CN111534555A - 一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺 - Google Patents
一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111534555A CN111534555A CN202010261885.6A CN202010261885A CN111534555A CN 111534555 A CN111534555 A CN 111534555A CN 202010261885 A CN202010261885 A CN 202010261885A CN 111534555 A CN111534555 A CN 111534555A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- tank
- sophorolipid
- batch
- oil
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 291
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 291
- ZTOKUMPYMPKCFX-CZNUEWPDSA-N (E)-17-[(2R,3R,4S,5S,6R)-6-(acetyloxymethyl)-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(acetyloxymethyl)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxyoctadec-9-enoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCC/C=C/CCCCCCC(C)O[C@@H]1O[C@H](COC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(C)=O)O1 ZTOKUMPYMPKCFX-CZNUEWPDSA-N 0.000 title claims abstract description 45
- 239000003876 biosurfactant Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 30
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 27
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 22
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 22
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 22
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 238000007599 discharging Methods 0.000 claims description 15
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 10
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 8
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 6
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 claims description 6
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 6
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 4
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 4
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 claims description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 claims description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims description 2
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 abstract 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000006052 feed supplement Substances 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 238000004886 process control Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺,其步骤包括:将多个体积相同的发酵罐依次连通,前一个发酵罐部分发酵液打入其紧连的发酵罐中,该发酵液中不仅其中含有高密度的菌细胞,可以作为接种液快速利用水溶性底物导致菌体细胞快速增殖,而且含有一定量槐糖脂,可以有效乳化增溶新补加的油溶性底物,缩短发酵周期;多个发酵罐相互连通,依次接种,连续补料,形成多级连续流加发酵工艺。本发明的优点在于可以大大缩短槐糖脂的发酵周期,提高发酵效率。同时,各主体发酵罐相互独立操作,单独补料和排放反应物料,可以大大避免相互感染杂菌的机会。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵领域,具体涉及一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺。
背景技术
作为重要的化工产品,表面活性剂素有“工业味精”的美称,在化工、石油、日化等各行业具有广泛用途。槐糖脂是目前被研究最为深入和应用最为广泛的一类生物表面活性剂。已发现多株假丝酵母菌(Candida sp.)可以利用水溶性和油溶性的双相碳源高产槐糖脂。和传统的化学合成表面活性剂相比,槐糖脂类生物表面活性剂具有以下显著特征和优点:(1)高表/界面活性;(2)低毒或无毒,对环境友好;(3)易于生物降解;(4)良好的耐温性、耐盐性和耐酸碱性。基于上述特点,槐糖脂类生物表面活性剂可以部分取代化学合成的表面活性剂而在日用化工、石油开采、纺织印染、食品发酵等行业获得广泛应用。微生物发酵是生产槐糖脂生物表面活性剂的重要途径和方法。目前,限制槐糖脂生物表面活性剂在各工业行业广泛应用的瓶颈是生产成本过高。亟需通过优化槐糖脂发酵工艺,提高槐糖脂生产效能,降低生产成本。
槐糖脂生物表面活性剂发酵动力学研究表明,在假丝酵母菌(Candida sp.)以利用水溶性和油溶性的双相碳源为底物合成槐糖脂生物表面活性剂的过程中,首先利用葡萄糖等水溶性碳源,使得菌体细胞的大量生长繁殖,达到生长稳定期时,菌细胞开始利用油溶性碳源并分泌代谢槐糖脂,菌株由延滞期进入稳定期往往长达4h以上,而整个发酵周期都大都在196h以上。这主要是由于油溶性底物与亲水性的菌细胞表面亲合性较差,往往需要较长时间的诱导产生槐糖脂并将油滴乳化分散后,菌细胞才能大量利用油溶性底物。因此,为缩短发酵周期,应改进发酵工艺流程,减少菌株诱导产生槐糖脂增溶油溶性底物的时间。
目前,在槐糖脂发酵工艺方面,已经开发出小试和中试规模上单罐分批式发酵(美国专利:3205150;美国专利:3321648)、单罐分批补料发酵(中国专利:CN101845469A)和单罐连续补料发酵(中国专利:CN 102492605A)三种发酵方式。但仍然存在发酵周期长、发酵效率低等突出问题。目前常用的单罐分批式发酵操作方式都是一次性加入基质并在反应完成后将全部反应物料取出,不仅高浓度油溶性基质会阻碍氧传质速率,而且产物浓度或其他代谢产物会抑制菌株的生长,导致发酵周期较长、底物利用率低,槐糖脂产率低。单罐分批补料发酵通过分批补加油溶性底物,可以提高底物利用率,保持发酵体系较高的溶氧水平;但仍是在发酵完成后一次取出反应物料,不仅会由于高浓度产物限制菌株生长,而且在下次培养周期中,菌株在油溶性底物诱导作用下生成槐糖脂所需时间较长,发酵周期增长,发酵效率降低。而单罐连续补料发酵易于染菌,且过程控制要求较高,难以满足工业化大规模生产的需求。
发明内容
针对假丝酵母菌摄取利用油溶性底物时需要诱导产生槐糖脂生物表面活性剂而导致发酵周期长的突出问题,本发明的目的是,根据槐糖脂发酵菌种生长和产物生成特性和动力学特征,提供一种发酵周期短、发酵效率高的槐糖脂生物表面活性剂多级连续流加双相发酵工艺。
本发明基于假丝酵母菌(Candida sp.)以水溶性和油溶性的双相碳源为底物合成槐糖脂生物表面活性剂发酵动力学特征,在单罐补料分批发酵和单罐连续发酵的基础上,设计和开发槐糖脂生物表面活性剂多级连续流加双相发酵工艺,将多个体积相同的发酵罐依次连通,前一个发酵罐部分发酵液打入其紧连的发酵罐中,该发酵液中不仅其中含有高密度的菌细胞,可以作为接种液快速利用水溶性底物导致菌体细胞快速增殖,而且含有一定量槐糖脂,可以有效乳化增溶新补加的油溶性底物,缩短发酵周期;多个发酵罐相互连通,依次接种,连续补料,形成多级连续流加发酵工艺。
本发明具体的技术方案如下:
本发明依托一套多级串联的发酵设备来完成。该发酵设备的主体由n(n=3-8)个发酵罐相互串联组成,第1个发酵罐连接第2个发酵罐,第2个发酵罐连接第3个发酵罐,依次类推,第n-1个与第n个发酵罐连接,第n个发酵罐又连接第1个发酵罐。每个发酵罐都连通种子罐和补料罐,并与储罐间有独立的连接管道,同时安装温度、pH、溶解氧等实时监测探头,各发酵罐之间依次连通。
本发明具体的工艺流程如下:
一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺,包括以下步骤:
(1)在种子罐中装入种子培养基,经灭菌后,接入菌种假丝酵母菌(Candida sp.),保持温度为25-35℃,曝气量为0.4-0.8 vvm、搅拌速率为300-800 rpm、罐压为0.105-0.15兆帕,发酵一段时间后,将种子液全部接种到事先装入已灭菌的新鲜发酵培养基的第1个发酵罐中;
(2)第1个发酵罐中的发酵液接种后,保持温度为25-35℃,曝气量为0.4-0.8 vvm、搅拌速率为300-800 rpm、罐压为0.105-0.15兆帕,将体积比为3%-15%的发酵液打入第2个发酵罐中;然后定时往第1个发酵罐中分批补加浓度60-180g/L葡萄糖溶液和植物油,添加量分别为发酵罐体积的2-10%和1-4%,继续通气、搅拌和发酵,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐中;
(3)第2个发酵罐中重复步骤(2),直至第n个发酵罐;
(4)在第1个发酵罐中通过补料罐加入一定体积的新鲜已灭菌的培养基,将从第n个发酵罐中加入的发酵液作为接种液,继续按步骤(2)进行;
(5)依次类推,在n个发酵罐之间形成多级串联连续流加双相发酵工艺;
(6)储罐中的发酵液静置0.5-10h小时后,槐糖脂自动沉降于发酵液底层,中间层为酵母菌聚集体,上层为发酵上清液;静置分离得到下层的槐糖脂,直接保藏。
所述发酵罐的个数n=3-8。
所述的种子培养基为:每1L的自来水中溶解葡萄糖20g,蛋白胨20g,酵母粉10g,在115℃下灭菌30min。
所述的发酵培养基为:每1L的自来水中加入酵母粉2.5g,柠檬酸钠5g,硫酸铵2g,磷酸二氢钾1g,葡萄糖100g,在115℃下灭菌30min;植物油100g,单独在115℃下灭菌30min。
所述的植物油为大豆油、花生油、菜籽油、玉米油、橄榄油、棉籽油、油酸中的一种或几种。
本发明的优点在于,槐糖脂生物表面活性剂的连续发酵工艺中由多个体积相同的发酵罐依次连通组成,不仅可以通过批次补料以维持较高底物利用率和较高溶氧水平;同时,前一发酵罐的部分发酵液作为种子液,不仅含有高密度的菌体细胞,而且含有前一发酵周期所生成的槐糖脂,可以有效乳化增溶新补加的油溶性底物,提高了菌体细胞对油溶性底物的吸收转化速率,从而大大缩短了发酵周期。二者相辅相成,可以大大缩短槐糖脂的发酵周期,提高发酵效率。同时,各主体发酵罐相互独立操作,单独补料和排放反应物料,可以大大避免相互感染杂菌的机会。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施例来进一步详细说明本发明。
实施例1:
本发明的槐糖脂生物表面活性剂多级串联连续流加双相发酵工艺流程如图1所示。
(1)在10L种子罐中装入5L种子培养基,经灭菌后,按照10%(体积比)的接种量接种接入菌种假丝酵母菌(Candida.bombicola) ATCC 22214,在温度为30℃下、曝气量为0.8vvm、搅拌速率为400rpm,发酵20小时,将种子液接种到第1个100L发酵罐中,该罐中已经装入45L已灭菌的发酵培养基。
(2)控制第1个发酵罐温度为30℃,曝气量为0.6vvm、搅拌速率为400rpm、罐压为0.11兆帕,发酵24h时,将5L的发酵液打入第2个发酵罐中,并分别在第1发酵罐发酵的48、72和96h时分别往第1发酵罐中补加已经灭菌的浓度为120g/L的葡萄糖溶液3L和1.2L花生油,继续通气搅拌和发酵,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(3)第2个发酵罐中通过补料罐加入45L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第1个发酵罐打入5L的发酵液作为接种液,控制温度为30℃、曝气量为0.6vvm、搅拌速率为400rpm、罐压为0.11兆帕,发酵24h,将5L的发酵液打入第3个发酵罐中,然后分别在第2个罐发酵的48、72和96h时,往其中补加已经灭菌的浓度为120g/L的葡萄糖溶液3L和1.2L花生油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(4)第3个发酵罐中通过补料罐加入45L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第2个发酵罐打入5L的发酵液作为接种液,控制温度为30℃、曝气量为0.6vvm、搅拌速率为400rpm、罐压为0.11兆帕,发酵24h,将5L的发酵液打入第4个发酵罐中,然后分别在发酵的48、72和96h时,往第3个发酵罐中补加已经灭菌的浓度为120g/L的葡萄糖溶液3L和1.2L花生油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(5)第4个发酵罐中通过补料罐加入45L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第3个发酵罐打入5L的发酵液作为接种液,控制温度为30℃、曝气量为0.6vvm、搅拌速率为400rpm、罐压为0.11兆帕,发酵24h,将5L的发酵液打入第1个发酵罐中,然后分别在第4个发酵罐发酵的48、72和96h时,往其中补加已经灭菌的浓度为120g/L的葡萄糖溶液3L和1.2L植物油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(6)第1个发酵罐中通过补料罐加入45L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第4个发酵罐打入5L的发酵液作为接种液,控制温度为30℃,曝气量为0.6vvm、搅拌速率为400rpm时发酵24h,将5L的发酵液打入第2个发酵罐中,然后分别在第1个罐发酵的48、72和96h时,往其中补加已经灭菌的浓度为120g/L的葡萄糖溶液3L和1.2L植物油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。依次类推,在4个发酵罐之间可以形成多级串联连续流加发酵工艺。
(7)储罐中的发酵液静止10h后,槐糖脂沉降于发酵液底层,分离得到纯度在95%以上槐糖脂。发酵产率为180g/L。
实施例2:
(1)在125L种子罐中装入75L种子培养基,经灭菌后,按照10%(体积比)的接种量接种接入菌种假丝酵母菌(Candida.bombicola) ATCC 22214,在温度为28℃、曝气量为0.6vvm、搅拌速率为500rpm,发酵24小时,将种子液接种到第1个1000L发酵罐中,该罐中已经装入425L已灭菌的发酵培养基。
(2)控制第1个发酵罐温度为28℃,曝气量为0.5vvm、搅拌速率为500rpm,罐压为0.105兆帕,发酵28h时,将75L的发酵液打入第2个发酵罐中,并分别在第1发酵罐发酵的56、84、112和140h时分别往第1发酵罐中补加已经灭菌的浓度为180g/L的葡萄糖溶液25L和15L大豆油,继续通气搅拌和发酵,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(3)第2个发酵罐中通过补料罐加入450L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第1个发酵罐打入75L的发酵液作为接种液,控制温度为28℃,曝气量为0.5vvm、搅拌速率为500rpm、罐压为0.105兆帕,发酵28h,将75L的发酵液打入第3个发酵罐中,然后分别在第2个罐发酵的56、84、112、140h时,往其中补加已经灭菌的浓度为180g/L的葡萄糖溶液25L和15L大豆油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(4)第3个发酵罐中通过补料罐加入425L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第2个发酵罐打入75L的发酵液作为接种液,控制温度为28℃,曝气量为0.5vvm、搅拌速率为500rpm、罐压为0.105兆帕,发酵28h,将75L的发酵液打入第4个发酵罐中,然后分别在发酵的56、84、112、140h时,往第3个发酵罐中补加已经灭菌的浓度为180g/L的葡萄糖溶液25L和15L大豆油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(5)第4个发酵罐中通过补料罐加入425L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第3个发酵罐打入75L的发酵液作为接种液,控制温度为28℃,曝气量为0.5vvm、搅拌速率为500rpm时发酵28h,将75L的发酵液打入第1个发酵罐中,然后分别在第4个罐发酵的56、84、112、140h时,往其中补加已经灭菌的浓度为180g/L的葡萄糖溶液25L和15L大豆油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(5)第5个发酵罐中通过补料罐加入425L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第4个发酵罐打入75L的发酵液作为接种液,控制温度为28℃,曝气量为0.5vvm、搅拌速率为500rpm时发酵28h,将75L的发酵液打入第1个发酵罐中,然后分别在第5个罐发酵的56、84、112、140h时,往其中补加已经灭菌的浓度为180g/L的葡萄糖溶液25L和15L大豆油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(6)第1个发酵罐中通过补料罐加入425L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第5个发酵罐打入75L的发酵液作为接种液,控制温度为28℃,曝气量为0.5vvm、搅拌速率为500rpm时发酵28h,将75L的发酵液打入第2个发酵罐中,然后分别在第1个罐发酵的56、84、112和140h时,往其中补加已经灭菌的浓度为180g/L的葡萄糖溶液25L和15L大豆油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。依次类推,在5个发酵罐之间可以形成多级串联连续流加发酵工艺。
(7)储罐中的发酵液静止4h后,槐糖脂沉降于发酵液底层,分离得到纯度在95%以上槐糖脂。发酵产率为225g/L。
实施例3:
(1)在50L种子罐中装入25L种子培养基,经灭菌后,按照10%(体积比)的接种量接种接入菌种假丝酵母菌(Candida.bombicola) ATCC 22214,在温度为32℃、曝气量为0.8vvm、搅拌速率为350rpm,发酵20小时,将种子液接种到第1个500L发酵罐中,该罐中已经装入225L已灭菌的发酵培养基。
(2)控制第1个发酵罐温度为32℃,曝气量为0.7vvm、搅拌速率为350rpm,罐压为0.115兆帕,发酵20h时,将25L的发酵液打入第2个发酵罐中,并分别在第1发酵罐发酵的40和60h时分别往第1发酵罐中补加已经灭菌的浓度为80g/L的葡萄糖溶液20L和5L玉米油,继续通气搅拌和发酵,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(3)第2个发酵罐中通过补料罐加入225L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第1个发酵罐打入25L的发酵液作为接种液,控制温度为32℃,曝气量为0.7vvm、搅拌速率为350rpm、罐压为0.115兆帕,发酵20h,将25L的发酵液打入第3个发酵罐中,然后分别在第2个发酵罐发酵的40和60h时,往其中补加已经灭菌的浓度为80g/L的葡萄糖溶液20L和5L玉米油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(4)第3个发酵罐中通过补料罐加入225L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第2个发酵罐打入25L的发酵液作为接种液,控制温度为32℃,曝气量为0.7vvm、搅拌速率为350rpm、罐压为0.115兆帕,发酵20h,将25L的发酵液打入第1个发酵罐中,然后分别在发酵的40、60h时,往第3个发酵罐中补加已经灭菌的浓度为80g/L的葡萄糖溶液20L和5L玉米油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。
(5)第1个发酵罐中通过补料罐加入225L的新鲜已灭菌的发酵培养基,将从第3个发酵罐打入25L的发酵液作为接种液,控制温度为32℃,曝气量为0.7vvm、搅拌速率为350rpm时发酵20h,将25L的发酵液打入第2个发酵罐中,然后分别在第1个罐发酵的40和60h时,往其中补加已经灭菌的浓度为80g/L的葡萄糖溶液20L和5L玉米油,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐。在3个发酵罐之间可以形成多级串联连续流加发酵工艺。
(7)储罐中的发酵液静止4h后,槐糖脂沉降于发酵液底层,分离得到纯度在95%以上槐糖脂。发酵产率为145g/L。
本领域的普通技术人员都会理解,在本发明的保护范围内,对于上述实施例进行修改,添加和替换都是有可能的,其都没有超出本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺,其特征在于,包括以下步骤:
(1)在种子罐中装入种子培养基,经灭菌后,接入菌种假丝酵母菌,保持温度为25-35℃,曝气量为0.4-0.8 vvm、搅拌速率为300-800 rpm、罐压为0.105-0.15兆帕,发酵一段时间后,将种子液全部接种到事先装入已灭菌的新鲜发酵培养基的第1个发酵罐中;
(2)第1个发酵罐中的发酵液接种后,保持温度为25-35℃,曝气量为0.4-0.8 vvm、搅拌速率为300-800 rpm、罐压为0.105-0.15兆帕,将体积比为3%-15%的发酵液打入第2个发酵罐中;然后定时往第1个发酵罐中分批补加浓度60-180g/L葡萄糖溶液和植物油,添加量分别为发酵罐体积的2-10%和1-4%,继续通气、搅拌和发酵,直至发酵结束并将发酵液排放入储罐中;
(3)第2个发酵罐中重复步骤(2),直至第n个发酵罐;
(4)在第1个发酵罐中通过补料罐加入一定体积的新鲜已灭菌的培养基,将从第n个发酵罐中加入的发酵液作为接种液,继续按步骤(2)进行;
(5)依次类推,在n个发酵罐之间形成多级串联连续流加双相发酵工艺;
(6)储罐中的发酵液静置0.5-10h小时后,槐糖脂自动沉降于发酵液底层,中间层为酵母菌聚集体,上层为发酵上清液;静置分离得到下层的槐糖脂,直接保藏。
2.如权利要求1所述的多级连续流加双相发酵工艺,其特征在于所述发酵罐的个数n=3-8。
3.如权利要求1所述的多级连续流加双相发酵工艺,其特征在于所述的种子培养基为:每1L的自来水中溶解葡萄糖20g,蛋白胨20g,酵母粉10g,在115℃下灭菌30min。
4.如权利要求1所述的多级连续流加双相发酵工艺,其特征在于所述的发酵培养基为:每1L的自来水中加入酵母粉2.5g,柠檬酸钠5g,硫酸铵2g,磷酸二氢钾1g,葡萄糖100g,在115℃下灭菌30min;植物油100g,单独在115℃下灭菌30min。
5.如权利要求1所述的多级连续流加双相发酵工艺,其特征在于所述的植物油为大豆油、花生油、菜籽油、玉米油、橄榄油、棉籽油、油酸中的一种或几种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010261885.6A CN111534555A (zh) | 2020-04-05 | 2020-04-05 | 一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010261885.6A CN111534555A (zh) | 2020-04-05 | 2020-04-05 | 一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111534555A true CN111534555A (zh) | 2020-08-14 |
Family
ID=71952223
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010261885.6A Pending CN111534555A (zh) | 2020-04-05 | 2020-04-05 | 一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111534555A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114561438A (zh) * | 2022-03-03 | 2022-05-31 | 姜锐 | 一种糖脂及其制备方法和应用 |
CN114807271A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-07-29 | 河南省科学院高新技术研究中心 | 一种发酵法制备槐糖脂的方法及槐糖脂在反渗透膜用药剂中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5879913A (en) * | 1996-10-18 | 1999-03-09 | Institut Francais Du Petrole | Process for the production of sophorolipids by cyclic fermentation with feed of fatty acid esters or oils |
CN109504629A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-03-22 | 万华化学集团股份有限公司 | 一种分段调控的连续培养菌种的方法 |
CN109790560A (zh) * | 2016-06-22 | 2019-05-21 | 合利菲姆有限公司 | 生产及分离脂质的方法 |
-
2020
- 2020-04-05 CN CN202010261885.6A patent/CN111534555A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5879913A (en) * | 1996-10-18 | 1999-03-09 | Institut Francais Du Petrole | Process for the production of sophorolipids by cyclic fermentation with feed of fatty acid esters or oils |
CN109790560A (zh) * | 2016-06-22 | 2019-05-21 | 合利菲姆有限公司 | 生产及分离脂质的方法 |
CN109504629A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-03-22 | 万华化学集团股份有限公司 | 一种分段调控的连续培养菌种的方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
A.M.DAVILA·R: "Sophorose lipid fermentation with differentiated substrate supply for growth and production phases", 《APPL MICROBIOL BIOTECHNOL》 * |
宋丹丹等: "不同碳源培养条件下假丝酵母菌产槐糖脂的结构及性能", 《环境化学》 * |
洛戈特金等: "《丙酮-丁醇生产工艺学》", 28 February 1963, 中国工业出版社 * |
潘求真: "《细胞工程》", 30 July 2009, 哈尔滨工程大学出版社 * |
秦耀宗: "《酒精工艺学》", 28 February 2007, 中国轻工业出版社 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114561438A (zh) * | 2022-03-03 | 2022-05-31 | 姜锐 | 一种糖脂及其制备方法和应用 |
CN114807271A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-07-29 | 河南省科学院高新技术研究中心 | 一种发酵法制备槐糖脂的方法及槐糖脂在反渗透膜用药剂中的应用 |
CN114807271B (zh) * | 2022-05-06 | 2023-06-23 | 河南省科学院高新技术研究中心 | 一种发酵法制备槐糖脂的方法及槐糖脂在反渗透膜用药剂中的应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102030776B1 (ko) | 최적화된 배양조건을 이용하여 슈도모나스 테트로렌스(Pseudomonas taetrolens)로부터 락토비온산을 생산하는 방법 | |
CN102168115A (zh) | 一种辅酶q10工业化生产方法 | |
CN111534555A (zh) | 一种槐糖脂生物表面活性剂的多级连续流加双相发酵工艺 | |
CN105506048A (zh) | 一种利用三孢布拉霉菌制备β-胡萝卜素的发酵方法 | |
CN112940945B (zh) | 一种中国被毛孢发酵的方法 | |
CN109517865A (zh) | 一种利用气升式环流反应器发酵生产阿维菌素的方法 | |
CN116333948B (zh) | 一种食气梭菌增菌培养基及其制备方法 | |
CN101153294B (zh) | 琥珀酸的固定化细胞单罐高强度连续发酵工艺 | |
CN112852891A (zh) | 一种用于生产mcl-PHA的人工双菌体系及其应用 | |
CN103952447A (zh) | 一种利用厌氧条件下发酵生产丁二酸的方法 | |
CN100497611C (zh) | 一种发酵法制备核酸酶p1的方法 | |
US4731329A (en) | Ethanol production by high performance bacterial fermentation | |
CN101402926B (zh) | 产氢细菌补料培养及生物制氢系统的生物强化方法 | |
FI71766C (fi) | Framstaellning av etanol genom hoegeffektiv bakteriejaesning. | |
CN109576196A (zh) | 一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法 | |
CN114540437A (zh) | 一种生物发酵生产长链二元酸的方法 | |
CN106854670A (zh) | 一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法 | |
CN111172212A (zh) | 一种高含量聚谷氨酸的发酵方法 | |
CN101974500A (zh) | 高纯中温α-淀粉酶的生产方法 | |
CN111893077A (zh) | 一种丁酸梭菌的规模化生产方法 | |
US4830964A (en) | Ethanol production by high performance bacterial fermentation | |
CN115125177B (zh) | 一种发酵方法及发酵生产辅酶q10的方法 | |
CN102732575A (zh) | 一种利用米根霉发酵生产l-乳酸的方法 | |
CN109868226A (zh) | 一种营养盐溶液及其应用 | |
CN101469061B (zh) | 利用活性污泥生产可生物降解塑料的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200814 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |