CN101513427A - 朝藿定c的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种朝藿定C在制备治疗骨质疏松药物中的用途。经申请人试验，在同等剂量下，朝藿定C作用优于淫羊藿、淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷，可以用于制备治疗骨质疏松的药物。同现有技术相比，对于治疗骨质疏松症，在同等剂量下，朝藿定C作用优于淫羊藿、淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷，朝藿定C加其他药物(如雌激素)组成的复方药剂，也要好于淫羊藿总黄酮加同种药物组成的复方药剂。本发明的朝藿定C在同剂量下有效成分更高，为治疗骨质疏松症提供了一种更有疗效的用药选择。
Description
技术领域
本发明涉及淫羊藿的提取物朝藿定C的用途，属于药物技术领域。
背景技术
淫羊藿为小檗科植物淫羊藿E pimedium brevicornum Maxim.和箭叶淫羊藿E.sagittatum(S.et Z.)Maxim.或柔毛淫羊藿E.Pubescens Maxim.等的全草。是我国传统的中药之一，对于淫羊藿及其提取物治疗骨质疏松症的作用，近几年有不少研究。如中国专利03145167.5公开了一种淫羊藿与雌激素组成的治疗绝经期后妇女骨质疏松症的复方制剂，公开了淫羊藿及其提取物淫羊藿总黄酮可以用于治疗骨质疏松症。还有中国专利200610065215.7公开了一种主要活性成分为淫羊藿总黄酮的治疗骨质疏松的中药制剂。但是淫羊藿总黄酮的成分包括朝藿定A、B、C等多种黄酮类成分，而目前，药典要求的淫羊藿药材的指标性成分仅为淫羊藿苷。对于淫羊藿总黄酮的哪种成分起到治疗骨质疏松的主要作用，治疗效果更好，并没有相关报道。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种朝藿定C的新用途。朝藿定C对于骨质疏松症有显著的疗效。
朝藿定C的制备方法。(1)提取工艺：取淫羊藿药材，切成断，加20倍70％乙醇回流3次，每次1h，合并三次的提取液，回收乙醇，并浓缩成60℃时相对密度为1.15。浓缩液加蒸馏水适量放置，弃沉淀，取上清液，再浓缩得浸膏。依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取至近无色，再用正丁醇反复萃取至近无色，回收正丁醇至干，即得到含朝藿定C的粗浸膏。(2)分离工艺：
①硅胶柱色谱的分离：
将上述所得粗浸膏用甲醇溶解，薄层色谱用硅胶拌样，硅胶柱色谱分离，以氯仿∶甲醇(100∶17，100∶20，100∶22)梯度洗脱，以硅胶预制板跟踪检识，展开系统为氯仿∶甲醇＝100∶20，收集硅胶预制板TLC上Rf值小于淫羊藿苷的斑点流份，回收溶剂后，即得朝藿定C粗品。
②聚酰胺柱色谱的分离：
朝藿定C粗品用甲醇溶解，柱色谱用聚酰胺拌样，聚酰胺柱色谱分离，以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶0，8∶1∶0.2)梯度洗脱，以聚酰胺薄膜跟踪检识，展开系统为乙酸乙酯∶乙醇∶水＝8∶1∶1，收集聚酰胺薄膜TLC上Rf值大于淫羊藿苷的斑点流份，回收溶剂后，即得朝藿定C。朝藿定C的纯度为89～99％。
本发明的技术方案。朝藿定C在制备治疗骨质疏松药物中的用途。
朝藿定C的分子式是这样的：
朝藿定C在制备治疗骨质疏松口服剂药物中的用途。
朝藿定C在制备治疗骨质疏松注射剂药物中的用途。
为了证明本发明的效果，申请人对朝藿定C与淫羊藿及其提取物进行了药理试验研究，具体如下：
试验一朝藿定C与淫羊藿及其提取物的对比试验
1、材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物
KM种小鼠，雌性，4周龄，体重20～22g；一级实验动物，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证：SCXK(黔)2002-0001。
1.1.2药物与试剂
淫羊藿(E pimedium brevicornum Maxim.)：由中国医学科学院药用植物研究所郭宝林研究员鉴定。1g浸膏相当于生药量6.28g。给药以生药量计。
淫羊藿总黄酮 由中国医学科学院药用植物研究所郭宝林研究员提供。
朝藿定C纯度89％ 由中国医学科学院药用植物研究所郭宝林研究员提供。
淫羊藿苷 南京崇原生物科技有限公司批号：20070501
己烯雌酚 合肥久联制药有限公司批号：20060518。
1.1.3主要仪器及设备
LUNAR骨密度仪-美国通用电气有限公司；AB104-S梅特勒-托利多电子分析天平梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；北京杰伟世视音频设备有限公司；小鼠骨质挠度测试仪-(自制)；AO-820型轮动式切片机-美国。BI-2000医学图像分析系统北京杰伟世视音频设备有限公司
1.2实验方法：
昆明雌性小鼠235只，体重20-22克。用0.4％戊巴比妥钠0.1mg/10g腹腔麻醉。无菌条件下切除卵巢造模，对照组动物切除卵巢旁部分脂肪保留卵巢。一月后取对照组和模型组各3只动物用美国LUNAR骨密度仪检测，确认造模成功。其后将造模小鼠分为：模型(等容积常水)、己稀雌酚(2mg/kg)、淫羊藿超高剂量(400mg/kg)、淫羊藿高剂量(200mg/kg)、淫羊藿中剂量(100mg/kg)、淫羊藿低剂量(50mg/kg)、淫羊藿总黄酮高剂量(20mg/kg)、淫羊藿总黄酮中剂量(10mg/kg)、淫羊藿总黄酮低剂量(5mg/kg)、朝藿定C高剂量(20mg/kg)、朝藿定C中剂量(10mg/kg)、朝藿定C低剂量(5mg/kg)、淫羊藿苷高剂量(20mg/kg)、淫羊藿苷中剂量(10mg/kg)、淫羊藿苷低剂量(5mg/kg)15组，加上对照组(等容积常水)，实验动物共分为16个组。各组动物按各自药物和剂量灌胃给药，每日一次，连续给药两个月，停药后次日，用LUNAR骨密度仪测骨密度；称取体重，脱颈椎处死动物，取左股骨于小鼠骨挠度测试仪上对其施压，以股骨断裂时所承受的最大载荷和最大挠度为判断其机械强度的指标；取约0.7cm长含股骨头的右侧股骨常规脱钙，石蜡包埋切片，片厚4μm，HE染色，以BI-2000医学图像分析系统进行骨组织形态学观察，计量：①骨小梁平均宽度；②骨皮质平均厚度；③相对骨体积；④成骨细胞数；⑤破骨细胞数。
实验数据用以均数±标准差(x±s)表示，采用Excel2000作Student-t检验。
2、结果
2.1去卵巢后36天对造模成功的判断
与对照组比较，模型组小鼠骨密度大幅度降低，可以判断为造模基本成功(表1)。
表1去卵巢后36天对造模抽样小鼠骨密度的影响(n＝3，x±s)
2.2给药两个月对去卵巢小鼠骨相关指标的影响
2.2.1对骨密度的影响
与对照组比较，模型组小鼠脊柱骨密度和全身骨密度均明显下降；与模型组比较，各给药组小鼠脊柱骨密度和全身骨密度均增高，差异显著(P＜0.05、P＜0.01；表2)。
表2对小鼠骨密度的影响(x±s)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | n | 脊柱(g/cm2) | 全身(g/cm2) |
| 对照组 | - | 13 | 0.087±0.005 | 0.243±0.089 |
| 模型组 | - | 11 | 0.076±0.004 | 0.149±0.026 |
| 己烯雌酚 | 2 | 10 | 0.097±0.008** | 0.199±0.048 |
| 淫羊藿 | 400 | 13 | 0.082±0.009* | 0.202±0.083 |
| 200 | 14 | 0.083±0.008* | 0.195±0.073* | |
| 100 | 14 | 0.084±0.010** | 0.241±0.085** | |
| 50 | 13 | 0.085±0.010* | 0.211±0.065** | |
| 淫羊藿总黄酮 | 20 | 14 | 0.084±0.007** | 0.241±0.129* |
| 10 | 14 | 0.086±0.007** | 0.236±0.077** | |
| 5 | 14 | 0.083±0.021* | 0.233±0.095** | |
| 朝藿定C | 20 | 14 | 0.090±0.006** | 0.265±0.083* |
| 10 | 14 | 0.089±0.010** | 0.272±0.102** | |
| 5 | 14 | 0.087±0.006** | 0.253±0.061* | |
| 淫羊藿苷 | 20 | 14 | 0.083±0.007* | 0.238±0.128* |
| 10 | 14 | 0.080±0.008 | 0.195±0.088 | |
| 5 | 14 | 0.082±0.009* | 0.219±0.092* |
注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01(下同)。
2.2.2对骨生物力学的影响
与对照组比较，模型组小鼠的最大载荷和最大挠度均明显下降，与模型组比较，各给药组小鼠最大载荷和最大挠度均明显提高，差异显著(P＜0.01；表3)。
表3对小鼠股骨机械强度的影响(x±s)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | n | 最大载荷(N) | 挠度(mm) |
| 对照组 | 一 | 13 | 19.538±2.904 | 0.184±0.026 |
| 模型组 | 一 | 11 | 15.400±1.506 | 0.137±0.021 |
| 己烯雌酚 | 2 | 10 | 22.100±3.573** | 0.229±0.058** |
| 淫羊藿 | 400 | 13 | 16.692±1.377** | 0.208±0.033** |
| 200 | 14 | 18.286±1.684** | 0.218±0.032** | |
| 100 | 14 | 18.231±2.127** | 0.234±0.048** | |
| 50 | 13 | 17.692±1.797** | 0.227±0.059** | |
| 淫羊藿总黄酮 | 20 | 14 | 17.643±2.530** | 0.187±0.027** |
| 10 | 14 | 18.643±2.205** | 0.192±0.036** | |
| 5 | 14 | 17.286±1.858** | 0.179±0.026** | |
| 朝藿定C | 20 | 14 | 21.429±2.681** | 0.198±0.029** |
| 10 | 14 | 20.538±2.847** | 0.268±0.065** | |
| 5 | 14 | 19.071±2.369** | 0.192±0.037** | |
| 淫羊藿苷 | 20 | 14 | 18.333±2.387** | 0.199±0.048** |
| 10 | 14 | 17.079±2.740** | 0.241±0.045** | |
| 5 | 14 | 17.729±4.419** | 0.238±0.061** |
2.2.3对骨组织形态学的影响
与对照组比较，模型组小鼠骨小梁平均宽度变窄、相对骨体积变小、骨皮质平均厚度减小、成骨细胞数明显减少，破骨细胞数明显增高，差异显著(P＜0.05、p＜0.01)；与模型组比较，各给药组均能明显提高小鼠骨小梁的平均宽度、骨皮质平均厚度、相对骨体积和成骨细胞数，使破骨细胞数明显减少，差异显著(P＜0.05、P＜0.01；表4～表5)。
表4对去卵巢小鼠骨组织学的影响](n＝8、x±s)
表5对小鼠成骨细胞和破骨细胞的影响(x±s)
3、总结
淫羊藿、淫羊藿总黄酮、朝藿定C、淫羊藿苷对小鼠去卵巢所致的骨质疏松均有治疗作用。淫羊藿、淫羊藿总黄酮、朝藿定C与淫羊藿苷在同等剂量下，朝藿定C作用优于淫羊藿、淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷，可以用于制备治疗骨质疏松的药物。药典要求的淫羊藿药材的指标性成分为淫羊藿苷，通过本发明的试验发现，对于治疗骨质疏松症，朝藿定C的疗效比淫羊藿苷和黄酮的疗效都好，因此朝藿定C起到了更主要的治疗作用，具有意想不到的效果。
试验二朝藿定C和淫羊藿总黄酮加雌激素的复方制剂对比试验
1实验方法
1.1动物分组实验动物选用6月龄Wistar雌鼠60只，体重260-330g。由贵阳医学院实验动物中心提供。随机分为假手术组、模型组、A组和B组，组15只。所有动物在相同条件下饲养。
1.2制备模型各组动物在腹腔注射3％戊巴比妥钠溶液(45mg/kg)麻醉下做腹部切口，除假手术组切除少许肾周围脂肪组织外，其余各组大鼠均行双侧卵巢切除术。术后给予青霉素肌注3d。所有大鼠术后均自由饮水，标准饲料常规喂养12周，造成实验性大鼠骨质疏松模型。
1.3给药方法各组动物从造模12周后开始灌胃给药，假手术组和模型组每天灌相等体积冷开水；按人鼠体重换算给予，A组灌胃淫羊藿总黄酮和雌激素的复方制剂(99％淫羊藿总黄酮+0.1％雌激素组)，B组灌胃朝藿定C和雌激素的复方制剂(99％朝藿定C+0.1％雌激素)，每天1次，连续12周。
1.4BMD测定各组动物灌胃治疗12周后，在乙醚麻醉下处死，各组大鼠取双侧股骨标本，用双能X线骨密度仪测定股骨干骨密度。结果见表6。
1.5统计学方法采用SPSS11.0软件包进行数据处理，采用单因数方差分析，结果用(x±s)表示，P＜0.05为差异显著的统计学意义。
2结果
表6中显示，模型组BMD明显低于假手术组，有显著差异(P＜0.05)，B组BMD略低于假手术(P＞0.05)，略高于A组(P＞0.05)，明显高于模型组(P＜0.05)。
表6大鼠骨密度的影响(x±s)
| 组别 | 动物数 | BMD(g/cm2) |
| 假手术组 | 15 | 0.1869±0.012 |
| 模型组 | 15 | 0.623±0.013△ |
| A组 | 15 | 0.2068±0.015▲ |
| B组 | 15 | 0.1936±0.025▲ |
注：t检验，与假手术组比较，△P＜0.05，与模型组比较，▲P＜0.05。
总结：淫羊藿总黄酮和朝藿定C，加雌激素的复方制剂对小鼠去卵巢所致的骨质疏松均有治疗作用。在同等剂量下，朝藿定C加雌激素的作用优于淫羊藿总黄酮加雌激素。
同现有技术相比，对于治疗骨质疏松症，在同等剂量下，朝藿定C作用优于淫羊藿、淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷，朝藿定C加其他药物(如雌激素)组成的复方药剂，也要好于淫羊藿总黄酮加同种药物组成的复方药剂。本发明的朝藿定C在同剂量下有效成分更高，为治疗骨质疏松症提供了一种更有疗效的用药选择。
具体实施方式
本发明的实施例1：(1)提取工艺：
取淫羊藿药材，切成断，加20倍70％乙醇回流3次，每次1h，合并三次的提取液，回收乙醇，并浓缩成60℃时相对密度为1.15。浓缩液加蒸馏水适量放置，弃沉淀，取上清液，再浓缩得浸膏。依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取至近无色，再用正丁醇反复萃取至近无色，回收正丁醇至干，即得到含朝藿定C的粗浸膏。
(2)分离工艺：
①硅胶柱色谱的分离：
将上述所得粗浸膏用甲醇溶解，薄层色谱用硅胶拌样，硅胶柱色谱分离，以氯仿∶甲醇(100∶17，100∶20，100∶22)梯度洗脱，以硅胶预制板跟踪检识，展开系统为氯仿∶甲醇＝100∶20，收集硅胶预制板TLC上Rf值小于淫羊藿苷的斑点流份，回收溶剂后，即得朝藿定C粗品。
②聚酰胺柱色谱的分离：
朝藿定C粗品用甲醇溶解，柱色谱用聚酰胺拌样，聚酰胺柱色谱分离，以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶0，8∶1∶0.2)梯度洗脱，以聚酰胺薄膜跟踪检识，展开系统为乙酸乙酯∶乙醇∶水＝8∶1∶1，收集聚酰胺薄膜TLC上Rf值大于淫羊藿苷的斑点流份，回收溶剂后，即得朝藿定C。朝藿定C的纯度为89～99％。
朝藿定C的分子式为
将所得的朝藿定C加入适量淀粉，混匀，制粒，干燥，制备成颗粒剂，或压制成片剂，或装入胶囊制成胶囊剂，以及其他常规的口服剂，用于治疗骨质疏松。
实施例2：按照实施例1制备朝藿定C，然后加入注射用水，搅匀，调PH值5-7，灌封，即得朝藿定C注射剂。
实施例3：按照实施例1制备朝藿定C提取物，加入注射用水，搅匀，调PH值5-7，无菌滤过，滤液分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥，即得冻干粉制剂。
实施例4：制备骨松宝颗粒
主要成份：朝藿定C、续断、知母、地黄、三棱、莪术、赤芍、川芎、牡蛎(煅)
制备方法：以上九味，牡蛎粉碎成细粉，备用；按照实施例1制备朝藿定C，备用；其余续断等七味加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35(50℃)的清膏，加入牡蛎粉和朝藿定C，混匀，干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，制成500g；或取清膏，加入适量的淀粉和蔗糖粉及上述细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。
药理作用：本品具有明显的抗炎止痛、提高免疫功能、改善“阳虚”症等作用，具有调节钙磷代谢、提高骨质密度，改善骨质疏松程度。功能主治：补肾活血，强筋壮骨。
实施例5：朝藿定C和雌激素的复方制剂。
制备得到朝藿定C，朝藿定C加雌激素(99％朝藿定C+0.1％雌激素)再加上适量的辅料，制成颗粒、胶囊、片剂等常规药剂。
本品对骨质疏松症有明显的预防和治疗作用。特别是对绝经期妇女和老年性骨质疏松症有良好的防治效果。
Claims (3)
1.朝藿定C在制备治疗骨质疏松药物中的用途，朝藿定C的分子式是这样的：
2.根据权利要求1所述的朝藿定C的用途，其特征在于：朝藿定C在制备治疗骨质疏松口服剂药物中的用途。
3.根据权利要求1所述的朝藿定C的用途，其特征在于：朝藿定C在制备治疗骨质疏松注射剂药物中的用途。
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| CNA2009103003119A CN101513427A (zh) | 2009-01-22 | 2009-01-22 | 朝藿定c的用途 |
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| CNA2009103003119A CN101513427A (zh) | 2009-01-22 | 2009-01-22 | 朝藿定c的用途 |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111494360A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-08-07 | 陕西师范大学 | 朝藿定c治疗糖尿病肝损伤的药物应用 |
| CN113940943A (zh) * | 2021-10-18 | 2022-01-18 | 广东金骏康生物技术有限公司 | 淫羊藿次苷ⅰ的用途 |
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2009
- 2009-01-22 CN CNA2009103003119A patent/CN101513427A/zh active Pending
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| WO2023065478A1 (zh) * | 2021-10-18 | 2023-04-27 | 广东金骏康生物技术有限公司 | 淫羊藿次苷ⅰ的用途 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20090826 |