WO2022228547A1 - 一种膦酰衍生物及其组合物和药学上的应用 - Google Patents

一种膦酰衍生物及其组合物和药学上的应用 Download PDF

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WO2022228547A1
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张晨
王健民
赵晨飞
钱国飞
马俊杰
黄正刚
袁帅
黄安邦
郑少龙
李凯
余彦
叶飞
唐平明
李瑶
倪佳
严庞科
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四川海思科制药有限公司
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    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65583—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system each of the hetero rings containing nitrogen as ring hetero atom

Definitions

  • the present invention relates to a compound of general formula (I) or its stereoisomers, deuterated compounds, solvates, prodrugs, metabolites, pharmaceutically acceptable salts or co-crystals, and intermediates and preparation methods thereof, and Use in EGFR-related diseases such as cancer diseases.
  • Epidermal growth factor receptor is a transmembrane protein tyrosine kinase that acts as a receptor for EGF family members to trigger the EGFR signaling pathway in human epithelial cells, thereby regulating cell proliferation, invasion, metastasis, apoptosis and angiogenesis (Nat. Rev. Cancer, 2007, 7, 169-181; Expert Opin. Ther. Targets, 2012, 16, 15-31.).
  • PROTAC proteolysis targeting chimera
  • PROTAC proteolysis targeting chimera
  • the purpose of the present invention is to provide a compound with novel structure, good efficacy, high bioavailability, and safety, which can inhibit and degrade EGFR, for the treatment of EGFR-related diseases such as cancer.
  • the present invention provides a compound or its stereoisomer, deuterated compound, solvate, prodrug, metabolite, pharmaceutically acceptable salt or co-crystal, wherein the compound is selected from the compounds represented by the general formula (I),
  • L is selected from a bond or -C 1-20 hydrocarbyl- in which 0 to 20 methylene units are optionally further replaced by -Ak-, -Cy-;
  • L is selected from a bond or -C 1-10 hydrocarbyl-, of which 0 to 10 (eg, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) the methylene unit is optionally further replaced by -Ak-, -Cy-;
  • each -Ak- is independently selected from Ak1, Ak2, Ak3, Ak4, or Ak5;
  • each -Cy- is independently selected from Cy1, Cy2, Cy3, Cy4, or Cy5;
  • L is selected from -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Cy5-Ak5-, -Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5 -, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-, -Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2 -Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak5-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-C
  • L is selected from -Cy1-, -Cy1-Ak1-, -Cy1-Ak1-Ak2-, -Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-, -Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-, -Cy1-Cy2-, -Cy1-Ak1-Cy2-, -Cy1-Cy2-Ak2-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Ak1-Cy2 -Ak2-Ak3-Ak4-, -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Cy
  • L is selected from a bond or a group in Table A, and the left side of the group is attached to B;
  • each R L is independently selected from H, C 1-6 alkyl, 3-7 membered heterocyclyl, 3-7 membered cycloalkyl, phenyl, or 5-6 membered heteroaryl;
  • each R L is independently selected from H or C 1-6 alkyl
  • each R L is independently selected from H or C 1-4 alkyl
  • each R L is independently H, methyl or ethyl
  • Cy1, Cy2, Cy3, Cy4 or Cy5 is each independently selected from a bond or a substituted or unsubstituted one of the following groups: cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, Azacyclobutyl, Azacyclopentyl, Azacyclohexenyl, Piperidine, Morpholine, Piperazine, Phenyl, Cyclopropylcyclopropyl, Cyclopropylcyclobutyl, Cyclopropyl cyclopentyl, cyclopropyl-cyclohexyl, cyclobutyl-cyclobutyl, cyclobutyl-cyclopentyl, cyclobutyl-cyclohexyl, cyclopentyl-cyclopentyl, cyclopentyl-cyclohexyl cyclohexyl, cyclohexyl and cyclohexyl, cyclo
  • K is selected from
  • K is selected from Indicates that the ring is selected from aromatic or non-aromatic;
  • K is selected from
  • R q is selected from H, methyl, ethyl
  • each E is independently selected from a C3-10 carbocyclic ring, a C6-10 aromatic ring, a 3-12 membered heterocyclic ring, or a 5-12 membered heteroaromatic ring, said heterocyclic or heteroaromatic ring contains 1 to 4 (eg 1, 2, 3, 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • each E is independently selected from C 3-8 carbocycle, benzene ring, 4-7 membered heterocycle, 8-12 membered heterocycle, 7-12 membered heteroaromatic ring, or 5-6 membered heterocycle Aromatic rings containing 1 to 4 (eg 1, 2, 3, 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • each E is independently selected from phenyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiazolyl, furyl, thienyl, oxa azolyl, indolinyl, isoindolinyl, 1,2,3,4-tetrahydroquinolinyl or 1,2,3,4-tetrahydroisoquinolinyl;
  • each E is independently selected from a benzene ring or a pyridine ring;
  • A is selected from a C3-10 carbocyclic ring, a C6-10 aromatic ring, a 3-10 membered heterocyclic ring, or a 5-10 membered heteroaromatic ring containing 1 to 4 (eg 1, 2, 3 or 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • A, H1, or H2 are each independently selected from a C3-8 carbocyclic ring, a benzene ring, a 4-7 membered heterocyclic ring, or a 5-6 membered heteroaromatic ring, the heterocyclic or heteroaromatic ring contains 1 to 4 (eg 1, 2, 3 or 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • A, H1, or H2 are each independently selected from phenyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiazolyl, furanyl, thienyl or oxazolyl;
  • each F is independently selected from C 3-20 carbocyclyl, C 6-20 aryl, 3-20 membered heterocyclyl, or 5-20 membered heteroaryl ring, said heterocyclyl or
  • the heteroaromatic ring contains 1 to 4 (eg 1, 2, 3, 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • each F is independently selected from 3-7 membered monocycloalkyl, 4-10 membered p-cycloalkyl, 5-12 membered spirocycloalkyl, 5-10 membered bridged cycloalkyl, 4-10 membered -7-membered heteromonocycle, 4-10-membered heterocycle, 5-12-membered heterospirocycle, 5-10-membered heterobridged ring, C 6-14 -membered aromatic ring or 5-10-membered heteroaromatic ring, the heteromonocycle
  • the ring, heterocyclic, heterospiro, heterobridged or heteroaromatic ring contains 1 to 4 (eg 1, 2, 3, 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • each R k2 is independently selected from a bond, -CO-, -SO2- , -SO-, or -C( Rk3 ) 2- ;
  • each R k2 is independently selected from -CO-, -SO 2 - or -C(R k3 ) 2 -;
  • the two R k3 and the carbon atom or ring skeleton directly attached to the two together form a 3-8 membered carbocycle or 3-8 membered heterocycle, the two R k1 and the directly attached
  • the two R k3 and the carbon atom or ring skeleton directly attached to both together form a 3-6 membered carbocycle or 3-7 membered heterocycle
  • the two R k1 and the directly attached carbon atom or ring skeleton together form a 3-6 membered carbocycle or 3-7 membered heterocycle
  • the carbon atoms or ring skeleton together form a 3-6 membered carbocycle or 3-7 membered heterocycle optionally further selected from 0 to 4 (eg 0, 1, 2, 3, 4)
  • each R k4 is independently selected from H, OH, NH 2 , CF 3 , CN, C 1-4 alkyl;
  • each R k5 is independently selected from C(CH 3 ) 2 , CO, CH 2 , SO 2 ,
  • each R k5 is independently selected from CO, CH 2 , SO 2 or
  • each R k is independently selected from CO, CH, SO, SO 2 , CH 2 or N;
  • each R k7 is independently selected from C( CH3 ) 2 , CO, CH, N, CH2 , O, S, N( CH3 ), N( CH2CH3 ) , N(cyclopropyl) or NH;
  • each R k7 is independently selected from C( CH3 ) 2 , CH2 , O, N( CH3 ), N( CH2CH3 ) , N(cyclopropyl) or NH;
  • each R k7 is independently selected from CO, CH, N, CH2 , O, S, N( CH3 ), or NH;
  • each R k8 is independently selected from C, N or CH;
  • each R is independently selected from a bond, C( CH3 ) 2 , CO , CH2 , CH2CH2 or SO2 ;
  • each R k9 is independently selected from CO, SO 2 or CH 2 ;
  • K is selected from one of the structural fragments shown in Table K-1;
  • K is selected from one of the structural fragments shown in Table K-2;
  • K is selected from one of the structural fragments shown in Table K-3;
  • K is selected from
  • B is selected from
  • B is selected from one of the following structural fragments:
  • B is selected from one of the structural fragments shown in Table B-1;
  • B is selected from
  • L is selected from -Cy1-CH 2 -Cy2-
  • Cy1 is selected from 4-6 membered nitrogen-containing heterocyclyl groups (preferably azetidinyl, azacyclopentyl, azacyclohexyl, piperazine)
  • Cy2 is selected from 4-6 membered nitrogen-containing heterocyclic groups (preferably azetidine, azetidine, azacyclohexyl, piperazine);
  • r3 is selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • r4 is selected from 0, 1 or 2;
  • R b5 is selected from H, C 1-4 alkyl, said alkyl is optionally further selected from 0 to 4 (eg 0, 1, 2, 3 or 4) selected from H, F, Cl, Br, I , C 1-4 alkyl, C 1-4 alkoxy or C 3-6 cycloalkyl substituent;
  • R b6 is independently selected from H, F, Cl, Br, I, C 1-4 alkyl, C 2-4 alkynyl, C 1-4 alkoxy, said alkyl, alkynyl, alkoxy
  • the group is optionally further selected from 0 to 4 (eg, 0, 1, 2, 3 or 4) selected from H, F, Cl, Br, 1, OH, CN, C 1-4 alkyl, C 1-4 alkane substituted by oxy or C 3-6 cycloalkyl substituent;
  • Each F is independently selected from a C3-20 carbocyclic ring, a C6-20 aromatic ring, a 3-20-membered heterocyclic ring, or a 5-20-membered heteroaromatic ring containing 1 to 4 (e.g. 1, 2, 3 or 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • Each R k2 is independently selected from a bond, -CO-, -SO 2 -, -SO- or -C(R k3 ) 2 -;
  • q is independently selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • R L is each independently selected from H or C 1-6 alkyl
  • R k4 is each independently selected from H, OH, NH 2 , CF 3 , CN, C 1-4 alkyl;
  • Each R k6 is independently selected from CO, CH, SO, SO 2 , CH 2 or N;
  • R k7 are each independently selected from C( CH3 ) 2 , CO, CH, N, CH2 , O, S, N( CH3 ), N( CH2CH3 ) , N(cyclopropyl) or NH;
  • Each R k8 is independently selected from C, N or CH;
  • Each F is independently selected from 3-7 membered monocycloalkyl, 4-10 membered cycloalkyl, 5-12 membered spirocycloalkyl, 5-10 membered bridged cycloalkyl, 4-7 membered heteromonocycle, 4-10-membered heterocyclic ring, 5-12-membered heterospirocyclic ring, 5-10-membered heterobridged ring, C 6-14 aryl or 5-10-membered heteroaryl, the heteromonocyclic, heterocyclic, heterocyclic
  • the spiro, heterobridged or heteroaryl group contains 1 to 4 (eg 1, 2, 3 or 4) heteroatoms selected from O, S, N;
  • R L is selected from H, methyl or ethyl
  • q is independently selected from 0, 1 or 2;
  • E is each independently selected from phenyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiazolyl, furyl, thienyl, or oxazolyl;
  • R k7 are each independently selected from C( CH3 ) 2 , CH2 , O, N( CH3 ), N( CH2CH3 ) , N(cyclopropyl) or NH;
  • p1 or p2 are each independently selected from 0, 1 or 2;
  • Ring V is selected from piperidine, piperazine optionally further substituted with 0 to 2 (eg 0, 1 or 2) F;
  • R b1 , R b2 are selected from methyl
  • K is selected from one of the structural fragments shown in Table K-1;
  • L is selected from -Cy1-, -Cy1-Ak1-, -Cy1-Ak1-Ak2-, -Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-, -Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-, -Cy1-Cy2-, - Cy1-Ak1-Cy2-, -Cy1-Cy2-Ak2-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4- , -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-, -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-, -Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-, -
  • R b3 is independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, CN, methyl, ethyl, isopropyl, propyl, ethynyl, methoxy, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclo pentyl, cyclohexyl, phenyl or 5- to 6-membered heteroaryl, optionally further 0 to 4 (eg 0, 1, 2, 3 or 4) ) is substituted with a substituent selected from H, F, Cl, Br, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy, and the heteroaryl group contains 1 to 3 (eg 1, 2, or 3 ) is selected from the heteroatom of O, S, N;
  • R b4 is selected from H, F, Cl or Br;
  • R b6 are each independently selected from H, F, Cl, Br, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy;
  • K is selected from one of the structural fragments shown in Table K-2;
  • K is selected from one of the structural fragments shown in Table K-3;
  • the present invention relates to the following compounds or their stereoisomers, deuterated products, solvates, prodrugs, metabolites,
  • the present invention relates to the following compounds or their stereoisomers, deuterated compounds, solvates, prodrugs, metabolites, pharmaceutically acceptable salts or co-crystals, wherein the compounds are selected from the compounds of Example 1 to Example 173 .
  • the present invention relates to the following compounds or their stereoisomers, deuterated compounds, solvates, prodrugs, metabolites, pharmaceutically acceptable salts or co-crystals, wherein the compounds are selected from where K is the same as in Table K-2.
  • the present invention relates to the use of the above-mentioned compounds of the present invention or their stereoisomers, deuterated products, solvates, prodrugs, metabolites, pharmaceutically acceptable salts or co-crystals, and the disease is selected from cancer, preferably non- Small Cell Lung Cancer.
  • Constants 1 to 5 heteroatoms selected from O, S, N means containing 1, 2, 3, 4 or 5 heteroatoms selected from O, S, N.
  • Substituted by 0 to X substituents selected from " means substituted by 0, 1, 2, 3 .... X substituents selected from ..., and X is selected from any integer between 1 and 10.
  • substituted with 0 to 4 substituents selected from " means substituted with 0, 1, 2, 3 or 4 substituents selected from ... .
  • substituted with 0 to 5 substituents selected from ! means substituted with 0, 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from ... ... substituents.
  • heterobridged ring is optionally further substituted with 0 to 4 substituents selected from H or F” means that the heterobridged ring is optionally further substituted with 0, 1, 2, 3 or 4 substituents selected from H or F base substituted.
  • a “prodrug” refers to a compound of the present invention that can be metabolized in vivo into a biologically active compound.
  • the prodrugs of the present invention are prepared by modifying the amino or carboxyl groups in the compounds of the present invention, and the modification can be removed by conventional operations or in vivo to obtain the parent compound.
  • the prodrugs of the present invention are administered to a mammalian subject, the prodrugs are cleaved to form free amino or carboxyl groups.
  • Co-crystal refers to a crystal formed by the combination of an active pharmaceutical ingredient (API) and a co-crystal former (CCF) under the action of hydrogen bonds or other non-covalent bonds, wherein the pure states of API and CCF are both at room temperature solid, and there is a fixed stoichiometric ratio between the components.
  • a co-crystal is a multicomponent crystal that includes both binary co-crystals formed between two neutral solids and multi-component co-crystals formed between neutral solids and salts or solvates.
  • the compound of general formula (C-4) and compound (C-7) are subjected to nucleophilic substitution reaction or coupling reaction to obtain the compound of general formula (I).
  • R c2 is selected from H, amino protecting group or hydroxyl protecting group
  • R c3 is selected from H, amino protecting group or hydroxyl protecting group
  • the compound of general formula (C-6) is obtained by nucleophilic substitution reaction or coupling reaction to obtain the compound of general formula (C-3), or the compound of general formula (C-6) is first removed by removing the protecting group, and then by nucleophilic substitution reaction or The coupling reaction obtains the compound of general formula (C-3);
  • the compound of general formula (C-3) is obtained by reduction reaction to obtain the compound of general formula (C-4);
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectrometry
  • HPLC HPLC-based high pressure liquid chromatograph
  • solvent IPA used in the preparation and purification of the present invention refers to isopropanol
  • CAN refers to acetonitrile
  • DEA refers to diethylamine
  • Benzyl 4-formylpiperidine-1-carboxylate (2.47 g, 10 mmol), tert-butyl 2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate (2.54 g, 10 mmol) were mixed In dichloromethane (100 mL), acetic acid (1.2 g, 20 mmol) and sodium triacetoxyborohydride (4.24 g, 20 mmol) were sequentially added, and the mixture was stirred at room temperature overnight.
  • the sixth step 2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methane base)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane (1F)
  • the seventh step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazole) -4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)isoindoline-1, 3-Dione (1G)
  • Step 8 5-(2-((1-(4-Amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl )methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3 -Diketone (1H)
  • the ninth step (6-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)quinoxalin-5-yl)dimethylphosphine oxide (II)
  • Step 10 5-(2-((1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl )amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro [5.5]Undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindole-1,3-dione (Compound 1)
  • Piperazine-1-carboxylate tert-butyl ester (20.00 g, 107.38 mmol), 1-Cbz-4-piperidone (20.05 g, 107.38 mmol) and anhydrous sodium sulfate (15.25 g, 107.38 mmol) were mixed in two In methyl chloride (500 mL), acetic acid (12.90 g, 214.76 mmol) and sodium triacetoxyborohydride (45.52 g, 214.76 mmol) were added successively, and the reaction was carried out at room temperature for 2 h, and 1N aqueous sodium hydroxide solution was added to adjust to basicity.
  • Dissolve 2A (20.00 g, 44.61 mmol) in dichloromethane (120 mL), slowly add trifluoroacetic acid (40 mL), react at room temperature for 1 h, concentrate under reduced pressure to remove dichloromethane and trifluoroacetic acid, add methyl tert-butyl Slurry with ether to obtain a white solid, then add 200 mL of dichloromethane to dissolve the solid, adjust the 1N aqueous sodium hydroxide solution to alkaline, and separate the layers.
  • Step 8 5-(4-[(4-(1-(2-(cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl )methyl]piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-isoindole-1,3-dione ( 2H)
  • the ninth step 5-(4-[(4-(1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl yl]piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-isoindole-1,3-dione (2I)
  • the first step 9-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylic acid tert-butyl ester ( 3A)
  • Step 7 5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((5-dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl) Amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2- (2,6-Dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (Compound 3)
  • the third step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H) -Pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-di Ketones (4C)
  • Step 5 5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidine- 2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl) Piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (Compound 4)
  • the first step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione (5A-1)
  • Step 4 5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidine- 2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl) Piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione (Compound 5)
  • the first step 4-(4-((1-(1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)methyl)piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylic acid benzyl ester ( 6A)
  • Dissolve 8B (3 g, 6.78 mmol) in dichloromethane (30 mL), add trifluoroacetic acid (7.73 g, 67.8 mmol) at room temperature, stir for 1 h, concentrate under reduced pressure, add 20 mL of dichloromethane to the residue, and add sodium bicarbonate The solid (20 g) was filtered with suction, and the filtrate was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to obtain 8C crude product (2.09 g), which was directly used in the next step.
  • Step 6 5-(4-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidine-3- yl)isoindoline-1,3-dione (8G)
  • the seventh step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyridine) oxazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-di Ketone (8H)
  • Step 8 5-(4-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4 '-Bipiperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (8I)
  • Step 9 5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidine-2- (yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl) Piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (Compound 8)
  • the fifth step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazole) -4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1, 3-Diketone (9E)
  • Step 6 5-(4-((9-(4-Amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-di azaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3 -Diketone (9F)
  • the fifth step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazole) -4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1, 3-Diketone (10F)
  • the first step 4-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2, 9-Diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperidine-1-carboxylate tert-butyl ester (11A)
  • the third step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazole- 4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione (11C)
  • Step 7 5-(4-((4-(4-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazine- 1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (12I)
  • Step 6 5-(4-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4 '-Bipiperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (13F)
  • Step 7 5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidine-2- yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl) Trifluoroacetate salt of piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (compound 13)
  • 14A (0.49 g, 0.79 mmol) and 1,4-dioxane solution of hydrogen chloride (20 mL, 4 mol/L) were sequentially added to a 50 mL round-bottomed flask, reacted at room temperature for 2 h, concentrated under reduced pressure, and added 1,4-dioxane Hexane (20 mL), ammonia water (5 mL), stirred at room temperature for 20 min, concentrated under reduced pressure at 50° C. to dryness to obtain 14B, which was directly used in the next reaction.
  • the third step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazole) -4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)isoindoline- 1,3-Dione (14C)
  • the fourth step 5-(2-(1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4' -Bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]non-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1 ,3-Dione (14D)
  • Step 5 5-(2-(1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl )amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-nitrogen Heterospiro[3.5]non-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (compound 14) in trifluoroacetic acid Salt
  • the first step 4-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-di Azaspiro[5.5]undecan-9-yl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate tert-butyl ester (15A)
  • Step 2 5-(9-([1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2 ,6-Dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (15B) hydrochloride
  • Step 5 5-(9-(1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl )amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9 - Diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (Compound 15)
  • the first step 4-((2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-5-yl)-2,9-diazo Spiro[5.5]undec-9-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate tert-butyl ester (16A)
  • Trifluoroacetate (0.6 g) of 10E, tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (0.4 g, 2.0 mmol) were mixed in DMAc (20 mL), and acetic acid (0.12 g, 2 mmol) was added successively ) and sodium triacetoxyborohydride (0.42 g, 2 mmol) and stirred at room temperature overnight.
  • Step 2 5-(9-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2- (2,6-Dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione (16B) trifluoroacetate salt
  • the third step 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyridine) oxazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2 -yl)isoindoline-1,3-dione (16C)

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Abstract

提供一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，及其中间体，以及在EGFR相关疾病如癌症中的用途。 B-L-K(I)

Description

一种膦酰衍生物及其组合物和药学上的应用 技术领域
本发明涉及一种通式(I)的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，及其中间体和制备方法，以及在EGFR相关疾病如癌症疾病中的用途。
背景技术
表皮生长因子受体(EGFR)是一种跨膜蛋白酪氨酸激酶，可作为EGF家族成员触发人类上皮细胞中EGFR信号通路的受体，从而调节细胞增殖，侵袭，转移，凋亡和血管生成(Nat.Rev.Cancer,2007,7,169-181；Expert Opin.Ther.Targets,2012,16,15-31.)。人体内EGFR基因的过度表达、突变或扩增致使EGFR活性异常增加，会导致许多恶性肿瘤如食道癌、胶质母细胞瘤、肛门癌、头颈部上皮癌、乳腺癌、肺癌、特别是非小细胞肺癌(NSCLC)的产生(Cells,2019,8,350-361.)。
PROTAC(proteolysis targeting chimera)分子是一类能够同时结合靶向蛋白和E3泛素连接酶的双功能化合物，此类化合物能够被细胞的蛋白酶体识别，引起靶向蛋白的降解，能够有效地降低靶向蛋白在细胞中的含量。通过在PROTAC分子引入能结合不同靶向蛋白的配体，使PROTAC技术应用于各种疾病的治疗成为可能，该技术近年来同时得到了广泛的关注(ACS Chem.Biol.2017,12,892-898；Drug Discovery Today Technol.2019,31,15-27.)。
开发新型的结合EGFR蛋白和E3泛素连接酶的PROTAC药物，用于治疗与EGFR蛋白相关的疾病，将充满应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种结构新颖的、药效好、生物利用度高、更安全、能抑制并降解EGFR的化合物，用于治疗与EGFR相关疾病如癌症。
本发明提供一种化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，化合物选自通式(I)所示的化合物，
B-L-K  (I)；
在某些实施方案中，L选自键或-C 1-50烃基-，所述烃基中有0至20个亚甲基单元任 选进一步被-Ak-、-Cy-替换；
在某些实施方案中，L选自键或-C 1-20烃基-，所述烃基中有0至20个亚甲基单元任选进一步被-Ak-、-Cy-替换；
在某些实施方案中，L选自键或-C 1-10烃基-，所述烃基中有0至10个(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)亚甲基单元任选进一步被-Ak-、-Cy-替换；
在某些实施方案中，每个-Ak-各自独立地选自Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5；
在某些实施方案中，每个-Ak-各自独立地选自-(CH 2) q-、-(CH 2) q-O-、-O-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR L-、-NR L-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR LC(＝O)-、-NR L(CH 2) qC(＝O)-、-(CH 2) q-C(＝O)NR L-、-C(＝O)-、-C(＝O)-(CH 2) q-NR L-、-(C≡C) q-、-CH＝CH-、-Si(R L) 2-、-Si(OH)(R L)-、-Si(OH) 2-、-P(＝O)(OR L)-、-P(＝O)(R L)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O) 2-或者键，所述的-CH 2-任选进一步被0至2个(例如0、1或2个)选自H、卤素、OH、CN、NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤素取代的C 1-6烷基、羟基取代的C 1-6烷基、氰基取代的C 1-6烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，每个-Cy-各自独立地选自Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5；
在某些实施方案中，每个-Cy-各自独立地选自键、4-8元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、7-10元杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂芳基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
在某些实施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立地选自键、4-7元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、7-10元杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂芳基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
在某些实施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键、4-7元含氮杂 单环、4-10元含氮杂并环、5-12元含氮杂螺环、7-10元含氮杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述杂单环、杂并环、杂桥环、杂螺环、环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂单环、杂并环、杂桥环、杂螺环或杂芳基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
在某些实施方案中，L选自-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Cy5-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、 -Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Ak5-Cy4-；
在某些实施方案中，L选自-Cy1-、-Cy1-Ak1-、-Cy1-Ak1-Ak2-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-、-Cy1-Ak1-Cy2-、-Cy1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Cy5-、-Ak1-Cy2-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Ak2-Ak3-、-Ak1-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、 -Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-；
在某些实施方案中，L选自-Cy1-Cy2-、-Cy1-CH 2-Cy2-，Cy1、Cy2各自独立的选自哌嗪、哌啶、氮杂环丁基、氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环已基、氮杂环丁基螺氮杂环已基、环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环已基螺氮杂环已基、环已基螺氮杂环已基、环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环戊基，所述的Cy1、Cy2任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2、COOH、CN、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些实施方案中，L选自键或表A中的基团，基团左侧与B连接；
表A L基团
Figure PCTCN2022090243-appb-000001
Figure PCTCN2022090243-appb-000002
Figure PCTCN2022090243-appb-000003
Figure PCTCN2022090243-appb-000004
Figure PCTCN2022090243-appb-000005
Figure PCTCN2022090243-appb-000006
Figure PCTCN2022090243-appb-000007
Figure PCTCN2022090243-appb-000008
Figure PCTCN2022090243-appb-000009
Figure PCTCN2022090243-appb-000010
Figure PCTCN2022090243-appb-000011
在某些实施方案中，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自独立的选自-(CH 2) q-、-(CH 2) q-O-、-O-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR L-、-NR L-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR LC(＝O)-、-(CH 2) q-C(＝O)NR L-、-C(＝O)-、-C(＝O)-(CH 2) q-NR L-、-(C≡C) q-或者键，所述的-CH 2-任选进一步被0至2个(例如0、1或2个)选自H、卤素、OH、CN、NH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自独立的选自-O-、-OCH 2-、-CH 2O-、-OCH 2CH 2-、-CH 2CH 2O-、-C≡C-、-C(CH 3) 2-、-CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-N(CH 3)-、-NH-、-CH 2N(CH 3)-、-CH 2NH-、-NHCH 2-、-CH 2CH 2N(CH 3)-、-CH 2CH 2NH-、-NHCH 2CH 2-、-C(＝O)-、-C(＝O)CH 2NH-、-CH 2C(＝O)NH-、-C(＝O)N(CH 3)-、-N(CH 3)C(＝O)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)-；
在某些实施方案中，R L各自独立的选自H、C 1-6烷基、3-7元杂环基、3-7元环烷基、苯基或5-6元杂芳基；
在某些实施方案中，R L各自独立的选自H或C 1-6烷基；
在某些实施方案中，R L各自独立的选自H或C 1-4烷基；
在某些实施方案中，R L各自独立的自H、甲基或乙基；
在某些实施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键或取代的或者未取代的如下基团之一：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己烯基、哌啶、吗啉、哌嗪、苯基、环丙基并环丙基、环丙基并环丁基、环丙基并环戊基、环丙基并环己基、环丁基并环丁基、环丁基并环戊基、环丁基并环已基、环戊基并环戊基、环戊基并环已基、环已基并环已基、环丙基螺环丙基、环丙基螺环丁基、环丙基螺环戊基、环丙基螺环己基、环丁基螺环丁基、环丁基螺环戊基、环丁基螺环己基、环戊基螺环戊基、环戊基螺环已基、环已基螺环已基、环丙基并氮杂环丁基、环丙基并氮杂环戊基、环丙基并氮杂环己基、环丁基并氮杂环丁基、环丁基并氮杂环戊基、环丁基并氮杂环已基、环戊基并氮杂环丁基、环戊基并氮杂环戊基、环戊基并氮杂环已基、环已基并氮杂环丁基、环已基并氮杂环戊基、环已基并氮杂环已基、环己基并哌啶、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环已基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环已基、氮杂环已基并氮杂环丁基、氮杂环已基并氮杂环戊基、氮杂环已基并氮杂环已基、环丁基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环已基、环戊基螺氮杂环丁基、环戊基螺氮杂环戊基、环戊基螺氮杂环已基、环已基螺氮杂环丁基、环已基螺氮杂环戊基、环已基螺氮杂环已基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环已基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环已基、氮杂环已基螺氮杂环丁基、氮杂环已基螺氮杂环戊基、氮杂环已基螺氮杂环已基、
Figure PCTCN2022090243-appb-000012
Figure PCTCN2022090243-appb-000013
Figure PCTCN2022090243-appb-000014
当被取代时，任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2、COOH、CN、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些实施方案中，Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键或取代的或者未取代的如下基团之一：
Figure PCTCN2022090243-appb-000015
Figure PCTCN2022090243-appb-000016
当被取代时，任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、CF 3、甲基、＝O、羟甲基、COOH、CN或NH 2的取代基所取代；
在某些实施方案中，K选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000017
Figure PCTCN2022090243-appb-000018
在某些实施方案中，K选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000019
Figure PCTCN2022090243-appb-000020
Figure PCTCN2022090243-appb-000021
Figure PCTCN2022090243-appb-000022
Figure PCTCN2022090243-appb-000023
表示环选自芳香环或非芳香环；
在某些实施方案中，K选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000024
Figure PCTCN2022090243-appb-000025
Figure PCTCN2022090243-appb-000026
在某些实施方案中，Q各自独立地选自键、-O-、-S-、-CH 2-、-NR q-、-CO-、-NR qCO-、-CONR q-或3-12元杂环，所述的杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选 自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，Q各自独立地选自-O-、-S-、-CH 2-、-NR q-、-CO-、-NR qCO-、-CONR q-或4-7元杂环，所述的杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R q选自H或C 1-6烷基；
在某些实施方案中，R q选自H或C 1-4烷基；
在某些实施方案中，R q选自H、甲基、乙基；
在某些实施方案中，E各自独立地选自C 3-10碳环、C 6-10芳环、3-12元杂环或5-12元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，E各自独立地选自C 3-8碳环、苯环、4-7元杂环、8-12元杂环、7-12元杂芳环或5-6元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，E各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、吲哚啉基、异吲哚啉基、1,2,3,4-四氢喹啉基或1,2,3,4-四氢异喹啉基；
在某些实施方案中，E各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
在某些实施方案中，E各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基；
在某些实施方案中，E各自独立的选自苯环或吡啶环；
在某些实施方案中，A选自C 3-10碳环、C 6-10芳环、3-10元杂环或5-10元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，A、H1或H2各自独立地选自C 3-8碳环、苯环、4-7元杂环或5-6元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，A、H1或H2各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
在某些实施方案中，A、H1或H2各自独立地选自苯基或吡啶基；
在某些实施方案中，F各自独立地选自C 3-20碳环基、C 6-20芳基、3-20元杂环基或5-20 元杂芳环，所述杂环基或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，F各自独立地选自3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、5-10元桥环烷基、4-7元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、5-10元杂桥环、C 6-14芳环或5-10元杂芳环，所述杂单环、杂并环、杂螺环、杂桥环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，F各自独立地选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷基、6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶基、2,3-二氢-1H-茚基、苯基、萘基、蒽基、菲基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、2-吡啶酮、苯并噁唑基、吡啶并咪唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并吡咯基、苯并吡啶基、苯并吡嗪基、苯并嘧啶基、苯并哒嗪基、苯并三嗪基、吡咯并吡咯基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡咯并哒嗪基、吡咯并吡嗪基、咪唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并吡嗪基、咪唑并哒嗪基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、吡唑并哒嗪基、吡唑并吡嗪基、嘧啶并吡啶基、嘧啶并吡嗪基、嘧啶并哒嗪基、嘧啶并嘧啶基、吡啶并吡啶基、吡啶并吡嗪基、吡啶并哒嗪基、哒嗪并哒嗪基、哒嗪并吡嗪基或吡嗪并吡嗪基；
在某些实施方案中，R k2各自独立地选自键、-CO-、-SO 2-、-SO-或-C(R k3) 2-；
在某些实施方案中，R k2各自独立地选自-CO-、-SO 2-或-C(R k3) 2-；
在某些实施方案中，R k1各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3-6环烷基，所述的烷基、烷氧基、环烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R k3各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3-8环烷基或3-8元杂环基，所述的烷基、烷氧基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R k1、R k3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CF 3、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基，所述烷基或烷氧基任选进一步被0 至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2的取代基所取代；
在某些实施方案中，R k1、R k3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CF 3、CN、COOH、CONH 2、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基，所述甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2的取代基所取代；
在某些实施方案中，两个R k3和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-8元碳环或3-8元杂环，两个R k1和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-8元碳环或3-8元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，两个R k3和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-6元碳环或3-7元杂环，两个R k1和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-6元碳环或3-7元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R k4各自独立地选自H、OH、NH 2、CN、CONH 2、C 1-6烷基、C 3-8环烷基或3-8元杂环基，所述的烷基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R k4各自独立的选自H、OH、NH 2、CF 3、CN、C 1-4烷基；
在某些实施方案中，R k5各自独立地选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000027
C(CH 3) 2、CO、CH 2、SO 2、
Figure PCTCN2022090243-appb-000028
Figure PCTCN2022090243-appb-000029
在某些实施方案中，R k5各自独立地选自CO、CH 2、SO 2或
Figure PCTCN2022090243-appb-000030
在某些实施方案中，R k6各自独立地选自CO、CH、SO、SO 2、CH 2或N；
在某些实施方案中，R k7各自独立地选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000031
C(CH 3) 2、CO、CH、N、CH 2、O、S、N(CH 3)、N(CH 2CH 3)、N(环丙基)或NH；
在某些实施方案中，R k7各自独立地选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000032
C(CH 3) 2、CH 2、O、N(CH 3)、N(CH 2CH 3)、N(环丙基)或NH；
在某些实施方案中，R k7各自独立地选自CO、CH、N、CH 2、O、S、N(CH 3)或NH；
在某些实施方案中，R k7各自独立地选自CH 2、O、N(CH 3)或NH；
在某些实施方案中，R k8各自独立地选自C、N或CH；
在某些实施方案中，R k9各自独立地选自键、
Figure PCTCN2022090243-appb-000033
C(CH 3) 2、CO、CH 2、CH 2CH 2或SO 2；
在某些实施方案中，R k9各自独立地选自CO、SO 2或CH 2；
在某些实施方案中，M 1选自键、-CH 2-C(＝O)NH-或-C(＝O)CH 2NH-；
在某些实施方案中，M 2选自-NHC(＝O)-C 1-6烷基、-NHC(＝O)-C 3-6环烷基或4-10元杂环基，所述的烷基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、NH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，M 3选自-NH-或-O-；
在某些实施方案中，R k10选自C 1-6烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、C 1-6烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，G选自6-10元芳环或5-10元杂芳环，所述的芳环或者杂芳环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CF 3、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂芳环含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自N、O、S的杂原子；
在某些实施方案中，R k11各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、SH、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基或-O-C(＝O)-C 1-6烷基，所述的烷基、烷氧基或烷硫基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R k12、R k13各自独立的选自H、C 1-6烷基或C 3-6环烷基，所述的烷基或环烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、NH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R k14选自5-6元杂芳基，所述的杂芳基任选进一步被0至4个(例 如0、1、2、3、4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CF 3、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂芳基含有1至4个(例如1、2、3、4个)选自N、O、S的杂原子；
在某些实施方案中，K选自表K-1所示的结构片段之一；
在某些实施方案中，K选自表K-2所示的结构片段之一；
在某些实施方案中，K选自表K-3所示的结构片段之一；
表K-1
Figure PCTCN2022090243-appb-000034
Figure PCTCN2022090243-appb-000035
Figure PCTCN2022090243-appb-000036
Figure PCTCN2022090243-appb-000037
表K-2
Figure PCTCN2022090243-appb-000038
Figure PCTCN2022090243-appb-000039
Figure PCTCN2022090243-appb-000040
表K-3
Figure PCTCN2022090243-appb-000041
Figure PCTCN2022090243-appb-000042
在某些实施方案中，K选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000043
Figure PCTCN2022090243-appb-000044
在某些实施方案中，B选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000045
在某些实施方案中，B选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000046
Figure PCTCN2022090243-appb-000047
在某些实施方案中，B选自如下结构片段之一：
Figure PCTCN2022090243-appb-000048
Figure PCTCN2022090243-appb-000049
在某些实施方案中，B选自如下结构片段之一:
Figure PCTCN2022090243-appb-000050
在某些实施方案中，B选自表B-1所示的结构片段之一；
表B-1
Figure PCTCN2022090243-appb-000051
Figure PCTCN2022090243-appb-000052
在某些实施方案中，B选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000053
在某些实施方案中，B选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000054
Figure PCTCN2022090243-appb-000055
在某些实施方案中，L选自-Cy1-CH 2-Cy2-，Cy1选自4-6元含氮杂环基(优选氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己基、哌嗪)，Cy2选自4-6元含氮杂环基(优选氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己基、哌嗪)；
在某些实施方案中，r3选自0、1、2、3或4；
在某些实施方案中，r4选自0、1或2；
在某些实施方案中，r6选自0、1、2或3；
在某些实施方案中，环W选自C 6-10碳环、5至10元杂环、C 6-10芳环、5至10元杂芳环，所述的杂环或杂芳环含有1至5个(例如1、2、3、4或5个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，环W选自苯环、萘环、5-6元单环杂芳环、9-10元并环杂芳环或9-10元杂环，所述的杂环或杂芳环含有1至5个(例如1、2、3、4或5个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，
Figure PCTCN2022090243-appb-000056
选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000057
Figure PCTCN2022090243-appb-000058
在某些实施方案中，环V选自4至10元杂环或者C 3-10碳环，所述的杂环或者碳环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，环V选自4至6元杂环或者C 3-6碳环，所述的杂环或者碳环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，环V选自氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基或哌嗪基，所述的氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基或哌嗪基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，环V选自哌啶、哌嗪，所述哌啶、哌嗪任选进一步被0至2个F取代；
在某些实施方案中，R b1、R b2各自独立的选自H、OH或C 1-4烷基；
在某些实施方案中，R b1、R b2各自独立的选自甲基或乙基；
在某些实施方案中，R b1、R b2选自甲基；
在某些实施方案中，R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 2-4炔基C 1-4烷氧基、C 3-6环烷基、3至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的烷基、炔基、烷氧基、环烷基、苯基、杂环基或杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂环基或杂芳基含有1至3个(例如1、2或3个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙基氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基或5至6元杂芳基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙基氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基或5至6元杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代的取代基所取代，所述的杂芳基含有1至3个(例如1、2或3个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基或5至6元杂芳基，所述的苯基或5至6元杂芳基(例如吡唑、吡咯)任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代，所述的杂芳基含有1至3个(例如1、2或3个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R b4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取 代；
在某些实施方案中，R b4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R b4选自H、F、Cl或Br；
在某些实施方案中，R b5选自H、C 1-4烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R b5选自H；
在某些实施方案中，R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、C 1-4烷基、C 2-4炔基、C 1-4烷氧基，所述的烷基、炔基、烷氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
在某些实施方案中，R b7选自4至7元杂环或者C 3-7碳环，所述的碳环或杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、氘代C 1-4烷基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂环基含有1至3个(例如1、2或3个)选自O、S、N的杂原子；
在某些实施方案中，R b7选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述R b7任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、 Cl、Br、I、OH、＝O、CN、氘代C 1-4烷基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
在某些实施方案中，R b7选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述R b7任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、CH 2D、CHD 2、CD 3、甲基、乙基的取代基所取代；
在某些实施方案中，q各自独立的选自0、1、2、3、4、5或6；
在某些实施方案中，q各自独立的选自0、1、2、3或4；
在某些实施方案中，q各自独立的选自0、1或2；
在某些实施方案中，n1、n2、n3各自独立的选自0、1、2或3；
在某些实施方案中，p1或p2各自独立的选自0、1、2、3、4或5；
在某些实施方案中，p1或p2各自独立的选自0、1或2；
任选地，通式(I)所示化合物不为
Figure PCTCN2022090243-appb-000059
作为本发明的第一种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
B-L-K  (I)；
L选自键或-C 1-50烃基-，所述烃基中有0至20个亚甲基单元任选进一步被-Ak-、-Cy-替换；
每个-Ak-各自独立地选自-(CH 2) q-、-(CH 2) q-O-、-O-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR L-、-NR L-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR LC(＝O)-、-NR L(CH 2) qC(＝O)-、-(CH 2) q-C(＝O)NR L-、-C(＝O)-、-C(＝O)-(CH 2) q-NR L-、-(C≡C) q-、-CH＝CH-、-Si(R L) 2-、-Si(OH)(R L)-、-Si(OH) 2-、-P(＝O)(OR L)-、-P(＝O)(R L)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O) 2-或者键，所述的-CH 2-任选进一步被0至2个(例如0、1或2)选自H、卤素、OH、CN、NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤素取代的C 1-6烷基、羟基取代的C 1-6烷基、氰基取代的C 1-6烷基的取代基所取代；
q各自独立的选自0、1、2、3、4、5或6；
R L各自独立的选自H、C 1-6烷基、3-7元杂环基、3-7元环烷基、苯基或5-6元杂芳基；
每个-Cy-各自独立地选自键、4-8元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、7-10元杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂芳基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
B选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000060
r3选自0、1、2、3或4；
r4选自0、1或2；
r6选自0、1、2或3；
环W选自C 6-10碳环、5至10元杂环、C 6-10芳环、5至10元杂芳环，所述的杂环或杂芳环含有1至5个例如1、2、3、4或5个)选自O、S、N的杂原子；
环V选自4至10元杂环或者C 3-10碳环，所述的杂环或者碳环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
R b1、R b2各自独立的选自H、OH或C 1-4烷基；
R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 2-4炔基C 1-4烷氧基、C 3-6环烷基、3至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的烷基、炔基、烷氧基、环烷基、苯基、杂环基或杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂环基或杂芳基含有1至3个(例如1、2或3个)选自O、S、N的杂原子；
R b4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
R b5选自H、C 1-4烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个) 选自H、F、Cl、Br、I、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、C 1-4烷基、C 2-4炔基、C 1-4烷氧基，所述的烷基、炔基、烷氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
R b7选自4至7元杂环或者C 3-7碳环，所述的碳环或杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、氘代C 1-4烷基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂环基含有1至3个(例如1、2或3个)选自O、S、N的杂原子；
K选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000061
Figure PCTCN2022090243-appb-000062
Q各自独立地选自键、-O-、-S-、-CH 2-、-NR q-、-CO-、-NR qCO-、-CONR q-或3-12元杂环基，所述的杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
R q选自H或C 1-6烷基；
A选自C 3-10碳环、C 6-10芳环、3-10元杂环或5-10元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
F各自独立地选自C 3-20碳环、C 6-20芳环、3-20元杂环或5-20元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
R k2各自独立地选自键、-CO-、-SO 2-、-SO-或-C(R k3) 2-；
R k1各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-6 烷基、C 1-6烷氧基、C 3-6环烷基，所述的烷基、烷氧基或环烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-6环烷基的取代基所取代；
R k3各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3-8环烷基或3-8元杂环基，所述的烷基、烷氧基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
或者两个R k3和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-8元碳环或3-8元杂环，两个R k1和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-8元碳环或3-8元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
R k4各自独立地选自H、OH、NH 2、CN、CONH 2、C 1-6烷基、C 3-8环烷基或3-8元杂环基，所述的烷基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
M 1选自键、-CH 2-C(＝O)NH-或-C(＝O)CH 2NH-；
M 2选自-NHC(＝O)-C 1-6烷基、-NHC(＝O)-C 3-6环烷基或4-10元杂环基，所述的烷基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、NH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
M 3选自-NH-或-O-；
R k10选自C 1-6烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、C 1-6烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
R k11各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、SH、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基或C 1-6烷硫基或-O-C(＝O)-C 1-6烷基，所述的烷基、烷氧基或烷硫基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
R k12、R k13各自独立的选自H、C 1-6烷基或C 3-6环烷基，所述的烷基或环烷基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、NH 2、C 1-4 烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
R k14选自5-6元杂芳基，所述的杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CF 3、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂芳基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自N、O、S的杂原子；
G选自6-10元芳环或5-10元杂芳环，所述的芳环或者杂芳环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CF 3、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂芳环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自N、O、S的杂原子；
n1、n2、n3各自独立的选自0、1、2或3；
p1或p2各自独立的选自0、1、2、3、4或5。
作为本发明的第二种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
L选自-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Cy5-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、 -Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Ak5-Cy4-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自独立的选自-(CH 2) q-、-(CH 2) q-O-、-O-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR L-、-NR L-(CH 2) q-、-(CH 2)q-NR LC(＝O)-、-(CH 2) q-C(＝O)NR L-、-C(＝O)-、-C(＝O)-(CH 2) q-NR L-、-(C≡C) q-或者键，所述的-CH 2-任选进一步被0至2个(例如0、1或2个)选自H、卤素、OH、CN、NH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立地选自键、4-7元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、7-10元杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、 杂并环、杂螺环或杂桥环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂芳基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
q各自独立的选自0、1、2、3或4；
R L各自独立的选自H或C 1-6烷基；
其余基团定义与本发明第一种实施方案相同。
作为本发明的第三种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键、4-7元含氮杂单环、4-10元含氮杂并环、5-12元含氮杂螺环、7-10元含氮杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述杂单环、杂并环、杂桥环、杂螺环、环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂单环、杂并环、杂桥环、杂螺环或杂芳基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
R L各自独立的选自H或C 1-4烷基；
环W选自苯环、萘环、5-6元单环杂芳环、9-10元并环杂芳环或9-10元杂环，所述的杂环或杂芳环含有1至5个(例如1、2、3、4或5个)选自O、S、N的杂原子；
环V选自4至6元杂环或者C 3-6碳环，所述的杂环或者碳环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
K选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000063
Figure PCTCN2022090243-appb-000064
Figure PCTCN2022090243-appb-000065
表示环选自芳香环或非芳香环；
Q各自独立地选自-O-、-S-、-CH 2-、-NR q-、-CO-、-NR qCO-、-CONR q-或4-7元杂环基，所述的杂环基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
R q选自H或C 1-4烷基；
R k1、R k3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CF 3、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基，所述烷基或烷氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2的取代基所取代；
或者两个R k3和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-6元碳环或3-7元杂环， 两个R k1和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-6元碳环或3-7元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
R k4各自独立的选自H、OH、NH 2、CF 3、CN、C 1-4烷基；
R k5各自独立地选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000066
C(CH 3) 2、CO、CH 2、SO 2、
Figure PCTCN2022090243-appb-000067
R k6各自独立地选自CO、CH、SO、SO 2、CH 2或N；
R k7各自独立地选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000068
C(CH 3) 2、CO、CH、N、CH 2、O、S、N(CH 3)、N(CH 2CH 3)、N(环丙基)或NH；
R k8各自独立地选自C、N或CH；
R k9各自独立地选自键、
Figure PCTCN2022090243-appb-000069
C(CH 3) 2、CO、CH 2、CH 2CH 2或SO 2；
A、H1或H2各自独立地选自C 3-8碳环、苯环、4-7元杂环或5-6元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
E各自独立地选自C 3-8碳环、苯环、4-7元杂环、8-12元杂环、7-12元杂芳环或5-6元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
F各自独立地选自3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、5-10元桥环烷基、4-7元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、5-10元杂桥环、C 6-14芳基或5-10元杂芳基，所述杂单环、杂并环、杂螺环、杂桥环或杂芳基含有1至4个(例如1、2、3或4个)选自O、S、N的杂原子；
其余基团定义与本发明第一、二种实施方案中任意一种相同。
作为本发明的第四种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
R L选自H、甲基或乙基；
q各自独立的选自0、1或2；
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键或取代的或者未取代的如下基团之一：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己烯基、哌啶、吗啉、哌嗪、苯基、环丙基并环丙基、环丙基并环丁基、环丙基并环戊基、环丙基 并环己基、环丁基并环丁基、环丁基并环戊基、环丁基并环已基、环戊基并环戊基、环戊基并环已基、环已基并环已基、环丙基螺环丙基、环丙基螺环丁基、环丙基螺环戊基、环丙基螺环己基、环丁基螺环丁基、环丁基螺环戊基、环丁基螺环己基、环戊基螺环戊基、环戊基螺环已基、环已基螺环已基、环丙基并氮杂环丁基、环丙基并氮杂环戊基、环丙基并氮杂环己基、环丁基并氮杂环丁基、环丁基并氮杂环戊基、环丁基并氮杂环已基、环戊基并氮杂环丁基、环戊基并氮杂环戊基、环戊基并氮杂环已基、环已基并氮杂环丁基、环已基并氮杂环戊基、环已基并氮杂环已基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环已基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环已基、氮杂环已基并氮杂环丁基、氮杂环已基并氮杂环戊基、氮杂环已基并氮杂环已基、环丁基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环已基、环戊基螺氮杂环丁基、环戊基螺氮杂环戊基、环戊基螺氮杂环已基、环已基螺氮杂环丁基、环已基螺氮杂环戊基、环已基螺氮杂环已基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环已基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环已基、氮杂环已基螺氮杂环丁基、氮杂环已基螺氮杂环戊基、氮杂环已基螺氮杂环已基、
Figure PCTCN2022090243-appb-000070
Figure PCTCN2022090243-appb-000071
Figure PCTCN2022090243-appb-000072
当被取代时，任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2、COOH、CN、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
Figure PCTCN2022090243-appb-000073
选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000074
Figure PCTCN2022090243-appb-000075
环V选自氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基或哌嗪基，所述的氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基或哌嗪基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基的取代基所取代；
R b1、R b2各自独立的选自甲基或乙基；
R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙基氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基或5至6元杂芳基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙基氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基或5至6元杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代的取代基所取代，所述的杂芳基含有1至3个(例如1、2或3个)选自O、S、N的杂原子；
R b4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
R b5选自H；
R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
R b7选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述R b7任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、氘代C 1-4烷基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6 环烷基的取代基所取代；
K选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000076
Figure PCTCN2022090243-appb-000077
Figure PCTCN2022090243-appb-000078
E各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
A各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
F各自独立地选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷基、6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶基、2,3-二氢-1H-茚基、苯基、萘基、蒽基、菲基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、2-吡啶酮、苯并噁唑基、吡啶并咪唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并吡咯基、苯并吡啶基、苯并吡嗪基、苯并嘧啶基、苯并哒嗪基、苯并三嗪基、吡咯并吡咯基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡咯并哒嗪基、吡咯并吡嗪基、咪唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并吡嗪基、咪唑并哒嗪基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、吡唑并哒嗪基、吡唑并吡嗪基、嘧啶并吡啶基、嘧啶并吡嗪基、嘧啶并哒嗪基、嘧啶并嘧啶基、吡啶并 吡啶基、吡啶并吡嗪基、吡啶并哒嗪基、哒嗪并哒嗪基、哒嗪并吡嗪基或吡嗪并吡嗪基；
R k7各自独立地选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000079
C(CH 3) 2、CH 2、O、N(CH 3)、N(CH 2CH 3)、N(环丙基)或NH；
p1或p2各自独立的选自0、1或2；
其余基团定义与本发明第一、二、三种实施方案中任意一种相同。
作为本发明的第五种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键或取代的或者未取代的如下基团之一：
Figure PCTCN2022090243-appb-000080
Figure PCTCN2022090243-appb-000081
Figure PCTCN2022090243-appb-000082
当被取代时，任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、CF 3、甲基、＝O、羟甲基、COOH、CN或NH 2的取代基所取代；
B选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000083
Figure PCTCN2022090243-appb-000084
环V选自哌啶、哌嗪，所述哌啶、哌嗪任选进一步被0至2个(例如0、1或2个)F取代；
R b1、R b2选自甲基；
K选自表K-1所示的结构片段之一；
其余基团定义与本发明第一、二、三或四种实施方案中任意一种相同。
作为本发明的第六种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
L选自-Cy1-、-Cy1-Ak1-、-Cy1-Ak1-Ak2-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-、-Cy1-Ak1-Cy2-、-Cy1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Cy5-、-Ak1-Cy2-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Ak2-Ak3-、-Ak1-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、 -Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自独立的选自-O-、-OCH 2-、-CH 2O-、-OCH 2CH 2-、-CH 2CH 2O-、-C≡C-、-C(CH 3) 2-、-CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-N(CH 3)-、-NH-、-CH 2N(CH 3)-、-CH 2NH-、-NHCH 2-、-CH 2CH 2N(CH 3)-、-CH 2CH 2NH-、-NHCH 2CH 2-、-C(＝O)-、-C(＝O)CH 2NH-、-CH 2C(＝O)NH-、-C(＝O)N(CH 3)-、-N(CH 3)C(＝O)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)-；
其余基团定义与本发明第一、二、三、四或五种实施方案中任意一种相同。
作为本发明的第七种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
L选自键或表A中的基团，其中基团左侧与B连接；
其余基团定义与本发明第一、二、三、四、五或六种实施方案中任意一种相同。
作为本发明的第八种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
B选自如下结构片段之一：
Figure PCTCN2022090243-appb-000085
Figure PCTCN2022090243-appb-000086
Figure PCTCN2022090243-appb-000087
R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基或5至6元杂芳基，所述的苯基或5至6元杂芳基任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代，所述的杂芳基含有1至3个(例如1、2、或3个)选自O、S、N的杂原子；
R b4选自H、F、Cl或Br；
R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
R b7选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯、吡唑、吡啶、苯基，所述R b7任选进一步被0至4个(例如0、1、2、3或4个)选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、CH 2D、CHD 2、CD 3、甲基、乙基的取代基所取代；
K选自表K-2所示的结构片段之一；
其余基团定义与本发明第一、二、三、四、五、六或七种实施方案中任意一种相同。
作为本发明的第九种实施方案，上述通式(I)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
B选自表B-1所示结构片段之一；
K选自表K-3所示的结构片段之一；
其余基团定义与本发明第一、二、三、四、五、六、七或八种实施方案中任意一种相同。
本发明涉及一种下述化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、
药学上可接受的盐或共晶，其中化合物选自表E-1所示结构之一。
本发明涉及一种下述化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中化合物选自实施例1至实施例173的化合物。
本发明涉及一种下述化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中化合物选自
Figure PCTCN2022090243-appb-000088
其中K与表K-2相同。
表E-1
Figure PCTCN2022090243-appb-000089
Figure PCTCN2022090243-appb-000090
Figure PCTCN2022090243-appb-000091
Figure PCTCN2022090243-appb-000092
Figure PCTCN2022090243-appb-000093
Figure PCTCN2022090243-appb-000094
Figure PCTCN2022090243-appb-000095
Figure PCTCN2022090243-appb-000096
Figure PCTCN2022090243-appb-000097
Figure PCTCN2022090243-appb-000098
Figure PCTCN2022090243-appb-000099
Figure PCTCN2022090243-appb-000100
Figure PCTCN2022090243-appb-000101
Figure PCTCN2022090243-appb-000102
Figure PCTCN2022090243-appb-000103
Figure PCTCN2022090243-appb-000104
Figure PCTCN2022090243-appb-000105
Figure PCTCN2022090243-appb-000106
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Figure PCTCN2022090243-appb-000111
Figure PCTCN2022090243-appb-000112
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Figure PCTCN2022090243-appb-000123
Figure PCTCN2022090243-appb-000124
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Figure PCTCN2022090243-appb-000130
Figure PCTCN2022090243-appb-000131
本发明涉及一种药物组合物，包括本发明上述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，以及药学上可接受的载体，任选地包含一种多或多种其它化学治疗剂。
本发明涉及一种本发明上述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶或所述药物组合物在用于制备治疗与EGFR活性或表达量相关疾病的药物中的应用。
本发明涉及一种本发明上述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶或所述药物组合物在用于制备治疗与抑制或降解EGFR相关疾病的药物中的应用。
本发明涉及的本发明上述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶的应用，所述的疾病选自癌症，优选非小细胞肺癌。
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或F、Cl、Br、I均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括 12C、 13C和 14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括 16O、 17O 和 18O，硫的同位素包括 32S、 33S、 34S和 36S，氮的同位素包括 14N和 15N，氟的同位素包括 17F和 19F，氯的同位素包括 35Cl和 37Cl，溴的同位素包括 79Br和 81Br。
“卤素”是指F、Cl、Br或I。
“卤素取代的”是指F、Cl、Br或I取代，包括但不限于1至10个选自F、Cl、Br或I的取代基所取代，1至6个选自F、Cl、Br或I的取代基所取代，1至4个选自F、Cl、Br或I的取代基所取代。“卤素取代的”简称为“卤代”。
“烷基”是指取代的或者未取代的直链或支链饱和脂肪族烃基，包括但不限于1至20个碳原子的烷基、1至8个碳原子的烷基、1至6个碳原子的烷基、1至4个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、新丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基及其各种支链异构体；本文中出现的烷基，其定义与本定义一致。烷基可以是一价、二价、三价或四价。
“烃基”是指取代的或者未取代的、直链或支链的、饱和或不饱和的由碳、氢原子组成的基团。烃基可以是一价、二价、三价或四价。
“杂烷基”指取代的或者未取代的烷基中的1个或多个(包括但不限于2、3、4、5或6个)碳原子被杂原子(包括但不限于N、O或S)替换。非限制性实施例包括-X(CH 2)v-X(CH 2)v-X(CH 2)v-H(v为1至5的整数，X各自独立的选自键或杂原子，杂原子包括但不限于N、O或S，且至少有1个X选自杂原子，且杂原子中的N或S可被氧化成各种氧化态)。杂烷基可以是一价、二价、三价或四价。
“亚烷基”是指取代的或者未取代的直链和支链的二价饱和烃基，包括-(CH 2) v-(v为1至10的整数)，亚烷基实施例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基等。
“亚杂烷基”是指取代的或者未取代的亚烷基中的1个或多个(包括但不限于2、3、4、5或6个)碳原子被杂原子(包括但不限于N、O或S)替换。非限制性实施例包括-X(CH 2)v-X(CH 2)v-X(CH 2)v-，v为1至5的整数，X各自独立的选自键、N、O或S，且至少有1个X选自N、O或S。
“环烷基”是指取代的或者未取代的饱和的碳环烃基，通常有3至10个碳原子，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基等。本文中出现的环烷基，其定义如上所述。环烷基可以是一价、二价、三价或四价。
“杂环烷基”是指取代的或者未取代的饱和的含有杂原子的环烃基，包括但不限于3至10个原子、3至8个原子，包含1至3个选自N、O或S的杂原子，杂环烷基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环烷基可以连接在杂原子或者碳原子上， 杂环烷基可以连接在芳香环上或者非芳香环上，杂环烷基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、二氧戊环基、二氧六环基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基、噁唑烷基、噁嗪烷基、吗啉基、六氢嘧啶基、哌嗪基。杂环烷基可以是一价、二价、三价或四价。
“烯基”是指取代的或者未取代的直链和支链的不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳双键，主链包括但不限于2至10个、2至6个或2至4个碳原子，烯基实施例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；本文中出现的烯基，其定义与本定义一致。烯基可以是一价、二价、三价或四价。
“炔基”是指取代的或者未取代的直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键，包括但不限于在主链包括2至10个碳原子、2至6个碳原子、2至4个碳原子，炔基实施例包括但不限于乙炔基、炔丙基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-甲基-1-丁炔基、2-甲基-1-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、1-甲基-1-戊炔基、2-甲基-1-戊炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、1-辛炔基、3-辛炔基、1-壬炔基、3-壬炔基、1-癸炔基、4-癸炔基等；炔基可以是一价、二价、三价或四价。
“烷氧基”是指取代的或者未取代的-O-烷基。非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、环丙氧基和环丁氧基。
“碳环基”或“碳环”是指取代的或未取代的饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至8元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，碳环基可以连接在芳香环上或者非芳香环上，芳香环或者非芳香环任选为单环、桥环或者螺环。非限制性实施例包括环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、 环己烯基、苯环、萘环、
Figure PCTCN2022090243-appb-000132
“碳环基”或“碳环”可以是一价、二价、三价或四价。
“杂环基”或“杂环”是指取代的或未取代的饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至8元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，且包含1个或多个(包括但不限于2、3、4或5个)个选自N、O或S的杂原子，杂环基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接在芳香环上或者非芳香环上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、吡嗪基、吲唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并吡咯基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并吡嗪基、哌嗪基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基、氧杂螺[3.3]庚烷基、
Figure PCTCN2022090243-appb-000133
Figure PCTCN2022090243-appb-000134
Figure PCTCN2022090243-appb-000135
“杂环基”或“杂环”可以是一价、二价、三价或四价。
“螺环”或“螺环基”是指取代的或未取代的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环基团，螺环体系中环原子的个数包括但不限于含有5至20个、6至14个、6至12个、6至10个，其中一个或多个环可以含有0个或多个(包括但不限于1、2、3或4)双键，且任选可以含有0至5个选自N、O或S(＝O) n的杂原子。
Figure PCTCN2022090243-appb-000136
“螺环”或“螺环基”可以是一价、二价、三价或四价。
“并环”或“并环基”是指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环基团，其中一个或多个环可以含有0个或多个(包括但不限于1、2、3或4)双键，且可以是取代的或未取代，并环体系中的各个环可以含0至5个杂原子或含有杂原子的基团(包括但不限于选自N、S(＝O) n或O，n为0、1或2)。并环体系中环原子的个数包括但不限于5至20个，5至14个，5至12个，5至10个。非限定性实例包括：
Figure PCTCN2022090243-appb-000137
“并环”或“并环基”可以是一价、二价、三价或四价。
“桥环”或“桥环基”是指取代的或未取代的含有任意两个不直接连接的原子的多环基团，可以含有0个或多个双键，并环体系中的任意环可以含0至5个选自杂原子或含有杂原子的基团(包括但不限于N、S(＝O)n或O，其中n为0、1、2)。环原子个数包括但不限于5至20个、5至14个、5至12个或5至10个。非限定性实例包括
Figure PCTCN2022090243-appb-000138
Figure PCTCN2022090243-appb-000139
立方烷、金刚 烷。“桥环”或“桥环基”可以是一价、二价、三价或四价。
“碳螺环”、“螺环碳环基”、“螺碳环基”或者“碳螺环基”是指环体系仅有碳原子组成的“螺环”。本文中出现的“碳螺环”、“螺环碳环基”、“螺碳环基”或者“碳螺环基”，其定义与螺环一致。
“碳并环”、“并环碳环基”、“并碳环基”或者“碳并环基”是指环体系仅有碳原子组成的“并环”。本文中出现的“碳并环”、“并环碳环基”、“并碳环基”或者“碳并环基”，其定义与并环一致。
“碳桥环”、“桥环碳环基”、“桥碳环基”或者“碳桥环基”是指环体系仅有碳原子组成的“桥环”。本文中出现的“碳桥环”、“桥环碳环基”、“桥碳环基”或者“碳桥环基”，其定义与桥环一致。
“杂单环”、“单环杂环基”或“杂单环基”是指单环体系的“杂环基”或“杂环”，本文中出现的杂环基、“单环杂环基”或“杂单环基”，其定义与杂环一致。
“杂并环”、“杂并环基”、“并环杂环基”或“杂并环基”是指含有杂原子的“并环”。本文中出现的杂并环、“杂并环基”、“并环杂环基”或“杂并环基”，其定义与并环一致。
“杂螺环”、“杂螺环基”、“螺环杂环基”或“杂螺环基”是指含有杂原子的“螺环”。本文中出现的杂螺环、“杂螺环基”、“螺环杂环基”或“杂螺环基”，其定义与螺环一致。
“杂桥环”、“杂桥环基”、“桥环杂环基”或“杂桥环基”是指含有杂原子的“桥环”。本文中出现的杂桥环、“杂桥环基”、“桥环杂环基”或“杂桥环基”，其定义与桥环一致。
“芳基”或“芳环”是指取代的或者未取代的具有单环或稠合环的芳香族烃基，芳香环中环原子个数包括但不限于6至18、6至12或6至10个碳原子。芳基环可以稠合于饱和或不饱和的碳环或杂环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含苯环、萘环、
Figure PCTCN2022090243-appb-000140
“芳基”或“芳环”可以是一价、二价、三价或四价。当为二价、三价或四价时，连接位点位于芳基环上。
“杂芳基”或“杂芳环”是指取代或未取代的芳香族烃基，且含有1至5个选杂原子或含有杂原子的基团(包括但不限于N、O或S(＝O)n，n为0、1、2)，杂芳香环中环原子个数包括但不限于5至15、5至10或5至6个。杂芳基的非限制性实施例包括但不限于吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、苯并吡唑、苯并咪唑、苯并吡啶、吡咯并吡啶等。所述杂芳基环可以稠合于饱 和或不饱和的碳环或杂环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含
Figure PCTCN2022090243-appb-000141
Figure PCTCN2022090243-appb-000142
本文中出现的杂芳基，其定义与本定义一致。杂芳基可以是一价、二价、三价或四价。当为二价、三价或四价时，连接位点位于杂芳基环上。
“5元环并5元杂芳环”是指5并5元的稠合杂芳环，2个并环中至少有1个环含有1个以上的杂原子(包括但不限于O、S或N)，整个基团具有芳香性，非限制实施例包括了吡咯并吡咯环、吡唑并吡咯环、吡唑并吡唑环、吡咯并呋喃环、吡唑并呋喃环、吡咯并噻吩环、吡唑并噻吩环。
“5并6元杂芳环”是指5并6元的稠合杂芳环，2个并环中至少有1个环含有1个以上的杂原子(包括但不限于O、S或N)，整个基团具有芳香性，非限制实施例包括了苯并5元杂芳基、6元杂芳环并5元杂芳环。
“取代”或“取代的”是指被1个或多个(包括但不限于2、3、4或5个)取代基所取代，取代基包括但不限于H、F、Cl、Br、I、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH 2) m-C(＝O)-R a、-O-(CH 2) m-C(＝O)-R a、-(CH 2) m-C(＝O)-NR bR c、-(CH 2) mS(＝O) nR a、-(CH 2) m-烯基-R a、OR d或-(CH 2) m-炔基-R a(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-NR bR c等基团，其中R b与R c独立选自包括H、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，R b与R c可形成五或六元环烷基或杂环基，R a、R d独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。
“含有1至5个选自O、S、N的杂原子”是指含有1、2、3、4或5个选自O、S、N的杂原子。
“0至X个选自…取代基所取代”是指被0、1、2、3….X个选自…取代基所取代，X选自1至10之间的任意整数。如“0至4个选自…取代基所取代”是指被0、1、2、3或4个选自…取代基所取代。如“0至5个选自…取代基所取代”是指被0、1、2、3、4或5个选自…取代基所取代。如“杂桥环任选进一步被0至4个选自H或F的取代基所取代”是指杂桥环任选进一步被0、1、2、3或4个选自H或F的取代基所取代。
X-Y元的环(X选自小于Y大于等于3的整数，Y选自4至12之间的任意整数)包括 了X+1、X+2、X+3、X+4….Y元的环。环包括了杂环、碳环、芳环、芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环。如“4-7元杂单环”是指4元、5元、6元或7元的杂单环，“5-10元杂并环”是指5元、6元、7元、8元、9元或10元的杂并环。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“药学上可接受的盐”或者“其药学上可接受的盐”是指本发明化合物保持游离酸或者游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或者有机碱，所述的游离碱通过与无毒的无机酸或者有机酸反应获得的盐。
“药物组合物”是指一种或多种本发明所述化合物、或者其立体异构体、互变异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶和其它化学组分形成的混合物，其中，“其它化学组分”是指药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。
药物组合物以适合于待治疗(或预防)的疾病的方式给予。适当的剂量以及合适的给予持续时间和频率将由诸如患者的状况、患者的疾病的类型和严重程度、活性成分的特定形式以及给予方法的因素来确定。可以使用实验模型和/或临床试验来确定最佳剂量。
在一些实施方案中，本方法涉及给予约0.1μg至约500mg本发明的至少一种化合物/kg受试者体重。更普遍地使用从约10μg至约200mg剂量的本申请公开的化合物，取决于受试者的生理反应。例如，用于治疗和/或预防如本申请描述的疾病的本申请描述的化合物的剂量是约0.001至约1mg/kg受试者体重/天，例如约0.001mg、约0.002mg、约0.005mg、约0.010mg、0.015mg、约0.020mg、约0.025mg、约0.050mg、约0.075mg、约0.1mg、约0.15mg、约0.2mg、约0.25mg、约0.5mg、约0.75mg或约1mg/kg体重/天。在一些实施方案中，用于所描述的方法的本申请描述的化合物的剂量是约1至约1000mg/kg所治疗的受试者体重/天，约1mg、约2mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约500mg、约750mg或约1000mg/天。
“载体”是指不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的材料。
“赋形剂”是指加入到药物组合物中以促进化合物给药的惰性物质。非限制性实施例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚 乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
“前药”是指可经体内代谢转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰本发明化合物中的氨基或者羧基来制备，该修饰可以通过常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。当本发明的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂形成游离的氨基或者羧基。
“共晶”是指活性药物成分(API)和共晶形成物(CCF)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中API和CCF的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。
“动物”是指包括哺乳动物，例如人、陪伴动物、动物园动物和家畜，优选人、马或者犬。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“互变异构体”是指分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体，如酮式-烯醇式异构和酰胺-亚胺醇式异构等。
“IC 50”是对指定的生物过程(或该过程中的某个组分比如酶、受体、细胞等)抑制一半时所需的药物或者抑制剂的浓度。
具体实施方式
以下结合实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
为了完成本发明的目的，根据本领域技术人员已知的有机合成技术，从市售的化学品和/或化学文献中描述的化合物开始，制备本文所述反应中使用的化合物“商业上可用的化学品”是从标准的商业来源获得的，包括上海阿拉丁生化科技股份有限公司，上海麦克林生化科技有限公司，Sigma-Aldrich，阿法埃莎(中国)化学有限公司，梯希爱(上海)化成工业发展有限公司，安耐吉化学，上海泰坦科技股份有限公司，科龙化工，百灵威科技有限公司等。
合成方法一：
Figure PCTCN2022090243-appb-000143
R c1选自卤素；
R c2选自H、氨基保护基或者羟基保护基；
R m1选自离去基团，优选卤素、OMs、OTs或OTf，
其余基团定义与说明书一致；
通式(C-1)化合物通过亲核取代反应或者偶联反应得到通式(C-2)化合物；
通式(C-2)化合物通过亲核取代反应、或者偶联反应、或者还原胺化、或者缩合反应得到通式(C-3)化合物；或者通式(C-2)化合物先通过脱去保护基，再通过亲核取代反应、或者偶联反应、或者还原胺化、或者缩合反应得到通式(C-3)化合物；
通式(C-3)化合物通过还原反应得到通式(C-4)化合物；
通式(C-4)化合物与化合物(C-7)通过亲核取代反应或者偶联反应得到通式(I)化合物。
合成方法二：
Figure PCTCN2022090243-appb-000144
R c2选自H、氨基保护基或者羟基保护基；
R c3选自H、氨基保护基或者羟基保护基；
其余基团定义与说明书一致；
通式(C-5)化合物通过亲核取代反应、或者偶联反应、或者还原胺化、或者缩合反应得到通式(C-6)化合物；或者通式(C-5)化合物先通过脱去保护基，再通过亲核取代反应、或者偶联反应、或者还原胺化、或者缩合反应得到通式(C-6)化合物；
通式(C-6)化合物通过亲核取代反应或者偶联反应得到通式(C-3)化合物，或者通式(C-6)化合物先通过脱去保护基、再通过亲核取代反应或者偶联反应得到通式(C-3)化合物；
通式(C-3)化合物通过还原反应得到通式(C-4)化合物；
通式(C-4)化合物与化合物(C-7)通过亲核取代反应或者偶联反应得到通式(I)化合物。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10 -6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，氘代氯仿(CDCl 3)，氘代甲醇(CD 3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)；
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))；
HPLC的测定使用Agilent 1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm,3.5μM)；
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm；
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体。
SEM：
Figure PCTCN2022090243-appb-000145
THP：
Figure PCTCN2022090243-appb-000146
Boc：叔丁氧基羰基；Ms：
Figure PCTCN2022090243-appb-000147
TBS：
Figure PCTCN2022090243-appb-000148
MTBE:甲基叔丁基醚；Bn：
Figure PCTCN2022090243-appb-000149
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺；DMAc：N,N-二甲基乙酰胺；DMSO：二甲基亚砜；DCM：二氯甲烷；Cbz：
Figure PCTCN2022090243-appb-000150
NMP：N-甲基吡咯烷酮；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；TFA：三氟乙酸
2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮：
Figure PCTCN2022090243-appb-000151
EDCI：CAS 25952-53-8 HOBT：CAS 2592-95-2 RuPhosPdG3：CAS 1445085-77-7
Pd(dppf)Cl 2·DCM：CAS 95464-05-4
没有特殊说明，本发明的制备HPLC采用的仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)
没有特殊说明，本发明的制备纯化中用到的溶剂IPA是指异丙醇、CAN指乙腈、DEA指二乙胺。
实施例1：化合物1的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000152
第一步：2-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一碳-9-羧酸叔丁酯(1A)
tert-butyl 2-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000153
将4-甲酰基哌啶-1-羧酸苄酯(2.47g,10mmol)，2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(2.54g,10mmol)混合于二氯甲烷(100mL)中，依次加入醋酸(1.2g,20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(4.24g,20mmol)，室温下搅拌过夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N的氢氧化钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝10/1-1/1)得到1A(4.1g，收率：84.5％)。
LCMS m/z＝486.2[M+H] +。
第二步：2-(哌啶-4-基甲基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(1B)
tert-butyl 2-(piperidin-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000154
将1A(4.1g,0.85mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入钯碳(wt％＝10％,410mg)，氢气置 换3次，氢气氛围(气球压强)、室温下搅拌过夜，过滤，滤液减压浓缩得到1B(2.96g)。
第三步：1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)
1-bromo-2-fluoro-4-methoxy-5-nitrobenzene
Figure PCTCN2022090243-appb-000155
将4-溴-5-氟-2-硝基苯酚(1g，4.24mmol)溶于10mLDMF中，加入碳酸钾(1.76g，12.72mmol)和碘甲烷(1.2g,8.48mmol)，45℃反应2h。冷却至室温，加入30mL水稀释反应液，减压抽滤，滤饼为1C(0.95g,收率：90％)。
LCMS m/z＝250.0[M+H] +。
第四步：4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)
4-(2-fluoro-4-methoxy-5-nitrophenyl)-1-methyl-1H-pyrazole
Figure PCTCN2022090243-appb-000156
氮气保护，50mL单口瓶瓶中加入1C(500mg，2mmol)和N-甲基吡唑-4-硼酸(CAS：847818-55-7，450mg，3.57mmol)，溶于10mL二氧六环和2mL水中，加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(160mg，0.2mmol)和碳酸钾(560mg，4mmol)，氮气置换三次，100℃反应2h，降温至室温，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得1D(400mg，收率80％)。
LCMS m/z＝252.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.27(d,1H),8.18(s,1H),7.92(s,1H),7.40(d,1H),3.95(s,3H),3.89(s,3H)。
第五步：2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(1E)
tert-butyl 2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000157
将1B(351mg,1mmol)，1D(301mg,1.2mmol)和碳酸钾(414mg,3mmol)混合溶于 DMSO(10mL)中，120℃搅拌16h。冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到1E(407mg，收率：70％)。
LCMS m/z＝583.5[M+H] +。
第六步：2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一烷(1F)
2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane
Figure PCTCN2022090243-appb-000158
将1E(407mg,0.7mmol)溶于DCM(10mL)，室温下加入TFA(3mL)，搅拌3h，减压浓缩后加入20mL DCM，用1N NaOH水溶液调节pH＝9-10，分液，有机层减压浓缩后得到1F(337mg)。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一烷-9-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1G)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000159
将1F(337mg,0.7mmol)溶于DMSO(5mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(276mg,1mmol)和DIPEA(0.31g,2.4mmol)，90℃搅拌3h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到1G(306mg，收率：59.2％)。
LCMS m/z＝739.3[M+H] +。
第八步：5-(2-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1H)
5-(2-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl) -2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000160
将1G(306mg,4.15mmol)、铁粉(200mg,3.57mmol)、氯化铵(200mg,3.77mmol)溶于乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃搅拌2h，冷却至室温，抽滤，滤液浓缩后得到1H(250mg,86.9％)。
LCMS m/z＝355.3[(M+2H)/2] +。
第九步：(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1I)
(6-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)quinoxalin-5-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000161
将(6-氨基喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(2.80g,12.66mmol，参见专利WO2020147838)和2,4,5-三氯嘧啶(4.64g,25.32mmol)溶于NMP(15mL)中，加入DIPEA(1.96g,5.19mmol)，氮气保护下130℃反应6h。冷却至室温，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有机层用30mL饱和食盐水洗涤一次。有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/2-1/0)，得到1I(3g，收率：64％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ13.28(s,1H),9.22-9.16(m,1H),8.82(d,1H),8.76(d,1H),8.37–8.22(m,2H),2.15(s,3H),2.12(s,3H)。
第十步：5-(2-((1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑基-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(化合物1)
5-(2-((1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000162
将1H(180mg,0.25mmol)和1I(0.12g,0.33mmol，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(142mg,0.75mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备产物以饱和碳酸氢钠水溶液碱化游离得到化合物1(53mg，收率：20.1％)。
LCMS m/z＝520.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.88(s,1H),11.04(s,1H),9.03–8.91(m,1H),8.86–8.73(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.81(s,1H),7.71–7.44(m,3H),7.33–7.25(m,1H),7.20(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.55–3.39(m,4H),3.14–3.04(m,2H),2.94–2.82(m,1H),2.72–2.51(m,6H),2.37–2.31(m,1H),2.25–2.13(m,3H),2.08–1.94(m,7H),1.81–1.72(m,2H),1.70–1.47(m,7H),1.39–1.28(m,4H)。
实施例2：化合物2的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000163
Figure PCTCN2022090243-appb-000164
第一步：4-(1-[(苄氧基)羰基]哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2A)
tert-butyl 4-(1-[(benzyloxy)carbonyl]piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000165
将哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20.00g,107.38mmol)，1-Cbz-4-哌啶酮(20.05g,107.38mmol)和无水硫酸钠(15.25g,107.38mmol)混合于二氯甲烷(500mL)中，依次加入醋酸(12.90g,214.76mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(45.52g,214.76mmol)，室温反应2h，加入1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝10/1-1/1)得到2A(39.6g，收率：82％)。
LCMS m/z＝404.2[M+H] +。
第二步：4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯(2B)
benzyl 4-(piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000166
将2A(20.00g,44.61mmol)溶于二氯甲烷(120mL)中，缓慢加入三氟乙酸(40mL)，室温反应1h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，加入甲基叔丁基醚打浆得到白色固体，再加入200mL二氯甲烷将固体溶解，1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液。收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到2B(10.0 g，收率：74％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝304.2[M+H] +。
第三步：4-(4-[(1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基)甲基]哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(2C)
benzyl 4-(4-[(1-[(tert-butoxy)carbonyl]piperidin-4-yl)methyl]piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000167
将2B(10.00g,32.96mmol)，4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.03g,32.96mmol)溶于二氯甲烷(120mL)中，依次加入醋酸(3.96g,65.92mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(13.97g,65.92mmol)，室温反应1h，加入1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到2C(16.14g，收率：98％)。
LCMS m/z＝501.1[M+H] +。
第四步：4-[(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2D)
tert-butyl 4-[(4-(piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000168
将2C(6.00g,11.98mmol)溶于异丙醇(100mL)以及氨甲醇溶液(25mL)混合溶剂中，加入钯碳(wt％＝10％,2.93g)，1atm氢气置换3次，室温反应1.5h，硅藻土过滤，二氯甲烷/甲醇(V/V＝10/1)洗涤滤饼，滤液减压浓缩得到2D(4.3g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝367.3[M+H] +。
第五步：1-环丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)
1-cyclopropyl-2-fluoro-4-methoxy-5-nitrobenzene
Figure PCTCN2022090243-appb-000169
氮气保护下将1C(3.0g,12.0mmol)、环丙基硼酸(2.06g，24.0mmol)、碳酸钾(4.98g，36.0mmol)和Pd(dppf)Cl 2·DCM(880mg，1.2mmol)加入到圆底烧瓶中，加入1,4-二氧六环(40mL)和水(5mL)，100℃反应3h。将反应液冷却至室温，硅藻土抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱色谱纯化(PE：EA＝20:1)得到2E(1.8g， 收率：70％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.55(d,1H),6.75(d,1H),3.93(s,3H),2.07–1.92(m,1H),1.07–0.92(m,2H),0.76–0.64(m,2H)。
第六步：4-[(4-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2F)
tert-butyl 4-[(4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000170
将2E(0.3g,1.42mmol)和2D(0.78g,2.13mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入碳酸钾(0.59g,4.26mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)三次。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到2F(0.5g，收率：63％)。
LCMS m/z＝558.5[M+H] +。
第七步：1-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-[(哌啶-4-基)甲基]哌嗪(2G)
1-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-[(piperidin-4-yl)methyl]piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000171
将2F(0.5g,0.9mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，室温下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室温搅拌2h。减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N氢氧化钠水溶液调节pH>10。分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到2G(0.38g)粗品。
第八步：5-(4-[(4-(1-(2-(环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(2H)
5-(4-[(4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-isoindole-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000172
将2G(0.38g,0.83mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.66mmol)，90℃搅拌5h，冷却至室温，加入20mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-30/1)，得到2H(0.46g，收率：77％)
第九步：5-(4-[(4-(1-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(2I)
5-(4-[(4-(1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl]piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-isoindole-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000173
将2H(0.2g,0.28mmol)溶于乙醇(12mL)和水(3mL)中，升温至80℃，加入氯化铵(0.22g,4.05mmol)和铁粉(0.23g,4.05mmol)的混合物，80℃搅拌0.5h。冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，滤液加入10mL饱和食盐水，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到2I(190mg)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝684.5[M+H] +。
第十步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹恶啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(化合物2)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000174
将2I(0.19g,0.28mmol)和(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(2J)(0.12g,0.28mmol，参见专利WO2020147838)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物2(100mg，收率：33％)。
LCMS m/z＝530.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.64(s,1H),11.05(s,1H),8.92–8.72(m,3H),8.34–8.19(m,2H),7.87(d,1H),7.68–7.58(m,1H),7.36–7.15(m,2H),6.87(s,1H),6.74(s,1H),5.06(dd,1H),4.03(d,2H),3.76(s,3H),3.38–3.18(m,2H),3.02–2.82(m,3H),2.70(t,2H),2.64–2.51(m,6H),2.44–2.25(m,5H),2.18–2.06(m,3H),2.06–1.95(m,7H),1.93–1.74(m,5H),1.69–1.55(m,2H),1.21–1.06(m,2H),0.78–0.66(m,2H),0.47–0.31(m,2H)。
实施例3：化合物3的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000175
第一步：9-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮螺环[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(3A)
tert-butyl 9-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000176
将2E(0.3g,1.42mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(0.43g,1.69mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入碳酸钾(0.59g,4.26mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)＝10/1-2/1)，得到3A(0.6g，收率：95％)。
LCMS m/z＝446.3[M+H] +。
第二步：3-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(3B)
3-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane
Figure PCTCN2022090243-appb-000177
将3A(0.6g,1.35mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，室温下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室温搅拌2h。减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N氢氧化钠水溶液调节pH>10。分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到3B(0.4g)粗品。
第三步：4-((9-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮螺环[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3C)
tert-butyl 4-((9-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000178
将3B(0.4g,1.16mmol)，4-甲酰哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.3g,1.39mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，依次加入醋酸(0.14g,2.32mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.49g,2.32mmol)，室温反应1h，加入1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚 (V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到3C(0.52g，收率：82％)。
LCMS m/z＝543.3[M+H] +。
第四步：3-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-9-(哌啶-4-基甲基)-3,9-二氮螺环[5.5]十一烷(3D)
3-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-9-(piperidin-4-ylmethyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane
Figure PCTCN2022090243-appb-000179
将3C(0.52g,0.96mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，室温下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室温搅拌2h。减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N氢氧化钠水溶液调节pH>10。分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到3D(0.4g)粗品。
第五步：5-(4-((9-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮螺环[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(3E)
5-(4-((9-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000180
将3D(0.4g,0.90mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.66mmol)，90℃搅拌5h，冷却至室温，加入20mL水，析出固体，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-30/1)，得到3E(0.45g，收率：71％)。
LCMS m/z＝699.3[M+H] +。
第六步：5-(4-((9-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)-3,9-二氮螺环[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(3F)
5-(4-((9-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000181
将3E(0.13g,0.19mmol)溶于乙醇(10mL)和水(2mL)中，升温至80℃，加入氯化铵(100mg,1.90mmol)和铁粉(106mg,1.90mmol)的混合物。80℃搅拌1h，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，滤液加入10mL饱和食盐水，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到3F(120mg)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝669.3[M+H] +。
第七步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-二甲基磷酰)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基)-3,9-二氮螺环[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物3)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000182
将3F(0.12g,0.18mmol)和2J(74mg,0.18mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(102mg,0.54mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)得到粗品(0.10g)，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物3(58mg，收率：31％)。
LCMS m/z＝522.9[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.63(s,1H),11.05(s,1H),8.89–8.71(m,3H),8.32–8.17(m,2H),7.88(d,1H),7.65(d,1H),7.37–7.16(m,2H),6.90–6.74(m,2H),5.06(dd,1H),4.12–3.97(m,2H),3.77(s,3H),3.04–2.81(m,7H),2.68–2.52(m,2H),2.44–2.30(m,4H),2.21–2.06(m,3H),2.06–1.97(m,7H),1.89–1.73(m,3H),1.69–1.46(m,8H),1.21–1.07(m,2H),0.80–0.60(m,2H),0.51–0.27(m,2H)。
实施例4：化合物4的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000183
Figure PCTCN2022090243-appb-000184
第一步：4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4A)
tert-butyl 4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000185
将1D(0.30g,1.19mmol)和2D(0.44g,1.19mmol)溶于DMSO(15mL)中，加入碳酸钾(0.33g,2.38mmol)，120℃反应4h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到4A(0.28g，收率：40％)。
LCMS m/z＝598.5[M+H] +。
第二步：1-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪(4B)
1-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000186
将4A(0.30g,0.50mmol)溶于二氯甲烷(12mL)中，缓慢加入三氟乙酸(4mL)，室温反应1.5h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入50mL二氯甲烷复溶，1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液，收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相， 无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到4B(0.24g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝498.4[M+H] +。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000187
将4B(0.22g,0.45mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(0.12g,0.45mmol)溶于DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.17g,1.35mmol)，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到4C(0.13g，收率：34％)。
LCMS m/z＝754.4[M+H] +。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4D)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000188
将4C(0.12g,0.15mmol)溶于乙醇(9mL)，加入还原铁粉(0.04g,0.75mmol)，再滴加氯化铵(0.04g,0.75mmol)的水溶液(3mL)，氮气保护，80℃反应3h，反应液冷却至室温，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到4D(0.11g)。
LCMS m/z＝724.5[M+H] +。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨 基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物4)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000189
将4D(0.11g,0.16mmol)与1I(0.06g,0.16mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.09g,0.48mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，DCM将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到粗品，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物4(36mg，收率：21％)。
LCMS m/z＝528.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.02–8.93(m,1H),8.88–8.78(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.65(d,1H),7.61–7.50(m,2H),7.33–7.28(m,1H),7.23(dd,1H),6.84(s,1H),5.06(dd,1H),4.03(d,2H),3.80(s,3H),3.78(s,3H),3.17–3.10(m,2H),3.01–2.93(m,2H),2.90–2.83(m,1H),2.68–2.51(m,8H),2.44–2.34(m,4H),2.27–2.21(m,1H),2.17–2.10(m,2H),2.08–1.95(m,7H),1.88–1.77(m,5H),1.62–1.53(m,2H),1.18–1.08(m,2H)。
实施例5：化合物5的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000190
Figure PCTCN2022090243-appb-000191
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000192
将4,5-二氟邻苯二甲酸(500mg,2.47mmol)溶解到25mL乙腈中，加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.41g,2.49mmol)与N,N'-羰基二咪唑(0.8g，4.94mmol)，回流反应4h。将反应体系减压浓缩后用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)，得5A-1(0.4g，产率：55.0％)。
LCMS m/z＝295.2[M+H] +。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000193
将4B(0.16g,0.54mmol)，5A-1(0.27g,0.54mmol)溶于DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到5A，黄色固体(0.22g，收率：53％)。
LCMS m/z＝772.4[M+H] +。
第三步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(5B)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000194
将5A(0.21g,0.27mmol)溶于乙醇(15mL)，加入还原铁粉(0.07g,1.35mmol)，再滴加氯化铵(0.07g,0.75mmol)的水溶液(5mL)，氮气保护，80℃反应3h。冷却至室温，加入5mL水，再用DCM萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到5B(0.19g)。
LCMS m/z＝742.3[M+H] +。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物5)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000195
将5B(0.21g,0.28mmol)与1I(0.10g,0.28mmol)溶于DMF(15mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，DCM将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到粗品，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物5(50mg，收率：17％)。
LCMS m/z＝537.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.89(s,1H),11.08(s,1H),9.02–8.93(m,1H),8.86 –8.80(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.69(d,1H),7.62–7.51(m,2H),7.44(d,1H),6.84(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.78(s,3H),3.61(d,2H),3.14(d,2H),2.94–2.83(m,3H),2.70–2.52(m,8H),2.47–2.34(m,4H),2.30–2.24(m,1H),2.22–2.13(m,2H),2.07–1.98(m,7H),1.89–1.79(m,4H),1.77–1.69(m,1H),1.63–1.53(m,2H),1.33–1.19(m,2H)。
实施例6：化合物6的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000196
第一步：4-(4-((1-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷基-3-基)甲基)哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯(6A)
benzyl 4-(4-((1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidin-3-yl)methyl)piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000197
将2B(0.65g,2.14mmol)，1-Boc-3-吡咯烷甲醛(0.51g,2.57mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，依次加入醋酸(0.26g,4.28mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.91g,4.28mmol)，室温反应1h，加入1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，加入20mL二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到6A(1g，收率：96％)。
第二步：3-((4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6B)
tert-butyl 3-((4-(piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000198
将6A(1.00g,2.05mmol)溶于异丙醇(10mL)和7N氨甲醇溶液(2.5mL)混合溶剂中，加入钯碳(wt％＝10％,0.4g)，1atm氢气置换3次，室温反应2h，硅藻土过滤，二氯甲烷/甲醇(V/V＝10/1)洗涤滤饼，滤液减压浓缩得到6B(0.73g)。
LCMS m/z＝353.3[M+H] +。
第三步：叔丁基3-((4-(1-(5-(甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(6C)
tert-butyl 3-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000199
将6B(0.73g,2.08mmol)，1D(0.35g,1.39mmol)和碳酸钾(0.58g,4.17mmol)混合溶于DMSO(10mL)中，120℃搅拌6h。冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到6C(530mg，收率：65％)。
LCMS m/z＝584.3[M+H] +。
第四步：1-(1-(1-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(6D)
1-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000200
将6C(0.53g,0.91mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，室温下加入三氟乙酸(3.06g, 26.84mmol)，室温搅拌2h。减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N氢氧化钠水溶液调节pH>10。分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到6D(0.4g)粗品，直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(3-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000201
将6D(0.4g,0.83mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.66mmol)，90℃搅拌5h，冷却至室温，加入20mL水，析出固体，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到6E(0.47g，收率：76％)。
第六步：5-(3-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6F)
5-(3-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000202
将6E(0.2g,0.27mmol)溶于乙醇(12mL)和水(3mL)中，升温至80℃，加入氯化铵(0.22g,4.05mmol)和铁粉(0.23g,4.05mmol)的混合物。此温度下搅拌1h，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，滤液加入10mL饱和食盐水，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到6F(190mg)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝710.3[M+H] +。
第七步：5-(3-((4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1- 基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(化合物6)
5-(3-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000203
将6F(0.19g,0.27mmol)和1I(99mg,0.27mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.15g,0.81mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物6(60mg，收率：21％)。
LCMS m/z＝521.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.06–8.77(m,3H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.70–7.47(m,3H),6.94–6.74(m,3H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.78(s,3H),3.59–3.36(m,3H),3.18–3.06(m,3H),2.95–2.81(m,1H),2.72–2.52(m,9H),2.49–2.29(m,6H),2.28–2.19(m,1H),2.17–2.07(m,1H),2.07–1.93(m,7H),1.91–1.68(m,3H),1.66–1.49(m,2H)。
实施例7：化合物7的三氟乙酸盐制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000204
第一步：7-氮杂螺环[3.5]壬-2-酮(7B)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-one
Figure PCTCN2022090243-appb-000205
将7A(13.0g,54.32mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，室温下加入三氟乙酸(61.94g,543.2mmol)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入50mL二氯甲烷，加入碳酸氢钠固体(70g)，抽滤，滤液用无水硫酸钠干燥、减压浓缩，得到7B(7.50g，收率：99％)。
LCMS m/z＝140.1[M+H] +。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-氧代-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-oxo-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000206
将7B(7.50g,53.88mmol)溶于二甲亚砜(100mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(22.32g,80.81mmol)和DIPEA(13.93g,107.78mmol)，100℃搅拌3h。冷却至室温，加入100mL水，搅拌5-10min，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇 (V/V)＝100/1-10/1)得到7C，黄色固体(11.40g，收率：54％)。
LCMS m/z＝396.1[M+H] +。
第三步：4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7D-1)
tert-butyl 4-(piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000207
100mL反应瓶中依次加入2A(4.91g,12.16mmol)、异丙醇/氨甲醇溶液(v/v＝4/1，60mL)和钯碳(2.5g)，氢气置换三次后在室温反应2h，硅藻土抽滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝25/1-10/1)得到7D-1(1.26g，收率：38％)。
LCMS m/z＝270.1[M+H] +。
第四步：4-(1-(5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7D)
tert-butyl 4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000208
将7D-1(1.23g,4.57mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(0.96g,3.80mmol)和碳酸钾(1.58g,11.41mmol)混合溶于DMSO(20mL)中，120℃搅拌过夜。冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到7D(970mg，收率：62％)。
LCMS m/z＝501.5[M+H] +。
第五步：1-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪(7E)
1-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000209
将7D(0.31g,0.62mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，室温下加入三氟乙酸(0.71g,6.2mmol)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠水溶液，调节pH＝8-9，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到7E(0.24g，收率：97％)。
LCMS m/z＝401.2[M+H] +。
第六步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000210
将7E(0.24g,0.60mmol)和7C(0.71g,1.80mmol)溶于1,2-二氯乙烷(10mL)中，依次加入
Figure PCTCN2022090243-appb-000211
分子筛(200mg)和醋酸(0.05g,0.90mmol)。室温搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.38g,1.79mol)，室温过夜反应。反应结束后，直接将反应体系减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到7F(0.23g，收率：49％)。
LCMS m/z＝780.4[M+H] +。
第七步：5-(2-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7G)
5-(2-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000212
将7F(0.23g,0.29mmol)溶于乙醇(5mL)和水(1mL)中，加入氯化铵固体(0.16g,2.99mmol)和铁粉(0.16g,2.86mmol)，N 2置换3次，80℃搅拌1h。反应完后，冷却至室温， 过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，减压浓缩。将减压浓缩所得物用二氯甲烷溶解，萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到7G(0.18g，收率83％)。
LCMS m/z＝750.4[M+H] +。
第八步：5-(2-(4-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物7)的三氟乙酸盐
5-(2-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000213
将7G(0.18g,0.24mmol)和1I(0.09g,0.24mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.14g,0.74mol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物7的三氟乙酸盐(40mg)。
LCMS m/z＝1081.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.96(s,1H),11.05(s,1H),9.02–8.78(m,3H),8.52(s,1H),8.22(s,1H),8.00(s,1H),7.82(s,1H),7.69–7.48(m,3H),7.34(d,1H),7.26(dd,1H),6.82(s,1H),5.06(dd,1H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.72–3.37(m,9H),3.28–3.11(m,5H),2.95–2.81(m,2H),2.74–2.52(m,5H),2.26–2.16(m,2H),2.14–1.90(m,11H),1.87–1.57(m,6H)。
实施例8：化合物8的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000214
第一步：4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8B)
tert-butyl 4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000215
将8A(5.0g,26.84mmol)溶于二甲亚砜(50mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(11.12g,40.26mmol)和DIPEA(6.94g,53.69mmol)，100℃搅拌3h。冷却至室温，加入50mL水，搅拌5-10min，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到8B(8.08g，收率：68％)。
LCMS m/z＝443.2[M+H] +。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000216
将8B(3g,6.78mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，室温下加入三氟乙酸(7.73g,67.8mmol)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，加入碳酸氢钠固体(20g)，抽滤，滤液用无水硫酸钠干燥、减压浓缩，得到8C粗品(2.09g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝343.1[M+H] +。
第三步：4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8D)
tert-butyl 4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000217
将8C(2.09g,6.10mmol)和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.91g,18.33mmol)溶于DMAc(40mL)中，依次加入
Figure PCTCN2022090243-appb-000218
分子筛(300mg)和醋酸(0.55g,9.16mmol)。室温搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.88g,18.31mmol)，室温过夜反应。反应结束后，用乙酸乙酯(50mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到8D(1.53g，收率：46％)。
LCMS m/z＝540.3[M+H] +。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000219
将8D(1.53g,2.84mmol)溶于二氯甲烷(15mL)，室温下加入三氟乙酸(3.23g,28.33mmol)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，加入碳酸氢钠固体(15g)抽滤，滤液用无水硫酸钠干燥、减压浓缩，得到8E(1.13g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝440.2[M+H] +。
第五步：4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(8F)
tert-butyl 4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000220
将8E(1.13g,2.57mmol)和4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.54g,7.73mmol)溶于DMAc(20mL)中，依次加入
Figure PCTCN2022090243-appb-000221
分子筛(200mg)和醋酸(0.23g,3.83mmol)。室温搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.63g,7.69mmol)，室温过夜反应。反应结束后，用乙酸乙酯萃取(50mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到8F(1.27g，收率：79％)。
LCMS m/z＝623.2[M+H] +。
第六步：5-(4-([1,4'-联哌啶]-4-基甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8G)
5-(4-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000222
将8F(1.27g,2.04mmol)溶于二氯甲烷(15mL)，室温下加入三氟乙酸(2.33g,20.43mmol)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，加入碳酸氢钠固体(20g)抽滤，滤液用无水硫酸钠干燥、减压浓缩，得到8G(0.98g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝523.3[M+H] +。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8H)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000223
将8G(980mg,1.87mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(0.31g,1.23mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入碳酸氢钠固体(0.32g,3.81mmol)，100℃过夜反应。反应完后，冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到8H(0.24g，收率：17％)。
LCMS m/z＝754.4[M+H] +。
第八步：5-(4-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8I)
5-(4-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000224
将8H(0.24g,0.32mmol)溶于乙醇(5mL)和水(1mL)中，加入氯化铵固体(0.17g,3.18mmol)和铁粉(0.18g,3.22mmol)，N 2置换3次，80℃搅拌1h。反应完后，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，减压浓缩。将减压浓缩所得物用二氯甲烷溶解，萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到8I(0.12g，收率52％)。
LCMS m/z＝724.4[M+H] +。
第九步：5-(4-((1’-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4’-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物8)
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000225
将8I(0.12g,0.17mmol)和1I(0.06g,0.16mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.095g,0.50mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物8(60mg，收率：35％)。
LCMS m/z＝1055.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.89(s,1H),11.06(s,1H),9.06–8.77(m,3H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.67(d,1H),7.62–7.49(m,2H),7.33(d,1H),7.24(dd,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.48–3.38(m,4H),3.18–3.09(m,2H),2.98–2.82(m,3H),2.69–2.52(m,4H),2.48–2.43(m,3H),2.39–2.27(m,1H),2.22–2.11(m,4H),2.07–1.95(m,7H),1.85–1.41(m,8H),1.19–1.05(m,2H)。
实施例9：化合物9的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000226
第一步：9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷 -3-羧酸叔丁酯(9A)
tert-butyl 9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000227
将1D(0.4g,1.59mmol)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(0.61g,2.40mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入碳酸钾(0.88g,6.37mmol)，130℃反应6h。冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL x 3)三次。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到9A(0.35g，收率：45％)。
LCMS m/z＝486.2[M+H] +。
第二步：3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(9B)
3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane
Figure PCTCN2022090243-appb-000228
将9A(350mg,0.72mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入2N盐酸的二氧六环溶液(10mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1M的NaOH水溶液调节pH＝9-10,分液，有机层减压浓缩后得到9B(264mg)，直接用于下一步。
第三步：4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(9C)
tert-butyl 4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000229
将9B(264mg,0.68mmol)和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(217.5mg,1.02mmol)溶于DMAc(10mL)中，加入醋酸(40.8mg,0.68mmol)。室温搅拌30min后加入三乙酰氧基 硼氢化钠(215.3mg,1.02mmol)，室温过夜反应。加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)得到9C(260mg，收率：66％)。
LCMS m/z＝583.3[M+H] +。
第四步：3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-9-(哌啶-4-基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(9D)的盐酸盐
3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-9-(piperidin-4-ylmethyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000230
将9C(260mg,0.45mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入2N盐酸的二氧六环溶液(6mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000231
将上一步的9D的盐酸盐粗品溶于DMSO(8mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(187.8mg,0.68mmol)和DIPEA(232.7mg,1.8mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到9E(174mg，收率：52％)。
LCMS m/z＝739.3[M+H] +。
第六步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9F)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000232
将9E(174mg,0.24mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(70mg，1.25mmol)，氯化铵(66.9mg，1.25mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到9F(150mg，收率：88％)。
LCMS m/z＝709.4[M+H] +。
第七步：5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物9)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000233
将9F(150mg,0.21mmol)和1I(117.8mg,0.32mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到化合物9(60mg，收率：27％)。
LCMS m/z＝1040.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.87(s,1H),11.05(s,1H),9.01–8.89(m,1H),8.87–8.76(m,2H),8.38(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.81(s,1H),7.65(d,1H),7.61–7.48(m,2H),7.30(s,1H),7.27–7.18(m,1H),6.89(s,1H),5.06(dd,1H),4.10–3.97(m,2H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.04–2.77(m,7H),2.70–2.53(m,2H),2.42–2.28(m,4H),2.24–2.09(m,2H),2.06–1.95(m,7H),1.90–1.72(m,3H),1.66–1.46(m,8H),1.21–1.09(m,2H)。
实施例10：化合物10的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000234
第一步：2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(10B)
tert-butyl 2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000235
将10A(2.0g,7.86mmol)溶于DMSO(15mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(2.5g,9.05mmol)和DIPEA(2.77g,21.43mmol)，90℃搅拌3h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到10B，黄色固体(3.0g，收率：75％)。
LCMS m/z＝511.3[M+H] +。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10C)的三氟乙酸盐
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000236
将10B(3.0g,5.88mmol)溶于二氯甲烷(60mL)中，加入三氟乙酸(4.6g,40mmol)，室温搅拌3h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：4-((2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(10D)
tert-butyl 4-((2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000237
将10C的三氟乙酸盐(0.6g)，4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.4g,1.87mol)混合于DMAc(20mL)中，依次加入醋酸(0.12g,2mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.42g,2mmol)，室温下搅拌过夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N氢氧化钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝10/1-1/1)得到10D(0.44g，收率：50％)。
LCMS m/z＝608.3[M+H] +。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(哌啶-4-基甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10E)的三氟乙酸盐
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(piperidin-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000238
将化合物10D(0.44g,0.72mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2.3g,20mmol)，室温搅拌3h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000239
将上一步的10E三氟乙酸盐粗品溶于DMSO(15mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(260mg,1.03mmol)和碳酸氢钠(250mg,3.0mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到10F(230mg，收率：43％)。
LCMS m/z＝739.3[M+H] +。
第六步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10G)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000240
将10F(230mg,0.31mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(53mg，0.95mmol)，氯化铵(50mg，0.93mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到10G，黄色固体(150mg，收率：68％)。
LCMS m/z＝709.3[M+H] +。
第七步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物10)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000241
将10G(150mg,0.21mmol)和1I(95.7mg,0.26mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(97mg,0.51mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到化合物10(30mg，收率：14％)。
LCMS m/z＝1040.6[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.06–8.89(m,1H),8.87–8.76(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.79(s,1H),7.67–7.46(m,3H),7.29(d,1H),7.23(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.77(s,3H),3.51–3.41(m,2H),3.36(s,2H),3.14–3.01(m,2H),2.95–2.80(m,1H),2.69–2.53(m,4H),2.45–2.20(m,6H),2.08–1.93(m,7H),1.81–1.70(m,2H),1.69–1.45(m,7H),1.45–1.20(m,4H)。
实施例11：化合物11的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000242
第一步：4-(2-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(11A)
tert-butyl 4-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000243
将10C的三氟乙酸盐(0.25g)和N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(183mg,0.92mmol)溶于DMAc(10mL)中，加入醋酸(39mg,0.65mmol)。室温搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(192mg,0.91mmol)，室温过夜反应。加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到11A(250mg，收率：69％)。
LCMS m/z＝594.3[M+H] +。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(11B)的盐酸盐
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000244
将11A(250mg,0.42mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入2N盐酸的二氧六环溶液(6mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(11C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000245
将上一步11B盐酸盐粗品溶于DMSO(5mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(158mg,0.63mmol)和碳酸氢钠(353mg,4.2mmol)，100℃反应5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到11C(140mg，收率：46％)。
LCMS m/z＝725.3[M+H] +。
第四步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(11D)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-dia zaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000246
将11C(140mg,0.19mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(53mg，0.95mmol)，氯化铵(51mg，0.95mmol)，氮气保护，80℃反应1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到11D(120mg，收率：91％)。
LCMS m/z＝695.3[M+H] +。
第五步：5-(9-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物11)
5-(9-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000247
将11D(120mg,0.17mmol)和(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1I)(96mg,0.26mmol，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(97mg,0.51mmol)，氮气保护下100℃反应16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到化合物11(40mg，收率：23％)。
LCMS m/z＝1026.5[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.88(s,1H),11.05(s,1H),9.04–8.89(m,1H),8.88–8.76(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.79(s,1H),7.65–7.49(m,3H),7.34–7.27(m,1H),7.24(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.51–3.42(m,2H),3.39–3.34(m,2H),3.19–3.09(m,2H),2.95–2.82(m,1H),2.69–2.53(m,6H),2.38–2.26(m,1H),2.08–1.94(m,8H),1.89–1.78(m,2H),1.70–1.34(m,11H)。
实施例12：化合物12的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000248
第一步：4-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12B)
benzyl 4-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000249
将12A(6.6g，30mmol)，4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(6.0g,30mmol)混合于DMAc(220mL)中，依次加入醋酸(1.2g,20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(8.4g,40mmol)，室温搅拌过夜。加入500mL二氯甲烷和250mL 1N氢氧化钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝10/1-1/1)得到12B(8g，收率：66％)。
LCMS m/z＝404.3[M+H] +。
第二步：4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12C)
benzyl 4-(piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000250
将12B(8.0g,19.8mmol)溶于二氯甲烷(120mL)中，缓慢加入三氟乙酸(40mL)，室温 反应1h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，加入甲基叔丁基醚打浆得到白色固体，再加入200mL二氯甲烷将固体溶解，1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液。收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到12C(5.0g，收率：83％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝304.3[M+H] +。
第三步：4-(1-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12D)
benzyl 4-(1-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000251
将12C(5.0g,16.5mmol)，4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.5g,16.4mmol)混合于DMAc(100mL)中，依次加入醋酸(0.3g,5mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(4.2g,20mmol)，室温下搅拌过夜。加入500mL二氯甲烷和250mL 1N氢氧化钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝10/1-1/1)得到12D(4.8g，收率：58％)。
LCMS m/z＝501.4[M+H] +
第四步：4-((4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(12E)
tert-butyl 4-((4-(piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000252
将12D(4.8g,9.6mmol)溶于甲醇溶液(100mL)中，加入钯碳(wt％＝10％,2.93g)，1atm氢气置换3次，室温反应1.5h，将溶液用硅藻土过滤，二氯甲烷/甲醇(V/V＝10/1)洗涤滤饼，滤液减压浓缩得到12E(3.2g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝367.3[M+H] +。
第五步：4-((4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(12F)
tert-butyl 4-((4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000253
将12E(0.8g,2.18mmol)和1D(0.63g,2.5mmol)溶于DMSO(20mL)中，加入碳酸钾(0.59g,4.26mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL x 3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到12F(0.4g，收率：31％)。
LCMS m/z＝598.4[M+H] +。
第六步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)哌嗪(12G)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000254
将12F(0.4g,0.67mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，室温下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室温搅拌2h。减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N氢氧化钠水溶液调节pH>10。分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到12G(0.30g)粗品，直接用于下一步。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(12H)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000255
将12G(0.3g,0.60mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(0.25g,0.91mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃搅拌5h，冷却至 室温，加入20mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-15/1)，得到12H(0.28g，收率：62％)。
LCMS m/z＝754.3[M+H] +。
第七步：5-(4-((4-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(12I)
5-(4-((4-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000256
将12H(0.28g,0.37mmol)溶于乙醇(12mL)和水(3mL)中，升温至80℃，加入氯化铵(0.22g,4.11mmol)和铁粉(0.23g,4.12mmol)的混合物。此温度下搅拌0.5h，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，滤液加入10mL饱和食盐水，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到12I(0.19g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝724.3[M+H] +。
第九步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物12)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000257
将12I(0.19g,0.26mmol)和1I(0.12g,0.33mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化((仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含 0.1％TFA))，将制备所得冻干，得到化合物12的三氟乙酸盐(32mg)。
LCMS m/z＝528.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ13.49(s,1H),10.60(s,1H),8.95–8.68(m,4H),7.95(s,1H),7.91(s,1H),7.67(d,1H),7.63–7.50(m,3H),7.25–7.22(m,1H),7.08–7.01(m,1H),6.70(s,1H),4.96(dd,1H),3.97–3.90(m,2H),3.87–3.70(m,9H),3.37–3.20(m,6H),3.07–2.57(m,13H),2.47–2.34(m,2H),2.21–1.94(m,10H),1.47–1.32(m,2H)。
实施例13：化合物13的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000258
第一步：1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(13A)
tert-butyl 1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidine]-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000259
将1D(1.0g,3.98mmol)和1-(叔丁氧羰基)-4,4'-联哌啶(1.28g,4.77mmol)溶于 DMSO(50mL)中，加入碳酸钾(1.10g,7.96mmol)，120℃反应12h。冷却至室温，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(30mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)＝10/1-2/1)，得到13A(1.3g，收率：65％)。
LCMS m/z＝500.3[M+H] +。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4,4'-联哌啶(13B)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4,4'-bipiperidine
Figure PCTCN2022090243-appb-000260
50mL圆底烧瓶中依次加入13A(1.3g，2.60mmol)，氯化氢的1,4-二氧六环溶液(30mL,4mol/L)，室温反应2h，减压浓缩，加入1,4-二氧六环(20mL)，氨水(5mL)，室温搅拌20min，50℃减压浓缩干得13B，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝400.3[M+H] +。
第三步：4-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(13C)
tert-butyl 4-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000261
将13B(0.5g,1.25mmol)，4-甲酰哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.54g,2.53mmol)溶于DMAc(10mL)中，加入一滴醋酸后室温搅拌1h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.79g,3.73mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，并依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到13C(0.62g，收率：83％)。
LCMS m/z＝597.4[M+H] +。
第四步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-1'-(哌啶-4-基甲基)-4,4'-联哌啶(13D)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-1'-(piperidin-4-ylmethyl)-4,4'-bipiperidine
Figure PCTCN2022090243-appb-000262
50mL圆底烧瓶中依次加入13C(0.47g，0.79mmol)，氯化氢的1,4-二氧六环溶液(20mL,4mol/L)，室温反应2h，减压浓缩，加入1,4-二氧六环(20mL)，氨水(5mL)，室温搅拌20min，50℃减压浓缩干得13D，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝497.3[M+H] +。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(13E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000263
将13D(387mg，0.78mmol)溶于DMSO(10mL)中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(258mg,0.93mmol)和DIPEA(504mg,3.90mmol)，100℃反应5h。向反应液中加入30mL水，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物通过硅胶柱色谱(DCM：MeOH＝15:1)分离纯化得到13E(377mg，产率64％)。
LCMS m/z＝753.4[M+H] +。
第六步：5-(4-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(13F)
5-(4-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000264
将13E(377mg,0.5mmol)、铁粉(140mg,2.5mmol)、氯化铵(134mg,2.5mmol)溶于乙醇(10mL)和水(5mL)中，85℃搅拌2h，之后冷却至室温，抽滤，滤液浓缩后得到13F(236mg,65％)并直接用于下一步。
LCMS m/z＝362.3[(M+2H)/2] +。
第七步：5-(4-((1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物13)的三氟乙酸盐
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid；
Figure PCTCN2022090243-appb-000265
将13F(236mg,0.33mmol)和1I(0.18g,0.49mmol，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化得化合物13的三氟乙酸盐(100mg)。
LCMS m/z＝1054.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.97(s,1H),11.06(s,1H),9.05–8.81(m,1H),8.89–8.74(m,3H),8.51(s,1H),8.21(s,1H),7.98(s,1H),7.83(s,1H),7.68(d,1H),7.64–7.49(m,2H),7.36(d,1H),7.28(dd,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),4.17–4.04(m,2H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.65–3.51(m,2H),3.20–3.09(m,2H),3.09–2.80(m,7H),2.68–2.52(m,4H),2.24–2.10(m,1H),2.10–1.90(m,9H),1.90–1.80(m,2H),1.80–1.68(m,2H),1.61–1.15(m,8H)。
实施例14：化合物14的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000266
第一步：2-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(14A)
tert-butyl 2-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000267
将13B(0.5g,1.25mmol)，2-氧代-7氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.54g,2.27mmol)溶于DMAc(10mL)中，加入一滴醋酸后室温搅拌1h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.79g,3.73mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，并分别用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到14A(0.49g，收率：63％)。
LCMS m/z＝623.4[M+H] +。
第二步：2-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷(14B)
2-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2022090243-appb-000268
50mL圆底烧瓶中依次加入14A(0.49g，0.79mmol)，氯化氢的1,4-二氧六环溶液(20mL,4mol/L)，室温反应2h，减压浓缩，加入1,4-二氧六环(20mL)，氨水(5mL)，室温搅拌20min，50℃减压浓缩干得14B，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝523.4[M+H] +。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮(14C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000269
将上一步的14B(402mg 0.77mmol)溶于DMSO(10mL)中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(255mg,0.92mmol)和DIPEA(498mg,3.85mmol)，100℃搅拌5h。向反应液中加入30毫升水，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物通过硅胶柱色谱(DCM：MeOH＝15:1)分离纯化得到14C(350mg，产率58％)。
LCMS m/z＝779.4[M+H] +。
第四步：5-(2-(1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(14D)
5-(2-(1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000270
将14C(350mg,0.45mmol)、铁粉(126mg,2.26mmol)、氯化铵(134mg,2.50mmol)溶于乙醇(10mL)和水(5mL)中，85℃搅拌2h，之后冷却至室温，抽滤，滤液浓缩后得到14D(144mg,43％)并直接用于下一步。
LCMS m/z＝749.6[M+H] +。
第五步：5-(2-(1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物14)的三氟乙酸盐
5-(2-(1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid；
Figure PCTCN2022090243-appb-000271
将14D(144mg,0.19mmol)和1I(105mg,0.29mmol，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(165mg,0.87mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化得化合物14的三氟乙酸盐(80mg)。
LCMS m/z＝540.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.96(s,1H),11.06(s,1H),9.38–9.17(m,1H),9.05–8.91(m,1H),8.89–8.77(m,2H),8.49(s,1H),8.21(s,1H),7.99(s,1H),7.83(s,1H),7.67(d,1H),7.63–7.48(m,2H),7.34(d,1H),7.30–7.21(m,1H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.86–3.59(m,7H),3.57–3.30(m,6H),3.22–3.11(m,2H),2.96–2.82(m,1H),2.81–2.65(m,2H),2.65–2.53(m,3H),2.30–2.15(m,2H),2.09–1.90(m,10H),1.83–1.56(m,7H),1.53–1.14(m,7H)。
实施例15：化合物15的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000272
Figure PCTCN2022090243-appb-000273
第一步：4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(15A)
tert-butyl 4-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000274
将11B(475mg,0.96mmol)和N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(287mg,1.44mmol)溶于DMAc(10mL)中，加入醋酸(58mg,0.96mmol)。室温搅拌60min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(304mg,1.43mmol)，室温过夜反应。加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到15A(320mg，收率：49％)。
LCMS m/z＝677.3[M+H] +。
第二步：5-(9-([1,4'-联哌啶]-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(15B)的盐酸盐
5-(9-([1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000275
将化合物15A(320mg,0.47mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入2N盐酸的二氧六环溶液(6mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(15C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000276
将上一步的化合物15B盐酸盐粗品溶于DMSO(8mL)中，依次加入1D(163mg,0.65mmol)和碳酸氢钠(144mg,1.71mmol)，100℃反应6h。冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到15C(160mg，收率：42％)。
LCMS m/z＝808.4[M+H] +。
第四步：5-(9-(1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(15D)
5-(9-(1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000277
将15C(160mg,0.20mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(56mg，1 mmol)，氯化铵(53mg，1mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得15D，黄色固体(120mg，收率：77％)。
LCMS m/z＝778.8[M+H] +。
第五步：5-(9-(1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物15)
5-(9-(1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000278
将15D(120mg,0.15mmol)和1I(85mg,0.23mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(86mg,0.45mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到化合物15(30mg，收率：18％)。
LCMS m/z＝555.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.89(s,1H),11.05(s,1H),9.03–8.91(m,1H),8.89–8.77(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.67–7.46(m,3H),7.33–7.26(m,1H),7.22(dd,1H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.50–3.41(m,2H),3.34(s,2H),3.18–3.07(m,2H),3.05–2.82(m,3H),2.69–2.53(m,4H),2.46–2.39(m,2H),2.37–2.07(m,5H),2.07–1.94(m,7H),1.86–1.70(m,4H),1.69–1.32(m,13H)。
实施例16：化合物16的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000279
Figure PCTCN2022090243-appb-000280
第一步：4-((2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-5-基)-2,9-二氮螺环[5.5]十一碳-9-基)甲基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(16A)
tert-butyl 4-((2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000281
将10E的三氟乙酸盐(0.6g)，4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.4g,2.0mmol)混合于DMAc(20mL)中，依次加入醋酸(0.12g,2mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.42g,2mmol)，室温下搅拌过夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N氢氧化钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝10/1-1/1)得到16A(0.40g)。
LCMS m/z＝691.3[M+H] +。
第二步：5-(9-([1,4'-联哌啶]-4-基甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(16B)的三氟乙酸盐
5-(9-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000282
将化合物16A(0.40g,0.58mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2.3g,20mmol)，室温搅拌3h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基 苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(16C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000283
将上一步的16B三氟乙酸盐粗品溶于DMSO(15mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(260mg,1.03mmol)和碳酸氢钠(250mg,3.0mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到16C(230mg，收率：48％)。
LCMS m/z＝822.3[M+H] +。
第四步：5-(9-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(16D)
5-(9-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000284
将16C(230mg,0.28mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(53mg，0.95mmol)，氯化铵(50mg，0.93mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到16D(160mg，收率：72％)。
LCMS m/z＝792.4[M+H] +。
第五步：5-(9-((1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物16)
5-(9-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000285
将16D(160mg,0.20mmol)和1I(95.7mg,0.26mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(97mg,0.51mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，柱层析得到的产品进一步制备HPLC纯化((仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，再用二氯甲烷(50ml)萃取，将有机相减压浓缩，得到化合物16(20mg，收率：9％)。
LCMS m/z＝562.4[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.94(s,1H),11.06(s,1H),9.01–8.91(m,1H),8.88–8.77(m,2H),8.53–8.42(m,1H),8.22(s,1H),8.01–7.82(m,2H),7.70–7.48(m,3H),7.44–7.20(m,2H),6.82(s,1H),5.11–5.02(m,1H),3.82(s,3H),3.77(s,3H),3.69–3.58(m,2H),3.56–2.82(m,18H),2.75–2.53(m,4H),2.16–1.96(m,10H),1.93–1.57(m,10H),1.54–1.45(m,2H)。
实施例17：化合物17的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000286
Figure PCTCN2022090243-appb-000287
第一步：2-((1'-((苄氧基)羰基)-[1,4'-双哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(17A)
tert-butyl 2-((1'-((benzyloxy)carbonyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000288
将1B(702mg,2mmol)，4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(699mg,3mmol)混合于二氯甲烷(100mL)中，依次加入醋酸(180mg,3mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(636mg,3mmol)，室温下搅拌过夜。加入30mL二氯甲烷和10mL 1N氢氧化钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝10/1-1/1)得到17A(512mg，收率：45％)。
LCMS m/z＝569.4[M+H] +。
第二步：2-([1,4'-双哌啶]-4-基甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(17B)
tert-butyl 2-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000289
将17A(512mg,0.9mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入钯碳(wt％＝10％,51mg)，氢气置换3次，氢气氛围(气球压强)、室温下搅拌过夜，过滤，滤液减压浓缩得到17B(390mg)， 直接用于下一步。
第三步：叔丁基2-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(17C)
tert-butyl2-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000290
将17B(390mg,0.9mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(301mg,1.2mmol)和碳酸钾(414mg,3mmol)混合溶于DMSO(10mL)中，120℃搅拌16h。冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到17C(310mg，收率：52％)。
LCMS m/z＝666.5[M+H] +。
第四步：2-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(17D)
2-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane
Figure PCTCN2022090243-appb-000291
将17C(310mg,0.47mmol)溶于DCM(10mL)，室温下加入三氟乙酸(3mL)，搅拌3h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝9-10，分液，有机层减压浓缩后得到17D(262mg)，直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(17E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(2-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000292
将17D(262mg,0.46mmol)溶于DMSO(5mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(276mg,1mmol)和DIPEA(0.31g,2.4mmol)，90℃搅拌3h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到17E(210mg，收率：55％)。
第六步：5-(2-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(17F)
5-(2-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000293
将化合物17E(210mg,0.26mmol)、铁粉(200mg,3.57mmol)、氯化铵(200m g,3.77mmol)溶于乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃搅拌2h，之后冷却至室温，抽滤，滤液浓缩后得到17F(150mg,74.3％)。直接用于下一步。
第七步：5-(2-((1'-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物17)
5-(2-((1'-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000294
将17F(70mg,0.09mmol)和(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1I)(0.44g,0.12mmol，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(57mg,0.3mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备产物以饱和碳酸氢钠水溶液碱化游离得到化合物17(23mg，收率：23.3％)。
LCMS m/z＝562.4[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.88(s,1H),11.15–10.89(m,1H),9.10–8.89(m,1H),8.88–8.77(m,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.98(s,1H),7.80(s,1H),7.67–7.46(m,3H),7.31–7.19(m,2H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.57–3.35(m,6H),3.17–3.06(m,2H),2.99–2.80(m,3H),2.71–2.52(m,6H),2.37–1.93(m,14H),1.87–1.42(m,11H),1.31–1.02(m,4H)。
实施例18：化合物18的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000295
5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物18)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将4D(0.22g,0.31mmol)与2J(0.13g,0.31mmol)溶于DMF(15mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.18g,0.93mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL 饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物18，黄色固体(150mg，收率：44％)。
LCMS m/z＝550.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.68(s,1H),11.05(s,1H),8.89–8.76(m,3H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),7.96(s,1H),7.77(s,1H),7.65(d,1H),7.62–7.50(m,2H),7.31(s,1H),7.23(d,1H),6.82(s,1H),5.06(dd,1H),4.04(d,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.17–3.09(m,2H),3.01–2.94(m,2H),2.91–2.84(m,1H),2.72–2.51(m,8H),2.46–2.30(m,4H),2.29–2.22(m,1H),2.20–2.10(m,2H),2.06–1.96(m,7H),1.87–1.74(m,5H),1.65-1.49(m,2H),1.22–1.05(m,2H)。
实施例19：化合物19的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000296
5-(4-((1’-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4’-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物19)的三氟乙酸盐
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
将8I(0.27g,0.37mmol)和2J(0.153g,0.37mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.213g,1.12mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物19的三氟乙酸 盐(50mg，黄色固体)。
LCMS m/z＝1099.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.72(s,1H),11.08(s,1H),10.13–9.45(m,2H),8.90–8.73(m,3H),8.45(s,1H),8.29(s,1H),7.96(s,1H),7.84–7.75(m,2H),7.62(s,1H),7.57–7.49(m,2H),7.38(dd,1H),6.81(s,1H),5.10(dd,1H),3.82(s,3H),3.77(s,3H),3.70–3.59(m,4H),3.48–2.81(m,14H),2.74–2.52(m,4H),2.22–1.96(m,11H),1.93–1.74(m,3H),1.59–1.43(m,2H)。
实施例20：化合物20的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000297
5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物20)的三氟乙酸盐
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
将9F(150mg,0.21mmol)和2J(132mg,0.32mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(120mg,0.63mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物20的三氟乙酸盐(44mg)。
LCMS m/z＝542.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.75(s,1H),11.06(s,1H),8.91–8.72(m,3H),8.56–8.47(m,1H),8.29(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.68(d,1H),7.62–7.49(m,2H),7.37(d,1H),7.28(dd,1H),6.89(s,1H),5.07(dd,1H),4.17–4.04(m,2H),3.82(s,3H),3.76(s, 3H),3.48–3.35(m,2H),3.16–2.76(m,10H),2.68–2.51(m,4H),2.21–2.09(m,1H),2.07–1.91(m,7H),1.90–1.50(m,8H),1.37–1.21(m,3H)。
实施例21：化合物21的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000298
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(21A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000299
将9D(470mg,0.97mmol)粗品溶于DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(430mg,1.46mmol)和碳酸氢钠(326mg,3.88mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到21A，黄色固体(600mg，收率：82％)。
LCMS m/z＝757.3[M+H] +。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(21B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000300
将21A(200mg,0.26mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(73mg，1.3mmol)，氯化铵(70mg，1.3mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到21B，黄色固体(180mg，收率：95％)。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物21)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000301
将21B(180mg,0.25mmol)和2J(157mg,0.38mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(143mg,0.75mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷，分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到化合物21(85mg，收率：31％)。
LCMS m/z＝551.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.66(s,1H),11.08(s,1H),8.87–8.72(m,3H),8.36(s,1H),8.26(s,1H),7.98(s,1H),7.79(s,1H),7.69(d,1H),7.63–7.48(m,2H),7.43(d,1H),6.88(s,1H),5.10(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.67–3.55(m,2H),2.96–2.76(m,7H),2.68–2.52(m,2H),2.43–2.29(m,4H),2.24–2.14(m,2H),2.06–1.94(m,8H),1.88–1.69(m,3H),1.62–1.50(m,7H),1.32–1.25(m,2H)。
实施例22：化合物22的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000302
第一步：1'-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(21A)
tert-butyl 1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidine]-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000303
将2E(450mg,2.13mmol)粗品溶于DMSO(10mL)中，依次加入[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(859mg,3.2mmol)和碳酸氢钠(716mg,8.52mmol)，100℃反应6h。冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到22A(800mg，收率：82％)。
LCMS m/z＝460.3[M+H] +。
第二步：1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4,4'-联哌啶(22B)
1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-4,4'-bipiperidine
Figure PCTCN2022090243-appb-000304
将22A(800mg,1.74mmol)溶于甲醇(4mL)中，加入2M盐酸的二氧六环溶液(15 mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1M的NaOH水溶液调节pH＝9-10,分液，有机层减压浓缩后得到22B，直接用于下一步。
第三步：4-((1'-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(22C)
tert-butyl 4-((1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000305
将22B(550mg,1.53mmol)和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(491mg,2.30mmol)溶于DMAc(15mL)中，加入醋酸(92mg,1.53mmol)。室温搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(485mg,2.29mmol)，室温过夜反应。加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)得到22C，黄色固体(650mg，收率：76％)。
LCMS m/z＝557.5[M+H] +。
第四步：1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-1'-(哌啶-4-基甲基)-4,4'-联哌啶(22D)的盐酸盐
1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-1'-(piperidin-4-ylmethyl)-4,4'-bipiperidine；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000306
将22C(650mg,1.17mmol)溶于甲醇(3mL)中，加入2M盐酸的二氧六环溶液(10mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第五步：5-(4-((1'-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(22E)
5-(4-((1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000307
将上一步的化合物22D的盐酸盐粗品溶于DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(453mg,1.64mmol)和碳酸氢钠(366mg,4.36mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到22E，黄色固体(600mg，收率：72％)。
LCMS m/z＝713.4[M+H] +。
第六步：5-(4-((1'-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(22F)
5-(4-((1'-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000308
将22E(200mg,0.28mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(78mg，1.40mmol)，氯化铵(75mg，1.40mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到22F(150mg，收率：78％)。
LCMS m/z＝342.3[(M+2H)/2] +。
第七步：5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物22)的三氟乙酸盐
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000309
将22F(150mg,0.22mmol)和2J(136mg,0.33mmol)溶于DMF(8mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(125mg,0.66mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物22的三氟乙酸盐(83mg)。
LCMS m/z＝529.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.72(s,1H),11.06(s,1H),8.94–8.69(m,4H),8.50–8.23(m,2H),7.94–7.81(m,1H),7.68(d,1H),7.36(s,1H),7.31–7.24(m,1H),6.94–6.73(m,2H),5.07(dd,1H),4.16–4.05(m,2H),3.77(s,3H),3.63–3.51(m,2H),3.39–3.28(m,2H),3.08–2.53(m,11H),2.19–1.75(m,15H),1.60–1.25(m,8H),0.78–0.65(m,2H),0.44–0.34(m,2H)。
实施例23：化合物23的三氟乙酸盐制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000310
第一步：3-碘-[1,1'-联苯]-4-胺(23B)
3-iodo-[1,1'-biphenyl]-4-amine
Figure PCTCN2022090243-appb-000311
将[1,1'-联苯]-4-胺(23A)(846mg,5.0mmol)、碘(1.27g,5.0mmol)和碳酸氢钠(1.26g,15.0mmol)加入到二氯甲烷(20mL)和水(10mL)的混合液中，在室温下搅拌过夜，反应结束后分离有机层，二氯甲烷萃取水层(3×20mL)，合并有机层，并依次用饱和Na 2S 2O 3溶液(2×20mL)和饱和食盐水(2×20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/20-1/5)得23B(530mg，收率：36％)。
LCMS m/z＝296.0[M+H] +。
第二步：(4-氨基-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23C)
(4-amino-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000312
氮气保护下将23B(401mg,1.36mmol)、二甲基氧化膦(117mg,1.50mmol)、磷酸三钾(318mg,1.50mmol)，醋酸钯(30mg,0.13mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(79mg,0.14mmol)加入到无水DMF(20mL)中，150℃反应3h，反应结束后冷却至室温，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，分离有机相并依次用水(20mL×2)和饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/10-1/3)得23C(170mg，收率：51％)。
LCMS m/z＝246.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.52–7.44(m,3H),7.45–7.37(m,2H),7.34-7.22(m,2H),6.80(dd,1H),1.82(d,6H)。
第三步：(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)
(4-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000313
将23C(170mg,0.69mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(315mg,1.38mmol)溶于NMP (10mL)中，加入DIPEA(107mg,0.83mmol)，氮气保护下130℃，此温度下搅拌6h。冷却至室温，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有机层用30mL饱和食盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/2-1/0)，得到23D(240mg，收率：80％)。
LCMS m/z＝436.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ11.37(s,1H),8.66(dd,1H),8.35(s,1H),7.85–7.76(m,1H),7.57–7.35(m,6H),1.89(d,6H)。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物23)的三氟乙酸盐
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid；
Figure PCTCN2022090243-appb-000314
将4D(87mg,0.12mmol)和23D(58mg,0.13mmol，溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(68mg,0.36mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化得化合物23的三氟乙酸盐(30mg)。
LCMS m/z＝562.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.43–8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.73–7.61(m,2H),7.61–7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.40–7.33(m,1H),7.33–7.29(m,1H),7.27–7.13(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.10–3.98(m,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.14–3.04(m,2H),3.04–2.81(m,4H),2.65–2.52(m,6H),2.44–2.30(m,4H),2.25–1.95(m,5H),1.92–1.73(m,11H),1.61–1.45(m,2H),1.21–1.08(m,2H)。
实施例23-1：化合物23的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000315
将化合物23的三氟乙酸盐(60mg)溶于20mL二氯甲烷中，加入20mL水和1mL饱和碳酸氢钠溶液，分离有机层，水层用二氯甲烷萃取(20mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得化合物23(42mg)。
LCMS m/z＝562.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),11.05(s,1H),8.31–8.22(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.85(s,1H),7.75–7.61(m,2H),7.61–7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.40–7.32(m,1H),7.30(s,1H),7.27–7.08(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.10–3.93(m,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.14–3.03(m,2H),3.03–2.81(m,4H),2.65–2.52(m,6H),2.44–2.30(m,4H),2.23–1.95(m,5H),1.89–1.72(m,11H),1.59–1.45(m,2H),1.19–1.07(m,2H)。
实施例24：化合物24的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000316
第一步：5-(4-((1'-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(24A)
5-(4-((1'-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000317
将8G(0.84g,1.61mmol)和1-环丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)(226mg,1.07mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入碳酸氢钠固体(405mg,4.82mmol)，100℃过夜反应。反应完后，冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到24A，黄色固体(0.61g，收率：53％)。
LCMS m/z＝714.4[M+H] +。
第二步：5-(4-((1'-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(24B)
5-(4-((1'-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000318
将24A(0.61g,0.85mmol)溶于乙醇(5mL)和水(1mL)中，加入氯化铵固体(455mg,8.5mmol)和铁粉(476mg,8.5mmol)，N 2置换3次，80℃搅拌1h。反应完后，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，减压浓缩。将减压浓缩所得物用50mL二氯甲烷溶解，萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到24B，黄色固体(0.32g，收率55％)。
LCMS m/z＝684.4[M+H] +。
第三步：5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹恶啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物24)
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000319
将24B(0.32g,0.468mmol)和2J(193mg,0.468mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(266mg,1.40mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物24，(60mg，收率：12％)。
LCMS m/z＝1059.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.64(s,1H),11.06(s,1H),8.90–8.74(m,3H),8.31–8.22(m,2H),7.87(d,1H),7.67(d,1H),7.32(s,1H),7.27–7.21(m,1H),6.86(s,1H),6.74(s,1H),5.07(dd,1H),3.76(s,3H),3.44–3.41(m,3H),3.34–3.31(m,3H),2.94–2.83(m,3H),2.73–2.64(m,2H),2.63–2.52(m,2H),2.49–2.43(m,4H),2.24–2.07(m,5H),2.06–1.97(m,7H),1.89(s,1H),1.87–1.79(m,2H),1.76–1.60(m,4H),1.56–1.46(m,1H),1.16–1.04(m,2H),0.79–0.66(m,2H),0.44–0.32(m,2H)。
实施例25：化合物25的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000320
第一步：5-(9-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(25A)
5-(9-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000321
将11B的盐酸盐(728mg)溶于DMSO(10mL)中，依次加入1-环丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)(350mg,1.66mmol)和碳酸氢钠(353mg,4.2mmol)，100℃反应5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到25A(540mg，收率：60％)。
LCMS m/z＝685.3[M+H] +。
第二步：5-(9-(1-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(25B)
5-(9-(1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000322
将25A(540mg,0.79mmol)溶于乙醇/水(16mL，3:1)中，依次加入铁粉(530mg，9.5mmol)，氯化铵(510mg，9.5mmol)，氮气保护，80℃反应1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到25B(250mg，收率：48％)。
LCMS m/z＝655.4[M+H] +。
第三步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基))哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物25)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000323
将25B(125mg,0.19mmol)和2J(87mg,0.21mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(110mg,0.57mmol)，氮气保护下100℃反应16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到化合物25(40mg，收率：25.4％)。
LCMS m/z＝515.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.65(s,1H),11.05(s,1H),8.98–8.70(m,3H),8.33–8.20(m,2H),7.86(d,1H),7.63(d,1H),7.36–7.20(m,2H),6.86(s,1H),6.74(s,1H),5.05(dd,1H),3.76(s,3H),3.50–3.43(m,2H),3.39–3.32(m,3H),2.95–2.82(m,1H),2.76–2.53(m,7H),2.14–1.82(m,11H),1.76–1.37(m,12H),0.74–0.64(m,2H),0.44–0.27(m,2H)。
实施例26：化合物26的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000324
第一步：4-((4-(4-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(26A)
tert-butyl 4-((4-(4-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000325
将12E(0.8g,2.18mmol)和2E(0.50g,2.4mmol)溶于DMSO(20mL)中，加入碳酸钾(0.59g,4.26mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)三次。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到26A(0.6g，收率：49％)。
LCMS m/z＝558.4[M+H] +。
第二步：1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)哌嗪(26B)
1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)-4-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000326
将26A(0.6g,1.07mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，室温下加入三氟乙酸(3.06g,26.84mmol)，室温搅拌2h。减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N氢氧化钠水溶液调节pH＝10。分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到26B(0.5g)粗品，直接用于下一步。
第三步：5-(4-((4-(4-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(26C)
5-(4-((4-(4-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000327
将26B(0.5g)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(0.30g,1.08mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃搅拌5h，冷却至室温，加入20mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-15/1)，得到26C(0.40g，收率：52％)
LCMS m/z＝714.3[M+H] +。
第四步：5-(4-((4-(4-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(26D)
5-(4-((4-(4-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000328
将26C(0.40g,0.58mmol)溶于乙醇(12mL)和水(3mL)中，升温至80℃，加入氯化铵(0.22g,4.11mmol)和铁粉(0.23g,4.12mmol)的混合物，80℃搅拌0.5h，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，滤液加入10mL饱和食盐水，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到26D(0.31g，收率：78％)。
LCMS m/z＝684.3[M+H] +。
第五步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物26)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000329
将26D(0.31g,0.45mmol)和1I(0.18g,0.5mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物26(30mg，收率：7％)。
LCMS m/z＝508.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.88(s,1H),11.06(s,1H),9.06–8.91(m,1H),8.90–8.80(m,2H),8.33(s,1H),8.17(s,1H),7.89(d,1H),7.65(d,1H),7.31(d,1H),7.23(dd,1H),6.88(s,1H),6.80(s,1H),5.07(dd,1H),4.10–3.98(m,2H),3.77(s,3H),3.09–2.83(m,9H),2.76–2.53(m,6H),2.30–2.09(m,4H),2.08–1.96(m,7H),1.94–1.71(m,7H),1.55–1.39(m,2H),1.22–1.08(m,2H),0.82–0.71(m,2H),0.49–0.40(m,2H)。
实施例27：化合物27的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000330
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(27A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000331
将9D的盐酸盐(0.27g)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异二氢吲哚-1,3-二酮(5A-1)(0.16g,0.56mmol)溶于DMSO(15mL)中，滴加DIPEA(0.22g,1.68mmol)，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到27A，黄色固体(0.30g，收率：71％)。
LCMS m/z＝757.4[M+H] +。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(27B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000332
将27A(0.30g,0.40mmol)溶于乙醇(15mL)，加入还原铁粉(0.11g,2.00mmol)，再滴加氯化铵(0.11g,2.00mmol)的水溶液(5mL)，氮气保护，80℃反应3h，反应液冷却至室温，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到27B，黄色固体(0.26g，收率：89％)。
LCMS m/z＝727.3[M+H] +。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物27)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000333
将27B(0.13g,0.18mmol)与1I(0.07g,0.18mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.10g,0.54mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到化合物27(44mg，收率：23％)。
LCMS m/z＝529.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.87(s,1H),11.08(s,1H),9.00–8.92(m,1H),8.87 –8.78(m,2H),8.38(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.82(s,1H),7.69(d,1H),7.57(s,2H),7.44(d,1H),6.89(s,1H),5.10(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.66–3.55(m,2H),2.95–2.80(m,7H),2.68–2.53(m,2H),2.41–2.31(m,4H),2.22–2.15(m,2H),2.08–1.97(m,7H),1.88-1.78(m,2H),1.78–1.69(m,1H),1.62–1.50(m,8H),1.33–1.24(m,2H)。
实施例28：化合物28的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000334
第一步：5-(9-(1-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物28)
5-(9-(1-(4-((5-chloro-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将33F(100mg,0.14mmol)和1I(77mg,0.21mmol)，溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(80mg,0.42mmol)，氮气保护下100℃反应16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物28(20mg，收率：14％)。
LCMS m/z＝1044.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.89(s,1H),11.08(s,1H),9.04–8.91(m,1H),8.83(dd,2H),8.37(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.71(d,1H),7.63–7.51(m,2H),7.47(d,1H),6.83(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.23–3.10(m,4H),3.06(s,2H),2.95–2.82(m,1H),2.70–2.52(m,6H),2.41–2.28(m,1H),2.10–1.94(m,7H),1.90–1.41(m,12H),1.34–1.20(m,2H)。
实施例29：化合物29的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000335
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物29)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将5B(0.16g,0.21mmol)与2J(0.09g,0.21mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.12g,0.63mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到化合物29(51mg，收率：22％)。
LCMS m/z＝559.4[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.68(s,1H),11.08(s,1H),8.90–8.71(m,3H),8.36(s,1H),8.27(s,1H),7.97(s,1H),7.78(s,1H),7.70(d,1H),7.64–7.49(m,2H),7.44(d,1H),6.82(s,1H),5.10(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.66–3.57(m,2H),3.20–3.10(m,2H),2.94–2.84(m,3H),2.70–2.51(m,8H),2.47-2.10(m,7H),2.07–1.95(m,7H),1.90–1.68(m,5H),1.66–1.43(m,2H),1.31–1.25(m,2H)。
实施例30：化合物30的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000336
Figure PCTCN2022090243-appb-000337
第一步：5-(3-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物30)
5-(3-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将6F(0.11g,0.15mmol)与2J(0.06g,0.15mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.09g,0.45mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到化合物30(31mg，收率：19％)。
LCMS m/z＝543.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.67(s,1H),11.04(s,1H),8.90–8.75(m,3H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),7.98(s,1H),7.76(s,1H),7.68–7.46(m,3H),6.93–6.79(m,3H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.58–3.48(m,2H),3.44–3.36(m,1H),3.19–3.06(m,3H),2.95–2.81(m,1H),2.75–2.52(m,9H),2.47–2.08(m,8H),2.07–1.96(m,7H),1.91–1.69(m,3H),1.66–1.49(m,2H)。
实施例31：化合物31的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000338
第一步：5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6- 二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物31)
5-(4-((4-(4-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将12I(0.25g,0.34mmol)和2J(0.18g,0.44mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干后的固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物31(30mg，收率：8％)。
LCMS m/z＝550.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.68(s,1H),11.05(s,1H),8.88–8.75(m,3H),8.37(s,1H),8.27(s,1H),7.97(s,1H),7.78(s,1H),7.65(d,1H),7.62–7.50(m,2H),7.30(d,1H),7.23(dd,1H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),4.09–3.98(m,2H),3.81(s,3H),3.75(s,3H),3.03–2.82(m,9H),2.69–2.52(m,6H),2.24–2.08(m,3H),2.07–1.96(m,7H),1.93–1.73(m,7H),1.51–1.37(m,2H),1.21–1.08(m,2H)。
实施例32：化合物32的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000339
第一步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物32)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]unde can-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将11D(100mg,0.14mmol)和2J(0.21g,0.51mmol)DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(87mg,0.46mmol)，氮气保护下100℃反应16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物32(22mg，收率：15％)。
LCMS m/z＝1070.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.66(s,1H),11.05(s,1H),8.88–8.73(m,3H),8.34(s,1H),8.26(s,1H),7.95(s,1H),7.76(s,1H),7.67–7.46(m,3H),7.34–7.16(m,2H),6.81(s,1H),5.05(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.51–3.35(m,4H),3.18–3.05(m,2H),2.96–2.81(m,1H),2.69–2.52(m,6H),2.34–2.24(m,1H),2.08–1.94(m,8H),1.89–1.74(m,2H),1.70–1.34(m,11H)。
实施例33：化合物33的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000340
第一步：2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(33A)
tert-butyl 2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-9-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000341
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(700mg,2.38mmol)溶于DMSO(10mL)中，依次加入2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(786mg,3.09mmol)和碳酸氢钠(800mg,9.52mmol)，100℃搅拌4h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到33A，黄色固体(0.6g，收率：48％)。
LCMS m/z＝529.3[M+H] +。
第二步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(33B)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000342
将33A(600mg,1.14mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入2M盐酸的二氧六环溶液(6mL)，室温下反应1h，减压浓缩残留物加入20mL二氯甲烷，用1M的NaOH水溶液调节pH＝9-10,分液，有机层减压浓缩后得到33B(462mg，收率：95％)。
第三步：4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(33C)
tert-butyl 4-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000343
将33B(462mg,1.08mmol)和N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(279mg,1.40mmol)溶于DMAc(8mL)中，加入醋酸(65mg,1.08mmol)。室温搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(342mg,1.61mmol)，室温过夜反应。加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二 氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到33C(400mg，收率：61％)。
LCMS m/z＝612.3[M+H] +。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-(哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(33D)的盐酸盐
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-(piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000344
将33C(400mg,0.65mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入2N盐酸的二氧六环溶液(6mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(33E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000345
将上一步33D的盐酸盐粗品溶于DMSO(5mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(196mg,0.78mmol)和碳酸氢钠(202mg,2.4mmol)，100℃反应5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到33E(178mg，收率：37％)。
LCMS m/z＝743.3[M+H] +。
第六步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(33F)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000346
将33E(178mg,0.24mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(67mg，1.20mmol)，氯化铵(64mg，1.20mmol)，氮气保护，80℃反应1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到33F(100mg，收率：58％)。
第七步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物33)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000347
将33F(100mg,0.14mmol)和2J(87mg,0.21mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(80mg,0.42mmol)，氮气保护下100℃反应16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物33(30mg，收率：20％)。
LCMS m/z＝1088.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.66(s,1H),11.09(s,1H),8.90–8.73(m,3H),8.34(s,1H),8.26(s,1H),7.95(s,1H),7.77(s,1H),7.70(d,1H),7.62–7.49(m,2H),7.46(d,1H),6.81(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.24–2.99(m,7H),2.95–2.82(m,1H),2.68–2.51(m,7H),2.36–2.25(m,1H),2.09–1.94(m,7H),1.89–1.39(m,12H)。
实施例34：化合物34的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000348
第一步：5-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(34B)
tert-butyl 5-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000349
将2-叔丁氧羰基-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯(34A)(1.06g,5mmol)和4-甲酰基哌啶-1-羧酸苄酯(2.47g,10mmol)溶于1,2-二氯乙烷(18mL)中，加入醋酸(600mg,10mmol)。室温搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.18g,15mmol)，室温过夜反应。加入20mL氢氧化钠水溶液(4N)和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到34B(3.55g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝444.3[M+H] +。
第二步：5-(哌啶-4-基甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(34C)
tert-butyl 5-(piperidin-4-ylmethyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000350
将34B(3.55g,5mmol)溶于氨/甲醇(30mL)中，加入钯碳(wt％＝10％,355mg)，氢 气置换3次，氢气氛围(气球压强)、室温下搅拌3h，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到34C(474mg，收率：31％)。
LCMS m/z＝310.3[M+H] +。
第三步：4-[(4-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(34D)
tert-butyl 5-((1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000351
将2E(356mg,1.69mmol)和34C(474mg,1.53mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入碳酸钾(634mg,4.59mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到34D(766mg)粗品，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝501.3[M+H] +。
第四步：2-((1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯(34E)的盐酸盐
2-((1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole hydrochloride；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000352
向34D(766mg)粗品加入盐酸二氧六环溶液(4N，6mL,24mmol)，室温搅拌5min，然后加入(6mL)，反应液溶清，室温搅拌5min送LCMS监测反应进程。将反应液减压浓缩干，得到34E的盐酸盐粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝401.3[M+H] +。
第五步：5-(5-((1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(34F)
5-(5-((1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000353
将上一步34E的盐酸盐粗品和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(422m g,1.53mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIPEA(593mg,4.59mmol)，100℃搅拌5h，冷却至室温，加入20mL水，析出固体，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-30/1)，得到34F(611mg，收率：61％)。
LCMS m/z＝657.3[M+H] +。
第六步：5-(5-((1-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(34G)
5-(5-((1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000354
将34F(611mg,0.93mmol)溶于甲醇(12mL)和水(3mL)中，升温至80℃，加入氯化铵(611mg,11.5mmol)和铁粉(611mg,11mmol)的混合物。此温度下搅拌0.5h，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，滤液加入10mL饱和食盐水，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过制备板制备得到(DCM/MeOH＝10/1)34G(140mg，收率：24％)。
LCMS m/z＝627.3[M+H] +。
第七步：5-(5-((1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物34)
5-(5-((1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000355
将34G(0.14g,0.22mmol)和2J(92mg,0.22mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(127mg,0.67mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物34(35mg，收率：16％)。
LCMS m/z＝501.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.64(s,1H),11.04(s,1H),8.90–8.61(m,3H),8.31–8.10(m,2H),7.95–7.78(m,1H),7.65(d,1H),7.03–6.65(m,4H),5.04(dd,1H),3.79–3.63(m,5H),3.29–3.13(m,4H),3.06–2.94(m,2H),2.93–2.80(m,1H),2.74–2.59(m,4H),2.59–2.48(m,4H),2.38–2.27(m,2H),2.12–1.92(m,8H),1.86–1.76(m,2H),1.63–1.53(m,1H),1.37–1.24(m,2H),0.73–0.58(m,2H),0.43–0.20(m,2H)。
实施例35：化合物35的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000356
第一步：4-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(35A)
tert-butyl 4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000357
将4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7D-1)(0.51g,1.89mmol)，1-环丙基-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(2E)(0.40g,1.89mmol)和碳酸钾(0.78g,5.67mmol)混合溶于DMSO(15mL)中，120℃搅拌3h。冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到35A(340mg，收率：39％)。
LCMS m/z＝461.3[M+H] +。
第二步：1-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪(化合物35B)
1-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000358
将35A(0.34g,0.74mmol)溶于DCM(15mL)，室温下加入三氟乙酸(5mL)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入30mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝9-10，分液，有机层减压浓缩后得到35B(265mg)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝361.3[M+H] +。
第三步：叔丁基3-((4-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(化合物35C)
tert-butyl 3-((4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000359
将35B(0.27g,0.74mmol)，3-甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.18g,0.89mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，依次加入醋酸(0.09g,1.48mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.31g,1.48mmol)，室温反应2h，加入1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1除去杂质，二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1收集产物)得到35C(400mg，收率： 99％)。
LCMS m/z＝544.3[M+H] +。
第四步：1-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(35D)
1-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000360
将35C(0.40g,0.74mmol)溶于DCM(15mL)，室温下加入三氟乙酸(5mL)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入30mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝9-10，分液，有机层减压浓缩后得到35D(305mg)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝444.3[M+H] +。
第五步：5-(3-((4-(1-(2-环丙基-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(35E)
5-(3-((4-(1-(2-cyclopropyl-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000361
将35D(0.31g,0.69mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(0.19g,0.69mmol)溶于DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.27g,2.07mmol)，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到35E(365mg，收率：76％)。
LCMS m/z＝700.3[M+H] +。
第六步：5-(3-((4-(1-(4-氨基-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(35F)
5-(3-((4-(1-(4-amino-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000362
将35E(0.18g,0.26mmol)溶于乙醇(15mL)，加入还原铁粉(0.07g,1.30mmol)，再滴加氯化铵(0.07g,1.30mmol)的水溶液(5mL)，氮气保护，80℃反应3h，反应液冷却至室温，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到35F(170mg)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝670.3[M+H] +。
第七步：5-(3-((4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-环丙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物35)
5-(3-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((5-(dimethylphosphoryl)quinoxalin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-cyclopropyl-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000363
将35F(0.17g,0.25mmol)与2J(0.10g,0.25mmol)溶于DMF(12mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.14g,0.75mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物35(80mg，收率：31％)。
LCMS m/z＝523.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.65(s,1H),11.04(s,1H),8.89–8.74(m,3H),8.26(s,1H),8.24(s,1H),7.87(d,1H),7.64(d,1H),6.94–6.83(m,2H),6.81(dd,1H),6.75(s,1H),5.05(dd,1H),3.76(s,3H),3.59–3.45(m,2H),3.44-3.35(m,1H),3.34–3.22(m,2H),3.17–3.09(m,1H),2.93–2.83(m,1H),2.76–2.52(m,9H),2.48–2.27(m,7H),2.17-2.07(m,2H),2.06–1.95(m,7H),1.93–1.82(m,2H),1.80-1.71(m,1H),1.68–1.57(m,2H), 0.79–0.64(m,2H),0.46–0.31(m,2H)。
实施例36：化合物36的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000364
第一步：5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物36)
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将13F(315mg,0.44mmol)和23D(224mg,0.51mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(251mg,1.32mmol)，氮气保护下，100℃反应16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物36(110mg，收率：22％)。
LCMS m/z＝561.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.44–8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.74–7.61(m,2H),7.61–7.50(m,3H),7.49–7.33(m,3H),7.30(d,1H),7.36(s,1H),7.27–7.12(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.09–3.97(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.15–3.03(m,2H),3.03–2.81(m,5H),2.64–2.52(m,3H),2.18–2.07(m,2H),2.05–1.96(m,1H),1.89–1.75(m,10H),1.75–1.65(m,2H),1.34–1.04(m,10H)。
实施例37：化合物37的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000365
第一步：9-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(37A)
tert-butyl 9-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000366
将化合物4-甲酰哌啶-1-羧酸苄酯(6.0g,24.26mmol)，3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(8.0g,31.45mmol)溶于DMAC(100mL)中，加入十滴(3mL一次性塑料滴管滴加)醋酸后，室温搅拌1h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(7.7g,36.33mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，并依次用水(200mL×2)和饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到37A(10g，收率：85％)。
LCMS m/z＝486.4[M+H] +。
第二步：9-(哌啶-4-基甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(37B)
tert-butyl 9-(piperidin-4-ylmethyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000367
依次加入37A(4.2g,8.65mmol)、钯碳(2.5g，10wt％)溶于60mL甲醇中，然后氢气置换三次后在室温反应2h，硅藻土抽滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝25/1-10/1)得到37B(2.8g，收率：92％)。
LCMS m/z＝352.3[M+H] +。
第三步：9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(37C)
tert-butyl 9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000368
将37B(1.6g,4.55mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.49g,5.93mmol)溶于DMSO(20mL)中，加入碳酸氢钠(1.53g,18.2mmol)，100℃反应6h。冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到37C(1.4g，收率：53％)。
LCMS m/z＝583.3[M+H] +。
第四步：3-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(37D)的盐酸盐
3-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000369
将37C(1.2g,2.06mmol)溶于甲醇(4mL)中，加入2N盐酸的二氧六环溶液(15mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(37E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000370
将上一步的37D的盐酸盐粗品溶于DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(683mg,2.47mmol)和碳酸氢钠(692mg,8.24mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到37E(1.4g，收率：92％)。
LCMS m/z＝739.3[M+H] +。
第六步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(37F)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000371
将37E(1.0g,1.35mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(375mg，6.71mmol)，氯化铵(361mg，6.75mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到37F(700mg，收率：73％)。
LCMS m/z＝709.4[M+H] +。
第七步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物37)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazas piro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000372
将37F(200mg,0.28mmol)和23D(148mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃反应16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物37(84mg，收率：27％)。
LCMS m/z＝1108.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),11.05(s,1H),8.45–8.34(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.74–7.62(m,2H),7.61–7.49(m,3H),7.48–7.39(m,2H),7.38–7.27(m,2H),7.25–7.10(m,2H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.53–3.39(m,4H),3.12–2.99(m,2H),2.95–2.80(m,1H),2.64-2.52(m,4H),2.43–2.28(m,4H),2.27–2.17(m,2H),2.07–1.95(m,1H),1.83(d,6H),1.76–1.66(m,2H),1.62–1.43(m,9H),1.35–1.23(m,2H)。
实施例38：化合物38的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000373
第一步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物38)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将10G(0.08g,0.11mmol)与23D(0.05g,0.11mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.06g,0.33mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％三氟乙酸))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物38，(30mg，收率：25％)。
LCMS m/z＝554.9[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),11.05(s,1H),8.43–8.36(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.76–7.62(m,2H),7.62–7.48(m,3H),7.47–7.39(m,2H),7.37–7.28(m,2H),7.28–7.21(m,1H),7.20–7.12(m,1H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.55–3.33(m,4H),3.15-3.00(m,2H),2.94–2.83(m,1H),2.70–2.51(m,4H),2.49–2.07(m,6H),2.04–1.95(m,1H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.78–1.25(m,13H)。
实施例39：化合物39的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000374
Figure PCTCN2022090243-appb-000375
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-)硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(39A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000376
将9D的盐酸盐(820mg)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异二氢吲哚-1,3-二酮(5A-1)(557mg,1.89mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入N,N-二异丙基乙基胺(413mg,3.2mmol)，90℃反应6h。冷却至室温，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-15/1)，得到39A(0.91g，收率：76％)。
LCMS m/z＝757.3[M+H] +。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(39B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000377
将39A(910mg,1.2mmol)溶于甲醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(910mg，17 mmol)，氯化铵(66.9mg，17.8mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到39B(345mg，收率：39％)。
LCMS m/z＝727.4[M+H] +。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物39)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000378
将39B(154mg,0.21mmol)和23D(99mg,0.23mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到粗品。所得粗品通过制备液相分离纯化得到化合物39，(35mg，收率：15％)。
LCMS m/z＝563.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.23–10.92(m,2H),8.45–8.34(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.74–7.62(m,2H),7.60–7.49(m,3H),7.48–7.39(m,3H),7.39–7.31(m,1H),7.26–7.11(m,1H),6.89(s,1H),5.09(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.66–3.54(m,2H),2.99–2.69(m,7H),2.65–2.51(m,2H),2.40–2.25(m,4H),2.22–2.12(m,2H),2.07–1.98(m,1H),1.90–1.64(m,9H),1.62–1.39(m,8H),1.32–1.23(m,2H)。
实施例40：化合物40的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000379
Figure PCTCN2022090243-appb-000380
第一步：(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)
(4-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000381
将23C(4.3g,17.5mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(6.4g,34.9mmol)溶于50mL NMP中，加入DIPEA(2.7g,20.9mmol)，130℃搅拌3h，冷却至室温，加入80mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)＝10/1-1/10)，得到40A(5.7g，收率：83％)。
LCMS m/z＝392.0[M+H] +。
第二步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物40)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000382
将12I(0.20g,0.28mmol)和40A(0.18g,0.46mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得 到化合物40(12mg，收率：4％)。
LCMS m/z＝540.4[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.54–8.45(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.74–7.68(m,1H),7.67–7.60(m,2H),7.59–7.52(m,2H),7.49–7.42(m,2H),7.39–7.33(m,1H),7.30(d,1H),7.23(dd,1H),7.20–7.13(m,1H),6.86(s,1H),5.06(dd,1H),4.09–3.98(m,2H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.02–2.81(m,9H),2.69–2.53(m,6H),2.26–2.09(m,3H),2.06–1.97(m,1H),1.93–1.73(m,13H),1.49–1.41(m,2H),1.17–1.11(m,2H)。
实施例41：化合物41的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000383
5-(4-((1'-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物41)
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[4,4'-bipiperidin]-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将13F(235mg,0.33mmol)和40A(157mg,0.4mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到化合物41(82mg，收率：23％)。
LCMS m/z＝539.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.36(s,1H),11.05(s,1H),8.54–8.42(m,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,1H),7.61–7.52(m,3H),7.48–7.33(m,3H),7.30(d,1H),7.26–7.12(m,2H),6.84(s,1H),5.06(dd,1H),4.10–3.97(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.15–3.04(m,2H),3.03–2.79(m,5H),2.64–2.52 (m,4H),2.17–1.97(m,3H),1.89–1.65(m,14H),1.37–1.05(m,9H)。
实施例42：化合物42的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000384
5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物42)
5-(4-((4-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将12I(0.20g,0.28mmol)和23D(0.17g,0.39mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物42(12mg，收率：4％)。
LCMS m/z＝562.4[(M+2H)/2] +。
实施例43：化合物43的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000385
5-(4-((1'-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物43)
5-(4-((1'-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将8I(180mg,0.249mmol)和23D(109mg,0.25mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(142mg,0.747mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物43的三氟乙酸盐(84mg)。向化合物43的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物43(60mg，收率：21％)。
LCMS m/z＝1123.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.42–8.35(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.72–7.65(m,2H),7.59–7.52(m,3H),7.47–7.42(m,2H),7.39–7.35(m,1H),7.34–7.31(m,1H),7.25(dd,1H),7.22–7.15(m,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.77(d,6H),3.48–3.39(m,4H),3.13–3.06(m,2H),2.95–2.87(m,2H),2.64–2.53(m,4H),2.49–2.45(m,3H),2.20–2.12(m,4H),2.04–1.97(m,2H),1.83(d,6H),1.78–1.71(m,4H),1.62–1.48(m,5H),1.17–1.14(m,2H)。
实施例44：化合物44的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000386
5-(2-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-2-(2,6- 二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物44)
5-(2-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1H(142mg,0.2mmol)和23D(99mg,0.23mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物44(34mg，收率：15.3％)。
LCMS m/z＝554.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.04(s,1H),8.47–8.33(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.75–7.50(m,5H),7.48–7.38(m,2H),7.36–7.26(m,2H),7.24–7.06(m,2H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),3.56–3.39(m,4H),3.14–3.00(m,2H),2.97–2.81(m,1H),2.75–2.51(m,6H),2.41–2.11(m,4H),2.04–1.96(m,1H),1.83(d,6H),1.76–1.44(m,9H),1.40–1.23(m,4H)。
实施例45：化合物45的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000387
第一步：4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(45B)
benzyl 4-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000388
将45A(6.0g,27.24mmol)和4-甲酰哌啶-1-羧酸叔丁酯(11.62g,54.48mmol)溶于DMAc(50mL)中，加入醋酸(3.27g,54.45mmol)，室温搅拌2h。然后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(17.32g,81.72mmol)，室温反应过夜。反应结束后，加入100mL乙酸乙酯和200mL水，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到45B，白色固体(6.0g，收率：53％)。
LCMS m/z＝418.3[M+H] +。
第二步：4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(45C)的盐酸盐
benzyl 4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine-1-carboxylate；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000389
将45B(3.0g,7.18mmol)溶于5mL甲醇，向反应体系加入30mL氯化氢-二氧六环溶液(1M)，室温反应1h，反应完后，减压浓缩，得到45C的盐酸盐(2.24g)，直接进行下一步反应。
LCMS m/z＝318.2[M+H] +。
第三步：4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(45D)
benzyl 4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000390
将45C的盐酸盐粗品(2.24g)溶于DMSO(20mL)中，分批加入固体碳酸钾(8.13g,58.8mmol)，搅拌5min，再加入化合物4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.48g,5.89mmol)，100℃反应过夜。反应结束后冷却至室温，用50mL乙酸乙酯和200mL水萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到45D(2.28g，收率：58％)。
LCMS m/z＝549.3[M+H] +。
第四步：2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌嗪-1-基甲基)哌啶-1-基)苯胺(45E)
2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-(4-(piperazin-1-ylmethyl)piperidin-1-yl)aniline
Figure PCTCN2022090243-appb-000391
将化合物45D(2.28g,4.16mmol)溶于20mL甲醇中，加入钯/碳(44mg)，置换氢气三次，在氢气氛围下，室温反应过夜。反应完后，抽滤，滤液减压浓缩得到45E粗品(1.6g)。
LCMS m/z＝385.3[M+H] +。
第五步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(45F)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000392
将45E粗品(800mg)溶于DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(1.14g,4.13mmol)和DIPEA(538mg,4.16mmol)，100℃反应3h。冷却至室温，加入10mL水，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到45F，黄色固体(1.0g，收率：75％)。
LCMS m/z＝641.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ7.98(s,1H),7.89(s,1H),7.68(d,1H),7.36(d,1H),7.22(dd,1H),6.87(s,1H),6.74(s,1H),5.06(dd,1H),3.90(s,3H),3.85(s,3H),3.53–3.42(m,4H),3.08–2.96(m,2H),2.91–2.69(m,3H),2.69–2.54(m,6H),2.41–2.28(m,2H),2.15–2.06(m,1H),1.90–1.78(m,2H),1.77–1.61(m,1H),1.43–1.24(m,2H)。
第六步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物45)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin- 1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000393
将45F(200mg,0.31mmol)和23D(203mg,0.465mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(177mg,0.93mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物45的三氟乙酸盐(60mg)，向化合物45的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物45(45mg，收率：14％)。
LCMS m/z＝1040.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.30(s,1H),8.13–8.00(m,2H),7.89–7.68(m,4H),7.68–7.55(m,4H),7.55–7.43(m,2H),7.43–7.20(m,3H),5.13(dd,1H),4.25–4.09(m,2H),4.06(s,3H),3.94–3.64(m,6H),3.61–3.46(m,5H),3.39–3.12(m,4H),2.96–2.85(m,2H),2.83–2.67(m,1H),2.57–2.38(m,1H),2.30–2.11(m,3H),2.09–1.85(m,8H)。
实施例46：化合物46的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000394
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基))-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(46A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000395
将12G(0.3g,0.60mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(0.25g,0.85mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIPEA(0.21g,1.62mmol)，90℃搅拌5h，冷却至室温，加入20mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-15/1)，得到46A(0.31g，收率：67％)
LCMS m/z＝772.4[M+H] +。
第二步：5-(4-((4-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(46B)
5-(4-((4-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000396
将46A(0.31g,0.40mmol)溶于乙醇(12mL)和水(3mL)中，升温至80℃，加入氯化铵(0.22g,4.11mmol)和铁粉(0.23g,4.12mmol)的混合物。此温度下搅拌0.5h，冷却至室温，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，滤液加入10mL饱和食盐水，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到46B粗品(0.19g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝742.3[M+H] +。
第三步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物46)
5-(4-((4-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000397
将46B粗品(0.15g)和23D(0.12g,0.27mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干，将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物46(26mg，收率：7％)。
LCMS m/z＝571.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.08(s,1H),8.39(s,1H),8.26(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.73–7.70(m,1H),7.68(s,1H),7.59(s,1H),7.55(d,2H),7.48–7.43(m,3H),7.36(t,1H),7.18(m,1H),6.85(s,1H),5.10(dd,1H),3.78(d,3H),3.75(s,3H),3.61(d,2H),2.92–2.83(m,8H),2.66–2.56(m,5H),2.54–2.52(m,1H),2.25–2.14(m,3H),2.09–2.00(m,1H),1.94–1.72(m,13H),1.48–1.39(m,2H),1.33–1.20(m,3H)。
实施例47：化合物47的
Figure PCTCN2022090243-appb-000398
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(47A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000399
将37D的盐酸盐粗品(333mg)溶于DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(265mg,0.90mmol)和碳酸氢钠(232mg,2.76mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到47A(420mg)。
第二步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(47B)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000400
将47A(420mg,0.55mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(154mg，2.75mmol)，氯化铵(147mg，2.75mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到47B(380mg，收率：95％)。
LCMS m/z＝727.4[M+H] +。
第三步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物47)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000401
将47B(200mg,0.28mmol)和23D(148mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物47(48mg，收率：15％)。
LCMS m/z＝563.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),11.08(s,1H),8.44–8.32(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.75–7.64(m,2H),7.60–7.50(m,3H),7.49–7.39(m,3H),7.39–7.30(m,1H),7.27–7.10(m,1H),6.85(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.28–3.19(m,4H),3.14–2.99(m,2H),2.95–2.82(m,1H),2.68–2.53(m,4H),2.42–2.30(m,4H),2.28–2.16(m,2H),2.08–1.97(m,1H),1.83(d,6H),1.77–1.65(m,2H),1.65–1.44(m,9H),1.34-1.23(m,2H)。
实施例48：化合物48的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000402
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物48)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazas piro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将37F(235mg,0.33mmol)和40A(157mg,0.4mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物48(82mg，收率：23％)。
LCMS m/z＝1064.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.49(s,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,J＝8.5Hz,1H),7.62–7.50(m,3H),7.44(t,2H),7.39–7.31(m,1H),7.33–7.26(m,1H),7.26–7.12(m,2H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.55–3.40(m,4H),3.07(d,2H),2.98–2.81(m,1H),2.70–2.53(m,4H),2.36(s,4H),2.29–2.17(m,2H),2.07–1.95(m,1H),1.84(d,6H),1.72(d,2H),1.64–1.45(m,9H),1.38–1.20(m,3H)。
实施例49：化合物49的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000403
第一步：5-(2-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物49)
5-(2-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1H(142mg,0.2mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(90mg,0.23mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g, 0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物49(50mg，收率：23.5％)。
LCMS m/z＝532.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.56–8.40(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.88(s,1H),7.70(d,1H),7.65–7.49(m,4H),7.42(t,2H),7.35–7.24(m,2H),7.22–7.07(m,2H),6.84(s,1H),5.05(dd,1H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),3.58–3.35(m,4H),3.14–3.02(m,2H),2.94–2.82(m,1H),2.73–2.52(m,4H),2.42–2.11(m,6H),2.05–1.93(m,1H),1.84(d,6H),1.78–1.46(m,9H),1.45–1.17(m,4H)。
实施例50：化合物50的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000404
第一步：5-(4-((4-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物50)
5-(4-((4-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将46B(0.15g,0.20mmol)和40A(0.13g,0.33mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干，将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶 液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物50(30mg，收率：14％)。
LCMS m/z＝549.4[(M/2+H)] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.08(s,1H),8.54–8.44(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.75–7.66(m,2H),7.61(s,1H),7.58–7.51(m,2H),7.50–7.40(m,3H),7.40–7.33(m,1H),7.21–7.09(m,1H),6.86(d,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.67–3.55(m,2H),3.00–2.77(m,10H),2.70–2.52(m,6H),2.18–2.11(m,2H),2.06–1.99(m,1H),1.96–1.65(m,13H),1.50–1.35(m,2H),1.31–1.19(m,2H)。
实施例51：化合物51的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000405
第一步：5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基))-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物51)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将39B(100mg,0.138mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(56mg,0.143mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(79mg,0.413mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到粗品。所得粗品通过制备液相分离纯化得到化合物51，(18mg，收率：12％)。
LCMS m/z＝541.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.44–11.32(m,1H),11.21–10.93(m,1H),8.54–8.39(m,1H),8.28(s,1H),8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.75–7.63(m,2H),7.61–7.50(m,3H),7.49–7.40(m,3H),7.39–7.30(m,1H),7.28–7.13(m,1H),6.89(s,1H),5.10(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.65–3.56(m,2H),2.95–2.74(m,7H),2.64–2.52(m,2H),2.37–2.26(m,4H),2.22–2.12(m,2H),2.09–1.98(m,1H),1.87–1.77(m,8H),1.76–1.68(m,1H),1.59–1.45(m,8H),1.31–1.22(m,2H)。
实施例52：化合物52的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000406
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物52)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将47B(200mg,0.28mmol)和40A(133mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物52(56mg，收率：18％)。
LCMS m/z＝1082.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.08(s,1H),8.57–8.39(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.76–7.64(m,2H),7.63–7.50(m,3H),7.50–7.40(m,3H),7.40–7.32(m,1H),7.23–7.11(m,1H),6.85(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s, 3H),3.76(s,3H),3.28–3.16(m,4H),3.13–3.03(m,2H),2.95–2.82(m,1H),2.68–2.52(m,4H),2.44–2.29(m,4H),2.29–2.17(m,2H),2.08–1.98(m,1H),1.84(d,6H),1.79–1.68(m,2H),1.63–1.47(m,9H),1.35–1.25(m,3H)。
实施例53：化合物53的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000407
第一步：5-(4-((1'-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物53)
5-(4-((1'-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将8I(180mg,0.249mmol)和40A(98mg,0.249mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(142mg,0.747mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物53的三氟乙酸盐(160mg)，向化合物53的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物53(120mg，收率：45％)。
LCMS m/z＝1079.5[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.52–8.45(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.87(s,1H),7.74–7.66(m,2H),7.61–7.53(m,3H),7.48–7.43(m,2H),7.39–7.36(m,1H),7.35–7.33(m,1H),7.25(dd,1H),7.20–7.14(m,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.77(d,6H),3.48–3.40(m,4H),3.14–3.09(m,2H),2.99–2.91(m,2H),2.63–2.55(m,3H),2.49–2.46(m,3H),2.21–2.13(m,4H),2.03–1.96(m,2H), 1.84(d,6H),1.80–1.72(m,4H),1.66–1.42(m,6H),1.17–1.13(m,2H)。
实施例54：化合物54的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000408
第一步：(2-氨基-5-溴苯基)二甲基氧化膦(54A)
(2-amino-5-bromophenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000409
将4-溴-2-碘苯胺(0.5g，1.68mmol)，二甲基氧化膦(0.13g，1.68mmol)，Xant-Phos(4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽，49mg，0.084mmol)和无水磷酸钾(0.46g，2.18mmol)依次加入到10mL 1,4-二氧六环中，搅拌下加入醋酸钯(19mg，0.084mmol)。氮气置换三次，80℃搅拌5h。冷却至室温，过滤，滤饼用20mL乙酸乙酯洗涤，合并滤液。减压浓缩滤液，残留物加入5mL甲基叔丁基醚打浆，过滤，滤饼干燥得到54A(0.3g，收率：72％)。
LCMS m/z＝248.1[M+H] +。
第二步：(4-氨基-2'-氟-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(54B)
(4-amino-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000410
将54A(0.3g,1.21mmol)和2-氟-苯硼酸(0.34g,2.42mmol)溶于10mL二氧六环和2mL水中，然后向其中加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(44mg，0.06mmol)和碳酸钾(670mg，4.84mmol)，氮气置换三次，100℃反应2h，降温至室温，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得54B(140mg，收率44％)。
LCMS m/z＝264.1[M+H] +。
第三步：(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(54C)
(4-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000411
将54B(0.14g,0.53mmol)，5-溴-2,4,-二氯嘧啶(0.24g,1.06mmol)溶于5mL NMP中，加入DIPEA(82mg,0.64mmol)，120℃搅拌2h，冷却至室温，加入8mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)＝10/1-1/10)，得到54C(0.16g，收率：66％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ11.47(s,1H),8.72-8.66(m,1H),8.36(s,1H),7.75(d,1H),7.52-7.46(m,1H),7.46-7.40(m,1H),7.39-7.33(m,1H),7.28-7.13(m,2H),1.88(d,6H)。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)氨基))嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物54)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000412
将4D(250mg,0.35mmol)和54B(190mg,0.42mmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)和NMP(1mL)混合溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(200mg,1.05mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物54的三氟乙酸盐，向化合物54的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和10mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物54(120mg，收率：30％)。
LCMS m/z＝571.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.13(s,1H),11.05(s,1H),8.47–8.37(m,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),7.98(s,1H),7.82(s,1H),7.71–7.57(m,2H),7.53(s,1H),7.48–7.37(m,2H),7.35–7.02(m,5H),6.80(s,1H),5.06(dd,1H),4.12–3.95(m,2H),3.77(s,3H),3.76(s,3H),3.15–3.04(m,2H),3.03–2.92(m,2H),2.92–2.82(m,1H),2.68–2.51(m,8H),2.46-2.26(m,4H),2.22–2.09(m,3H),2.05–1.94(m,1H),1.91–1.68(m,11H),1.59–1.43(m,2H),1.21–1.08(m,2H)。
实施例55：化合物55的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000413
第一步：(2-氨基-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(55A)
(2-amino-5-cyclopropylphenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000414
将54A(2.3g,9.27mmol)和环丙基硼酸(2.39g,27.81mmol)溶于20mL二氧六环和4mL水中，然后向其中加入三环己基膦(0.52g，1.85mmol)、醋酸钯(0.21g，0.93mmol)和磷酸钾(7.87g，37.08mmol)，氮气置换三次，100℃反应24h，降温至室温，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得55A(1.26g，收率65％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ6.94(d,1H),6.88-6.80(m,1H),6.63-6.57(m,1H),1.82-1.71(m,7H),0.91-0.83(m,2H),0.59-0.51(m,2H)。
第二步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(55B)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-5-cyclopropylphenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000415
将化合物55A(0.26g,1.24mmol)，5-溴-2,4,-二氯嘧啶(0.57g,2.48mmol)溶于5mL NMP中，加入DIPEA(190mg,1.49mmol)，120℃搅拌2h，冷却至室温，加入8mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)＝10/1-0/10)，残留物用乙酸乙酯/石油醚(10mL，V/V＝1/2)混合溶剂打浆，过滤，滤饼减压干燥得到55B(0.28g，收率：56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ11.20(s,1H),8.45-8.39(m,1H),8.30(s,1H),7.24-7.19(m,1H),7.06-7.00(m,1H),1.93–1.79(m,7H),1.05-0.96(m,2H),0.78-0.65(m,2H)。
第三步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物55)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000416
将4D(200mg,0.28mmol)和55B(130mg,0.33mmol)溶于DMF(4mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物55的三氟乙酸盐，向化合物55的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和10mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物55(90mg，收率：29％)。
LCMS m/z＝544.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.84(s,1H),8.19–8.05(m,3H),7.96(s,1H),7.86(s,1H),7.65(d,1H),7.57(s,1H),7.32–7.10(m,3H),6.79(s,1H),6.55–6.34(m,1H),5.06(dd,1H),4.11–3.95(m,2H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.18–3.06(m,2H),3.02–2.81(m,3H),2.70–2.51(m,8H),2.45–2.30(m,4H),2.29–2.09(m,3H),2.05–1.96(m,1H),1.89–1.68(m,12H),1.64–1.50(m,2H),1.21–1.05(m,2H),0.96–0.86(m,2H),0.57–0.43(m,2H)。
实施例56：化合物56的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000417
第一步：5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪 -1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(56A)
Methyl 5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinate
Figure PCTCN2022090243-appb-000418
将4B(0.22g,0.44mmol)，5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(0.08g,0.52mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入碳酸钾(0.15g,1.09mmol)，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入40mL饱和碳酸氢钠水溶液，再加入50ml乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到56A(0.18g，收率：65％)。
LCMS m/z＝633.3[M+H] +。
第二步：5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸(56B)
5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000419
将56A(0.18g,0.28mmol)溶于四氢呋喃(12mL)和水(4mL)的混合溶液中，加入一水氢氧化锂(0.05g，1.19mmol)，室温反应4h，反应结束后反应液中加入稀盐酸(2mol/L)调节pH＝7，减压浓缩得到56B粗品(0.18g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝619.3[M+H] +。
第三步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基))哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-酰胺(56C)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000420
将56B(0.18g)，3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.06g,0.36mmol)溶于DMF(10mL)中，加入DIPEA(0.10g,0.77mmol)和HATU(0.14g,0.37mmol)，室温反应3h，反应结束后，加入40mL饱和碳酸氢钠水溶液，再加入50ml乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-10/1)得到56C(0.15g，两步收率：74％)。
LCMS m/z＝729.4[M+H] +。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-酰胺(56D)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000421
将56C(0.15g,0.21mmol)溶于乙醇(9mL)和水(3mL)，加入铁粉(0.04g,0.72mmol)，再滴加氯化铵(0.04g,0.75mmol)，氮气保护，80℃反应3h，反应液冷却至室温，减压浓缩，然后加入20ml饱和碳酸氢钠水溶液，再用二氯甲烷(20ml)萃取两次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到56D，白色固体(0.12g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝699.4[M+H] +。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物56)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000422
将56D(0.12g)与23D(0.08g,0.18mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(0.09g,0.47mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。将制备所得冻干，将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到化合物56(8mg，收率：3％)。
LCMS m/z＝549.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.39(s,1H),8.31–8.25(m,2H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.87–7.80(m,2H),7.70(dd,1H),7.60–7.51(m,3H),7.49–7.33(m,4H),7.23–7.14(m,1H),6.83(s,1H),4.82–4.65(m,1H),3.93(d,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.10(d,2H),2.86(t,2H),2.80–2.73(m,1H),2.64–2.52(m,6H),2.45–2.32(m,4H),2.23–2.12(m,4H),2.04–1.97(m,1H),1.89–1.75(m,10H),1.60–1.48(m,3H),1.22–1.18(m,3H)。
实施例57：化合物57的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000423
Figure PCTCN2022090243-appb-000424
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3),9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(57A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000425
将化合物9D的盐酸盐(820mg)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(523mg,1.9mmol)溶于DMSO(20mL)中，加入N,N-二异丙基乙基胺(612mg,4.74mmol)，90℃反应6h。冷却至室温，加入60mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)三次。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-15/1)，得到57A(0.39g，收率：33％)。
LCMS m/z＝739.4[M+H] +。
第二步：5-(4-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(57B)
5-(4-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000426
将57A(390mg,0.53mmol)溶于甲醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(390mg，6.98mmol)，氯化铵(390mg，7.29mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤， 滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到57B(270mg，收率：72％)。
LCMS m/z＝709.3[M+H] +。
第三步：5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物57)
5-(4-((9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000427
将57B(134mg,0.19mmol)和23D(90mg,0.21mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到粗品，进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到化合物57，(22mg，收率：10.5％)。
LCMS m/z＝554.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.17–10.96(m,2H),8.47–8.34(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.73–7.62(m,2H),7.60–7.49(m,3H),7.44(t,2H),7.36(t,1H),7.33–7.10(m,3H),6.89(s,1H),5.06(dd,1H),4.12–3.95(m,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.06–2.71(m,7H),2.68–2.52(m,2H),2.44–2.26(m,4H),2.24–2.10(m,2H),2.06–1.92(m,1H),1.90–1.73(m,9H),1.59–1.44(m,8H),1.23–1.09(m,2H)。
实施例58：化合物58的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000428
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物58)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；
将4D(87mg,0.12mmol)和40A(56mg,0.14mmol，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(68mg,0.36mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有固体析出，抽滤收集固体，依次用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)、制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，后向浓缩液中加入20mL二氯甲烷和3mL饱和碳酸氢钠溶液，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(10mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得化合物58(15mg，收率：11.6％)。
LCMS m/z＝540.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.36(s,1H),11.05(s,1H),8.54–8.44(m,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.86(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,1H),7.59(s,1H),7.58–7.51(m,2H),7.45(t,2H),7.40–7.34(m,1H),7.30(s,1H),7.26–7.20(m,1H),7.20–7.12(m,1H),6.84(s,1H),5.06(dd,5.4Hz,1H),4.10–3.98(m,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.11(d,3H),3.03–2.82(m,5H),2.68–2.53(m,6H),2.25–2.08(m,4H),2.07–1.95(m,2H),1.88–1.74(m,10H),1.63–1.45(m,3H),1.21–1.07(m,3H)。
实施例59：化合物59的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000429
5-(4-((9-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物59)
5-(4-((9-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将57B(134mg,0.19mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(81mg,0.21mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(119.8mg,0.63mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到粗品，进一步用制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物59，(25mg，收率：12.4％)。
LCMS m/z＝532.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.20–10.75(m,1H),8.61–8.39(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.76–7.61(m,2H),7.59–7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.32–7.12(m,3H),6.89(s,1H),5.06(dd,1H),4.14–3.93(m,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.05–2.73(m,7H),2.69–2.51(m,2H),2.43–2.22(m,4H),2.22–2.06(m,2H),2.05–1.94(m,1H),1.89–1.72(m,9H),1.65–1.45(m,8H),1.20–1.06(m,2H)。
实施例60：化合物60的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000430
第一步：9-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(60A)
benzyl 9-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000431
将2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(2.60g,9.02mmol)，N-BOC-哌啶酮(2.16g,10.82mmol)，无水硫酸钠(2.56g,18.04mmol)和醋酸(1.08g,18.04mmol)依次加入到二氯甲烷(20ml)中，室温搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.82g,18.04mmol)，加毕，室温搅拌过夜。用1N氢氧化钠水溶液调节pH>8,加入30mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化，得到60A(4.3g，收率：98％)。
LCMS m/z＝472.3[M+1] +。
第二步：9-(哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(60B)
benzyl 9-(piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000432
将60B(4.50g,9.54mmol)溶于DCM(30ml)中，加入三氟乙酸(15.30g,134.23mmol)， 室温搅拌2h，减压浓缩，残留物加入1N NaOH水溶液调节pH＝9-10，有机层减压浓缩后直接用于下一步。
第三步：9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(60C)
benzyl 9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000433
将4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.70g,6.77mmol)，化合物60B(3.27g,8.80mmol)和碳酸钾(3.74g,27.08mmol)加入到DMSO(20ml)中，120℃搅拌6h。冷却至室温，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(50mL×3)。减压浓缩，残留物柱层析纯化得到60C(2.3g，收率：56％)。
LCMS m/z＝603.3[M+1] +。
第四步：9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(60D)
9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane
Figure PCTCN2022090243-appb-000434
将60C(2.20g,3.65mmol)溶于乙酸(6ml)中，室温下加入溴化氢醋酸溶液(10mL，wt％＝33％)，搅拌0.5h。加入30mL MTBE，析出大量固体，过滤，滤饼溶于20mL水中，用20mL乙酸乙酯萃取，有机层弃去，水相加入30mL二氯甲烷，用1N氢氧化钠水溶液调节pH>8.有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到60D，直接用于下一步。
LCMS m/z＝469.3[M+1] +。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-yl)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(60E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000435
将60D(0.4g,0.85mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(0.26g,0.94mmol)溶于DMSO(5ml)中，加入DIPEA(0.22g,1.7mmol)，90℃搅拌5h，冷却至室温，加入10mL水，析出固体，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化得到60E(0.45g，收率：73％)。
第六步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(60F)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000436
将60E(400mg,0.55mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(310mg，5.5mmol)，氯化铵(290mg，5.5mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液加入20mL二氯甲烷和20mL饱和氯化钠水溶液萃取，有机层干燥后减压浓缩，得到60F(380mg)，直接用于下一步。
第七步：5-(9-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物60)
5-(9-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000437
将60F(140mg,0.20mmol)和40A(78mg,0.20mmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)和NMP(1mL)混合溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(110mg,0.60mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物60的三氟乙酸盐，向化合物60的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和10mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物60(60mg，收率：28％)。
LCMS m/z＝525.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.36(s,1H),11.05(s,1H),8.65–8.32(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.67–7.49(m,4H),7.49–7.40(m,2H),7.39–7.29(m,2H),7.28–7.09(m,2H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.52–3.42(m,2H),3.41–3.34(m,2H),3.18–3.03(m,2H),2.98–2.81(m,1H),2.72–2.50(m,9H),2.09–1.97(m,1H),1.93–1.32(m,18H)。
实施例61：化合物61的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000438
第一步：2-苄基9-(叔丁基)2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,9-二羧酸酯(61A)
2-benzyl 9-(tert-butyl)2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2,9-dicarboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000439
将10A(5.00g,19.66mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入三乙胺(4.18g,41.29mmol)，再于冰浴下滴加氯甲酸苄酯(3.42g,20.05mmol)，滴加完毕，室温反应1h。加水淬灭反应，400mL乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝20/1-5/1)得到61A(6.07g，收率：79％)。
LCMS m/z＝333.2[M-55] +。
第二步：2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61B)
benzyl 2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000440
将61A(2.00g,5.15mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，缓慢加入三氟乙酸(10mL)，室温反应1h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入50mL二氯甲烷复溶，1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液，收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到61B(1.35g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝289.2[M+H] +。
第三步：9-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61C)
benzyl 9-((1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000441
将61B(1.35g)，4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g,4.68mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，依次加入醋酸(0.56g,9.36mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.98g,9.36mmol)，室温反应2h，加入1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1除去杂质，二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1收集产物)得到61C(2.07g，收率：91％)。
LCMS m/z＝486.4[M+H] +。
第四步：9-(哌啶-4-基甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61D)
benzyl 9-(piperidin-4-ylmethyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000442
将化合物61C(2.07g,4.26mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，缓慢加入三氟乙酸(10mL)，室温反应1h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入50mL二氯甲烷复溶，1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液，收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到61D(1.64g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝386.3[M+H] +。
第五步：9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(61E)
benzyl 9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000443
将61D(1.64g,4.25mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.07g,4.25mmol)和碳酸钾(2.94g,21.25mmol)混合溶于DMSO(50mL)中，120℃搅拌3h。冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到61E(640mg，收率：24％)。
LCMS m/z＝617.3[M+H] +。
第六步：4-(4-((2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺(61F)
4-(4-((2,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)aniline
Figure PCTCN2022090243-appb-000444
将61E(0.64g,1.04mmol)溶于异丙醇(20mL)以及氨甲醇溶液(5mL)混合溶剂中，加入钯碳(wt％＝10％,0.33g)，1atm氢气置换3次，室温反应1.5h，硅藻土过滤，二氯甲烷/甲醇(V/V＝10/1)洗涤滤饼，滤液减压浓缩得到61F(450mg)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝453.3[M+H] +。
第七步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(61G)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000445
将61F(0.23g,0.50mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(0.15g,0.50mmol)溶于DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.19g,1.50mmol)，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-10/1)得到61G，(167mg，收率：46％)。
LCMS m/z＝727.3[M+H] +。
第八步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物61)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000446
将61G(0.08g,0.11mmol)与(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(0.05g,0.11mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.06g,0.33mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％三氟乙酸))得到产物，经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物61，(15mg，收率：12％)。
LCMS m/z＝563.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),11.08(s,1H),8.43–8.35(m,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.75–7.62(m,2H),7.60–7.51(m,3H),7.50–7.39(m,3H),7.33(t,1H),7.25–7.07(m,1H),6.84(s,1H),5.10(dd,1H),3.78(s,3H),3.75(s,3H),3.24–3.13(m,2H),3.12–2.97(m,4H),2.94–2.80(m,1H),2.69–2.52(m,4H),2.45–2.14(m,6H),2.08–1.95(m,1H),1.83(d,6H),1.76–1.63(m,4H),1.63–1.38(m,7H),1.35–1.24(m,2H)。
实施例62：化合物62的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000447
第一步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物62)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将60F(140mg,0.20mmol)和23D(87mg,0.20mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(110mg,0.60mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物62的三氟乙酸盐，向化合物62的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和10mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得到化合物62(30mg，收率：14％)。
LCMS m/z＝547.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),11.05(s,1H),8.47–8.32(m,1H),8.26(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.86(s,1H),7.69(d,1H),7.63(d,1H),7.60–7.48(m,3H),7.45(t,2H),7.40–7.07(m,4H),6.82(s,1H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.56–3.37(m,4H),3.17–3.04(m,2H),2.95–2.81(m,1H),2.72–2.51(m,9H),2.05–1.95(m,1H),1.92–1.74(m,8H),1.74–1.35(m,10H)。
实施例63：化合物63的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000448
第一步：5-(2-(4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物63)
5-(2-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将7G(0.15g,0.20mmol)与23D(0.10g,0.23mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(0.09g,0.47mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入5mL 水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-12/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。将制备所得冻干，将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物63(30mg，收率：13％)。
LCMS m/z＝575.4[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(d,1H),11.05(s,1H),8.39(s,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.85(s,1H),7.69(dd,1H),7.64(d,1H),7.59–7.52(m,3H),7.45(t,2H),7.39–7.34(m,1H),7.31(d,1H),7.23(dd,1H),7.21–7.13(m,1H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.50–3.44(m,2H),3.41–3.36(m,2H),3.29–3.27(m,1H),3.09(d,2H),2.92–2.84(m,1H),2.72–2.65(m,1H),2.63–2.51(m,6H),2.36–2.16(m,5H),2.04–1.95(m,3H),1.87–1.75(m,8H),1.67–1.47(m,9H)。
实施例64：化合物64的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000449
第一步：1-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪(64A)
1-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000450
将45D(1.4g,2.55mmol)溶解在5mL乙酸中，加入10mL HBr-AcOH，室温搅拌30min。将反应体系倒入40mL水中，析出固体，过滤，滤饼用150ml二氯甲烷溶解，碳酸氢钠水洗涤(100mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得64A(1.0g，收率95.2％)。
LCMS m/z＝415.3[M+1] +。
第二步：5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯(64B)
methyl 5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)picolinate
Figure PCTCN2022090243-appb-000451
将64A(1.0g，2.41mmol)加入30mL二甲基亚砜中，加入5-氟吡啶甲酸甲酯(0.56g，3.61mmol)及三乙胺(1.22g，12.08mmol)，90℃条件下反应3h。冷却至常温，加入100mL水，析出固体，过滤，滤饼用二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩至油状物，用(二氯甲烷/甲醇＝10/1)(V/V)作流动相柱层析，得64B(1.0g，收率：81％)。
LCMS m/z＝550.3[M+1] +。
第三步：5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶甲酸(64C)
5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)picolinic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000452
将64B(1.0g，1.82mmol)加入40mL四氢呋喃和4mL水中，加入氢氧化锂一水合物(153mg，3.64mmol)，常温反应18h。用1N HCl调节体系pH至中性，减压浓缩得64C(1.2g， 粗品)。
LCMS m/z＝536.3[M+1] +。
第四步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺(64D)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000453
将64C(1.2g粗品)加入30mL DMF中，加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.36g，2.20mmol)、DIPEA(1.64g，12.7mmol)和HATU(1.04g，2.74mmol)，常温反应16h。加入120mL纯化水析出固体，抽滤，干燥，残渣用(二氯甲烷/甲醇＝10/1)(V/V)作流动相柱层析，得64D(1.0g，收率：87.5％)
LCMS m/z＝646.2[M+1] +。
第五步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲酰胺(64E)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000454
将64D(1.0g,1.55mmol)溶于THF(10mL)、乙醇(30mL)和水(6mL)的混合液中，加入还原铁粉(875mg,15.63mmol)以及氯化铵(830mg,15.63mmol)，85℃反应2h，反应液冷却至室温，真空浓缩除去溶剂，向残余物中加入50mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到64E(0.7g，收率：73％)
LCMS m/z＝616.3[M+H] +。
第六步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(2,6-二氧代哌 啶-3-基)吡啶甲酰胺(化合物64)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000455
将64E(350mg,0.57mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(373mg,0.85mmol)，溶于DMF(20mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(325mg,1.71mmol)，100℃搅拌8h。冷却至室温，加入200mL饱和碳酸氢钠水溶液有白色固体析出，抽滤收集固体，滤饼用水冲洗(100ml×3)，二氯甲烷复溶，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)＝15:1)纯化得化合物64(200mg，收率：35％)。
LCMS m/z＝1015.3[M+1] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),10.84(s,1H),8.72(d,1H),8.46–8.24(m,3H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.88(t,2H),7.70(dd,1H),7.63–7.50(m,3H),7.49–7.40(m,3H),7.39–7.31(m,1H),7.25–7.12(m,1H),6.85(s,1H),4.81–4.70(m,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.44–3.33(m,4H),3.14–3.02(m,2H),2.86–2.73(m,1H),2.71–2.51(m,7H),2.29(d,2H),2.25–2.13(m,1H),2.07–2.00(m,1H),1.83(d,6H),1.79-1.70(m,2H),1.69–1.54(m,1H),1.39–1.24(m,2H)。
实施例65：化合物65的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000456
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基) 氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物65)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将45F(250mg,0.39mmol)和40A(153mg,0.39mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(223mg,1.17mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物65的三氟乙酸盐(63mg，黄色固体)。向化合物65的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物65，黄色固体，(45mg，收率：12％)。
LCMS m/z＝996.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.27–8.14(m,2H),8.10(s,1H),7.88–7.69(m,4H),7.65–7.55(m,4H),7.55–7.42(m,2H),7.38–7.22(m,3H),5.12(dd,1H),4.22–4.08(m,2H),4.05(s,3H),3.89–3.69(m,6H),3.61–3.47(m,5H),3.37–3.13(m,4H),2.95–2.85(m,2H),2.82–2.65(m,1H),2.56–2.39(m,1H),2.30–2.13(m,3H),2.08–1.86(m,8H)。
实施例66：化合物66的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000457
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲酰胺(化合物66)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
将64E(350mg,0.57mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(336mg,0.85mmol)，溶于DMF(20mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(325mg,1.71mmol)，100℃搅拌8h。冷却至室温，加入200mL饱和碳酸氢钠水溶液有白色固体析出，抽滤收集固体，滤饼用水冲洗(100ml×3)，二氯甲烷复溶，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)＝15:1)纯化得化合物66(230mg，收率：41％)。
LCMS m/z＝971.3[M+1] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.38(s,1H),10.84(s,1H),8.72(d,1H),8.58–8.42(m,1H),8.33(d,1H),8.29(s,1H),8.12(s,1H),8.03(s,1H),7.88(d,2H),7.71(dd,1H),7.64–7.50(m,3H),7.49–7.39(m,3H),7.39–7.29(m,1H),7.27–7.05(m,1H),6.86(s,1H),4.82–4.67(m,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.46–3.33(m,4H),3.15–3.01(m,2H),2.86–2.72(m,1H),2.70–2.51(m,7H),2.29(d,2H),2.25–2.10(m,1H),2.10–1.97(m,1H),1.84(d,6H),1.80–1.69(m,2H),1.69–1.54(m,1H),1.40–1.25(m,2H)。
实施例67：化合物67的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000458
第一步：3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷 -1-羧酸叔丁酯(67A)
tert-butyl 3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000459
将1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(化合物80B)的盐酸盐(1.0g)和3-甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.8g,4.02mmol)溶于DMAc(50mL)中，加入醋酸(1.0g,16.65mmol)，室温搅拌2h。然后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.0g,4.72mmol)，室温反应过夜。反应结束后，加入100mL乙酸乙酯和200mL饱和碳酸氢钠水溶液洗涤并分液，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到67A，黄色固体(1.1g，收率：70％)。
LCMS m/z＝501.2[M+H] +。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(67B)的盐酸盐
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000460
将化合物67A(1.1g,2.20mmol)溶于甲醇(14mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(30mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(67C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000461
将上一步的67B的盐酸盐粗品溶于DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3- 基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(683mg,2.47mmol)和碳酸氢钠(692mg,8.24mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入30mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到67C(0.95g，两步收率：66％)。
LCMS m/z＝657.3[M+H] +。
第四步：5-(3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(67D)
5-(3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000462
将67C(0.95g,1.45mmol)溶于乙醇/水(20mL，3:1)中，依次加入铁粉(375mg，6.71mmol)，氯化铵(361mg，6.75mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到67D(700mg，收率：77％)。
LCMS m/z＝627.3[M+H] +。
第五步：5-(3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物67)
5-(3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000463
将67D(200mg,0.32mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(148mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters  2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物67(40mg，收率：12％)。
LCMS m/z＝513.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),11.04(s,1H),8.45–8.34(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.70(dd,1H),7.65(d,1H),7.60(s,1H),7.55(d,2H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.23–7.11(m,1H),6.91(d,1H),6.87(s,1H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.78(d,6H),3.64–3.48(m,2H),3.48–3.37(m,1H),3.18(dd,1H),3.00–2.77(m,5H),2.71–2.52(m,7H),2.47–2.40(m,2H),2.21–2.09(m,1H),2.07–1.95(m,1H),1.90–1.73(m,7H)。
实施例68：化合物68的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000464
第一步：5-(3-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物68)
5-(3-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将67D(200mg,0.32mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(180mg,0.46mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入 饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物68(30mg，收率：10％)。
LCMS m/z＝491.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.05(s,1H),8.54–8.45(m,1H),8.27(s,1H),8.12(s,1H),8.05(s,1H),7.89(s,1H),7.71(dd,1H),7.65(d,1H),7.62(s,1H),7.55(d,2H),7.45(t,2H),7.34(t,1H),7.21–7.10(m,1H),6.90(d,1H),6.88(s,1H),6.81(dd,1H),5.05(dd,1H),3.78(d,6H),3.61–3.48(m,2H),3.48–3.37(m,1H),3.18(dd,1H),2.97–2.82(m,5H),2.69–2.52(m,7H),2.47–2.40(m,2H),2.21–2.10(m,1H),2.05–1.96(m,1H),1.90–1.73(m,7H)。
实施例69：化合物69的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000465
第一步：5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)吡啶-2-甲酸甲酯(69A)
methyl 5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)picolinate
Figure PCTCN2022090243-appb-000466
将37D(1.00g,2.07mmol)溶于DMSO(20mL)中，依次加入5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(388mg,2.50mmol)和碳酸钠(530mg,5.00mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入30mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到69A(0.95g，收率：74％)。
LCMS m/z＝618.3[M+H] +。
第二步：5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)吡啶甲酸(69B)
5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)picolinic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000467
将69A(0.95g,1.54mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入水(2mL)，再加入一水氢氧化锂(126mg,3.00mmol)，加热到50℃反应4h。反应结束后，滴加稀盐酸(2mol/L)调节pH＝7，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
LCMS m/z＝604.3[M+H] +。
第三步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)吡啶甲酰胺(69C)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000468
将上一步所得69B粗品与3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.30g,1.82mmol)溶于DMF(10mL)中，加入DIPEA(0.50g,3.87mmol)和HATU(0.70g,1.84mmol)，室温反应3h后，加入40mL饱和碳酸氢钠水溶液，再加入50ml乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-10/1)得到(69C)(0.73g，两步收率：66％)。
LCMS m/z＝714.3[M+H]。
第四步：5-(9-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲酰胺(69D)
5-(9-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000469
将69C(0.73g,1.02mmol)溶于乙醇/水(20mL，3:1)中，依次加入铁粉(375mg，6.71mmol)，氯化铵(361mg，6.75mmol)，氮气保护80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到69D(600mg，收率：86％)。
LCMS m/z＝342.8[(M+2H)/2] +。
第五步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲酰胺(化合物69)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000470
将69D(200mg,0.29mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(148mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物69(45mg，收率：14％)。
LCMS m/z＝542.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.42–8.35(m,1H),8.30(d,2H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.87–7.82(m,2H),7.69(dd,1H),7.58–7.52(m,3H),7.47–7.33(m,4H),7.23–7.15(m,1H),6.85(s,1H),4.78–4.68(m,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.42–3.32(m,4H),3.06(d,2H),2.84–2.73(m,1H),2.64–2.52(m,3H),2.36(s,4H),2.24–2.13(m,3H),2.05–1.98(m,1H),1.83(s,3H),1.81(s,3H),1.71(d2H),1.59–1.49(m,8H),1.32–1.22(m,3H)。
实施例70：化合物70的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000471
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶甲酰胺(化合物70)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-3,9-diazas piro[5.5]undecan-3-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
将69D(200mg,0.29mmol)和(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)二甲基氧化膦(40A)(180mg,0.46mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物70(40mg，收率：13％)。
LCMS m/z＝520.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.51–8.45 (m,1H),8.32–8.27(m,2H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88–7.82(m,2H),7.71(dd,1H),7.60–7.53(m,3H),7.47–7.32(m,4H),7.21–7.10(m,1H),6.85(s,1H),4.78–4.68(m,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.38–3.33(m,4H),3.07(d,2H),2.83–2.75(m,1H),2.66–2.53(m,3H),2.42–2.30(m,4H),2.27–2.14(m,3H),2.05–1.99(m,1H),1.85(s,3H),1.82(s,3H),1.72(d,2H),1.59–1.48(m,8H),1.32–1.18(m,3H)。
实施例71：化合物71的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000472
第一步：1-碘萘-2-胺(71B)
1-iodonaphthalen-2-amine
Figure PCTCN2022090243-appb-000473
将71A(2.00g,13.97mmol)溶于DMSO(30mL)中，室温下加入NIS(3.14g,13.97mmol)，加毕于20℃反应2h，加入50mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，收集有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝7/1)得到71B，(2.69g，收率：72％)。
LCMS m/z＝270.0[M+H] +。
第二步：(2-氨基萘-1-基)二甲基氧化膦(71C)
(2-aminonaphthalen-1-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000474
将71B(2.68g,9.96mmol)，二甲基氧化膦(0.78g,9.96mmol)溶于1,4-二氧六环(80mL)中，加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.15g,1.99mmol)，醋酸钯(0.22g,1.00mmol)以及磷酸钾(4.23g,19.92mmol)，氮气置换3次，100℃反应5h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到71C，(1.68g，收率：77％)。
LCMS m/z＝220.1[M+H] +。
第三步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)萘-1-基)二甲基氧化膦(71D)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)naphthalen-1-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000475
将71C(0.87g,3.97mmol)，5-溴-2,4-二氯嘧啶(1.81g,7.94mmol)溶于NMP(25mL)中，滴加DIPEA(1.03g,7.94mmol)，130℃反应3h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到71D(580mg，收率：36％)。
LCMS m/z＝410.0[M+H] +。
第四步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((1-(二甲基磷酰基)萘-2-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物71)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((1-(dimethylphosphoryl)naphthalen-2-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000476
将71D(0.17g,0.41mmol)与4D(0.30g,0.41mmol)溶于DMF(15mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.23g,1.23mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％三氟乙酸))得到产物，经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物71(30mg，收率：7％)。
LCMS m/z＝549.4[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),11.05(s,1H),8.33–8.24(m,1H),8.20(s,1H),8.10(s,1H),7.93(d,1H),7.89–7.77(m,2H),7.72–7.49(m,4H),7.49–7.33(m,2H),7.34–7.17(m,2H),6.78(s,1H),5.06(dd,1H),4.15–3.99(m,2H),3.79(s,3H),3.72(s,3H),3.16–3.02(m,2H),3.03–2.81(m,3H),2.69–2.51(m,8H),2.45–2.18(m,5H),2.14(d,2H),2.09–1.92(m,7H),1.92–1.73(m,5H),1.63–1.43(m,2H),1.22–1.06(m,2H)。
实施例72：化合物72的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000477
第一步：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)萘-1-基)二甲基氧化膦(72A)
(2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)naphthalen-1-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000478
将71C(0.87g,3.97mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(1.46g,7.94mmol)溶于NMP(25mL)中，滴加DIPEA(1.03g,7.94mmol)，130℃反应3h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到72A，(720mg，收率：50％)。
LCMS m/z＝366.0[M+H] +。
第二步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((1-(二甲基磷酰基)萘-2-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物72)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((1-(dimethylphosphoryl)naphthalen-2-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000479
将72A(0.15g,0.41mmol)与4D(0.30g,0.41mmol)溶于DMF(15mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.23g,1.23mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％三氟乙酸))得到产物，经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物72(40mg，收率：9％)。
LCMS m/z＝527.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.69(s,1H),11.06(s,1H),8.49–8.40(m,1H),8.19–8.03(m,2H),7.97–7.79(m,3H),7.76–7.50(m,4H),7.49–7.32(m,2H),7.30(d,1H),7.27–7.18(m,1H),6.79(s,1H),5.06(dd,1H),4.11–3.97(m,2H),3.80(s,3H),3.72(s,3H),3.14–2.81(m,5H),2.70–2.51(m,8H),2.48–2.18(m,5H),2.14(d,2H),2.10–1.93(m, 7H),1.90–1.69(m,5H),1.66–1.45(m,2H),1.21–1.08(m,2H)。
实施例73：化合物73的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000480
第一步：2-碘-3,4-二甲基-1-硝基苯(73A)
2-iodo-3,4-dimethyl-1-nitrobenzene
Figure PCTCN2022090243-appb-000481
向反应瓶中加入2,3-二甲基-6-硝基苯胺(2,3-dimethyl-6-nitroaniline)(6.0g,36.14mmol)和盐酸(30mL,360.14mmol)，0℃下缓慢滴加硝酸钾(2.99g,43.33mmol)的水(15mL)溶液，在此温度下搅拌1h后，向其中加入碘化钾(9.0g,54.22mmol)的水(30mL)溶液，加毕，自然回温继续搅拌1h。反应结束后，向其中加入60mL水，乙酸乙酯(60mL x 3)萃取，有机层依次用饱和硫代硫酸钠溶液(40mL x 2)和饱和食盐水(40mL x 2)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯(V/V)＝10/1)，得到73A(5.3g，收率：53％)。
第二步：(2,3-二甲基-6-硝基苯基)二甲基氧化膦(73B)
(2,3-dimethyl-6-nitrophenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000482
氮气保护下将73A(5.29g,19.09mmol)、二甲基氧化膦(1.94g,24.82mmol)、磷酸钾(8.1g,38mmol)，醋酸钯(429mg,1.91mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(2.21g,3.82mmol)加入到1,4-二氧六环(150mL)中，100℃反应16h，反应结束后冷却至室温， 加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，水(50mL×2)和饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱色谱纯化(甲醇/二氯甲烷(V/V)＝1/50-1/20)得73B(2.7g，收率：62.3％)。
LCMS m/z＝228.1[M+H] +。
第三步：(6-氨基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(73C)
(6-amino-2,3-dimethylphenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000483
将73B(2.7g,11.88mmol)溶于乙醇/水(30mL/10mL)中，依次加入铁粉(5.31g，95mmol)，氯化铵(5.08mg，95mmol)，氮气保护，80℃搅拌3h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到73C(1.3g，收率：98.2％)。
LCMS m/z＝198.1[M+H] +。
第四步：(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(73D)
(6-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-2,3-dimethylphenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000484
将(6-氨基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(73C)(2.5g,12.7mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(4.3g,19.0mmol)溶于DMF(20mL)中，加入碳酸钾(3.5g,25.4mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入80mL乙酸乙酯和80mL水萃取，有机层用饱和食盐水(30mL×3)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷(V/V)＝1/50-1/20)，得到73D(3.5g，收率：71.2％)。
LCMS m/z＝388.0[M+H] +。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(化合物73)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)-3,4-dimethylphenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl) methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000485
将4D(250mg,0.35mmol)和73D(160mg,0.42mmol)，溶于1,4-二氧六环和NMP(4mL/1mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(200mg,1.05mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和30mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物73(70mg，收率：18.6％)。
LCMS m/z＝1075.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.91(s,1H),11.05(s,1H),8.11(s,1H),8.03–7.84(m,3H),7.75(s,1H),7.70–7.53(m,2H),7.30(s,1H),7.22(dd,1H),6.85–6.56(m,2H),5.06(dd,1H),4.13–3.94(m,2H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.15–3.03(m,2H),2.96(t,2H),2.91–2.80(m,1H),2.72–2.51(m,8H),2.46–2.31(m,4H),2.28–2.19(m,4H),2.18–2.10(m,2H),2.07(s,3H),2.04–1.95(m,1H),1.93–1.71(m,11H),1.65–1.42(m,2H),1.21–1.03(m,2H)。
实施例74：化合物74的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000486
Figure PCTCN2022090243-appb-000487
第一步：4-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(74B)
tert-butyl 4-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)amino)benzyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000488
将74A(参照专利WO2017018803合成所得，3g,10.30mmol)和3-溴代哌啶-2,6-二酮(3.96g,20.6mmol)溶于DMSO(30mL)中，加入碳酸氢钠(4.33g,51.5mmol)，100℃反应6h。冷却至室温，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(30mL x 3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)＝10/1-2/1)，得到74B(2.57g，收率：62％)。
LCMS m/z＝403.1[M+H] +。
第二步：3-((3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74C)的盐酸盐
3-((3-(piperazin-1-ylmethyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000489
50mL圆底烧瓶中依次加入74B(1.06g，2.63mmol)，氯化氢的1,4-二氧六环溶液(30 mL,4mol/L)，室温反应2h，减压浓缩干得74C的盐酸盐，直接用于下一步反应。
第三步：3-((3-((4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74D)
3-((3-((4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000490
将1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(0.6g,2.40mmol)，上一步得到的74C的盐酸盐和碳酸氢钠(1.01g,12mmol)，溶于20mL DMSO中，100℃反应3h，反应结束后冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯，萃取，水层用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，并依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到74D(1.0g，收率：71％)。
第四步：3-((3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74E)
3-((3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000491
氮气保护，50mL单口瓶瓶中加入74D(202mg，0.38mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(95.7mg，0.76mmol),溶于20mL二氧六环和4mL水中，加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(31mg，0.04mmol)和碳酸氢钠(96mg，1.14mmol)，氮气置换三次，100℃反应3h，降温至室温，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得74E(190mg，收率94％)。
LCMS m/z＝534.2[M+H] +。
第五步：3-((3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(74F)
3-((3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methy l)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000492
将74E(190mg，0.36mmol)溶于甲醇(10mL)中，室温下加入钯碳10％(190mg)，氢气下反应2h，反应结束后硅藻土抽滤，滤液浓缩得74F直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝504.3[M+H] +。
第六步：3-((3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物74)
3-((3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000493
将上一步得到的74F(101mg,0.2mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(105mg,0.24mmol，溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入50mL DCM后加入饱和碳酸氢钠溶液调节溶液至碱性，分离二氯甲烷层，水层用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物74(15mg，收率8.3％)。
LCMS m/z＝452.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),10.76(s,1H),8.46–8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.76–7.64(m,1H),7.58(s,1H),7.56–7.46(m,2H),7.44–7.25(m,3H),7.15(s,1H),7.06(t,1H),6.86(s,1H),6.68(s,1H),6.64-6.53(m,2H),5.80(d,1H),4.38-4.28(m,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.43(s,2H),2.97–2.82(m, 4H),2.81-2.69(m,1H),2.67–2.52(m,5H),2.18–2.07(m,1H),1.94–1.75(m,7H)。
实施例75：化合物75的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000494
第一步：8-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-1,4-二氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸烷(75A)
8-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-1,4-dioxa-8-azaspiro[4.5]decane
Figure PCTCN2022090243-appb-000495
将1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(1.37g,9.56mmol)，1D(1.2g,4.78mmol)和碳酸钾(3.30g,23.90mmol)混合溶于DMSO(30mL)中，120℃搅拌5h。冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/ 石油醚(V/V)＝1/1)得到75A(1g，收率：56％)。
LCMS m/z＝375.1[M+H] +。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-酮(75B)
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-one
Figure PCTCN2022090243-appb-000496
50mL圆底烧瓶中依次加入75A(1g，2.67mmol)，丙酮(30mL)盐酸水溶液(3mL,4mol/L)，室温反应过夜，加入50mL DCM，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH为碱性，分离有机层，DCM萃取水层(2×30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得75B，直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.92(s,1H),7.90(s,1H),7.27(s,1H),6.65(s,1H),3.98(s,3H),3.97(s,3H),3.31(t,4H),2.53(t,4H)。
第三步：(1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲醇(75C)
(1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methanol
Figure PCTCN2022090243-appb-000497
将75B(787mg,2.38mmol)，哌啶-4-基甲醇(329mg,2.86mmol)混合于二氯乙烷(50mL)中，加入醋酸(143mg,2.38mmol)，50℃反应2h冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1g,4.72mmol)，室温下搅拌过夜。加入50mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到75C(430mg，收率：42％)。
LCMS m/z＝430.2[M+H] +。
第四步：1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联吡啶]-4-醛(75D)
1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidine]-4-carbaldehyde
Figure PCTCN2022090243-appb-000498
将75C(430mg，1.00mmol)和戴斯-马丁氧化剂(1.27g，3mmol)溶于20mL二氯甲烷中，室温反应2h，浓缩，硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得75D(150mg，收率35％)。
LCMS m/z＝428.3[M+H] +。
第五步：3-(4-(1-((1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(75F)
3-(4-(1-((1'-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000499
将75E(参照专利WO2021127283合成所得，156mg,0.46mmol)和75D(150mg,0.35mmol)溶于DMAC(10mL)中，依次加入
Figure PCTCN2022090243-appb-000500
分子筛(200mg)和醋酸(21mg,0.35mmol)，50℃反应2h后冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(148mg,0.70mmol)，室温下搅拌过夜。反应结束后，加入50ml水淬灭反应，加入饱和碳酸氢钠溶液调节到碱性，用乙酸乙酯萃取(3×50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩、硅胶柱色谱纯化(DCM：MeOH：Et 3N＝10:1:0.01)得到75F(100mg，收率：38％)。
第六步：3-(4-(1-((1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(75G)
3-(4-(1-((1'-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000501
将75F(100mg，0.13mmol)溶于甲醇(10mL)中，室温下加入钯碳10％(100mg)，氢气下反应2h，反应结束后硅藻土抽滤，滤液浓缩得75G直接用于下一步反应。
第七步：3-(4-(1-((1'-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(化合物75)
3-(4-(1-((1'-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000502
将75G(85mg,0.12mmol)和23D(63mg,0.14mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(68mg,0.36mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入30mL DCM后加入饱和碳酸氢钠溶液调节溶液至碱性，分离二氯甲烷层，水层用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物75(5mg，收率3.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),8.45–8.33(s,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.70(d,1H),7.62–7.50(m,3H),7.50–7.41(m,3H),7.40–7.33(m,1H),7.20(s,1H),7.08(s,1H),6.95–6.87(m,2H),6.83(s,1H)。δ4.85(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.46(s,3H),3.10(d,2H),2.99–2.86(m,4H),2.68–2.34(m,5H),2.30–2.05(m,6H),2.05–1.91(m,2H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.79–1.65(m,8H),1.65–1.42(m,4H),1.18–1.03(m,2H)。
实施例76：化合物76的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000503
第一步：5-(3-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物76)
5-(3-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将6F(200mg,0.28mmol)和23D(150mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物76(40mg，收率：13％)。
LCMS m/z＝555.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.04(s,1H),8.43–8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.70(dd,1H),7.64(d,1H),7.59–7.51(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.23–7.14(m,1H),6.90(d,1H),6.82(dd,2H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.59–3.37(m,4H),3.19–3.03(m,3H),2.94–2.83(m,1H),2.65–2.51(m,10H),2.47–2.32(m,5H),2.25–2.09(m,2H),2.05–1.99(m,1H),1.85–1.73(m,8H),1.60–1.49(m,2H)。
实施例77：化合物77的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000504
第一步：4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(77A)
tert-butyl 4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000505
将1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(80B)的盐酸盐(1.0g)和1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(0.8g,3.75mmol)溶于DMAc(50mL)中，加入醋酸(1.0g,16.65mmol)，室温搅拌2h。然后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.0g,4.72mmol)，室温反应过夜。反应结束后，加入100mL乙酸乙酯和200mL饱和碳酸氢钠水溶液，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到化合物(77A)，黄色固体(1.2g，收率：74％)。
LCMS m/z＝515.3[M+H] +。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪(77B)的盐酸盐
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000506
将77A(1.2g,2.33mmol)溶于甲醇(14mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(30mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(77C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000507
将上一步的77B的盐酸盐粗品溶于DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(683mg,2.47mmol)和碳酸氢钠(692mg,8.24mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入30mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到77C(0.90g，两步收率：58％)。
LCMS m/z＝671.3[M+H] +。
第四步：5-(4-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(77D)
5-(4-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000508
将77C(0.90g,1.34mmol)溶于乙醇/水(20mL，3:1)中，依次加入铁粉(375mg，6.71mmol)，氯化铵(361mg，6.75mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到77D(650mg，收率：76％)。
LCMS m/z＝641.3[M+H] +。
第五步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物77)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000509
将77D(200mg,0.31mmol)和23D(150mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物77(50mg，收率：15％)。
LCMS m/z＝520.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.28(s,1H),8.25–8.03(m,6H),7.83(s,1H),7.75(d,1H),7.63–7.45(m,5H),7.43–7.27(m,1H),6.98(s,1H),5.23(dd,1H),4.00–3.90(m,5H),3.90–3.71(m,5H),3.71–3.59(m,2H),3.44–3.07(m,8H),2.97–2.89(m,2H),2.87–2.71(m,1H),2.66–2.48(m,1H),2.48–2.32(m,2H),2.32–2.21(m,1H),2.21–2.07(m,2H),2.02(d,6H)。
实施例78：化合物78的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000510
Figure PCTCN2022090243-appb-000511
第一步：5-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(78A)
tert-butyl 5-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000512
将4-甲酰基哌啶-1-羧酸苄酯(2.5g,10.11mmol)，六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(3.58g,16.88mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，加入醋酸(610mg，10.11mmol)，室温搅拌1h，继续加入三乙酰氧基硼氢化钠(4.29g,20.22mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用水(100mL×2)洗涤后经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到78A(3.7g，收率：82.5％)。
LCMS m/z＝444.3[M+H] +。
第二步：5-(哌啶-4-基甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(78B)
tert-butyl 5-(piperidin-4-ylmethyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000513
依次加入78A(3.7g,8.34mmol)、钯碳(1.5g，10wt％)溶于60mL甲醇中，然后氢气置换三次后在室温反应3h，硅藻土抽滤，滤液减压浓缩，得到78B(2.5g，收率：96.8％)。
第三步：5-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(78C)
tert-butyl 5-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl) methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000514
将78B(2.46g,7.96mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(2.0g,7.96mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入无水碳酸钾(3.3g,23.88mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)三次。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到78C(0.8g，收率：18％)。
LCMS m/z＝541.3[M+H] +。
第四步：2-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯(78D)的盐酸盐
2-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000515
将78C(800mg,1.48mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(4mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
LCMS m/z＝441.3[M+H] +。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(5-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)异吲哚-1,3-二酮(78E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(5-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000516
将上一步的78D的盐酸盐的粗品溶于DMSO(6mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(410mg,1.48mmol)和DIPEA(1.15g,8.88mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动 相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到78E(318mg，收率：30.8％)。
LCMS m/z＝697.3[M+H] +。
第六步：5-(5-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(78F)
5-(5-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000517
将化合物78E(318mg,0.46mmol)溶于乙醇/水(9mL/3mL)中，依次加入铁粉(210mg，3.68mmol)，氯化铵(200mg，3.68mmol)，氮气保护，80℃搅拌3h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-20/1)得到78F(240mg，收率：78％)。
第七步：5-(5-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(化合物78)
5-(5-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000518
将化合物78F(120mg,0.18mmol)和23D(86mg,0.20mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)和NMP(0.5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(93mg,0.54mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物78(20mg，收率：10.4％)。
LCMS m/z＝533.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.24–10.92(m,2H),8.50–8.32(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),7.98(s,1H),7.83(s,1H),7.77–7.60(m,2H),7.59–7.45(m,3H),7.39(t,2H),7.25(t,1H),7.22–7.06(m,1H),6.97(d,1H),6.88(dd,1H),6.83(s,1H),5.05(dd,1H),3.86–3.65(m,8H),3.30–3.19(m,2H),3.12–2.93(m,4H),2.93–2.82(m,1H),2.71–2.51(m,8H),2.34(d,2H),2.05–1.96(m,1H),1.82(d,6H),1.76–1.63(m,2H),1.60–1.44(m,1H),1.36–1.24(m,2H)。
实施例79：化合物79的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000519
第一步：9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(79A)
tert-butyl 9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000520
将3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(1.27g,4.98mmol)，4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.5g,5.98mmol)和碳酸钾(2.75g,19.92mmol)混合溶于DMSO(10mL)中，120℃搅拌16h。冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(79A)(2.0g，收率：83％)。
LCMS m/z＝486.3[M+H] +。
第二步：3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(79B)
3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane
Figure PCTCN2022090243-appb-000521
将化合物79A(2.0g,4.12mmol)溶于DCM(20mL)，室温下加入三氟乙酸(6mL)，搅拌3h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝9-10,分液，有机层减压浓缩后得到化合物3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(79B)(1.5g)，直接用于下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异吲哚-1,3-二酮(79C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000522
将化合物79B(1.5g,3.89mmol)溶于DMSO(5mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(1.29g,4.67mmol)和DIPEA(1.01g,7.78mmol)，90℃搅拌3h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异吲哚-1,3-二酮(79C)(1.4g，收率：56.1％)。
LCMS m/z＝642.3[M+H] +。
第四步：5-(9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(79D)
5-(9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000523
将化合物79C(1.4g,2.18mmol)、铁粉(0.97mg,17.44mmol)、氯化铵(0.93mg,17.44mmol)溶于乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃搅拌2h，之后冷却至室温，抽滤，滤液浓缩后得到标题化合物5-(9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(79D)(1.0g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝612.3[M+H] +。
第五步：5-(9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物79)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000524
将79D(180mg,0.29mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(150mg,0.35mmol)溶于1,4-二氧六环(3mL)和NMP(1mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(165mg,0.87mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物79(22mg，收率：7.5％)。
LCMS m/z＝506.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.13(s,1H),11.06(s,1H),8.45–8.36(m,1H),8.32(s,1H),8.18(s,1H),8.04(s,1H),7.88(s,1H),7.75–7.64(m,2H),7.59–7.50(m,3H),7.50–7.41(m,2H),7.41–7.29(m,2H),7.30–7.16(m,2H),6.92(s,1H),5.07(dd,1H),3.81(s, 3H),3.77(s,3H),3.54–3.39(m,4H),2.96–2.78(m,5H),2.69–2.52(m,2H),2.06–1.96(m,1H),1.83(d,6H),1.71–1.51(m,8H)。
实施例80：化合物80的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000525
第一步：4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80A)
tert-butyl 4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000526
将1D(0.8g,3.18mmol)溶于DMSO(20mL)中，依次加入碳酸钾(1.3g,9.41mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(712mg,3.82mmol)，100℃反应6h。反应完后，用50mL乙酸乙酯和200mL水萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到80A(650mg，收率：49％)。
LCMS m/z＝418.2[M+H] +。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(80B)的盐酸盐
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazine；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000527
将80A(400mg,0.96mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(6mL)， 室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000528
将上一步的80B的盐酸盐粗品溶于DMSO(8mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(318mg,1.15mmol)和碳酸氢钠(323mg,3.84mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到80C(284mg，两步收率：52％)。
LCMS m/z＝574.2[M+H] +。
第四步：5-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80D)
5-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000529
将80C(284mg,0.50mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(140mg，2.5mmol)，氯化铵(134mg，2.5mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到80D(260mg，收率：96％)。
LCMS m/z＝544.2[M+H] +。
第五步：5-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物80)
5-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl )amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000530
将80D(130mg,0.24mmol)和(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(23D)(135mg,0.31mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(137mg,0.72mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物80(77mg，收率：34％)。
LCMS m/z＝943.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),11.07(s,1H),8.38(s,1H),8.29(s,1H),8.20(s,1H),8.15(s,1H),7.88(s,1H),7.77–7.63(m,3H),7.55(d,2H),7.48–7.40(m,2H),7.41–7.25(m,3H),7.18(s,1H),6.87(s,1H),5.09(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.67–3.54(m,4H),3.05–2.92(m,4H),2.92–2.83(m,1H),2.68–2.54(m,2H),2.06–1.94(m,1H),1.83(d,6H)。
实施例81：化合物81的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000531
Figure PCTCN2022090243-appb-000532
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(81A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000533
将7E(1.0g,2.50mmol)溶于DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(828mg,3.00mmol)和碳酸氢钠(692mg,8.24mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入30mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到81A(0.90g，收率：55％)。
LCMS m/z＝657.3[M+H] +。
第二步：5-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(81B)
5-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000534
将81A(0.90g,1.37mmol)溶于乙醇/水(20mL，3:1)中，依次加入铁粉(375mg，6.71mmol)，氯化铵(361mg，6.75mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤， 滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到81B(700mg，收率：82％)。
LCMS m/z＝627.3[M+H] +。
第三步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物81)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000535
将81B(200mg,0.32mmol)和23D(150mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物81(55mg，收率：17％)。
LCMS m/z＝513.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.06(s,1H),8.44–8.33(m,1H),8.29(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.87(s,1H),7.75–7.65(m,2H),7.61–7.52(m,3H),7.46(t,2H),7.40–7.33(m,2H),7.32–7.24(m,1H),7.23–7.12(m,1H),6.84(s,1H),5.08(dd,1H),3.79(s,3H),3.77(s,3H),3.52–3.39(m,4H),3.18–3.05(m,2H),2.95–2.80(m,1H),2.75–2.52(m,8H),2.36–2.23(m,1H),2.08–1.99(m,1H),1.88–1.75(m,8H),1.65–1.51(m,2H)。
实施例82：化合物82的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000536
第一步：9-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(82B)
tert-butyl 9-(4-((benzyloxy)carbonyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000537
将9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(82A)(1.50g,5.61mmol)和哌嗪-1-羧酸苄酯(1.23g,5.58mmol)溶于DMAc(50mL)中，加入醋酸(1.0g,16.65mmol)，室温搅拌2h。然后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.0g,9.44mmol)，室温反应过夜。反应结束后，加入100mL乙酸乙酯和200mL饱和碳酸氢钠水溶液，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝100/1-3/1)得到82B，白色固体(1.6g，收率：61％)。
LCMS m/z＝472.3[M+H] +。
第二步：4-(3-氮杂螺环[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(82C)的盐酸盐
benzyl 4-(3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazine-1-carboxylate；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000538
将82B(1.6g,3.39mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(40mL)， 室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：4-(3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(82D)
benzyl 4-(3-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000539
将上一步的82C的盐酸盐粗品溶于DMSO(20mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(851mg,3.39mmol)和碳酸钾(690mg,5.00mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入30mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到82D(1.0g两步收率：49％)。
LCMS m/z＝603.3[M+H] +。
第四步：2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(9-(哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)苯胺(82E)
2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-(9-(piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)aniline
Figure PCTCN2022090243-appb-000540
将82D(1.0g,1.66mmol)溶于甲醇(40mL)中，氮气保护，加入钯碳(wt％＝10％,500mg)，1atm氢气置换3次，室温反应1.5h。反应结束后，硅藻土过滤，二氯甲烷/甲醇(V/V＝10/1)洗涤滤饼，滤液减压浓缩得到82E(650mg，收率：89％)。
LCMS m/z＝439.3[M+H] +。
第五步：5-(4-(3-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(82F)
5-(4-(3-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000541
将82E(650mg,1.48mmol)溶于DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(552mg,2.00mmol)和碳酸氢钠(692mg,8.24mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入30mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到82F(400mg，收率：39％)。
LCMS m/z＝695.3[M+H] +。
第六步：5-(4-(3-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)吡啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物82)
5-(4-(3-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000542
将82F(200mg,0.29mmol)和23D(148mg,0.34mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物82(30mg，收率：9％)。
LCMS m/z＝547.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.13(s,1H),11.06(s,1H),8.44–8.35(m,1H),8.30(s,1H),8.18(s,1H),8.02(s,1H),7.87(s,1H),7.75–7.63(m,2H),7.62–7.50(m,3H),7.44(t,2H),7.39–7.30(m,2H),7.25(dd,1H),7.22–7.12(m,1H),6.89(s,1H),5.07(dd,1H), 3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.50–3.35(m,4H),2.96–2.72(m,5H),2.69–2.51(m,6H),2.34–2.22(m,1H),2.09–1.99(m,1H),1.93–1.71(m,8H),1.68–1.51(m,4H),1.49–1.31(m,4H),1.19–1.03(m,2H)。
实施例83：化合物83的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000543
第一步：2-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(83A)
tert-butyl 2-(4-((benzyloxy)carbonyl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000544
将2-氧代-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(8.1g,33.84mmol)，哌嗪-1-羧酸苄酯(5g,22.70mmol)溶于1,2-二氯乙烷(100mL)中，加入十滴醋酸后室温搅拌1h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(9.6g,45.30mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝100/1-1/1)得到83A(9.3g，收率：92％)。
LCMS m/z＝444.3[M+H] +。
第二步：4-(7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(83B)的盐酸盐；
benzyl 4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazine-1-carboxylate；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000545
将化合物83A(3g,6.76mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(30mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第三步：4-(7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(83C)
benzyl 4-(7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000546
将上一步得到的83B的盐酸盐和1D(1.49g,5.93mmol)溶于DMSO(20mL)中，加入碳酸氢钠(1.53g,18.2mmol)，100℃反应6h。冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL x 3)三次。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到83C(2g，收率：59％)。
LCMS m/z＝575.3[M+H] +。
第四步：2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(2-(哌嗪-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)苯胺(83D)
2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-(2-(piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)aniline
Figure PCTCN2022090243-appb-000547
依次加入83C(1g,1.74mmol)、钯碳(1g，10wt％)溶于60mL甲醇中，然后氢气置换三次后在室温反应2h，硅藻土抽滤，滤液减压浓缩得到83D(600mg,收率：84％)
LCMS m/z＝411.3[M+H] +。
第五步：5-(4-(7-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(83E)
5-(4-(7-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000548
将上一步的83D(600mg,1.46mmol)溶于DMSO(20mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(604mg,2.19mmol)和DIPEA(942mg,7.29mmol)，100℃搅拌3h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到83E(540mg，收率：55.5％)。
LCMS m/z＝667.3[M+H] +。
第六步：5-(4-(7-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物83)
5-(4-(7-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000549
将83E(270mg,0.40mmol)和23D(265mg,0.61mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(230mg,1.21mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备液浓缩，加入50mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液调节至碱性，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物83(20mg，收率：5％)。
LCMS m/z＝533.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.13(s,1H),11.06(s,1H),8.48–8.35(m,1H),8.31(s,1H),8.18(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.76–7.63(m,2H),7.61–7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.40–7.31(m,2H),7.27(dd,1H),7.22–7.09(m,1H),6.83(s,1H),5.07(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.59–3.40(m,4H),2.94–2.83(m,1H),2.82–2.67(m,5H),2.66–2.53(m,2H),2.47–2.25(m,4H),2.10–1.95(m,3H),1.83(d,6H),1.75–1.51(m,6H)。
实施例84：化合物84的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000550
第一步：9-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(84A)
tert-butyl 9-(1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000551
将4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(2.75g,11.79mmol)，3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(3.0g,11.79mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，加入醋酸(710mg，11.79mmol)，室温搅拌1h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(5.0g,23.58mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用水(100mL×2)洗涤后经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到84A(2.5g，收率：45.0％)。
LCMS m/z＝472.3[M+H] +。
第二步：9-(哌啶-4-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(84B)
tert-butyl 9-(piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000552
将84A(2.5g,5.30mmol)、钯碳(1.5g，10wt％)溶于60mL甲醇中，然后氢气置换三次后在室温反应3h，硅藻土抽滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝25/1-10/1)得到84B(1.5g，收率：83.9％)。
第三步：9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(84C)
tert-butyl 9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000553
将84B(1.5g,4.44mmol)和4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(1.1g,4.44mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入无水碳酸钾(1.84g,13.32mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和30mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(20mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到84C(1.0g，收率：39.6％)。
LCMS m/z＝569.3[M+H] +。
第四步：3-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(84D)的盐酸盐
3-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000554
将84C(1.0g,1.76mmol)溶于甲醇(3mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(15mL)， 室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
LCMS m/z＝469.2[M+H] +。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异吲哚-1,3-二酮(84E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000555
将上一步的84D的盐酸盐粗品溶于DMSO(10mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(490mg,1.76mmol)和DIPEA(1.14g,8.80mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到84E(600mg，收率：47.0％)。
LCMS m/z＝725.4[M+H] +。
第六步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(84F)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000556
将84E(600mg,0.83mmol)溶于乙醇/水(9mL/3mL)中，依次加入铁粉(370mg，6.64mmol)，氯化铵(360mg，6.64mmol)，氮气保护，80℃搅拌3h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到84F(520mg，收率：90％)。
第七步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(化合物84)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2 -yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000557
将84F(220mg,0.32mmol)和23D(150mg,0.35mmol)溶于DMF(3mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(182mg,0.96mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物84(100mg，收率：28.5％)。
LCMS m/z＝547.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.48–8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.76–7.62(m,2H),7.61–7.49(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.30(s,1H),7.25–7.08(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.55–3.39(m,4H),3.18–3.01(m,2H),2.97–2.77(m,1H),2.70–2.50(m,8H),2.31–2.16(m,1H),2.06–1.95(m,1H),1.91–1.71(m,8H),1.65–1.41(m,10H)。
实施例85：化合物85的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000558
Figure PCTCN2022090243-appb-000559
第一步：9-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺环[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(85C)
tert-butyl 9-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000560
将1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(80B)盐酸盐(1.05g粗品)加入到30mL THF中，加入碳酸氢钠(806mg，9.60mmol)，室温搅拌20min，加入3-Boc-9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷(1.28g,4.80mmol)以及0.3mL醋酸，之后室温搅拌2h；加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.02g,4.80mmol)，室温反应16h。加入饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝50/1-20/1)得到85C(1.1g g，收率：82％)。
LCMS m/z＝569.3[M+1] +。
第二步：9-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷(85D)的三氟乙酸盐
9-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecane；2,2,2-trifluoroacetate
Figure PCTCN2022090243-appb-000561
将85C(1.0g,1.76mmol)溶解在25mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h。将反应液减压浓缩，得到85D的三氟乙酸盐(1.2g粗品)。
LC-MS m/z＝469.3[M+1] +。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(9-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂罗[5.5]十一烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(85E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(9-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000562
将85D的三氟乙酸盐(1.2g粗品)溶于20mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(740mg,8.81mmol)，室温搅拌10min，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(585mg，2.12mmol)，反应于80℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，加入200mL水，过滤，收集固体，水洗，固体用DCM溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残余物通过用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝15/1)得到85E(1.1g，收率：88％)。
LCMS m/z＝725.3[M+1] +。
第四步：5-(9-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(85F)
5-(9-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000563
将85E(1.1g,1.52mmol)溶于THF(10mL)、乙醇(30mL)和水(6mL)的混合液中，加入还原铁粉(827mg,14.77mmol)以及氯化铵(790mg,14.77mmol)，85℃反应2h，反应液冷却至室温，真空浓缩除去溶剂，向残余物中加入50mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到85F(0.71g，收 率：66％)。
LCMS m/z＝695.3[M+H] +。
第五步：5-(9-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物85)
5-(9-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-3-azaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000564
将85F(320mg,0.46mmol)和23D(241mg,0.55mmol，溶于DMF(20mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(263mg,1.38mmol)，100℃搅拌8h。冷却至室温，加入100mL饱和碳酸氢钠水溶液有黄色固体析出，抽滤收集固体，滤饼用水冲洗(100ml×3)，二氯甲烷复溶，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)＝15:1)纯化，得化合物85(180mg，收率：33％)。
LCMS m/z＝1094.3[M+1] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.05(s,1H),8.51–8.34(m,1H),8.27(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.88(s,1H),7.75–7.62(m,2H),7.62–7.50(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.33–7.10(m,3H),6.85(s,1H),5.06(dd,1H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.57–3.40(m,4H),2.94–2.77(m,5H),2.70–2.52(m,6H),2.30–2.20(m,1H),2.08–1.98(m,1H),1.89–1.73(m,8H),1.72-1.64(m,2H),1.63–1.52(m,2H),1.50–1.32(m,4H),1.21–1.06(m,2H)。
实施例86：化合物86的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000565
Figure PCTCN2022090243-appb-000566
第一步：4-氟-4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(86B)
tert-butyl 4-fluoro-4-formylpiperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000567
0℃下，将戴斯-马丁氧化剂(8.48g，20mmol)分批加入至86A(2.33g，10mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌2h，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：PE/EA(V/V)＝10/1-1/1)得到86B(2.1g，收率：90.9％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ9.66(d,1H),4.11–3.85(m,2H),3.17-2.84(m,2H),1.86–1.59(m,4H),1.47-1.35(m,9H)。
第二步：叔丁基4-氟-4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(86C)
tert-butyl 4-fluoro-4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000568
将7E(400mg,1.0mmol)和86B(462mg,2.0mmol)溶于1,2-二氯乙烷(10mL)中，依次加入
Figure PCTCN2022090243-appb-000569
分子筛(200mg)和醋酸(0.12g,2mmol)。室温搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.38g,1.79mol)，室温过夜反应。反应结束后，直接将反应体系减压浓缩后用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到86C(492mg，收率：80％)。
LCMS m/z＝616.3[M+H] +。
第三步：1-((4-氟哌啶-4-基)甲基)-4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪(86D)
1-((4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)-4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000570
将86C(492mg,0.8mmol)溶于DCM(15mL)，室温下加入三氟乙酸(5mL)，搅拌1h，减压浓缩，残留物加入30mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝9-10，分液，有机层减压浓缩后得到86D(412mg)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝516.3[M+H] +。
第四步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-氟-4-((4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基))-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(86E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-fluoro-4-((4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000571
将86D(412mg,0.8mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(276mg,1mmol)溶于DMSO(10mL)中，滴加DIPEA(0.27g,2.07mmol)，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到86E(370mg，收率：60％)。
LCMS m/z＝772.3[M+H] +。
第五步：5-(4-((4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(86F)
5-(4-((4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)-4-fluoropiperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000572
将86E(0.37g,0.48mmol)溶于乙醇(15mL)，加入还原铁粉(0.07g,1.30mmol)，再滴加氯化铵(0.07g,1.30mmol)的水溶液(5mL)，氮气保护，80℃反应3h，反应液冷却至室温，加入5mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到86F(170mg，产率：47.9％)
LCMS m/z＝371.7[(M+2H)/2] +。
第六步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物86)的三氟乙酸盐
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)-4-fluoropiperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000573
将86F(0.13g,0.18mmol)与23D(0.08g,0.18mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(0.09g,0.47mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入5mL水和5mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。将制备所得冻干得到化合物86的三氟乙酸盐(10mg)。
LCMS m/z＝571.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.29–8.16(m,2H),7.83–7.72(m,3H),7.71–7.59(m,2H),7.55–7.42(m,4H),7.42–7.29(m,3H),7.26(dd,1H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),3.95–3.79(m,5H),3.68(s,3H),3.62–3.32(m,5H),3.28–3.03(m,6H),2.96–2.45(m,9H), 2.17–2.03(m,5H),2.01–1.70(m,10H)。
实施例87：化合物87的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000574
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物87)
5-(4-((4-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将5B(150mg,0.20mmol)与23D(96mg,0.22mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-10/1)得到粗品，进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备液浓缩，加入30mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液调节至碱性，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物87(25mg，收率：11％)。
LCMS m/z＝571.2[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.08(s,1H),8.47–8.32(m,1H),8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.78–7.63(m,2H),7.62–7.40(m,6H),7.36(t,1H),7.29–7.05(m,1H),6.83(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.68–3.51(m,2H),3.15–3.01(m,2H),2.98–2.80(m,3H),2.71–2.51(m,8H),2.46–2.29(m,4H),2.27–2.11(m,3H),2.10–1.96(m,1H),1.91–1.68(m,11H),1.63–1.45(m,2H),1.35–1.22(m,2H)。
实施例88：化合物88的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000575
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(9-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-yl)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(88A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(9-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000576
将60D(0.4g,0.85mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(0.26g,0.94mmol)溶于DMSO(5ml)中，加入DIPEA(0.22g,1.7mmol)，90℃搅拌5h，冷却至室温，加入10mL水，析出固体，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化得到88A(0.5g，收率：79％)。
第二步：5-(9-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(88B)
5-(9-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000577
将88A(500mg,0.67mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(370mg，6.7mmol)，氯化铵(360mg，6.7mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液加入20mL二氯甲烷和20mL饱和氯化钠水溶液萃取，有机层干燥后减压浓缩，得到88B(260mg)，直接用于下一步。
第三步：5-(9-(1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物88)
5-(9-(1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000578
将88B(140mg,0.20mmol)和23D(87mg,0.20mmol)溶于DMF(5mL)溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(110mg,0.60mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物88的三氟乙酸盐，向化合物88的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和10mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物88(40mg，收率：18％)。
LCMS m/z＝556.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.09(s,1H),8.50–8.32(m,1H),8.26(s,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),7.75–7.64(m,2H),7.64–7.51(m,3H),7.51–7.41(m,3H),7.34(t,1H),7.23–7.07(m,1H),6.82(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.22–3.02(m,6H),2.95–2.82(m,1H),2.68–2.50(m,9H),2.07–1.95(m,1H), 1.91–1.39(m,18H)。
实施例89：化合物89的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000579
第一步：5-(9-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物89)
5-(9-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)-2,9-diazaspiro[5.5]undecan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将10G(0.20g,0.28mmol)与40A(0.11g,0.28mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)与NMP(2mL)混合溶剂，加入对甲苯磺酸水合物(0.16g,0.84mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％三氟乙酸))得到产物，经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物89，(30mg，收率：10％)。
LCMS m/z＝532.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.04(s,1H),8.55–8.40(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.86(s,1H),7.70(dd,1H),7.62(d,1H),7.59–7.47(m,3H),7.42(t,2H),7.36–7.26(m,2H),7.24(dd,1H),7.20–7.05(m,1H),6.85(s,1H),5.05(dd,1H),3.78(s,3H),3.75(s,3H),3.55–3.34(m,4H),3.11–3.00(m,2H),2.95–2.79(m,1H),2.71–2.51(m,4H),2.44–2.16(m,6H),2.04–1.95(m,1H),1.83(d,6H),1.74-1.35(m,11H),1.32–1.25(m,2H)。
实施例90：化合物90的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000580
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基膦酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物90)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将77D(200mg,0.31mmol)和40A(180mg,0.46mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物90(50mg，收率：16％)。
LCMS m/z＝498.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.32–8.03(m,7H),7.86(s,1H),7.72(d,1H),7.60–7.45(m,5H),7.40–7.23(m,1H),6.98(s,1H),5.21(dd,1H),3.98–3.89(m,5H),3.89–3.72(m,5H),3.72–3.64(m,2H),3.42–3.10(m,8H),2.97–2.89(m,2H),2.85–2.70(m,1H),2.65–2.47(m,1H),2.45–2.32(m,2H),2.32–2.21(m,1H),2.21–2.07(m,2H),2.02(d,6H)。
实施例91：化合物91的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000581
第一步：5-(2-(4-(1-(4-(5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)-氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮(化合物91)
5-(2-(4-(1-(4-(5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将7G(285mg,0.38mmol)和40A(179mg,0.46mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(217mg,1.14mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。将制备所得冻干，将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物91(65mg，收率：15％)。
LCMS m/z＝1105.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.63–8.39(m,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.02(s,1H),7.86(s,1H),7.71(dd,1H),7.64(d,1H),7.60(s,1H),7.58–7.50(m,2H),7.45(t,2H),7.41–7.34(m,1H),7.33–7.26(m,1H),7.27–7.08(m,2H),6.84(s,1H),5.06(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.52–3.35(m,4H),3.18–3.03(m,2H),2.97–2.79(m,1H),2.76–2.50(m,8H),2.44–2.11(m,6H),2.10–1.91(m,3H),1.91–1.71(m,8H),1.69–1.48(m,8H)。
实施例92：化合物92的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000582
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物92)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将81B(200mg,0.32mmol)和40A(180mg,0.46mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物92(40mg，收率：13％)。
LCMS m/z＝491.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.55–8.41(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.76–7.65(m,2H),7.65–7.51(m,3H),7.46(t,2H),7.41–7.33(m,2H),7.31–7.11(m,2H),6.85(s,1H),5.08(dd,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.53–3.39(m,4H),3.19–3.05(m,2H),2.97–2.83(m,1H),2.74–2.51(m,8H),2.36–2.22(m,1H),2.08–1.92(m,1H),1.89–1.74(m,8H),1.67–1.53(m,2H)。
实施例93：化合物93的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000583
第一步：5-(4-((4-(1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物93)
5-(4-((4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将5B(150mg,0.20mmol)与40A(94mg,0.24mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-10/1)得到粗品，进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备液浓缩，加入30mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液调节至碱性，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物93(20mg，收率：9％)。
LCMS m/z＝549.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.36(s,1H),11.08(s,1H),8.60–8.38(m,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.86(s,1H),7.77–7.65(m,2H),7.64–7.51(m,3H),7.51–7.41(m,3H),7.40–7.32(m,1H),7.23–7.06(m,1H),6.84(s,1H),5.10(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.67–3.51(m,2H),3.15–3.03(m,2H),2.96–2.78(m,3H),2.70–2.51(m,8H),2.47–2.29(m,4H),2.26–2.12(m,3H),2.08-1.98(m,1H),1.91–1.66(m,11H),1.62–1.45(m,2H),1.34–1.18(m,2H)。
实施例94：化合物94的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000584
第一步：7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺环[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(94A)
tert-butyl 7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000585
将1D(2g,7.96mmol)和2,7-二氮杂螺环[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(2.67g,11.80mmol)溶于DMSO(30mL)中，加入碳酸钾(3.26g,23.59mmol)，120℃反应6h。冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和50mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(30mL×3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，得到94A(2.47g，收率：68％)。
LCMS m/z＝458.3[M+H] +。
第二步：7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺环[3.5]壬烷(94B)
7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2022090243-appb-000586
将94A(2.47g,5.40mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入4N氯化氢的二氧六环溶液(20mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物加入20mL二氧六环和2mL氨水，减压浓缩后得到94B粗品，直接用于下一步。
第三步：4-((7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺环[3.5]壬-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(94C)
tert-butyl 4-((7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000587
将上一步得到的94B粗品和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.30g,10.78mmol)溶于DMAC(30mL)中，加入醋酸(323mg,5.37mmol)。室温搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.43g,16.18mmol)，室温过夜反应。加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(3×30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)得到94C(2.3g，收率：77％)。
LCMS m/z＝555.4[M+H] +。
第四步：7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2-(哌啶-4-基甲基)-2,7-二氮杂螺环[3.5]壬烷(94D)的盐酸盐
7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2-(piperidin-4-ylmethyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000588
将94C(2.3g,4.15mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入4N氯化氢的二氧六环溶液(25mL)， 室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((7-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺环[3.5]壬-2-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(94E)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((7-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000589
将上一步的94D的盐酸盐粗品溶于DMSO(30mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(5A-1)(1.46g,4.96mmol)和DIPEA(2.67g,20.7mmol)，100℃搅拌5h。冷却至室温，加入30mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到94E(1.8g，收率：60％)。
LCMS m/z＝729.3[M+H] +。
第六步：5-(4-((7-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,7-二氮杂螺环[3.5]壬-2-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(94F)
5-(4-((7-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000590
将94E(700mg,0.96mmol)溶于乙醇/水(20mL，3:1)中，依次加入铁粉(280mg，5mmol)，氯化铵(335mg，6.26mmol)，氮气保护，85℃搅拌2h。冷却至室温，减压抽滤，滤液浓缩后，加入20mL水稀释，二氯甲烷萃取(3×30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到94F(600mg，收率：89％)。
LCMS m/z＝699.3[M+H] +。
第七步：5-(4-((7-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,7-二氮螺环[3.5]壬基-2-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物94)
5-(4-((7-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl) methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000591
将94F(150mg,0.21mmol)和40A(124mg,0.32mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(120mg,0.63mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，冻干，硅胶制备板纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝15/1)得到化合物94(15mg，收率：6.8％)。
LCMS m/z＝527.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.38(s,1H),11.08(s,1H),8.61–8.42(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.06(s,1H),7.87(s,1H),7.75–7.64(m,2H),7.62–7.52(m,3H),7.51–7.40(m,3H),7.39–7.32(m,1H),7.23–7.02(m,1H),6.84(s,1H),5.09(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.66–3.52(m,2H),3.20–2.95(m,4H),2.94–2.82(m,3H),2.81–2.68(m,4H),2.65–2.52(m,2H),2.48–2.34(m,2H),2.08–1.93(m,1H),1.92–1.69(m,12H),1.61–1.43(m,1H),1.41–1.25(m,2H)。
实施例95：化合物95的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000592
第一步：5-(9-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物95)
5-(9-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)- 3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将37F(1.7g,2.40mmol)和54C(1.09g,2.40mmol)溶于DMF(15mL)溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(0.91g,4.8mmol)，100℃反应过夜。冷却至室温，加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步用中压制备反相柱纯化(乙腈/水(含0.1％TFA)＝3％-40％)，得到化合物95的三氟乙酸盐制备液，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷搅拌5min后分液萃取，有机层用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到化合物95(600mg，收率：22％)。
LCMS m/z＝563.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.14(s,1H),11.05(s,1H),8.48–8.36(m,1H),8.33(s,1H),8.19(s,1H),7.99(s,1H),7.83(s,1H),7.69–7.56(m,2H),7.52(s,1H),7.46–7.34(m,2H),7.34–7.03(m,5H),6.81(s,1H),5.06(dd,1H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),3.54–3.40(m,4H),3.11–2.97(m,2H),2.96–2.79(m,1H),2.69–2.51(m,4H),2.43–2.27(m,4H),2.21(d,2H),2.08–1.96(m,1H),1.80(d,6H),1.73–1.63(m,2H),1.61–1.41(m,9H),1.31–1.17(m,2H)。
实施例96：化合物96的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000593
第一步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物96)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将77D(3.5g,5.46mmol)和54C(2.98g,6.55mmol)溶于DMF(50mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(3.1g,16.30mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入100 mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步用反相制备柱C18纯化；流动相组成：流动相A：水(含0.1％TFA)，流动相B：乙腈。将制备所得固体溶于100mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到化合物96(1.5g，收率：26％)。
LCMS m/z＝529.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.33–8.06(m,7H),7.76–7.62(m,2H),7.52–7.37(m,2H),7.37–7.21(m,3H),7.00(s,1H),5.22(dd,1H),4.01–3.90(m,8H),3.90–3.78(m,2H),3.77–3.63(m,2H),3.44–3.15(m,8H),2.96–2.89(m,2H),2.85–2.70(m,1H),2.64–2.50(m,1H),2.46–2.32(m,2H),2.32–2.22(m,1H),2.21–2.05(m,2H),1.99(d,6H)
实施例97：化合物97的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000594
第一步：(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-3-基)二甲基氧化膦(97A)
(4-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-3-yl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000595
将54B(4.5g,17.09mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(6.27g,34.18mmol)溶于20mL NMP中，加入DIPEA(2.65g,20.51mmol)，120℃搅拌2h，冷却至室温，加入50mL水，过滤，滤饼减压干燥后，残留物加入10mL乙醇和30mL甲基叔丁基醚打浆1h，过滤，滤饼用10mL甲基叔丁基醚洗涤，滤饼减压干燥得到97A(4.5g，收率：64％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ11.69(s,1H),8.82-8.76(m,1H),8.24(s,1H),7.76(d,1H),7.52-7.40(m,2H),7.40-7.32(m,1H),7.28–7.14(m,2H),1.88(d,6H)。
第二步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物97)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000596
将77D(3.5g,5.46mmol)和97A(2.69g,6.56mmol)溶于DMF(50mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(3.1g,16.30mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入100mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备液浓缩，加入100mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液调节至碱性，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物97(1.2g，收率：22％)。
LCMS m/z＝507.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.37–8.23(m,3H),8.23–8.07(m,4H),7.78–7.62(m,2H),7.52–7.37(m,2H),7.37–7.20(m,3H),7.01(s,1H),5.22(dd,1H),4.00–3.90(m,8H),3.90–3.79(m,2H),3.77–3.67(m,2H),3.45–3.20(m,8H),2.96–2.90(m,2H),2.85–2.71(m,1H),2.65–2.51(m,1H),2.48–2.33(m,2H),2.32–2.22(m,1H),2.21–2.06(m,2H),2.00(d,6H)。
实施例98：化合物98的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000597
Figure PCTCN2022090243-appb-000598
第一步：5-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物98)
5-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将80D(130mg,0.24mmol)和40A(122mg,0.31mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(137mg,0.72mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物98(55mg，收率：25％)。
LCMS m/z＝899.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.35(s,1H),11.07(s,1H),8.64–8.36(m,1H),8.28(s,1H),8.17(s,1H),8.13(s,1H),7.89(s,1H),7.76–7.64(m,3H),7.61–7.51(m,2H),7.50–7.24(m,5H),7.23–7.04(m,1H),6.88(s,1H),5.09(dd,1H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),3.69–3.47(m,4H),3.06–2.83(m,5H),2.70–2.52(m,2H),2.10–1.97(m,1H),1.84(d,6H)。
实施例99：化合物99的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000599
Figure PCTCN2022090243-appb-000600
第一步：4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(99A)
tert-butyl 4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000601
将80B的盐酸盐(1.05g粗品)加入到30mL THF中，加入碳酸氢钠(806mg，9.60mmol)，室温搅拌20min，加入(955mg,4.80mmol)以及0.3mL醋酸，之后室温搅拌2h；加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.02g,4.80mmol)，室温反应16h。加入饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝50/1-20/1)得到99A(1.0g，收率：84.6％)。
LCMS m/z＝501.3[M+1] +。
第二步：1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(哌啶-4-基)哌嗪(99B)的三氟乙酸盐
1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(piperidin-4-yl)piperazine；2,2,2-trifluoroacetate
Figure PCTCN2022090243-appb-000602
将99A(1.0g,2.0mmol)溶解在25mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2 h。将反应液减压浓缩，得99B的三氟乙酸盐(1.2g粗品)。
LC-MS m/z＝401.3[M+1] +。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(99C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000603
将99B的三氟乙酸盐(1.2g粗品)溶于20mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(840mg,10.0mmol)，室温搅拌10min，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(662mg，2.40mmol)，反应于80℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，加入200mL水，过滤，收集固体，水洗，固体用DCM溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残留物用硅胶柱层析(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝15/1)纯化得到99C(0.72g，收率：55.3％)。
LCMS m/z＝657.3[M+1] +。
第四步：5-(4-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(99D)
5-(4-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000604
将99C(0.72g,1.10mmol)溶于THF(10mL)、乙醇(30mL)和水(6mL)的混合液中，加入还原铁粉(614mg,10.96mmol)以及氯化铵(587mg,10.97mmol)，85℃反应2h，反应液冷却至室温，真空浓缩除去溶剂，向残余物中加入50mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到99D(0.52g，收率：75.4％)
LCMS m/z＝627.3[M+H] +。
第五步：5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基) -5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物99)
5-(4-(4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000605
将99D(250mg,0.40mmol)和23D(260mg,0.60mmol)，溶于DMF(20mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(230mg,1.21mmol)，100℃搅拌8h。冷却至室温，加入100mL饱和碳酸氢钠水溶液有黄色固体析出，抽滤收集固体，滤饼用水冲洗(100mL×3)，二氯甲烷复溶，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)＝15:1)纯化，得化合物99(120mg，收率：28％)。
LCMS m/z＝1026.3[M+1] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.06(s,1H),8.45–8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.88(s,1H),7.76–7.64(m,2H),7.61–7.50(m,3H),7.43(t,2H),7.40–7.30(m,2H),7.27(dd,1H),7.22–7.08(m,1H),6.85(s,1H),5.07(dd,1H),4.15–3.96(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.11–2.98(m,2H),2.97–2.77(m,5H),2.71–2.51(m,7H),2.10–1.87(m,3H),1.83(d,6H),1.60–1.41(m,2H)。
实施例100：化合物100的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000606
Figure PCTCN2022090243-appb-000607
第一步：5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物100)
5-(4-(4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将99D(250mg,0.40mmol)和40A(188mg,0.48mmol)，溶于DMF(20mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(263mg,1.38mmol)，100℃搅拌8h。冷却至室温，加入100mL饱和碳酸氢钠水溶液有白色固体析出，抽滤收集固体，滤饼用水冲洗(100ml×3)，二氯甲烷复溶，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(100ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用prep-TLC(DCM：MeOH(V/V)＝15:1)纯化得化合物100(100mg，收率：25％)。
LCMS m/z＝982.3[M+1] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.36(s,1H),11.06(s,1H),8.65–8.35(m,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.89(s,1H),7.78–7.65(m,2H),7.64–7.48(m,3H),7.44(t,2H),7.40–7.29(m,2H),7.27(dd,1H),7.22–7.09(m,1H),6.85(s,1H),5.07(dd,1H),4.19–3.96(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.11–2.96(m,2H),2.95–2.73(m,5H),2.73–2.51(m,7H),2.10–1.88(m,3H),1.84(d,6H),1.61–1.41(m,2H)。
实施例101：化合物101的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000608
Figure PCTCN2022090243-appb-000609
5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物101)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将45F(2.5g,3.90mmol)和54C(1.77g,3.90mmol)溶于DMF(20mL)溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(1.48g,7.8mmol)，100℃反应过夜。冷却至室温，加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步用中压制备反相柱纯化(乙腈/水(含0.1％TFA)＝3％-40％)，得到化合物101的三氟乙酸盐制备液，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷搅拌5min后分液萃取，有机层用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到化合物101(1.5g，收率：36％)。
LCMS m/z＝529.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.28(s,1H),8.19–8.07(m,1H),7.93(s,1H),7.87–7.78(m,3H),7.76–7.65(m,1H),7.53–7.41(m,3H),7.40–7.21(m,5H),5.12(dd,1H),4.21–4.07(m,2H),4.03(s,3H),3.89–3.66(m,9H),3.59–3.47(m,2H),3.37–3.15(m,4H),2.94–2.83(m,2H),2.82–2.67(m,1H),2.56–2.40(m,1H),2.31–2.13(m,3H),2.07–1.87(m,8H)。
实施例102：化合物102的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000610
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2- 基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物102)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将45F(2.5g,3.90mmol)和97A(1.6g,3.90mmol)溶于DMF(20mL)溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(1.48g,7.8mmol)，100℃反应过夜。冷却至室温，加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步用中压制备反相柱纯化(乙腈/水(含0.1％TFA)＝3％-40％)，得到化合物102的三氟乙酸盐制备液，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷搅拌5min后分液萃取，有机层用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到化合物102(1.5g，收率：38％)。
LCMS m/z＝507.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.28–8.21(m,1H),8.19(s,1H),7.98(s,1H),7.91–7.77(m,3H),7.74–7.64(m,1H),7.54–7.40(m,3H),7.40–7.21(m,5H),5.12(dd,1H),4.24–4.07(m,2H),4.04(s,3H),3.89–3.69(m,9H),3.61–3.48(m,2H),3.37–3.12(m,4H),2.95–2.84(m,2H),2.83–2.67(m,1H),2.58–2.41(m,1H),2.28–2.11(m,3H),2.06–1.89(m,8H)。
实施例103：化合物103的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000611
Figure PCTCN2022090243-appb-000612
第一步：4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(103H)
tert-butyl 4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000613
将1C(30g,120.48mmol)、1-叔丁氧羰基哌嗪(24.65g,132.52mmol)溶于DMSO(300mL)中，加入碳酸钾(50g,361.44mmol)，120℃反应6h，反应液倾入搅拌的水中，析出固体，抽滤，水洗3次，滤饼经真空干燥得到103H，(50g，收率：99％)。
LCMS m/z＝360.0[M-55] +。
第二步：1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪(103I)
1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000614
将103H(33g,80mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，缓慢加入三氟乙酸(50mL)，室温反应3h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入100mL二氯甲烷复溶，2N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液，收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到103I(24.5g，收率：98％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝316.0[M+H] +。
第三步：(R)-3-(((甲磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(103B)
tert-butyl(R)-3-(((methylsulfonyl)oxy)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000615
将103A(叔丁基(R)-3-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸酯)(5.00g,24.84mmol)溶于DCM(50mL)中，加入三乙胺(7.54g,74.52mmol)，冰浴下滴加甲磺酰氯(5.69g,49.68mmol)，加毕于20℃反应2h，加水淬灭反应，200mL二氯甲烷稀释反应液，0.1N稀盐酸洗涤3次，碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠洗涤1次，收集有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到103B，(6.90g直接用于下一步)。
LCMS m/z＝224.1[M-55] +。
第四步：叔丁基(S)-3-((4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(103C)
tert-butyl(S)-3-((4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000616
将103I(5.20g,16.45mmol)，103B(5.51g,19.74mmol)溶于DMF(50mL)中，加入碘化钠(0.99g,6.58mmol)，碳酸钾(6.82g,49.35mmol)，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝2/1-纯乙酸乙酯)得到103C，(3.30g，收率：40％)。
LCMS m/z＝499.1[M+H] +。
第五步：叔丁基(S)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(103D)
tert-butyl(S)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000617
将103C(3.30g,6.61mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(1.33g,10.58mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(0.54g,0.66mmol)，碳酸钾(1.83g,13.22mmol)的水 溶液(10mL)，氮气置换3次，90℃反应5h，反应液冷却至室温，加入300mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠水溶液洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1-纯乙酸乙酯)得到103D，(2.89g，收率：87％)。
LCMS m/z＝501.3[M+H] +。
第六步：(R)-1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(103E)
(R)-1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000618
将103D(2.89g,5.77mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，缓慢加入三氟乙酸(10mL)，室温反应1h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入100mL二氯甲烷复溶，1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液，收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到103E(2.26g，收率：98％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝401.3[M+H] +。
第七步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((S)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(103F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-((S)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000619
将103E(2.26g,5.64mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(1.87g,6.77mmol)溶于DMSO(30mL)中，滴加DIPEA(2.19g,16.92mmol)，90℃反应16h，反应液冷却至室温，加入20mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到103F(3.58g，收率：97％)。
LCMS m/z＝657.2[M+H] +。
第八步：5-((S)-3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(103G)
5-((S)-3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000620
将103F(3.58g,5.45mmol)溶于乙醇(60mL)，加入还原铁粉(1.83g,32.70mmol)，再滴加氯化铵(1.75g,32.70mmol)的水溶液(20mL)，氮气保护，90℃反应3h，反应液冷却至室温，加入20mL水，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到103G(3.40g，收率：99％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝627.3[M+H] +。
第九步：5-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物103)
5-((S)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000621
将103G(1.70g,2.71mmol)与23D(1.18g,2.71mmol)溶于DMF(40mL)，加入对甲苯磺酸水合物(1.55g,8.13mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物103(580mg，收率：21％)。
LCMS m/z＝513.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),11.04(s,1H),8.46–8.33(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.74–7.50(m,5H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.26–7.07(m,1H),6.97–6.85(m,2H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.62–3.48(m,2H),3.48–3.36(m,1H),3.23–3.11(m,1H),3.00–2.79(m,5H),2.74–2.51(m,7H),2.47–2.31(m,2H),2.24–2.09(m,1H),2.08–1.94(m,1H),1.91–1.68(m,7H)。
实施例104：化合物104的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000622
第一步：(S)-3-(((甲磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(104B)
tert-butyl(S)-3-(((methylsulfonyl)oxy)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000623
将104A(5.00g,24.84mmol)溶于DCM(50mL)中，加入三乙胺(7.54g,74.52mmol)，冰浴下滴加甲磺酰氯(5.69g,49.68mmol)，20℃反应2h，加水淬灭反应，200mL二氯甲烷稀释反应液，0.1N稀盐酸洗涤3次，碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤1次，收集有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到104B(7g，直接用于下一步)。
第二步：叔丁基(R)-3-((4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(化合物104C)
tert-butyl(R)-3-((4-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000624
将103I(6.7g,21.19mmol)，104B(7g,25.40mmol)溶于DMF(50mL)中，加入碘化钠(0.32g,2.12mmol)，碳酸钾(8.79g,63.57mmol)，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠水溶液洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝2/1-纯乙酸乙酯)得到104C，(5g，收率：47％)。
LCMS m/z＝499.1[M+H] +。
第三步：叔丁基(R)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(104D)
tert-butyl(R)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000625
将104C(5g,10.01mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(2.52g,20.02mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(0.82g,1.00mmol)，碳酸钾(4.15g,30.03mmol)的水溶液(15mL)，氮气置换3次，100℃反应4h，反应液冷却至室温，加入300mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1-纯乙酸乙酯)得到104D，(5g，收率：99％)。
LCMS m/z＝501.3[M+H] +。
第四步：(S)-1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-4-(吡咯烷-3-基甲基)哌嗪(104E)
(S)-1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-4-(pyrrolidin-3-ylmethyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000626
将104D(5g,9.99mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，缓慢加入三氟乙酸(10mL)，室温反 应1h，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸，再加入100mL二氯甲烷复溶，1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，分液，收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次，合并所有有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到104E(3.8g，收率：95％)，直接用于下一步。
第五步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((R)-3-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(104F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-((R)-3-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000627
将104E(3.8g,9.49mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(2.88g,10.44mmol)溶于DMSO(30mL)中，滴加DIPEA(2.45g,18.98mmol)，90℃反应1.5h，反应液冷却至室温，加入30mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-12/1)得到104F(3.8g，收率：60％)。
LCMS m/z＝657.3[M+H] +。
第六步：5-((R)-3-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(104G)
5-((R)-3-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000628
将104F(3.8g,5.79mmol)溶于乙醇(60mL)，加入还原铁粉(3.23g,57.9mmol)，再滴加氯化铵(3.1g,57.9mmol)的水溶液(20mL)，氮气保护，80℃反应0.5h，反应液冷却至室温，过滤，滤饼用100mL二氯甲烷洗涤，加入50mL饱和食盐水，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到104G(3.8g，收率：100％)，直 接用于下一步。
第七步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物104)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000629
将23D(1.32g,3.03mmol)与104G(1.9g,3.03mmol)溶于DMF(15mL)，加入对甲苯磺酸水合物(1.15g,6.06mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步用中压制备反相柱纯化(乙腈/水(含0.1％TFA)＝3％-40％)，得到化合物104的三氟乙酸盐制备液，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷搅拌5min后分液萃取，有机层用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到化合物104(1.0g，收率：32％)。
LCMS m/z＝513.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.04(s,1H),8.50–8.34(m,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.74–7.50(m,5H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.26–7.03(m,1H),6.98–6.85(m,2H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.63–3.47(m,2H),3.47–3.36(m,1H),3.22–3.07(m,1H),2.97–2.76(m,5H),2.71–2.51(m,7H),2.44(d,2H),2.23–2.06(m,1H),2.06–1.93(m,1H),1.91–1.67(m,7H)。
实施例105：化合物105的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000630
Figure PCTCN2022090243-appb-000631
第一步：4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(105A)
tert-butyl 4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000632
将3-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(4.0g,12.4mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.0g,21.5mmol)溶于超干DMF(60mL)中，依次加入碳酸铯(8.1g,24.9mmol)和RuPhosPdG3(1.0g,1.2mmol)，氮气保护，100℃搅拌16h。反应结束后，加入200mL乙酸乙酯和100mL水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到105A(1.3g，收率：24％)。
LCMS m/z＝429.2[M+H] +。
第二步：3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105B)的盐酸盐
3-(1-oxo-5-(piperazin-1-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000633
将105A(1.3g,3.0mmol)溶于甲醇(3mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(15mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
LCMS m/z＝329.2[M+H] +。
第三步：4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(105C)
tert-butyl 4-((4-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000634
将105B的盐酸盐粗品(1.1g)，4-甲酰哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.1g,5.16mmol)溶于DMAC(30mL)中，加入醋酸0.1ml，室温搅拌1h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.1g,5.2mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用水(100mL×2)洗涤后经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到105C(1.0g，两步收率：63％)。
LCMS m/z＝526.3[M+H] +。
第四步：3-(1-氧代-5-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105D)的盐酸盐
3-(1-oxo-5-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000635
将105C(1.0g,1.9mmol)溶于甲醇(3mL)中，加入4N盐酸的二氧六环溶液(15mL)，室温下反应1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
LCMS m/z＝426.3[M+H] +。
第五步：3-(5-(4-((1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105E)
3-(5-(4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000636
将105D的盐酸盐粗品(900mg)溶于DMSO(25mL)中，依次加入1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(500mg,2.0mmol)和碳酸氢钠(504mg,6.0mmol)，90℃搅拌3h。冷却至室温，加入80mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到105E(700mg，两步收率：56％)。
LCMS m/z＝655.3[M+H] +。
第六步：3-(5-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105F)
3-(5-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000637
氮气保护，50mL单口瓶瓶中加入105E(300mg，0.46mmol)和N-甲基吡唑-4-硼酸(115mg，0.91mmol)，溶于10mL二氧六环和2mL水中，然后向其中加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(81mg，0.10mmol)和碳酸钾(168mg，1.2mmol)，氮气置换三次，80℃反应2h，降温至室温，将反应液倒入100ml水中，100ml乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得105F(220mg，收率73％)。
LCMS m/z＝657.3[M+H] +。
第七步：3-(5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(105G)
3-(5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000638
将105F(220mg,0.33mmol)、铁粉(200mg,3.57mmol)、氯化铵(200mg,3.77mmol)溶于乙醇(30mL)和水(10mL)中，80℃搅拌2h，之后冷却至室温，抽滤，滤液浓缩后加入30mL水，再用30ml二氯甲烷萃取，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到105G(170mg，收率81％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝627.3[(M+H] +。
第八步：3-(5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(化合物105)
3-(5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000639
将105G(170mg,0.27mmol)和40A(180mg,0.46mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和30mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物105(25mg，收率：9.3％)。
LCMS m/z＝491.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),10.93(s,1H),8.63–8.41(m,1H),8.30(s,1H),8.11(s,1H),8.04(s,1H),7.88(s,1H),7.71(d,1H),7.64–7.48(m,4H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.26–7.11(m,1H),7.11–7.00(m,2H),6.86(s,1H),5.05(dd,1H),4.41–4.17(m,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.39–3.22(m,4H),3.17–3.00(m,2H),2.98–2.81(m,1H),2.69–2.52(m,6H),2.43–2.16(m,4H),2.02–1.92(m,1H),1.89–1.72(m,8H),1.69–1.53(m,1H),1.45–1.26(m,2H)。
实施例106：化合物106的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000640
第一步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物106)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将45F(256mg,0.4mmol)和(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(55B)(200mg,0.5mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物106的三氟乙酸盐，向化合物106的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物106(125mg，收率：31％)。
LCMS m/z＝502.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.23(s,1H),7.96–7.75(m,5H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),7.31–7.15(m,2H),6.91(d,1H),5.12(dd,1H),4.22–4.07(m,5H),4.03(s,3H),3.93–3.70(m,6H),3.62-3.48(m,2H),3.39–3.18(m,4H),2.95–2.85(m,2H),2.82–2.67(m,1H),2.63–2.44(m,1H),2.37–2.16(m,3H),2.12–1.88(m,9H),1.19–1.08(m,2H),0.73–0.65(m,2H)。
实施例107：化合物107的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000641
第一步：(5-环丙基-2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(107A)
(5-cyclopropyl-2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)phenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000642
将55A(10.7g,51.14mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(13.96g,76.71mmol)溶于NMP(40mL)中，加入DIPEA(9.91g,76.71mmol)，氮气保护下120℃搅拌2h。冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯和50mL水萃取，有机层用50mL饱和食盐水洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝1/100-1/20)得107A(15.6g，收率：86％)。
LCMS m/z＝356.1[M+H] +。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物107)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000643
将45F(256mg,0.4mmol)和107A(178mg,0.5mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物107的三氟乙酸盐，向化合物107的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物107(120mg，收率：31.3％)。
LCMS m/z＝480.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.13(s,1H),8.02–7.91(m,3H),7.86(s,1H),7.82(d,1H),7.46(s,1H),7.36(s,1H),7.33–7.11(m,2H),6.90(d,1H),5.12(dd,1H),4.23–4.07(m,5H),4.04(s,3H),3.93–3.74(m,6H),3.63–3.48(m,2H),3.39–3.20(m,4H),2.95–2.85(m,2H),2.82–2.65(m,1H),2.63–2.45(m,1H),2.37–2.17(m,3H),2.14–1.88(m,9H),1.18–1.07(m,2H),0.71–0.63(m,2H)。
实施例108：化合物108的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000644
第一步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(108B)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)phenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000645
将108A(5g,29.56mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(13.47g,59.12mmol)溶于NMP(50mL)中，加入DIPEA(5.73g,44.34mmol)，氮气保护下120℃，此温度下搅拌2h。冷却至室温，加入300mL乙酸乙酯和300mL水萃取，有机层用150mL饱和食盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-10/1)，得到108B(8.6g，收率：80.6％)
LCMS m/z＝360.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.53(s,1H),8.61–8.47(m,1H),8.37–8.21(m,1H),7.76–7.45(m,2H),7.31–7.13(m,1H),1.81(d,6H)。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物108)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione；
Figure PCTCN2022090243-appb-000646
将45F(2g,3.12mmol)和108B(1.24g,3.43mmol)溶于DMF(30mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(1.78g,9.36mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入100mL水和100mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物108的三氟乙酸盐，向化合物108的三氟乙酸盐中加入200mL二氯甲烷和100mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物108(1.1g，收率：36.5％)。
LCMS m/z＝964.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.29(s,1H),7.94(s,1H),7.91–7.77(m,4H),7.59(dd,1H),7.46(d,1H),7.39–7.23(m,3H),7.19(t,1H),5.12(dd,1H),4.23–4.08(m,5H),4.05(s,3H),3.97–3.73(m,6H),3.60-3.48(m,2H),3.39–3.15(m,4H),2.95–2.85(m,2H),2.83–2.65(m,1H),2.65–2.46(m,1H),2.37–2.16(m,3H),2.13–1.88(m,8H)。
实施例109：化合物109的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000647
第一步：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(109B)
(2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)phenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000648
将108A(5g,29.56mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(10.84g,59.12mmol)溶于NMP(50mL)中，加入DIPEA(5.73g,44.34mmol)，氮气保护120℃搅拌2h。冷却至室温，加入300mL乙酸乙酯和300mL水萃取，有机层用150mL饱和食盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-10/1)，得到109B(8.3g，收率：88％)
LCMS m/z＝316.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.82(s,1H),8.49–8.36(m,2H),7.70–7.56(m,2H),7.33–7.18(m,1H),1.82(d,6H)。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物109)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000649
将45F(3g,4.68mmol)和109B(1.63g,5.15mmol)溶于DMF(30mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(2.67g,14.04mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入100mL水和100mL饱和碳酸氢钠水溶液，过滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物109的三氟乙酸盐，向化合物109的三氟乙酸盐中加入200mL二氯甲烷和100mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物109(1.9g，收率：44.1％)。
LCMS m/z＝920.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.20(s,1H),8.01–7.91(m,2H),7.90–7.77(m,3H),7.58(dd,1H),7.46(s,1H),7.39–7.24(m,3H),7.17(t,1H),5.12(dd,1H),4.23–4.09(m,5H),4.06(s,3H),3.96–3.73(m,6H),3.64–3.48(m,2H),3.39–3.16(m,4H),2.96–2.86(m,2H),2.82–2.67(m,1H),2.64–2.47(m,1H),2.36–2.15(m,3H),2.13–1.88 (m,8H)。
实施例110：化合物110的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000650
第一步：4-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110A)
tert-butyl 4-((1-((benzyloxy)carbonyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000651
将4-甲酰基哌啶-1-羧酸苄酯(2.47g,10mmol)，叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1.86g,10mmol)混合于二氯甲烷(100mL)中，依次加入醋酸(1.2g,20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(4.24g,20mmol)，室温下搅拌过夜。加入100mL二氯甲烷和50mL 1N氢氧化钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝10/1-1/1)得到110A(3.54g，收率：85％)。
LCMS m/z＝418.2[M+H] +。
第二步：4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110B)
tert-butyl 4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000652
将110A(3.54g,8.49mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入钯碳(wt％＝10％,500mg)，氢气置换3次，氢气氛围(气球压强)、室温下搅拌过夜，过滤，滤液减压浓缩得到110B的粗品，直接用于下一步。
第三步：1-乙基-4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1H-吡唑(110C)
1-ethyl-4-(2-fluoro-4-methoxy-5-nitrophenyl)-1H-pyrazole
Figure PCTCN2022090243-appb-000653
氮气保护，500mL单口瓶中加入1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(2.49g，10mmol)和1-乙基-1H-吡唑-4-硼酸频那醇酯(Cas：847818-70-6，3.33g,15mmol)，溶于100mL 1,4-二氧六环和10mL水中，然后向其中加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(400mg，0.5mmol)和碳酸钾(4.14g，30mmol)，氮气置换三次，100℃反应16h，降温至室温，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得110C(2.1g，收率80％)。
LCMS m/z＝266.1[M+H] +。
第四步：4-((1-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110D)
tert-butyl 4-((1-(2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000654
将110B(8.49mmol)，110C(2.1g,7.92mmol)和碳酸钾(3.51g,25.5mmol)混合溶于DMSO(30mL)中，120℃搅拌16h。冷却至室温，加入100mL水和100mL乙酸乙酯萃取，有机层减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到110D(2.5g，收率：60％)。
LCMS m/z＝529.1[M+H] +。
第五步：1-((1-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪(110E)的三氟乙酸盐
1-((1-(2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine；2,2,2-trifluoroacetate
Figure PCTCN2022090243-appb-000655
将110D(1.1g,2.0mmol)溶解在5mL二氯甲烷中，加入3mL三氟乙酸，室温搅拌1h。将反应液减压浓缩，得到110E的三氟乙酸盐粗品，直接用于下一步。
第六步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((1-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(110F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((1-(2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000656
将110E的三氟乙酸盐(2.08mmol)的粗品溶于10mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(840mg,10.0mmol)，室温搅拌10min，加入DIPEA(3.45mL，20.8mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(662mg，2.40mmol)，反应于80℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，加入100mL水，过滤，收集固体，水洗，固体用DCM溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得粗品。粗品经过硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝15/1)得到110F(0.73g，收率：51％)。
LCMS m/z＝685.3[M+H] +。
第七步：5-(4-((1-(4-氨基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(110I)
5-(4-((1-(4-amino-2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000657
将110F(0.73g,1.07mmol)溶于乙醇(20mL)和水(5mL)的混合液中，加入还原铁粉(480mg,8.56mmol)以及氯化铵(460mg,8.56mmol)，85℃反应4h，反应液冷却至室温， 真空浓缩除去溶剂，向残余物中加入10mL水和50mL二氯甲烷，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到110I(620mg，收率：88％)
LCMS m/z＝655.4[M+H] +。
第八步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基))-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物110)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000658
将110I(310mg,0.47mmol)和40A(200mg,0.52mmol)，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(268mg,1.41mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液有黄色固体析出，抽滤收集固体，滤饼用水冲洗(20mL×3)，二氯甲烷复溶，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(30ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩后加入水冻干得化合物110(120mg，收率：25％)。
LCMS m/z＝505.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.07(s,1H),8.60–8.39(m,1H),8.31(s,1H),8.11(s,1H),8.10(s,1H),7.90(s,1H),7.76–7.63(m,2H),7.62–7.51(m,3H),7.44(t,2H),7.40–7.31(m,2H),7.27(d,1H),7.23–7.05(m,1H),6.86(s,1H),5.08(dd,1H),4.06(q,2H),3.80(s,3H),3.56–3.40(m,4H),3.17–3.01(m,2H),2.96–2.80(m,1H),2.70–2.50(m,8H),2.29(d,2H),2.11–1.97(m,1H),1.91–1.72(m,8H),1.72–1.47(m,1H),1.41–1.25(m,5H)。
实施例111：化合物111的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000659
第一步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基))-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物111)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-2-(1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-methoxyphenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将110I(310mg,0.47mmol)和23D(230mg,0.52mmol)，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(268mg,1.41mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液有黄色固体析出，抽滤收集固体，滤饼用水冲洗(20ml×3)，二氯甲烷复溶，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(30ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩后加入水冻干得化合物111(120mg，收率：24％)。
LCMS m/z＝527.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),11.07(s,1H),8.50–8.35(m,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),8.09(s,1H),7.89(s,1H),7.79–7.63(m,2H),7.63–7.50(m,3H),7.44(t,2H),7.41–7.30(m,2H),7.27(d,1H),7.21–7.02(m,1H),6.85(s,1H),5.08(dd,1H),4.06(q,2H),3.79(s,3H),3.57–3.38(m,4H),3.16–3.00(m,2H),2.97–2.79(m,1H),2.71–2.51(m,8H),2.28(d,2H),2.10–1.96(m,1H),1.90–1.69(m,8H),1.69–1.52(m,1H),1.39–1.25(m,5H)。
实施例112：化合物112的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000660
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物112)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将81B(2.3g,3.30mmol)和55B(1.45g,3.63mmol)溶于DMF(20mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(1.88g,9.90mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入100mL饱和碳酸氢钠水溶液和200mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于100mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物112(1.0g，收率：31％)。
LCMS m/z＝495.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.07(s,1H),10.84(s,1H),8.25–8.07(m,3H),7.98(s,1H),7.88(s,1H),7.69(d,1H),7.57(s,1H),7.41–7.13(m,3H),6.80(s,1H),6.57–6.34(m,1H),5.07(dd,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.60–3.40(m,4H),3.20–3.06(m,2H),2.97–2.82(m,1H),2.75–2.55(m,8H),2.40–2.29(m,1H),2.09–1.97(m,1H),1.95–1.85(m,2H),1.85–1.70(m,7H),1.69–1.54(m,2H),0.95–0.81(m,2H),0.57–0.39(m,2H)。
实施例113：化合物113的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000661
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物113)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将81B(2.3g,3.30mmol)和107A(1.29g,3.63mmol)溶于DMF(20mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(1.88g,9.90mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液和200mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于200mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物113(1.1g，收率：32％)。
LCMS m/z＝473.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.07(s,1H),8.31–8.19(m,1H),8.15(s,1H),8.07(s,1H),8.00(s,1H),7.89(s,1H),7.69(d,1H),7.59(s,1H),7.41–7.15(m,3H),6.81(s,1H),6.54–6.31(m,1H),5.07(dd,1H),3.85(s,3H),3.78(s,3H),3.54–3.41(m,4H),3.20–3.08(m,2H),2.97–2.82(m,1H),2.76–2.54(m,8H),2.41–2.28(m,1H),2.09–1.97(m,1H),1.95–1.86(m,2H),1.85–1.70(m,7H),1.70-1.55(m,2H),1.01–0.79(m,2H),0.62–0.45(m,2H)。
实施例114：化合物114的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000662
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物114)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将81B(2.24g,3.57mmol)与108B(1.29g,3.57mmol)溶于DMF(30mL)，加入对甲苯磺酸水合物(2.04g,10.71mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物114，(1.1g，收率：32％)。
LCMS m/z＝475.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.07(s,1H),10.94(s,1H),8.40–8.23(m,1H),8.24–8.08(m,2H),7.95(s,1H),7.84(s,1H),7.69(d,1H),7.59(s,1H),7.55–7.44(m,1H),7.39–7.20(m,2H),7.06–6.86(m,2H),6.80(s,1H),5.07(dd,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.53–3.42(m,4H),3.20–3.05(m,2H),2.96–2.81(m,1H),2.76–2.53(m,8H),2.40–2.27(m,1H),2.07–1.97(m,1H),1.93–1.83(m,2H),1.76(d,6H),1.68–1.50(m,2H)。
实施例115：化合物115的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000663
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物115)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将81B(2.24g,3.57mmol)与109B(1.13g,3.57mmol)溶于DMF(30mL)，加入对甲苯磺酸水合物(2.04g,10.71mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩干燥得化合物115，(780mg，收率：24％)。
LCMS m/z＝453.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.21(s,1H),11.07(s,1H),8.55–8.39(m,1H),8.20(s,1H),8.10(s,1H),7.97(s,1H),7.85(s,1H),7.69(d,1H),7.63–7.44(m,2H),7.40–7.20(m,2H),7.08–6.86(m,2H),6.80(s,1H),5.07(dd,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.55–3.36(m,4H),3.21–3.07(m,2H),2.97–2.82(m,1H),2.75–2.53(m,8H),2.39–2.24(m,1H),2.07–1.97(m,1H),1.94–1.84(m,2H),1.76(d,6H),1.67–1.50(m,2H)。
实施例116：化合物116的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000664
第一步：5-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物116)
5-((S)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将103G(1.70g,2.71mmol)与54C(1.23g,2.71mmol)溶于DMF(40mL)，加入对甲苯磺酸水合物(1.55g,8.13mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物116，(750mg，收率：26％)。
LCMS m/z＝522.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.14(s,1H),11.05(s,1H),8.51–8.37(m,1H),8.34(s,1H),8.19(s,1H),8.02(s,1H),7.86(s,1H),7.71–7.48(m,3H),7.48–7.33(m,2H),7.33–7.22(m,2H),7.20–7.00(m,1H),6.96–6.72(m,3H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.63–3.47(m,2H),3.47–3.37(m,1H),3.22–3.10(m,1H),2.96–2.77(m,5H),2.72–2.51(m,7H),2.46–2.36(m,2H),2.21–2.09(m,1H),2.07–1.93(m,1H),1.90–1.69(m,7H)。
实施例117：化合物117的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000665
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶)-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物117)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将54C(1.38g,3.03mmol)与104G(1.9g,3.03mmol)溶于DMF(15mL)，加入对甲苯磺酸水合物(1.15g,6.06mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步用中压制备反相柱纯化(乙腈/水(含0.1％TFA)＝3％-40％)，得到化合物117的三氟乙酸盐制备液，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷搅拌5min后分液萃取，有机层用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到化合物117(1.1g，收率：35％)。
LCMS m/z＝522.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.14(s,1H),11.04(s,1H),8.57–8.37(m,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.73–7.48(m,3H),7.47–7.34(m,2H),7.34–7.22(m,2H),7.19–7.00(m,1H),6.96–6.69(m,3H),5.05(dd,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.63–3.48(m,2H),3.47–3.38(m,1H),3.21–3.10(m,1H),3.00–2.76(m,5H),2.73–2.51(m,7H),2.45–2.35(m,2H),2.21–2.09(m,1H),2.08–1.96(m,1H),1.93–1.67(m,7H)。
实施例118：化合物118的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000666
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物118)
5-((R)-3-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将104G(250mg,0.40mmol)和40A(200mg,0.53mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物118(60mg，收率：15％)。
LCMS m/z＝982.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.04(s,1H),8.59–8.42(m,1H),8.28(s,1H),8.12(s,1H),8.05(s,1H),7.89(s,1H),7.71(dd,1H),7.67–7.59(m,2H),7.59–7.50(m,2H),7.45(t,2H),7.33(t,1H),7.22–7.06(m,1H),6.98–6.86(m,2H),6.82(dd,1H),5.05(dd,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.62–3.48(m,2H),3.48–3.37(m,1H),3.22–3.13(m,1H),3.00–2.78(m,5H),2.73–2.52(m,7H),2.45(d,2H),2.23–2.09(m,1H),2.06–1.96(m,1H),1.90–1.71(m,7H)。
实施例119：化合物119的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000667
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物119)
5-((R)-3-((4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将104G(250mg,0.40mmol)和107A(200mg,0.56mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物119(100mg，收率：27％)。
LCMS m/z＝473.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.24–10.78(m,2H),8.37–8.20(m,1H),8.16(s,1H),8.07(s,1H),8.01(s,1H),7.90(s,1H),7.65(d,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),6.94–6.76(m,3H),6.58–6.32(m,1H),5.05(dd,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.63–3.47(m,2H),3.47–3.36(m,1H),3.23–3.13(m,1H),3.00–2.77(m,5H),2.75–2.51(m,7H),2.46(d,2H),2.23–2.10(m,1H),2.06–1.94(m,1H),1.86–1.71(m,8H),0.95–0.85(m,2H),0.60–0.46(m,2H)。
实施例120：化合物120的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000668
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物120)
5-((R)-3-((4-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将104G(250mg,0.40mmol)和109B(200mg,0.63mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(160mg,0.84mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于20mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物120(120mg，收率：33％)。
LCMS m/z＝906.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.21(s,1H),11.04(s,1H),8.57–8.31(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.98(s,1H),7.86(s,1H),7.70–7.57(m,2H),7.56–7.44(m,1H),7.05–6.93(m,2H),6.92–6.86(m,1H),6.86–6.73(m,2H),5.05(dd,1H),3.82(s,3H),3.81(s,3H),3.63–3.46(m,2H),3.46–3.35(m,1H),3.22–3.11(m,1H),3.01–2.79(m,5H),2.73–2.52(m,7H),2.45(d,2H),2.21–2.08(m,1H),2.06–1.93(m,1H),1.86–1.66(m,8H)。
实施例121：化合物121的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000669
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物121)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将55B(0.26g,0.64mmol)与104G(0.4g,0.64mmol)溶于DMF(5mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.24g,1.28mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.05％氨水))得到化合物121(0.2g，收率：32％)。
LCMS m/z＝495.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.33–10.89(m,1H),10.84(s,1H),8.26–8.10(m,3H),7.99(s,1H),7.90(s,1H),7.65(d,1H),7.58(s,1H),7.23(dd,1H),6.98–6.76(m,3H),6.48(s,1H),5.05(dd,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.64–3.36(m,3H),3.25–3.14(m,1H),2.99–2.80(m,5H),2.75–2.51(m,7H),2.48–2.37(m,2H),2.22–2.08(m,1H),2.07–1.93(m,1H),1.88–1.67(m,8H),0.98–0.78(m,2H),0.62–0.37(m,2H)。
实施例122：化合物122的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000670
第一步：5-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物122)
5-((R)-3-((4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将108B(0.23g,0.64mmol)与104G(0.4g,0.64mmol)溶于DMF(5mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.24g,1.28mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物122的三氟乙酸盐，向化合物122的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和20mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物122(0.18g，收率：30％)。
LCMS m/z＝475.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.04(s,1H),10.94(s,1H),8.42–8.28(m,1H),8.25–8.10(m,2H),7.96(s,1H),7.85(s,1H),7.65(d,1H),7.61(s,1H),7.56–7.38(m,1H),7.15–6.87(m,3H),6.87–6.67(m,2H),5.05(dd,1H),3.82(s,3H),3.81(s,3H),3.67–3.36(m,3H),3.22–3.12(m,1H),3.02–2.82(m,5H),2.76–2.51(m,7H),2.47–2.36(m,2H),2.22–2.11(m,1H),2.04–1.94(m,1H),1.88–1.63(m,7H)。
实施例123：化合物123的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000671
第一步：5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(123A)
methyl 5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinate
Figure PCTCN2022090243-appb-000672
将77B的盐酸盐粗品(由4.43mmol的77A所制得)，5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(1.5g,9.66mmol)溶于DMSO(30mL)中，加入碳酸钾(3.34g,24.15mmol)，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入100mL水，再加入100mL乙酸乙酯萃取。分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，依次用50mL水和50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-19/1)得到123A(1.66g，收率：68％)。
LCMS m/z＝550.3[M+H] +。
第二步：5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-甲酸(123B)
5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000673
将123A(1.66g,3.02mmol)溶于四氢呋喃(45mL)和水(15mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂一水合物(0.44g，10.48mmol)，室温反应16h，反应结束后反应液中加入稀盐酸(2mol/L)调节pH＝7，减压浓缩得到123B粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝536.3[M+H] +。
第三步：N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)吡啶-2-酰胺(123C)
N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-((4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000674
将上一步得到的123B粗品，3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.75g,4.53mmol)溶于DMF(30mL)中，加入DIPEA(1.95g,15.1mmol)和HATU(1.72g,4.53mmol)，室温反应3h，反应结束后，加入100mL水，再加入100ml乙酸乙酯萃取。分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取(3×30mL)，合并有机相，依次用50mL水和50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-19/1)得到123C(1.48g，两步收率：76.4％)。
LCMS m/z＝646.3[M+H] +。
第四步：5-(4-((4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-酰胺(123D)
5-(4-((4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000675
将123C(1.9g,2.94mmol)溶于乙醇(100mL)和水(30mL)，加入铁粉(1.64g,29.4mmol)，再加入氯化铵(1.57g,29.4mmol)，氮气保护，85℃反应2h，反应液冷却至室温，通过硅藻土抽滤，滤液二氯甲烷萃取(3×50ml)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到123D，白色固体(1.27g)粗品，直接用于下一步。
LCMS m/z＝616.3[M+H] +。
第五步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物123)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
Figure PCTCN2022090243-appb-000676
将123D(265mg)与23D(244mg,0.56mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(245mg,1.29mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，真空浓缩；制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。向制备液中加入50mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物123(50mg，收率：8％)。
LCMS m/z＝1015.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),10.82(s,1H),8.68(d,1H),8.39(s,1H),8.34–8.26(m,2H),8.19(s,1H),8.02(s,1H),7.91–7.83(m,2H),7.70(dd,1H),7.62–7.51(m,3H),7.49–7.33(m,4H),7.17(s,1H),6.86(s,1H),4.81–4.64(m,1H),3.95(d,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),2.97–2.70(m,7H),2.59-2.49(m,5H),2.32–2.12(m,3H),2.01-1.97(m,1H),1.88-1.76(m,9H),1.31-1.16(m,2H)。
实施例124：化合物124的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000677
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物124)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-N-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)picolinamide
将123D(265mg)与40A(219mg,0.56mmol)溶于DMF(10mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(245mg,1.29mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，真空浓缩；制备HPLC纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。向制备液中加入50mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物124(80mg，收率：13％)。
LCMS m/z＝486.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),10.83(s,1H),8.68(d,1H),8.49(s,1H),8.35–8.25(m,2H),8.12(s,1H),8.04(s,1H),7.93–7.82(m,2H),7.71(dd,,1H),7.61(s,1H),7.56(d,2H),7.50–7.34(m,4H),7.16(s,1H),6.87(s,1H),4.84–4.68(m,1H),3.95(d,2H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.00–2.71(m,7H),2.59–2.50(m,5H),2.31–2.10(m,3H),2.05-2.00(m,1H),1.92-1.72(m,9H),1.31-1.14(m,2H)。
实施例125：化合物125的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000678
Figure PCTCN2022090243-appb-000679
第一步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物125)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将77D(210mg,0.33mmol)和55B(158mg,0.40mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(188mg,0.99mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于40mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物125(100mg，收率：30％)。
LCMS m/z＝1004.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.84(s,1H),8.25–8.09(m,3H),7.98(s,1H),7.89(s,1H),7.65(d,1H),7.59(s,1H),7.36–7.28(m,1H),7.27–7.14(m,2H),6.83(s,1H),6.59–6.28(m,1H),5.06(dd,1H),4.11–3.97(m,2H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.05–2.78(m,7H),2.64–2.51(m,6H),2.25(d,2H),2.06–1.95(m,1H),1.95–1.79(m,4H),1.74(d,6H),1.30–1.08(m,2H),0.95–0.83(m,2H),0.56–0.45(m,2H)。
实施例126：化合物126的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000680
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶 -3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物126)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将77D(250mg,0.39mmol)和107A(170mg,0.47mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(223mg,1.17mmol)，氮气保护下100℃搅拌16h。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩。将浓缩液进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))，将制备所得冻干。将所得固体溶于40mL二氯甲烷，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，萃取，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物126(80mg，收率：21％)。
LCMS m/z＝480.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.30–10.80(m,2H),8.42–7.94(m,4H),7.89(s,1H),7.72–7.53(m,2H),7.42–7.14(m,3H),6.83(s,1H),6.56–6.38(m,1H),5.05(dd,1H),4.13–3.96(m,2H),3.83(s,3H),3.80(s,3H),3.05–2.78(m,7H),2.64–2.51(m,6H),2.25(d,2H),2.06–1.95(m,1H),1.93–1.78(m,4H),1.75(d,6H),1.29–1.08(m,2H),1.00–0.79(m,2H),0.59–0.38(m,2H)。
实施例127：化合物127的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000681
第一步：5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物127)
5-(4-((4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将77D(600mg,0.94mmol)和108B(372.83mg,1.03mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(536.42mg,2.82mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL水和20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物127的三氟乙酸盐，向化合物127的三氟乙酸盐中加入60mL二氯甲烷和30mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物127(260mg，收率：28.26％)。
LCMS m/z＝964.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.94(s,1H),8.40–8.27(m,1H),8.22–8.14(m,2H),7.95(s,1H),7.84(s,1H),7.65(d,1H),7.60(s,1H),7.55–7.41(m,1H),7.36–7.27(m,1H),7.23(dd,1H),7.04–6.90(m,2H),6.82(s,1H),5.06(dd,1H),4.10–3.97(m,2H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),3.07–2.79(m,7H),2.68–2.50(m,6H),2.28–2.17(m,2H),2.09–1.97(m,1H),1.92–1.79(m,3H),1.76(d,6H),1.27–1.08(m,2H)。
实施例128：化合物128的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000682
第一步：5-(4-((4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物128)
5-(4-((4-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将77D(600mg,0.94mmol)和109B(329.84mg,1.04mmol)溶于DMF(5mL)中，加入 对甲苯磺酸一水合物(536.42mg,2.82mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL水和20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物128的三氟乙酸盐，向化合物128的三氟乙酸盐中加入60mL二氯甲烷和30mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物128(200mg，收率：23.12％)。
LCMS m/z＝920.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.21(s,1H),11.05(s,1H),8.58–8.34(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.97(s,1H),7.85(s,1H),7.65(d,1H),7.62(s,1H),7.57–7.40(m,1H),7.31(s,1H),7.28–7.14(m,1H),7.07–6.90(m,2H),6.83(s,1H),5.06(dd,1H),4.23–3.93(m,2H),3.82(s,3H),3.81(s,3H),3.05–2.78(m,7H),2.67–2.50(m,6H),2.24(d,2H),2.08–1.94(m,1H),1.93–1.80(m,3H),1.76(d,6H),1.29–1.08(m,2H)。
实施例129：化合物129的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000683
第一步：9-(3-硝基苄基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(129A)
tert-butyl 9-(3-nitrobenzyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000684
将3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(3.0g,11.8mmol)，3-硝基苯甲醛(1.3g, 8.6mmol)溶于DMAC(30mL)中，加入醋酸1ml，室温搅拌1h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.1g,10mmol)，室温反应过夜，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用水(100mL×2)洗涤后经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到129A(3.5g，收率：76％)。
LCMS m/z＝390.3[M+H] +。
第二步：9-(3-氨基苄基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(129B)
tert-butyl 9-(3-aminobenzyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000685
将129A(3.5g,9.0mmol)、铁粉(5g,89.3mmol)、氯化铵(5g,93.5mmol)溶于乙醇(60mL)和水(20mL)中，80℃搅拌2h，之后冷却至室温，抽滤，滤液浓缩后加入60mL水，再用60ml二氯甲烷萃取，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到129B(3.0g，收率93％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝360.3[(M+H] +。
第三步：9-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苄基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(129C)
tert-butyl 9-(3-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)amino)benzyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000686
将129B(3.0g,8.36mmol)和3-溴代哌啶-2,6-二酮(3.96g,20.6mmol)溶于DMSO(40mL)中，加入碳酸氢钠(4.0g,47.6mmol)，100℃反应6h。冷却至室温，加入100mL乙酸乙酯和100mL水萃取，有机层用饱和食盐水洗涤(30mL x 3)。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯：石油醚(V/V)＝10/1-2/1)，得到129C(2.4g，收率：61％)。
LCMS m/z＝471.3[M+H] +。
第四步：3-((3-((3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基哌啶-2,6-二酮(129D) 的盐酸盐
3-((3-((3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000687
50mL圆底烧瓶中依次加入129C(1.0g，2.1mmol)，氯化氢的1,4-二氧六环溶液(30mL,4mol/L)，室温反应2h，减压浓缩干得129D的盐酸盐，直接用于下一步反应。
第五步：3-((3-((9-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(129E)
3-((3-((9-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000688
将化合物1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(0.6g,2.40mmol)，上一步得到的129D的盐酸盐和碳酸氢钠(1.0g,11.9mmol)，溶于20mL DMSO中，100℃反应3h，反应结束后冷却至室温，加入50mL水和50mL乙酸乙酯，分离乙酸乙酯层，水层用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到129E(0.8g，两步收率：63％)。
LCMS m/z＝600.2[M+H] +。
第六步：3-((3-((9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(129F)
3-((3-((9-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000689
氮气保护，50mL单口瓶瓶中加入129E(400mg，0.67mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(95.7mg，0.76mmol)，溶于20mL二氧六环和4mL水中，然后向其中加入 Pd(dppf)Cl 2·DCM(31mg，0.04mmol)和碳酸氢钠(96mg，1.14mmol)，氮气置换三次，100℃反应3h,降温至室温，将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)，得129F(180mg，收率45％)。
LCMS m/z＝602.3[M+H] +。
第七步：3-((3-((9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(129G)
3-((3-((9-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000690
将129F(180mg，0.30mmol)溶于甲醇(10mL)中，室温下加入钯碳10％(180mg)，氢气下反应2h，反应结束后硅藻土抽滤，滤液浓缩得129G(140mg，收率82％)。
LCMS m/z＝572.3[M+H] +。
第八步：3-((3-((9-(4-((5-溴-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物129)
3-((3-((9-(4-((5-bromo-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000691
将上一步得到的129G(140mg,0.25mmol)和23D(140mg,0.32mmol)，溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(114mg,0.6mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动 相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入50mL DCM后加入饱和碳酸氢钠溶液调节溶液至碱性，分离二氯甲烷层，水层用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物129(30mg，收率13％)。
LCMS m/z＝486.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.12(s,1H),10.75(s,1H),8.48–8.35(m,1H),8.30(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.68(dd,1H),7.59–7.47(m,3H),7.42(t,2H),7.33(t,1H),7.25–7.10(m,1H),7.03(t,1H),6.88(s,1H),6.65(s,1H),6.60–6.43(m,2H),5.78(d,1H),4.37–4.25(m,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.39–3.32(m,2H),2.86–2.70(m,5H),2.69–2.54(m,1H),2.41–2.22(m,4H),2.17–2.04(m,1H),1.98–1.78(m,7H),1.62–1.37(m,8H)。
实施例130：化合物130的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000692
第一步：3-((3-((9-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物130)
3-((3-((9-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
将129G(140mg,0.25mmol)和40A(140mg,0.74mmol)，溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(140mg,0.81mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和50mL二氯甲烷分层，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝100/1-20/1)，粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备液浓缩，加入50mL DCM后加入饱和碳酸氢钠溶液调节溶液至碱性，分离二氯甲烷层，水层用二氯甲烷萃取(2×30mL)，合并二氯甲烷 层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物130(20mg，收率8.8％)。
LCMS m/z＝464.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),10.75(s,1H),8.52–8.43(m,1H),8.30(s,1H),8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.69(dd,1H),7.60-7.48(m,3H),7.42(t,2H),7.33(t,1H),7.23–7.12(m,1H),7.03(t,1H),6.89(s,1H),6.65(s,1H),6.61–6.45(m,2H),5.78(d,1H),4.36–4.25(s,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.40–3.30(m,2H),2.88–2.69(m,6H),2.65–2.54(m,1H),2.42–2.25(m,4H),2.17–2.07(m,1H),1.96–1.77(m,7H),1.62–1.42(s,7H)。
实施例131：化合物131的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000693
第一步：4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(131B)
tert-butyl 4-(4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000694
将131A(14.1g,10mmol)，1-叔丁氧羰基哌嗪(18.6g,10mmol)，溶于DMF(100mL)中，加入碳酸钾(34.5g,25mmol)，50℃反应3h，反应液冷却至室温，加入100mL水，有黄色固体析出，抽滤，滤饼用石油醚(300mL)打浆，抽滤，滤饼减压浓缩后得到131B(29.2g,收率：95％)。
LCMS m/z＝252.2[M-55] +。
第二步：4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(131C)
tert-butyl 4-(4-aminophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000695
将131B(11.9g,38.8mmol)、钯碳(1.2g，10wt％)溶于60mL甲醇与60mL四氢呋喃中，然后氢气置换三次后，室温反应8h，硅藻土抽滤，滤液减压浓缩，得到131C(10.7g，收率：100％)。
LCMS m/z＝278.2[M+H] +。
第三步：4-(4-((3-乙氧基-3-氧丙基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(131D)
tert-butyl 4-(4-((3-ethoxy-3-oxopropyl)amino)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000696
将乳酸(7.2g,80mmol)滴加到1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(12.2g，80mmol)的乙醚(100ml)溶液中，室温搅拌过夜，减压浓缩后溶于1,4-二氧六环(200mL)中，依次加入131C(10.7g,38.6mmol)，丙烯酸乙酯(8g,80mmol)，90℃反应24h。反应完后冷却至室温，用300mL乙酸乙酯和200mL水萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝20/1-4/1)得到131D(7.3g，收率：50％)。
LCMS m/z＝378.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ6.91–6.71(m,2H),6.69–6.39(m,2H),4.08(q,2H),3.61–3.45(m,4H),3.43–3.24(m,2H),3.08–2.80(m,4H),2.57–2.48(m,2H),1.41(s,9H),1.19(t,3H)。
第四步：4-(4-(N-(3-乙氧基-3-氧代丙基)氰胺基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(131E)
tert-butyl4-(4-(N-(3-ethoxy-3-oxopropyl)cyanamido)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000697
将131D(7.3g,19.4mmol)和溴氰(4.24g,40mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入碳酸氢钠(10.08g,120mmol)，氮气保护，室温反应3h。反应完后，用200mL乙酸乙酯和100 mL水萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到131E(6.5g，收率：83.5％)。
LCMS m/z＝403.3[M+H] +。
第五步：4-(4-(1-(3-乙氧基-3-氧丙基)脲基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(131F)
tert-butyl 4-(4-(1-(3-ethoxy-3-oxopropyl)ureido)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000698
将131E(6.5g,16.2mmol)溶于甲苯(100mL)中，依次加入乙醛肟(2.95g,50mmol)，氯化铟(Ⅲ)四水合物(1.46g,5mmol)，130℃反应3h。冷却至室温，加入100mL乙酸乙酯和100mL饱和碳酸氢钠水溶液后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-10/1)得到131F(5.6g，82.5％)。
LCMS m/z＝421.2[M+H] +。
第六步：4-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(131G)
tert-butyl 4-(4-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000699
将131F(5.6g,13.3mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入苄基三甲基氢氧化铵(40％甲醇溶液)(8.3g,20mmol)，氮气保护，90℃反应15min。反应完后，冷却至室温，用150mL乙酸乙酯和60mL水萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到131G(3.7g，收率：74％)。
LCMS m/z＝375.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.64(s,1H),7.11(d,2H),6.86(d,2H),3.74(t,2H),3.63–3.45(m,4H),3.16–3.02(m,4H),2.74(t,2H),1.41(s,9H)。
第七步：1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131H)
1-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000700
将131G(3.7g,9.9mmol)溶于DCM(40mL)，室温下加入三氟乙酸(10mL)，搅拌3h， 减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝7-8，减压浓缩后得到131H(2.7g)，直接用于下一步。
第八步：4-((4-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(131I)
tert-butyl 4-((4-(4-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000701
将131H(1.37g,5mmol)，1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛混合于二氯甲烷(20mL)与2ml醋酸中，室温搅拌10min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.12g,10mmol)，室温下搅拌0.5h。加入100mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝7-8后分层，有机层减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1-10/1)得到131I(1.3g,收率55％)。
LCMS m/z＝472.1[M+H] +。
第九步：1-(4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131J)的三氟乙酸盐
1-(4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione；Trifluoroacetate
Figure PCTCN2022090243-appb-000702
将131I(1.3g,2.76mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌3h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第十步：1-(4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131K)
1-(4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000703
将上一步的131J三氟乙酸盐粗品溶于DMSO(25mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(828mg,3.3mmol)和碳酸氢钠(2.77g,33mmol)，100℃搅拌12h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到131K(1.1g，收率：66％)。
LCMS m/z＝603.3[M+H] +。
第十一步：1-(4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(131L)
1-(4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000704
将131K(1.1g,1.83mmol)溶于乙醇/水(20mL，3:1)中，依次加入铁粉(530mg，9.5mmol)，氯化铵(500mg，9.3mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到131L，黄色固体(860mg，收率：82.3％)。
LCMS m/z＝573.4[M+H] +。
第十二步：1-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物131)
1-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000705
将131L(200mg,0.35mmol)和107A(178mg,0.5mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物131的三氟乙酸盐，向化合物131的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物131(80mg，收率：25.6％)。
LCMS m/z＝446.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.15(s,1H),8.00–7.89(m,3H),7.86(s,1H),7.66–7.45(m,4H),7.34(s,1H),7.20(d,1H),6.88(d,1H),4.19–3.98(m,10H),3.98–3.69(m,10H),3.44–3.23(m,2H),2.97–2.84(m,2H),2.62–2.45(m,1H),2.37–2.19(m,2H),2.12–1.98(m,2H),1.97–1.81(m,7H),1.15–1.00(m,2H),0.70–0.53(m,2H)。
实施例132：化合物132的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000706
第一步：(1-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物132)
1-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
将131L(200mg,0.35mmol)和109B(158mg，0.5mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入 20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物132的三氟乙酸盐，向化合物132的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物132(60mg，收率：20.2％)。
LCMS m/z＝426.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.20(s,1H),8.00–7.91(m,2H),7.88–7.78(m,2H),7.66–7.47(m,5H),7.42–7.25(m,2H),7.18(t,1H),4.18(s,3H),4.13–4.03(m,7H),3.98–3.77(m,10H),3.43–3.31(m,2H),2.93(t,2H),2.66–2.46(m,1H),2.38–2.21(m,2H),2.15–1.99(m,2H),1.94(d,6H)。
实施例133：化合物133的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000707
第一步：1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮(133A)
1-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000708
将131G(2.4g,6.41mmol)溶于DCM(20mL)，室温下加入三氟乙酸(20mL)，搅拌3h，减压浓缩，残留物加入20mL二氯甲烷，用1N NaOH水溶液调节pH＝9-10，分液，有机层减压浓缩后得到133A粗品(1.5g)。
第二步：4-(4-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(133B)
tert-butyl 4-(4-(4-(2,4-dioxotetrahydropyrimidin-1(2H)-yl)phenyl)piperazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000709
将133A(1.5g)，4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g,6.56mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，依次加入醋酸(394mg,6.56mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.7g,8.21mmol)，室温反应过夜，加入1N氢氧化钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1至二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到133B(1.2g，收率：48％)。
LCMS m/z＝458.3[M+H] +。
第三步：1-(4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(133C)的三氟乙酸盐
1-(4-(4-(piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione；trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2022090243-appb-000710
将133B(1.2g,2.62mmol)溶于DCM(15mL)，室温下加入三氟乙酸(15mL)，室温搅拌1h，减压浓缩，残留物直接用于下一步。
第四步：1-(4-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(133D)
1-(4-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000711
将上一步的133C三氟乙酸盐粗品溶于DMSO(10mL)中，依次加入4-(2-氟-4-甲氧基 -5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(942mg,3.75mmol)和碳酸氢钠(1.7g,20mmol)，100℃搅拌7h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到133D，黄色固体(0.3g，收率：20％)。
LCMS m/z＝589.3[M+H] +。
第五步：1-(4-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(133E)
1-(4-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000712
将133D(0.3g,0.51mmol)溶于乙醇/水(8mL，3:1)中，依次加入铁粉(142mg，2.55mmol)，氯化铵(136mg，2.55mmol)，氮气保护，80℃搅拌1h。冷却至室温，减压抽滤，滤液减压浓缩后，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到133E(220mg，收率：77％)。
第六步：1-(4-(4-(1-(4-(5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物133)
1-(4-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000713
将133E(90mg,0.16mmol)和107A(76mg,0.21mmol)，溶于DMF(4mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(61mg,0.32mmol)，氮气保护下100℃过夜反应。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，残留物继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动 相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化得到化合物133的三氟乙酸盐。将所得固体加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中并用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到化合物133(15mg，白色固体，收率：11％)。
LCMS m/z＝439.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.24(s,1H),8.05(s,1H),7.99(s,1H),7.95(dd,1H),7.64–7.54(m,3H),7.52–7.45(m,2H),7.17(d,1H),6.98(s,1H),6.79–6.71(m,1H),4.14(s,3H),4.10–4.00(m,4H),3.97–3.81(m,9H),3.62–3.52(m,1H),3.49–3.37(m,2H),3.14–3.00(m,2H),2.93-2.83(m,2H),2.45–2.32(m,2H),2.19-2.05(m,2H),1.93–1.78(m,7H),1.08–0.97(m,2H),0.55–0.46(m,2H)。
实施例134：化合物134的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000714
第一步：1-(4-(4-(1-(4-((5-氯-4-(2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物134)
1-(4-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
将133E(90mg,0.16mmol)和109B(76mg,0.24mmol)，溶于DMF(4mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(61mg,0.32mmol)，氮气保护下100℃过夜反应。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，残留物继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈流动相B：水(含0.1％TFA))纯化得到化合物134的三氟乙酸盐。将所得固体 加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中并用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到化合物134(31mg，白色固体，收率：23％)。
LCMS m/z＝419.8[(M+H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.23–8.19(m,1H),8.13–8.05(m,3H),7.73–7.67(m,1H),7.67–7.58(m,2H),7.59–7.47(m,3H),7.33–7.25(m,1H),7.21–7.12(m,1H),7.08(s,1H),4.19(s,3H),4.16–4.04(m,4H),4.03–3.88(m,7H),3.74–3.63(m,1H),3.59–3.49(m,1H),3.30–3.17(m,1H),3.04–2.87(m,4H),2.52–2.38(m,1H),2.30–2.13(m,1H),1.95(s,3H),1.91(s,3H),1.89–1.76(m,2H),0.68–0.58(m,2H)。
实施例135：化合物135的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000715
第一步：4-(4-(2-甲氧基-2-氧乙基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(135A)
tert-butyl 4-(4-(2-methoxy-2-oxoethyl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000716
氮气保护，500mL单口瓶中加入2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(10.0g,43.65mmol)，叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(12.2g,65.47mmol)，溶于300mL 1,4-二氧六环中，然后向其中加入S-(-)-1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(2.72g，4.37mmol)，醋酸钯(0.98g，4.37mmol)和碳酸铯(35.56g，109.13mmol)，氮气置换三次，100℃反应16h。降温至室温，将反应液过滤， 除去残渣，滤液浓缩后加入乙酸乙酯溶解，加入水，然后乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，得135A(9.5g，收率65％)。
LCMS m/z＝335.1[M+H] +。
第二步：4-(4-(4-氰基-1-甲氧基-1-氧代丁烷-2-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(135B)
tert-butyl 4-(4-(4-cyano-1-methoxy-1-oxobutan-2-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000717
将化合物135A(8.0g,23.95mmol)溶于甲苯(80mL)中，加入烯丙基腈(1.93g,28.7mmol)和苄基三甲基氢氧化铵的甲醇溶液(wt％＝40％,501mg，1.2mmol)，室温下搅拌过夜，加入50mL水和100mL乙酸乙酯，萃取分液，收集有机相，减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝6/1-3/1)得到135B(2.2g，收率24％)。
LCMS m/z＝388.2[M+H] +。
第三步：4-(4-(5-氨基-1-甲氧基-1,5-二氧戊烷-2-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(135C)
tert-butyl 4-(4-(5-amino-1-methoxy-1,5-dioxopentan-2-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000718
将135B(2.2g,5.68mmol)溶于甲苯(20mL)中，加入乙醛肟(1.0g,17.0mmol)和氯化铟的四水合物(832mg，2.84mmol)，130℃搅拌3h。冷却至室温后加入50mL乙酸乙酯和20mL水，萃取分液，收集有机相，加入饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到135C(1.0g，收率43％)。
LCMS m/z＝406.3[M+H] +。
第四步：4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(135D)
tert-butyl 4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000719
将135C(1.0g,2.47mmol)溶于乙腈(20mL)中，升温至60℃，向反应液中滴加苄基三甲基氢氧化铵的甲醇溶液(wt％＝40％,2.06g，4.94mmol)，搅拌20min。冷却至室温，加入20mL水和50mL二氯甲烷萃取，收集有机层，加入20mL水洗涤，加入无水硫酸钠干燥有机相，过滤，滤液减压浓缩，残留物柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-25/1)得到135D(420mg，收率：46％)。
LCMS m/z＝374.3[M+H] +。
第五步：3-(4-(哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135E)的盐酸盐
3-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000720
将135D(400mg,1.07mmol)溶解在1mL甲醇中，加入4N盐酸/二氧六环溶液(3mL)，室温搅拌1h。将反应液减压浓缩，得到135E的盐酸盐粗品，直接用于下一步。
第六步：4-((4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(135F)
tert-butyl 4-((4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000721
将135E的盐酸盐的粗品溶于10mL甲醇中，加入碳酸氢钠(180mg,2.14mmol)的水(0.2mL)溶液，室温搅拌10min，减压浓缩除尽水分，加入二氯甲烷(20mL)和醋酸(2mL)的混合溶液将其溶解，加入1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(227mg,1.07mmol)，室温下搅拌1h，再向其中加入三乙酰基硼氢化钠(677mg,3.21mmol)，室温下继续搅拌2h。加入20mL二氯甲烷和5mL 1N氢氧化钠水溶液后分层，收集有机层，减压干燥，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到135F(300mg，收率：60％)。
LCMS m/z＝471.2[M+H] +。
第七步：3-(4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135G)的盐酸盐
3-(4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione；HCl
Figure PCTCN2022090243-appb-000722
将135F(300mg,0.64mmol)溶解在0.5mL甲醇中，加入4N盐酸/二氧六环溶液(3mL)，室温搅拌1h。将反应液减压浓缩，得到135G的盐酸盐粗品，直接用于下一步。
第八步：3-(4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135H)
3-(4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000723
将135G的盐酸盐粗品溶于10mL二甲基亚砜中，加入碳酸氢钠(538mg,6.4mmol)固体，室温搅拌10min后，继续加入4-(2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(1D)(161mg,0.64mmol)，100℃反应过夜。将反应液冷却至室温，加入30mL乙酸乙酯稀释后，加水(20mL×3)洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(流动相：DCM/MeOH(V/V)＝15/1)得到135H(180mg，两步收率：47％)。
LCMS m/z＝602.3[M+H] +。
第九步：3-(4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(135I)
3-(4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000724
将135H(180mg,0.3mmol)溶于四氢呋喃(12mL)中，加入氯化铵(80mg,1.5mmol)的水(2mL)溶液，加入锌粉(98mg,1.5mmol)，室温反应20min，反应液经过硅藻土过滤，滤液中加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，再用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经 无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到135I(130mg，收率：74％)。
LCMS m/z＝286.7[(M+2H)/2] +。
第十步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物135)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000725
将135I(130mg,0.23mmol)和109B(79mg,0.25mmol)，溶于DMF(3mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(131mg,0.69mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(10ml×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到化合物135)(19mg，收率：10％)。
LCMS m/z＝426.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.19(s,1H),10.75(s,1H),8.50–8.36(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.57–7.44(m,1H),7.29–7.12(m,1H),7.11–7.03(m,2H),7.02–6.96(m,1H),6.93–6.86(m,2H),6.81(s,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.73(dd,1H),3.18–3.03(m,6H),2.73–2.57(m,3H),2.54–2.40(m,5H),2.36–2.22(m,2H),2.20–2.06(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.83–1.71(m,8H),1.69–1.60(m,1H),1.39–1.27(m,2H)。
实施例136：化合物136的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000726
第一步：1-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(化合物136)
1-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
将131L(200mg,0.35mmol)和40A(156mg,0.4mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(228mg,1.2mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物136的三氟乙酸盐，向化合物136的三氟乙酸盐中加入20mL二氯甲烷和50mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物136(100mg，收率：30.9％)。
LCMS m/z＝928.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.49–8.42(m,1H),8.42–8.35(m,1H),8.33–8.25(m,1H),8.08–7.99(m,2H),7.99–7.89(m,1H),7.88–7.77(m,6H),7.76–7.69(m,3H),7.60–7.48(m,2H),4.40–3.66(m,20H),3.62–3.46(m,2H),3.19–3.05(m,2H),2.77–2.60(m,1H),2.47–2.33(m,2H),2.28–2.12(m,8H)。
实施例137：化合物137的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000727
第一步：1-(4-(4-(1-(4-(5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯基]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)二氢嘧啶 -2,4(1H，3H)-二酮(化合物137)
1-(4-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)dihydropyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
将133E(70mg,0.13mmol)和40A(78mg,0.20mmol)，溶于DMF(4mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(49mg,0.26mmol)，氮气保护下100℃过夜反应。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，残留物继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈流动相B：水(含0.1％TFA))纯化得到化合物137的三氟乙酸盐。将所得固体加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中并用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到化合物137(17mg，收率：14％)。
LCMS m/z＝457.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.21(s,1H),8.10(d,3H),7.69(s,1H),7.62(d,2H),7.59–7.47(m,3H),7.29(t,1H),7.17(t,1H),7.08(s,1H),4.20(s,3H),4.16–4.03(m,5H),4.00–3.86(m,9H),3.54(d,2H),3.24(t,2H),2.93(t,2H),2.46(d,2H),2.29–2.16(m,2H),1.94(d,6H)。
实施例138和实施例139：化合物138和化合物139的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000728
取500mg化合物65使用SFC制备分离纯化。SFC制备分离条件：仪器：Waters 150 MGM；色谱柱：DAICEL CHIRALCEL AD(250mm×30mm,10μm)；流动相：A for CO 2and B for IPA+ACN(0.1％NH 3·H 2O)；梯度：70％phase B isocratic elution；流速：100mL/min；背压：100bar；柱温：35℃；波长：220nm。
SFC分析条件：仪器：SHIMADZU LC-30AD sfc；色谱柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流动相：A for CO 2and B for IPA+ACN(0.05％DEA)；梯度：B 60％；流速：3mL/min；背压：100bar；柱温：35℃；波长：220nm。
经制备分离后，合并相同保留时间的组分，减压浓缩得到化合物138(220mg)和化合物139(200mg)。
化合物138：
SFC分析条件下保留时间1.6min，
LCMS m/z＝498.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.58–8.40(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.78–7.64(m,2H),7.63–7.52(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,2H),7.27(dd,1H),7.22–7.10(m,1H),6.86(s,1H),5.07(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.57–3.39(m,4H),3.15–3.00(m,2H),2.97–2.77(m,1H),2.72–2.51(m,8H),2.35–2.21(m,2H),2.07–1.94(m,1H),1.91–1.71(m,8H),1.70–1.56(m,1H),1.40–1.26(m,2H)。
化合物139：
SFC分析条件下保留时间2.5min，
LCMS m/z＝498.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),11.06(s,1H),8.58–8.41(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.75–7.65(m,2H),7.62–7.51(m,3H),7.45(t,2H),7.36(t,2H),7.28(dd,1H),7.22–7.09(m,1H),6.86(s,1H),5.07(dd,1H),3.80(s,3H),3.76(s,3H),3.55–3.39(m,4H),3.14–3.01(m,2H),2.99–2.79(m,1H),2.69–2.51(m,8H),2.35–2.23(m,2H),2.06–1.96(m,1H),1.90–1.72(m,8H),1.70–1.57(m,1H),1.40–1.26(m,2H)。
实施例140：化合物140的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000729
第一步：3-(5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(化合物140)
3-(5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-1-oxo isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione
将105G(300mg,0.48mmol)和109B(228mg,0.72mmol)，溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(182mg,0.96mmol)，氮气保护下100℃过夜反应。冷却至室温，加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL二氯甲烷萃取，有机层减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)，残留物继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈流动相B：水(含0.1％TFA))纯化得到化合物140的三氟乙酸盐。将所得固体加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中并用二氯甲烷(40mL x 3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到化合物140(150mg，收率：35％)。
LCMS m/z＝906.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ11.21(s,1H),10.93(s,1H),8.44(s,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.85(s,1H),7.61(s,1H),7.56–7.45(m,2H),7.10–7.04(m,2H),7.04–6.90(m,2H),6.81(s,1H),5.05(dd,1H),4.45–4.14(m,2H),3.81(d,6H),3.09(d,2H),2.90(ddd,1H),2.68–2.54(m,3H),2.29(d,2H),2.03–1.91(m,1H),1.88–1.71(m,8H)。
实施例141：化合物141的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000730
第一步：(2-氨基-5-氟苯基)二甲基氧化膦(141A)
(2-amino-5-fluorophenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000731
将4-氟-2-碘苯胺(5.00g,21.10mmol)、二甲基氧化膦(2.14g,27.43mmol)、磷酸钾(6.72g,31.65mmol)、醋酸钯(0.24g,1.06mmol)、Xant-Phos(0.61g,1.06mmol)和无水硫酸镁(2.54g,21.1mmol)依次加入到1,4-二氧六环(50ml)中，氮气置换三次，100℃搅拌8h。冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，残留物柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚(V/V)＝1/1～二氯 甲烷/甲醇(V/V)＝30/1)得到141A(3g，收率：76％)。
LCMS m/z＝188.1[M+H] +。
第二步：(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦(141B)
(2-((5-bromo-2-chloropyrimidin-4-yl)amino)-5-fluorophenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000732
将141A(1.50g,7.97mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(3.63g,15.94mmol)溶于NMP(10ml)，加入DIPEA(1.24g,9.56mmol)，120℃搅拌1h。冷却至室温，加入30mL水和30mL乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次。减压浓缩，残留物用10mL MTBE打浆，过滤，减压干燥得到141B(1.5g，收率：50％)。
LCMS m/z＝378.0[M+H] +。
第三步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物141)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000733
将45F(1.20g,1.87mmol)和141B(0.71g,1.87mmol)溶于DMF(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水化合物(0.71g,3.74mmol)，100℃搅拌过夜。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，析出固体，过滤，滤饼干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/3-100/5)。所得残留物加入8mL乙腈，70℃搅拌1h。过滤，滤饼减压干燥得到化合物141(0.44g，收率：24％)。
LCMS m/z＝491.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.06(s,1H),10.78(s,1H),8.30(s,1H),8.17(s,1H),8.16(s,1H),7.98(s,1H),7.82(s,1H),7.68(d,1H),7.61(s,1H),7.44–7.36(m,1H),7.34(d,1H),7.26(d,1H),6.81(s,1H),6.68(s,1H),5.11-5.03(m,1H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.49-3.40(m,4H),3.13-3.02(m,2H),2.95-2.81(m,1H),2.70-2.45(m,8H),2.29(d,2H),2.06-1.97(m,1H),1.78(d,6H),1.84-1.60(m,3H),1.39-1.27(m,2H)。
实施例142：化合物142的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000734
第一步：(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦(142A)
(2-((2,5-dichloropyrimidin-4-yl)amino)-5-fluorophenyl)dimethylphosphine oxide
Figure PCTCN2022090243-appb-000735
将141A(1.50g,7.97mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(2.92g,15.94mmol)溶于NMP(10ml)，加入DIPEA(1.24g,9.56mmol)，120℃搅拌1h。冷却至室温，加入30mL水和30mL乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次。减压浓缩，残留物用10mL MTBE打浆，过滤，减压干燥得到142A(1.4g，收率：52％)。
LCMS m/z＝334.0[M+H] +。
第二步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2-氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物142)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000736
将45F(1.20g,1.87mmol)和142A(0.62g,1.87mmol)溶于DMF(10ml)中，加入对甲苯磺酸一水化合物(0.71g,3.74mmol)，100℃搅拌过夜。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，析出固体，过滤，滤饼干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/3-100/5)。所得残留物加入8mL乙腈，70℃搅拌1h。过滤，滤饼减压干燥得到化合物142(0.8g，收率：45％)。
LCMS m/z＝469.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.08-11.03(m,1H),8.42(s,1H),8.17(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.83(s,1H),7.68(d,1H),7.62(s,1H),7.46-7.38(m,1H),7.34(d,1H),7.26(d,1H),6.81(s,1H),6.67(s,1H),5.10-5.03(m,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H)3.49-3.40(m,4H),3.15-3.01(m,2H),2.96-2.79(m,1H),2.70-2.45(m,8H),2.29(d,2H),2.05-1.97(m,1H),1.79(d,6H),1.84-1.60(m,3H),1.41-1.28(m,2H)。
实施例143：化合物143的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000737
第一步：4-(1-(苄氧基)羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(143A)
tert-butyl4-(1-((benzyloxy)carbonyl)piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000738
将N-Cbz-哌啶-4-羧酸(7.80g，29.63mmol)，N-Boc-哌嗪(5.52g，29.63mmol)，HOBT(4.40g，32.59mmol)和二氯甲烷(80mL)加入反应瓶中，冰水浴冷却下，加入EDCI(8.52g，44.44mmol)，加完室温反应3h。反应液饱和碳酸氢钠溶液(100mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂DCM/CH 3OH＝50/1至20/1，得143A(10g，收率：78.2％)。
第二步：4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(143B)
tert-butyl 4-(piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000739
将143A(10g，23.17mmol)，甲醇(100mL)和钯碳(2g)加入反应瓶中，氢气换气三次，室温反应约18h，铺适量硅藻土，抽滤，滤饼少量甲醇洗涤，滤液减压浓缩干，加入MTBE(50mL)搅拌打浆30min，减压抽滤，滤饼减压浓缩干，得143B(6.30g，收率：91.4％)。
第三步：4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(143C)
tert-butyl 4-(1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000740
将143B(6.30g，21.18mmol)，1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C，5.30g，21.18mmol)，碳酸钾(4.39g，31.77mmol)和DMSO(70mL)加入反应瓶中，100℃反应2-3h，将反应液冷却至室温，加入甲醇(35mL)，滴入水(200mL)，加完搅拌1h，抽滤，滤饼少量水洗，抽干后滤饼转移至反应瓶中，加入MTBE(100mL)，搅拌下滴入石油醚(50mL)，搅拌打浆1h，抽滤，滤饼少量石油醚洗涤，减压浓缩干，得143C(10g，收率：89.5％)。
第四步：4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(143D)
tert-butyl 4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000741
将143C(10g，18.96mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(3.58g，28.44mmol)，Pd(dppf)Cl 2·DCM(2.31g，2.84mmol)，碳酸钾(8.14g，56.88mmol)和1,4-二氧六环(100mL)，水(30mL)加入反应瓶中，氮气换气三次，100℃反应3h左右。水浴冷却，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，搅拌分层，有机层饱和氯化钠溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至30/1，得143D(8.2g，收率：81.81％)。
第五步：(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)(哌嗪-1-基)甲酮(143E)
(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)(piperazin-1-yl)methanone
Figure PCTCN2022090243-appb-000742
将143D(8.2g，15.51mmol)和DCM(40mL)加入反应瓶中，搅拌下加入三氟乙酸(16mL)，室温反应过夜，约16h。反应液减压浓缩干，残余物加入二氯甲烷(50mL)，滴入1N氢氧化钠溶液调pH 12-13，分层，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，得143E(6.2g，收率：93.3％)。
第六步：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(143F)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(4-(1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000743
将143E(4.0g，9.34mmol)、2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-5-氟-异吲哚-1,3-二酮(2.58g，9.34mmol)、DIPEA(1.81g，14.01mmol)和DMSO(40mL)加入反应瓶中，90℃反应3h，冰水冷却，加入乙酸乙酯(150mL)和水(100mL)，搅拌5min，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至20/1，得143F(3g，收率：46.9％)。
第七步：5-(4-(1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(143G)
5-(4-(1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000744
将143F(2g，2.92mmol)，锌粉(0.95g，14.60mmol)，氯化铵(0.78g，14.60mmol)，四氢呋喃(20mL)和水(8mL)加入反应瓶中，室温反应1h，加入二氯甲烷(50mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌2min，铺适量硅藻土，抽滤，二氯甲烷(30mL×2)洗涤，滤液分层，有机层水(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，得143G(黄色固体，1.6g，收率：83.7％)。
第八步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物143)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000745
将143G(0.4g，0.61mmol)，107A(0.22g，0.61mmol)，一水合对甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，100℃反应约18h，冰水冷却下加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(20mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH3OH＝DCM至50/1至30/1至20/1，得化合物143(0.23g，收率：38.7％)。
LCMS m/z＝487.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(s,1H),11.07(s,1H),8.29–8.21(m,1H),8.14(s,1H),8.07(s,1H),7.96(s,1H),7.91(s,1H),7.71(d,1H),7.62(s,1H),7.36(d,1H),7.29-7.20(m,2H),6.82(s,1H),6.53-6.33(m,1H),5.12-5.04(m,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.76-3.63(m,4H),3.58-3.45(m,4H),3.17-3.07(m,2H),2.95–2.67(m,4H),2.64–2.45(m,2H),2.07–2.00(m,1H),1.85–1.72(m,11H),0.95–0.88(m,2H),0.54-0.48(m,2H)。
实施例144：化合物144的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000746
第一步：5-(4-(1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物144)
5-(4-(1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将143G(0.4g，0.61mmol)，(2-((2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(109B，0.22g，0.61mmol)，一水合对甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，100℃反应约18h后，冰水冷却下加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(20mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至30/1至20/1，得化合物144(0.26g，收率：45.55％)。
LCMS m/z＝467.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.22(s,1H),11.07(s,1H),8.50-8.39(m,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.93(s,1H),7.87(s,1H),7.71(d,1H),7.63(s,1H),7.55–7.46(m,1H),7.36(d,1H),7.28-7.22(m,1H),7.05–6.91(m,2H),6.81(s,1H),5.12-5.04(m,1H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),377-3.61(m,4H),3.57-3.43(m,4H),3.17-3.07(m,2H),2.96–2.66(m,4H),2.64–2.45(m,2H),2.08–1.98(m,1H),1.86-1.68(m,10H)。
实施例145：化合物145的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000747
Figure PCTCN2022090243-appb-000748
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物145)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将143G(0.4g，0.61mmol)，55B(0.24g，0.61mmol)，一水合对甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，100℃反应约18h后，冰水冷却下加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(20mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至30/1至20/1，所得粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备产物以饱和碳酸氢钠水溶液碱化游离得到化合物145(0.06g，收率：9.65％)。
LCMS m/z＝509.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.06(s,1H),10.84(s,1H),8.20-8.10(m,3H),7.94(s,1H),7.91(s,1H),7.71(d,1H),7.60(s,1H),7.37(d,1H),7.29–7.19(m,2H),6.81(s,1H),6.54-6.35(m,1H),5.12-5.03(m,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.75-3.63(m,4H),3.58-3.45(m,4H),3.16-3.07(m,2H),2.96–2.67(m,4H),2.65–2.45(m,2H),2.06–1.99(m,1H),1.85-1.71(m,11H),0.94-0.87(m,2H),0.53-0.47(m,2H)。
实施例146：化合物146的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000749
Figure PCTCN2022090243-appb-000750
第一步：5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物146)
5-(4-(1-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidine-4-carbonyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将143G(0.4g，0.61mmol)，108B(0.22g，0.61mmol)，一水合对甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，100℃反应约18h后，冰水冷却下加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(20mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至30/1至20/1，所得粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化后的产物以饱和碳酸氢钠水溶液碱化游离得到化合物146(0.09g，收率：15％)。
LCMS m/z＝489.6[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.06(s,1H),10.95(s,1H),8.40-8.28(m,1H),8.18(s,2H),7.91(s,1H),7.86(s,1H),7.71(d,1H),7.61(s,1H),7.53-7.44(m,1H),7.36(d,1H),7.29-7.23(m,1H),7.05-6.90(m,2H),6.80(s,1H),5.11-5.03(m,1H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),3.75-3.63(m,4H),3.57-3.45(m,4H),3.16-3.07(m,2H),2.94-2.66(m,4H),2.65–2.45(m,2H),2.05–1.97(m,1H),1.83-1.70(m,10H)。
实施例147：化合物147的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000751
Figure PCTCN2022090243-appb-000752
第一步：4-氟-4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(147A)
tert-butyl 4-fluoro-4-formylpiperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000753
将1-叔丁氧羰基-4-氟-4-(羟甲基)哌啶(14g，60.01mmol)和二氯甲烷(210mL)加入反应瓶中，搅拌溶清后，冰水冷却下加入戴斯-马丁试剂(80.91g，120.02mmol)，室温反应约3h，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)，搅拌5min，铺适量硅藻土，抽滤，滤饼二氯甲烷(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后残余物柱层析纯化(洗脱剂PE/EA＝1/1)得147A(5g，收率：36.03％)。
第二步：苄基4-(1-(叔丁氧基羰基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(147B)
benzyl 4-((1-(tert-butoxycarbonyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000754
将147A(5g，21.62mmol)，苄基-1-哌嗪碳酸酯(4.76g，21.62mmol)和二氯甲烷(100mL)加入反应瓶中，搅拌下加入冰乙酸(2.59g，43.24mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(11.45g，54.05mmol)，室温过夜反应约18h，加入水(100mL)，搅拌5min，静置分层，有机层饱和碳酸氢钠溶液(100mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂PE/EA＝2/1，得147B(6.2g，收率：65.84％)。
第三步：4-(4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(147C)
benzyl 4-((4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000755
将147B(6.2g，14.24mmol)和二氯甲烷(30mL)加入反应瓶中，搅拌溶解，滴入三氟乙酸(12mL)，加完室温反应3h，减压浓缩干，残余物加入DCM(50mL)，1N氢氧化钠溶液调pH 12左右，静置分层；水层DCM(30mL)提取一次，有机层合并，饱和氯化钠溶液(60mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，得147C(4.2g，收率：87.93％)。
第四步：苄基4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(147D)
benzyl 4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000756
将147C(4.2g，12.52mmol)，1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C，3.13g，12.52mmol)，碳酸钾(3.46g，25.04mmol)和DMSO(40mL)加入反应瓶中，100℃反应3h左右，冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后，硅胶柱层析纯化(洗脱剂PE/EA＝PE至5/1至3/1至2/1)，得147D(5g，收率：70.63％)。
第五步：苄基4-((4-氟-1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(147E)
Benzyl 4-((4-fluoro-1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000757
将147D(5g，8.84mmol)，1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(1.67g，13.26mmol)，Pd(dppf)Cl 2·DCM(1.07g，1.33mmol)，碳酸钾(2.44g，17.68mmol)和1,4-二氧六环(50mL)，水(20mL)加入反应瓶中，氮气换气三次，100℃反应3h左右，水浴冷却，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，搅拌分层，有机层饱和氯化钠溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至30/1，得147E(4.1g，收率：81.85％)。
第六步：4-(4-氟-4-(哌啶-4-基甲基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺(147F)
4-(4-fluoro-4-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-1-yl)-2-methoxy-5-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)aniline
Figure PCTCN2022090243-appb-000758
将147E(0.5g，0.88mmol)，Pd/C(0.1g)，甲醇(5mL)和冰乙酸(1mL)加入反应瓶中，氢气换气三次，室温氢化反应约20h，铺适量硅藻土，过滤，滤饼少量甲醇洗涤，滤液减压浓缩干，得147F，直接用于下一步。
第七步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(147G)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000759
将147F(0.35g，0.88mmol)，2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-5-氟-异吲哚-1,3-二酮(0.24g，0.88mmol)，DIPEA(0.17g，1.32mmol)和DMSO(5mL)加入反应瓶中，100℃反应3h，冰水冷却，加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，搅拌5min，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至30/1，得147G(0.10g，收率：17.45％)。
第八步：5-(4-((1-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物147)
5-(4-((1-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-4-fluoropiperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000760
将147G(0.10g，0.15mmol)，(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(55B，0.06g，0.15mmol)，一水合对甲苯磺酸(0.057g，0.30mmol)和DMF(2mL)加入反应瓶中，100℃反应约18h，水冷却下加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至30/1，得化合物147(0.09g，收率：58.66％)。
LCMS m/z＝511.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.06(s,1H),10.84(s,1H),8.22–8.10(m,3H),7.99(s,1H),7.90(s,1H),7.68(d,1H),7.59(s,1H),7.35(s,1H),7.30–7.19(m,2H),6.83(s,1H),6.48(s,1H),5.07(dd,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.47(s,4H),2.98-2.82(m,5H),2.76–2.52(m,8H),2.09–1.93(m,4H),1.91–1.67(m,8H),0.94–0.83(m,2H),0.56-0.48(m,2H)。
实施例148：化合物148的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000761
第一步：3-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(148A)
tert-butyl 3-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000762
将80B(3.17g，9.99mmol)和3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.71g,9.99mmol)溶于DCM(100mL)中，加入醋酸(1.71mL,29.97mmol)，40℃搅拌1h。然后冷至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(4.23g,19.98mmol)，室温反应3h。反应结束后，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液洗涤并分液，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-20/1)得到148A(2.42g，收率：51％)。
LCMS m/z＝473.2[M+H] +。
第二步：1-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(148B)
1-(azetidin-3-yl)-4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000763
将148A(2.40g,5.08mmol)加入烧瓶中，搅拌下缓慢加入4N盐酸的二氧六环溶液(13mL)，室温下反应1h，减压浓缩，向残留物中加入20mL二氯甲烷和碳酸氢钠固体(2.13g,25.4mmol),常温下搅拌10min后，过滤除去过量的碳酸氢钠固体，滤液浓缩得到148B(1.5g，收率：79％)。
第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-yl)氮杂环丁烷-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(148C)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-(3-(4-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000764
将148B(1.5g，4.03mmol)溶于DMSO(15mL)中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3- 基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(1.11g,4.03mmol)和DIPEA(2.0mL,12.09mmol)，90℃搅拌过夜。冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液，析出大量固体，过滤，滤饼减压干燥后，用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到148C(1.35g，收率：53％)。
LCMS m/z＝629.2[M+H] +。
第四步：5-(3-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(148D)
5-(3-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000765
将148C(1.3g,2.07mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，依次加入氯化铵(1.11g，20.7mmol)的水(5mL)溶液，锌粉(1.35g，20.7mmol)，加毕，40℃搅拌0.5h。反应结束后冷却至室温，减压抽滤，向滤液中加入二氯甲烷(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，萃取分液，有机相经过无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到148D(900mg，收率：73％)。
LCMS m/z＝599.2[M+H] +。
第五步：5-(3-(4-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物148)
5-(3-(4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000766
将148D(200mg,0.33mmol)和107A(120mg,0.33mmol)溶于DMF(8mL)中，加入 对甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，黄色固体析出，过滤，得到的固体用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到粗纯化的产物。柱层析得到的粗产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。向收集的制备液中加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物148(60mg，收率：20％)。
LCMS m/z＝459.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),11.05(s,1H),8.29–8.23(m,1H),8.13(s,1H),8.07(s,1H),8.00(s,1H),7.89(s,1H),7.66(d,1H),7.62(s,1H),7.22(dd,1H),6.83–6.82(m,2H),6.69(dd,1H),6.51–6.40(m,1H),5.08–5.03(m,1H),4.16(t,2H),3.91-3.88(m,2H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.52–3.44(m,1H),2.99–2.84(m,5H),2.64–2.51(m,6H),2.06–1.96(m,1H),1.87–1.78(m,1H),1.75(d,6H),0.92–0.83(m,2H),0.58–0.41(m,2H)。
实施例149：化合物149的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000767
第一步：5-(3-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物149)
5-(3-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将148D(200mg,0.33mmol)和(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(109B)(100mg,0.33mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，黄色固体析出，过滤，得到的固体用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到粗纯化的产物。柱层析得到的粗产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含 0.1％TFA))。向收集的制备液中加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物149(50mg，收率：17％)。
LCMS m/z＝439.6[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.21(s,1H),11.10–10.96(m,1H),8.68–8.64(m,1H),8.52–8.32(m,1H),8.21(s,1H),8.10(s,1H),7.98(s,1H),7.86(s,1H),7.66(d,1H),7.60(s,1H),7.54–7.42(m,1H),7.08–6.94(m,2H),6.85–6.76(m,2H),6.68(dd,1H),5.06(dd,1H),4.15(t,2H),3.96–3.86(m,2H),3.81(d,6H),3.50–3.40(m,1H),2.97–2.80(m,5H),2.59–2.52(m,4H),2.06–1.97(m,1H),1.76(d,6H)。
实施例150：化合物150的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000768
第一步：5-(3-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物150)
5-(3-(4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将148D(200mg,0.33mmol)和(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(55B)(130mg,0.5mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，黄色固体析出，过滤，得到的固体用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到粗纯化的产物。柱层析得到的粗产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。向收集的制备液中加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物150(50mg，收率：16％)。
LCMS m/z＝481.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.84(s,1H),8.23–8.10(m,3H),7.98(s,1H),7.88(s,1H),7.66(d,1H),7.61(s,1H),7.21(dd,1H),6.85–6.78(m,2H),6.68(dd,1H),6.57–6.37(m,1H),5.06(dd,1H),4.16(t,2H),3.93–3.87(m,2H),3.84(s,3H),3.79(s, 3H),3.55–3.40(m,1H),2.98–2.80(m,5H),2.63–2.51(m,6H),2.08–1.96(m,1H),1.85–1.79(m,1H),1.74(d,6H),0.95–0.83(m,2H),0.56–0.44(m,2H)。
实施例151：化合物151的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000769
第一步：5-(3-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物151)
5-(3-(4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将148D(200mg,0.33mmol)和(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(108B)(120mg,0.33mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(190mg,0.99mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，黄色固体析出，过滤，得到的固体用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到粗纯化的产物。柱层析得到的粗产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。向收集的制备液中加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物151(50mg，收率：16％)。
LCMS m/z＝461.6[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.94(s,1H),8.38–8.27(m,1H),8.20(s,1H),8.18(s,1H),7.96(s,1H),7.85(s,1H),7.66(d,1H),7.59(s,1H),7.53–7.41(m,1H),7.05–6.93(m,2H),6.82(s,2H),6.68(dd,1H),5.06(dd,1H),4.15(t,2H),3.95–3.86(m,2H),3.81(d,6H),3.50–3.41(m,1H),2.96–2.81(m,5H),2.62–2.53(m,4H),2.05–1.95(m,1H),1.75(d,6H)。
实施例152：化合物152的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000770
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物152)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
将135I(165mg,0.29mmol)和107A(110mg,0.32mmol)，溶于DMF(4mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(170mg,0.87mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，黄色固体析出，过滤，得到的固体用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到粗纯化的产物，进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。向收集的制备液中加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物152(50mg，收率：19％)。
LCMS m/z＝446.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.19–11.04(m,1H),10.75(s,1H),8.33–8.21(m,1H),8.14(s,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.88(s,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),7.05(d,2H),6.89(d,2H),6.82(s,1H),6.45(s,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.72(dd,1H),3.18–3.03(m,6H),2.68–2.57(m,3H),2.55–2.51(m,5H),2.34–2.26(m,2H),2.20–2.07(m,1H),2.04–1.94(m,1H),1.85–1.78(m,3H),1.75(d,6H),1.70–1.60(m,1H),1.42–1.26(m,2H),0.93–0.85(m,2H),0.53–0.46(m,2H)。
实施例153：化合物153的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000771
Figure PCTCN2022090243-appb-000772
第一步：4-(3-氟-4-(2-甲氧基-2-氧乙基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(153B)
tert-butyl 4-(3-fluoro-4-(2-methoxy-2-oxoethyl)phenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000773
将153A(10.00g,40.48mmol)与N-Boc-哌嗪(11.31g,60.72mmol)溶于1,4-二氧六环(150mL)，加入醋酸钯(0.91g,4.05mmol)，(S)-BINAP(2.52g,4.05mmol)以及碳酸铯(32.97g,101.20mmol)，氮气保护，100℃反应16h，冷却至室温，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼3次，收集有机相，减压浓缩，快速柱层析(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1)得到153B(12.30g，收率：86％)
LCMS m/z＝297.2[M-55] +。
第二步：4-(4-(4-氰基-1-甲氧基-1-氧代丁-2-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(153C)
tert-butyl 4-(4-(4-cyano-1-methoxy-1-oxobutan-2-yl)-3-fluorophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000774
将153B(12.60g,35.75mmol)与丙烯腈(2.85g,53.63mmol)溶于甲苯(100mL)，加入苄基三甲基氢氧化铵(0.30g,1.79mmol)，室温反应16h，500mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，有机相经无水硫酸钠干燥，快速柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1)得到153C(5.00g，收率：34％)。
第三步：4-(4-(5-氨基-1-甲氧基-1,5-二氧代戊烷-2-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(153D)
tert-butyl 4-(4-(5-amino-1-methoxy-1,5-dioxopentan-2-yl)-3-fluorophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000775
将153C(8.70g,21.46mmol)溶于甲苯(80mL)，加入乙醛肟(3.80g,64.38mmol)，以及氯化铟(Ⅲ)四水合物(3.15g,10.73mmol)，130℃反应2h，反应液冷却至室温，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-20/1)得到153D(4.7g，收率：52％)。
LCMS m/z＝368.2[M-55] +。
第四步：4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(153E)
tert-butyl 4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-fluorophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000776
将153D(4.70g,11.10mmol)溶于乙腈(50mL)，加入苄基三甲基氢氧化铵(9.28g,22.20mmol)，60℃反应1h，反应液冷却至室温，加入500mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到153E(3.4g，收率：78％)。
LCMS m/z＝336.1[M-55] +。
第五步：3-(2-氟-4-(哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(153F)
3-(2-fluoro-4-(piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000777
将153E(3.50g,8.94mmol)溶于甲醇(30mL)，室温下滴加1,4-二氧六环的盐酸溶液(10mL,4mol/L)，室温反应3h，减压浓缩除去溶剂，残余物再以300mL二氯甲烷复溶，碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，分液，收集有机相，水相经二氯甲烷萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得153F(2.6g)，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝292.2[M+H] +。
第六步：4-((4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(153G)
tert-butyl 4-((4-(4-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-3-fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000778
将153F(2.60g,8.92mmol)，1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(1.90g,8.92mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，依次加入醋酸(2.14g,35.68mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(3.78g,17.84mmol)，室温反应1h，加入碳酸氢钠水溶液调节至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到153G(3.48g，收率：80％)。
第七步：3-(2-氟-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(153H)
3-(2-fluoro-4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000779
将153G(3.48g,7.12mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，室温下滴加1,4-二氧六环的盐酸溶液(6mL,4mol/L)，室温反应3h，减压浓缩除去溶剂，加入200mL甲醇溶解，加入碳酸钾固体，搅拌30min，调节pH至碱性，抽滤，滤饼经二氯甲烷洗涤，合并有机相，减压浓缩得153H(2.7g，收率：98％)。
LCMS m/z＝389.2[M+H] +。
第八步：3-(4-(4-((1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物153I)
3-(4-(4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000780
将153H(2.00g,5.15mmol)与1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(1.42g,5.67mmol)溶于DMSO(50mL)，加入碳酸钾(1.42g,10.30mmol)，100℃反应2h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-20/1)得到153I(2.4g，收率：75％)。
LCMS m/z＝618.1[M+H] +。
第九步：3-(2-氟-4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮(153J)
3-(2-fluoro-4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000781
将153I(2.40g,3.88mmol)，(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(0.78g,6.21mmol)溶于1,4-二氧六环(80mL)中，加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(0.32g,0.39mmol)，碳酸钾(1.07g,7.76mmol)的水溶液(10mL)，氮气置换3次，80℃反应2h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1-纯乙酸乙酯)得到153J(1.58g，收率：66％)。
LCMS m/z＝620.3[M+H] +。
第十步：3-(4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(153K)
3-(4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000782
将153J(1.63g,2.63mmol)溶于四氢呋喃(30mL)，加入锌粉(0.86g,13.15mmol)，再滴加氯化铵(0.70g,13.15mmol)的水溶液(5mL)，室温反应1h，向反应液中加入5mL氨水以 及20mL水，用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到153K，(1.5g)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝590.3[M+H] +。
第十一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物153)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000783
将153K(0.40g,0.68mmol)与107A(0.24g,0.68mmol)溶于DMF(20mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.39g,2.04mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物153(0.16g，收率：26％)。
LCMS m/z＝455.2[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),10.78(s,1H),8.30–8.22(m,1H),8.14(s,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.88(s,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),7.09(t,1H),6.82(s,1H),6.76–6.72(m,1H),6.71(s,1H),6.45(s,1H),3.89(dd,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.19–3.14(m,4H),3.09(d,2H),2.77–2.67(m,1H),2.63(t,2H),2.54–2.48(m,5H),2.29(d,2H),2.20–2.08(m,1H),2.01–1.92(m,1H),1.85-1.64(m,3H),1.76(s,3H),1.73(s,3H),1.71–1.63(m,1H),1.39–1.29(m,2H),0.93–0.86(m,2H),0.53–0.43(m,2H)。
实施例154：化合物154的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000784
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物154)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
将153K(0.40g,0.68mmol)与109B(0.21g,0.68mmol)溶于DMF(20mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.39g,2.04mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物154，(0.17g，收率：30％)。
LCMS m/z＝435.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.21(s,1H),10.78(s,1H),8.44(s,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.53–7.46(m,1H),7.09(t,1H),7.02–6.92(m,2H),6.81(s,1H),6.75–6.72(m,1H),6.71(s,1H),3.89(dd,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.19–3.13(m,4H),3.09(d,2H),2.77–2.66(m,1H),2.61(t,2H),2.55–2.45(m,5H),2.28(d,2H),2.20–2.08(m,1H),2.00–1.92(m,1H),1.83-1.72(m,2H),1.78(s,3H),1.74(s,3H),1.70–1.60(m,1H),1.37–1.28(m,2H)。
实施例155：化合物155的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000785
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二 酮(化合物155)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)piperidine-2,6-dione
将135I(165mg,0.29mmol)和40A(130mg,0.32mmol)，溶于DMF(4mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(170mg,0.87mmol)，100℃搅拌16h。冷却至室温，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，黄色固体析出，过滤，得到的固体用硅胶柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)得到的粗产品进一步SFC制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))。向收集的制备液中加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液使得溶液为碱性，分离有机相，经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物155(50mg，收率：19％)。
LCMS m/z＝464.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),10.75(s,1H),8.56–8.41(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.62–7.52(m,3H),7.45(t,2H),7.39–7.31(m,1H),7.25–7.13(m,1H),7.06(d,2H),6.90(d,2H),6.86(s,1H),3.78(d,6H),3.75–3.68(m,1H),3.19–3.03(m,6H),2.71–2.57(m,3H),2.56–2.51(m,5H),2.28(d,2H),2.20–2.06(m,1H),2.05–1.95(m,1H),1.84(d,6H),1.78–1.71(m,2H),1.69–1.58(m,1H),1.39–1.26(m,2H)。
实施例156：化合物156的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000786
第一步：3-(4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((3-(二甲基磷酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(化合物156)
3-(4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((3-(dimethylphosphoryl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)amino)pyrimidi n-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-fluorophenyl)piperidine-2,6-dione
将153K(0.40g,0.68mmol)与40A(0.27g,0.68mmol)溶于DMF(20mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.39g,2.04mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物156，(0.11g，收率：17％)。
LCMS m/z＝473.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.37(s,1H),10.79(s,1H),8.52–8.44(m,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.71(dd,1H),7.58(d,2H),7.55(s,1H),7.45(t,2H),7.36(t,1H),7.25–7.14(m,1H),7.09(t,1H),6.86(s,1H),6.77–6.73(m,1H),6.72(s,1H),3.89(dd,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.20–3.15(m,4H),3.09(d,2H),2.77–2.66(m,1H),2.62(t,2H),2.54–2.48(m,5H),2.28(d,2H),2.20–2.08(m,1H),2.01–1.92(m,1H),1.85(s,3H),1.82(s,3H),1.79-1.72(m,2H),1.67–1.58(m,1H),1.36–1.26(m,2H)。
实施例157：化合物157的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000787
第一步：4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(157B)
tert-butyl 4-(2-fluoro-4-nitrophenyl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000788
将157A(10.00g,62.86mmol)与N-Boc-哌嗪(11.71,62.86mmol)溶于DMF(50mL)，加入碳酸钾(17.38g,125.72mmol)，50℃反应12h，反应液冷却至室温，倒入200mL水中，有黄色固体析出，抽滤，滤饼经水洗3次后，将其复溶到300mL二氯甲烷中，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得157B(20.0g)，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝270.1[M-55] +。
第二步：1-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪(157C)
1-(2-fluoro-4-nitrophenyl)piperazine
Figure PCTCN2022090243-appb-000789
将157B(20.00g,61.47mmol)溶于二氯甲烷(50mL)，室温下滴加1,4-二氧六环的盐酸溶液(20mL,4mol/L)，室温反应1h，减压除去溶剂，加少量水使之溶解，氢氧化钠水溶液调节pH至碱性，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得157C(13.8g，收率：99％)，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝226.1[M+H] +。
第三步：叔丁基4-((4-(2-氟-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸酯(157D)
tert-butyl 4-((4-(2-fluoro-4-nitrophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000790
将157C(12.8g,56.83mmol)，1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲醛(12.12,56.83mmol)溶于二氯甲烷(130mL)中，依次加入醋酸(13.65g,227.32mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(24.09g,113.66mmol)，室温反应4h，氢氧化钠水溶液调节反应液至碱性，分液收集有机相，水相经二氯甲烷萃取3次后与之前有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/1除去小极性杂质，二氯甲烷/甲醇(V/V)＝20/1)得到157D，(24.0g，收率：99％)。
LCMS m/z＝423.2[M+H] +。
第四步：4-((4-(4-氨基-2-氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(157E)
tert-butyl 4-((4-(4-amino-2-fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000791
将157D(12.00g,28.40mmol)溶于乙酸乙酯(250mL)中，加入钯碳(wt％＝10％,5.00g)，1atm氢气置换3次，30℃反应4h，直接硅藻土过滤除去钯碳，二氯甲烷洗涤滤饼，合并有机相，减压浓缩得到157E，(10.9g，收率：98％)，直接用于下一步。
LCMS m/z＝393.3[M+H] +。
第五步：4-((4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(157F)
tert-butyl 4-((4-(4-((2,6-dioxopiperidin-3-yl)amino)-2-fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
Figure PCTCN2022090243-appb-000792
150mL封管中，将157E(3.50g,8.92mmol)与化合物3-溴哌啶-2,6-二酮(5.14g,26.76mmol)溶于DMF(60mL)，加入碳酸氢钠(4.50g,53.52mmol)，密闭，90℃反应16h，反应液冷却至室温，加入300mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和食盐水洗涤1次，有机相经无水硫酸钠，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/1)得到157F，(2.7g，收率：60％)。
LCMS m/z＝504.3[M+H] +。
第六步：3-((3-氟-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物157G)
3-((3-fluoro-4-(4-(piperidin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000793
将157F(2.70g,5.36mmol)溶于二氯甲烷(50mL)，室温下滴加1,4-二氧六环的盐酸溶液(15mL,4mol/L)，室温反应0.5h，减压浓缩除去溶剂，残余物再以200mL甲醇复溶，加入碳酸钾固体，搅拌30min，调节pH至碱性，抽滤，滤饼经二氯甲烷洗涤，合并有机 相，减压浓缩得157G(2.16g，收率：99％)。
LCMS m/z＝404.2[M+H] +。
第七步：3-((4-(4-((1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(157H)
3-((4-(4-((1-(2-bromo-5-methoxy-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000794
将157G(2.06,5.11mmol)与1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1C)(1.28g,5.11mmol)溶于DMSO(50mL)，加入碳酸氢钠(2.15g,25.55mmol)，100℃反应3h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-20/1)得到157H(1.71g，收率：53％)。
LCMS m/z＝633.2[M+H] +。
第八步：3-((3-氟-4-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物157I)
3-((3-fluoro-4-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)phenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000795
将157H(1.81g,2.86mmol)，(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(0.58g,4.58mmol)溶于1,4-二氧六环(40mL)中，加入Pd(dppf)Cl 2·DCM(0.23g,0.29mmol)，碳酸钾(0.79g,5.72mmol)的水溶液(5mL)，氮气置换3次，80℃反应3h，反应液冷却至室温，加入200mL乙酸乙酯稀释反应液，水洗3次，饱和氯化钠洗涤1次，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1-纯乙酸乙酯)得到157I(0.43g，收率：24％)。
LCMS m/z＝635.3[M+H] +。
第九步：3-((4-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(157J)
3-((4-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000796
将157I(0.43g,0.67mmol)溶于四氢呋喃(18mL)，加入锌粉(0.22g,3.35mmol)，再滴加氯化铵(0.18g,3.35mmol)的水溶液(3mL)，室温反应0.5h，向反应液中加入2mL氨水以及10mL水，用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到157J(0.41g)。
LCMS m/z＝605.3[M+H] +。
第十步：3-((4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物157)
3-((4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000797
将157J(0.13g,0.22mmol)与109B(0.07g,0.22mmol)溶于DMF(8mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.13g,0.66mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物157(10mg，收率：5％)。
LCMS m/z＝442.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.20(s,1H),10.75(s,1H),8.48–8.39(m,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.97(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.50(dd,1H),7.04–6.93(m,2H),6.84(d,1H),6.81(s,1H),6.51(dd,1H),6.43(dd,1H),5.78(d,1H),4.29–4.21(m,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.08(d,2H),2.90–2.82(m,4H),2.78–2.68(m,1H),2.66–2.54(m,4H),2.54–2.45(m,2H),2.27(d,2H),2.13–2.05(m,1H),1.90–1.82(m,1H),1.82–1.70(m,9H),1.70–1.60(m,1H),1.31(d,2H)。
实施例158：化合物158的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000798
第一步：3-((4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物158)
3-((4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
将157J(0.13g,0.22mmol)与107A(0.08g,0.22mmol)溶于DMF(8mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.13g,0.66mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物158(10mg，收率：5％)。
LCMS m/z＝462.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),10.75(s,1H),8.30–8.20(m,1H),8.14(s,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.88(s,1H),7.59(s,1H),7.23(dd,1H),6.87–6.79(m,2H),6.51(dd,1H),6.48–6.38(m,2H),5.79(d,1H),4.29–4.19(m,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.08(d,2H),2.88(s,4H),2.77–2.68(m,1H),2.67–2.50(m,6H),2.36–2.23(m,2H),2.13–2.05(m,1H),2.04–1.85(m,1H),1.85–1.77(m,4H),1.77(s,3H),1.73(s,3H),1.71–1.61(m,1H),1.40–1.28(m,2H),0.93–0.87(m,2H),0.54–0.48(m,2H)。
实施例159：化合物159的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000799
第一步：3-((4-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(化合物159)
3-((4-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)amino)piperidine-2,6-dione
将157J(0.13g,0.22mmol)与142A(0.07g,0.22mmol)溶于DMF(8mL)，加入对甲苯磺酸水合物(0.13g,0.66mmol)，氮气保护，100℃反应16h，反应液冷却至室温，加入50mL饱和碳酸氢钠水溶液，有黄色固体析出，抽滤，滤饼水洗3次，二氯甲烷将滤饼复溶，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇(V/V)＝50/1-15/1)得到产物，进一步制备HPLC纯化(流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到产物，产物经碳酸氢钠水溶液游离后二氯甲烷萃取，浓缩，干燥得化合物159(12mg，收率：6％)。
LCMS m/z＝451.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.06(s,1H),10.76(s,1H),8.41(s,1H),8.18(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.82(s,1H),7.61(s,1H),7.46–7.38(m,1H),6.87–6.78(m,2H),6.75–6.59(m,1H),6.51(dd,1H),6.42(d,1H),5.79(d,1H),4.31–4.20(m,1H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.12–3.04(m,2H),2.91–2.82(m,4H),2.78–2.66(m,1H),2.65–2.52(m,4H),2.49–2.43(m,2H),2.28(d,2H),2.14–2.04(m,1H),2.04–1.73(m,10H),1.70–1.59(m,1H),1.35–1.28(m,2H)。
实施例160：化合物160的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000800
Figure PCTCN2022090243-appb-000801
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-((1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(160A)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5-fluoro-6-(4-((1-(5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-4-nitrophenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000802
将64A(1.5g，3.62mmol)，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(1.07g，3.62mmol)，DIPEA(0.70g，5.43mmol)和DMSO(15mL)加入反应瓶中，90℃反应3h，冰水冷却，加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)，搅拌5min，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化(洗脱剂：DCM/CH 3OH＝DCM至50/1至20/1)，得160A(1.7g，收率：68.19％)。
第二步：5-(4-((1-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(160B)
5-(4-((1-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000803
将160A(0.5g，0.73mmol)，锌粉(0.24g，3.63mmol)，氯化铵(0.19g，3.63mmol)，四氢呋喃(6mL)和水(2mL)加入反应瓶中，室温反应1h，加入二氯甲烷(50mL)和氨水(10mL)，搅拌2min，铺适量硅藻土，抽滤，适量二氯甲烷洗涤，滤液分层，有机层水(20mL ×1)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得160B(0.40g，收率：83.18％)。
第三步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物160)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000804
将160B(0.4g，0.61mmol)，107A(0.22g，0.61mmol)，一水合对甲苯磺酸(0.23g，1.22mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，100℃反应约18h，冰水冷却下加入乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝50/1至30/1至20/1，所得粗品用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备产物以饱和碳酸氢钠水溶液碱化游离得到化合物160(0.11g，收率：18.43％)。
LCMS m/z＝489.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.15-11.03(m,2H),8.31–8.23(m,1H),8.13(s,1H),8.07(s,1H),7.99(s,1H),7.89(s,1H),7.72(d,1H),7.60(s,1H),7.46(d,1H),7.24(dd,1H),6.82(s,1H),6.45(s,1H),5.10(dd,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.27(s,4H),3.15-3.04(m,2H),2.95-2.83(m,1H),2.68–2.51(m,8H),2.31(d,2H),2.05–1.97(m,2H),1.89–1.56(m,11H),1.42-1.30(m,1H),0.95–0.87(m,2H),0.54-0.47(m,2H)。
实施例161：化合物161的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000805
第一步：5-(4-((1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物161)
5-(4-((1-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperidin-4-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将160B(0.41g，0.64mmol)，109B(0.2g，0.64mmol)，一水合对甲苯磺酸(0.24g，1.28mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，100℃反应约18h，冰水冷却下加入乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，搅拌，静置分层，有机层饱和氯化钠溶液(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干，残余物柱层析纯化，洗脱剂：DCM/CH 3OH＝50/1至30/1至20/1，所得粗品继续用制备HPLC(仪器：waters 2767制备液相；色谱柱：XBridge@Prep C18(30mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))纯化，制备产物以饱和碳酸氢钠水溶液碱化游离得到化合物161(0.22g，收率：36.63％)。
LCMS m/z＝469.7[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.21(s,1H),11.09(s,1H),8.52–8.36(m,1H),8.28–8.14(m,1H),8.14–8.07(m,1H),8.02–7.90(m,1H),7.90–7.78(m,1H),7.76–7.40(m,4H),7.08–6.90(m,2H),6.86–6.73(m,1H),5.16–5.05(m,1H),3.93–3.73(m,6H),3.33–3.17(m,4H),3.15–3.00(m,2H),2.98–2.79(m,1H),2.70–2.45(m,8H),2.40–2.20(m,2H),2.08–1.99(m,1H),1.90–1.50(m,9H),1.42–1.22(m,2H)。
实施例162：化合物162的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000806
第一步：5-(9-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物162)
5-(9-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将79D(397.60mg,0.65mmol)和142A(238.89mg,0.72mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL水和20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取， 有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-15/1)得到化合物162(140mg，收率：23.69％)。
LCMS m/z＝909.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,2H),8.42(br.s,1H),8.17(s,1H),8.10(s,1H),8.03(s,1H),7.85(s,1H),7.70–7.57(m,2H),7.48–7.17(m,3H),6.87(s,1H),6.67(br.s,1H),5.11–5.00(m,1H),3.93–3.75(m,6H),3.60–3.40(m,4H),3.00–2.75(m,5H),2.70–2.50(m,2H),2.10–1.92(m,1H),1.88–1.72(m,6H),1.72–1.52(m,8H)。
实施例163：化合物163的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000807
第一步：5-(9-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物163)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)-4-fluorophenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将79D(400mg,0.65mmol)和141B(270.67mg,0.72mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL水和20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用DCM溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-15/1)得到化合物163(150mg，收率：24.19％)。
LCMS m/z＝953.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.06(s,1H),10.78(s,1H),8.30(br.s,1H),8.20–8.13(m,2H),8.01(s,1H),7.84(s,1H),7.69–7.57(m,2H),7.45–7.19(m,3H),6.87(s,1H),6.69(br.s,1H),5.11–5.01(m,1H),3.92–3.75(m,6H),3.58–3.42(m,4H),2.97–2.77(m,5H),2.65–2.50(m,2H),2.10–1.95(m,1H),1.85–1.72(m,6H),1.72–1.54(m,8H)。
实施例164：化合物164的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000808
第一步：5-(9-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑)-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物164)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将79D(400mg,0.65mmol)和108B(257.81mg,0.72mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL水和20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-10/1)，得到的产品进一步制备液相纯化(仪器：waters 2767制备色谱柱：SunFire@Prep C18(19mm×150mm)；流动相组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含0.1％TFA))得到化合物164的三氟乙酸盐，向化合物164的三氟乙酸盐中加入60mL二氯甲烷和30mL饱和碳酸氢钠溶液，分层，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到化合物164(120mg，收率：19.73％)。
LCMS m/z＝935.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.94(s,1H),8.33(br.s,1H),8.22–8.13(m,2H),7.96(s,1H),7.86(s,1H),7.70–7.43(m,3H),7.36–7.21(m,2H),7.07–6.92(m,2H),6.86(s,1H),5.12–4.99(m,1H),3.88–3.77(m,6H),3.58–3.45(m,4H),2.96–2.77(m,5H),2.70–2.50(m,2H),2.10–1.95(m,1H),1.84–1.51(m,14H)。
实施例165：化合物165的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000809
第一步：5-(9-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶 -3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物165)
5-(9-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将79D(397.60mg,0.65mmol)和55B(286.46mg,0.72mmol)溶于DMF(8mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(370.93mg,1.95mmol)，氮气保护，100℃反应过夜。冷却至室温，加入20mL水和20mL饱和碳酸氢钠水溶液，抽滤，滤饼用二氯甲烷溶解、萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/1-15/1)得到化合物165(190mg，收率：29.95％)。
LCMS m/z＝975.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.05(s,1H),10.85(s,1H),8.24–8.08(m,3H),8.00(s,1H),7.90(s,1H),7.72–7.50(m,2H),7.38–7.16(m,3H),6.88(s,1H),6.48(br.s,1H),5.12–5.01(m,1H),3.96–3.72(m,6H),3.60–3.44(m,4H),3.00–2.77(m,5H),2.70–2.50(m,2H),2.10–1.50(m,16H),1.00–0.80(m,2H),0.60–0.40(m,2H)。
实施例166：化合物166的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000810
第一步：5-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(166A)
5-(4-(4-amino-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000811
将80C(10g,18.40mmol)置于500mL单口瓶中，依次加入氯化铵(14.76g, 276mmol)，THF(100ml)、乙醇(100ml)、水(50ml)和铁粉(15.41g,276mmol)，加毕，80℃搅拌2h。冷却至室温，过滤，滤饼用二氯甲烷/甲醇(v/v＝10/1)混合溶剂洗涤，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得到166A(2g，收率：20％)。
第二步：5-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物166)
5-(4-(4-((5-bromo-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
Figure PCTCN2022090243-appb-000812
将166A(0.4g,0.74mmol)和55B(0.3g,0.74mmol)溶于DMF(5ml)中，加入对甲苯磺酸一水化合物(0.28g,1.48mmol)，100℃搅拌过夜。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，析出固体，过滤，滤饼干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/3-100/5)。所得残留物加入8mL乙腈，70℃搅拌1h。过滤，滤饼减压干燥得到化合物166(0.2g，收率：30％)。
LCMS m/z＝454.3[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.07(s,1H),10.83(s,1H),8.27–8.07(m,4H),7.89(s,1H),7.71(d,1H),7.65(s,1H),7.45–7.39(m,1H),7.36–7.29(m,1H),7.25–7.14(m,1H),6.84(s,1H),6.57–6.44(m,1H),5.19–4.99(m,1H),3.83(d,6H),3.66(s,4H),3.01(s,4H),2.95–2.82(m,1H),2.67–2.55(m,2H),2.06–1.99(m,1H),1.82–1.68(m,7H),0.94–0.82(m,2H),0.60–0.46(m,2H)。
实施例167：化合物167的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000813
第一步：5-(4-(4-((5-氯-4-((4-环丙基-2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5- 甲氧基-2-(1-甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物167)
5-(4-(4-((5-chloro-4-((4-cyclopropyl-2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将166A(0.4g,0.74mmol)和107A(0.26g,0.74mmol)溶于DMF(5ml)中，加入对甲苯磺酸一水化合物(0.28g,1.48mmol)，100℃搅拌过夜。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，析出固体，过滤，滤饼干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/3-100/5)。所得残留物加入8mL乙腈，70℃搅拌1h。过滤，滤饼减压干燥得到化合物167(0.25g，收率：39％)。
LCMS m/z＝432.2[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.10(s,1H),11.07(s,1H),8.36–8.22(m,1H),8.21–8.11(m,2H),8.08(s,1H),7.90(s,1H),7.71(d,1H),7.66(s,1H),7.46–7.39(m,1H),7.38–7.30(m,1H),7.26–7.15(m,1H),6.85(s,1H),6.57–6.39(m,1H),5.13–5.00(m,1H),3.83(d,6H),3.66(s,4H),3.01(s,4H),2.96–2.82(m,1H),2.69–2.52(m,2H),2.09–1.97(m,1H),1.83–1.67(m,7H),0.94–0.83(m,2H),0.59–0.48(m,2H)。
实施例168：化合物168的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000814
第一步：5-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑)-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物168)
5-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将166A(0.45g,0.83mmol)和109B(0.26g,0.83mmol)溶于DMF(5mL)中，加入对甲苯磺酸一水化合物(0.32g,1.66mmol)，100℃搅拌过夜。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，析出固体，过滤，滤饼干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/3-100/5)。所得残留物加入8mL乙腈，70℃搅拌1h。过滤，滤饼减压干燥得到化合物168(0.3g，收率：44％)。
LCMS m/z＝412.2[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.21(s,1H),11.07(s,1H),8.48–8.39(m,1H),8.22(s,1H),8.13–8.06(m,2H),7.86(s,1H),7.71(d,1H),7.66(s,1H),7.56–7.46m,1H),7.44–7.39(m,1H),7.37–7.28(m,1H),7.07–6.92(m,2H),6.85(s,1H),5.14–5.01(m,1H),3.83(d,6H),3.64(s,4H),3.01(s,4H),2.95–2.84(m,1H),2.68–2.53(m,2H),2.05–1.98(m,1H),1.76(d,6H)。
实施例169：化合物169的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000815
第一步：5-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑)-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物169)
5-(4-(4-((5-bromo-4-((2-(dimethylphosphoryl)phenyl)amino)pyrimidin-2-yl)amino)-5-methoxy-2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)piperazin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将166A(0.4g,0.74mmol)和108B(0.27g,0.74mmol)溶于DMF(5ml)中，加入对甲苯磺酸一水化合物(0.28g,1.48mmol)，100℃搅拌过夜。冷却至室温，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，析出固体，过滤，滤饼干燥后用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇(V/V)＝100/3-100/5)。所得残留物加入8mL乙腈，70℃搅拌1h。过滤，滤饼减压干燥得到化合物169(0.25g，收率：39％)。
LCMS m/z＝434.2[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.07(s,1H),10.94(s,1H),8.39–8.28(m,1H),8.25–8.16(m,2H),8.07(s,1H),7.85(s,1H),7.71(d,1H),7.65(s,1H),7.54–7.45(m,1H),7.44–7.39(m,1H),7.36–7.29(m,1H),7.09–6.92(m,2H),6.84(s,1H),5.15–5.04(m,1H),3.82(d,6H),3.64(s,4H),3.00(s,4H),2.95–2.81(m,1H),2.68–2.53(m,2H),2.09–1.93(m,1H),1.76(d,6H)。
实施例170和实施例171：化合物170和171的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000816
取300mg化合物106使用SFC制备分离纯化。SFC制备分离条件：仪器：Waters 150 MGM；色谱柱：Chiralpak Column；流动相：A for CO 2and B for IPA(异丙醇)+ACN(乙腈)；梯度：65％phase B isocratic elution；流速：120mL/min；背压：100bar；柱温：35℃；波长：220nm。
SFC分析条件：仪器：SHIMADZU LC-30AD sfc；色谱柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流动相：A for CO 2and B for IPA(异丙醇)+ACN(乙腈)(0.05％DEA(二乙胺))；梯度：B 60％；流速：3mL/min；背压：100bar；柱温：35℃；波长：220nm。
经制备分离后，合并相同保留时间的组分，冷冻干燥，20mL DCM复溶，加入水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)萃取，分离有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物170(30mg)和化合物171(70mg)。
化合物170：
SFC分析条件下保留时间1.6min，
LCMS m/z＝502.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.23(s,1H),7.96–7.75(m,5H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),7.31–7.15(m,2H),6.92(d,1H),5.12(dd,1H),4.22–4.07(m,5H),4.03(s,3H),3.93–3.70(m,6H),3.62–3.48(m,2H),3.39–3.18(m,4H),2.95–2.85(m,2H),2.82–2.67(m,1H),2.63–2.44(m,1H),2.37–2.16(m,3H),2.12–1.88(m,9H),1.19–1.08(m,2H),0.73–0.65(m,2H)。
化合物171：
SFC分析条件下保留时间2.7min，
LCMS m/z＝502.8[(M+2H)/2] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.23(s,1H),7.96–7.75(m,5H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),7.31–7.15(m,2H),6.92(d,1H),5.12(dd,1H),4.22–4.07(m,5H),4.03(s,3H),3.93–3.70(m,6H),3.62–3.48(m,2H),3.39–3.18(m,4H),2.95–2.85(m,2H),2.82–2.67(m,1H),2.63–2.44(m,1H),2.37–2.16(m,3H),2.12–1.88(m,9H),1.19–1.08(m,2H),0.73–0.65(m,2H)。
实施例172和实施例173：化合物172和173的制备
Figure PCTCN2022090243-appb-000817
取345mg化合物107使用SFC制备分离纯化。SFC制备分离条件：仪器：Waters 150 MGM；色谱柱：Chiralpak Column；流动相：A for CO 2and B for IPA+ACN；梯度：70％phase B isocratic elution；流速：100mL/min；背压：100bar；柱温：35℃；波长：220nm。
SFC分析条件：仪器：SHIMADZU LC-30AD sfc；色谱柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流动相：A for CO 2and B for IPA+ACN(0.05％DEA)；梯度：B 60％；流速：3mL/min；背压：100bar；柱温：35℃；波长：220nm。
经制备分离后，合并相同保留时间的组分，减压浓缩得到化合物172(160mg)和化合物173(165mg)。
化合物172：SFC分析条件下保留时间1.5min，LCMS m/z＝960.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.14(s,1H),8.02–7.91(m,3H),7.86(s,1H),7.82(d,1H),7.46(s,1H),7.36(s,1H),7.31–7.13(m,2H),6.90(d,1H),5.12(dd,1H),4.25–4.08(m,5H),4.04(s,3H),3.95–3.73(m,6H),3.63–3.45(m,2H),3.39–3.18(m,4H),2.94–2.85(m,2H),2.83–2.67(m,1H),2.63–2.44(m,1H),2.37–2.19(m,3H),2.13–1.88(m,9H),1.20–1.06(m,2H),0.72–0.64(m,2H)。
化合物173：SFC分析条件下保留时间2.5min，LCMS m/z＝960.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,D 2O/CF 3COOD(v/v＝1:1))δ8.14(s,1H),8.03–7.91(m,3H),7.86(s,1H),7.82(d,1H),7.46(s,1H),7.37(s,1H),7.30–7.16(m,2H),6.90(d,1H),5.12(dd,1H),4.25–4.08(m,5H),4.04(s,3H),3.94–3.75(m,6H),3.62–3.45(m,2H),3.38–3.15(m,4H),2.94–2.85(m,2H),2.83–2.66(m,1H),2.63–2.45(m,1H),2.35–2.17(m,3H),2.12–1.89(m,9H),1.18–1.06(m,2H),0.74–0.64(m,2H)。
Figure PCTCN2022090243-appb-000818
生物测试例
测试例1：NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)和A431(EGFR-WT)细胞的增殖抑制 活性
NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)和A431(EGFR-WT)细胞购自于ATCC，培养基分别为RPMI1640+10％FBS和DMEM+10％FBS，于37℃，5％CO 2孵箱中培养。第一天，收集处于指数生长期的NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)和A431(EGFR-WT)细胞，用自动细胞分析仪(countstar)进行活细胞计数。用培养基将细胞悬液调整后铺板96孔细胞培养板，NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)细胞每孔1000个，A431细胞每孔3000个。第二天，吸去培养基，每孔加入90μL新鲜培养基和10μL不同浓度化合物，每孔DMSO终浓度为0.1％。于37℃，5％CO 2孵箱中培养72小时。药物处理72小时后，每孔加入50μL预先融化并平衡到室温的CTG溶液(promega，G7572)，用微孔板震荡器混匀2min，于室温放置10min后用酶标仪(PHERAstar FSX)测定荧光信号值。
细胞存活率用公式V sample/V vehicle control x100％计算。其中V sample为药物处理组的读数，V vehicle control为溶剂对照组的平均值。应用origin9.2软件,使用非线性回归模型绘制S型剂量-存活率曲线并计算IC 50值。
表1 测试化合物对NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)细胞的增殖抑制活性结果
Figure PCTCN2022090243-appb-000819
Figure PCTCN2022090243-appb-000820
Figure PCTCN2022090243-appb-000821
Figure PCTCN2022090243-appb-000822
注：表1中A＜0.1μM，0.1μM≤B＜0.5μM，0.5μM≤C＜1μM。
测试化合物对A431(WT)细胞的增殖抑制活性：
化合物1、2、4、6、7的三氟乙酸盐、14的三氟乙酸盐、18、23的三氟乙酸盐、24、30、34、35、36、37、38、40、41、42、45、46、47、48、50、54、55、57、58、59、60、61、62、63、65、66、67、68、71、72、73、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86的三氟乙酸盐、87、88、89、90、91、92、93、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、116、117、118、119、121、125、126、133、137、138、139、143、145、146、147、148、150、160、162、163、164、165、166、167、170、171、172、173对A431(EGFR-WT)细胞增殖抑制活性IC50≥10μM。
结论：本发明化合物对NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)细胞具有良好的增殖抑制活性；对A431(EGFR-WT)细胞增殖抑制活性差，具有良好的选择性。
测试例2:对细胞Ba/F3-TEL-EGFR-T790M-L858R-C797S的增殖抑制活性
细胞Ba/F3-TEL-EGFR-T790M-L858R-C797S培养于37℃，5％CO 2孵箱中。收集处于指数生长期的细胞，计数后铺板96孔板，铺板密度为2000个/孔。加入不同浓度的化合物，并设置细胞加DMSO的溶媒对照组，细胞培养基加DMSO的空白对照组，DMSO的浓度均为0.1％。细胞培养板置于37℃，5％CO 2孵箱中培养72小时。培养结束后，取出细胞培养板放置10min使其平衡至室温。按照CellTiter-Glo试剂盒(Promega，G7573)操作说明，每孔加入50μL预先融化并平衡到室温的CTG溶液，用微孔板震荡器混匀2min，于室温放置10min后用酶标仪(SpectraMax Paradigm)测定荧光信号值。细胞增殖抑制率(Inhibition Rate)数据采用式(1)处理，计算不同浓度化合物对应的抑制率，并使用GraphPad Prism软件作抑制率曲线图并计算IC 50值。其中RLU Drug为药物处理组的读数，RLU Max为对照组的读数，RLU Min为空白组读数。
Inhibition Rate(Inh％)＝(1-(RLU Drug-RLU Min)/(RLU Max-RLU Min))×100％   (式1)
结论：本发明化合物对细胞Ba/F3-TEL-EGFR-T790M-L858R-C797S具有良好的增殖抑制活性，例如化合物106的IC50为15.6nM、化合物107的IC50为15.6nM。
测试例3:对细胞NCI-H1975EGFR-L858R-T790M-C797S的增殖抑制活性
细胞NCI-H1975EGFR-L858R-T790M-C797S培养于37℃，5％CO 2孵箱中，培养基为RPMI1640+10％FBS+100μg/mL潮霉素。收集处于指数生长期的细胞，用不含潮霉素 的培养基将细胞悬液调整到适当浓度后铺板96孔板，铺板密度为1500个/孔，体积90μL。加入10μL不同浓度的化合物，并设置细胞加DMSO的溶媒对照组，DMSO的浓度均为0.1％。细胞培养板置于37℃，5％CO 2孵箱中培养72小时。培养结束后，按照CellTiter-Glo试剂盒(Promega，G7572)操作说明，每孔加入50μL预先融化并平衡到室温的CTG溶液，用微孔板震荡器混匀2min，于室温放置10min后用酶标仪(Envision2104)测定荧光信号值。细胞存活率(Surviving cells％)数据采用式(2)处理，并使用GraphPad Prism 5.0软件，使用非线性回归模型绘制S型剂量-存活率曲线并计算IC 50值。其中V sample为药物处理组的读数，V vehicle control为对照组的读数。
Surviving cells％＝V sample/V vehicle control x100％    (式2)
表2 化合物对细胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S的增殖抑制活性
化合物编号 IC 50(μM) 化合物编号 IC 50(μM)
化合物2 B(0.299) 化合物84 A(0.047)
化合物6 A(0.027) 化合物90 A(0.068)
化合物7的三氟乙酸盐 A(0.030) 化合物92 A(0.065)
化合物9 A(0.039) 化合物96 A(0.060)
化合物18 A(0.024) 化合物97 A(0.079)
化合物23的三氟乙酸盐 A(0.083) 化合物99 A(0.057)
化合物37 A(0.032) 化合物100 A(0.084)
化合物45 B(0.364) 化合物101 A(0.152)
化合物47 A(0.072) 化合物102 A(0.152)
化合物54 A(0.056) 化合物103 A(0.101)
化合物57 A(0.065) 化合物104 A(0.082)
化合物65 A(0.136) 化合物106 A(0.112)
化合物67 A(0.115) 化合物107 A(0.045)
化合物68 B(0.280) 化合物108 A(0.135)
化合物77 A(0.046) 化合物112 A(0.127)
化合物81 A(0.049) 化合物117 A(0.079)
对照化合物A 1.383 对照化合物B C(0.704)
注：表2中A＜0.2μM，0.2μM≤B＜0.5μM，0.5μM≤C＜1μM。
结论：本发明化合物对细胞NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M-C797S具有良好的增殖抑制活性，明显优于对照化合物A和B。
测试例4：小鼠药代动力学测试
实验目的：本试验通过单剂量静脉和灌胃给予受试物于ICR小鼠，测定小鼠血浆中受试物的浓度，评价受试物在小鼠体内药代特征和生物利用度。
试验动物：雄性ICR小鼠，20～25g。购自北京华阜康生物科技股份有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2019-0008；或者成都达硕实验动物有限公司(SCXK(川)2020-030)；或湖南斯莱克景达实验动物有限公司(SCXK(湘)2019-0004)。
试验方法：试验当天，ICR小鼠按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h恢复给食。
Figure PCTCN2022090243-appb-000823
*剂量以游离碱计，静脉给药的给药剂量采用2.5mg/kg或者1mg/kg的任意一种；
取样：于给药前及给药后异氟烷麻醉经眼眶取血，置于EDTAK 2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。
G1&G2组采集血浆时间点：0,5min,15min,30min,1,2,4,6,8,24h；
G3组采集血浆时间点：0,5min,15min,30min,1,2,4,6,8,24h；
分析检测前，所有样品存于-80℃。用LC-MS/MS对样品进行定量分析。
表3-1 受试化合物小鼠口服吸收结果(给药方式i.g.(10mg/kg))
Figure PCTCN2022090243-appb-000824
Figure PCTCN2022090243-appb-000825
表3-2 受试化合物药物小鼠PK数据(给药方式i.g.(10mg/kg))
化合物编号 AUC(ng.h.mL -1) T 1/2(h)
化合物68 53240 3.47
化合物67 70884 3.86
化合物90 35887 4.16
化合物77 47347 5.79
化合物92 63006 6.88
化合物80 81905 10.4
化合物98 69837 10.9
化合物100 33340 2.49
化合物101 117559 12.7
化合物102 87882 9.49
化合物107 129648 13.9
化合物106 144575 18.0
化合物108 71014 4.83
化合物109 81455 4.53
化合物141 86626 5.91
化合物142 104039 5.12
化合物163 93054 6.68
对照化合物B 2086 1.23
对照化合物A 563 1.54
*注：i.g.(灌胃)给予化合物。
结论：运用本发明技术所合成的化合物在小鼠体内具有一定的口服吸收性能，口服性能优于对照化合物A和B。
测试例5：对细胞H1975-EGFR-T790M-L858R-C797S中EGFR蛋白降解活性
方法一：
蛋白样品制备：细胞NCI-H1975EGFR-L858R-T790M-C797S培养于37℃，5％CO 2孵箱中，培养基为RPMI1640+10％FBS+100μg/mL潮霉素。收集处于指数生长期的细胞，用不含潮霉素的培养基将细胞悬液调整到适当浓度后铺板6孔板，铺板密度为200000个/孔，铺板体积2mL，过夜培养于37℃、5％CO 2培养箱中。第二天，加入不同浓度的化合物并设置DMSO对照孔，确保所有孔的DMSO浓度均为0.1％。将6孔板置于37℃、5％CO 2培养箱中培养72h后，加入30μL含有蛋白酶抑制剂(碧云天，Cat.P0013B)的RIPA裂解液(碧云天，Cat.P0013B)，冰上裂解30min。于4℃，13000转/分钟离心20min，收集蛋白上清样品，用BCA法进行蛋白定量，制备Western Blot检测样品。
Western检测：每孔加入20μg蛋白样品，聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜。转膜结束后加入稀释后的抗EGFR(CST，Cat.4267S)和NADPH(Kangchen，Cat.KC-5G4)抗体，4℃过夜孵育。洗膜后加入稀释后的羊抗兔(Licor，Cat.926-32211)和羊抗鼠(Licor，Cat.926-68070)抗体，避光孵育45min。用远红外成像系统(Odyssey)在700nm和800nm波长下扫描检测。
根据式(3)计算不同浓度化合物孵育后，细胞中EGFR蛋白相对与DMSO对照组的表达量。其中EGFR compound为化合物孵育后EGFR蛋白的荧光值，EGFR vehicle为DMSO对照组EGFR蛋白的荧光值。使用Origin9.2软件计算EGFR蛋白相对DMSO对照组表达量为50％时的药物浓度DC 50值。
EGFR％＝EGFR compound/EGFR vehicle×100％   式(3)
方法二：
蛋白样品制备：细胞NCI-H1975EGFR-L858R-T790M-C797S培养于37℃，5％CO 2孵箱中，培养基为RPMI1640+10％FBS+100μg/mL潮霉素。收集处于指数生长期的细胞，用不含潮霉素的培养基将细胞悬液调整到适当浓度后铺板6孔板，铺板密度为350000个/孔，铺板体积2mL，过夜培养于37℃、5％CO 2培养箱中。第二天，加入不同浓度的化合物并设置DMSO对照孔，确保所有孔的DMSO浓度均为0.1％。将6孔板置于37℃、5％CO 2培养箱中培养48h后，加入30μL含有蛋白酶抑制剂(碧云天，Cat.P0013B)的RIPA裂解液(碧云天，Cat.P0013B)，冰上裂解30min。于4℃，13000转/分钟离心20分钟，收集蛋白上清样品，用BCA法进行蛋白定量，制备Western Blot检测样品。
Western检测：每孔加入20μg蛋白样品，聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜。转膜结束后加入稀释后的抗EGFR(CST，Cat.4267S)和NADPH(Kangchen，Cat.KC-5G4)抗体，4℃过夜孵育。洗膜后加入稀释后的羊抗兔(Licor，Cat.926-32211)和羊抗鼠(Licor，Cat. 926-68070)抗体，避光孵育45min。用远红外成像系统(Odyssey)在700nm和800nm波长下扫描检测。
根据式(3)计算不同浓度化合物孵育后，细胞中EGFR蛋白相对与DMSO对照组的表达量。其中EGFR compound为化合物孵育后EGFR蛋白的荧光值，EGFR vehicle为DMSO对照组EGFR蛋白的荧光值。使用Origin9.2软件计算EGFR蛋白相对DMSO对照组表达量为50％时的药物浓度DC 50值。
EGFR％＝EGFR compound/EGFR vehicle×100％   式(3)
表4 化合物对细胞NCI-H1975EGFR-L858R-T790M-C797S中EGFR蛋白降解活性结果
Figure PCTCN2022090243-appb-000826
注：表4中A＜0.1μM，0.1μM≤B＜0.5μM，0.5μM≤C＜1μM
结论：本发明化合物对细胞H1975-EGFR-T790M-L858R-C797S中EGFR蛋白具有良好的降解效果。

Claims (15)

  1. 一种化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，化合物选自通式(I)所示的化合物，
    B-L-K(I)；
    L选自键或-C 1-50烃基-，所述烃基中有0至20个亚甲基单元任选进一步被-Ak-或-Cy-替换；
    每个-Ak-各自独立地选自-(CH 2) q-、-(CH 2) q-O-、-O-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR L-、-NR L-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR LC(＝O)-、-NR L(CH 2) qC(＝O)-、-(CH 2) q-C(＝O)NR L-、-C(＝O)-、-C(＝O)-(CH 2) q-NR L-、-(C≡C) q-、-CH＝CH-、-Si(R L) 2-、-Si(OH)(R L)-、-Si(OH) 2-、-P(＝O)(OR L)-、-P(＝O)(R L)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O) 2-或者键，所述的-CH 2-任选进一步被0至2个选自H、卤素、OH、CN、NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤素取代的C 1-6烷基、羟基取代的C 1-6烷基或氰基取代的C 1-6烷基的取代基所取代；
    q各自独立的选自0、1、2、3、4、5或6；
    R L各自独立的选自H、C 1-6烷基、3-7元杂环基、3-7元环烷基、苯基或5-6元杂芳基；
    每个-Cy-各自独立地选自键、4-8元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、7-10元杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂芳基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环含有1至4个选自O、S或N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
    B选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100001
    r3选自0、1、2、3或4；
    r4选自0、1或2；
    r6选自0、1、2或3；
    环W选自C 6-10碳环、5至10元杂环、C 6-10芳环或5至10元杂芳环，所述的杂环或 杂芳环含有1至5个选自O、S或N的杂原子；
    环V选自4至10元杂环或者C 3-10碳环，所述的杂环或者碳环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R b1、R b2各自独立的选自H、OH或C 1-4烷基；
    R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 2-4炔基、C 1-4烷氧基、C 3-6环烷基、3至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的烷基、炔基、烷氧基、环烷基、苯基、杂环基或杂芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂环基或杂芳基含有1至3个选自O、S或N的杂原子；
    R b4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R b5选自H或C 1-4烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、C 1-4烷基、C 2-4炔基或C 1-4烷氧基，所述的烷基、炔基或烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R b7选自4至7元杂环或者C 3-7碳环，所述的碳环或杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基、氘代C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂环基含有1至3个选自O、S或N的杂原子；
    K选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100002
    Figure PCTCN2022090243-appb-100003
    Figure PCTCN2022090243-appb-100004
    Q各自独立地选自键、-O-、-S-、-CH 2-、-NR q-、-CO-、-NR qCO-、-CONR q-或3-12元杂环，所述的杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    R q选自H或C 1-6烷基；
    A选自C 3-10碳环C 6-10芳环、3-10元杂环或5-10元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    F各自独立地选自C 3-20碳环、C 6-20芳环、3-20元杂环或5-20元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    R k2各自独立地选自键、-CO-、-SO 2-、-SO-或-C(R k3) 2-；
    R k1各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基或C 3-6环烷基，所述的烷基、烷氧基或环烷基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R k3各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3-8环烷基或3-8元杂环基，所述的烷基、烷氧基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个选自O、S或N的杂原 子；
    或者两个R k3和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-8元碳环或3-8元杂环，两个R k1和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-8元碳环或3-8元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    R k4各自独立地选自H、OH、NH 2、CN、CONH 2、C 1-6烷基、C 3-8环烷基或3-8元杂环基，所述的烷基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    M 1选自键、-CH 2-C(＝O)NH-或-C(＝O)CH 2NH-；
    M 2选自-NHC(＝O)-C 1-6烷基、-NHC(＝O)-C 3-6环烷基或4-10元杂环基，所述的烷基、环烷基或杂环基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、NH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环基含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    M 3选自-NH-或-O-；
    R k10选自C 1-6烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、C 1-6烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R k11各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、SH、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基或-O-C(＝O)-C 1-6烷基，所述的烷基、烷氧基或烷硫基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
    R k12、R k13各自独立的选自H、C 1-6烷基或C 3-6环烷基，所述的烷基或环烷基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、＝O、OH、NH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
    R k14选自5-6元杂芳基，所述的杂芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CF 3、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂芳基含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
    G选自6-10元芳环或5-10元杂芳环，所述的芳环或者杂芳环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CF 3、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代，所述杂芳环含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
    n1、n2、n3各自独立的选自0、1、2或3；
    p1或p2各自独立的选自0、1、2、3、4或5。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    L选自-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Cy5-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy3-Cy4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、 -Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak5-、-Ak1-Cy1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy1-Cy2-Cy3-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Ak3-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Ak3-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Ak4-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Ak4-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Cy1-Cy2-Cy3-Ak4-Ak5-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Ak5-Cy2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Ak5-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Cy1-Cy2-Cy3-Ak5-Cy4-；
    Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自独立的选自-(CH 2) q-、-(CH 2) q-O-、-O-(CH 2) q-、-(CH 2) q-NR L-、-NR L-(CH 2) q-、-(CH 2)q-NR LC(＝O)-、-(CH 2) q-C(＝O)NR L-、-C(＝O)-、-C(＝O)-(CH 2) q-NR L-、-(C≡C) q-或者键，所述的-CH 2-任选进一步被0至2个选自H、卤素、OH、CN、NH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或氰基取代的C 1-4烷基的取代基所取代；
    Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立地选自键、4-7元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、7-10元杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂芳基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环含有1至4个选自O、S或N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
    q各自独立的选自0、1、2、3或4；
    R L各自独立的选自H或C 1-6烷基。
  3. 根据权利要求2所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键、4-7元含氮杂单环、4-10元含氮 杂并环、5-12元含氮杂螺环、7-10元含氮杂桥环、3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、7-10元桥环烷基、5-10元杂芳基或6-10元芳基，所述杂单环、杂并环、杂桥环、杂螺环、环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、COOH、CN、NH 2、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂单环、杂并环、杂桥环、杂螺环或杂芳基含有1至4个选自O、S或N的杂原子，当杂原子选自S时，任选进一步被0、1或2个＝O取代；
    R L各自独立的选自H或C 1-4烷基；
    环W选自苯环、萘环、5-6元单环杂芳环、9-10元并环杂芳环或9-10元杂环，所述的杂环或杂芳环含有1至5个选自O、S、N的杂原子；
    环V选自4至6元杂环或者C 3-6碳环，所述的杂环或者碳环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    K选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100005
    Figure PCTCN2022090243-appb-100006
    Figure PCTCN2022090243-appb-100007
    Figure PCTCN2022090243-appb-100008
    表示环选自芳香环或非芳香环；
    Q各自独立地选自-O-、-S-、-CH 2-、-NR q-、-CO-、-NR qCO-、-CONR q-或4-7元杂环，所述的杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    R q选自H或C 1-4烷基；
    R k1、R k3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CF 3、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基，所述烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH或NH 2的取代基所取代；
    或者两个R k3和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-6元碳环或3-7元杂环，两个R k1和与二者直接相连的碳原子或环骨架共同形成3-6元碳环或3-7元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、COOH、CONH 2、C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代，所述杂环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    R k4各自独立的选自H、OH、NH 2、CF 3、CN或C 1-4烷基；
    R k5各自独立地选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100009
    C(CH 3) 2、CO、CH 2、SO 2、
    Figure PCTCN2022090243-appb-100010
    R k6各自独立地选自CO、CH、SO、SO 2、CH 2或N；
    R k7各自独立地选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100011
    C(CH 3) 2、CO、CH、N、CH 2、O、S、N(CH 3)、N(CH 2CH 3)、N(环丙基)或NH；
    R k8各自独立地选自C、N或CH；
    R k9各自独立地选自键、
    Figure PCTCN2022090243-appb-100012
    C(CH 3) 2、CO、CH 2、CH 2CH 2或SO 2；
    A、H1或H2各自独立地选自C 3-8碳环、苯环、4-7元杂环或5-6元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    E各自独立地选自C 3-8碳环、苯环、4-7元杂环、8-12元杂环、7-12元杂芳环或5-6元杂芳环，所述杂环或杂芳环含有1至4个选自O、S或N的杂原子；
    F各自独立地选自3-7元单环烷基、4-10元并环烷基、5-12元螺环烷基、5-10元桥环烷基、4-7元杂单环、4-10元杂并环、5-12元杂螺环、5-10元杂桥环、C 6-14芳基或5-10元杂芳基，所述杂单环、杂并环、杂螺环、杂桥环或杂芳基含有1至4个选自O、S或N的杂原子。
  4. 根据权利要求3所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    R L选自H、甲基或乙基；
    q各自独立的选自0、1或2；
    Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键或取代的或者未取代的如下基团之一：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己烯基、哌啶、吗啉、哌嗪、苯基、环丙基并环丙基、环丙基并环丁基、环丙基并环戊基、环丙基并环己基、环丁基并环丁基、环丁基并环戊基、环丁基并环已基、环戊基并环戊基、环戊基并环已基、环已基并环已基、环丙基螺环丙基、环丙基螺环丁基、环丙基螺环戊基、环丙基螺环己基、环丁基螺环丁基、环丁基螺环戊基、环丁基螺环己基、环戊基螺环戊基、环戊基螺环已基、环已基螺环已基、环丙基并氮杂环丁基、环丙基并氮杂环戊基、环丙基并氮杂环己基、环丁基并氮杂环丁基、环丁基并氮杂环戊基、环丁基并氮杂环已基、环戊基并氮杂环丁基、环戊基并氮杂环戊基、环戊基并氮杂环已基、环已基并氮杂环丁基、环已基并氮杂环戊基、环已基并氮杂环已基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环已基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环已基、氮杂环已基并氮杂环丁基、氮杂环已基并氮杂环戊基、氮杂环已基并氮杂环已基、环丁基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环已基、环戊基螺氮杂环丁基、环戊基螺氮杂环戊基、环戊基螺氮杂环已基、环已基螺氮杂环丁基、环已基螺氮杂环戊基、环已基螺氮杂环已基、氮杂环丁基螺 氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环已基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环已基、氮杂环已基螺氮杂环丁基、氮杂环已基螺氮杂环戊基、氮杂环已基螺氮杂环已基、
    Figure PCTCN2022090243-appb-100013
    Figure PCTCN2022090243-appb-100014
    Figure PCTCN2022090243-appb-100015
    当被取代时，任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2、COOH、CN、＝O、C 1-4烷基、卤素取代的C 1-4烷基、羟基取代的C 1-4烷基或C 1-4烷氧基的取代基所取代；
    Figure PCTCN2022090243-appb-100016
    选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100017
    Figure PCTCN2022090243-appb-100018
    环V选自氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基或哌嗪基，所述的氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基或哌嗪基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN或C 1-4烷基的取代基所取代；
    R b1、R b2各自独立的选自甲基或乙基；
    R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙基氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯 基或5至6元杂芳基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙基氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基或5至6元杂芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH 2、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代的取代基所取代，所述的杂芳基含有1至3个选自O、S或N的杂原子；
    R b4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R b5选自H；
    R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基，所述的甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    R b7选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯、吡唑、吡啶或苯基，所述R b7任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、氘代C 1-4烷基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤素取代的C 1-4烷基、氰基取代的C 1-4烷基或C 3-6环烷基的取代基所取代；
    K选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100019
    Figure PCTCN2022090243-appb-100020
    Figure PCTCN2022090243-appb-100021
    Figure PCTCN2022090243-appb-100022
    E各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
    A各自独立地选自苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基或噁唑基；
    F各自独立地选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷基、6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶基、2,3-二氢-1H-茚基、苯基、萘基、蒽基、菲基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、2-吡啶酮、苯并噁唑基、吡啶并咪唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并吡咯基、苯并吡啶基、苯并吡嗪基、苯并嘧啶基、苯并哒嗪基、苯并三嗪基、吡咯并吡咯基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡咯并哒嗪基、吡咯并吡嗪基、咪唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并吡嗪基、咪唑并哒嗪基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、吡唑并哒嗪基、吡唑并吡嗪基、嘧啶并吡啶基、嘧啶并吡嗪基、嘧啶并哒嗪基、嘧啶并嘧啶基、吡啶并吡啶基、吡啶并吡嗪基、吡啶并哒嗪基、哒嗪并哒嗪基、哒嗪并吡嗪基或吡嗪并吡嗪基；
    R k7各自独立地选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100023
    C(CH 3) 2、CH 2、O、N(CH 3)、N(CH 2CH 3)、N(环丙基)或NH；
    p1或p2各自独立的选自0、1或2。
  5. 根据权利要求4所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    Cy1、Cy2、Cy3、Cy4或Cy5各自独立的选自键或取代的或者未取代的如下基团之一：
    Figure PCTCN2022090243-appb-100024
    Figure PCTCN2022090243-appb-100025
    Figure PCTCN2022090243-appb-100026
    当被取代时，任选进一步被0至4个选自H、F、CF 3、甲基、＝O、羟甲基、COOH、CN或NH 2的取代基所取代；
    B选自
    Figure PCTCN2022090243-appb-100027
    Figure PCTCN2022090243-appb-100028
    环V选自哌啶或哌嗪，所述哌啶或哌嗪任选进一步被0至2个F取代；
    R b1、R b2选自甲基；
    K选自表K-1所示的结构片段之一；。
  6. 根据权利要求5所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    L选自-Cy1-、-Cy1-Ak1-、-Cy1-Ak1-Ak2-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-、-Cy1-Ak1-Cy2-、-Cy1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Ak2-Cy3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Ak2-Cy3-、-Ak1-Cy2-Cy3-Ak3-Cy4-、-Ak1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Cy5-、-Ak1-Cy2-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-、-Ak1-Ak2-Ak3-、-Ak1-Ak2-、-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Ak2-Cy3-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Cy1-Cy2-Cy3-Cy4-Ak4-Ak5-、-Cy1-Ak1-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-Ak5-、-Ak1-Cy2-、-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-Ak4-或-Ak1-Cy2-Ak2-Ak3-；
    Ak1、Ak2、Ak3、Ak4、Ak5各自独立的选自-O-、-OCH 2-、-CH 2O-、-OCH 2CH 2-、-CH 2CH 2O-、-C≡C-、-C(CH 3) 2-、-CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-N(CH 3)-、-NH-、-CH 2N(CH 3)-、-CH 2NH-、-NHCH 2-、-CH 2CH 2N(CH 3)-、-CH 2CH 2NH-、-NHCH 2CH 2-、-C(＝O)-、-C(＝O)CH 2NH-、-CH 2C(＝O)NH-、-C(＝O)N(CH 3)-、-N(CH 3)C(＝O)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)-。
  7. 根据权利要求6所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    L选自键或表A中的基团，其中基团左侧与B连接。
  8. 根据权利要求7所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代 谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    B选自如下结构片段之一：
    Figure PCTCN2022090243-appb-100029
    Figure PCTCN2022090243-appb-100030
    R b3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙炔基、甲氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基或苯基或5至6元杂芳基，所述的苯基或5至6元杂芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代，所述的杂芳基含有1至3个选自O、S或N的杂原子；
    R b4选自H、F、Cl或Br；
    R b6各自独立的选自H、F、Cl、Br、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
    R b7选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯、吡唑、吡啶或苯基，所述R b7任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、CN、CH 2D、CHD 2、CD 3、甲基或乙基的取代基所取代；
    K选自表K-2所示的结构片段之一。
  9. 根据权利要求8所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    B选自表B-1所示结构片段之一；
    K选自表K-3所示的结构片段之一。
  10. 根据权利要求1所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物选表E-1所示结构之一。
  11. 一种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求1-10任意一项所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，以及药学上可接受的载体，任选地包含一种多或多种其它化学治疗剂。
  12. 根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述的治疗有效量是指，药物组合物以适合于待治疗(或预防)的疾病的剂量给予，例如给予约0.5μg至约50mg的至少一种化合物/kg受试者体重，优选约10μg至约100mg/kg体重/天。
  13. 根据权利要求1-10任意一项所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶、或权利要求11-12任一项所述的组合物在用于制备治疗与EGFR活性或表达量相关疾病的药物中的应用。
  14. 根据权利要求1-10任意一项所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶、或权利要求11-12任一项所述的组合物在用于制备治疗与抑制或降解EGFR相关疾病的药物中的应用。
  15. 根据权利要求13或14所述的应用，其特征在于，所述的疾病选自癌症，优选非小细胞肺癌。
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