.15-3.04(m,2H),2.95-2.83(m,1H),2.68-2.51(m,8H),2.31(d,2H),2.05-1.97(m,2H),1.89-1.56(m,11H),1.42-1.30(m,1H),0.95-0.87(m,2H),0.54-0.47(m,2H)。
實施例161：化合物161的製備
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮(化合物161)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將160B(0.41g，0.64mmol)，109B(0.2g，0.64mmol)，一水合對甲苯磺酸(0.24g，1.28mmol)和DMF(5mL)加入反應瓶中，100℃反應約18h，冰水冷卻下加入乙酸乙酯(20mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌，靜置分層，有機層飽和氯化鈉溶液(20mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，殘餘物柱層析純化，洗脫劑：DCM/CH3OH=50/1至30/1至20/1，所得粗產物繼續用製備HPLC(儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：XBridge@ Prep C18(30mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))純化，製備產物以飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化游離得到化合物161(0.22g，收率：36.63%)。
LCMS m/z=469.7[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.21(s,1H),11.09(s,1H),8.52-8.36(m,1H),8.28-8.14(m,1H),8.14-8.07(m,1H),8.02-7.90(m,1H),7.90-7.78(m,1H),7.76-7.40(m,4H),7.08-6.90(m,2H),6.86-6.73(m,1H),5.16-5.05(m,1H),3.93-3.73(m,6H),3.33-3.17(m,4H),3.15-3.00(m,2H),2.98-2.79(m,1H),2.70-2.45(m,8H),2.40-2.20(m,2H),2.08-1.99(m,1H),1.90-1.50(m,9H),1.42-1.22(m,2H)。
實施例162：化合物162的製備
第一步：5-(9-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物162)
5-(9-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將79D(397.60mg,0.65mmol)和142A(238.89mg,0.72mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL水和20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-15/1)得到化合物162(140mg，收率：23.69%)。
LCMS m/z=909.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.05(s,2H),8.42(br.s,1H),8.17(s,1H),8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.85(s,1H),7.70-7.57(m,2H),7.48-7.17(m,
3H),6.87(s,1H),6.67(br.s,1H),5.11-5.00(m,1H),3.93-3.75(m,6H),3.60-3.40(m,4H),3.00-2.75(m,5H),2.70-2.50(m,2H),2.10-1.92(m,1H),1.88-1.72(m,6H),1.72-1.52(m,8H)。
實施例163：化合物163的製備
第一步：5-(9-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物163)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將79D(400mg,0.65mmol)和141B(270.67mg,0.72mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL水和20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用DCM溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-15/1)得到化合物163(150mg，收率：24.19%)。
LCMS m/z=953.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.06(s,1H),10.78(s,1H),8.30(br.s,1H),8.20-8.13(m,2H),8.01(s,1H),7.84(s,1H),7.69-7.57(m,2H),7.45-7.19(m,3H),6.87(s,1H),6.69(br.s,1H),5.11-5.01(m,1H),3.92-3.75(m,6H),3.58-3.42(m,4H),2.97-2.77(m,5H),2.65-2.50(m,2H),2.10-1.95(m,1H),1.85-1.72(m,6H),1.72-1.54(m,8H)。
實施例164：化合物164的製備
第一步：5-(9-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑)-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物164)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將79D(400mg,0.65mmol)和108B(257.81mg,0.72mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL水和20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-10/1)，得到的產品進一步製備液相純化(儀器：waters 2767製備色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×150mm)；流動相組成：流動相A：乙腈，流動相B：水(含0.1% TFA))得到化合物164的三氟乙酸鹽，向化合物164的三氟乙酸鹽中加入60mL二氯甲烷和30mL飽和碳酸氫鈉溶液，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，得到化合物164(120mg，收率：19.73%)。
LCMS m/z=935.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.05(s,1H),10.94(s,1H),8.33(br.s,1H),8.22-8.13(m,2H),7.96(s,1H),7.86(s,1H),7.70-7.43(m,3H),7.36-7.21(m,2H),7.07-6.92(m,2H),6.86(s,1H),5.12-4.99(m,1H),3.88-3.77(m,6H),3.58-3.45(m,4H),2.96-2.77(m,5H),2.70-2.50(m,2H),2.10-1.95(m,1H),1.84-1.51(m,14H)。
實施例165：化合物165的製備
第一步：5-(9-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物165)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將79D(397.60mg,0.65mmol)和55B(286.46mg,0.72mmol)溶於DMF(8mL)中，加入對甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮氣保護，100℃反應過夜。冷卻至室溫，加入20mL水和20mL飽和碳酸氫鈉水溶液，抽濾，濾餅用二氯甲烷溶解、萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/1-15/1)得到化合物165(190mg，收率：29.95%)。
LCMS m/z=975.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.05(s,1H),10.85(s,1H),8.24-8.08(m,3H),8.00(s,1H),7.90(s,1H),7.72-7.50(m,2H),7.38-7.16(m,3H),6.88(s,1H),6.48(br.s,1H),5.12-5.01(m,1H),3.96-3.72(m,6H),3.60-3.44(m,4H),3.00-2.77(m,5H),2.70-2.50(m,2H),2.10-1.50(m,16H),1.00-0.80(m,2H),0.60-0.40(m,2H)。
實施例166：化合物166的製備
第一步：5-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(166A)
5-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將80C(10g,18.40mmol)置於500mL單口瓶中，依次加入氯化銨(14.76g,276mmol)，THF(100ml)、乙醇(100ml)、水(50ml)和鐵粉(15.41g,276mmol)，加畢，80℃攪拌2h。冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷/甲醇(v/v=10/1)混合溶劑洗滌，合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮得到166A(2g，收率：20%)。
第二步：5-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物166)
5-(4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將166A(0.4g,0.74mmol)和55B(0.3g,0.74mmol)溶於DMF(5ml)中，加入對甲苯磺酸一水化合物(0.28g,1.48mmol)，100℃攪拌過夜。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，析出固體，過濾，濾餅乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/3-100/5)。所得殘留物加入8mL乙腈，70℃攪拌1h。過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物166(0.2g，收率：30%)。
LCMS m/z=454.3[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.07(s,1H),10.83(s,1H),8.27-8.07(m,4H),7.89(s,1H),7.71(d,1H),7.65(s,1H),7.45-7.39(m,1H),7.36-7.29(m,1H),7.25-7.14(m,1H),6.84(s,1H),6.57-6.44(m,1H),5.19-4.99(m,1H),3.83(d,6H),3.66(s,4H),3.01(s,4H),2.95-2.82(m,1H),2.67-2.55(m,2H),2.06-1.99(m,1H),1.82-1.68(m,7H),0.94-0.82(m,2H),0.60-0.46(m,2H)。
實施例167：化合物167的製備
第一步：5-(4-(4-((5-氯-4-((4-環丙基-2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物167)
5-(4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將166A(0.4g,0.74mmol)和107A(0.26g,0.74mmol)溶於DMF
(5ml)中，加入對甲苯磺酸一水化合物(0.28g,1.48mmol)，100℃攪拌過夜。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，析出固體，過濾，濾餅乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/3-100/5)。所得殘留物加入8mL乙腈，70℃攪拌1h。過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物167(0.25g，收率：39%)。
LCMS m/z=432.2[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.10(s,1H),11.07(s,1H),8.36-8.22(m,1H),8.21-8.11(m,2H),8.08(s,1H),7.90(s,1H),7.71(d,1H),7.66(s,1H),7.46-7.39(m,1H),7.38-7.30(m,1H),7.26-7.15(m,1H),6.85(s,1H),6.57-6.39(m,1H),5.13-5.00(m,1H),3.83(d,6H),3.66(s,4H),3.01(s,4H),2.96-2.82(m,1H),2.69-2.52(m,2H),2.09-1.97(m,1H),1.83-1.67(m,7H),0.94-0.83(m,2H),0.59-0.48(m,2H)。
實施例168：化合物168的製備
第一步：5-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑)-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物168)
5-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將166A(0.45g,0.83mmol)和109B(0.26g,0.83mmol)溶於DMF(5mL)中，加入對甲苯磺酸一水化合物(0.32g,1.66mmol)，100℃攪拌過夜。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，析出固體，過濾，濾餅乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/3-100/5)。所得殘留物加入8mL乙腈，70℃攪拌1h。過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物168(0.3g，收率：44%)。
LCMS m/z=412.2[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.21(s,1H),11.07(s,1H),8.48-8.39(m,1H),8.22(s,1H),8.13-8.06(m,2H),7.86(s,1H),7.71(d,1H),7.66(s,1H),7.56-7.46m,1H),7.44-7.39(m,1H),7.37-7.28(m,1H),7.07-6.92(m,2H),6.85(s,1H),5.14-5.01(m,1H),3.83(d,6H),3.64(s,4H),3.01(s,4H),2.95-2.84(m,1H),2.68-2.53(m,2H),2.05-1.98(m,1H),1.76(d,6H)。
實施例169：化合物169的製備
第一步：5-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑)-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚-1,3-二酮(化合物169)
5-(4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將166A(0.4g,0.74mmol)和108B(0.27g,0.74mmol)溶於DMF(5ml)中，加入對甲苯磺酸一水化合物(0.28g,1.48mmol)，100℃攪拌過夜。冷卻至室溫，加入10mL飽和碳酸氫鈉水溶液，析出固體，過濾，濾餅乾燥後用矽膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇(V/V)=100/3-100/5)。所得殘留物加入8mL乙腈，70℃攪拌1h。過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物169(0.25g，收率：39%)。
LCMS m/z=434.2[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 11.07(s,1H),10.94(s,1H),8.39-8.28(m,1H),8.25-8.16(m,2H),8.07(s,1H),7.85(s,1H),7.71(d,1H),7.65(s,1H),7.54-7.45(m,1H),7.44-7.39(m,1H),7.36-7.29(m,1H),7.09-6.92(m,2H),6.84(s,1H),5.15-5.04(m,1H),3.82(d,6H),3.64(s,4H),3.00(s,4H),2.95-2.81
(m,1H),2.68-2.53(m,2H),2.09-1.93(m,1H),1.76(d,6H)。
實施例170和實施例171：化合物170和171的製備
取300mg化合物106使用SFC製備分離純化。SFC製備分離條件：儀器：Waters 150 MGM；色譜柱：Chiralpak Column；流動相：A for CO2 and B for IPA(異丙醇)+ACN(乙腈)；梯度：65% phase B等度沖提；流速：120mL/min；背壓：100bar；柱溫：35℃；波長：220nm。
SFC分析條件：儀器：SHIMADZULC-30AD sfc；色譜柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流動相：A for CO2 and B for IPA(異丙醇)+ACN(乙腈)(0.05%DEA(二乙胺))；梯度：B 60%；流速：3mL/min；背壓：100bar；柱溫：35℃；波長：220nm。
經製備分離後，合併相同保留時間的組分，冷凍乾燥，20mL DCM複溶，加入水(10mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(1mL)萃取，分離有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得化合物170(30mg)和化合物171(70mg)。
化合物170：
SFC分析條件下保留時間1.6min，
LCMS m/z=502.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.23(s,1H),7.96-7.75(m,5H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),7.31-7.15(m,2H),6.92(d,1H),5.12(dd,1H),4.22-4.07(m,5H),4.03(s,3H),3.93-3.70(m,6H),3.62-3.48(m,2H),3.39-3.18(m,4H),2.95-2.85(m,2H),2.82-2.67(m,1H),2.63-2.44(m,1H),2.37-2.16(m,3H),2.12-1.88(m,9H),1.19-1.08(m,2H),0.73-0.65(m,2H)。
化合物171：
SFC分析條件下保留時間2.7min，
LCMS m/z=502.8[(M+2H)/2]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.23(s,1H),7.96-7.75(m,5H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),7.31-7.15(m,2H),6.92(d,1H),5.12(dd,1H),4.22-4.07(m,5H),4.03(s,3H),3.93-3.70(m,6H),3.62-3.48(m,2H),3.39-3.18(m,4H),2.95-2.85(m,2H),2.82-2.67(m,1H),2.63-2.44(m,1H),2.37-2.16(m,3H),2.12-1.88(m,9H),1.19-1.08(m,2H),0.73-0.65(m,2H)。
實施例172和實施例173：化合物172和173的製備
取345mg化合物107使用SFC製備分離純化。SFC製備分離條件：儀器：Waters 150 MGM；色譜柱：Chiralpak Column；流動相：A for CO2 and B for IPA+ACN；梯度：70% phase B等度沖提；流速：100mL/min；背壓：100bar；柱溫：35℃；波長：220nm。
SFC分析條件：儀器：SHIMADZU LC-30AD sfc；色譜柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流動相：A for CO2 and B for IPA+ACN(0.05%DEA)；梯度：B 60%；流速：3mL/min；背壓：100bar；柱溫：35℃；波長：220nm。
經製備分離後，合併相同保留時間的組分，減壓濃縮得到化合物172(160mg)和化合物173(165mg)。
化合物172：SFC分析條件下保留時間1.5min，LCMS m/z=960.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.14(s,1H),8.02-7.91(m,3H),7.86(s,1H),7.82(d,1H),7.46(s,1H),7.36(s,1H),7.31-7.13(m,2H),6.90(d,1H),5.12(dd,1H),4.25-4.08(m,5H),4.04(s,3H),3.95-3.73(m,6H),3.63-3.45(m,2H),3.39-3.18(m,4H),2.94-2.85(m,2H),2.83-2.67(m,1H),2.63-2.44(m,1H),2.37-2.19(m,3H),2.13-1.88(m,9H),1.20-1.06(m,2H),0.72-0.64(m,2H)。
化合物173：SFC分析條件下保留時間2.5min，LCMS m/z=960.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,D2O/CF3COOD(v/v=1：1))δ 8.14(s,1H),8.03-7.91(m,3H),7.86(s,1H),7.82(d,1H),7.46(s,1H),7.37(s,1H),7.30-7.16(m,2H),6.90(d,1H),5.12(dd,1H),4.25-4.08(m,5H),4.04(s,3H),3.94-3.75(m,6H),3.62-3.45(m,2H),3.38-3.15(m,4H),2.94-2.85(m,2H),2.83-2.66(m,1H),2.63-2.45(m,1H),2.35-2.17(m,3H),2.12-1.89(m,9H),1.18-1.06(m,2H),0.74-0.64(m,2H)。
生物測試例
測試例1：NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)和A431(EGFR-WT)細胞的增殖抑制活性
NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)和A431(EGFR-WT)細胞購自於ATCC，培養基分別為RPMI1640+10%FBS和DMEM+10%FBS，於37℃，5% CO2孵箱中培養。第一天，收集處於指數生長期的NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)和A431(EGFR-WT)細胞，用自動細胞分析儀(countstar)進行活細胞計數。用培養基將細胞懸液調整後鋪板96孔細胞培養板，NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)細胞每孔1000個，A431細胞每孔3000個。第二天，吸去培養基，每孔加入90μL新鮮培養基和10μL不同濃度化合物，每孔DMSO終濃度為0.1%。於37℃，5% CO2孵箱中培養72小時。藥物處理72小時後，每孔加入50μL預先融化並平衡到室溫的CTG溶液(promega，G7572)，用微孔板震盪器混勻2min，於室溫放置10min後用酶標儀(PHERAstar FSX)測定螢光訊號值。
細胞存活率用公式Vsample/Vvehicle control x100%計算。其中Vsample為藥物處理組的讀數，Vvehicle control為溶劑對照組的平均值。應用origin9.2軟體，使用非線性回歸模型繪製S型劑量-存活率曲線並計算IC50值。
表1測試化合物對NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)細胞的增殖抑制活性結果
注：表1中A<0.1μM，0.1μM
B<0.5μM，0.5μM
C<1μM。
測試化合物對A431(WT)細胞的增殖抑制活性：
化合物1、2、4、6、7的三氟乙酸鹽、14的三氟乙酸鹽、18、23的三氟乙酸鹽、24、30、34、35、36、37、38、40、41、42、45、46、47、48、50、54、55、57、58、59、60、61、62、63、65、66、67、68、71、72、73、76、
77、78、79、80、81、82、83、84、85、86的三氟乙酸鹽、87、88、89、90、91、92、93、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、116、117、118、119、121、125、126、133、137、138、139、143、145、146、147、148、150、160、162、163、164、165、166、167、170、171、172、173對A431(EGFR-WT)細胞增殖抑制活性IC50
10μM。
結論：本發明化合物對NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)細胞具有良好的增殖抑制活性；對A431(EGFR-WT)細胞增殖抑制活性差，具有良好的選擇性。
測試例2：對細胞Ba/F3-TEL-EGFR-T790M-L858R-C797S的增殖抑制活性
細胞Ba/F3-TEL-EGFR-T790M-L858R-C797S培養於37℃，5% CO2孵箱中。收集處於指數生長期的細胞，計數後鋪板96孔板，鋪板密度為2000個/孔。加入不同濃度的化合物，並設置細胞加DMSO的溶媒對照組，細胞培養基加DMSO的空白對照組，DMSO的濃度均為0.1%。細胞培養板置於37℃，5% CO2孵箱中培養72小時。培養結束後，取出細胞培養板放置10min使其平衡至室溫。按照CellTiter-Glo試劑盒(Promega，G7573)操作說明，每孔加入50μL預先融化並平衡到室溫的CTG溶液，用微孔板震盪器混勻2min，於室溫放置10min後用酶標儀(SpectraMax Paradigm)測定螢光訊號值。細胞增殖抑制率(Inhibition Rate)資料採用式(1)處理，計算不同濃度化合物對應的抑制率，並使用GraphPad Prism軟體作抑制率曲線圖並計算IC50值。其中RLUDrug為藥物處理組的讀數，RLUMax為對照組的讀數，RLUMin為空白組讀數。
Inhibition Rate(Inh%)=(1-(RLUDrug-RLUMin)/(RLUMax-RLUMin))×100% (式1)
結論：本發明化合物對細胞Ba/F3-TEL-EGFR-T790M-L858R-C797S具有良好的增殖抑制活性，例如化合物106的IC50為15.6nM、化合物107的IC50為15.6nM。
測試例3：對細胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S的增殖抑制活性
細胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S培養於37℃，5% CO2孵箱中，培養基為RPMI1640+10%FBS+100μg/mL潮黴素。收集處於指數生長期的細胞，用不含潮黴素的培養基將細胞懸液調整到適當濃度後鋪板96孔板，鋪板密度為1500個/孔，體積90μL。加入10μL不同濃度的化合物，並設置細胞加DMSO的溶媒對照組，DMSO的濃度均為0.1%。細胞培養板置於37℃，5% CO2孵箱中培養72小時。培養結束後，按照CellTiter-Glo試劑盒(Promega，G7572)操作說明，每孔加入50μL預先融化並平衡到室溫的CTG溶液，用微孔板震盪器混勻2min，於室溫放置10min後用酶標儀(Envision2104)測定螢光訊號值。細胞存活率(Surviving cells%)資料採用式(2)處理，並使用GraphPad Prism 5.0軟體，使用非線性回歸模型繪製S型劑量-存活率曲線並計算IC50值。其中Vsample為藥物處理組的讀數，Vvehicle control為對照組的讀數。
Surviving cells%=Vsample/Vvehicle control x100% (式2)
表2化合物對細胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S的增殖抑制活性
注：表2中A<0.2μM，0.2μM
B<0.5μM，0.5μM
C<1μM。
結論：本發明化合物對細胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S具有良好的增殖抑制活性，明顯優於對照化合物A和B。
測試例4：小鼠藥代動力學測試
實驗目的：本試驗通過單劑量靜脈和灌胃給予受試物於ICR小鼠，測定小鼠血漿中受試物的濃度，評價受試物在小鼠體內藥代特徵和生物利用度。
試驗動物：雄性ICR小鼠，20~25g。購自北京華阜康生物科技股份有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK(京)2019-0008；或者成都達碩實驗動物有限公司(SCXK(川)2020-030)；或湖南斯萊克景達實驗動物有限公司(SCXK(湘)2019-0004)。
試驗方法：試驗當天，ICR小鼠按體重隨機分組。給藥前1天禁食不禁水12~14h，給藥後4h恢復給食。
*劑量以游離鹼計，靜脈給藥的給藥劑量採用2.5mg/kg或者1mg/kg的任意一種；
取樣：於給藥前及給藥後異氟烷麻醉經眼眶取血，置於EDTAK2離心管中。5000rpm，4℃離心10min，收集血漿。
G1&G2組採集血漿時間點：0,5min,15min,30min,1,2,4,6,8,24h；
G3組採集血漿時間點：0,5min,15min,30min,1,2,4,6,8,24h；
分析檢測前，所有樣品存於-80℃。用LC-MS/MS對樣品進行定量分析。
表3-1受試化合物小鼠口服吸收結果(給藥方式i.g.(10mg/kg))
表3-2受試化合物藥物小鼠PK資料(給藥方式i.g.(10mg/kg))
*注：i.g.(灌胃)給予化合物。
結論：運用本發明技術所合成的化合物在小鼠體內具有一定的口服吸收性能，口服性能優於對照化合物A和B。
測試例5：對細胞H1975-EGFR-T790M-L858R-C797S中EGFR蛋白降解活性
方法一：
蛋白樣品製備：細胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S培養於37℃，5% CO2孵箱中，培養基為RPMI1640+10%FBS+100μg/mL潮黴素。收集處於指數生長期的細胞，用不含潮黴素的培養基將細胞懸液調整到適當濃度後鋪板6孔板，鋪板密度為200000個/孔，鋪板體積2mL，過夜培養於37°C、5% CO2培養箱中。第二天，加入不同濃度的化合物並設置DMSO對照孔，確保所有孔的DMSO濃度均為0.1%。將6孔板置於37℃、5% CO2培養箱中培養72h後，加入30μL含有蛋白酶抑制劑(碧雲天，Cat.P0013B)的RIPA裂解液(碧雲天，Cat.P0013B)，冰上裂解30min。於4℃，13000轉/分鐘離心20min，收集蛋白上清樣品，用BCA法進行蛋白定量，製備Western Blot檢測樣品。
Western檢測：每孔加入20μg蛋白樣品，聚丙烯醯胺凝膠電泳並轉膜。轉膜結束後加入稀釋後的抗EGFR(CST，Cat.4267S)和NADPH(Kangchen，Cat.KC-5G4)抗體，4℃過夜孵育。洗膜後加入稀釋後的羊抗兔(Licor，Cat.926-32211)和羊抗鼠(Licor，Cat.926-68070)抗體，避光孵育45min。用遠紅外成像系統(Odyssey)在700nm和800nm波長下掃描檢測。
根據式(3)計算不同濃度化合物孵育後，細胞中EGFR蛋白相對與DMSO對照組的表達量。其中EGFRcompound為化合物孵育後EGFR蛋白的螢光值，EGFRvehicle為DMSO對照組EGFR蛋白的螢光值。使用Origin9.2軟體計算EGFR蛋白相對DMSO對照組表達量為50%時的藥物濃度DC50值。
EGFR%=EGFRcompound/EGFRvehicle×100% 式(3)
方法二：
蛋白樣品製備：細胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S培養於37℃，5% CO2孵箱中，培養基為RPMI1640+10%FBS+100μg/mL潮黴素。收集處於指數生長期的細胞，用不含潮黴素的培養基將細胞懸液調整到適當濃度後鋪板6孔板，鋪板密度為350000個/孔，鋪板體積2mL，過夜培養於37℃、5% CO2培養箱中。第二天，加入不同濃度的化合物並設置DMSO對照孔，確保
所有孔的DMSO濃度均為0.1%。將6孔板置於37℃、5% CO2培養箱中培養48h後，加入30μL含有蛋白酶抑制劑(碧雲天，Cat.P0013B)的RIPA裂解液(碧雲天，Cat.P0013B)，冰上裂解30min。於4℃，13000轉/分鐘離心20分鐘，收集蛋白上清樣品，用BCA法進行蛋白定量，製備Western Blot檢測樣品。
Western檢測：每孔加入20μg蛋白樣品，聚丙烯醯胺凝膠電泳並轉膜。轉膜結束後加入稀釋後的抗EGFR(CST，Cat.4267S)和NADPH(Kangchen，Cat.KC-5G4)抗體，4℃過夜孵育。洗膜後加入稀釋後的羊抗兔(Licor，Cat.926-32211)和羊抗鼠(Licor，Cat.926-68070)抗體，避光孵育45min。用遠紅外成像系統(Odyssey)在700nm和800nm波長下掃描檢測。
根據式(3)計算不同濃度化合物孵育後，細胞中EGFR蛋白相對與DMSO對照組的表達量。其中EGFRcompound為化合物孵育後EGFR蛋白的螢光值，EGFRvehicle為DMSO對照組EGFR蛋白的螢光值。使用Origin9.2軟體計算EGFR蛋白相對DMSO對照組表達量為50%時的藥物濃度DC50值。
EGFR%=EGFRcompound/EGFRvehicle×100% 式(3)
表4化合物對細胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S中EGFR蛋白降解活性結果
注：表4中A<0.1μM，0.1μM
B<0.5μM，0.5μM
C<1μM
結論：本發明化合物對細胞H1975-EGFR-T790M-L858R-C797S中EGFR蛋白具有良好的降解效果。
Claims (15)
- 一種化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，化合物選自通式(I)所示的化合物，B-L-K (I)；L選自鍵或-C1-50烴基-，所述烴基中有0至20個亞甲基單員任選進一步被-Ak-或-Cy-替換；每個-Ak-各自獨立地選自-(CH2)q-、-(CH2)q-O-、-O-(CH2)q-、-(CH2)q-NRL-、-NRL-(CH2)q-、-(CH2)q-NRLC(=O)-、-NRL(CH2)qC(=O)-、-(CH2)q-C(=O)NRL-、-C(=O)-、-C(=O)-(CH2)q-NRL-、-(C≡C)q-、-CH=CH-、-Si(RL)2-、-Si(OH)(RL)-、-Si(OH)2-、-P(=O)(ORL)-、-P(=O)(RL)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-或者鍵，所述的-CH2-任選進一步被0至2個選自H、鹵素、OH、CN、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素取代的C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基或氰基取代的C1-6烷基的取代基所取代；q各自獨立的選自0、1、2、3、4、5或6；RL各自獨立的選自H、C1-6烷基、3-7員雜環基、3-7員環烷基、苯基或5-6員雜芳基；每個-Cy-各自獨立地選自鍵、4-8員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、7-10員雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述芳基、雜芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜芳基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1至4個選自O、S或N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；B選自或
；
r3選自0、1、2、3或4；r4選自0、1或2；r6選自0、1、2或3；環W選自C6-10碳環、5至10員雜環、C6-10芳環或5至10員雜芳環，所述的雜環或雜芳環含有1至5個選自O、S或N的雜原子；環V選自4至10員雜環或者C3-10碳環，所述的雜環或者碳環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rb1、Rb2各自獨立的選自H、OH或C1-4烷基；Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C3-6環烷基、3至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，所述的烷基、炔基、烷氧基、環烷基、苯基、雜環基或雜芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜環基或雜芳基含有1至3個選自O、S或N的雜原子；Rb4各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述的烷基或烷氧基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rb5選自H或C1-4烷基，所述的烷基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C2-4炔基或C1-4烷氧基，所述的烷基、炔基或烷氧基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rb7選自4至7員雜環或者C3-7碳環，所述的碳環或雜環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基、氘代C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自O、S或N的雜原子；K選自、
、
、
；
Q各自獨立地選自鍵、-O-、-S-、-CH2-、-NRq-、-CO-、-NRqCO-、-CONRq-或3-12員雜環，所述的雜環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；Rq選自H或C1-6烷基；A選自C3-10碳環C6-10芳環、3-10員雜環或5-10員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；F各自獨立地選自C3-20碳環、C6-20芳環、3-20員雜環或5-20員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；Rk2各自獨立地選自鍵、-CO-、-SO2-、-SO-或-C(Rk3)2-；Rk1各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基或C3-6環烷基，所述的烷基、烷氧基或環烷基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rk3各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8環烷基或3-8員雜環基，所述的烷基、烷氧基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個選自O、S或N的雜原子；或者兩個Rk3和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-8員碳環或3-8員雜環，兩個Rk1和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-8員碳環或3-8員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；Rk4各自獨立地選自H、OH、NH2、CN、CONH2、C1-6烷基、C3-8環烷基或3-8員雜環基，所述的烷基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個選自O、S或N的雜原子；M1選自鍵、-CH2-C(=O)NH-或-C(=O)CH2NH-；M2選自-NHC(=O)-C1-6烷基、-NHC(=O)-C3-6環烷基或4-10員雜環基，所述的烷基、環烷基或雜環基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、NH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環基含有1至4個選自O、S或N的雜原子；M3選自-NH-或-O-；Rk10選自C1-6烷基，所述的烷基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、 I、=O、OH、C1-6烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rk11各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、SH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-O-C(=O)-C1-6烷基，所述的烷基、烷氧基或烷硫基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；Rk12、Rk13各自獨立的選自H、C1-6烷基或C3-6環烷基，所述的烷基或環烷基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、=O、OH、NH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；Rk14選自5-6員雜芳基，所述的雜芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CF3、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜芳基含有1至4個選自N、O或S的雜原子；G選自6-10員芳環或5-10員雜芳環，所述的芳環或者雜芳環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CF3、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代，所述雜芳環含有1至4個選自N、O或S的雜原子；n1、n2、n3各自獨立的選自0、1、2或3；p1或p2各自獨立的選自0、1、2、3、4或5。 - 根據權利要求1所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，L選自-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Cy5-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3- Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Ak5-Cy4-；Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自獨立的選自-(CH2)q-、-(CH2)q-O-、-O-(CH2)q-、-(CH2)q-NRL-、-NRL-(CH2)q-、-(CH2)q-NRLC(=O)-、-(CH2)q-C(=O)NRL-、-C(=O)-、-C(=O)-(CH2)q-NRL-、-(C≡C)q-或者鍵，所述的-CH2-任選進一步被0至2個選自H、鹵素、OH、CN、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或氰基取代的C1-4烷基的取代基所取代；Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立地選自鍵、4-7員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、7-10員雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述芳基、雜 芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜芳基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1至4個選自O、S或N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；q各自獨立的選自0、1、2、3或4；RL各自獨立的選自H或C1-6烷基。
- 根據權利要求2所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵、4-7員含氮雜單環、4-10員含氮雜並環、5-12員含氮雜螺環、7-10員含氮雜橋環、3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基、5-10員雜芳基或6-10員芳基，所述雜單環、雜並環、雜橋環、雜螺環、環烷基、芳基或雜芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH2、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的雜單環、雜並環、雜橋環、雜螺環或雜芳基含有1至4個選自O、S或N的雜原子，當雜原子選自S時，任選進一步被0、1或2個=O取代；RL各自獨立的選自H或C1-4烷基；環W選自苯環、萘環、5-6員單環雜芳環、9-10員並環雜芳環或9-10員雜環，所述的雜環或雜芳環含有1至5個選自O、S、N的雜原子；環V選自4至6員雜環或者C3-6碳環，所述的雜環或者碳環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；K選自、
、
、
、
、
或
；
表示環選自芳香環或非芳香環；
Q各自獨立地選自-O-、-S-、-CH2-、-NRq-、-CO-、-NRqCO-、-CONRq-或4-7員雜環，所述的雜環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；Rq選自H或C1-4烷基；Rk1、Rk3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CF3、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述烷基或烷氧基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH或NH2的取代基所取代；或者兩個Rk3和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-6員碳環或3-7員雜環，兩個Rk1和與二者直接相連的碳原子或環骨架共同形成3-6員碳環或3-7員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、NH2、CN、COOH、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述雜環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；Rk4各自獨立的選自H、OH、NH2、CF3、CN或C1-4烷基；Rk5各自獨立地選自、C(CH3)2、CO、CH2、SO2、
、
、
；
Rk6各自獨立地選自CO、CH、SO、SO2、CH2或N；Rk7各自獨立地選自、C(CH3)2、CO、CH、N、CH2、O、S、N(CH3)、N(CH2CH3)、N(環丙基)或NH；
Rk8各自獨立地選自C、N或CH；Rk9各自獨立地選自鍵、、C(CH3)2、CO、CH2、CH2CH2或SO2；
A、H1或H2各自獨立地選自C3-8碳環、苯環、4-7員雜環或5-6員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；E各自獨立地選自C3-8碳環、苯環、4-7員雜環、8-12員雜環、7-12員雜芳環或5-6員雜芳環，所述雜環或雜芳環含有1至4個選自O、S或N的雜原子；F各自獨立地選自3-7員單環烷基、4-10員並環烷基、5-12員螺環烷基、5-10員橋環烷基、4-7員雜單環、4-10員雜並環、5-12員雜螺環、5-10員雜橋環、C6-14芳基或5-10員雜芳基，所述雜單環、雜並環、雜螺環、雜橋環或雜芳基含有1至4個選自O、S或N的雜原子。 - 根據權利要求3所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，RL選自H、甲基或乙基；q各自獨立的選自0、1或2；Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵或取代的或者未取代的如下基團之一：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、氮雜環己烯基、哌啶、嗎啉、哌嗪、苯基、環丙基並環丙基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環已基、環戊基並環戊基、環戊基並環已基、環已基並環已基、環丙基螺環丙基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環已基、環已基螺環已基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環已基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環已基、環已基並氮雜環丁基、環已基並氮雜環戊基、環已基並氮雜環已基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環已基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環已基、氮雜環已基並氮雜環丁基、氮雜環已基並氮雜環戊基、氮雜環已基並氮雜環已基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環已基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環已基、環已基螺氮雜環丁基、環已基螺氮雜環戊基、環已基螺氮雜環已基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環已基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環已基、氮雜環已基螺氮雜環丁基、氮雜環已基螺氮雜環戊基、氮雜環已基螺氮雜環已基、、
、
、
、
、
、
、
、
或
，當被取代時，任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、COOH、CN、=O、C1-4烷基、鹵素取代的C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
選自
、
、
、
、
、
環V選自氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基或哌嗪基，所述的氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基或哌嗪基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN或C1-4烷基的取代基所取代；Rb1、Rb2各自獨立的選自甲基或乙基；Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙基氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙基氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、苯基或5至6員雜芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、 I、OH、=O、NH2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代的取代基所取代，所述的雜芳基含有1至3個選自O、S或N的雜原子；Rb4各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rb5選自H；Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基，所述的甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6環烷基的取代基所取代；Rb7選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡咯、吡唑、吡啶或苯基，所述Rb7任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、氘代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素取代的C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基或C3-6環烷基的取代基所取代；K選自、
、
、
、、
、
、
、
、
或
；
E各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；A各自獨立地選自苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；F各自獨立地選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、雙環[1.1.1]戊烷基、6,7-二氫-5H-環戊[c]吡啶基、2,3-二氫-1H-茚基、苯基、萘基、蒽基、菲基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、哌啶基、嗎啉基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、2-吡啶酮、苯並噁唑基、吡啶並咪唑基、苯並咪唑基、苯並吡唑基、苯並噻唑基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、苯並吡咯基、苯並吡啶基、苯並吡嗪基、苯並嘧啶基、苯並噠嗪基、苯並三嗪基、吡咯並吡咯基、吡咯並吡啶基、吡咯並嘧啶基、吡咯並噠嗪基、吡咯並吡嗪基、咪唑並嘧啶基、咪唑並吡啶基、咪唑並吡嗪基、咪唑並噠嗪基、吡唑並吡啶基、吡唑並嘧啶基、吡唑並噠嗪基、吡唑並吡嗪基、嘧啶並吡啶基、嘧啶並吡嗪基、嘧啶並噠嗪基、嘧啶並嘧啶基、吡啶並吡啶基、吡啶並吡嗪基、吡啶並噠嗪基、噠嗪並噠嗪基、噠嗪並吡嗪基或吡嗪並吡嗪基；Rk7各自獨立地選自、C(CH3)2、CH2、O、N(CH3)、N(CH2CH3)、N(環丙基)或NH；
p1或p2各自獨立的選自0、1或2。 - 根據權利要求4所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自獨立的選自鍵或取代的或者未取代的如下基團之一：、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
，當被取代時，任選進一步被0至4個選自H、F、CF3、甲基、=O、羥甲基、COOH、CN或NH2的取代基所取代；
B選自、
、
、
；
環V選自哌啶或哌嗪，所述哌啶或哌嗪任選進一步被0至2個F取代；Rb1、Rb2選自甲基；K選自表K-1所示的結構片段之一；。 - 根據權利要求5所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，L選自-Cy1-、-Cy1-Ak1-、-Cy1-Ak1-Ak2-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-、-Cy1-Ak1-Cy2-、-Cy1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Cy5-、-Ak1-Cy2-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Ak2-Ak3-、-Ak1-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-或-Ak1-Cy2- Ak2-Ak3-；Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自獨立的選自-O-、-OCH2-、-CH2O-、-OCH2CH2-、-CH2CH2O-、-C≡C-、-C(CH3)2-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-N(CH3)-、-NH-、-CH2N(CH3)-、-CH2NH-、-NHCH2-、-CH2CH2N(CH3)-、-CH2CH2NH-、-NHCH2CH2-、-C(=O)-、-C(=O)CH2NH-、-CH2C(=O)NH-、-C(=O)N(CH3)-、-N(CH3)C(=O)-、-C(=O)NH-或-NHC(=O)-。
- 根據權利要求6所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，L選自鍵或表A中的基團，其中基團左側與B連接。
- 根據權利要求7所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，B選自如下結構片段之一：
Rb3各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、異丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基或苯基或5至6員雜芳基，所述的苯基或5至6員雜芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代，所述的雜芳基含有1至3個選自O、S或N的雜原子；Rb4選自H、F、Cl或Br；Rb6各自獨立的選自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；Rb7選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡咯、吡唑、吡啶或苯基，所述Rb7任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、=O、CN、CH2D、CHD2、CD3、甲基或乙基的取代基所取代；K選自表K-2所示的結構片段之一。 - 根據權利要求8所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，B選自表B-1所示結構片段之一；K選自表K-3所示的結構片段之一。
- 根據權利要求1所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中該化合物選表E-1所示結構之一。
- 一種藥物組合物，包括治療有效量的權利要求1-10任意一項所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，以及藥學上可接受的載體，任選地包含一種多或多種其它化學治療劑。
- 根據權利要求11所述的藥物組合物，其中所述的治療有效量是指，藥物組合物以適合於待治療(或預防)的疾病的劑量給予，例如給予約0.5μg至約50mg的至少一種化合物/kg受試者體重，較佳約10μg至約100mg/kg體重/天。
- 根據權利要求1-10任意一項所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶、或權利要求11-12任一項所述的組合物在用於製備治療與EGFR活性或表達量相關疾病的藥物中的應用。
- 根據權利要求1-10任意一項所述的化合物或者其立體異構體、氘代物、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶、或權利要求11-12任一項所述的組合物在用於製備治療與抑制或降解EGFR相關疾病的藥物中的應用。
- 根據權利要求13或14所述的應用，其特徵在於，所述的疾病選自癌症，較佳非小細胞肺癌。
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