CN111544498A - 当归芍药散的新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了当归芍药散的新用途，可制备用于干预和治疗代谢综合征的药物，也可作为吡格列酮替代药物，通过下调氧化三甲胺(TMAO)或其中间体三甲胺(TMA)的代谢来起到降糖、降脂和保护肝脏的作用。

Description

当归芍药散的新用途
技术领域
本发明涉及中药技术领域，尤其是涉及当归芍药散的新用途。
背景技术
代谢综合征(MS)是一种涉及多种代谢异常、与心血管病紧密联系的疾病状态，其中以肥胖(超重)、血压、血糖和血脂异常四项最为突出，且代谢综合征是未来发生2型糖尿病和动脉粥样硬化性心血管病的重要危险因素。此外，代谢综合征还具有一定的遗传效应。
截止目前，尚无根治代谢综合征的治疗方法，一般多采用控制饮食，服用降糖、降压、降脂的药物进行干预，但是长期大量服用这些药物会产生一定的副作用和不良反应。另外，临床研究表明，高果糖的大量摄入会诱导代谢综合征的发生，且伴随非酒精性脂肪肝及单纯性脂肪肝炎的产生，肝脏的病变已成为代谢综合征在肝脏组织的病理特征。
当归芍药散是主治妇人妊娠或经期腹痛的经典方剂，由当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻六味药组成，出自《金匮要略》“妇人妊娠病证篇”和“妇人杂病脉证并治篇”。方中重用芍药以缓急止痛、柔肝养血,当归助芍药养血行血,川芎行血、去滞开郁,三药皆可调肝；茯苓、白术除湿健脾、固胎,大量泽泻渗利湿浊,三药共以健脾。全方调肝养血,健脾利湿,体现了血水同治、肝脾共调之特点。此复方还具有抗氧化、抗炎、清除自由基、调节血脂代谢等药理活性作用。临床研究证实，该复方能降低血液中TC、TG及LDL-C等危险因子，同时能显著增加有益因子HDL-C的含量，具有调节血脂代谢的作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供当归芍药散的新用途。
本发明采用的技术方案是：
当归芍药散在制备用于干预和治疗代谢综合征的药物方面的应用。
优选的，上述当归芍药散的应用，所述代谢综合征为糖尿病、脂肪肝或高尿酸血症。
当归芍药散作为吡格列酮替代药物的应用。
优选的，上述当归芍药散的应用，所述当归芍药散是由下述方法制备得到的：取当归、白芍、茯苓、白术、泽泻和川芎混匀粉碎，加甲醇浸泡加热回流提取并过滤，上清液减压浓缩得浸膏，真空干燥得当归芍药散醇提取物的粉末。
优选的，上述当归芍药散的应用，所述当归、白芍、茯苓、白术、泽泻和川芎的重量比为52：172：69：69：86：52。
优选的，上述当归芍药散的应用，所述当归芍药散醇提取物为当归芍药散50％醇提取物。
本发明的有益效果是：
所述当归芍药散的新用途，可制备用于干预和治疗代谢综合征的药物，也可作为吡格列酮替代药物，通过下调氧化三甲胺(TMAO)或其中间体三甲胺(TMA)的代谢来起到降糖、降脂和保护肝脏的作用。
附图说明
图1当归芍药散50％醇提取物样品总离子流图和结构图；
图2给药干预8周各组大鼠肝脏病理切片形态图(100X)；
图3肝脏差异代谢物差异箱线图，其中，上图为阳性药组，下图为当归芍药散50％醇提取物给药组；
图4粪便差异代谢物差异箱线图，其中，上图为阳性药组，下图为当归芍药散50％醇提取物给药组；
图5组间菌群物种差异分析对比图，其中，上图为空白组和模型组，中间图为模型组和阳性药组，下图为模型组和当归芍药散50％醇提取物给药组。
具体实施方式
为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明：
实施例1
当归芍药散50％醇提取物的制备
取当归52g，白芍172g，茯苓69g，白术69g，泽泻86g，川芎52g混匀粉碎，加10倍量50％甲醇浸泡30分钟，加热回流提取2小时，过滤，滤渣加入8倍量50％甲醇，加热回流提取2小时，滤液与前一次滤液合并，上清液减压浓缩得浸膏，置于40℃真空干燥器，得当归芍药散50％醇提取物的粉末。
实施例2
当归芍药散50％醇提取物的检测
取实施例1所述粉末2mg，加入1mL60％甲醇溶解，涡旋5min，超声溶解30min。过SPE小柱，过柱后的液体离心取上清，并稀释一倍，装入干净的进样小瓶待测。
采用0.1％甲酸水(A相)-甲醇(B相)的洗脱系统，进样体积2μL，在Waters ACQUITYUPLC BEH C18色谱柱进行梯度洗脱(0-3min,95％-86％A；3-16min,86％-44％A；16-23min,44％-20％A；23-25min,20％-5％A)。
用甲酸钠溶液为校正质量轴，用亮氨酸脑啡肽为内标校正质量精度，电喷雾离子化源采用正负离子模式(正离子模式3KV，负离子模式-2.5KV)，Lock Spray TM流速5μL/min，centroid模式进行质谱数据采集。
实施例3
1当归芍药散对代谢综合征大鼠体重和空腹血糖(FBG)的影响
将40只SPF级雄性健康Wistar大鼠随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组(普通水，普通饲料，适量溶剂)，模型组(15％果糖，普通饲料，适量溶剂)，阳性药(吡格列酮)组(15％果糖，普通饲料，4mg/kg)，当归芍药散50％醇提物给药组(15％果糖，普通饲料，1.8g/kg)，饲养周期8周，每周记录大鼠的体重和空腹血糖。大鼠腹主动脉取血，标本采集，组织冻存。
2当归芍药散对代谢综合征大鼠生化指标的影响
按照试剂盒严格操作，测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、尿酸(UA)和谷丙转氨酶(ALT)的相对含量。
按照试剂盒严格操作，测定肝脏组织中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)和糖原(Glycogen)的相对含量。
3当归芍药散对代谢综合征大鼠肝组织病理形态学的影响
取大鼠肝脏做HE染色石蜡切片，在显微镜下观察。
4当归芍药散对代谢综合征大鼠代谢标志物的影响
取大鼠新鲜肝脏组织(-100mg)，用甲醇和水(2:1)提取，吸取上清600μL除去溶剂，加入600μL含0.01％TSP-d4的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)，取上清550μL转移至核磁管中。
取大鼠冻干粪便(-50mg)，加入1mL含0.01％TSP-d4的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)，取上清550μL转移至核磁管中。
5当归芍药散对代谢综合征大鼠菌群的影响
利用16S rDNA测序得到raw reads，对低质量reads进行过滤，组装和再过滤，利用最有效数据聚类成OUT。获得OTU后，依次进行物种注释、α多样性分析、β多样性分析等群落功能预测。通过Lefse分析组间菌群差异，可以找出各组间特异的主要菌群。
结果
1当归芍药散50％醇提取物的结构鉴定(实施例2)
如图1所示，通过UPLC-Q/TOF-MS液质联用仪进行分析，采用全信息串联质谱(MSE)扫描模式，共鉴定出当归芍药散中化合物23个：没食子酸、阿魏酸、芍药苷、芍药内酯苷、没食子酰芍药苷、芍药新苷、牡丹皮苷I、isomaltopaeoniflorin、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、3-丁基苯酞、Z-藁本内酯、E-藁本内酯、川芎内酯A、白术内酯I、Riligustilide、TokinolideB、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇C、23-乙酰泽泻醇B、环六(异)亮氨酸、环七(异)亮氨酸、腺苷。
2当归芍药散对代谢综合征大鼠体重和空腹血糖(FBG)的影响
应用GraphPad Prism 6.0.4软件对数据进行分析，与空白对照组相比，模型组大鼠的体重和空腹血糖明显升高，阳性药组和当归芍药散50％醇提物给药组体重和空腹血糖有一定的下降趋势，表明当归芍药散具有一定程度的降血糖作用(表1)。
表1给药干预8周各组大鼠体重及空腹血糖(FBG)统计表
Figure BDA0002500260570000061
注：空白组与模型组之间比较采用*p<0.05，**p<0.01和***p<0.001表示，其它药物干预组与模型组之间采用#p<0.05，##p<0.01和###p<0.001表示。
3当归芍药散对代谢综合征大鼠生化指标含量的调节
血清生化指标：与空白对照组相比，模型组的TG、LDL-C、UA和ALT含量升高，TC、HDL-C含量下降，且都具有统计学差异，表明造模成功；与模型组相比，阳性药组和当归芍药散50％醇提物给药组TG含量降低，TC、HDL-C含量升高，TG、LDL-C、UA和ALT含量降低，且都具有统计学差异，表明当归芍药散50％醇提取物能够在一定程度上发挥降糖和降脂治疗作用(表2)。
表2给药干预8周各组大鼠血清生化指标结果统计表
Figure BDA0002500260570000071
注：空白组与模型组之间比较采用*p<0.05，**p<0.01和***p<0.001表示，其它药物干预组与模型组之间采用#p<0.05，##p<0.01和###p<0.001表示。
肝脏生化指标：与空白对照组相比，模型组的TG、LDL-C、ALT和Glycogen含量升高，TC、HDL-C含量降低，且都具有统计学差异，表明造模成功；与模型组相比，阳性药组和当归芍药散50％醇提物给药组TG、LDL-C、ALT和Glycogen含量降低，TC、HDL-C含量升高，表明当归芍药散50％醇提取物能够在一定程度上缓解肝脏的病变程度(表3)。
表3给药干预8周各组大鼠肝脏组织生化指标统计表
Figure BDA0002500260570000081
注：空白组与模型组之间比较采用*p<0.05，**p<0.01和***p<0.001表示，其它药物干预组与模型组之间采用#p<0.05，##p<0.01和###p<0.001表示。
4当归芍药散对代谢综合征大鼠肝脏的保护作用
模型组与空白对照组相比肝细胞胞质内出现大小不等、圆形、有张力的空泡，主要位于肝小叶的周边区。肝细胞索结构不清晰。表明代谢综合征大鼠的肝脏受到了一定程度上的损伤。
如图2所示，阳性药组和当归芍药散50％醇提物给药组分别与模型组相比，肝细胞胞质内空泡性都变小。表明两个药物治疗组均发挥了一定的疗效。
5当归芍药散对代谢综合征大鼠代谢标志物的调节作用
差异代谢物主要通过有监督的正交偏最小二乘判别分析法进行筛选，卡VIP值大于1以及p小于0.05，并结合韦恩分析。
如图3所示，肝脏差异代谢物的筛选结果：阳性药给药组丙氨酸(alanine)，羟基丁酸(3-hydroxybutyrate)，鹅肌肽(anserine)，葡萄糖(glucose)，甘氨酸(glycine)，酪胺(tyramine)的相对含量下调，而胆碱(choline)，延胡索酸盐(fumarate)，肌肽(carnosine)，组胺(histamine)，黄嘌呤(xanthine)的相对含量上调；当归芍药散50％醇提物给药组鹅肌肽(anserine)，葡萄糖(glucose)，肌苷(inosine)，甘氨酸(glycine)，氧化三甲胺(TMAO)的相对含量下调，而肌肽(carnosine)，胆碱(choline)，肌酸(creatine)，延胡索酸盐(fumarate)，组胺(histamine)，黄嘌呤(xanthine)的相对含量上调。
如图4所示，粪便差异代谢物的筛选结果：阳性药给药组乳酸(lactate)，氧化三甲胺(TMAO)，甲酸(formate)的相对含量下调，而色氨酸(tryptophan)的相对含量上调；当归芍药散50％醇提物给药组三甲胺(TMA)和甲酸(formate)的相对含量下调，而延胡索酸盐(fumarate)的相对含量上调。
表明不同药物可能通过影响不同的差异代谢物而发挥调控代谢综合征的作用，其中当归芍药散50％醇提取物很有可能是通过影响TMAO(或其中间体TMA)的代谢而发挥作用。
6当归芍药散对代谢综合征大鼠菌群的分析
如图5所示，结合两组之间差异菌属相对丰度柱状图与Lsfse分析结果可看出：空白组与模型组之间差异主要体现在模型组原著杆菌类、乳酸杆菌相对丰度的下调，梭菌属及厚壁菌属相对丰度的上调；模型组与阳性药组之间的差异主要体现在阳性药组双歧杆菌属和放线菌属相对丰度的下调；模型组与当归芍药散50％醇提取物给药组之间的差异主要体现在当归芍药散50％醇提取物给药组原著杆菌类、乳酸杆菌属、拟杆菌属相对丰度上调，厚壁菌属相对丰度略微下调，及有益菌属阿克曼菌属和疣微菌属相对丰度上调。表明当归芍药散50％醇提取物能直接调控紊乱菌属相对丰度，使得有益菌属相对丰度上调。
7结论
当归芍药散可通过下调TMAO(或其中间体TMA)的代谢来起到降糖、降脂和保护肝脏的作用，具有与吡格列酮相当的干预和治疗代谢综合征的效果。
以上所述实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

Claims (6)

1.当归芍药散在制备用于干预和治疗代谢综合征的药物方面的应用。
2.根据权利要求1所述的当归芍药散的应用，其特征在于：所述代谢综合征为糖尿病、脂肪肝或高尿酸血症。
3.根据权利要求1所述的当归芍药散的应用，其特征在于：所述当归芍药散是由下述方法制备得到的：取当归、白芍、茯苓、白术、泽泻和川芎混匀粉碎，加甲醇浸泡加热回流提取并过滤，上清液减压浓缩得浸膏，真空干燥得当归芍药散醇提取物的粉末。
4.根据权利要求3所述的当归芍药散的应用，其特征在于：所述当归、白芍、茯苓、白术、泽泻和川芎的重量比为52：172：69：69：86：52。
5.根据权利要求3所述的当归芍药散的应用，其特征在于：所述当归芍药散醇提取物为当归芍药散50％醇提取物。
6.当归芍药散作为吡格列酮替代药物的应用。
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