KR20220163985A - 질소-함유 방향족 유도체의 자유 알칼리 결정 형태 - Google Patents

질소-함유 방향족 유도체의 자유 알칼리 결정 형태 Download PDF

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KR20220163985A
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샤오란 잔
린송 구오
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상하이 한서 바이오메디컬 컴퍼니 리미티드
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Abstract

본 발명은 질소-함유 방향족 유도체의 자유 알칼리의 결정 형태에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 화학식 I로 표시되는 화합물의 결정 형태, 이의 제조 방법 및 상기 결정 형태를 치료 효과량으로 함유하는 약학적 조성물, 및 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 유방암, 폐암 및 결장직장암과 같은 질병 또는 병태의 치료에서 단백질 티로신 포스파타제-2C(SHP2) 억제제로서 이의 용도에 관한 것이다.

Description

질소-함유 방향족 유도체의 자유 알칼리 결정 형태
본 발명은 바이오 의약 분야에 속하며, 특히 질소-함유 헤테로방향족 유도체의 자유 염기의 결정 형태, 이의 제조 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
티로신-단백질 포스파타제 비수용체 유형 11(PTPN11)로도 공지된 Src 상동성-2 도메인 함유 포스파타제 2(SHP-2)는 PTPN11 유전자에 의해 암호화되며 단백질 티로신 포스파타제(PTP) 패밀리에 속한다. SHP-2는 사이토카인, 성장인자 및 기타 세포외 자극인자의 다운스트림 신호 분자로서 신체의 다양한 조직 및 세포에서 널리 발현되고 세포 신호 전달에 참여하며 세포 성장, 분화, 이동, 대사, 유전자 전사, 면역 반응 등을 조절한다.
SHP-2는 SH-2 도메인(N-SH2 및 C-SH2), PTP 활성 도메인 및 C-말단(티로신 인산화 부위를 가짐)의 세 가지 주요 구조 부분을 가지고 있다. SH2 도메인은 고도로 보존되어 있으며, 이는 포스포티로신 결합 부위이며 PTP 도메인의 이의 리간드에 대한 결합을 매개한다.
SHP-2는 생체 내에서 비활성화된 상태와 활성화된 상태의 두 가지 주요 상태를 가지고 있다. 비활성화 상태에서 SHP-2의 N-SH2는 PTP 도메인에 결합하는데, PTP 도메인이 점유되어 있기 때문에 SHP-2가 비활성화된다. N-SH2가 인산화된 티로신 잔기 리간드에 특이적으로 결합하면 PTP 도메인이 다시 노출되고 SHP-2가 활성을 재개한다. 최신 연구에 따라 SHP-2는 또한 생체 내에서 이량체를 형성할 수 있으며, 이는 또한 SHP-2 비활성화로 이어질 수 있다.
SHP-2는 주로 ERK/MAPK, JAK-STAT, PI3K/AKT, Hippo, Wnt/β-카테닌과 같은 신호 경로를 조절하여 생물학적 발달과 항상성을 유지하는 기능을 한다. 특정 연구에 따라 SHP-2는 수용체 티로신 키나제(RTK) 또는 스캐폴드에 직접 결합하여 ERK/MAPK 경로의 활성화에 참여한다. 또한, 활성화된 SHP-2는 GRB2/SOS를 모집할 수 있으며 간접적으로 RAS 신호 전달 경로의 활성화를 촉진한다. 또한, SHP-2는 면역 반응을 억제하는 신호 전달에도 관여한다. 예를 들어, SHP-2 및 SHP-1은 면역억제 수용체(예컨대, PD-1)에 결합하여 이를 활성화하고, T 세포 활성화를 차단할 수 있다.
중요한 세포 신호 인자로서 SHP-2 돌연변이는 많은 질병과 밀접한 관련이 있다. 연구에 따라 SHP-2 돌연변이는 신경모세포종, 급성 골수성 백혈병(A ML, 4%), 유방암, 비소세포폐암(NSCLC, 10%), 폐 선암종(30%), 식도암, 두경부 종양, 흑색종 및 위암.
SHP-2의 돌연변이 부위는 주로 N-SH2 및 PTP 활성 영역에서 발생한다. 돌연변이는 N-CH2/PTP 도메인의 상호 억제를 감소시키고 고도로 활성인 SHP-2를 유도하며, 예를 들어 Cys459Ser 돌연변이, E76K 돌연변이 등은 SHP-2의 활성에 영향을 미칠 것이다. 연구에 따라 고활성 SHP-2는 염증, 간경화, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)가 분비하는 독소 CagA 등과 밀접한 관련이 있다. 고도로 활성인 SHP-2는 종양 재생 및 발달을 유발할 수 있으며 원암 유전자와 동등한다. SHP-2에 대한 이해가 깊어짐에 따라 SHP-2는 신약 개발을 위한 종양 치료 표적으로 활용되고 있다.
현재, 여러 SHP-2 알로스테릭 억제제가 임상 연구 단계에 진입하였다. 예를 들어, Novartis가 개발한 TNO-155, Revolution Medicine이 개발한 RMC-4630, Beijing Jacobio가 개발한 JAB-3068은 모두 임상 1상 단계에 진입했다. 그러나 누난 증후군, 레오파드 증후군, 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 유방암, 식도암, 두경부 종양, 폐암 및 결장암의 치료를 위한 SHP-2 억제제는 시장에 없다. 따라서, 약학적 특성이 우수한 SHP-2 억제제 계열의 개발이 시급하다.
PCT 특허 출원(출원 번호: PCT/CN2019/110314)은 일련의 질소-함유 헤테로방향족 유도체 억제제의 구조를 개시하고 있다. 이후의 연구개발에서는 가공, 여과, 건조가 용이한 제품을 수득하고, 보관의 편리성, 장기안정성, 높은 생체이용률 등의 특징을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 물질의 자유 염기에 대한 종합적인 연구를 수행하고, 가장 적합한 결정 형태를 수득하는 데 전념한다.
특허 출원 PCT/CN2019/110314에 관련된 모든 내용은 참고로 본 발명에 포함된다.
본 발명의 목적은 구조가 하기 화학식 I로 표시되는 화학식 I의 화합물의 결정 형태를 제공하는 것이다:
Figure pct00001
상기 식에서,
R1은 수소, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 추가 치환되고;
R2는 수소, 아미노 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3은 수소, 할로겐, 아미노, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 추가 치환되고;
R4는 수소, 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C2-6 알켄일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C2-6 알켄일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 추가 치환되거나,
R5 및 R6은 결합하여 C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 또는 5 내지 12 원 헤테로아릴을 형성하고, 이때, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 수소, 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 추가 치환된다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, R1은 수소, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 하이드록시, 옥소, C1-6 알킬 및 C3-8 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 보다 바람직하게는 수소, 할로겐, C1-3 알킬, C1-3 하이드록시알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-3 알킬, C1-3 하이드록시알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 하이드록시, 옥소, C1-3 알킬 및 C3-6 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 추가로 바람직하게는 수소, 불소, 브롬, 메틸, 하이드록시에틸,
Figure pct00002
,
Figure pct00003
,
Figure pct00004
,
Figure pct00005
,
Figure pct00006
및
Figure pct00007
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, R2는 수소, 아미노 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 수소, 아미노 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 보다 바람직하게는 수소, 아미노, 메틸, 에틸 및 프로필로부터 선택되고; 추가로 바람직하게는 수소, 아미노 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, R3은 수소, 할로겐, 아미노, C1-6 알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 옥소로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 바람직하게는 수소, 할로겐, 아미노, C1-3 알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-3 알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 옥소로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 추가로 바람직하게는 아미노, 염소, 사이클로프로필, 아자사이클로부틸, 테트라하이드로피롤일, 모르폴리닐,
Figure pct00008
,
Figure pct00009
및
Figure pct00010
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, R4는 수소, 할로겐, C1-6 알킬 및 C3-8 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 수소, 할로겐, C1-3 알킬 및 C3-6 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 추가로 바람직하게는 수소, 불소, 염소, 메틸 및 사이클로프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-6 알켄일 및 C3-8 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-6 알켄일 및 C3-8 사이클로알킬은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 바람직하게는 수소, C1-3 알킬, C2-4 알켄일 및 C3-6 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-3 알킬, C2-4 알켄일 및 C3-6 사이클로알킬은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 추가로 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, 비닐, 사이클로프로필,
Figure pct00011
및
Figure pct00012
로 이루어진 군으로부터 선택되거나,
R5 및 R6은 결합하여 C3-8 사이클로알킬, C6-12 아릴 또는 5 내지 12 원 헤테로아릴을 형성하고, 이때, 상기 C3-8 사이클로알킬, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 바람직하게는 C3-6 사이클로알킬, 페닐 또는 5 또는 6 원 헤테로아릴을 형성하고, 이때, 상기 C3-6 사이클로알킬, 페닐 및 5 또는 6 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고; 추가로 바람직하게는
Figure pct00013
,
Figure pct00014
,
Figure pct00015
,
Figure pct00016
,
Figure pct00017
,
Figure pct00018
또는
Figure pct00019
을 형성한다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, 화합물의 구조는 하기 화학식 (II)에 제시된 바와 같다:
Figure pct00020
상기 식에서,
고리 A는 C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-10 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Ra는 수소, 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
x는 0, 1, 2 또는 3이다.
본 발명의 추가의 바람직한 양태에서, 고리 A는 페닐이다.
본 발명은 또한 구체적으로 하기 단계를 포함하는 화학식 I의 화합물의 결정 형태의 제조 방법을 제공한다:
1) 적당량의 자유 염기를 칭량하여 저조 용매(poor solvent)에 현탁하여 현탁액을 수득하는 단계로서, 상기 현탁액 밀도가 바람직하게는 50 내지 200 mg/mL인, 단계;
2) 단계 1)에서 수득된 현탁액을 0 내지 40℃에서 1 내지 10일 동안 진탕시키는 단계;
3) 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계;
이때,
단계 1)의 저조 용매는 아세톤, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온 및 3-펜탄온; 바람직하게는 3-펜탄온, 아세토니트릴, 디클로로메탄 및 1,4-디옥산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 구체적으로 하기 단계를 포함하는 화학식 I의 화합물의 결정 형태의 제조 방법을 제공한다:
1) 적당량의 자유 염기를 칭량하고, 우수 용매(good solvent)에 용해시키는 단계
2) 상기 단계 1)에서 수득된 용액에 0 내지 25℃에서 역용매(anti-solvent)를 첨가하고, 고체가 침전될 때까지 교반하는 단계;
3) 상기 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계;
이때,
단계 1)의 우수 용매는 메탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온 및 3-펜탄온으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드 및 아세토니트릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
단계 2)의 역용매는 헵탄, 물, 메틸 tert-부틸 에터, 톨루엔 및 이소프로필 에터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 물이다.
본 발명의 추가의 바람직한 양태에서, 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 A이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 9.0°, 15.2°, 20.2° 및 23.0°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 0.7°, 12.3°, 15.4°, 19.8°, 23.5° 및 27.1°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖고; 4.5°, 13.7°, 14.6°, 16.8°, 18.1°, 21.5°, 27.7° 및 28.2°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖는다.
Cu-Kα 방사선을 사용하여 2θ 각도와 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크는 표 1에 제시된다.
번호 결정 형태 A의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%) 면적 비율(I%)
1 4.46 19.7967 336 59.9 2777 29.9
2 8.95 9.8727 553 98.6 6611 71.3
3 9.677 9.1323 292 52 2672 28.8
4 12.348 7.1619 257 45.8 3318 35.8
5 13.431 6.587 90 16 2814 30.3
6 13.732 6.4435 131 23.4 2807 30.3
7 14.58 6.0703 129 23 2026 21.8
8 15.213 5.8193 561 100 9274 100
9 15.435 5.7362 364 64.9 4743 51.1
10 16.75 5.2884 194 34.6 3530 38.1
11 17.072 5.1895 81 14.4 1497 16.1
12 18.129 4.8892 90 16 1303 14.1
13 19.838 4.4718 234 41.7 5413 58.4
14 20.199 4.3926 337 60.1 5137 55.4
15 21.454 4.1383 106 18.9 1754 18.9
16 22.974 3.868 537 95.7 8148 87.9
17 23.463 3.7884 335 59.7 6702 72.3
18 27.05 3.2936 183 32.6 2983 32.2
19 27.741 3.2132 175 31.2 3116 33.6
20 28.169 3.1653 93 16.6 1534 16.5
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 A이고, 이의 DSC 스펙트럼은 실질적으로 도 1에 도시된 바와 같고; 이의 TGA 스펙트럼은 실질적으로 도 2에 도시된 바와 같다.
본 발명의 추가의 바람직한 양태에서, 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 7.9°, 14.6° 및 16.2°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 18.1°, 19.2°, 20.2°, 24.7° 및 26.8°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 14.9°, 27.2°, 28.1° 및 30.5°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖고; 더 많은 것은 13.9°, 15.6°, 16.9° 및 19.8°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖고; 가장 바람직하게는, 이의 XRPD 패턴은 실질적으로 도 3에 도시된 바와 같다.
Cu-Kα 방사선을 사용하여, 2θ 각도와 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크는 표 2에 제시된다.
번호 결정 형태 B의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%) 면적 비율(I%)
1 6.31 13.9956 80 8 396 2.5
2 7.853 11.2482 690 68.7 5922 37.1
3 9.923 8.9068 61 6.1 834 5.2
4 13.911 6.3607 221 22 1254 7.9
5 14.564 6.0771 733 72.9 9648 60.5
6 14.925 5.9309 547 54.4 6387 40
7 15.637 5.6625 105 10.4 1085 6.8
8 16.166 5.4781 1005 100 13053 81.8
9 16.92 5.2359 139 13.8 1536 9.6
10 18.11 4.8942 948 94.3 14765 92.6
11 19.183 4.6229 707 70.3 6787 42.5
12 19.831 4.4733 317 31.5 5379 33.7
13 20.219 4.3883 838 83.4 14241 89.3
14 21.899 4.0553 126 12.5 1340 8.4
15 23.135 3.8413 126 12.5 697 4.4
16 24.679 3.6044 447 44.5 7296 45.7
17 26.828 3.3204 820 81.6 15952 100
18 27.211 3.2745 232 23.1 8341 52.3
19 27.843 3.2016 219 21.8 6157 38.6
20 28.123 3.1703 265 26.4 6160 38.6
21 29.136 3.0624 131 13 1588 10
22 30.459 2.9323 227 22.6 4827 30.3
23 31.428 2.8441 131 13 2164 13.6
24 31.833 2.8088 80 8 470 2.9
25 32.483 2.7541 67 6.7 851 5.3
26 33.25 2.6923 78 7.8 709 4.4
27 34.473 2.5996 55 5.5 1185 7.4
28 34.915 2.5676 63 6.3 2273 14.2
29 38.185 2.3549 55 5.5 3052 19.1
30 38.787 2.3197 69 6.9 1824 11.4
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B이고, 이의 DSC 스펙트럼은 실질적으로 도 4에 도시된 바와 같고; 이의 TGA 스펙트럼은 실질적으로 도 5에 도시된 바와 같다.
본 발명의 추가의 바람직한 양태에서, 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 C이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 9.4°, 14.5° 및 20.3°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 또한 22.2°, 22.7°, 22.9° 및 26.2°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 8.2°, 14.9°, 23.8°, 27.5°, 28.1°, 29.3°, 30.2° 및 31.7°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖고; 12.0°, 16.4°, 25.5°, 28.6°, 34.8° 및 35.4°의 2θ에서 회절 피크를 더 추가로 갖는다.
Cu-Kα 방사선을 사용하여 2θ 각도 및 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크는 표 3에 제시된다.
번호 결정 형태 C의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%) 면적 비율(I%)
1 8.155 10.8327 137 20.9 1410 12.1
2 9.412 9.3886 231 35.3 2719 23.2
3 12.023 7.3549 108 16.5 578 4.9
4 14.522 6.0944 654 100 9549 81.6
5 14.926 5.9303 380 58.1 6492 55.5
6 16.351 5.4166 181 27.7 1568 13.4
7 19.076 4.6485 87 13.3 2344 20
8 19.63 4.5187 77 11.8 1134 9.7
9 20.32 4.3666 604 92.4 6581 56.2
10 22.206 4 414 63.3 5017 42.9
11 22.652 3.9222 384 58.7 11700 100
12 22.933 3.8748 465 71.1 10729 91.7
13 23.849 3.7279 277 42.4 3805 32.5
14 25.493 3.4912 116 17.7 2306 19.7
15 26.198 3.3987 367 56.1 6160 52.6
16 27.517 3.2388 258 39.4 3216 27.5
17 28.081 3.175 266 40.7 3946 33.7
18 28.55 3.1239 143 21.9 2439 20.8
19 29.341 3.0415 149 22.8 1702 14.5
20 30.153 2.9614 207 31.7 3160 27
21 31.673 2.8226 178 27.2 3637 31.1
22 33.013 2.7111 61 9.3 1617 13.8
23 34.816 2.5747 119 18.2 1530 13.1
24 35.384 2.5346 112 17.1 2291 19.6
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 C이고, 이의 DSC 스펙트럼은 실질적으로 도 6에 도시된 바와 같고; 이의 TGA 스펙트럼은 실질적으로 도 7에 도시된 바와 같다.
본 발명의 추가의 바람직한 양태에서, 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 D이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 5.1°, 13.4° 및 18.3°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 또한 18.0°, 19.9°, 20.7° 및 22.6°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 13.7°, 16.8°, 17.7°, 19.0°, 22.3° 및 27.5°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖고; 16.1°, 22.9°, 24.9°, 25.5° 및 28.9°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 더 갖는다.
Cu-Kα 방사선을 사용하여 2θ 각도와 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크는 표 4에 제시된다.
번호 결정 형태 D의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%) 면적 비율(I%)
1 5.077 17.3927 634 100 4794 30.6
2 13.369 6.6176 377 59.5 4314 27.5
3 13.652 6.481 250 39.4 2141 13.7
4 16.137 5.4881 107 16.9 914 5.8
5 16.756 5.2866 300 47.3 2486 15.9
6 17.728 4.999 206 32.5 5075 32.4
7 17.928 4.9437 437 68.9 8117 51.8
8 18.251 4.8567 608 95.9 8751 55.8
9 19.025 4.6608 214 33.8 1681 10.7
10 19.855 4.468 346 54.6 4664 29.8
11 20.704 4.2866 434 68.5 5726 36.5
12 22.285 3.9859 372 58.7 12254 78.2
13 22.609 3.9295 467 73.7 15673 100
14 22.893 3.8815 196 30.9 3486 22.2
15 24.92 3.57 111 17.5 2065 13.2
16 25.468 3.4946 128 20.2 2543 16.2
17 27.517 3.2388 199 31.4 4405 28.1
18 28.486 3.1308 74 11.7 1554 9.9
19 28.898 3.0871 170 26.8 3959 25.3
20 32.646 2.7407 77 12.1 684 4.4
21 33.941 2.6391 74 11.7 1278 8.2
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 D이고, 이의 DSC 스펙트럼은 실질적으로 도 8에 도시된 바와 같고, 이의 TGA 스펙트럼은 실질적으로 도 9에 도시된 바와 같다.
본 발명의 추가의 바람직한 양태에서, 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 E이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 8.4°, 15.3° 및 18.3°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 20.7°, 22.5°, 26.7° 및 27.6°의 2θ에서 회절 피크를 갖고; 13.5°, 14.6°, 15.8°, 16.0°, 16.9°, 19.2°, 20.4°, 24.0°, 24.4°, 25.5°, 28.2°, 28.9°, 31.8° 및 32.2°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖고, 5.2°, 9.5°, 10.4°, 17.2°, 17.7°, 19.5°, 20.0°, 26.3°, 28.7°, 30.5°, 31.0° 및 34.1°의 2θ에서 회절 피크를 추가로 갖는다
Cu-Kα 방사선을 사용하여 2θ 각도와 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크는 표 5에 제시된다.
번호 결정 형태 E의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%) 면적 비율(I%)
1 5.213 16.9394 142 14.1 1046 7.9
2 8.399 10.5189 557 55.4 6484 48.7
3 9.536 9.2669 131 13 1025 7.7
4 10.431 8.4736 119 11.8 1062 8
5 13.525 6.5415 203 20.2 1975 14.8
6 14.586 6.0678 280 27.9 2862 21.5
7 15.333 5.7739 1005 100 8117 60.9
8 15.756 5.6198 369 36.7 5128 38.5
9 16.022 5.5271 309 30.7 4761 35.7
10 16.873 5.2504 284 28.3 2124 15.9
11 17.158 5.1637 138 13.7 1260 9.5
12 17.724 5.0002 180 17.9 2794 21
13 18.331 4.8358 959 95.4 11686 87.7
14 19.183 4.623 393 39.1 3758 28.2
15 19.527 4.5423 139 13.8 1435 10.8
16 20.055 4.4239 250 24.9 3421 25.7
17 20.463 4.3364 316 31.4 8881 66.7
18 20.745 4.2781 755 75.1 8937 67.1
19 22.528 3.9435 461 45.9 4722 35.4
20 23.927 3.716 304 30.2 6493 48.7
21 24.438 3.6394 328 32.6 3799 28.5
22 25.471 3.4942 227 22.6 2255 16.9
23 26.28 3.3883 113 11.2 589 4.4
24 26.667 3.3401 472 47 4830 36.3
25 27.558 3.234 624 62.1 13324 100
26 28.206 3.1612 187 18.6 1824 13.7
27 28.671 3.111 154 15.3 1821 13.7
28 28.939 3.0828 289 28.8 3092 23.2
29 30.498 2.9287 175 17.4 1729 13
30 31.023 2.8803 157 15.6 1960 14.7
31 31.756 2.8154 168 16.7 5043 37.8
32 32.221 2.7759 228 22.7 3442 25.8
33 34.124 2.6253 151 15 1585 11.9
34 36.496 2.4599 77 7.7 1877 14.1
35 38.162 2.3563 71 7.1 1082 8.1
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민 결정 형태 E이고, 이의 DSC 스펙트럼은 실질적으로 도 10에 도시된 바와 같고; 이의 TGA 스펙트럼은 실질적으로 도 11에 도시된 바와 같다.
또한, 본 발명의 목적은 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A가 제공된다.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 20.0±0.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖거나; 19.4±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 17.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 22.6±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 10.7±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 25.6±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 12.7±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 24.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 19.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 18.4±0.2°에서 회절 피크를 갖고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2 내지 5, 또는 3 내지 5, 또는 3 내지 6, 또는 3 내지 8, 또는 5 내지 8, 또는 6 내지 8개를 포함하고; 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 6, 7 또는 8개를 포함한다.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 적어도 20.0±0.2°, 19.4±0.2° 및 17.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2개를 포함하고, 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 3개를 포함하고; 임의적으로, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함할 수 있고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2, 3, 4 또는 5개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.0±0.2° 및 19.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2° 및 17.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2° 및 17.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2° 및 22.6±0.2°;
또는, 22.6±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 10.7±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2° 및 17.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2° 및 22.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 22.6±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2° 및 22.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 10.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, @22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 10.7±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴 임의적으로 또한 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2°, 31.5±0.2°, 29.2±0.2°, 20.6±0.2° 및 21.4±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고; 추가로 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 12.7±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 29.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2°, 31.5±0.2°, 29.2±0.2°, 20.6±0.2° 및 21.4±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 4, 5, 6, 8 또는 10개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 22.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2°, 31.5±0.2°, 29.2±0.2°, 20.6±0.2°, 21.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2°, 27.4±0.2°, 33.1±0.2° 및 14.5±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 적어도 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10 내지 12, 또는 15 내지 18개를 포함하고; 추가로 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 16 또는 18개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 22.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 10.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 25.6±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 12.7±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 19.1±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 18.4±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 6.2±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 6.2±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 6.2±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 6.2±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°;
또는, 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 24.5±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2°, 21.1±0.2°, 15.8±0.2° 및 31.5±0.2°.
가장 바람직하게는 Cu-Kα 방사선을 사용하여 2θ 각도 및 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크가 표 6에 제시된다.
번호 결정 형태 A의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%)
1 6.205 14.2327 335 15.2
2 10.747 8.2255 727 33
3 12.715 6.9565 630 28.6
4 14.545 6.0847 184 8.4
5 15.761 5.6181 218 9.9
6 17.116 5.1763 1073 48.7
7 18.374 4.8247 365 16.6
8 19.061 4.6521 424 19.3
9 19.428 4.5651 1271 57.7
10 19.976 4.4411 2202 100
11 20.606 4.3067 278 12.6
12 21.111 4.2048 229 10.4
13 21.44 4.141 264 12
14 22.551 3.9396 838 38.1
15 24.532 3.6257 470 21.3
16 25.612 3.4751 717 32.6
17 27.379 3.2548 196 8.9
18 29.22 3.0537 318 14.4
19 31.514 2.8365 333 15.1
20 33.054 2.7078 191 8.7
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 실질적으로 도 12에 도시된 바와 같고; 이의 DSC 스펙트럼은 도 13에 도시된 바와 같고; 이의 TGA 스펙트럼은 도 14에 도시된 바와 같다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A는 용매-함유 결정 형태 또는 용매-미함유 결정 형태이며, 여기서 용매는 물, 메탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸-테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸술폭시드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜탄온, n-헵탄, 헵탄, 에틸 포르메이트, 이소프로필 아세테이트, 사이클로헥산, 메틸 tert-부틸 에터 및 이소프로필 에터로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상이고.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A 중 함유된 용매 분자의 개수는 0.2 내지 3개, 바람직하게는 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3개, 보다 바람직하게는 0.5, 1, 2 또는 3개이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A는 용매-미함유 결정 형태, 보다 바람직하게는 무수 결정 형태이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A는 수화물 결정 형태이고, 물 분자의 개수는 0.2 내지 3개, 바람직하게는 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3개, 보다 바람직하게는 0.5, 1, 2 또는 3개이다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B가 제공된다.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 20.2±0.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖거나; 22.2±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 12.2±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 25.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 21.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 18.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 17.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 20.0±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 28.6±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 5.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2 내지 5, 또는 3 내지 5, 또는 3 내지 6, 또는 3 내지 8, 또는 5 내지 8, 또는 6 내지 8개를 포함하고; 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 6, 7 또는 8개를 포함하고;
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 적어도 20.2±0.2°, 22.2±0.2° 및 12.2±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2개를 포함하고, 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 3개를 포함하고; 임의적으로, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함할 수 있고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2, 3, 4 또는 5개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.2±0.2° 및 22.2±0.2°;
또는, 20.2±0.2° 및 12.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2° 및 12.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2° 및 25.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2° 및 25.1±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 25.1±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 25.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 25.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 18.5±0.2° 및 17.8±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 17.8±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 17.8±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 17.8±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 20.0±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 20.0±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 17.8±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴 임의적으로 또한 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2°, 24.5±0.2°, 13.2±0.2°, 12.4±0.2° 및 29.2±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고; 추가로 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 5.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2° 및 24.5±0.2°;
20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2° 및 13.2±0.2°;
20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2° 및 12.4±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2°, 24.5±0.2°, 13.2±0.2°, 12.4±0.2° 및 29.2±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 4, 5, 6, 8 또는 10개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 25.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 17.8±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 20.0±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 22.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 18.5±0.2° 및 28.6±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 28.6±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 28.6±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 5.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 5.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 28.6±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 5.1±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 5.1±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 5.1±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2 및 28.6±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 5.1±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 5.1±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 5.1±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2°, 5.1±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2°, 5.1±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2° 및 24.5±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2°, 24.5±0.2°, 13.2±0.2°, 12.4±0.2°, 29.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2°, 16.9±0.2°, 30.5±0.2° 및 15.5±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 적어도 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10 내지 12, 또는 15 내지 18개를 포함하고; 추가로 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 16 또는 18개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 25.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 18.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 17.8±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 20.0±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2°, 10.8±0.2° 및 9.9±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 22.2±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 22.2±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 28.6±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 22.2±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 28.6±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 28.6±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 5.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 5.1±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2° 및 9.9±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2°, 9.9±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 5.1±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 14.3±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 5.1±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 24.5±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 5.1±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2°, 28.6±0.2°, 10.8±0.2°, 9.9±0.2° 및 13.2±0.2°;
또는, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 9.9±0.2° 및 13.2±0.2°.
가장 바람직하게는 Cu-Kα 방사선을 사용하여 2θ 각도 및 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크가 표 7에 제시된다.
번호 결정 형태 B의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%)
1 5.095 17.3287 325 22
2 9.939 8.892 189 12.8
3 10.831 8.162 191 12.9
4 12.188 7.256 815 55.2
5 12.414 7.1243 231 15.7
6 13.162 6.7211 265 18
7 14.316 6.1817 306 20.7
8 15.493 5.7145 173 11.7
9 16.854 5.2563 179 12.1
10 17.788 4.9822 371 25.1
11 18.452 4.8045 440 29.8
12 19.976 4.4412 359 24.3
13 20.238 4.3842 1476 100
14 21.455 4.1382 502 34
15 22.185 4.0037 1166 79
16 24.496 3.631 295 20
17 25.081 3.5476 634 43
18 28.551 3.1238 327 22.2
19 29.239 3.0518 216 14.6
20 30.478 2.9305 177 12
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 실질적으로 도 15에 도시된 바와 갖고; 이의 DSC 스펙트럼은 도 16에 도시된 바와 같다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B는 용매-함유 결정 형태 또는 용매-미함유 결정 형태이며, 여기서 용매는 물, 메탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸-테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸술폭시드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜탄온, n-헵탄, 헵탄, 에틸 포르메이트, 이소프로필 아세테이트, 사이클로헥산, 메틸 tert -부틸 에터 및 이소프로필 에터로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B 중 함유된 용매 분자의 개수는 0.2 내지 3개, 바람직하게는 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3개, 보다 바람직하게는 0.5, 1, 2 또는 3개이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B는 용매-미함유 결정 형태, 보다 바람직하게는 무수 결정 형태이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B는 수화물 결정 형태이고, 물 분자의 개수는 0.2 내지 3개, 바람직하게는 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3개, 보다 바람직하게는 0.5, 1, 2 또는 3개이다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C가 제공된다.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 17.8±0.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고; 19.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 26.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 18.2±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 24.0±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 22.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 10.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 21.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 17.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 21.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2 내지 5, 또는 3 내지 5, 또는 3 내지 6, 또는 3 내지 8, 또는 5 내지 8, 또는 6 내지 8개를 포함하고; 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 6, 7 또는 8개를 포함하고;
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 적어도 17.8±0.2°, 19.8±0.2° 및 26.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2개를 포함하고, 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 3개를 포함하고; 임의적으로, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함할 수 있고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2, 3, 4 또는 5개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
17.8±0.2° 및 19.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2° 및 26.1±0.2°;
또는, 19.8±0.2° 및 26.1±0.2°;
또는, 26.1±0.2° 및 18.2±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2° 및 26.1±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 18.2±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 18.2±0.2°;
또는, 26.1±0.2°, 18.2±0.2° 및 24.0±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 18.2±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2° 및 24.0±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2° 및 24.0±0.2°;
또는, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 22.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2° 및 24.0±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 22.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 10.5±0.2°;
또는, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 10.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 22.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 10.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 10.5±0.2°;
또는, 26.1±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 22.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 10.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 10.5±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴 임의적으로 또한 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2°, 22.3±0.2°, 24.3±0.2°, 14.5±0.2° 및 30.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고; 추가로 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 21.8±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 14.5±0.2°;
또는, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 14.5±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2°, 22.3±0.2°, 24.3±0.2°, 14.5±0.2° 및 30.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 4, 5, 6, 8 또는 10개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 18.2±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 24.0±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 22.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 10.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 17.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 17.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 17.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 21.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 21.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 21.8±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 21.8±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 21.8±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 17.5±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 21.8±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 17.5±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 21.8±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 17.5±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 21.8±0.2° 및 24.3±0.2°.
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2°, 22.3±0.2°, 24.3±0.2°, 14.5±0.2°, 30.1±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2°, 24.8±0.2°, 13.2±0.2° 및 12.5±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 적어도 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10 내지 12, 또는 15 내지 18개를 포함하고; 추가로 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 16 또는 18개를 포함하고;
예컨대, 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 하기 위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는다:
17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 18.2±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 24.0±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 22.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 10.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 21.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 17.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 17.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 17.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 21.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 21.8±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 21.8±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 19.5±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 21.8±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 22.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 24.3±0.2°;
또는, 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 21.8±0.2°, 23.4±0.2°, 12.0±0.2° 및 24.3±0.2°.
가장 바람직하게는 Cu-Kα 방사선을 사용하여 2θ 각도 및 면간 간격 d 값으로 표시되는 특징적인 X선 회절 피크가 표 8에 제시된다.
번호 결정 형태 C의 XRPD 회절 데이터
2θ(±20.2°) d 값 피크 높이 비율(I%)
1 10.544 8.3832 296 36.4
2 12.046 7.3412 138 17
3 12.476 7.0891 120 14.7
4 13.182 6.7106 129 15.8
5 14.461 6.1201 173 21.3
6 17.522 5.0572 242 29.7
7 17.807 4.9769 814 100
8 18.249 4.8573 541 66.5
9 19.451 4.5598 210 25.8
10 19.835 4.4725 607 74.6
11 21.473 4.1349 287 35.3
12 21.762 4.0806 233 28.6
13 22.306 3.9822 201 24.7
14 22.813 3.8949 341 41.9
15 23.4 3.7984 156 19.2
16 24.049 3.6974 371 45.6
17 24.332 3.655 198 24.3
18 24.798 3.5873 132 16.2
19 26.117 3.4091 567 69.7
20 30.11 2.9655 160 19.7
본 발명의 결정 형태는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C이고, 이의 X선 분말 회절 패턴은 실질적으로 도 17에 도시된 바와 갖고; 이의 DSC 스펙트럼은 도 18에 도시된 바와 같다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C는 용매-함유 결정 형태 또는 용매-미함유 결정 형태이며, 여기서 용매는 물, 메탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸-테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸술폭시드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜탄온, n-헵탄, 헵탄, 에틸 포르메이트, 이소프로필 아세테이트, 사이클로헥산, 메틸 tert -부틸 에터 및 이소프로필 에터로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C 중 함유된 용매 분자의 개수는 0.2 내지 3개, 바람직하게는 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3개, 보다 바람직하게는 0.5, 1, 2 또는 3개이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C는 용매-미함유 결정 형태, 보다 바람직하게는 무수 결정 형태이다.
본 발명의 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C는 수화물 결정 형태이고, 물 분자의 개수는 0.2 내지 3개, 바람직하게는 0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3개, 보다 바람직하게는 0.5, 1, 2 또는 3개이다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, 결정 형태의 X선 분말 회절 패턴에서, 상위 10개의 피크 강도를 갖는 회절 피크 위치와 참조 회절 피크 위치 사이의 2θ 오차는 ±0.2° 내지 ±0.5°, 바람직하게는 ±0.2° 내지 ±0.3°, 가장 바람직하게는 ±0.2°이다.
본 발명의 추가로 바람직한 양태에서, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A, 결정 형태 B 및 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴에서, 도 1, 4 및 6 각각에서, 상위 10개의 피크 강도를 갖는 회절 피크 위치와 참조 회절 피크 위치 사이의 2θ오차는 ±0.2° 내지 ±0.5°, 바람직하게는 ±0.2° 내지 ±0.3°, 가장 바람직하게는 ±0.2°이다.
본 발명은 또한 구체적으로 하기 단계를 포함하는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태의 제조 방법을 제공한다:
1) 적당량의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 자유 염기를 칭량하고, 저조 용매에 현탁시키는 단계로서, 상기 현탁 밀도가 바람직하게는 50 내지 200 mg/mL인, 단계;
2) 단계 1)에서 수득된 현탁액을 일정 온도에서 일정 시간 동안 진탕시키는 단계로서, 상기 온도가 바람직하게는 0 내지 60℃고, 상기 시간이 바람직하게는 1 내지 10일인, 단계;
3) 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계;
이때,
저조 용매는 아세톤, 에틸아세테이트, 이소프로필아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜타논, 메틸 tert -부틸 에터 및 물, 바람직하게는 군으로부터 선택되는 하나 이상 아세톤, 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 톨루엔, 이소프로판올, 2-부탄온, 3-펜탄온, 메틸 tert-부틸 에터 및 물로 이루어진 군으로부터 선택되거나,
상기 방법은 구체적으로 하기 단계를 포함한다:
1) 적당량의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 자유 염기를 칭량하고, 이를 우수 용매에 용해시키는 단계;
2) 단계 1)에서 수득된 용액에 일정한 온도에서 역용매를 첨가하고, 고체가 침전될 때까지 교반하는 단계로서, 상기 온도가 바람직하게는 0 내지 25℃인, 단계;
3) 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계;
이때,
상기 우수 용매는 메탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜탄온 및 N-메틸피롤리돈, 바람직하게는 N-메틸피롤리돈으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
역용매는 헵탄, 물, 메틸 tert-부틸 에터, 톨루엔 및 이소프로필 에터로 이루어진 군으로부터 선택되거나,
상기 방법은 구체적으로 하기 단계를 포함한다:
1) 적당량의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 자유 염기를 칭량하고, 가열하에 이를 우수 용매에 용해시키는 단계;
2) 상기 단계 1)에서 수득된 용액을 저온에 신속하게 두고, 고체가 침전될 때까지 교반하는 단계로서, 상기 온도가 바람직하게는 -10 내지 5℃ 인, 단계; 및
3) 상기 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계;
이때,
상기 우수 용매는 메탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜탄온 및 N-메틸피롤리돈으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 2-메틸테트라하이드로퓨란이다.
본 발명의 목적은 또한 치료 효과량의 화학식 I의 화합물 또는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민, 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 (들), 희석제(들) 또는 부형제(들)을 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 또한 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민, 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체(들), 희석제(들) 또는 부형제(들)을 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 또한 화학식 I의 화합물 또는 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물의 SHP-2 억제제 약제의 제조에서의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 또한 화학식 I의 화합물 또는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민 또는 이를 포함하는 약학 조성물의 SHP-2 억제제 약제의 제조에서의 용도를 제공하는 것이다.
상기 용도에서, 용도는 누난 증후군, 레오파드 피부 증후군, 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 식도암, 두경부 종양, 유방암, 폐암 및 결장암; 바람직하게는 비소세포 폐암, 식도암 또는 두경부 종양과 같은 질병 또는 상태를 치료하기 위한 약제의 제조에서의 용도이다.
도 1은 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 A의 DSC 스펙트럼이다.
도 2는 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 A의 TGA 스펙트럼이다.
도 3은 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B의 XRPD 스펙트럼이다.
도 4는 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B의 DSC 스펙트럼이다.
도 5는 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B의 TGA 스펙트럼이다.
도 6은 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 C의 DSC 스펙트럼이다.
도 7은 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 C의 TGA 스펙트럼이다.
도 8은 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 D의 DSC 스펙트럼이다.
도 9는 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 D의 TGA 스펙트럼이다.
도 10은 (S)-1’-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4’-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 E의 DSC 스펙트럼이다.
도 11은 (S)-1’-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4’-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 E의 TGA 스펙트럼이다.
도 12는 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 XRPD 스펙트럼이다.
도 13은 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 DSC 스펙트럼이다.
도 14는 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 TGA 스펙트럼이다.
도 15는 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 XRPD 스펙트럼이다.
도 16은 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 DSC 스펙트럼이다.
도 17은 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 XRPD 스펙트럼이다.
도 18은 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 DSC 스펙트럼이다.
용어 "알킬"은 포화 지방족 탄화수소 기를 지칭하고, 이는 1 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 기이고, 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 알킬, 보다 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알킬, 가장 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 알킬이다. 비제한적인 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2,3-디메틸부틸, n-헵틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 4-메틸헥실, 5-메틸헥실, 2,3-디메틸펜틸, 2,4-디메틸펜틸, 2,2-디메틸펜틸, 3,3-디메틸펜틸, 2-에틸펜틸, 3-에틸펜틸, n-옥틸, 2,3-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 2,2-디메틸헥실, 3,3-디메틸헥실, 4,4-디메틸헥실, 2-에틸헥실, 3-에틸헥실, 4-에틸헥실, 2-메틸-2-에틸펜틸, 2-메틸-3-에틸펜틸, n-노닐, 2-메틸-2-에틸헥실, 2-메틸-3-에틸헥실, 2,2-디에틸펜틸, n-데실, 3,3-디에틸헥실, 2,2-디에틸헥실, 이의 다양한 분지된 이성질체를 포함한다. 알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)는 임의의 이용가능한 연결점에서 치환될 수 있다. 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알켄일, 알킨일, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클릴티오, 옥소, 카복시 및 알콕시카보닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기(들)이다. 본 발명의 알킬은 바람직하게는 메틸, 에틸, 이소프로필, tert-부틸, 할로알킬, 중수소화된 알킬, 알콕시-치환된 알킬, 하이드록시-치환된 알킬 및 시아노-치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
용어 "사이클로알킬"은 3 내지 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 3 내지 8개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 부분 불포화 일환형 또는 다환형 탄화수소 치환기를 지칭한다. 일환형 사이클로알킬의 비제한적인 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜텐일, 사이클로헥실, 사이클로헥센일, 사이클로헥사디엔일, 사이클로헵틸, 사이클로헵타트리엔일, 사이클로옥틸 등을 포함한다. 다환형 사이클로알킬은 스피로 고리, 융합된 고리 또는 가교된 고리를 갖는 사이클로알킬을 포함한다. 사이클로알킬은 바람직하게는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로헥실, 사이클로펜틸 또는 사이클로헵틸이다. 사이클로알킬 고리는 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴의 고리에 융합될 수 있고, 이때, 모 구조에 결합된 상기 고리는 사이클로알킬이다. 비제한적인 예는 인단일, 테트라하이드로나프틴일, 벤조사이클로헵틸 등을 포함한다. 사이클로알킬은 임의적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)은 바람직하게는 알킬, 알켄일, 알킨일, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클릴티오, 옥소, 카복시 및 알콕시카보닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기(들)이다.
용어 "헤테로사이클릴"은 3 내지 20 원 포화 또는 부분 불포화 일환형 또는 다환형 탄화수소 기를 지칭하고, 이때, 하나 이상의 고리 원자는 질소, 산소 및 S(O)m(이때, m은 0 내지 2의 정수임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로 원자이되, 상기 고리에서 -O-O-, -O-S- 또는 -S-S-는 배제되고, 단, 나머지 고리 원자는 탄소 원자이다. 바람직하게는, 헤테로사이클릴은 3 내지 12개의 고리 원자(이때, 1 내지 4개의 원자는 헤테로원자임); 보다 바람직하게는, 3 내지 8 고리 원자; 가장 바람직하게는 3 내지 8 고리 원자를 갖는다. 일환형 헤테로사이클릴의 비제한적인 예는 옥세탄일, 피롤리딘일, 피롤리돈일, 이미다졸리딘일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로티엔일, 디하이드로이미다졸일, 디하이드로퓨란일, 디하이드로피라졸일, 디하이드로피롤일, 피페리딘일, 피페라진일, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페라진일, 피란일 등, 바람직하게는 옥세탄일, 피롤리돈일, 테트라하이드로퓨란일, 피라졸리딘일, 모르폴리닐, 피페라진일 및 피란일을 포함한다. 다환형 헤테로사이클릴은 스피로 고리, 융합된 고리 또는 가교된 고리를 갖는 헤테로사이클릴을 포함한다. 스피로 고리, 융합된 고리 또는 가교된 고리를 갖는 헤테로사이클릴은 임의적으로 단일 결합을 통해 다른 기에 결합되거나, 고리 상의 2개 이상의 원자를 통해 다른 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 및 헤테로아릴에 추가로 결합된다. 헤테로사이클릴은 임의적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)은 바람직하게는 알킬, 알켄일, 알킨일, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클릴티오, 옥소, 카복시 및 알콕시카보닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기(들)이다.
용어 "아릴"은 배위된 π-전자 시스템을 갖는 6 내지 14 원 전(all)-탄소 일환형 고리 또는 다환형 융합된 고리(즉, 상기 시스템에서 각각의 고리는 상기 시스템에서 또 다른 고리와 인접한 쌍의 탄소 원자를 공유함), 바람직하게는 6 내지 10 원 아릴, 예컨대, 페닐 및 나프틴일이다. 아릴은 보다 바람직하게는 페닐이다. 아릴 고리는, 헤테로사이클릴 또는 사이클로알킬의 고리에 융합될 수 있고, 이때, 모 구조에 결합된 상기 고리는 아릴 고리이다. 아릴 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)은 바람직하게는 알킬, 알켄일, 알킨일, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클릴티오, 카복시 및 알콕시카보닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기(들)이다.
용어 "헤테로아릴"은 산소, 황 및 질소로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 5 내지 14 원 헤테로방향족 시스템을 지칭한다. 헤테로아릴은 바람직하게는 5 내지 10 원 헤테로아릴, 보다 바람직하게는 5 또는 6 원 헤테로아릴, 예컨대, 이미다졸일, 퓨릴, 티엔일, 티아졸일, 피라졸일, 옥사졸일, 피롤일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딘일, 티아디아졸일, 옥사디아졸일, 피라진일 등, 바람직하게는 옥사졸일, 옥사디아졸일, 테트라졸일, 트리아졸일, 티엔일, 이미다졸일, 피리딜, 피라졸일, 피리미딘일 및 티아졸일, 보다 바람직하게는 옥사졸일, 옥사디아졸일, 테트라졸일, 트리아졸일, 티엔일, 피리딜, 티아졸일 및 피리미딘일이다. 헤테로아릴 고리는 아릴, 헤테로사이클릴 또는 사이클로알킬의 고리에 융합될 수 있고, 이때, 모 구조에 결합된 상기 고리는 헤테로아릴 고리이다. 헤테로아릴은 임의적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)은 바람직하게는 알킬, 알켄일, 알킨일, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클릴티오, 카복시 및 알콕시카보닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기(들)이다.
용어 "알콕시"는 -O-(알킬) 또는 -O-(비치환된 사이클로알킬) 기를 지칭하고, 이때, 상기 알킬은 상기 정의된 바와 같다. 알콕시는 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 알콕시, 보다 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알콕시, 가장 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 알콕시이다. 알콕시의 비제한적인 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 사이클로프로필옥시, 사이클로부틸옥시, 사이클로펜틸옥시, 사이클로헥실옥시를 포함한다. 알콕시는 임의적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환될 때, 치환기(들)은 바람직하게는 알킬, 알켄일, 알킨일, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클릴티오, 카복시 및 알콕시카보닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기(들)이다.
"할로알킬"은 하나 이상의 할로겐(들)에 의해 치환된 알킬 기를 지칭하고, 이때, 상기 알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"할로알콕시"는 하나 이상의 할로겐(들)에 의해 치환된 알콕시 기를 지칭하고, 이때, 상기 알콕시는 상기 정의된 바와 같다.
"하이드록시알킬"은 하나 이상의 하이드록시(들)에 의해 치환된 알킬 기를 지칭하고, 이때, 상기 알킬은 상기 정의된 바와 같다.
"알켄일"은 알켄 기로도 공지되어 있는 쇄 알켄일을 지칭한다. 알켄일은 다른 관련 기, 예컨대, 알킬, 알켄일, 알킨일, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 하이드록시, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알콕시, 헤테로사이클로알콕시, 사이클로알킬티오, 헤테로사이클릴티오, 카복시 또는 알콕시카보닐에 의해 추가로 치환될 수 있다.
"하이드록시"는 -OH 기를 지칭한다.
"할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.
"아미노"는 -NH2 기를 지칭한다.
"시아노"는 -CN 기를 지칭한다.
"니트로"는 -NO2 기를 지칭한다.
"THF"는 테트라하이드로퓨란을 지칭한다.
"EtOAc"는 에틸 아세테이트를 지칭한다.
"DMSO"는 디메틸 설폭사이드를 지칭한다.
"LDA"는 리튬 디이소프로필아미드를 지칭한다.
"DMAP"는 4-디메틸아미노피리딘을 지칭한다.
"Et mgBr"은 에틸마그네슘 브로마이드를 지칭한다.
"HOSu"는 N-하이드록시숙신이미드를 지칭한다.
"EDCl"은 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드하이드로클로라이드를 지칭한다.
"IPA"는 이소프로판올을 지칭한다.
"MeOH"는 메탄올을 지칭한다.
"EtOH"는 에탄올을 지칭한다.
"DMF"는 N,N-디메틸포름아미드를 지칭한다.
"DIPEA"는 N,N-디이소프로필에틸아민를 지칭한다.
"HEPES"는 4-하이드록시에틸피페라진에탄설폰산을 지칭한다.
"X는 A, B 또는 C로 이루어진 군으로부터 선택됨", "X는 A, B 및 C로 이루어진 군으로부터 선택됨", "X는 A, B 또는 C임", "X는 A임"과 같은 다양한 표현, B 및 C" 등은 동일한 의미를 나타낸다. 즉, X는 A, B 및 C 중 임의의 하나 이상일 수 있다.
"임의적" 또는 "임의적으로"는 이후에 설명된 사건 또는 상황이 발생할 수 있지만 반드시 그럴 필요는 없음을 의미하며 이러한 설명에는 사건 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않는 상황이 포함된다.
"치환된"은 대응하는 수의 치환기에 의해 독립적으로 치환된 기 내의 하나 이상의 수소 원자, 바람직하게는 5개 이하, 보다 바람직하게는 1 내지 3개의 수소 원자를 지칭한다. 치환체가 가능한 화학적 위치에만 존재한다는 것은 말할 필요도 없다. 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 과도한 노력 없이 실험이나 이론에 의하여 치환이 가능한지 불가능한지를 판단할 수 있다. 예를 들어, 자유 수소를 갖는 아미노 또는 하이드록시 및 불포화 결합을 갖는 탄소 원자(예컨대, 올레핀계)의 조합은 불안정할 수 있다.
"입체 이성질체"는 기하 이성질체(시스-트랜스 이성질체), 광학 이성질체 및 형태 이성질체를 포함한다.
본 발명의 수소 원자는 그의 동위원소 중수소로 치환될 수 있다. 본 발명의 실시예의 화합물에서 임의의 수소 원자는 또한 중수소 원자(들)로 치환될 수 있다.
"약학 조성물"은 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 생리학적/약학적으로 허용되는 염 또는 전구약물 중 하나 이상과 다른 화학 성분, 및 생리학적/약학적으로 허용되는 담체 및 부형제와 같은 기타 성분의 혼합물을 의미한다. 약학 조성물의 목적은 생물학적 활성을 발휘하도록 활성 성분의 흡수에 도움이 되는 유기체에 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.
"약학적으로 허용되는 염"은 포유동물에서 안전하고 효과적이며 원하는 생물학적 활성을 갖는 본 발명의 화합물의 염을 지칭한다.
X선 분말 회절(XRPD) 패턴은 실험적으로 관찰된 회절 패턴 또는 그로부터 파생된 매개변수를 말하며, X선 분말 회절 패턴은 피크 위치(가로) 와 피크 강도(세로)를 특징으로 한다. 당업자는 그 안에 있는 실험 오차가 기기의 조건, 샘플의 준비 및 샘플의 순도에 의존한다는 것을 이해할 것이다. 특히, X선 회절 패턴은 일반적으로 기기의 조건에 따라 변한다는 것은 당업자에게 잘 알려져 있다. 당업자는 XRPD에 대한 적절한 허용오차가 2θ±0.5°, 2θ±0.4°, 2θ±0.3°, 2θ±0.2°일 수 있음을 이해할 것이다. 특히 X선 회절패턴의 상대강도는 실험조건에 따라 달라질 수 있다는 점을 지적하는 것이 중요하다. 따라서 피크 강도의 순서는 단독 또는 결정적인 요소로 사용될 수 없다. 또한 샘플의 높이와 같은 실험적 요인의 영향으로 인해 피크 각도의 전체 편차가 발생하며 일반적으로 특정 편차가 허용된다. 따라서, 당업자는 본 발명의 패턴과 동일하거나 유사한 특성 피크를 갖는 결정 형태가 본 발명의 범위에 속함을 이해할 수 있을 것이다.
"TGA"는 열중량 분석(TGA) 시험을 나타낸다.
"DSC"는 시차 주사 열량계(DSC) 시험을 나타낸다.
"HPLC"는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 시험을 나타낸다.
"PK"는 약동학(PK) 시험을 의미한다.
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 추가로 설명될 것이지만, 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다.
I. 화합물의 제조
본 발명의 화합물의 구조는 핵 자기 공명(NMR) 및/또는 액체 크로마토그래피-질량 분석(LC-MS)에 의해 확인되었다. NMR 이동(δ)은 백만분율(ppm)로 표시된다. NMR은 Bruker AVANCE-400 기계로 측정하였다. 측정을 위한 용매는 중수소화된 디메틸술폭사이드(DMSO-d6), 중수소화된 메탄올(CD3OD) 및 중수소화된 클로로포름(CDCl3)이었고, 내부 표준은 테트라메틸실란(TMS)이었다.
액체 크로마토그래피-질량 분석기(LC-MS)는 Agilent 1200 Infinity 시리즈 질량 분석기에서 측정하였다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 Agilent 1200DAD 고압 액체 크로마토그래피(Sunfire C18 150 x 4.6 mm 크로마토그래피 컬럼) 및 Waters 2695-2996 고압 액체 크로마토그래피(Gimini C18 150 x 4.6 mm 크로마토그래피 컬럼)에서 측정하였다.
Yantai Huanghai HSGF254 또는 Qingdao GF254 실리카겔 플레이트를 박막 실리카겔 크로마토그래피(TLC) 플레이트로 사용하였다. TLC에 사용된 실리카 겔 플레이트의 치수는 0.15 mm 내지 0.2 mm이고, 생성물 정제에 사용된 실리카 겔 플레이트의 치수는 0.4 mm 내지 0.5 mm였다. Yantai Huanghai 200 내지 300 메쉬(mesh) 실리카겔은 일반적으로 컬럼 크로마토그래피의 담체로 사용하였다.
본 발명의 실시예에 사용된 원료는 공지되어 있고 상업적으로 입수가능하거나, 당업계에 공지된 방법을 채택하거나 따라 합성할 수 있다.
달리 언급되지 않는 한, 본 발명의 모든 반응은 건조 질소 또는 아르곤 분위기하에 연속 자기 교반하에 수행되었고, 용매는 건조되었으며, 반응 온도는 섭씨 온도였다.
실시예 1
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00021
단계 1: 2-에틸헥실 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00022
마이크로파 반응관에서, 3-클로로-4-요오도피리딘-2-아민(800 mg, 3.15 mmol) 및 2-에틸헥실 3-머캅토프로파노에이트(687 mg, 3.15 mmol)를 1,4-디옥산(7 mL)에 용해시킨 후, DIPEA(813 mg, 6.3 mmol), 팔라듐 아세테이트(35 mg, 0.16 mmol) 및 잔트포스(Xantphos)(109 mg, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 마이크로파하에서 100℃로 가열하고 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 냉각한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 희석하고 규조토로 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여액을 회전 증발기로 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(15 내지 25% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 생성물(1.03 g, 수율: 95%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 345.1 [M+H]+.
단계 2: 2-에틸헥실 3-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00023
밀폐된 관에 2-에틸헥실 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(500 mg, 1.45 mmol)를 톨루엔과 물의 혼합 용매(톨루엔/물=10 mL/1 mL)에 용해시킨 후, 칼륨 사이클로프로필 트리플루오로보레이트(280 mg, 1.89 mmol), n-부틸비스(1-아다만틸) 포스핀(52 mg, 0.145 mmol), 팔라듐 아세테이트(16 mg, 0.073 mmol) 및 세슘 카보네이트(1.41 g, 4.35 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 100℃로 가열하여 5시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 20 mL의 포화 NH4Cl 용액을 첨가하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 컬럼 크로마토그래피(50% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 생성물(220 mg, 수율: 43%)을 갈색 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 350.1 [M+H]+.
단계 3: 칼륨 2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-티올레이트의 제조
Figure pct00024
2-에틸헥실 3-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(220 mg, 0.63 mmol)를 10 mL의 에탄올에 용해시켰다. 칼륨 tert-부톡사이드(74 mg, 0.66 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하고, 생성된 잔류물을 다음 단계에 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 165.1 [MH]-.
단계 4: 3-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민의 제조
Figure pct00025
마이크로파 반응관에서 칼륨 2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-티올레이트(128 mg, 0.63 mmol) 및 2-아미노-3-브로모-6-클로로피라진(149 mg, 0.72 mmol)을 7 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 후, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(33 mg, 0.036 mmol), 잔트포스(42 mg, 0.072 mmol) 및 DIPEA(279 mg, 2.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 마이크로파하에서 110℃로 가열하고 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 희석한 후, 규조토로 여과하였다. 여액을 회전 증발기로 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(50 내지 70% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 생성물(50 mg, 수율: 24%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 294.1 [M+H]+.
단계 5: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00026
(S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(69 mg, 0.17 mmol)를 3 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 1 mL의 트리플루오로아세트산을 첨가하고 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고, 5 mL의 DMF에 용해시켰다. 칼륨 카보네이트(352 mg, 2.55 mmol) 및 3-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민(50 mg, 0.17 mmol)을 첨가하고, 반응 용액 질소 분위기하에서 100℃로 가열하고 12시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 냉각한 후, 물 20 mL를 가하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 용액(20 mL x 3)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(75 내지 80% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 생성물(20 mg, 수율: 21%)을 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 564.1 [M+H]+.
단계 6: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민
Figure pct00027
(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(20 mg, 0.035 mmol)를 5 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 디옥산에 용해시킨 4M HCl 1 mL를 넣고 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고 메탄올 5 mL에 용해시키고 메탄올 중 7M NH3을 사용하여 pH를 알칼리성으로 조정하였다. 반응 용액을 회전 증발에 의해 건조될 때까지 농축시키고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 10% MeOH)에 의해 정제하였다. 생성된 미정제 생성물을 박층 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올=10:1)에 의해 정제하여 생성물(9.0 mg, 수율: 56%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.90 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.57 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.96 (s, 1H), 3.30 - 3.19 (m, 2H), 3.15 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 1.90 - 1.78 (m, 2H), 1.82 - 1.70 (m, 1H), 1.58 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 1.43 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.26 - 1.15 (m, 2H), 0.94 - 0.85 (m, 2H).
MS m/z(ESI): 460.1 [M+H]+.
실시예 2
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-클로로-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00028
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 2의 화합물을 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.88 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.54 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 13.7 Hz, 2H), 3.95 (s, 1H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 3.13 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.79(d, J = 15.6 Hz, 1H), 1.88 - 1.74 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 1H), 1.56 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 1.43 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.24 - 1.13 (m, 2H), 0.93 - 0.83 (m, 2H).
MS m/z(ESI): 479.1 [M+H]+, 481.1 [M+2+H]+.
실시예 3
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00029
단계 1: 2-에틸헥실 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00030
마이크로파 반응관에 2,3-디클로로-4-요오도피리딘(1.0 g, 3.65 mmol) 과 2-에틸헥실 3-머캅토프로파노에이트(0.88 g, 4.03 mmol)를 1,4-디옥산(7 mL)에 용해시킨 후, DIPEA(0.95 g, 7.34 mmol), 팔라듐 아세테이트(41 mg, 0.18 mmol) 및 잔트포스(127 mg, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 마이크로파하에서 100℃로 가열하고 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 냉각한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 희석하고 규조토로 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여액을 회전 증발기로 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(10 내지 15% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 갈색 오일(1.29 g, 수율: 97%)을 수득하였다.
MS m/z(ESI): 364.1 [M+H]+.
단계 2: 2-에틸헥실 3-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00031
밀폐된 관에 2-에틸헥실 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(1.29 g, 3.54 mmol)를 톨루엔과 물의 혼합 용매(톨루엔/물=20 mL/2 mL)에 용해시킨 후, 칼륨 사이클로프로필 트리플루오로보레이트(624 mg, 4.25 mmol), n-부틸비스(1-아다만틸) 포스핀(95 mg, 0.267 mmol), 팔라듐 아세테이트(40 mg, 0.178 mmol) 및 탄산세슘(3.43 g, 3.54 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 100℃로 가열하여 5시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 20 mL의 포화 NH4Cl 용액을 첨가하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(5 내지 8% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 황색 오일(600 mg, 수율: 45%)을 수득하였다.
MS m/z(ESI): 370.1 [M+H]+.
단계 3: 칼륨 3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-티올레이트의 제조
Figure pct00032
2-에틸헥실 3-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(600 mg, 1.62 mmol)를 15 mL의 에탄올에 용해시켰다. 칼륨 tert-부톡사이드(190 mg, 1.70 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하고, 생성된 잔류물을 다음 단계에 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 186.1 [M+H]+.
단계 4: 6-클로로-3-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민의 제조
Figure pct00033
마이크로파 반응관에서, 칼륨 3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-티올레이트(120 mg, 0.54 mmol) 및 2-아미노-3-브로모-6-클로로피라진(112 mg, 0.54 mmol)을 5 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 후, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(25 mg, 0.027 mmol), 잔트포스(31 mg, 0.054 mmol) 및 DIPEA(209 mg, 1.62 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 마이크로파하에서 110℃로 가열하고 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 희석한 후, 규조토로 여과하였다. 여액을 회전 증발에 의해 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(10 내지 20% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 생성물(135 mg, 수율: 80%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 313.1 [M+H]+.
단계 5: tert-부틸 1-옥소-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00034
1-인데논(5.14 g, 38.9 mmol) 및 tert-부틸 N,N-비스(2-클로로에틸)카바메이트(9.42 g, 38.9 mmol)를 DMF 100 mL에 용해시켰다. 60% 수소화나트륨(3.89 g, 97.3 mmol)을 얼음조에서 뱃취로 첨가하였다. 반응 용액을 질소 분위기의 오일 배스에서 60℃로 가열하고 밤새 반응시켰다. 반응 용액을 냉각한 후, 포화 염화나트륨 용액 250 mL를 가하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(150 mL x 2)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 용액(100 mL x 3)으로 세척하고, 무수 mgSO 4로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(10 내지 20% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 미정제 생성물(2.80 g, 수율: 23%)을 갈색 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 202.1 [M-Boc+H]+.
단계 6: tert-부틸 (R,E)-1-((tert-부틸설피닐)이미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00035
테트라에틸 티타네이트(40 mL)를 90℃로 가열하였다. tert-부틸 1-옥소-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(2.80 g, 9.27 mmol) 및 (R)-(+)-tert-부틸설핀아미드(3.36 g, 27.8 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 질소 분위기하 90℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 용액을 에틸 아세테이트 400 mL에 부었다. 포화 염화나트륨 용액 400 mL를 교반하면서 천천히 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 반응 용액을 규조토를 통해 여과하여 침전된 고체를 제거하였다. 여액을 2개의 층으로 분리한 후, 에틸아세테이트층을 무수 마그네슘 설페이트로 건조하고 컬럼 크로마토그래피(20 내지 30% 에틸아세테이트/석유에터)에 의해 정제하여 생성물(2.20 g, 수율: 59%)을 갈색 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 405.1 [M+H]+.
단계 7: tert-부틸 (S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00036
tert-부틸 (R,E)-1-((tert-부틸설피닐)이미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(2.20 g, 5.44 mmol)를 용해시켰다. 테트라하이드로퓨란 30 mL에 용액을 -78℃로 냉각하고, 나트륨 보로하이드라이드(308 mg, 8.16 mmol)를 이 온도에서 뱃취로 첨가하였다. 반응 용액을 질소 분위기하에서 서서히 실온으로 승온하고 밤새 교반하였다. 포화 염화나트륨 용액 200 mL를 첨가하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트(100 mL x 2)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 용액(100 mL)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(20 내지 35% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 갈색의 거품질 고체(1.21 g, 수율: 54%)를 수득하였다.
MS m/z(ESI): 407.1 [M+H]+.
단계 8: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00037
tert-부틸 (S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(100 mg, 0.25 mmol)를 3 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 1 mL의 트리플루오로아세트산을 첨가하고 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고, 5 mL의 DMF에 용해시켰다. 칼륨 카보네이트(517 mg, 3.75 mmol) 및 6-클로로-3-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민(78 mg, 0.25 mmol)을 첨가하고, 반응물 용액을 질소 분위기에서 100℃로 가열하고 12시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 냉각한 후, 물 20 mL를 가하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 용액(20 mL x 3)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(50% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 생성물(26 mg, 수율 18%)을 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 583.1 [M+H]+.
단계 9: (S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00038
(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(26 mg, 0.044 mmol)를 5 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 디옥산에 용해시킨 4M HCl 1 mL를 넣고 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고 메탄올 5 mL에 용해시키고 메탄올 중 7M NH3을 사용하여 pH를 알칼리성으로 조정하였다. 반응 용액을 회전 증발로 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 5 내지 8% MeOH)에 의해 정제하여 생성물(12 mg, 수율: 57%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.03 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.24 (dd, J = 6.4, 3.9 Hz, 3H), 6.39 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.21 - 4.13 (m, 2H), 4.07 (s, 1H), 3.23 - 3.21 (m, 2H), 3.13 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.57 - 2.48 (m, 1H), 1.88 - 1.73 (m, 2H), 1.63 - 1.56 (m, 1H), 1.50 - 1.42 (m, 1H), 1.09 - 1.00 (m, 4H).
MS m/z(ESI): 479.1 [M+H]+.
실시예 4
(2R)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)스피로[비사이클로[3.1.0]헥산-3,4'-피페리딘]-2-아민의 제조
Figure pct00039
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.73 - 7.67 (m, 1H), 7.65 - 7.60 (m, 1H), 6.08 - 6.01 (m, 1H), 4.53 - 4.41 (m, 2H), 3.63 - 3.51 (m, 2H), 3.14 (p, J = 9.6 Hz, 1H), 2.41 - 2.33 (m, 1H), 1.56 - 1.40 (m, 3H), 1.44 - 1.35 (m, 1H), 1.39 - 1.19 (m, 4H), 0.89 - 0.81 (m, 2H), 0.76 - 0.60 (m, 2H), 0.44 - 0.28 (m, 2H).
MS m/z(ESI): 424.1 [M+H]+.
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 4의 화합물을 제조하였다.
실시예 5
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-브로모피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00040
단계 1: 2-에틸헥실 3-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00041
3-브로모-6-클로로피라진-2-아민(4 g, 20 mmol), 2-에틸헥실 3-머캅토프로파노에이트(5.2 g, 24 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(916 mg, 1 mmol), 4,5- 비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐(1.16 g, 2 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(5.12 g, 40 mmol)을 디옥산(35 mL) 중에서 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(30 mL)로 2회 세척하였다. 여액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 석유 에터/에틸 아세테이트(90:10)]에 의해 정제하여 2-에틸헥실 3-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)프로파노에이트(5.5 g, 수율: 82%)를 갈색 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 146.1 [M+H]+, 148.1 [M+2+H]+.
단계 2: 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올의 제조
Figure pct00042
칼륨 tert-부톡사이드(2.7 g, 23.9 mmol)를 에탄올(100 mL) 중 2-에틸헥실 3-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)프로파노에이트(5.5 g, 15.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 회전 증발로 농축하여 약 50 mL의 에탄올을 제거하였다. 잔류하는 반응 용액을 염화암모늄 수용액(100 mL)에 붓고 에틸아세테이트(100 mL)로 2회, 디클로로메탄(100 mL)으로 2회 추출하였다. 유기층을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올(95:5)]에 의해 정제하여 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올(1.8 g, 수율: 70%)을 암녹색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 162.0[M+H]+, 164.0 [M+2+H]+
단계 3: 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민의 제조
Figure pct00043
3-아미노-5-클로로피라진-2-티올(500 mg, 3.1 mmol), 3-클로로-4-요오도피리딘-2-아민(789 mg, 3.1 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(142 mg, 0.16 mmol), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐(179 mg, 0.31 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.2 g, 9.3 mmol)을 디옥산(10 mL) 중에서 마이크로파하에 130℃에서 교반하였다. 1 시간. 반응 용액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올(99:1)]에 의해 정제하여 1 g의 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 에탄올(5 mL)에 펄프화(pulping)하고 여과하여 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민(580 mg, 수율: 65%) 회색 고체로 표시된다.
MS m/z(ESI): 288.0 [M+H]+, 290.0 [M+2+H]+.
단계 4: N-((S)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00044
트리플루오로아세트산(1 mL)을 디클로로메탄(3 mL) 중 tert-부틸(1S)-1-((tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(150 mg, 0.37 mmol)의 용액에 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 N-((S)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드 염산염(150 mg, 수율: 100%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 307.2 [M+H]+.
[α]20 D=1.773.
단계 5: N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00045
N-((S)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드 염산염(150 mg, 0.37 mmol), 3-((2- 아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민(100 mg, 0.35 mmol) 및 칼륨 카보네이트(335 mg, 2.43 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(4 mL)에서 18시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 용액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올(97:3)]에 의해 정제하여 N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(100 mg, 수율: 52%)를 자색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 558.1 [M+H]+, 560.2 [M+2+H]+.
단계 6: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-브로모피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00046
N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(100 mg, 0.18 mmol) 및 N-브로모숙신이미드(64 mg, 0.36 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에서 18시간 동안의 실온에서 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올(95:5)]에 의해 정제하여 (S)-1'-(6-아미노-5-((2)-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-브로모피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민(80 mg, 수율: 84%)을 카키색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.72-7.64 (m, 1H), 7.36 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.27-7.16 (m, 3H), 6.58 (s, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.80 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.94-3.83 (m, 2H), 3.17 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.14-2.98 (m, 3H), 2.77-2.64 (m, 1H), 1.97-1.74 (m, 2H), 1.55 (d, J = 12 Hz, 1H).
MS m/z(ESI): 532.0 [M+H]+, 534.0 [M+2+H]+.
실시예 6
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민
Figure pct00047
단계 1: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00048
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-브로모피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민(30 mg, 0.056 mmol), 트리메틸보록신(789 mg, 3.1 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(4 mg, 0.0056 mmol) 및 칼륨 카보네이트(15 mg, 0.11 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(10 mL) 중에서 마이크로파하에 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민(0.7 mg, 수율: 3%)을 회색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.73-7.62 (m, 1H), 7.35 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.28-7.16 (m, 3H), 6.57 (s, 2H), 6.32 (s, 2H), 5.78 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.97 (s, 1H), 3.94-3.81 (m, 2H), 3.15 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.12-2.95 (m, 3H), 2.75-2.64 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 1.99-1.75 (m, 2H), 1.58 (d, J = 12 Hz, 1H).
MS m/z(ESI): 468.1 [M+H]+, 470.1 [M+2+H]+.
실시예 7
(S)-1'-(5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00049
단계 1: 2-클로로-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진의 제조
Figure pct00050
마이크로파 반응관에서 칼륨 3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-티올레이트(120 mg, 0.54 mmol) 및 2-브로모-5-클로로피라진(104 mg, 0.54 mmol)을 5 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 후, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(25 mg, 0.027 mmol), 잔트포스(31 mg, 0.054 mmol) 및 DIPEA(209 mg, 1.62 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 마이크로파하에서 110℃로 가열하고 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 희석한 후, 규조토로 여과하였다. 여액을 회전 증발기로 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(10 내지 20% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 담황색 오일(120 mg, 수율: 74%)을 수득하였다.
MS m/z(ESI): 298.0 [M+H]+.
단계 2: (R)-N-((S)-1'-(5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00051
tert-부틸 (S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(81 mg, 0.20 mmol)를 3 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 1 mL의 트리플루오로아세트산을 첨가하고 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고, 5 mL의 DMF에 용해시켰다. 칼륨 카보네이트(373 mg, 2.70 mmol) 및 2-클로로-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진(55 mg, 0.18 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 질소 분위기하에서 100℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 냉각한 후, 물 20 mL를 가하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 용액(20 mL x 3)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(50% 에틸 아세테이트/석유 에터)에 의해 정제하여 생성물(48 mg, 수율: 47%)을 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 568.1 [M+H]+.
단계 3: (S)-1'-(5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00052
(R)-N-((S)-1'-(5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(48 mg, 0.085 mmol)를 5 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 디옥산에 용해시킨 4M HCl 1 mL를 넣고 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고 메탄올 5 mL에 용해시키고 메탄올 중 7M NH3을 사용하여 pH를 알칼리성으로 조정하였다. 반응 용액을 회전 증발에 의해 건조될 때까지 농축하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 10% MeOH)에 의해 정제하여 생성물(23 mg, 수율: 58%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.36 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.98 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.32 - 7.21 (m, 3H), 6.43 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.44 - 4.29 (m, 2H), 4.14 (s, 1H), 3.41 - 3.30 (m, 2H), 3.19 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 2.96 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 2.60 - 2.49 (m, 1H), 1.90 - 1.76 (m, 2H), 1.67 - 1.54 (m, 2H), 1.09 - 0.99 (m, 4H).
MS m/z(ESI): 464.1 [M+H]+.
실시예 8
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00053
단계 1: tert-부틸(5-브로모-1,3,4-티아디아졸-2-일)카바메이트의 제조
Figure pct00054
에틸 2-클로로티아졸-4-카복실레이트(9.0 g, 46.97 mmol)를 메탄올 150 mL에 용해시키고 실온에서 교반하였다. NaBH4 (7.1 g, 3회분 첨가)를 첨가하고, 반응 용액을 출발물질이 없어질 때까지 교반하였다. 반응 용액을 교반하면서 염수에 천천히 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 반응 용액을 농축하여 용매를 제거하고 에틸아세테이트(200 mL)로 3회 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트/석유 에터=3:1)에 의해 정제하여 표적 생성물(2-클로로티아졸-4-일)메탄올(4.2 g, 수율: 60%)을 무색 유성 액체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.11 (s, 1H), 4.71 (s, 2H), 2.22 (s, 1H).
MS m/z(ESI): 150.0 [M+H]+, 152.0 [M+2+H]+.
단계 2: (2-클로로티아졸-4-일)메틸 메탄설포네이트의 제조
Figure pct00055
(2-클로로티아졸-4-일)메탄올(2.6 g, 17.4 mmol)을 40 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 메탄설포닐 클로라이드(1.6 mL, 20.88 mmol, d=1.48g/mL)를 빙수욕에서 질소 분위기하에서 적가하고, 반응 용액을 빙수욕에서 30분 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 염화나트륨 용액(100 mL)에 적가하고, 디클로로메탄(100 mL)으로 3회 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 나트륨 설페이트로 건조한 후, 농축하여 표적 생성물 (2-클로로티아졸-4-일)메틸 메탄설포네이트(3.9 g, 수율: 97%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (s, 1H), 5.25 (s, 2H), 3.07 (s, 3H).
단계 3: 1-(tert-부틸) 4-에틸 4-((2-클로로티아졸-4-일)메틸)피페리딘-1,4-디카복실레이트의 제조
Figure pct00056
1-(tert-부틸) 4-에틸 피페리딘-1,4-디카복실레이트(4.8 g, 18.59 mmol)를 THF(40 mL)에 용해시켰다. 용액을 질소 분위기하에서 -60℃로 냉각한 후, 리튬 디이소프로필아미드(12.7 mL, 25.35 mmol)를 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 -60℃ 내지 -50℃에서 30분 동안 교반하였다. THF(15 mL) 중 (2-클로로티아졸-4-일)메틸 메탄설포네이트의 용액을 적가하였다. 첨가 완료 후, -60℃에서 30분 동안 반응 용액을 교반한 후, 천천히 실온으로 승온하여 2시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 식염수(150 mL)에 적가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 3회 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, tert-부틸) 4-에틸 4-((2-클로로티아졸-4-일)메틸)피페리딘-1,4-디카복실레이트(3.7 g, 수율: 56%)를 황색 액체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.79 (s, 1H), 4.14 (dd, J = 7.1, 3.1 Hz, 2H), 3.91 - 3.85 (m, 2H), 2.92 (s, 2H), 2.86 (dd, J = 16.3, 13.6 Hz, 2H), 2.10 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 1.53 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.25 - 1.22 (m, 3H).
MS m/z(ESI): 289 [M-100+H]+.
단계 4: tert-부틸 2-클로로-6-옥소-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00057
1-(tert -부틸) 4-에틸 4-((2-클로로티아졸-4-일)메틸)피페리딘-1,4-디카복실레이트(4.1 g, 10.6 mmol)를 THF(40 mL)에 용해시켰다. 용액을 질소 분위기하에서 -70℃로 냉각한 후, 리튬 디이소프로필아미드(13.4 mL, 26.5 mmol)를 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 -70℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 포화 식염수(150 mL)에 적가하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 3회 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축하여 미정제 생성물을 수득하고 이를 컬럼 크로마토그래피(에틸아세테이트/석유에터=3:1)에 의해 정제하여 표적 생성물 tert-부틸 2-클로로-6-옥소-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(1.2 g, 수율: 33%)를 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.15 (s, 4H), 3.05 (s, 2H), 2.06 - 1.93 (m, 2H), 1.60 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H).
MS m/z(ESI): 243 [M-100+H]+.
단계 5: tert-부틸 (R,Z)-6-((tert-부틸설피닐<설페닐>)이미노)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘의 제조]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00058
tert-부틸 2-클로로-6-옥소-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(1.2 g, 3.5 mmol)를 THF(10 mL)에 용해시켰다. Ti(OEt)4 (10 mL)를 첨가하고, 반응 용액을 질소 분위기하에서 95℃로 가열하고 10시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각하고 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하였다. 물(20 mL)을 교반하면서 첨가하고, 용액을 흐려질 때까지 교반하였다. 혼합물의 고체가 모래가 될 때까지 무수 나트륨 설페이트를 이에 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이것을 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=5:1)에 의해 정제하여 표적 생성물 tert-부틸 (R,Z)-6-((tert-부틸설피닐<설페닐>이미노)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(1.1 g, 수율: 75%)를 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.13 (dd, J = 22.7, 15.6 Hz, 4H), 2.92 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 2.05 (s, 2H), 1.57 (s, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.29 - 1.22 (m, 9H).
MS m/z(ESI): 346 [M-100+H]+.
단계 6: tert-부틸 (S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트 및 tert-부틸 (S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00059
tert-부틸 (R,Z)-6-((tert-부틸설피닐<설페닐>)이미노)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'- 카복실레이트(600 mg, 1.35 mmol)를 50 mL 3구 플라스크의 무수 THF(10 mL)에 용해시켰다. 용액을 질소 분위기하에 -70℃로 냉각한 후, BH3/THF(4.0 mL, D=1M)를 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 천천히 실온으로 승온하고 10시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 물에 적가하고, 포화 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 pH를 9로 조정하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(100 mL)로 3회 추출하였다. 유기층을 합하고 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(PE/EA=1:1)에 의해 정제하여 표적 생성물 tert-부틸(S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(112 mg, 수율: 20%)를 황색 액체로서, 및 tert-부틸 (S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(56 mg, 수율: 9%)를 황색 액체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 414.0 [M+H]+;
MS m/z(ESI): 448.1 [M+H]+, 450.1 [M+H+2]+.
단계 7: (R)-N-((S)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00060
tert-부틸 (S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(112 mg, 0.27 mmol)을 무수 CH2Cl2(5 mL)에 용해시켰다. 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 미정제 생성물 (R)-N-((S)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(67 mg, 수율: 76%)을 황색 액체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 314.0 [M+H]+.
단계 8: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00061
(R)-N-((S)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(67 mg, 0.21 mmol), 6-클로로-3-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민(78 mg, 0.25 mmol) 및 DIPEA(0.4 mL)를 DMF(2.0 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 110℃로 가열하고 10시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(100 mL)에 녹이고, 물(50 mL)로 2회 세척하고, 포화 식염수(50 mL)로 3회 세척하였다. 유기층을 합하여 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(EtOAc)에 의해 정제하여 표적 생성물 (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(30 mg, 수율: 19%)을 황색 액체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 590.0 [M+H]+.
단계 9: (S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00062
(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(30 mg, 0.05 mmol)를 무수 메탄올(3.0 mL)에 용해시켰다. 염산/1,4-디옥산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 물에 용해시켰다. 포화 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 pH를 10으로 조절하고, 반응 용액을 디클로로메탄(50 mL)으로 2회 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 분취 HPLC에 의해 정제하여 표적 생성물 (S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민(3.4 mg, 수율: 49%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.77 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.45 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 4.45 (s, 1H), 3.38 (d, J = 61.4 Hz, 4H), 2.91 (s, 2H), 2.22 (s, 1H), 1.92 (s, 1H), 1.71 (s, 1H), 1.52 (s, 2H), 1.33 - 0.92 (m, 8H).
MS m/z(ESI): 486 [M+H]+.
실시예 9
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00063
단계 1: (R)-N-((S)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00064
tert-부틸 (S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(56 mg, 0.13 mmol)를 무수 CH2Cl2(5 mL)에 용해시켰다. 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 미정제 생성물 (R)-N-((S)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(40 mg, 수율: 100%)를 황색 액체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 348.0 [M+H]+.
단계 2: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00065
(R)-N-((S)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(40 mg, 0.1 mmol), 6-클로로-3-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민(15 mg, 0.05 mmol) 및 DIPEA(0.1 mL)를 DMF(0.8 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 110℃로 가열하고 10시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(100 mL)에 녹이고, 물(50 mL)로 2회 세척하고, 포화 식염수(50 mL)로 3회 세척하였다. 유기층을 합하여 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(EtOAc)에 의해 정제하여 표적 생성물 (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(8.2 mg, 수율: 26%)를 황색 액체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 624.1 [M+H]+.
단계 3: (S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00066
(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(8.2 mg, 0.01 mmol)를 무수 메탄올(2.0 mL)에 용해시켰다. 염산/디옥산(0.5 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 물에 용해시켰다. 포화 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 pH를 10으로 조절하고, 반응 용액을 디클로로메탄(50 mL)으로 2회 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축하여 미정제 생성물을 수하고, 이를 분취 HPLC에 의해 정제하여 표적 생성물 (S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-클로로-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민(1.5 mg, 수율: 22%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.48 (s, 1H), 7.45 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 4.71 (s, 1H), 3.41 (d, J = 74.5 Hz, 4H), 2.92 (s, 2H), 2.16 (d, J = 56.0 Hz, 2H), 1.74 (s, 1H), 1.52 (s, 2H), 1.26 (d, J = 15.5 Hz, 4H), 1.03 (d, J = 39.0 Hz, 4H).
MS m/z(ESI): 520.1 [M+H]+.
실시예 10
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00067
단계 1: 2-에틸헥실 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00068
2,3-디클로로-4-요오도피리딘(2.0 g, 7.31 mmol), 2-에틸헥실 3-머캅토프로파노에이트(1.8 g, 8.24 mmol), 팔라듐 아세테이트(82 mg, 0.37 mmol), 잔트포스(254 mg, 0.44 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.9 g, 14.70 mmol)을 질소 분위기하에 100℃에서 5시간 동안 디옥산 15 mL 중에서 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 반응 용액을 여과하고, 여액을 농축건조하였다. 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트=3:1)에 의해 정제하여 표적 생성물 2-에틸헥실 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(910 mg, 수율: 34%)를 수득하였다.
MS m/z(ESI): 364.1 [M+H]+
단계 2: 2-에틸헥실 3-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00069
2-에틸헥실 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(200 mg, 0.55 mmol), 아제티딘(63 mg, 1.10 mmol) 및 1,4-디옥산(5 mL)을 3시간 동안 마이크로파하에서 120℃에서 교반하였다. 반응 용액을 농축건조한 후, 물을 첨가하였다. 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 유기층을 농축건조하였다. 수득된 잔사를 컬럼 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트=3:1)에 의해 정제하여 생성물(130 mg, 수율: 62%)을 수득하였다.
MS m/z(ESI): 385.1 [M+H]+.
단계 3: 2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-티올의 제조
Figure pct00070
2-에틸헥실 3-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(130 mg, 0.34 mmol) 및 칼륨 tert-부톡사이드(38 mg, 0.34 mmol)를 실온에서 1시간 동안 무수 에탄올(5 mL)에서 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하고, 생성된 잔류물을 다음 단계에 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 201.0 [M+H]+.
단계 4: 3-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민의 제조
Figure pct00071
2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-티올(이전 단계에서 수득됨), 3-브로모-6-클로로피라진-2-아민(84 mg, 0.40 mmol), Pd2(dba)3 (15 mg, 0.016 mmol), 잔트포스(20 mg, 0.035 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(87 mg, 0.67 mmol)을 5 mL의 1,4-디옥산에 첨가하고, 반응 용액을 질소 분위기하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 농축건조하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트=1:1)에 의해 정제하여 담황색 고체(71 mg, 수율: 64%)를 수득하였다.
MS m/z(ESI): 328.0 [M+H]+.
단계 5: (R)-N-((S)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00072
tert-부틸 (S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(100 mg, 0.25 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 용해시켰다. 1 mL의 트리플루오로아세트산을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하여 오일을 수득하고, 이를 다음 단계에서 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 307.1 [M+H]+.
[α]20 D = 1.773.
단계 6: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00073
3-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민(71 mg, 0.22 mmol), (R)-N-((S)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드(이전 단계에서 수득됨) 및 칼륨 카보네이트(299 mg, 2.16 mmol)을 DMF(5 mL) 질소 분위기하에 100℃에서 마이크로파 2시간 동안에서 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축건조하여 오일을 수득하고, 이를 다음 단계에서 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 598.2[M+H]+.
단계 7: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민
Figure pct00074
(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드(이전 단계에서 수득됨)를 메탄올(5 mL)에 용해시켰다. 4M HCl/1,4-디옥산(5 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표적 생성물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민(8.7 mg, 수율: 8%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.69 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.42 - 7.32 (m, 1H), 7.28 - 7.14 (m, 3H), 5.97 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.35 - 4.16 (m, 6H), 3.96 (s, 1H), 3.28 - 3.19 (m, 2H), 3.15 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.32 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.80 (dtd, J = 32.3, 12.6, 4.3 Hz, 2H), 1.58 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 1.42 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 1.31 (d, J = 16.2 Hz, 1H).
MS m/z(ESI): 494.1 [M+H]+.
실시예 11
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4]의 제조 '-피페리딘]-1-아민
Figure pct00075
단계 1: 2-에틸헥실 3-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00076
2-에틸헥실 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(200 mg, 0.55 mmol), 모르폴린(96 mg, 1.10 mmol) 및 1,4-디옥산(5 mL)을 8시간 동안 마이크로파하에서 120℃에서 교반하였다. 반응 용액을 농축건조한 후, 물을 첨가하였다. 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 유기층을 농축건조하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트=3:1)에 의해 정제하여 생성물(152 mg, 수율: 67%)을 수득하였다.
MS m/z(ESI): 415.2 [M+H]+.
단계 2: 칼륨 3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-티올레이트의 제조
Figure pct00077
2-에틸헥실 3-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(100 mg, 0.24 mmol) 및 칼륨 tert-부톡사이드(27 mg, 0.24 mmol)를 무수 에탄올(5 mL)에서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하여 생성물을 수득하고, 이를 다음 단계에서 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 231.0 [M+H]+.
단계 3: 6-클로로-3-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민의 제조
Figure pct00078
칼륨 3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-티올레이트(이전 단계에서 얻음), 3-브로모-6-클로로피라진-2-아민(60 mg, 0.29 mmol), Pd2(dba)3 (11 mg, 0.012 mmol), 잔트포스(14 mg, 0.024 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(62 mg, 0.48 mmol)을 5 mL의 디옥산에서 질소 분위기하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 농축건조하고 컬럼 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트=1:1)에 의해 정제하여 담황색 고체를 수득하였다(60 mg, 수율: 70%).
MS m/z(ESI): 358.0 [M+H]+.
단계 4: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00079
6-클로로-3-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민(60 mg, 0.22 mmol), (R)-N-((S)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(76 mg, 0.25 mmol) 및 칼륨 카보네이트(231 mg, 1.67 mmol)을 DMF(5 mL)에 용해시키고, 반응 용액을 질소 분위기하에 100℃에서 마이크로파하에 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 농축건조하여 오일을 수득하고, 이를 다음 단계에서 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 628.2[M+H]+.
단계 5: (S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00080
(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(이전 단계에서 수득됨)를 메탄올(5 mL)에 용해시켰다. 4M HCl/1,4-디옥산(5 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표적 생성물 (S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민을 수득하였다(6 mg, 2단계 수율: 5%).
MS m/z(ESI): 524.1[M+H]+.
실시예 12
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(3,3-디플루오로아제티딘-1-일)피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00081
실시예 11의 실험 계획을 참고하여 실시예 12의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 530.1 [M+H]+, 532.1[M+2+H]+.
실시예 13
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00082
실시예 11의 실험 계획을 참고하여 실시예 13의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 508.1 [M+H]+, 510.1[M+2+H]+.
실시예 14
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00083
실시예 11의 실험 계획을 참고하여 실시예 14의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 508.1 [M+H]+, 510.1[M+2+H]+.
실시예 15
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1-메틸-4,6-디하이드로-1H-스피로[사이클로펜타[d]이미다졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00084
실시예 11의 실험 계획을 참고하여 실시예 15의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 498.1[M+H]+, 500.1[M+2+H]+.
실시예 16
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-(아제티딘-1-일)-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-메틸-2,6-디하이드로-4H-스피로[사이클로펜타[c]피라졸-5,4'-피페리딘]-4-아민의 제조
Figure pct00085
실시예 11의 실험 계획을 참고하여 실시예 16의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 498.1[M+H]+, 500.1[M+2+H]+.
실시예 17
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00086
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 17의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 538.1 [M+H]+, 540.1[M+2+H]+.
실시예 18
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00087
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 18의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 522.1 [M+H]+, 524.1[M+2+H]+.
실시예 19
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00088
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 19의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 529.1[M+H]+, 531.1[M+2+H]+.
실시예 20
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00089
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 20의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 513.1 [M+H]+, 515.1[M+2+H]+.
실시예 21
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-1-메틸-4,6-디하이드로-1H-스피로[사이클로펜타[d]이미다졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 21의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00090
MS m/z(ESI): 526.1 [M+H]+, 528.1[M+2+H]+.
실시예 22
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-메틸-2,6-디하이드로-4H-스피로[사이클로펜타[c]피라졸-5,4'-피페리딘]-4-아민의 제조
Figure pct00091
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 22의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 526.1 [M+H]+, 528.1[M+2+H]+.
실시예 23
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00092
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 23의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 529.1[M+H]+, 531.1[M+2+H]+.
실시예 24
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-모르폴리노피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-메틸-2,6-디하이드로-4H-스피로[사이클로펜타[c]피라졸-5,4'-피페리딘]-4-아민의 제조
Figure pct00093
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 24의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 542.1[M+H]+, 544.1[M+2+H]+.
실시예 25
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00094
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 25의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 484.1 [M+H]+, 486.1[M+2+H]+.
실시예 26
(S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00095
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 26의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 470.1 [M+H]+, 472.1[M+2+H]+.
실시예 27
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00096
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 27의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 436.1 [M+H]+.
실시예 28
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-사이클로프로필-3-메틸피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00097
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 28의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 450.1 [M+H]+.
실시예 29
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-사이클로프로필-3-플루오로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00098
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 29의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 454.1 [M+H]+.
실시예 30
(S)-1-(4-((3-아미노-5-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)피라진-2-일)의 제조)티오)-3-클로로피리딘-2-일)아제티딘-2-온
Figure pct00099
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 30의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 508.1 [M+H]+, 510.1[M+2+H]+.
실시예 31
(S)-1-(4-((3-아미노-5-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)피라진-2-일)의 제조)티오)-3-클로로피리딘-2-일)피롤리딘-2-온의 제조
Figure pct00100
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 31의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 522.1 [M+H]+, 524.1[M+2+H]+.
실시예 32
(S)-1-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((2-사이클로프로필피리딘-4-일)의 제조 티오)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00101
단계 1: (S)-1-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00102
에틸마그네슘 브로마이드(0.1 mL, 0.30 mmol, 3M) 및 테트라이소프로필 티타네이트(43 mg, 0.15 mmol)를 THF(10 mL) 중 에틸(S)-3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-(2-사이클로프로필피리딘-4-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(50 mg, 0.10 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 반응 용액을 실온으로 가온하고 5시간 동안 교반하였다. 포화 NH4Cl 수용액을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 반응 용액을 디클로로메탄(3 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기층을 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조하고, 농축시키고 분취 HPLC로 정제하여 (S)-1-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((2-사이클로프로필피리딘-4-일)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올(5 mg, 수율: 10%)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 500.1 [M+H]+.
실시예 33
(S)-1-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00103
실시예 32의 실험 계획을 참고하여 실시예 33의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 534.1 [M+H]+, 536.1[M+2+H]+.
실시예 34
(S)-1-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일)사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00104
실시예 32의 실험 계획을 참고하여 실시예 34의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 509.1 [M+H]+, 511.1[M+2+H]+.
실시예 35
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00105
단계 1: tert-부틸 4-알릴-4-포르밀피페리딘-1-카복실레이트의 제조
Figure pct00106
N,N-디메틸포름아미드(300 mL) 중 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카복실레이트(30 g, 14.1 mmol)의 용액에 리튬 tert-부톡사이드(13.5 g, 16.9 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 첨가 완료 후, 용액을 30분 동안 교반하였다. 알릴 브로마이드(19 g, 16.2 mmol)를 첨가하고, 첨가 완료 후, 반응 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 염화암모늄 수용액(1 L)에 붓고, 에틸 아세테이트(1 L x 2)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 수용액(500 mL)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 2%]에 의해 정제하여 생성물tert-부틸 4-알릴-4-포르밀피페리딘-1-카복실레이트(15 g, 수율: 42%)를 무색 오일로서 수득하였다.
단계 2: tert-부틸 4-알릴-4-(1-하이드록시알릴)피페리딘-1-카복실레이트의 제조
Figure pct00107
비닐 마그네슘 클로라이드(65 mL, 123.5 mmol)를 -78℃에서 테트라하이드로퓨란(300 mL) 중 tert-부틸 4-알릴-4-포르밀피페리딘-1-카복실레이트(25 g, 99 mmol)의 용액에 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 천천히 실온으로 승온하고 30분 동안 교반하였다. 반응 용액을 염화암모늄 수용액(1 L)에 붓고, 에틸 아세테이트(1 L x 2)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 수용액(500 mL)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 5%]에 의해 정제하여 생성물을 수득하였다. tert-부틸 4-알릴-4-(1-하이드록시알릴)피페리딘-1-카복실레이트(25 g, 수율: 90%)를 무색 오일로서 수득하였다.
단계 3: tert-부틸 4-아크릴로일-4-알릴피페리딘-1-카복실레이트의 제조
Figure pct00108
데스-마틴 시약(41.5 g, 98 mmol)을 디클로로메탄(400 mL) 중 tert-부틸 4-알릴-4-(1-하이드록시알릴)피페리딘-1-카복실레이트(25 g, 89 mmol)의 용액에 첨가하였다. 0℃ 첨가 완료 후, 반응 용액을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 중나트륨 카보네이트/아나트륨 설페이트 수용액(1/1, 1 L)에 천천히 붓고 디클로로메탄(1 L x 2)으로 추출하였다. 디클로로메탄 층을 포화 염화나트륨 수용액(500 mL)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 회전 증발에 의해 농축건조하였다. N-헵탄(200 mL)을 첨가하고, 용액을 5분 동안 교반하였다. 용액을 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 여액을 농축하여 생성물 tert -부틸 4-아크릴로일-4-알릴피페리딘-1-카복실레이트(24.8 g, 수율: 100%)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 신속하게 다음 단계에 사용하였다.
단계 4: tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트의 제조
Figure pct00109
tert-부틸 4-아크릴로일-4-알릴피페리딘-1-카복실레이트(24.8 g, 89 mmol) 및 디클로로(2-이소프로폭시페닐메틸렌) (트리사이클로헥실포스핀) 루테늄(II)(1.2 g, 1.4 mmol)을 톨루엔(700 mL)에서 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각하고 농축하고, 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 20%]에 의해 정제하여 생성물 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(13 g, 수율: 58%)를 적갈색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 252.1 [M+H]+.
단계 5: tert-부틸 2-브로모-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트의 제조
Figure pct00110
피리딘 N-옥사이드(11 g, 116 mmol)를 아세토니트릴(300 mL) 중 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(13 g, 51.8 mmol)의 용액에 첨가한 후, N-브로모숙신이미드(28 g, 157 mmol)를 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각하고 농축하고, 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 20%]에 의해 정제하여 생성물 tert-부틸 2-브로모-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(4.2 g, 수율: 25%)를 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 330.1 [M+H]+, 332.1 [M+2+H]+.
단계 6: tert-부틸 2-사이클로프로필-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트의 제조
Figure pct00111
tert-부틸 2-브로모-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(4.2 g, 12.8 mmol), 칼륨 사이클로프로필 트리플루오로보레이트(3.79 g, 25.6 mmol), 탄산세슘(12.5g), 38.4 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 디클로로메탄 착물(731 mg, 0.9 mmol)을 디옥산(100 mL) 및 물(10 mL) 중에서 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물(150 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트(150 mL x 2)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 수용액(50 mL)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 12%]에 의해 정제하여 생성물을 수득하였다. tert-부틸 2-사이클로프로필-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(1 g, 수율: 27%)를 황색 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 292.2 [M+H]+
단계 7: tert-부틸 (R,Z)-1-((tert-부틸설피닐<설페닐>)이미노)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트의 제조
Figure pct00112
tert-부틸 2-사이클로프로필-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(1 g, 3.4 mmol) 및 (R)-(+)-tert-부틸설핀아미드(2 g, 17.2) mmol)을 테트라에틸 티타네이트(30 mL)에서 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각한 후, 에틸 아세테이트(100 mL)를 첨가하였다. 반응 용액을 물(150 mL)에 부어 다량의 백색 고체를 침전시켰다. 반응 용액을 규조토를 통해 여과하고, 여액을 2개의 층으로 분리하였다. 유기층을 회전 증발에 의해 건조될 때까지 농축하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 50%]에 의해 정제하여 생성물 tert-부틸(R,Z)-1-((tert-부틸설피닐<설페닐>이미노)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(190 mg, 수율: 14%)를 황색 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 395.2 [M+H]+.
단계 8: tert-부틸 (S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트의 제조
Figure pct00113
디이소부틸 알루미늄 하이드라이드(0.9 mL, 1 mmol)를 테트라하이드로퓨란(10 mL) 중 tert-부틸 (R,Z)-1-((tert-부틸설피닐<설페닐>)이미노)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(210 mg, 0.53 mmol)의 용액에 -78℃에서 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 15분 동안 교반하였다. -78℃에서 나트륨 설페이트 10수화물을 첨가하여 반응을 종결시키고, 반응 용액을 10분 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하고, 여액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 5%]에 의해 정제하여 생성물 tert-부틸 (S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>아미노)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(105 mg, 수율: 50%)를 무색 오일로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 397.2 [M+H]+.
단계 9: (S)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00114
디옥산 중 염산(15 mL, 60 mmol)을 메탄올(3 mL) 중tert-부틸 (S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-카복실레이트(105 mg, 0.27 mmol)의 용액에 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 회전 증발에 의해 농축건조시켜 생성물 (S)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민(105 mg, 수율: 100%)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 193.2 [M+H]+.
단계 10: (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]의 제조]데크-2-엔-1-아민
Figure pct00115
3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민(76 mg, 0.26 mmol), (S)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민(80 mg, 0.2 mmol) 및 칼륨 카보네이트(167 mg, 1.2 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(8 mL)에서 100℃에서 7시간 동안 교반하였다. 물(60 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트(50 mL x 2)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 수용액(20 mL)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 박층 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄/메탄올=7/1]에 의해 정제하여 생성물(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민(37 mg, 수율: 41%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.67 - 7.51 (m, 2H), 5.92 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.27 (s, 1H), 4.26 - 4.04 (m, 2H), 3.33 (s, 1H), 3.27 - 3.08 (m, 2H), 2.44 - 2.18 (m, 2H), 1.81 - 1.69 (m, 1H), 1.68 - 1.47 (m, 2H), 1.42 - 1.24 (m, 2H), 0.81 - 0.60 (m, 2H), 0.57 - 0.28 (m, 2H).
MS m/z(ESI): 444.1 [M+H]+, 446.1 [M+2+H]+.
실시예 36
(S)-8-(5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00116
단계 1: 3-클로로-4-((5-클로로피라진-2-일)티오)피리딘-2-아민의 제조
Figure pct00117
칼륨 2-아미노-3-클로로피리딘-4-티올레이트(1 g, 2.64 mmol), 2-브로모-5-클로로피라진(597 mg, 3.11 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(284 mg, 0.311 mmol), 클로로[(4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II)(360 mg, 0.622 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.2 g, 9.33 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(10 mL)에서 마이크로파하에 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 회전 증발에 의해 건조될 때까지 농축하고, 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 에틸 아세테이트/석유 에터 0%에서 30%]에 의해 정제하여 생성물 3-클로로-4-((5-클로로피라진-2-일)티오)피리딘-2-아민(250 mg, 수율: 35%)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 273.0 [M+H]+, 275.0 [M+2+H]+.
단계 2: (S)-8-(5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00118
3-클로로-4-((5-클로로피라진-2-일)티오)피리딘-2-아민(100 mg, 0.368 mmol), (S)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔 -1-아민 염산염(105 mg, 0.265 mmol) 및 칼륨 카보네이트(254 mg, 1.84 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(8 mL)에서 100℃에서 6시간 동안 교반하였다. 물(40 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트(40 mL*2)로 추출하였다. 유기층을 농축하고 박층 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올=10/1)에 의해 정제하여 생성물 (S)-8-(5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)를 수득하였다. 피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민(40 mg, 수율: 35%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.29 (d, J = 16 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 4 Hz, 1H), 5.93 (d, J = 4 Hz, 1H), 5.31 (s, 1H), 4.34 - 4.14 (m, 2H), 3.43 - 3.35 (m, 2H), 3.28 - 3.21 (m, 1H), 2.45 - 2.21 (m, 2H), 1.86 - 1.49 (m, 3H), 1.44 - 1.22 (m, 2H), 0.82 - 0.61 (m, 2H), 0.58 - 0.30 (m, 2H).
MS m/z(ESI): 429.1 [M+H]+, 431.1 [M+2+H]+.
실시예 37
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00119
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 37의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 432.1 [M+H]+, 434.1[M+2+H]+.
실시예 38
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-에틸-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00120
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 38의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 446.1 [M+H]+, 448.1[M+2+H]+.
실시예 39
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-이소프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00121
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 39의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 460.1[M+H]+, 462.1[M+2+H]+.
실시예 40
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]의 제조]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00122
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 40의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 458.1 [M+H]+, 460.1[M+2+H]+.
실시예 41
(S)-1-(6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(6-아미노-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00123
실시예 32의 실험 계획을 참고하여 실시예 41의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 500.1 [M+H]+, 502.1[M+2+H]+.
실시예 42
(R)-1-(6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-일)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00124
실시예 32의 실험 계획을 참고하여 실시예 42의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 459.1[M+H]+, 461.1[M+2+H]+.
실시예 43
(S)-1-(3-(1-아미노-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-일)-6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4)-일)티오)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00125
실시예 32의 실험 계획을 참고하여 실시예 43의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 473.1 [M+H]+, 475.1[M+2+H]+.
실시예 44
(S)-1-(3-(1-아미노-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-일)-6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일) 사이클로프로판-1-올의 제조
Figure pct00126
실시예 32의 실험 계획을 참고하여 실시예 44의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 499.1[M+H]+, 501.1[M+2+H]+.
실시예 45
(S)-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일)메탄올의 제조
Figure pct00127
단계 1: 2-에틸헥실 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트의 제조
Figure pct00128
3-클로로-4-요오도피리딘-2-아민(3 g, 11.8 mmol), 2-에틸헥실 3-머캅토프로파노에이트(2.9 g, 14.2 mmol), 팔라듐 아세테이트(132 mg, 0.59 mmol), 4,5-비스(디페닐포스피노))-9,9-디메틸크산텐(683 mg, 1.18 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(561 mg, 4.3 mmol)을 디옥산(80 mL) 중에서 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하였다. 여액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유에터 ~ 석유에터/에틸아세테이트(60:40)]에 의해 정제하여 2-에틸헥실 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(3.8 g, 수율: 94%)를 연황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 345.1 [M+H]+, 347.0 [M+2+H]+.
단계 2: 칼륨 2-아미노-3-클로로피리딘-4-티올레이트의 제조
Figure pct00129
칼륨 tert-부톡사이드(174 mg, 1.53 mmol)를 에탄올(30 mL) 중 2-에틸헥실 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)프로파노에이트(500 mg, 1.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 미정제 생성물 칼륨 2-아미노-3-클로로피리딘-4-티올레이트(500 mg)를 황색 고체로 수득하고, 이를 다음 단계에 곧바로 사용하였다.
MS m/z(ESI): 161.0 [M+H]+, 163.0 [M+2+H]+.
단계 3: 에틸 6-브로모-3-((S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트의 제조
Figure pct00130
에틸 6-브로모-3-클로로-5-메틸피라진-2-카복실레이트(840 mg, 3 mmol), (S)-N-(1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)피발아미드 트리플루오로아세테이트(1.5 g, 3.6 mmol) 및 칼륨 카보네이트(1.7 g, 12 mmol)을 아세토니트릴(40 mL) 중에서 55℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하였다. 여액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 석유 에터 ~ 석유 에터/에틸 아세테이트(60:40)]에 의해 정제하여 에틸 6-브로모-3-((S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(1.5 g, 수율: 91%)를 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 549.2 [M+H]+, 551.2 [M+2+H]+.
단계 4: 에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트의 제조
Figure pct00131
에틸 6-브로모-3-((S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(798 mg, 1.45 mmol), 칼륨 2-아미노-3-클로로피리딘-4-티올레이트(500 mg, 1.45 mmol, 미정제), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(66 mg, 0.073 mmol)), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐(84 mg, 0.145 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(561 mg, 4.35 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(15 mL)에서 마이크로파하에서 1.5시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 용액을 여과하였다. 여액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올(98.5:1.5)]에 의해 정제하여 에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(500 mg, 수율: 55%)를 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 629.1 [M+H]+, 631.1 [M+2+H]+.
단계 5: (R)-N-((S)-1'-(5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(하이드록시메틸)-6-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00132
리튬 알루미늄 하이드라이드(0.7 mL, 2.5 M)를 테트라하이드로퓨란(30 mL) 중 에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-1-(((R))-tert-부틸설핀일<설페닐>)아미노)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(500 mg, 0.795 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 반응 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 소듐 설페이트 10수화물을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 반응 용액을 10분 동안 교반하였다. 반응 용액을 규조토로 여과하고, 필터 케이크를 테트라하이드로퓨란(50 mL)으로 2회 세척하였다. 여액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올(95:5)]에 의해 정제하여 (R)-N-((S)-1'-(5-((2-아미노-3)-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(하이드록시메틸)-6-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(220 mg, 수율: 47%)를 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 587.1 [M+H]+, 589.1 [M+2+H]+.
단계 6: (S)-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일)메탄올의 제조
Figure pct00133
디옥산 중 염산 (20 mL, 4.0 M)을 메탄올(3 mL) 중 (R)-N-((S)-1-(5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(하이드록시메틸)-6-메틸피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(220 mg, 0.375 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고, 메탄올(10 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 암모니아로 알칼리성으로 조정하고 회전 증발에 의해 농축건조하였다. 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올(1% NH3-H2O)(95:5)]에 의해 정제하여 (S)-(3-(1-아미노-1,3-디하이드로스피로[인덴])-2,4'-피페리딘]-1'-일)-6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일)메탄올(115 mg, 수율: 63%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.59 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.41 - 7.34 (m, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 5.89 (d, J = 4 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 4.00 (s, 1H), 3.88 (d, J = 12 Hz, 2H), 3.28 - 3.20 (m, 2H), 3.14 (d, J = 16 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 16 Hz, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.01 - 1.85 (m, 2H), 1.67 - 1.58 (m, 1H), 1.52 - 1.43 (m, 1H).
MS m/z(ESI): 483.2 [M+H]+, 485.2 [M+2+H]+.
실시예 46
(S)-(6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(6-아미노-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-일)메탄올의 제조
Figure pct00134
단계 1: 에틸 6-브로모-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트의 제조
Figure pct00135
(R)-N-((S)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(470 mg, 1.5 mmol, 1.0 당량), 에틸 6-브로모-3-클로로-5-메틸피라진-2-카복실레이트(398 mg, 1.43 mmol, 0.95 당량) 및 칼륨 카보네이트(1.04 g, 7.5 mmol, 5.0 당량)를 DMF(4.0 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 질소 분위기하에서 60℃로 가열하고 3시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 농축하여 DMF를 제거하였다. 생성된 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(페트로 에터 중 100% EtOAc)에 의해 정제하여 생성물 에틸 6-브로모-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)를 수득하였다. -4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(600 mg, 수율: 72%)를 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 556.1[M+H]+, 558.1[M+H+2]+.
단계 2: 에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트의 제조
Figure pct00136
마이크로파 반응관에서, 에틸 6-브로모-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(600 mg, 1.08 mmol, 1.0 eq) 및 칼륨 2-아미노-3-클로로피리딘-4-티올레이트(536 mg, 2.70 mmol, 2.5eq)를 10 mL의 DMF에 용해시킨 후, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(50 mg, 0.054 mmol, 0.05 당량), 잔트포스(62 mg, 0.11 mmol, 0.1 당량) 및 DIPEA(419 mg, 3.24 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 반응 용액에 질소를 3분 동안 발포하고 마이크로파하에서 105℃로 가열하고 75분 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 희석한 후, 규조토로 여과하였다. 여액을 농축하고, 생성된 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl 중 10% MeOH2)에 의해 정제하여 생성물 에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(360 mg, 수율: 52%)를 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 636.0 [M+H]+, 638.0 [M+H+2]+.
단계 3: 에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-의 제조 4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트
Figure pct00137
에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로 [사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(360 mg, 0.57 mmol, 1.0 당량)를 40 mL의 무수 THF에 용해시키고, 용액 질소로 퍼징하였다. 용액을 0℃로 냉각한 후, 테트라하이드로퓨란 중 LiAlH4 용액(0.6 mL, 1.14 mmol, 2.0 당량, D=2M)을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 천천히 실온으로 승온하고 3시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하고, 0℃로 냉각하였다. 2 mL의 물을 적가하고, 15% 수산화나트륨 수용액 4 mL를 첨가하였다. 물 6 mL를 넣고 반응 용액을 실온으로 승온하여 30분 동안 교반하였다. 적당량의 무수 나트륨 설페이트를 첨가하고, 반응 용액을 15분 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하여 고체를 제거하고, 여액을 농축하였다. 생성된 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl 중 10% MeOH2)에 의해 정제하여 생성물 에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(150 mg, 수율: 44%)를 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 594.1[M+H]+, 596.1[M+H+2]+.
단계 4: (S)-(6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(6-아미노-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-일)메탄올
Figure pct00138
에틸 6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-((S)-6-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-4,6-디하이드로스피로 [사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-카복실레이트(150 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량)를 MeOH(5 mL)에 용해시켰다. 디옥산에 염산 용액(1.0 mL, 4M)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고 메탄올 5 mL에 용해시키고 메탄올 중 7M NH3을 사용하여 pH를 알칼리성으로 조정하였다. 반응 용액을 농축하고, 순상 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2 중 10% MeOH) 및 역상 컬럼 크로마토그래피(H2O 중 30% MeCN(0.1% NH3H2O))에 의해 연속적으로 정제하여 목적 화합물 (S)-(6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(6-아미노-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-일)메탄올(52 mg, 수율: 42%)을 회색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.93 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.98 (s, 1H), 3.84 (s, 2H), 2.76 (dd, J = 47.2, 16.9 Hz, 4H), 2.37 (s, 3H), 1.60 (dd, J = 165.2, 116.4 Hz, 7H).
MS m/z(ESI): 490.1 [M+H]+, 492.1 [M+H+2]+.
실시예 47
(S)-(6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-(6-아미노-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]옥사졸-5,4'-피페리딘]-1'-일)-5-메틸피라진-2-일)메탄올의 제조
Figure pct00139
실시예 46의 실험 계획을 참고하여 실시예 47의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 474.1 [M+H]+, 476.1[M+2+H]+.
실시예 48
(R)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-메틸렌-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민의 제조
Figure pct00140
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 48의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 418.1 [M+H]+, 420.1[M+2+H]+.
실시예 49
(S,E)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-에틸리덴-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민의 제조
Figure pct00141
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 49의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 432.1 [M+H]+, 434.1[M+2+H]+.
실시예 50
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-(프로판-2-일리덴)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민의 제조
Figure pct00142
실시예 1의 실험 계획을 참고하여 실시예 50의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 446.1 [M+H]+, 448.1[M+2+H]+.
실시예 51
(S,E)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-에틸리덴-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민의 제조
Figure pct00143
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 51의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 446.1 [M+H]+, 448.1[M+2+H]+.
실시예 52
(R)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-메틸피라진-2-일)-2-메틸렌-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민의 제조
Figure pct00144
실시예 6의 실험 계획을 참고하여 실시예 52의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 432.1 [M+H]+, 434.1[M+2+H]+.
실시예 53
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00145
단계 1: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00146
3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민(200 mg, 0.694 mmol), (R)-N-((S)-1,3-디하이드로스피로 [인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(350 mg, 0.833 mmol, [α]20 D=1.773) 및 칼륨 카보네이트(479 mg, 3.47 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드(7 mL)에서 100℃에서 8시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 40 mL의 물을 첨가하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트(40 mL x 2)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 수용액(20 mL)으로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올 0%에서 3%]에 의해 정제하여 생성물(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(200 mg, 수율: 52%)를 주황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 558.2 [M+H]+.
단계 2: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00147
디옥산 중 염산 (20 mL, 80 mmol)을 (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-)의 용액에 첨가하였다. 메탄올(5) 중 일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(188 mg, 0.337 mmol) mL), 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축건조하고, 5 mL의 메탄올에 용해시켰다. pH를 암모니아로 알칼리성으로 조정하였다. 반응 용액을 농축하고 컬럼 크로마토그래피[용리액: 디클로로메탄 ~ 디클로로메탄/메탄올 0%에서 7.5%]에 의해 정제하여 생성물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3)-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민(130 mg, 수율: 85%)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 454.2 [M+H]+.
단계 3: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00148
N-플루오로비스벤젠설폰아미드(69 mg, 0.22 mmol)를 아세토니트릴(10 mL) 중 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민(100 mg, 0.22 mmol)의 용액에 -10℃에서 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 천천히 실온으로 승온하고 7시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 회전 증발기로 농축건조하고, 생성된 잔류물을 박층 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올=10/1)에 의해 정제하여 생성물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민(28 mg, 수율: 27%)을 카키색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.62 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 1H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 6.00 (d, J = 4 Hz, 1H), 4.67 - 4.54 (m, 2H), 4.30 (d, J = 16 Hz, 2H), 3.97 (s, 1H), 3.16 (d, J = 16 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 16 Hz, 1H), 1.95 - 1.78 (m, 2H), 1.65 - 1.53 (m, 1H), 1.48 - 1.38 (m, 1H).
MS m/z(ESI): 472.1 [M+H]+, 474.1 [M+2+H]+.
[α]20D =-36.893 .
실시예 54
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b] 피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민의 제조
Figure pct00149
단계 1: 3-브로모-2-(클로로메틸)피리딘의 제조
Figure pct00150
(3-브로모피리딘-2-일)메탄올(7.5 g, 40 mmol)을 디클로로메탄(20 mL)에 용해시키고 잘 혼합하였다. 빙수욕에 SOCl2(9.5 g, 80 mmol)를 적가하고, 반응 용액을 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고, 생성된 미정제 생성물을 고속 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적화합물 3-브로모-2-(클로로메틸)피리딘(5 g, 수율: 61%)을 무색 액체로서 수득하였다.
MS m/z (ESI): 205.9 [M+H]+.
단계 2: 1-(tert-부틸) 4-메틸 4-((3-브로모피리딘-2-일)메틸)피페리딘-1,4-디카복실레이트의 제조
Figure pct00151
1-(tert-부틸) 4-메틸 피페리딘-1,4-디카복실레이트(7.7 g, 31.7 mmol) 및 LDA(18.3 mL, 36.6 mmol)를 THF(20 mL)에 첨가하고, 반응 용액을 1시간 동안 60℃에서 반응시켰다. 3-브로모-2-(클로로메틸)피리딘(5 g, 24.4 mmol)을 첨가하고 반응 용액을 -60℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 감압 농축하고, 생성된 미정제 생성물을 고속 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 1-(tert-부틸) 4-메틸 4-((3-브로모피리딘-2-일)메틸)피페리딘-1,4-디카복실레이트(9 g, 수율: 89%)를 연황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z (ESI):413.0 [M+H]+.
단계 3: tert-부틸 5-옥소-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00152
THF(100 mL)를 1-(tert-부틸) 4-메틸 4-((3-브로모피리딘-2-일)메틸)피페리딘-1,4-디카복실레이트(9 g, 21.84 mmol)에 첨가하고, 용액 -78℃로 냉각시켰다. N-부틸리튬 용액(1.6N, 17 mL)을 천천히 적가한 후, -78℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 염화암모늄 수용액을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 나트륨 설페이트로 건조하고 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 생성된 미정제 생성물을 고속 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 tert-부틸 5-옥소-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(3 g, 수율: 45%)를 연황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z (ESI):303.1 [M+H]+.
단계 4: tert-부틸 (R,Z)-5-((tert-부틸설피닐<설페닐>)이미노)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00153
tert-부틸 5-옥소-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(3 g, 9.93 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.6 g, 29.8 mmol)을 에틸 티타네이트(50 mL)에 첨가하였다. 반응 용액을 잘 교반하고, 110℃에서 13시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 물(100 mL)을 천천히 적가하여 고체를 침전시켰다. 에틸 아세테이트(200 mL)를 첨가하고, 반응 용액을 여과하였다. 유기층을 감압하에 농축하여 목적 화합물 tert-부틸 (R,Z)-5-((tert-부틸설피닐<설페닐>)이미노)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(3 g, 수율: 75%)를 다음 단계에서 곧바로 사용하였다.
MS m/z (ESI):406.1 [M+H]+.
단계 5: tert-부틸 (S)-5-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트의 제조
Figure pct00154
tert-부틸 (R,Z)-5-((tert-부틸설피닐<설페닐>)이미노)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(3 g, 7.41 mmol)을 THF(40 mL)에 첨가하였다. 용액을 0℃로 냉각하고, BH3(7.5 mL, THF 중 2N)을 천천히 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 0℃로 유지하고 2시간 동안 반응시켰다. 메탄올(10 mL)을 적가하고, 반응 용액을 감압 농축하였다. 생성된 미정제 생성물을 고속 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 tert-부틸 (S)-5-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>아미노)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(2.5 g, 수율: 83%)를 담황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z (ESI):408.1 [M+H]+.
단계 6: (S)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민의 제조
Figure pct00155
tert-부틸 (S)-5-(((R)-tert-부틸설피닐<설페닐>)아미노)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트(2.5 g, 6.14 mmol) 및 디옥산 중 염산(10 mL, 4N)을 CH2Cl2(40 mL)에 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 감압 농축하여 목적 화합물 (S)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민을 수득하고(1.5 g), 이를 다음 단계에서 곧바로 사용하였다.
MS m/z (ESI):204.1 [M+H]+.
단계 7: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민의 제조
Figure pct00156
(S)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민(1.5 g, 7.39 mmol), 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일))티오)-6-브로모피라진-2-아민(3.7 g, 11.09 mmol) 및 탄산세슘(7.2 g, 22.17 mmol)을 DMF(50 mL)에 첨가하였다. 반응 용액을 90℃에서 13시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 감압 농축하고, 생성된 미정제 생성물을 고속 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민(1 g, 수율: 29%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z (ESI): 455.1 [M+H]+, 457.1 [M+H+2]+.
단계 8: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민의 제조
Figure pct00157
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민(600 mg, 1.32 mmol) 및 NFSI(830 mg, 2.64 mmol)를 THF(10 mL)에 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 감압 농축하고, 생성된 미정제 생성물을 고속 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-5,7-디하이드로스피로[사이클로펜타[b]피리딘-6,4'-피페리딘]-5-아민(90 mg, 수율: 14%)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS m/z (ESI): 473.0 [M+H]+, 475.1 [M+H+2]+.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 8.33 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.62 (d, J=5.6 Hz, 1H), 7.28-7.25 (m, 1 H), 6.01 (d, J=5.6 Hz, 1H), 4.35-4.31(m,2 H), 4.03 (s, 1 H), 3.36-3.31(m, 2 H),3.25-3.21 (m,1H), 2.92 (d, J=16.8 Hz, 1H), 1.98-1.84 (m, 2 H),1.64-1.60 (m,1 H), 1.42-1.39(m, 1 H).
실시예 55
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00158
단계 1: (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드의 제조
Figure pct00159
(R)-N-((S)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(260 mg, 0.83 mmol, 1.0 당량), 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민(227 mg, 0.79 mmol, 0.95 당량) 및 칼륨 카보네이트(574 mg, 4.15 mmol, 5.0 당량)을 DMF(2 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 질소 분위기하에서 105℃로 가열하고 10시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 용액을 농축하여 DMF를 제거하였다. 생성된 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피 (CH2Cl2 중 8% MeOH)에 의해 정제하여 생성물 (R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(340 mg, 수율: 76%)을 황색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 565.1[M+H]+, 567.1[M+H+2]+.
단계 2: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00160
(R)-N-((S)-1'-(6-아미노-5-((3-클로로-2-사이클로프로필피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-일)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(340 mg, 0.60 mmol, 1.0 당량)를 MeOH(5 mL)에 용해시켰다. 디옥산(1.0 mL, 4M) 중 HCl 용액을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축건조하고 메탄올 5 mL에 용해시키고 메탄올 중 7M NH3을 사용하여 pH를 알칼리성으로 조정하였다. 반응 용액을 농축하고, 순상 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2 중 10% MeOH) 및 역상 컬럼 크로마토그래피(H2O 중 40% MeCN(0.1% NH3·H2O)) 연속적으로 정제하여 목적 화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민(220 mg, 수율: 80%)을 회색 고체로서 수득하였다.
MS m/z(ESI): 461.1 [M+H]+, 463.1 [M+H+2]+.
단계 3: (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민의 제조
Figure pct00161
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민(220 mg, 0.48 mmol, 1.0 당량)을 무수 DMF(2 mL) 및 무수 MeCN(10 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 질소로 3회 퍼징하고, 시약 N-플루오로-N-(벤젠설포닐) 벤젠설폰아미드(159 mg, 0.5 mmol, 1.05 당량)를 질소 분위기하에 뱃취로 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 MeOH(50 mL)에 교반하면서 적가하고, 물 1 mL를 첨가하였다. 반응 용액을 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 분취 HPLC로 정제하여 생성물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-4,6-디하이드로스피로[사이클로펜타[d]티아졸-5,4'-피페리딘]-6-아민(40 mg, 수율: 17%)을 회색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.96 (s, 1H), 7.67 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.28 (s, 2H), 6.17 (s, 2H), 5.86 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.98 (s, 1H), 2.81 (dd, J = 52.7, 15.2 Hz, 4H), 1.88 (s, 2H), 1.75 - 1.52 (m, 4H).
19F NMR (376 MHz, DMSO) δ -88.17 (s).
MS m/z(ESI): 479.0 [M+H]+, 481.0 [M+H+2]+.
실시예 56
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00162
단계 1: (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00163
N-플루오로비스벤젠설폰아미드(40 mg, 0.128 mmol)를 테트라하이드로퓨란(18 mL) 중 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민(35 mg, 0.085 mmol)의 용액에 25℃에서 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 1시간 동안 교반하였다. TLC는 반응이 완료되지 않았음을 나타냈고, 추가의 N-플루오로비스벤젠술폰아미드(27 mg, 0.085 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 추가로 1시간 동안 교반하였다. TLC는 반응이 완료되지 않았음을 나타냈고, 추가의 N-플루오로비스벤젠술폰아미드(27 mg, 0.085 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 추가로 1시간 동안 교반하였다. TLC는 불순물의 존재를 보여주었다. 반응 용액을 염산(40 mL, 0.5N)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20 mL*2)로 세척하였다. 수성층을 나트륨 카보네이트로 pH 약 8로 조정하고, 에틸 아세테이트(30 mL*2)로 추출하였다. 유기층을 회전 증발에 의해 건조될 때까지 농축하고, 생성된 잔류물을 분취 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올=10/1)에 의해 정제하여 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민(28 mg, 수율: 27%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.61 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H), 4.31 - 4.13 (m, 2H), 3.45 (s, 1H), 3.30 - 3.15 (m, 2H), 2.43 - 2.24 (m, 2H), 1.89 - 1.48 (m, 5H), 0.84 - 0.65 (m, 2H), 0.57 - 0.36 (m, 2H).
MS m/z (ESI): 462.1 [M+H]+, 474.1 [M+2+H]+.
실시예 57
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 제조
Figure pct00164
실시예 53의 실험 계획을 참고하여 실시예 57의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 436.1 [M+H]+, 438.1[M+2+H]+.
실시예 58
(S)-(3-(1-아미노-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-8-일)-6-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-5-메틸피라진-2-일)메탄올의 제조
Figure pct00165
실시예 45의 실험 계획을 참고하여 실시예 58의 화합물을 제조하였다.
MS m/z(ESI): 473.1 [M+H]+, 475.1[M+2+H]+.
실시예 59
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 제조
Figure pct00166
실시예 53의 실험 계획을 참고하여 실시예 59의 화합물을 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.66 - 7.54 (m, 2H), 7.42 - 7.33 (m, 1H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 5.93 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.37 - 4.19 (m, 2H), 3.98 (s, 1H), 3.29 - 3.20 (m, 2H), 3.15 (d, J = 16 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 16 Hz, 1H), 1.91 - 1.68 (m, 2H), 1.65 - 1.53 (m, 1H), 1.50 - 1.39 (m, 1H).
MS m/z(ESI): 454.1[M+H]+, 456.1[M+2+H]+.
II. 화합물의 생물학적 분석 및 평가
본 발명은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는 하기 시험예와 함께 하기에 추가로 설명된다.
시험예 1. 본 발명 화합물의 SHP-2 키나제 활성 억제 효과 측정
실험 목표:
이 시험의 목적은 SHP-2 전장 단백질 알로스테릭 활성에 대한 화합물의 억제 효과를 측정하는 것이다.
실험 기구: 원심분리기(5810R, Eppendorf에서 구입), 피펫(Eppendorf 또는 Rainin에서 구입) 및 마이크로플레이트 판독기(모델: SynergyH1 완전-기능 마이크로플레이트 판독기, BioTek, USA에서 구입).
실험 방법: Homogeneous Full Length SHP-2 Assay Kit(BPS Bioscience, #79330)를 사용하여 in vitro SHP-2 활성을 측정하였다. 먼저, 18 μL의 마스터 믹스를 96-웰 저흡착 마이크로플레이트(NUNC, #267342)에 첨가하였다. 즉,, 1x의 최종 농도를 갖는 반응 완충액은 0.5μM SHP-2 활성화 펩티드 및 5mM DTT를 포함하였다. 원심분리 후, 5 μL의 시험 화합물/DMSO를 각 웰에 첨가하였다(최종 DMSO 함량은 1%, V/V이었고, 시험 화합물은 DMSO에 1 mM까지 용해되었고, 3배 연속 희석을 수행하여 10개의 농도를 수득함, 반응 시스템의 최종 농도는 1μM 내지 0.05nM였다. SHP-2를 1x 반응 완충액에서 0.06nM의 최종 농도로 희석하고, 생성된 용액을 반응 마이크로플레이트(웰당 2 μL)에 첨가하였다. 전체 활성 대조군(DMSO만 있는 화합물) 및 전체 억제 대조군(SHP-2 없음)을 반응 플레이트에 설정하였다. 원심분리 후, 반응 혼합물을 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다.
인큐베이션 완료 후, 최종 농도가 10μM인 기질 및 5mM DTT를 포함하는 기질 용액 25 μL를 각 웰에 첨가하였다. 원심분리 후, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 반응 완료 후, Synergy H1 전기능 마이크로플레이트 리더(BioTek)에서 판독값을 측정하였다(여기 파장: 340 nm, 방출 파장: 455nM, 이득 값: 75).
실험 데이터 처리 방법:
Max 및 Min 값으로 사용된 전체 활성 제어 및 전체 억제 제어를 기반으로 화합물이 처리된 웰의 억제율 데이터는 플레이트 상의 양성 대조군 웰(DMSO 대조군 웰) 및 음성 대조군 웰(키나제 없음)을 통해 계산하였다{% 억제율=100-[(시험 화합물 값-최소 평균)/(최대 평균-최소 평균)] x 100}. 시험 화합물의 IC50 값은 GraphPad 프리즘을 사용하여 4개 매개변수 비선형 논리 공식에 10개 농도의 데이터 및 백분율 억제율을 피팅(fitting)하여 계산하였다.
실험 결론:
상기 반응식에 따라, 본 발명의 실시예의 화합물은 SHP-2 키나제 활성 시험에서 표 2.1과 같은 생물학적 활성을 나타냈다.
[표 2.1]
SHP-2 키나제 활성 억제에 대한 화합물의 상대 IC50 값
Figure pct00167
상기 데이터는 본 발명의 실시예의 화합물이 SHP-2 키나제 활성을 억제하는데 우수한 활성을 가짐을 나타낸다.
시험예 2. KYSE520 세포에 대한 본 발명 화합물의 증식 억제 활성 측정
이 시험예의 목적은 종양 세포에 대한 본 발명의 화합물의 증식 억제 효과를 측정하는 것이다. 종양 세포에 대한 화합물의 증식 억제 활성은 CellTiter-Glo 방법에 의해 결정되었고, 세포 증식 억제에 대한 화합물의 절반 억제 농도 IC50을 구하였다. 2000개의 세포(90 μL의 세포 현탁액)를 96-웰 세포 배양 플레이트(Cornin g, #3610)의 각 웰에 접종하였다. 배양 플레이트를 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다(37℃, 5% CO2). 다음날, 시험 화합물 용액(최종 DMSO 함량은 0.1%, V/V, 반응 시스템의 최종 농도 범위는 100μM 내지 45nM임)의 10 μL의 구배 희석액을 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 동시에, 전체 활성 대조군(DMSO만 있는 화합물) 및 전체 억제 대조군(세포 없음)을 반응 플레이트에 설정하였다. 배양 플레이트를 인큐베이터에서 3일 동안 인큐베이션하였다(37℃, 5% CO2).
인큐베이션 완료 후, CellTiter-Glo 시약 50 μL를 세포 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고 실온에서 10분 동안 방치하였다. 화학발광 신호 값은 Synergy H1 전기능 마이크로플레이트 판독기(BioTek)에서 측정하였다. Max 및 Min 값으로 사용된 전체 활성 제어 및 전체 억제 제어를 기반으로, 화합물에 의해 처리된 웰의 백분율 억제율 데이터는 {% 억제율=100-[(시험 화합물 값-최소 평균)/(최대 평균-최소 평균)] x 100}로 계산하였다. 시험 화합물의 IC50 값은 GraphPad 프리즘을 사용하여 4-매개변수 비선형 논리 공식에 퍼센트 억제율 및 8개 농도의 데이터를 피팅함으로써 계산하였다.
상기 반응식에 따라, 본 발명의 화합물은 KYSE520 세포에 대한 증식 억제 활성 시험에서 약 0.1 nM 내지 200 nM(IC50)의 생물학적 활성을 나타냈다.
일부 양태에서, KYSE520 세포의 증식 억제에 대한 본 발명의 화합물의 IC50은 약 200 nM 미만, 바람직하게는 약 100 nM 미만, 더욱 바람직하게는 약 10 nM 미만, 보다 바람직하게는 약 1 nM 미만, 가장 바람직하게는 1nM 미만이었다.
시험예 3. NCI-H358 세포에 대한 본 발명 화합물의 증식 억제 활성 측정
실험 목적: 이 실험예의 목적은 종양 세포에 대한 본 발명의 화합물의 증식 억제 효과를 측정하는 것이다.
실험 기구: 원심분리기(5810R, Eppendorf에서 구입), 이산화탄소 인큐베이터(Ther에서 구입), 생물학적 안전 캐비닛(Shanghai Boxun Company에서 구입), 피펫(Eppendorf 또는 Rainin에서 구입) 및 마이크로플레이트 리더(모델: SynergyH1 full- 기능 마이크로플레이트 리더, BioTek, USA에서 구입).
실험 방법: 96-웰 세포 배양 플레이트(Cornin g, #3610)의 각 웰에 3000개의 세포(90 μL의 세포 현탁액)를 접종하였다. 배양 플레이트를 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다(37℃, 5% CO2). 다음날, 시험 화합물 용액(최종 DMSO 함량은 0.2%, V/V, 반응 시스템의 최종 농도 범위는 10μM 내지 4.5nM임)의 10 μL의 구배 희석액을 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 동시에, 전체 활성 대조군(DMSO만 있는 화합물) 및 전체 억제 대조군(세포 없음)을 반응 플레이트에 설정하였다. 배양 플레이트를 인큐베이터에서 3일 동안 인큐베이션하였다(37℃, 5% CO2).
인큐베이션 완료 후, CellTiter-Glo 시약 50 μL를 세포 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고 실온에서 10분 동안 방치하였다. 화학 발광 신호 값은 Synergy H1 full-function microplate reader(BioTek)에서 측정하였다. Max 및 Min 값으로 사용된 전체 활성 제어 및 전체 억제 제어를 기반으로, 화합물에 의해 처리된 웰의 백분율 억제율 데이터는 {% 억제율=100-[(시험 화합물 값-최소 평균)/(최대 평균-최소 평균)] x 100}로 계산하였다. 시험 화합물의 IC50 값은 GraphPad 프리즘을 사용하여 4-매개변수 비선형 논리 공식에 퍼센트 억제율 및 8개 농도의 데이터를 피팅함으로써 계산하였다.
실험 데이터 처리 방법:
실시예의 화합물에 의해 처리된 웰의 억제율 데이터는 플레이트 상의 비히클 대조군 웰을 통해 계산하였다{% 억제율=100-(시험 화합물 값/비히클 대조군 값) x 100}. IC50 값은 GraphPad 프리즘을 사용하여 4개 매개변수 비선형 논리 공식에 다양한 농도 및 해당 백분율 억제율의 데이터를 피팅하여 계산하였다.
실험 결론:
상기 반응식에 따라, 본 발명의 실시예의 화합물은 NCI-H358 세포 증식 억제 시험에서 표 2.2와 같은 생물학적 활성을 나타냈다.
[표 2.2]
NCI-H358 세포의 증식 억제에 대한 화합물의 IC50 값
Figure pct00168
상기 데이터는 본 발명의 실시예의 화합물이 NCI-H358 세포의 증식을 억제하는 우수한 활성을 가짐을 나타낸다.
시험예 4. 마우스의 약동학 분석
4.1. 연구 목표:
Balb/c 마우스를 시험 동물로 사용하였다. 마우스 신체(혈장)에 경구 투여 후, 실시예 36, 46, 53, 54 및 55의 화합물의 약동학적 거동을 연구하였다.
4.2. 시험 프로토콜
4.2.1 시험 화합물:
자체 제조된 실시예 36, 46, 53, 54 및 55의 화합물;
4.2.2 시험 동물:
수컷 Balb/c 마우스는 인증서 번호: SCXK(Shanghai) 2013-0006 N0.311620400001794로 Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., LTD에서 구입하였다.
4.2.3 시험 화합물의 제조:
5 g의 하이드록시에틸셀룰로오스(HEC, CMC-Na, 점도: 800 내지 120 Cps)을 1000 mL의 정제수에 녹이고 10 g의 Tween 80을 첨가하였다. 용액을 잘 혼합하여 투명한 용액을 형성하였다.
4 mL 유리병에 실시예 36, 46, 53, 54 및 55의 화합물 1.2 mg을 각각 첨가한 후, 상기 용액 2.4 mL를 첨가하였다. 용액을 10분 동안 초음파 처리하여 농도 0.5 mg/mL의 무색 투명한 용액을 수득하였다.
4.2.4 관리:
밤새 금식시킨 후, 수컷 Balb/c 마우스에 5 mg/kg의 투여 용량 및 10 mL/kg의 투여 부피로 시험 화합물을 경구 투여하였다.
4.2.5 샘플 수집:
투여 전 및 투여 후, 0.25시간, 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간 및 24시간에 채혈하였다. 혈액 샘플을 EDTA-2K 튜브에 보관하고, 6000 rpm에서 4℃에서 6분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 혈장 샘플은 -80℃에서 보관하였다. 마우스에게 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.
4.2.6 시험 결과:
시험 결과는 표 2.3과 같이 LCMS/MS 방법으로 측정하였다.
[표 2.3]
마우스에서 화합물의 약동학적 매개변수
Figure pct00169
상기 데이터는 본 발명의 실시예의 화합물이 5 mg/kg의 용량에서 우수한 대사 활성을 가짐을 나타낸다.
시험예 5. 랫트의 약동학 분석
5.1. 연구 목표:
SD 랫트를 시험 동물로 사용하였다. 랫트 몸(혈장)에 경구 투여한 후, 실시예 36, 46, 53, 54, 55 및 59의 화합물의 약동학적 거동을 연구하였다.
5.2. 시험 프로토콜
5.2.1 시험 화합물:
자체 제조된 실시예 36, 46, 53, 54, 55 및 59의 화합물;
5.2.2 시험 동물:
수컷 SD 랫트(군당 랫트 3마리)는 인증서 번호: SCXK(Shanghai) 2013-0006 N0.311620400001794로 Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., LTD에서 구입하였다.
5.2.3 시험 화합물의 제조:
5g의 하이드록시에틸셀룰로오스(HEC, CMC-Na, 점도: 800 내지 120 Cps)을 1000 mL의 정제수에 녹이고 10 g의 Tween 80을 첨가하였다. 용액을 잘 혼합하여 투명한 용액을 형성하였다.
실시예 36, 46, 53, 54, 55 및 59의 화합물 3.9 mg을 상기 용액에 각각 용해시켰다. 용액을 잘 진탕한 후, 15분 동안 초음파 처리하여 농도 0.5 mg/mL의 무색 투명한 용액을 수득하였다.
5.2.4 관리:
밤새 금식시킨 후, 수컷 SD 랫트(군당 3마리 랫트)에 5 mg/kg의 투여 용량 및 10 mL/kg의 투여 부피로 시험 화합물을 경구 투여하였다.
5.2.5 샘플 수집:
투여 전 및 투여 후, 0.5시간, 1.0시간, 2.0시간, 4.0시간, 6.0시간, 8.0시간 및 24.0시간에 경정맥에서 0.2 mL의 혈액을 채취하였다. 혈액 샘플을 EDTA-2K 튜브에 보관하고, 6000 rpm에서 4℃에서 6분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 혈장 샘플은 -80℃에서 보관하였다. 랫트에게 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.
5.3 시험 결과: 시험 결과는 표 2.4와 같이 LCMS/MS 방법으로 측정하였다.
[표 2.4]
랫트에서 본 발명의 화합물의 약동학적 매개변수
Figure pct00170
실험 결론: 상기 표의 데이터는 본 발명의 실시예의 화합물이 5 mg/kg의 용량으로 경구 투여한 후, 랫트 혈장에서 비교적 높은 노출에 도달했음을 나타낸다. 또한, 실시예 59의 화합물을 투여한 랫트에서 항문 주위 오염이 관찰되어 실시예 59의 화합물이 위장 독성이 있음을 나타낸다.
시험예 6. MiaPaca 2 이종이식 모델에 대한 종양 억제 시험
6.1 실험 목적:
Balb/c 누드 마우스를 시험 동물로 사용하였다. 시험 화합물의 항종양 효과를 평가하기 위해 인간 췌장암 세포 MiaPaca 2 이종이식편(CDX) 모델에 대해 생체내 약력학 시험을 수행하였다.
6.2 실험 기기 및 시약:
6.2.1 도구:
초세척 작업대(Ultra-clean workbench)(BSC-1300II A2, Shanghai Boxun Medical Biological Instrument Corp.)
CO2 인큐베이터(Thermo-311, Thermo)
원심분리기(Centrifuge 5720R, Eppendorf)
자동 세포 계수기(Countes II, Life Technologies)
피펫(10-20 μL, Eppendorf)
현미경(Ts 2, Nikon)
버니어 캘리퍼스 (CD-6'' AX, Mitutoyo, Japan)
세포 배양 플라스크 (T25/T75/T225, Corning)
항온 수조(HWS12, Shanghai YIHENG Technical Co., Ltd.)
6.2.2 시약:
DMEM (11995-065, Gibco)
소 태아 혈청(FBS) (10091-148, Gibco)
0.25% 트립신(25200-056, Gibco)
페니실린-스트렙토마이신 이중항생제(P/S) (SV30010, GE)
인산완충식염수(PBS) (10010-023, Gibco)
마트리겔(356234, 코닝)
Gln (25030-081, Gibco)
6.3 실험 과정:
세포 은행에서 MiaPaca 2 세포를 꺼내 해동하였다. 세포를 DMEM 배지(10% FBS, 1% Glu 및 1% P/S 함유)에 첨가하고 CO2 인큐베이터(인큐베이터의 온도는 37℃이고, CO2 농도는 5% 였음)에서 인큐베이션하였다. 세포가 배양 플라스크 바닥의 80 내지 90%를 덮은 후, 세포를 계대하였다. 계대 후, 세포는 CO2 인큐베이터에서 계속 인큐베이션되었다. 세포의 수가 생체 내 접종 요건을 충족할 때까지 과정을 반복하였다. 약력학 시험. 대수 성장기의 세포를 수집하고 자동 세포 계수기로 계수하였다. 계수 결과에 따라 세포를 PBS 및 Matrigel(부피비: 1:1)로 재현탁하여 세포 현탁액(밀도: 8 x 107/mL)을 수득하고 나중에 사용하기 위해 아이스 박스에 넣었다.
암컷 Balb/c 누드 마우스(6 내지 8주령, 체중: 약 18 내지 22g)를 시험 동물로 사용하였다. 마우스는 특수 병원체가 없는 환경과 단일 환기 케이지(케이지당 5마리 마우스)에서 유지하였다. 모든 케이지, 침구 및 물은 사용 전에 소독하였다. 모든 동물은 표준 인증 상업용 실험 동물 사료에 무료로 접근할 수 있었다. 누드 마우스는 시험 전에 랫트와 랫트를 위한 일회용 범용 귀 태그로 표시하였다. 접종 부위의 피부는 접종 전 75% 의료용 알코올로 소독하였다. 각 마우스의 오른쪽 등에 0.1 mL의 MiaPaca 2 종양 세포(8 x 106 세포 함유)를 접종하였다. 평균 종양 부피가 100 내지 200 mm3에 도달했을 때, 투여를 수행하였다. 시험 화합물을 매일 위내 투여하였다. 시험종료 시점의 각 군의 용량, 투여빈도 및 효능을 표 5에 나타냈다. 종양 부피(mm3)는 주 2회 버니어 캘리퍼스로 측정하였다. 종양 부피 계산 공식: V=0.5*D*d*d, 여기서 D 및 d는 각각 종양의 장경 및 단경을 나타낸다. 항종양 효능은 화합물 처리된 동물의 평균 종양 증가 부피를 미처리 동물의 평균 종양 증가 부피로 나누어 측정하였다. 종양 성장 억제율 계산식: TGI(%) = 1-[(Vt-V0) 투여군/(Vt-V0) 비히클 대조군]*100%. 실험 후, 모든 동물을 안락사시켰다.
6.4 실험 결과
[표 2.5]
이종이식을 갖는 마우스에서 화합물의 약력학적 매개변수
Figure pct00171
참고: 괄호 안의 데이터는 해당 시간(즉, 각각 0일 및 21일)에서 본 실시예에 해당하는 비히클 QD x 3w 군(즉, 대조군)의 종양 부피를 나타낸다.실험 결론: 상기 데이터는 21일의 연속 경구 투여 후, 본 발명의 실시예의 화합물이 3 내지 10 mg/kg QD의 투여 조건하에서 누드 마우스에서 MiaPaca 2 이종이식편의 성장을 유의하게 억제할 수 있음을 나타낸다.
시험예 7. 종양 보유 마우스의 약동학 분석
7.1. 연구 목표:
MiaPaca 2 종양 보유 마우스를 시험 동물로 사용하였다. 마우스 신체(혈장, 종양 조직 및 장)에서 6 mg/kg의 용량으로 경구 투여한 후, 실시예 53의 화합물의 약동학적 거동을 연구하였다.
7.2. 시험 프로토콜
7.2.1 시험 화합물:
자체 제조된 실시예 53의 화합물.
7.2.2 시험 동물:
24마리의 암컷 MiaPaca 2 종양 보유 마우스가 사용하였다. 각 시점(0시간, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 16시간 및 24시간)에 대해 3마리의 마우스를 사용하였다. 마우스는 인증서 번호: SCXK(Shanghai) 2018-0006으로 Shanghai Sippr-BK lab animal Co. Ltd.에서 구입하였다.
7.2.3 시험 화합물의 제조:
하이드록시메틸셀룰로오스 5g을 1000 mL의 정제수에 녹이고 10 g의 Tween 80을 첨가하였다. 용액을 잘 혼합하여 투명한 용액을 형성하였다.
실시예 53의 화합물 4.57 mg, 22.6 mg을 상기 용액에 용해시켰다. 용액을 잘 진탕한 후, 15분 동안 초음파를 가하여 0.6 mg/mL 농도의 균일한 현탁액을 수득하였다.
7.2.4 관리:
금식 후, MiaPaca 2 종양 보유 마우스에 체중에 따른 시험 화합물을 6 mg/kg의 투여 용량 및 10 mL/kg 투여 부피로 경구(p.o.) 투여하였다(동물은 0시간에 시험 화합물로 투여되지 않음).
7.2.5 샘플 수집:
투여 전과 투여 후에 마우스를 CO2로 안락사시키고, 심장에서 0.5 mL의 혈액을 채취하였다. 혈액 샘플을 EDTA-2K 튜브에 보관하고, 6000 rpm에서 4℃에서 6분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 혈장 샘플은 -80℃에서 보관하였다. 종양 조직의 무게를 측정하고 2 mL 원심분리 튜브에 넣고 80℃에서 보관하였다. 적절한 길이의 십이지장, 회장, 결장 조직을 채취하여 가위로 절개하여 내용물을 제거하였다. 상기 조직을 PBS로 2회 세척하고 흡수지로 수분을 흡수시켰다. 조직의 무게를 측정하고 2 mL 원심분리 튜브에 넣고 -80℃에서 보관하였다.
7.3 시험 결과: 시험 결과는 표 2.6과 같이 LCMS/MS 방법으로 측정하였다.
[표 2.6]
마우스에서 본 발명의 화합물의 약동학적 매개변수
Figure pct00172
실험 결론: 상기 표의 데이터는 6 mg/kg의 용량에서 마우스 종양에 대한 본 발명의 실시예 화합물의 노출이 매우 높은 수준에 도달하였고, 종양에서의 노출이 혈액에서보다 유의하게 더 높음을 나타낸다. Tmax 및 MRT에서 종양 내 화합물의 농도가 점차 증가하고 T1/2가 더 길어짐을 알 수 있으며, 이는 화합물이 점차 종양에 축적되고 항상 종양 내 더 높은 농도를 유지하여 더 나은 종양 억제 효과를 보장함을 나타낸다.
시험예 8. hERG 칼륨 채널에 대한 억제 활성 시험
8.1 세포 준비
8.1.1 CHO-hERG 세포를 175 cm2 배양 플라스크에서 배양하였다. 세포가 60 내지 80%의 밀도로 성장하면 배양액을 제거하고 PBS 7 mL로 1회 세척한 후, Detachin 3 mL를 첨가하여 세포를 분해하였다.
8.1.2 소화가 완료된 후, 배양액 7 mL를 첨가하여 세포를 중화시킨 후, 원심분리하였다. 상청액을 제거한 후, 5 mL의 배양액을 첨가하여 재현탁하여 세포 밀도가 2 내지 5 x 106 세포/mL이 되도록 하였다.
8.2 용액 준비
[표 2.7]
세포내액 및 세포외액의 성분
Figure pct00173
8.3 전기생리학적 기록 과정
단일 셀 고임피던스 밀폐 및 전체 셀 패턴 형성 프로세스는 모두 Qpatch 기기에 의해 자동으로 완료하였다. 전체 셀 기록 패턴을 수득된 후, 셀을 -80 mV에서 고정하였다. 5초 동안 +40 mV의 탈분극 자극을 적용하기 전에 -50 mV의 사전 전압을 50밀리초 동안 인가한 다음, 세포를 -50 mV로 재분극하고 5초 동안 유지한 다음 다시 -80 mV로 되돌렸다. 이 전압 자극을 15초 간격으로 인가하여 2분 동안 데이터를 기록한 후, 세포외액을 투여하고 5분 동안 데이터를 기록하고 투여를 시작하였다. 화합물은 가장 낮은 시험 농도에서 투여되었고, 2. 각 시험 농도에 대해 5분이 주어졌다. 모든 농도의 화합물을 투여한 후, 양성대조군으로 3M Cisapride를 투여하였다. 각 농도에 대해 최소 3개의 세포(n≥3)를 시험하였다.
8.4 화합물 제조
8.4.1 20mM 화합물 모액을 세포외액으로 희석하였다. 20mM 화합물 모액 5 μL에 2495 μL의 세포외액을 첨가하여 40μM로 500배 희석한 후, 0.2% DMSO를 포함하는 세포외액에 순차적으로 3배 희석하여 시험될 최종 농도를 수득하였다.
8.4.2 가장 높은 시험 농도는 40μM이었으며, 총 6개의 농도(각각 40, 13.33, 4.44, 1.48, 0.49, 0.16μM)가 있었다.
8.4.3 최종 시험 농도에서 DMSO 함량은 0.2% 이하였다. 이 농도의 DMSO는 hERG 칼륨 채널에 영향을 미치지 않았다.
8.5 데이터 분석
실험 데이터는 XLFit 소프트웨어로 분석하였다.
8.6 품질 관리
환경: 습도 20 내지 50% 및 온도 22 내지 ℃
시약: 사용된 실험 시약은 순도가 >98%로 Sigma에서 구입하였다.
보고서의 실험 데이터는 다음 기준을 충족해야 한다.
전체 셀 밀폐 임피던스 >100 MΩ
테일 전류 진폭 >400 pA
약리학적 매개변수:
hERG 채널에 대한 여러 농도의 Cisapride의 억제 효과를 양성 대조군으로 설정하였다.
8.7 실험 결과
hERG 전류에 대한 다중 농도에서 실시예의 화합물의 억제 효과는 다음과 같다.
[표 2.8]
hERG 전류에 대한 다중 농도에서 실시예의 화합물의 억제 효과
Figure pct00174
실험 결론: 심장 hERG 칼륨 채널에 대한 약물의 억제는 약물이 QT 연장 증후군을 유발하는 주요 원인이다. 실험 결과로부터, 본 발명의 실시예의 화합물은 심장 hERG 칼륨 채널에 대한 명백한 억제 효과가 없어 고용량에서 심장 독성 부작용을 피할 수 있음을 알 수 있다.
시험예 9. 마우스의 약동학 분석
9.1. 연구 목표:
Balb/c 마우스를 시험 동물로 사용하였다. 마우스 신체(혈장)에 단일 정맥내 주사 후, 실시예 53 및 59의 화합물의 약동학적 거동을 연구하였다.
9.2. 시험 프로토콜
9.2.1 시험 화합물:
자체 제조된 실시예 53 및 59의 화합물;
9.2.2 시험 동물:
수컷 Balb/c 마우스는 인증서 번호: SCXK(Shanghai) 2013-0006 N0.311620400001794로 Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., LTD에서 구입하였다.
9.2.3 시험 화합물의 제조:
10% Solutol HS15 함유 수용액: 주사용 정제수에 10g의 Solutol HS15를 첨가하고 교반하에 용해시켰다. 주사용 정제수로 용액을 100 mL로 희석하고 잘 진탕하여 원하는 용액을 수득하였다.
20% HP-β-CD 함유 수용액: 주사용 정제수에 HP-β-CD 20g을 첨가하여 교반하에 용해시켰다. 주사용 정제수로 용액을 100 mL로 희석하고 잘 진탕하여 원하는 용액을 수득하였다.
DMSO 0.5 mL, 20% HP-β-CD 수용액 8.5 mL 및 10% Solutol HS15 수용액 1 mL를 혼합하고 잘 진탕하여 투명한 용액을 수득하였다.
실시예 53 및 59의 화합물 0.234 mg을 칭량하고, 상기 용액 1.17 mL에 첨가하였다. 용액을 초음파로 처리하여 투명한 용액을 수득하였다. 용액을 0.22 μm 정수 필터로 여과하고, 여액을 정맥 투여용 제제(iv)로 하였다. 농도는 0.2 mg/mL였다.
9.2.4 관리:
밤새 금식시킨 후, 수컷 Balb/c 마우스에 1 mg/kg의 투여 용량 및 5 mL/kg의 투여 부피로 시험 화합물을 정맥내 투여하였다.
9.2.5 샘플 수집:
투여 전 및 투여 후, 0분, 5분, 15분, 0.5시간, 1.0시간, 2.0시간, 4.0시간, 8.0시간 및 24.0시간에 채혈하였다. 혈액 샘플을 EDTA-2K 튜브에 보관하고, 6000 rpm에서 4℃에서 6분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 혈장 샘플은 -80℃에서 보관하였다. 마우스에게 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.
9.3 시험 결과: 시험 결과는 표 2.9와 같이 LCMS/MS 방법으로 측정하였다.
[표 2.9]
마우스에서 화합물의 약동학적 매개변수
Figure pct00175
실험 결론: 본 발명의 실시예의 화합물은 1 mg/kg의 용량에서 마우스 체내에서 우수한 대사 특성을 갖는다.
시험예 10. 랫트의 약동학 분석
10.1. 연구 목표:
SD 랫트를 시험 동물로 사용하였다. 랫트 신체(혈장)에 단일 정맥내 주사 후, 실시예 53 및 59의 화합물의 약동학적 거동을 연구하였다.
10.2. 시험 프로토콜
10.2.1 시험 화합물:
자체 제조된 실시예 53 및 59의 화합물.
10.2.2 시험 동물:
수컷 SD 랫트(군당 랫트 3마리)는 인증서 번호: SCXK(Shanghai) 2013-0006 N0.311620400001794로 Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., LTD에서 구입하였다.
10.2.3 시험 화합물의 제조:
10% Solutol HS15 함유 수용액: 주사용 정제수에 10g의 Solutol HS15를 첨가하고 교반하에 용해시켰다. 주사용 정제수로 용액을 100 mL로 희석하고 잘 진탕하여 원하는 용액을 수득하였다.
20% HP-β-CD 함유 수용액: 주사용 정제수에 HP-β-CD 20g을 첨가하여 교반하에 용해시켰다. 주사용 정제수로 용액을 100 mL로 희석하고 잘 진탕하여 원하는 용액을 수득하였다.
DMSO 0.5 mL, 20% HP-β-CD 수용액 8.5 mL 및 10% Solutol HS15 수용액 1 mL를 혼합하고 잘 진탕하여 투명한 용액을 수득하였다.
실시예 53 및 59의 화합물 0.78 mg을 칭량하고, 상기 용액 3.9 mL에 첨가하였다. 용액을 초음파로 처리하여 투명한 용액을 수득하였다. 용액을 0.22 μm 정수 필터로 여과하고, 여액을 정맥 투여용 제제(iv)로 하였다. 농도는 0.2 mg/mL였다.
10.2.4 관리:
밤새 금식시킨 후, 수컷 SD 랫트(군당 3마리 랫트)에 1 mg/kg의 투여 용량 및 5 mL/kg의 투여 부피로 시험 화합물을 정맥내 투여하였다.
10.2.5 샘플 수집:
투여 전 및 투여 후, 0분, 5분, 15분, 0.5시간, 1.0시간, 2.0시간, 4.0시간, 8.0시간 및 24시간에 경정맥에서 0.2 mL의 혈액을 채취하였다. 혈액 샘플을 EDTA-2K 튜브에 보관하고, 6000 rpm에서 4℃에서 6분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 혈장 샘플은 -80℃에서 보관하였다. 랫트에게 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.
10.3 시험 결과: 시험 결과는 표 2.10과 같이 LCMS/MS 방법으로 측정하였다.
[표 2.10]
랫트에서 본 발명의 화합물의 약동학적 매개변수
Figure pct00176
실험 결론: 본 발명의 실시예의 화합물은 1 mg/kg의 용량에서 랫트 체내에서 우수한 대사 특성을 갖는다.
시험예 11. 마우스의 내성 분석
11.1. 연구 목표:
Balb/c 마우스를 시험 동물로 사용하였다. 암컷 및 수컷 마우스에 경구 투여 후, 실시예 53 및 59의 화합물의 내성을 연구하였다.
11.2. 시험 프로토콜
11.2.1 시험 화합물:
자체 제조된 실시예 53 및 59의 화합물;
11.2.2 시험 동물:
Balb/c 마우스(수컷 9마리 및 암컷 9마리)는 인증서 번호: SCXK(Shanghai) 2013-0006 N0.311620400001794로 Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., LTD에서 구입하였다.
11.2.3 시험 화합물의 제조:
5g의 하이드록시에틸셀룰로오스(HEC, CMC-Na, 점도: 800 내지 120 Cps)을 1000 mL의 정제수에 녹이고 10 g의 Tween 80을 첨가하였다. 용액을 잘 혼합하여 투명한 용액을 형성하였다.
100 mL 유리병에 실시예 53의 화합물 41.0 mg 및 실시예 59의 화합물 25.9 mg을 각각 첨가한 후, 상기 용액 41.0 mL 및 25.9 mL를 첨가하였다. 용액을 10분 동안 초음파 처리하여 1 mg/mL 농도의 무색 투명한 용액을 수득하였다.
11.2.4 관리:
밤새 금식시킨 후, Balb/c 마우스(수컷 3마리 및 암컷 3마리)에 시험 화합물을 10 mg/kg의 투여 용량 및 10 mL/kg의 투여 부피로 경구 투여하였다.
11.2.5 데이터 수집:
마우스에게 투여 전후에 매일 체중을 측정하였고, 비정상적인 반응이 관찰되었다. 마우스에게 투여 4시간 후에 먹이를 주었다.
11.2.6 시험 결과:
체중을 저울로 칭량하여 시험 결과를 표 2.11에 나타냈다.
표 2.11: 마우스 체중 변화의 비교
Figure pct00177
실험 결론: 상기 데이터는 본 발명의 실시예의 화합물이 10 mg/kg의 용량에서 마우스에서 우수한 내성을 가짐을 나타낸다. 그러나, 실시예 59의 화합물을 투여한 마우스는 묽은 변, 혈변, 현저한 체중 감소 등을 나타내어, 이 화합물의 내성이 불량한 것을 나타낸다.
요약하면, 본 발명은 신규한 구조를 갖는 일련의 고활성 및 임의적 SHP2 키나제 억제제를 제공한다. 이들 억제제는 랫트와 마우스 모두에서 우수한 약동학적 특성을 나타내며, Miapaca 2 종양 보유 마우스 모델에서도 우수한 효능을 나타낸다. 이들 억제제는 종양 질환 치료를 위한 단일 약물 또는 복합 약물로 개발될 가능성이 크다.
III. (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민
1.1 실험 기기
1.1.1 물리적 및 화학적 시험 기기의 일부 매개변수
Figure pct00178
1.2 기기 및 액체 크로마토그래피 조건
1.2.1 기기 및 장치
Figure pct00179
1.2.2 크로마토그래피 조건
컬럼: Waters Xbridge C18 (4.6 mm *150 mm, 3.5 μm)
유속: 1 mL/분
컬럼 온도: 40℃
검출 파장: 275 nm
주입량: 5.0 μL
전개 시간: 30분
희석제: DMSO
이동상: A: 물(0.05% 트리플루오로아세트산); B: 아세토니트릴(0.05% 트리플루오로아세트산)
Figure pct00180
2. (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 다양한 결정 형태의 제조
2.1. (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 제조
5 g의 (S)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민 하이드로클로라이드를 75 mL의 NMP에 질소 분위기하에서 첨가하고, 온도를 20 내지 30℃로 조절하였다. 3.17 g의 NaHCO3을 첨가하고, 생성 용액을 10분 동안 교반하였다. 4.35 g의 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 및 5.2 g의 K2CO3을 첨가하고, 반응 용액을 질소로 30분 동안 발포하였다. 반응 용액을 85℃로 가온하고, 8시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각하고, 120 mL의 DCM 및 150 mL의 순수를 첨가하였다. 용액을 교반하고 2개의 층으로 분리하고, 수성 상을 120 mL의 DCM으로 1회 추출하였다. 유기층을 합하고 NMP를 제거하기 위해 순수(180 mL)로 5회 및 15% 염화나트륨 수용액(180 mL)으로 1회 세척하였다. 0.75 g의 활성탄을 DCM 층에 첨가한 후, 이를 1시간 동안 교반하고 여과하고, 필터 케이크를 30 mL의 THF로 헹구었다. 1 g의 머캅토 실리카겔을 여액에 첨가한 후, 3시간 동안 교반하고 여과하고, 필터 케이크를 30 mL의 THF로 헹구었다. 여액을 농축건조하여 9 g의 황색 유성 고체를 수득하였다. 30 mL의 EA/MTBE (1/1)를 첨가하고, 용액을 50℃로 가열하고 0.5시간 동안 펄프화하였다. 용액을 20℃로 자연 냉각하고 4시간 동안 교반한 후, 여과하였다. 필터 케이크를 MTBE로 헹구고 진공하에 건조시켜 3.6 g의 연황색 고체를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라, 이는 표 6에 제시된 XRPD 데이터, 도 12에 제시된 XRPD 패턴, 도 13에 제시된 DSC 스펙트럼, 도 14에 제시된 TGA 스펙트럼을 가졌다.
2.2. (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B의 제조
약 20 mg의 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A를 칭량하고 0.6 mL의 2-메틸-테트라하이드로퓨란에 70℃에서 가열하에 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 이 용액을 빠르게 2℃ 조건에 넣고 12시간 동안 교반하여 고체를 침전시켰다. 혼합물을 고속으로 원심분리하고, 상청액을 제거하고, 고체를 40℃에서 진공건조하여 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라, 이는 표 7에 제시된 XRPD 데이터, 도 15에 제시된 XRPD 패턴 및 도 16에 제시된 DSC 스펙트럼을 가졌다.
2.3. (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C의 제조
약 20 mg의 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A를 2 mL 유리 플라스크에 넣고 교반하면서 실온에서 200 μL의 NMP에 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 0.6 mL의 이소프로필에터를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하여 고체를 침전시켰다. 혼합물을 고속으로 원심분리하고, 상청액을 제거하고, 고체를 40℃에서 진공건조하여 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 C를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라, 이는 표 8에 제시된 XRPD 데이터, 도 17에 제시된 XRPD 패턴, 도 18에 제시된 DSC 스펙트럼을 가졌다.
3. (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 다양한 결정 형태의 스크리닝 및 안정한 결정 형태의 판정
3.1 실험 목적:
목적은 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민 다형성 스크리닝의 안정한 결정 형태를 찾는 것이다.
3.2 실험 방법 및 결과
(1) 슬러리의 변환 시험
약 20 mg의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A를 2 mL 유리 플라스크에 칭량한 후, 관련 유기 용매를 각각 10 내지 200 μL씩 첨가하고, 샘플을 50℃에서 4일 동안 균일하게 진탕시켰다. 샘플이 투명한 용액인 경우, 용액을 실온에 놓고 교반한다. 현탁액을 고속으로 원심분리하고, 상청액을 제거하고, 고체를 진공하에 40℃에서 건조하였다. 생성된 고체의 XRPD, DSC 및 TGA를 측정하고 비교하였다. 실험 결과를 표 3.1에 나타냈다.
[표 3.1]
슬러리 변환 시험 결과
Figure pct00181
상기 결과는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A가 상기 용매에서 펄프화하는 동안 결정 형태 변형을 겪지 않았으므로 결정 형태 A는 안정하다.
(2) 냉각 방법 및 휘발 방법 시험
일정량의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민을 2 mL 유리 플라스크에 칭량하고 가열하에 일부 우수 용매에 각각 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 투명한 용액을 냉각시키거나, 역용매를 투명한 용액에 넣고 교반하여 고체 침전이 일어나는지 확인하였다. 고체가 있는 경우, 용액을 고속으로 원심분리하고, 상청액을 제거하고 고체를 40℃에서 진공건조한다. 고체가 없으면 용액을 실온에서 열어두고 용매를 증발시켰다. 생성된 고체의 XRPD, DSC 및 TGA를 측정하고 비교하였다. 실험 결과를 표 3.2에 나타냈다.
[표 3.2]
냉각 방법 및 휘발 방법 시험
Figure pct00182
상기 결과는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 B가 2-Me-THF를 용매로 사용하는 급속 냉각 방법으로 수득될 수 있음을 나타낸다. MeOH, DCM, THF 또는 88% 아세톤을 용매로 사용하는 급속 냉각 방법에 의해서는 고체가 침전되지 않았고 휘발 후에도 여전히 결정 형태 A가 수득되었다.
(3) 용매 결정화법 시험
일정량의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민을 2 mL 유리 플라스크에 칭량하고 일부 용매(우수 용매로서)에 각각 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 일부 용매(역용매로서)를 각각 용액에 적가하고, 이를 교반하여 고체 침전이 있는지 확인하였다. 고체가 있는 경우, 용액을 고속으로 원심분리하고, 상청액을 제거한 다음 고체를 40℃에서 진공건조한다. 생성된 고체의 XRPD, DSC 및 TGA를 측정하고 비교하였다. 실험 결과를 표 3.3에 나타냈다.
[표 3.3]
용매 결정화법 시험
Figure pct00183
상기 결과는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A 및 C가 용매 제거 결정화 스크리닝에 의해 수득되었음을 나타낸다.
3.3 실험 결론:
(S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 3가지 결정 형태, 즉 결정 형태 A, B 및 C가 결정화 용매 및 결정화 방법을 변경하여 펄프화에 의해 수득되었다. 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 상이한 결정 형태의 DSC 스펙트럼을 비교함으로써, 결정 형태 A가 열역학적 안정성이 더 우수하고, 무수물임을 알 수 있다.
4. 고체 안정성 실험
4.1 실험 목적:
고온(60℃), 실온/고습(92.5% RH) 및 고온/고습(50℃ 및 75% RH)의 조건하에 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 물리화학적 안정성을 조사하여 화합물의 저장에 대한 기초를 제공하였다.
4.2 실험 계획:
고온(60℃), 실온/고습(92.5% RH) 및 고온/고습(50℃ 및 75% RH)의 조건하에 약 2 mg의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A를 5, 10, 20 및 30일 동안 조사하였다. 함량은 외부 표준 방법을 사용하여 HPLC로 측정하였다. 관련 물질 변화는 크로마토그래피 피크 면적 정규화 방법에 의해 계산하였다.
4.3 실험 결과: 안정성 결과를 표 3.4에 나타냈다.
[표 3.4]
고체 안정성 결과
Figure pct00184
4.4 실험 결론:
상기 데이터는 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A가 고온(60℃), 실온/고습(92.5% RH) 및 고온/고습(50℃ 및 75% RH)) 조건하에 안정적이고 불순물 증가는 0.15% 미만임을 나타낸다.
5. 흡습성 실험
5.1 실험 목적
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 흡습성을 상이한 상대 습도 조건하에 조사하여 화합물의 결정 형태 스크리닝 및 저장에 대한 기초를 제공하였다.
5.2 실험 계획:
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민을 상대 습도가 다른 포화 수증기에 넣어 화합물과 수증기 사이의 동적 평형을 달성하고 평형 후, 화합물의 흡습 중량 증가 백분율을 계산하였다.
5.3 실험 결과:
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민은 RH 80% 조건하에서 약 0.544%의 흡습 중량 증가를 보였고 약간의 흡습성을 가졌다. 0 내지 95% 상대 습도 조건하에서 가습 및 제습의 한 사이클 후, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 XRPD 패턴은 변하지 않았는데, 즉, 결정 형태가 변형되지 않았다.
6. 상이한 매질에서의 용해도 실험
6.1 실험 목적
매질, 예컨대, pH 1 내지 8을 갖는 완충액(pH 1을 갖는 염산 완충액, pH 3 및 4를 갖는 프탈산 완충액, 및 pH 5, 6, 7 및 8을 갖는 포스페이트 완충액), 물, 공복 상태 모의 위액(FaSGF), 공복 상태 모의 장액(FaSSIF) 및 섭식 상태 모의 장액(FeSSIF) 중 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 용해도를 비교하여 약물 가능성(druggability)을 평가하는 기초를 제공하였다.
6.2 실험 계획:
약 2 mg의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민화합물의 결정 형태 A를 각각 2시간 동안 상이한 매질에 현탁시켰다. 37℃에서 화합물의 열역학적 용해도를 외부 표준 방법을 사용하는 HPLC에 의해 측정하였다.
6.3 실험 결과를 표 3.5에 나타냈다.
[표 3.5]
다양한 매질에서의 용해도 실험
Figure pct00185
6.4 실험 결론:
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 용해도를 비교함으로써, 상이한 매질에서 결정 형태 A가 산성 조건하에서 더 나은 용해도를 가짐을 알 수 있다.
7. 결정 변환 조사 실험
7.1 실험 목적:
목적은 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A가 압력 결정 변형 및 분쇄 결정 변형 실험에 의해 결정 변형을 겪을 것인지를 조사하는 것이다.
7.2 실험 계획:
일정량의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민을 칭량하고, 타정기로 타정하였다. 정제를 분말로 으깨고 XRPD로 특성규명하였다.
일정량의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민을 칭량하고, 막자 사발로 15분 동안 격렬하게 분쇄하고, XRPD로 특성규명하였다.
7.3 실험 결론:
XRPD 패턴을 비교함으로써, 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A가 정제화 및 분쇄 후에 결정 변형을 겪지 않았으므로 결정 형태 A가 안정함을 알 수 있다.
8. 랫트의 약동학 연구
8.1 실험 목적:
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A의 랫트의 몸(혈장)에 단일 경구 투여 후의 약동학적 거동을 연구하고, 경구 투여에 대한 생체 이용률을 계산하였다.
8.2 실험 기기 및 시약:
8.2.1 도구:
Figure pct00186
8.2.2 시약:
Figure pct00187
8.3 실험 동물:
Figure pct00188
8.4 시험 화합물:
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A를 자체 제조하였다.
8.5 실험 계획:
화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A를 0.5% HPMC K4M을 함유하는 수용액에 균일하게 현탁시킨 후, 10 mg/kg의 용량으로 랫트에 3회 위내 투여하였다.
8.6 실험 결과:
[표 3.6]
랫트의 약동학 실험 결과
Figure pct00189
8.7 실험 결론:
본 발명의 화합물 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태 A가 10 mg/kg의 용량에서 우수한 대사 특성을 나타냄을 상기 표에 나타낸 랫트에서의 약동학 실험의 결과로부터 알 수 있다.
IV. (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태에 대한 연구
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태의 대규모 생산(실시예 53)
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민과 THF를 반응기에 투입한 후, N-플루오로비스벤젠설폰아미드(NFSI)를 투입하고 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 2 L의 0.5 mol/L의 염산 용액을 첨가하고, 반응 용액을 교반하에 2 L의 EA로 추출하여 2개의 층으로 분리하였다. 유기층에 3 L의 0.25 mol/L의 염산 용액을 첨가하고, 이를 교반하에 11 L의 EA로 추출하여 2개의 층으로 분리하였다. 수성층을 합하고 유기층을 버렸다. 수성층을 1.5 L*2의 EA 로 추출하여 불순물을 제거한 후, 2.65 L의 THF 를 첨가하고 교반하였다. 고체 나트륨 카보네이트를 첨가하여 Ph를 9 내지 10으로 조정하고, 용액을 두 단계로 분리하였다. 수성층을 1.5 L의 2-메틸테트라하이드로퓨란으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 건조하고, 여과하고, 농축하여 73.4 g의 황갈색 고체를 수득하였다. 고체를 테트라하이드로퓨란에 녹여 투명한 용액으로 만들고, 생성된 생성물을 EA:PE=20%, 60%, 0.005% 트리에틸아민을 함유하는 EA, 및 메탄올(5% 트리에틸아민 함유):DCM=5%로 차례로 세척하였다. 완충액을 감압하에 농축하여 41.1g의 황색 고체를 수득하여 나중에 사용하였다.
1.1 실험 기기
1.1.1 물리적 및 화학적 시험 기기의 일부 매개변수
Figure pct00190
1.2 기기 및 액체 크로마토그래피 조건
1.2.1 기기 및 장치
Figure pct00191
1.2.2 크로마토그래피 조건
컬럼: ZORBAX (SB-C8, 3.5 μm, 4.6* 75 mm)
유속: 1 mL/분
컬럼 온도: 40℃
검출 파장: 275 nm
주입량: 5.0 μL
전개 시간: 13분
희석제: ACN-물(v/v, 1:1)
이동상: A: 물(0.05% 트리플루오로아세트산); B: 아세토니트릴(0.05% 트리플루오로아세트산)
Figure pct00192
1. (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 다양한 결정 형태의 제조
1.1 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 A의 제조
10 mg의 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태 2 mL 유리 플라스크에서 칭량한 후, 3-펜탄온 100 μL를 첨가하고, 실온에서 24시간 교반하였다. 시스템은 투명하였고, 이어서 교반하는 동안 고체가 침전되었다. 혼합물을 원심분리하여 상청액을 제거하고, 나머지 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조시켜 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 A를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라 XRPD 데이터는 표 1에 제시되고, DSC 스펙트럼은 도 1에 제시되고, TGA 스펙트럼은 도 2에 제시된다.
1.2 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B의 제조
20 mg의 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태를 2 mL 유리 플라스크에서 칭량하고 실온에서 200 μL의 아세토니트릴에 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 400 μL의 H2O를 실온에서 시스템에 천천히 첨가하였다. H2O를 교반하면서 첨가하였고, 곧 고체가 침전되었다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 원심분리하여 상청액을 제거하고, 나머지 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조시켜 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라 XRPD 데이터는 표 2에 제시되고, DSC 스펙트럼은 도 4에 제시되고, TGA 스펙트럼은 도 5에 제시된다.
1.3 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3의 결정 형태 C의 제조 -디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민
20 mg의 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태를 2 mL 유리 플라스크에서 칭량하고, 실온에서 디클로로메탄 50 μL에 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 실온에서 24시간 동안 교반한 결과 고체가 침전되었다. 혼합물을 빠르게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 나머지 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조시켜 (S)-1'-(6-아미노-5-((S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 C를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라 XRPD 데이터는 표 3에 제시되고, DSC 스펙트럼은 도 6에 제시되고, TGA 스펙트럼은 도 7에 제시된다.
1.4 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 D의 제조
20 mg의 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태를 2 mL 유리 플라스크에 칭량하고 실온에서 1,4-디옥산 50 μL에 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 실온에서 24시간 동안 교반한 결과 고체가 침전되었다. 혼합물을 빠르게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 나머지 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조시켜 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 D를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라 XRPD 데이터는 표 4에 제시되고, DSC 스펙트럼은 도 8에 제시되고, TGA 스펙트럼은 도 9에 제시된다.
1.5 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 E의 제조
20 mg의 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태를 2 mL 유리 플라스크에 칭량하고 실온에서 100 μL의 DMF에 용해시켜 투명한 용액이 되도록 하였다. 400 μL의 H2O를 실온에서 시스템에 천천히 첨가하였다. H2O를 교반하면서 첨가하였고, 곧 고체가 침전되었다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 원심분리하여 상청액을 제거하고, 나머지 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조시켜 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 E를 수득하였다. 검출 및 분석에 따라 XRPD 데이터는 표 5에 제시되고, DSC 스펙트럼은 도 10에 제시되고, TGA 스펙트럼은 도 11에 제시된다.
2. 고체 안정성 실험
2.1 실험 목적:
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태, 결정 형태 A 및 결정 형태 B의 물리화학적 안정성을 광 조건하에서 조사하여 화합물의 결정 형태 스크리닝 및 저장에 대한 기초를 제공하였다.
2.2 실험 계획:
약 2 mg의 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태, 결정 형태 A 및 결정 형태 B를 라이트 박스(light box)(5000 lx ±500 lx)에 각각 넣어 5 일 및 10 일 동안 조사하였다. 함량은 외부 표준 방법을 사용하여 HPLC로 측정하였다. 관련 물질 변화는 크로마토그래피 피크 면적 정규화 방법에 의해 계산하였다.
2.3 실험 결과:
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 다양한 결정 형태의 물리화학적 안정성 결과를 표 4.1에 나타냈다.
[표 4.1]
다양한 결정 형태의 물리화학적 안정성 결과
Figure pct00193
상기 데이터는 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 무정형 형태의 10일 총 불순물 증가가 광 조건하에서 19.34%이고, (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 A 및 결정 형태 B의 10일 총 불순물 증가가 광 조건하에서 2% 미만임을 나타낸다.
2.4 실험 결론:
광 조건하에서의 안정성은 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민을 결정 형태로을 제조함으로써 개선될 수 있다.
3. 흡습성 실험
3.1 실험 목적
화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B의 흡습성을 상이한 상대 습도 조건하에서 조사하여 화합물의 결정 형태 스크리닝 및 저장에 대한 기초를 제공하였다.
3.2 실험 계획:
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민을 상대 습도가 상이한 포화 수증기에 넣어 화합물과 수증기 사이의 동적 평형을 달성하고 평형 후, 화합물의 흡습 중량 증가 백분율을 계산하였다.
3.3 실험 결과:
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민은 RH 80% 조건하에서 약 1.639%의 흡습 중량 증가를 보였고 약간의 흡습성을 가졌다. 0 내지 95% 상대 습도 조건하에서 가습 및 제습의 한 사이클 후, (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B의 XRPD 패턴은 변하지 않았는데, 즉, 결정 형태가 변형되지 않았다.
4. 상이한 매질에서의 용해도 실험
4.1 실험 목적
매질, 예컨대, 물, 공복 상태 모의 위액(FaSGF), 공복 상태 모의 장액(FaSSIF) 및 섭식 상태 모의 장액(FeSSIF) 중 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B의 용해도를 비교하여 약물 가능성을 평가하기 위한 기초를 제공하였다.
4.2 실험 계획:
약 2 mg의 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 결정 형태 B를 각각 24시간 동안 상이한 매질에 현탁시켰다. 37℃에서 화합물의 열역학적 용해도는 외부 표준 방법을 사용하는 HPLC에 의해 측정하였다.
4.3 실험 결과를 표 4.2에 나타냈다.
[표 4.2]
다양한 매질에서의 용해도 실험
Figure pct00194
5. 다형성 스크리닝 실험 및 안정한 결정 형태의 결정
5.1 실험 목적:
목적은 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 안정한 결정 형태를 다형성 스크리닝에 의해 찾는 것이다.
5.2 실험 계획:
특정 용해도를 갖는 유기 용매 및 물을 선택하여 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민을 용매 시스템에 현탁시키고, 혼합물을 실온에서 1주일 동안 교반하고 슬러리화한 후, 원심분리하였다. 상청액을 버리고, 고체를 40℃에서 밤새 진공(-0.1 Mpa)하에 건조하였다. 고체의 XRPD, DSC 및 TGA를 측정하고 비교하였다.
5.3 실험 결과:
(S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 5개의 결정 형태, 즉, 결정 형태 A, B, C, D 및 E를 결정화 용매 및 결정화 방법을 변경하여 펄프화에 의해 수득하였다. (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민의 상이한 결정 형태의 DSC 스펙트럼을 비교함으로써, 5개의 결정 형태 중 결정 형태 B가 열역학적 안정성이 가장 우수함을 알 수 있다.

Claims (23)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물의 결정 형태:
    Figure pct00195

    상기 식에서,
    R1은 수소, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고;
    R2는 수소, 아미노 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3은 수소, 할로겐, 아미노, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고;
    R4는 수소, 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C2-6 알켄일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C2-6 알켄일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되거나,
    R5 및 R6은 결합하여 C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 또는 5 내지 12 원 헤테로아릴를 형성하고, 이때, 상기 C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴은 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, 옥소, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환된다.
  2. 제1항에 있어서,
    R1이 수소, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C1-6 하이드록시알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴이 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 하이드록시, 옥소, C1-6 알킬 및 C3-8 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, R1이 보다 바람직하게는 수소, 할로겐, C1-3 알킬, C1-3 하이드록시알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-3 알킬, C1-3 하이드록시알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴이 각각 임의적으로 중수소, 할로겐, 하이드록시, 옥소, C1-3 알킬 및 C3-6 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, R1이 더욱 바람직하게는 수소, 불소, 브롬, 메틸, 하이드록시에틸,
    Figure pct00196
    ,
    Figure pct00197
    ,
    Figure pct00198
    ,
    Figure pct00199
    ,
    Figure pct00200
    및
    Figure pct00201
    로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  3. 제1항에 있어서,
    R2가 수소, 아미노 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 수소, 아미노 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 수소, 아미노, 메틸, 에틸 및 프로필로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  4. 제1항에 있어서,
    R3가 수소, 할로겐, 아미노, C1-6 알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C3-8 사이클로알킬 및 3 내지 12 원 헤테로사이클릴이 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 옥소로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, R3이 바람직하게는 수소, 할로겐, 아미노, C1-3 알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-3 알킬, C3-6 사이클로알킬 및 3 내지 6 원 헤테로사이클릴이 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 옥소로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, R3이 더욱 바람직하게는 아미노, 염소, 사이클로프로필, 아자사이클로부틸, 테트라하이드로피롤일, 모르폴리닐,
    Figure pct00202
    ,
    Figure pct00203
    및
    Figure pct00204
    로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  5. 제1항에 있어서,
    R4가 수소, 할로겐, C1-6 알킬 및 C3-8 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 수소, 할로겐, C1-3 알킬 및 C3-6 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 추가로 바람직하게는 수소, 불소, 염소, 메틸 및 사이클로프로필로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  6. 제1항에 있어서,
    R5 및 R6이 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-6 알켄일 및 C3-8 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-6 알켄일 및 C3-8 사이클로알킬이 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, 바람직하게는, R5 및 R6이 각각 독립적으로 수소, C1-3 알킬, C2-4 알켄일 및 C3-6 사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때, 상기 C1-3 알킬, C2-4 알켄일 및 C3-6 사이클로알킬이 각각 임의적으로 수소, 중수소, 할로겐 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, 더욱 바람직하게는, R5 및 R6이 각각 독립적으로 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, 비닐, 사이클로프로필,
    Figure pct00205
    및
    Figure pct00206
    로 이루어진 군으로부터 선택되거나,
    R5 및 R6이 결합하여 C3-8 사이클로알킬, C6-12 아릴 또는 5 내지 12 원 헤테로아릴을 형성하고, 이때, 상기 C3-8 사이클로알킬, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴이 각각 임의적으로 수소, 중수소, 할로겐 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, 바람직하게는, R5 및 R6이 결합하여 C3-6 사이클로알킬, 페닐 또는 5 또는 6 원 헤테로아릴을 형성하고, 이때, 상기 C3-6 사이클로알킬, 페닐 및 5 또는 6 원 헤테로아릴이 각각 임의적으로 중수소, 할로겐 및 C1-3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기(들)로 추가 치환되고, 더욱 바람직하게는, R5 및 R6이 결합하여
    Figure pct00207
    ,
    Figure pct00208
    ,
    Figure pct00209
    ,
    Figure pct00210
    ,
    Figure pct00211
    ,
    Figure pct00212
    또는
    Figure pct00213
    을 형성하는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  7. 제1항에 있어서,
    화합물의 구조가 하기 화학식 (II)에 제시된 바와 같은, 결정 형태:
    Figure pct00214

    상기 식에서,
    고리 A는 C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-10 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Ra는 수소, 중수소, 할로겐, 아미노, 니트로, 하이드록시, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 중수소화된 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알콕시, C2-6 알켄일, C2-6 알킨일, C3-8 사이클로알킬, 3 내지 12 원 헤테로사이클릴, C6-12 아릴 및 5 내지 12 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    x는 0, 1, 2 또는 3이다.
  8. 제1항에 있어서,
    고리 A가 페닐인 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  9. 제1항에 있어서,
    화합물의 구조가 하기와 같은, 결정 형태:
    Figure pct00215

    Figure pct00216
  10. 제1항에 있어서,
    화합물이 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민 및 (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  11. 제10항에 있어서,
    화합물 (S)-1'-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-3-플루오로피라진-2-일)-1,3-디하이드로스피로[인덴-2,4'-피페리딘]-1-아민이 결정 형태 A, B, C, D 및 E를 포함하는 것을 특징으로 하며, 이때,
    결정 형태 A인 경우, 이의 X선 분말 회절 패턴이 9.0°, 15.2°, 20.2° 및 23.0°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 바람직하게는 9.7°, 12.3°, 15.4°, 19.8°, 23.5° 및 27.1°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고, 보다 바람직하게는 4.5°, 13.7°, 14.6°, 16.8°, 18.1°, 21.5°, 27.7° 및 28.2°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고,
    보다 바람직하게는, 이의 DSC 스펙트럼이 실질적으로 도 1에 도시된 바와 같거나, 이의 TGA 스펙트럼이 실질적으로 도 2에 도시된 바와 같고;
    결정 형태 B인 경우, 이의 X선 분말 회절 패턴이 7.9°, 14.6° 및 16.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 바람직하게는 또한 18.1°, 19.2°, 20.2°, 24.7° 및 26.8°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 보다 바람직하게는 14.9°, 27.2°, 28.1° 및 30.5°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고, 더욱 바람직하게는 13.9°, 15.6°, 16.9° 및 19.8°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고, 가장 바람직하게는, 이의 XRPD 패턴은 실질적으로 도 3에 도시된 바와 같고,
    바람직하게는, 이의 DSC 스펙트럼이 실질적으로 도 4에 도시된 바와 같거나, 이의 TGA 스펙트럼이 실질적으로 도 5에 도시된 바와 같고;
    결정 형태 C인 경우, 이의 X선 분말 회절 패턴이 9.4°, 14.5° 및 20.3°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 바람직하게는 또한 22.2°, 22.7°, 22.9° 및 26.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 보다 바람직하게는 8.2°, 14.9°, 23.8°, 27.5°, 28.1°, 29.3°, 30.2° 및 31.7°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고, 더욱 바람직하게는 12.0°, 16.4°, 25.5°, 28.6°, 34.8° 및 35.4°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고,
    보다 바람직하게는, 이의 DSC 스펙트럼이 실질적으로 도 6에 도시된 바와 같거나, 이의 TGA 스펙트럼이 실질적으로 도 7에 도시된 바와 같고;
    결정 형태 D인 경우, 이의 X선 분말 회절 패턴이 5.1°, 13.4° 및 18.3°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 바람직하게는 또한 18.0°, 19.9°, 20.7° 및 22.6°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 보다 바람직하게는 13.7°, 16.8°, 17.7°, 19.0°, 22.3° 및 27.5°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고, 더욱 바람직하게는 16.1°, 22.9°, 24.9°, 25.5° 및 28.9°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고,
    보다 바람직하게는, 이의 DSC 스펙트럼이 실질적으로 도 8에 도시된 바와 같거나, 이의 TGA 스펙트럼이 실질적으로 도 9에 도시된 바와 같고;
    결정 형태 E인 경우, 이의 X선 분말 회절 패턴이 8.4°, 15.3° 및 18.3°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 바람직하게는 또한 20.7°, 22.5°, 26.7° 및 27.6°의 2θ에서의 회절 피크를 갖고, 보다 바람직하게는 13.5°, 14.6°, 15.8°, 16.0°, 16.9°, 19.2°, 20.4°, 24.0°, 24.4°, 25.5°, 28.2°, 28.9°, 31.8° 및 32.2°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고, 더욱 바람직하게는 5.2°, 9.5°, 10.4°, 17.2°, 17.7°, 19.5°, 20.0°, 26.3°, 28.7°, 30.5°, 31.0° 및 34.1°의 2θ에서의 회절 피크를 추가로 갖고,
    보다 바람직하게는, 이의 DSC 스펙트럼이 실질적으로 도 10에 도시된 바와 같거나, 이의 TGA 스펙트럼이 실질적으로 도 11에 도시된 바와 같은, 결정 형태.
  12. 제10항에 있어서,
    (S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-2-사이클로프로필-8-아자스피로[4.5]데크-2-엔-1-아민의 결정 형태가 결정 형태 A, 결정 형태 B 및 결정 형태 C를 포함하는 것을 특징으로 하며, 이때,
    결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴은 20.0±0.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖거나; 19.4±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 17.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 22.6±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 10.7±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 25.6±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 12.7±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 24.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 19.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 18.4±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2 내지 5, 또는 3 내지 5, 또는 3 내지 6, 또는 3 내지 8, 또는 5 내지 8, 또는 6 내지 8개를 포함하고; 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 6, 7 또는 8개를 포함하고;
    결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 20.2±0.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖거나; 22.2±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 12.2±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 25.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 21.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 18.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 17.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 20.0±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 28.6±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 5.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2 내지 5, 또는 3 내지 5, 또는 3 내지 6, 또는 3 내지 8, 또는 5 내지 8, 또는 6 내지 8개를 포함하고; 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 6, 7 또는 8개를 포함하고;
    결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 17.8±0.2°의 2θ에서의 회절 피크를 갖거나; 19.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 26.1±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 18.2±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 24.0±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 22.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 10.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 21.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 17.5±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 21.8±0.2°에서 회절 피크를 갖거나; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2 내지 5, 또는 3 내지 5, 또는 3 내지 6, 또는 3 내지 8, 또는 5 내지 8, 또는 6 내지 8개를 포함하고; 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 6, 7 또는 8개를 포함하는, 결정 형태.
  13. 제12항에 있어서,
    결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴이 적어도 20.0±0.2°, 19.4±0.2° 및 17.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2개를 포함하고, 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 3개를 포함하고; 임의적으로, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2° 및 24.5±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함할 수 있고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2, 3, 4 또는 5개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴이
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 25.6±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 12.7±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖고,
    결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴이 적어도 20.2±0.2°, 22.2±0.2° 및 12.2±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2개를 포함하고, 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 3개를 포함하고; 임의적으로, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2° 및 20.0±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함할 수 있고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2, 3, 4 또는 5개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴이
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 18.5±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 17.8±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 17.8±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖고,
    결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴이 적어도 17.8±0.2°, 19.8±0.2° 및 26.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2개를 포함하고, 보다 바람직하게는 상기 회절 피크 중 3개를 포함하고; 임의적으로, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2° 및 21.5±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함할 수 있고, 바람직하게는 상기 회절 피크 중 2, 3, 4 또는 5개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴이
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 22.8±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 10.5±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 10.5±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  14. 제12항에 있어서,
    결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴이 임의적으로 또한 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2°, 31.5±0.2°, 29.2±0.2°, 20.6±0.2° 및 21.4±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고; 더욱 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴이
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2° 및 18.4±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2° 및 31.5±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖고,
    결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴이 임의적으로 또한 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2°, 24.5±0.2°, 13.2±0.2°, 12.4±0.2° 및 29.2±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고; 더욱 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴이
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 5.1±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2° 및 14.3±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2° 및 24.5±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖고,
    결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴 임의적으로 또한 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2°, 22.3±0.2°, 24.3±0.2°, 14.5±0.2° 및 30.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고; 더욱 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴이
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 21.8±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2° 및 19.5±0.2°; 또는
    또는, 17.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2° 및 22.3±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  15. 제12항에 있어서,
    결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴이 20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2, 19.1±0.2°, 18.4±0.2°, 6.2±0.2°, 31.5±0.2°, 29.2±0.2°, 20.6±0.2° 및 21.4±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 4, 5, 6, 8 또는 10개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴이
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 22.6±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2° 및 10.7±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2° 및 19.1±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2° 및 19.1±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 19.1±0.2° 및 6.2±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2, 19.1±0.2° 및 6.2±0.2°; 또는
    20.0±0.2°, 19.4±0.2°, 17.1±0.2°, 22.6±0.2°, 10.7±0.2°, 25.6±0.2°, 12.7±0.2°, 24.5±0.2, 18.4±0.2° 및 6.2±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖고,
    결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴은 20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2°, 5.1±0.2°, 14.3±0.2°, 24.5±0.2°, 13.2±0.2°, 12.4±0.2° 및 29.2±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 4, 5, 6, 8 또는 10개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴이
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 25.1±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2° 및 21.5±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2° 및 28.6±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2° 및 28.6±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 5.1±0.2° 및 14.3±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 28.6±0.2° 및 14.3±0.2°; 또는
    20.2±0.2°, 22.2±0.2°, 12.2±0.2°, 25.1±0.2°, 21.5±0.2°, 18.5±0.2°, 17.8±0.2°, 20.0±0.2, 5.1±0.2° 및 14.3±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖고,
    결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴은 17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 17.5±0.2°, 21.8±0.2°, 19.5±0.2°, 22.3±0.2°, 24.3±0.2°, 14.5±0.2° 및 30.1±0.2°의 2θ에서의 하나 이상의 회절 피크를 포함하고; 바람직하게는 상기 회절 피크 중 임의의 4, 5, 6, 8 또는 10개를 포함하고;
    예컨대, 결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴이
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 18.2±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2° 및 24.0±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2° 및 17.5±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2° 및 17.5±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 17.5±0.2° 및 19.5±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 21.8±0.2° 및 19.5±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 17.5±0.2° 및 19.5±0.2°; 또는
    17.8±0.2°, 19.8±0.2°, 26.1±0.2°, 18.2±0.2°, 24.0±0.2°, 22.8±0.2°, 10.5±0.2°, 21.5±0.2, 21.8±0.2° 및 19.5±0.2°
    위치의 2θ에서의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  16. 제12항에 있어서,
    결정 형태 A의 X선 분말 회절 패턴이 도 12에 도시된 바와 같거나, 결정 형태가 도 13에 도시된 DSC 스펙트럼을 갖거나, 도 14에 도시된 TGA 스펙트럼을 갖고;
    결정 형태 B의 X선 분말 회절 패턴이 도 15에 도시된 바와 같거나, 결정 형태가 도 16에 도시된 DSC 스펙트럼을 갖고;
    결정 형태 C의 X선 분말 회절 패턴이 도 17에 도시된 바와 같거나, 결정 형태가 도 18에 도시된 DSC 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    결정 형태의 X선 분말 회절 패턴에서, 상위 10개의 피크 강도를 갖는 회절 피크 위치와 참조 회절 피크 위치 사이의 2θ오차가 ±0.2° 내지 ±0.5°, 바람직하게는 ±0.2° 내지 ±0.3°, 가장 바람직하게는 ±0.2°인 것을 특징으로 하는, 결정 형태.
  18. 1) 적당량의 자유 염기를 칭량하여 저조 용매(poor solvent)에 현탁하여 현탁액을 수득하는 단계로서 상기 현탁액 밀도가 바람직하게는 50 내지 200 mg/mL인, 단계;
    2) 단계 1)에서 수득된 현탁액을 0 내지 40℃에서 1 내지 10일 동안 진탕시키는 단계; 및
    3) 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계
    를 구체적으로 포함하는, 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 결정 형태의 제조 방법으로서,
    단계 1)의 저조 용매가 아세톤, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온 및 3-펜탄온; 바람직하게는 3-펜탄온, 아세토니트릴, 디클로로메탄 및 1,4-디옥산으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  19. 1) 적당량의 자유 염기를 칭량하고, 우수 용매(good solvent)에 용해시키는 단계
    2) 단계 1)에서 수득된 용액에 역용매(anti-solvent)를 첨가하고, 고체가 침전될 때까지 교반하는 단계; 및
    3) 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 40℃의 진공건조 오븐에서 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계
    를 구체적으로 포함하는 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 결정 형태의 제조 방법으로서,
    단계 1)의 우수 용매는 메탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온 및 3-펜탄온으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드 및 아세토니트릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    단계 2)의 역용매가 헵탄, 물, 메틸 tert-부틸 에터, 톨루엔 및 이소프로필 에터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 물인, 제조 방법.
  20. 1) 적당량의 자유 염기를 칭량하고, 저조 용매에 현탁시키는 단계;
    2) 단계 1)에서 수득된 현탁액을 일정 온도에서 일정 시간 동안 진탕시키는 단계; 및
    3) 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계
    [이때,
    상기 저조 용매는 아세톤, 에틸아세테이트, 이소프로필아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜타논, 메틸 tert -부틸 에터 및 물, 바람직하게는 군으로부터 선택되는 하나 이상 아세톤, 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 톨루엔, 이소프로판올, 2-부탄온, 3-펜탄온, 메틸 tert-부틸 에터 및 물로 이루어진 군으로부터 선택됨]
    를 구체적으로 포함하거나,
    1) 적당량의 자유 염기를 칭량하고, 이를 우수 용매에 용해시키는 단계;
    2) 단계 1)에서 수득된 용액에 일정한 온도에서 역용매를 첨가하고, 고체가 침전될 때까지 교반하는 단계; 및
    3) 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계
    [이때,
    상기 우수 용매는 메탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜탄온 및 N-메틸피롤리돈, 바람직하게는 N-메틸피롤리돈으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    상기 역용매는 헵탄, 물, 메틸 tert -부틸 에터, 톨루엔 및 이소프로필 에터로 이루어진 군으로부터 선택됨]
    를 구체적으로 포함하거나,
    1) 적당량의 자유 염기를 칭량하고, 가열하에 이를 우수 용매에 용해시키는 단계;
    2) 상기 단계 1)에서 수득된 용액을 저온에 신속하게 두고, 고체가 침전될 때까지 교반하는 단계, 단계; 및
    3) 상기 단계 2)에서 수득된 현탁액을 신속하게 원심분리하여 상청액을 제거하고, 잔류하는 고체를 일정한 중량이 될 때까지 건조하여 표적 생성물을 수득하는 단계
    [이때,
    상기 우수 용매는 메탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 아세토니트릴, 에탄올, 88% 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 2-메틸테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 벤젠, 톨루엔, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, n-프로판올, tert -부탄올, 2-부탄온, 3-펜탄온 및 N-메틸피롤리돈으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 2-메틸테트라하이드로퓨란임]
    를 구체적으로 포함하는 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 결정 형태의 제조 방법.
  21. 치료 효과량의 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 결정 형태, 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체(들), 희석제(들) 또는 부형제(들)를 포함하는 약학 조성물.
  22. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 결정 형태 또는 제21항에 따른 약학 조성물의, SHP-2 억제제 약제의 제조에서의 용도.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 용도가 누난 증후군, 레오파드 피부 증후군, 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 식도암, 두경부 종양, 유방암, 폐암 및 결장암; 바람직하게는 비소세포 폐암, 식도암 또는 두경부 종양의 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제의 제조에서의 용도인, 용도.
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