CN111526735A

CN111526735A - 肠道屏障功能改善用组合物

Info

Publication number: CN111526735A
Application number: CN201880084290.9A
Authority: CN
Inventors: 船木亜由太; 笠岛直树; 有江秀行
Original assignee: Suntory Holdings Ltd
Current assignee: Suntory Holdings Ltd
Priority date: 2017-12-27
Filing date: 2018-12-26
Publication date: 2020-08-11
Also published as: JPWO2019131759A1; TWI778202B; CA3086827A1; TW201936065A; US20200315998A1; JP7252904B2; WO2019131759A1; SG11202005327YA

Abstract

本发明的目的在于，提供一种可改善肠道屏障功能的肠道屏障功能改善用组合物及没食子酸的肠道屏障功能改善作用增强剂。本发明涉及一种含有没食子酸作为有效成分的肠道屏障功能改善用组合物。

Description

肠道屏障功能改善用组合物

技术领域

本发明涉及肠道屏障功能改善用组合物。此外，本发明涉及没食子酸的肠道屏障功能改善作用增强剂。本发明还涉及改善肠道屏障功能的方法及没食子酸用于改善肠道屏障功能的应用等。

背景技术

近年来，有关肠道健康的意识越来越强，与肠道相关的功能性食品也在大量销售。作为肠功能，主要是营养素的吸收功能和防止有害物质侵入(透过)的屏障功能(肠道屏障功能)。其中，已知肠道屏障功能与随年龄增长而增加的慢性炎症疾病有密切关系。

肠道上皮细胞下存在很多像巨噬细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞这样的免疫系统细胞。通常，肠道上皮细胞通过被称为紧密连接的结构相互牢固地粘结在一起，以高分子量物质无法透过细胞间隙的形式进行严格控制。此外，肠道上皮细胞中还存在用于将疏水性异物从细胞排出的转运蛋白。此类紧密连接结构或转运蛋白等担当着防止异物侵入的肠道屏障功能。但是，若因年龄增长、生活无节制、压力等原因使肠道屏障受损进而使肠道透过性上升，则存在于肠道内的肠道内细菌或其菌体成分等高分子物质会经由细胞间隙转移至生物体内，刺激免疫系统细胞等，从而促使促炎因子的释放，诱发炎症。认为其结果会诱发起因于慢性炎症的各种病态：就肠道而言为炎性肠疾病或过敏性肠症候群，就肝脏而言为非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)，就肌肉而言为肌少症，就血管而言为起因于动脉硬化的症状，就脑而言为认知功能降低、抑郁或焦虑，就全身性而言为糖尿病、脂质代谢异常、自身免疫性疾病等。此外，设想未消化的物质会通过从肠道内侵入而诱发过敏。

如上所述，肠道屏障功能的降低可能成为各种疾病的原因。从这种观点出发，正在尝试可改善肠道屏障功能的材料的探索。已知上皮细胞生长因子(EGF)促进肠道上皮细胞的成熟化并提高屏障功能。但是，由于作为细胞因子的EGF仅微量存在于生物体内，因而作为改善肠道屏障功能的材料而使用，就经济性或安全性方面而言不优选。非专利文献1中，已记载槲皮素等类黄酮促进紧密连接等的形成进而预防慢性炎症。专利文献1中，已记载含有选自菩提树、八角、山棕、红茶、黑茶或它们的处理物中的1种或2种以上作为有效成分的吸收抑制剂。专利文献2中，已记载特定序列的六肽及色氨酸具有过敏原吸收抑制活性。专利文献3中，已记载被肠内投用以便维持或恢复肠的肠道屏障的膳食补充剂，其含有谷氨酰胺、具有抗氧化活性的物质及短链脂肪酸的组合。

现有技术文献

专利文献

专利文献1日本特开2002-193819号公报

专利文献2日本特开2002-257814号公报

专利文献3日本特表2004-513912号公报

非专利文献

非专利文献1Suzuki T.et al,The Journal of NutritionalBiochemistry.2011 May,Vol.22(5),p.401-408

发明内容

本发明的目的在于，提供一种可改善肠道屏障功能的肠道屏障功能改善用组合物。本发明的目的还在于，提供一种没食子酸的肠道屏障功能改善作用增强剂。

本发明者们，为了解决上述课题进行了深入研究，尝试如下：在使用人肠道细胞培养株Caco-2的肠道透过模型中添加促炎因子，制作出可在人类中使肠道屏障功能破坏的状态，进而通过发现可改善该状态的物质来解决上述课题。其结果发现，没食子酸(3,4,5-三羟基安息香酸)具有肠道屏障功能改善作用。此外还发现：将没食子酸与没食子酸以外的酚化合物组合使用时，由它们的协同效应，可达到优异的肠道屏障功能改善效果。在并用没食子酸及上述酚化合物时，肠道屏障功能改善效果得到协同性增强，此为令人惊奇的发现。本发明者们基于这些发现完成了本发明。

即，本发明涉及以下肠道屏障功能改善用组合物等。

(1)一种肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，含有没食子酸作为有效成分。

(2)根据上述(1)所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，进一步含有酚化合物。

(3)根据上述(2)所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，所述酚化合物为多酚及/或香豆酸类。

(4)根据上述(3)所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，所述多酚为选自黄烷-3-醇聚合物、黄烷醇类、黄酮醇类、黄烷酮类、黄酮类、异黄酮类、花色素类、二氢黄酮醇类、二苯乙烯类、查尔酮类及水解性单宁中的1种以上的化合物。

(5)根据上述(2)～(4)中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，上述酚化合物为选自原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3、儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素、花旗松素、大豆黄酮、金雀异黄素、芹菜素、木犀草素、柑桔素、柑桔素查尔酮、山柰酚、芸香苷、槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、杨梅素、白皮杉醇、矮牵牛花色素、反式云杉新苷、鞣云实素、Stenophyllanin A、StenophyllaninB、木麻黄鞣宁、牛儿鞣素、特里马素I、长梗马兜铃素、旌节花素A、尤金弗罗林D2、1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,4,6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、β-葡萄糖没食子鞣苷、2-香豆酸及3-香豆酸中的1种以上的化合物。

(6)根据上述(1)～(5)中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，为经口用组合物。

(7)根据上述(6)所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，所述经口用组合物为饮食品、医药品或医药部外品。

(8)根据上述(1)～(7)中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，其用于整肠。

(9)根据上述(1)～(8)中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，其附有具整肠作用的主旨的标示。

(10)一种没食子酸的肠道屏障功能改善作用增强剂，其特征在于，含有酚化合物作为有效成分。

(11)一种肠道屏障功能改善方法，其特征在于，向对象投用没食子酸。

(12)一种没食子酸的应用，其特征在于，用于肠道屏障功能改善。

(13)一种增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用的方法，其特征在于，使没食子酸及酚化合物组合并向对象投用。

(14)一种酚化合物的应用，其特征在于，用于增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。

如果使用本发明的肠道屏障功能改善用组合物，则可改善肠道屏障功能。此外，如果使用本发明的肠道屏障功能改善作用增强剂，则可显著增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。本发明通过改善肠道屏障功能，也可有助于慢性炎症性疾病、过敏疾病等与肠道屏障功能异常相关的状态或疾病的预防或治疗。

具体实施方式

本发明的肠道屏障功能改善用组合物含有没食子酸作为有效成分。

没食子酸具有肠道屏障功能改善作用。没食子酸为葡萄、茶树等植物中所包含的成分，即使长时间摄取副作用也较少，安全性高。

没食子酸其来源或制造方法并无特别限定。例如可使用从植物中萃取的来自植物的没食子酸，也可使用由合成法获得的没食子酸。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物，进一步优选含有酚化合物。酚化合物可使用1种也可使用2种以上。

在本发明中，酚化合物是指没食子酸以外的具有酚性羟基的化合物或其糖苷。没食子酸不包含在本发明中的酚化合物中。

所谓糖苷，是指糖的羟基可与非糖质化合物进行糖苷键合的化合物。糖苷中的糖可为单糖，也可为双糖或其以上的复数糖，并无特别限定。糖的种类也无特别限定，可列举葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖等醛糖；果糖等酮糖；葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸等糖醛酸；芹菜糖、芸香糖等。此外，糖苷中的糖可为D体，也可为L体。

通过使没食子酸及酚化合物组合，可增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。从而，如果组合使用它们，则可达到优异的肠道屏障功能改善效果。由没食子酸及酚化合物的组合而获得的肠道屏障功能改善效果，与单独使用各成分所获得的效果所预测的相加效果相比，为显著优异的协同效应。

在本发明的一种方式中，肠道屏障功能改善用组合物，优选含有没食子酸及酚化合物作为有效成分的肠道屏障功能改善用组合物。

作为本发明中所使用的酚化合物，可列举多酚、香豆酸类。所谓多酚，是指在分子内有2个以上酚性羟基的化合物或其糖苷。作为香豆酸类，可列举对香豆酸、2-香豆酸、3-香豆酸、它们的糖苷。

作为多酚，优选黄烷-3-醇聚合物、黄烷醇类、黄酮醇类、黄烷酮类、黄酮类、异黄酮类、花色素类、二氢黄酮醇类、二苯乙烯类、查尔酮类、水解性单宁等。如果使用上述多酚，则可增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。

黄烷-3-醇聚合物，是以黄烷-3-醇为结构单元，通过使黄烷-3-醇在4-6位或4-8位缩合或聚合而键合的2聚体以上的聚合物。黄烷-3-醇聚合物为也被称为缩合型单宁的化合物。黄烷-3-醇聚合物可为聚合度不同的2种以上聚合物的混合物。在一种方式中，黄烷-3-醇聚合物也可具有没食子酰基。黄烷-3-醇聚合物的聚合度并无特别限定，例如可使用聚合度为2～30(2～30聚体)的黄烷-3-醇聚合物。在一种方式中，作为黄烷-3-醇聚合物，优选黄烷-3-醇的2聚体。作为黄烷-3-醇的2聚体，可列举原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3等。

作为黄烷醇类的化合物，可列举儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯等黄烷-3-醇；茶黄素等。在与没食子酸并用时，从增强肠道屏障功能改善作用的作用较强的观点出发，黄烷醇类中，优选儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素等。在一种方式中，在与没食子酸并用时，从能够获得更优异的肠道屏障功能改善效果的观点出发，更优选儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯等。

此外，本发明中的黄烷醇类中，不包含上述黄烷-3-醇聚合物。

作为黄酮醇类化合物，可列举槲皮素、杨梅素、山柰酚、它们的糖苷(槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷、芸香苷等)等。从增强肠道屏障功能改善作用的作用较强的观点出发，作为黄酮醇类优选槲皮素、山柰酚、它们的糖苷。

作为黄烷酮类化合物，可列举柑桔素、其糖苷等。

作为黄酮类化合物，可列举芹菜素、木犀草素、它们的糖苷等。

作为异黄酮类化合物，可列举大豆黄酮、金雀异黄素、它们的糖苷等。

作为花色素类化合物，可列举矮牵牛花色素、其糖苷等。

作为二氢黄酮醇类化合物，可列举花旗松素、其糖苷等。

作为二苯乙烯类化合物，可列举白皮杉醇、其糖苷(反式云杉新苷、顺式云杉新苷等)等。

作为查尔酮类化合物，可列举柑桔素查尔酮(4,2',4',6'-四羟基查尔酮)、其糖苷等。

作为水解性单宁，可列举没食子单宁、鞣花单宁。作为没食子单宁，例如可列举β-葡萄糖没食子鞣苷、1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,4,6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖。作为鞣花单宁，例如可列举鞣云实素(Corilagin)、特里马素I(Tellimagrandin I)、长梗马兜铃素(Pedunculagin)、旌节花素A(Praecoxin A)、牛儿鞣素(Geraniin)、Stenophyllanin A、StenophyllaninB、木麻黄鞣宁(Casuarinin)、尤金弗罗林D2(Eugeniflorin D2)。

在本发明的一种方式中，从可获得更高的肠道屏障功能改善效果的观点出发，作为酚化合物，优选黄烷-3-醇聚合物、黄烷醇类、鞣花单宁。此外，作为酚化合物，优选黄烷-3-醇聚合物(优选原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3等)、儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素、花旗松素、大豆黄酮、金雀异黄素、芹菜素、木犀草素、柑桔素、柑桔素查尔酮、山柰酚、芸香苷、槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、杨梅素、白皮杉醇、矮牵牛花色素、反式云杉新苷、鞣云实素、Stenophyllanin A、StenophyllaninB、木麻黄鞣宁、牛儿鞣素、特里马素I、长梗马兜铃素、旌节花素A、尤金弗罗林D2、1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,4,6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、β-葡萄糖没食子鞣苷、2-香豆酸、3-香豆酸，更优选原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3、儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素、花旗松素、2-香豆酸、大豆黄酮、金雀异黄素、芹菜素、木犀草素、柑桔素、柑桔素查尔酮、山柰酚、芸香苷、槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、矮牵牛花色素、反式云杉新苷、鞣云实素、Stenophyllanin A、牛儿鞣素、特里马素I、长梗马兜铃素、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、β-葡萄糖没食子鞣苷。如果将上述酚化合物与没食子酸并用，则可更加增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。

上述酚化合物，其来源或制造方法并无特别限定。例如可使用从植物萃取的来自植物的酚化合物，也可使用由合成法获得的酚化合物。优选使用来自植物的酚化合物。例如，黄烷-3-醇聚合物可从葡萄(优选葡萄种子)、可可、苹果、松、野樱莓、荔枝等植物中获得。黄烷醇类可从绿茶叶、红茶叶等中获得。水解性单宁，例如可通过如下方法获得：将含有水解性单宁的原料用水或含水乙醇萃取，将萃取液通过过滤、浓缩除醇后，进行管柱纯化。作为水解性单宁的原料，可使用含有水解性单宁的植物。作为含有水解性单宁的植物，例如可列举壳斗科(Fagaceae)、千屈菜科(Lythraceae)、桃金娘科(Myrtaceae)、蔷薇科(Rosaceae)的植物等。在这些植物中，含有很多水解性单宁。作为桃金娘科植物，优选蒲桃属(Syzygium)、桉树属(Eucalyptus)、昆士亚属(Kunzea)等的植物等。例如在桉树叶萃取物中，含有很多特里马素I、没食子单宁等水解性单宁。

酚化合物也可使用市售品。

在本发明中，所谓肠道屏障功能，是指防止从肠道上皮细胞外(肠道内)至体内的异物(例如内毒素等毒素、致炎物质、未消化物等)的侵入(透过)的功能。肠道包括大肠及小肠。将与正常状态相比从肠道上皮细胞外至体内的异物侵入受到促进的状态，称为肠道上皮细胞中的异物透过性上升(亢进)的状态。抑制肠道上皮细胞中的异物的透过性上升，以及使肠道上皮细胞中的异物的透过性降低均是肠道屏障功能改善所指的意思。此外，在本发明中，所谓肠道屏障功能改善，以包含抑制肠道屏障功能的降低、提高已降低的肠道屏障功能的意思而使用。

例如，通过对将肠道上皮细胞相互粘结的紧密连接进行正常化或强化，可改善肠道屏障功能。在一种方式中，本发明的肠道屏障功能改善用组合物，可用于通过对将肠道上皮细胞中的紧密连接进行正常化或强化而改善肠道屏障功能。

肠道屏障功能改善效果，例如可通过肠道上皮细胞的电阻值(跨上皮膜电阻值(transepithelial electric resistance:TEER))上升，或抑制TEER的降低而显示出来。使上述TEER上升或抑制其降低的物质，具有对肠道上皮细胞中的紧密连接进行正常化或强化的作用。此外，肠道屏障功能改善效果，还可通过从肠道上皮细胞的肠道侧透过体内侧的物质的量的减少而显示出来。本领域技术人员，可根据目的而选择肠道屏障功能改善效果的具体评价方法。例如，如后述实施例所示，可使用采用人肠道上皮细胞(Caco-2细胞)的肠道透过模型测定TEER的方法。具体而言，对Caco-2单层培养细胞添加促炎因子(TNFα、IL-1β、IFNγ等)，作出可在人类中使肠道屏障功能破坏的状态，如果通过被验物质的添加，与未添加该物质的情况相比抑制了TEER的降低，则可评价为该被验物质具有肠道屏障功能改善效果。

如实施例所示，没食子酸在使用Caco-2细胞的肠道透过模型中，会抑制因促炎因子的添加所致的TEER的降低，具有肠道屏障功能作用。没食子酸可对肠道上皮细胞中的紧密连接进行正常化或强化而改善肠道屏障功能。此外，如实施例所示，没食子酸及酚化合物的组合，可发挥更优异的肠道屏障功能改善效果。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物，通过含有没食子酸作为有效成分而达到肠道屏障功能改善效果。此外，如果肠道屏障功能改善用组合物含有酚化合物，则肠道屏障功能改善效果得到增强，可达到更优异的肠道屏障功能改善效果。

因此，本发明的肠道功能改善用组合物，有用于预防或改善肠道屏障功能的改善为有效的状态或疾病，例如与肠道屏障功能异常相关的状态或疾病。肠道屏障功能异常包括肠道屏障功能的降低。作为与肠道屏障功能异常相关的状态或疾病，可列举起因于肠道屏障功能异常的状态或疾病，或伴随着肠道屏障功能异常的状态或疾病。作为此种与肠道屏障功能异常相关的状态或疾病，例如可列举炎性肠疾病、过敏性肠症候群、全身性自身免疫性疾病(类风湿性关节炎、红斑狼疮等)、过敏(食物过敏、花粉症等)、生活习惯病(肥胖、1型或2型糖尿病、高血压、高血脂症、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、动脉硬化等)等(例如Camilleri et al.,Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 303:G775-G785,2012；Mu et al.,Front.Immunol.,Vol.8,Article 598,2017；Bischoff et al.,BMCGastroenterology 2014 14:189)。

作为与肠道屏障功能异常相关的状态或疾病的更具体的症状之一例，可列举腹泻、便秘、肚子(腹部)的不快感(膨胀感、咕噜咕噜感、腹痛等)等症状。本发明的肠道屏障功能改善用组合物，具有通过改善肠道屏障功能而改善肠道状态的作用。从而，本发明的肠道屏障功能改善用组合物，可通过肠道屏障功能改善来调节肠的状况，有用于预防或改善如上所述的肠道症状。在一种方式中，本发明的肠道屏障功能改善用组合物可用于整肠(例如用于预防或改善腹泻、便秘、腹部的不快感等)。本发明的肠道屏障功能改善用组合物，通过改善肠道屏障功能而有用于整肠。此外，肠道屏障功能异常也与生活习惯病等相关(例如上述Bischoff et al.,BMC Gastroenterology 2014 14:189)。改善肠道屏障功能，对生活习惯病的预防或改善也较有效。作为生活习惯病的症状，可列举糖代谢异常、脂质代谢异常、体脂肪增加、内脏脂肪增加、腹围脂肪增加、较高的血压等。从而，本发明的肠道屏障功能改善用组合物，也可通过改善肠道屏障功能而有助于糖代谢的改善、脂质代谢的改善、体脂肪、内脏脂肪、腹围脂肪等的脂肪减少或增加抑制、较高的血压的改善等。

本说明书中提及“状态或疾病的预防”时，是指提高对象对状态或疾病的抵抗性、延迟或防止状态或疾病的发病。此外，本说明书中提及“状态或疾病的改善”时，是指使对象从状态或疾病中恢复、减轻状态或疾病的症状、延迟或防止状态或疾病的进展。

本发明的组合物，适用于治疗用途(医疗用途)或非治疗用途(非医疗用途)均可。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物，例如能够以饮食品、医药品、医药部外品、饲料等形态提供，但并不限定于此。本发明的肠道屏障功能改善用组合物可以是其本身为饮食品、医药品、医药部外品、饲料等，也可以是在这些产品中所使用的添加剂等制剂、材料。作为一例，本发明的肠道屏障功能改善用组合物，能够以药剂的形态提供，但并不限定于本形态。也可将该药剂直接作为组合物或作为含有该药剂的组合物来提供。

在一种方式中，本发明的肠道屏障功能改善用组合物优选为经口用组合物。根据本发明，可提供具有优异的肠道屏障功能改善作用的经口用组合物。作为经口用组合物，可列举饮食品、医药品、医药部外品，优选为饮食品。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物，只要不损害本发明的效果，也可含有上述没食子酸及任意调配的酚化合物以外的成分(其他成分)中的1种或2种以上。

在一种方式中，作为其他成分，例如还可含有乳酸菌、双歧杆菌、食物纤维、多糖类等。

乳酸菌及双歧杆菌优选可经口摄取的菌。

上述食物纤维，为非水溶性的食物纤维、水溶性的食物纤维均可。作为非水溶性的食物纤维，可例示纤维素、木质素、半纤维素、小麦麦麸、苹果纤维、甘薯纤维、甲壳素等。水溶性食物纤维，大致区分为高粘性物和低粘性物，作为高粘性物，可列举果胶、蒟蒻甘露聚糖、海藻酸、海藻酸钠、瓜尔胶、洋菜等。在日本国内一般所知的食物纤维中，所谓低粘性物的水溶性食物纤维，是指称含有50重量％以上食物纤维且溶解于常温水而成为低粘性溶液并且在大约5重量％水溶液中显示20mPa·s以下的粘度的溶液的食物纤维材料。作为水溶性食物纤维的低粘性物，可列举难消化性糊精、聚葡萄糖、瓜尔胶分解物、Litesse(聚葡萄糖)等。除此之外，满足低粘性、水溶性条件的食物纤维材料皆可包含在内。食物纤维可使用1种，也可使用2种以上。

作为上述多糖类，可列举半乳寡糖、木寡糖、甘露寡糖、琼脂寡糖、果寡糖、异麦芽寡糖、棉子糖等寡糖。这些可使用1种，也可使用2种以上。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物，除上述以外，还可含有任意添加剂、任意成分。这些添加剂及成分，可根据肠道屏障功能改善用组合物的形态进行选择，一般可使用可用于饮食品、医药品、医药部外品、饲料等中的添加剂及成分。例如，作为经口投用剂，可例示在饮食品中或药学上允许的各种添加剂，例如赋形剂、润滑剂、稳定剂、分散剂、粘合剂、稀释剂、香味剂、甜味剂、风味剂、着色剂等。例如，将本发明的肠道屏障功能改善用组合物制成经口用组合物时，在不损害本发明效果的范围内，除上述以外，还可适当含有维生素、维生素样物质、蛋白质、氨基酸、油脂、有机酸、碳水化合物、来自植物的原料、来自动物的原料、微生物、饮食品用添加剂、医药品用添加剂等可经口摄取的成分。

除上述以外，还可根据其用途而适当调配在饮食品、医药品、医药部外品、饲料等中所使用的材料等成分。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物的形态，只要具有本发明的效果则没有特别限定，例如可列举片剂、丸剂、颗粒剂、细粒剂、咀嚼剂、胶囊剂(包括软胶囊剂、硬胶囊剂)、液剂、口嚼剂、饮料等。也可以是其他食品的形态。它们的投用形态，可使用该领域中通常所知的惯用方法来调制。

在一种方式中，在将本发明的肠道屏障功能改善用组合物制成饮食品时，可在没食子酸及任意调配的酚化合物中调配可用于饮食品的成分(例如饮食品材料、根据需要所使用的添加剂等)，从而制成各种饮食品(饮食品组合物)。饮食品并无特别限定，例如可列举一般的饮食品、健康食品、功能性标示食品、特定保健用食品、病人用食品、食品添加剂、它们的原料等。饮食品的形态也无特别限定，可制成片剂、包衣片剂、细粒剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂(包括软胶囊剂、硬胶囊剂)、干糖浆剂、口嚼剂等经口用固体制剂；内服液剂、糖浆剂等经口用液体制剂的各种制剂形态。在本发明的一种方式中，饮食品也可包含上述乳酸菌、双歧杆菌、食物纤维、多糖类中的1种或2种以上。

将本发明的肠道屏障功能改善用组合物制成医药品或医药部外品时，可在没食子酸及任意调配的酚化合物中调配药学上允许的赋形剂等添加剂，从而制成各种剂型的医药品(医药组合物)或医药部外品(医药部外品组合物)。医药品或医药部外品的投用形态，优选为经口投用。医药品或医药部外品的剂型，只要制成适于投用形态的剂型即可。作为经口用医药品或医药部外品的剂型，例如可列举片剂、包衣片剂、细粒剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂(包括软胶囊剂、硬胶囊剂)、干糖浆剂、口嚼剂等经口用固体制剂；内服液剂、糖浆剂等经口用液体制剂。

在片剂、丸剂及颗粒剂的情况下，也可根据需要制成施加了惯用的药皮的剂型，例如糖衣片、明胶包封剂、肠溶包封剂、膜衣剂等，此外片剂也可制成双重片等多层片。

将本发明的肠道屏障功能改善用组合物制成饮食品、医药品、医药部外品、饲料等时，其制造方法并无特别限定，可使用没食子酸及任意调配的酚化合物，通过一般方法制造。本发明也包括没食子酸用于制造肠道屏障功能改善用组合物的应用。本发明还包括没食子酸及没食子酸以外的酚化合物用于制造肠道屏障功能改善用组合物的应用。

在本发明中，可使用含有没食子酸及酚化合物的植物萃取物来调配肠道屏障功能改善用组合物。含有没食子酸及酚化合物的植物萃取物并无特别限定，例如可使用葡萄种子萃取物、绿茶萃取物、乌龙茶萃取物、红茶萃取物、桉树萃取物、番石榴萃取物、甜茶萃取物、蔷薇果萃取物等。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物中，也可在包装、容器或说明书等中标示用途、有效成分的种类、上述效果、使用方法(例如摄取方法、投用方法)等中的1种或2种以上。本发明的肠道屏障功能改善用组合物中，也可附有具肠道屏障功能改善作用或基于肠道屏障功能改善作用的作用的主旨的标示。作为此种标示，例如也可附有具整肠作用的主旨的标示。

整肠作用只要是基于肠道屏障功能的改善的整肠作用即可，并无特别限定。作为上述具有整肠作用的主旨的标示之一例，可列举“针对稍微便秘或腹泻者”、“针对在意肚子的状况者”、“针对容易感觉到肚子的不快感者”、“改善通便”、“改善便的状态”、“改善排便次数”、“改善排便量”、“使肚子舒畅”、“调整肚子的状况”、“调整肠的状况”、“改善肚子的不快感”、“缓和气体的产生”、“缓和肚子胀”、“缓和肚子的咕噜咕噜感”等。本发明的肠道屏障功能改善用组合物中，也可附有此种标示中的1种或2种以上。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物中的没食子酸含量，可根据该组合物的形态等进行适当设定。在一种方式中，将肠道屏障功能改善用组合物制成饮食品、医药、医药部外品等经口用组合物时，没食子酸的含量在组合物中优选为0.0001重量％以上，更优选为0.001重量％以上，此外，优选为10重量％以下，更优选为1重量％以下。在一种方式中，没食子酸的含量在肠道屏障功能改善用组合物中，优选为0.0001～10重量％，更优选为0.001～1重量％。

没食子酸的含量，可依照公知方法测定，例如可用HPLC法等。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物含有酚化合物时，没食子酸及酚化合物的含量比(没食子酸/酚化合物)，以摩尔比计优选为0.1～10，更优选为0.3～5。如果以上述比例使用没食子酸及酚化合物，则可更加提高肠道屏障功能改善效果。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物，可以以对应其形态的适当方法摄取或投用。本发明的肠道屏障功能改善用组合物优选为经口投用或经口摄取。

本发明的肠道屏障功能改善用组合物的摄取量(也可称为投用量)并无特别限定，只要是可获得肠道屏障功能改善效果的量即可，且只要根据投用形态、投用方法等进行适当设定即可。作为一种方式，在以人(成人)为对象，使其经口投用或摄取时，肠道屏障功能改善用组合物的摄取量，以没食子酸的摄取量计，每1日优选为0.01～500mg，更优选为0.1～300mg，进一步优选为1～100mg。优选将上述量例如1日1次或分2～3次经口投用或摄取。在以将人(成人)作为对象获得肠道屏障功能改善效果为目的而摄取肠道屏障功能改善用组合物时，优选以没食子酸的摄取量成为上述范围的方式，经口使对象摄取或向对象投用肠道屏障功能改善用组合物。

在一种方式中，本发明的肠道屏障功能改善用组合物，考虑到其投用形态、投用方法等，优选含有可获得本发明所期望的效果的量，即有效量的没食子酸。作为一种方式的例子，在肠道屏障功能改善用组合物为经口用组合物时，该组合物的成人每1人1日的摄取量中，没食子酸的含量优选为0.01～500mg，更优选为0.1～300mg，进一步优选为1～100mg。在本发明的一种方式中，肠道屏障功能改善用组合物，优选除了含有上述量的没食子酸外，还含有酚化合物。

投用或摄取本发明的肠道屏障功能改善用组合物的对象(以下也简称为投用对象)，优选为人、人以外的动物，更优选为哺乳动物(人及非人哺乳动物)，进一步优选为人。此外，作为本发明中的投用对象，优选为需要或希望肠道屏障功能改善的对象。作为适当的对象，例如可列举肠道屏障功能降低的对象、希望预防或改善上述与肠道屏障功能异常相关的状态或疾病的对象等。

本发明还包括以下肠道屏障功能改善方法等。

一种肠道屏障功能改善方法，其为向对象投用没食子酸。

在上述肠道屏障功能改善方法中，进一步优选投用酚化合物。通过使没食子酸及酚化合物组合并投用，可获得优异的肠道屏障功能改善效果。酚化合物的优选方式与肠道屏障功能改善用组合物的情况相同。

在投用没食子酸及酚化合物时，可将它们分别投用，也可同时投用。优选同时投用没食子酸及酚化合物。可直接投用没食子酸及任意使用的酚化合物，也可投用含有没食子酸等的组合物。例如，可投用上述本发明的肠道屏障功能改善用组合物。

本发明还包括以下应用。

一种没食子酸的应用，其用于肠道屏障功能改善。

在上述应用中，优选使用没食子酸及酚化合物。

在上述肠道屏障功能改善方法及应用中，没食子酸、任意使用的酚化合物、对象(投用对象)、投用方法、投用量以及它们的优选方式等，与上述肠道屏障功能改善用组合物的情况相同。

例如，没食子酸的投用量，只要为可获得肠道屏障功能改善效果的量即有效量即可，并无特别限定。例如可投用上述量的没食子酸。在使用酚化合物时，没食子酸与酚化合物的比例(没食子酸/酚化合物)，以摩尔比计优选为0.1～10、更优选为0.3～5。如果没食子酸及酚化合物的比例在上述范围，则可更加提高肠道屏障功能改善效果。

如上所述，通过组合使用没食子酸及酚化合物，可增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。上述酚化合物，可用于增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。

本发明的另一种方式为含有酚化合物作为有效成分的没食子酸的肠道屏障功能改善作用增强剂；酚化合物用于增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用的应用。

本发明，还包括增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用的方法，其为使没食子酸及酚化合物组合并向对象投用。

在肠道屏障功能改善作用增强剂及增强肠道屏障功能改善作用的方法等中，酚化合物及其优选方式等，与上述肠道屏障功能改善用组合物的情况相同。没食子酸及酚化合物的使用量的优选比例也与上述肠道屏障功能改善用组合物的情况相同，没食子酸及酚化合物的摩尔比(没食子酸/酚化合物)优选为0.1～10，更优选为0.3～5。如果没食子酸及酚化合物的比例在上述范围，则可更加增强肠道屏障功能改善作用。

上述方法及应用，可为治疗的方法及应用，也可为非治疗的方法及应用。所谓“非治疗”，为不包含医疗行为即手术、治疗或诊断的概念。

实施例

以下示出更具体地说明本发明的实施例。另外，本发明并不仅限定于这些实施例。

＜肠道屏障功能改善作用的评价方法＞

在实施例中，被验化合物(以下称样品)的肠道屏障功能改善作用，用Caco-2细胞由以下方法进行评价。

使用Caco-2细胞的改善肠道屏障功能的成分的评价

使用DMEM(达尔伯克改良伊格尔培养基)，用转移板(Transwell)(Millicell公司制)于37℃培养Caco-2细胞3周。从培养了Caco-2细胞的培养板中除去培养基，用不含血清的DMEM将微孔各清洗3遍，并用该培养基填满微孔。其后通过Millicell-ERS(Millipore公司制)测定Caco-2单层细胞的跨上皮电阻(TEER)，选出经判断为形成充分的紧密连接的细胞(TEER≧1000Ω·cm²)，用于随后的筛选。接下来，在粘膜侧、基底膜侧两者的试验液(培养基)中添加样品和TNFα(40ng/mL)、IL-1β(20ng/mL)以及IFNγ(10ng/mL)，培养48小时。另外，样品是溶解于二甲亚砜(DMSO)后再添加于试验液中。此时，将未添加促炎因子(TNFα、IL-1β及IFNγ)及样品的微孔作为正常来设置。此外，将添加了促炎因子但未添加样品的微孔作为对照来设置。培养后再次测定TEER，评价样品是否抑制促炎因子所致的TEER的降低(减少)。

由添加样品的微孔、正常及对照的TEER值通过下式求得样品所致的TEER降低抑制率(％)。

(TEER降低抑制率的计算式)

TEER降低抑制率(％)＝100×((添加样品的微孔的TEER)-(对照的TEER))/((正常的TEER)-(对照的TEER))

在该评价系统中，TEER降低抑制率(％)越高肠道屏障改善作用越强。

＜实施例1＞

使用没食子酸作为样品，用上述评价方法评价Caco-2细胞中的肠道屏障功能改善作用。没食子酸(NacalaiTesque株式会社)以使试验液中的浓度成为100μM(μmol/L)的形式进行添加。

作为参考，用100μM槲皮素(Funakoshi株式会社)代替没食子酸添加至试验液中，同样地评价肠道屏障功能改善作用。针对槲皮素，已报道紧密连接屏障功能改善作用(非专利文献1)。

其结果，TEER降低抑制率，没食子酸为86.5％，槲皮素为75.0％。已确认没食子酸在100μM下与同浓度的槲皮素相比，TEER降低抑制率高1.15倍左右。

＜实施例2＞

在评价1～4中，使用没食子酸及以下酚化合物作为样品。

评价1：儿茶素(CA)(和光纯药工业株式会社)

评价2：表儿茶素(EC)(和光纯药工业株式会社)

评价3：没食子儿茶素(GC)(和光纯药工业株式会社)

评价4：表没食子儿茶素(EGC)(和光纯药工业株式会社)

实施例2中使用的酚化合物为黄烷醇类。

在评价1～4中，针对各评价系统中(i)～(iii)所示的样品，以上述评价方法评价Caco-2细胞中的TEER降低抑制率(％)。

(i)酚化合物(CA、EC、GC或EGC)(1μM)

(ii)没食子酸(GA)(1μM)

(iii)酚化合物(1μM)及没食子酸(1μM)并用(酚化合物+GA)

样品以使试验液中的浓度成为上述浓度的形式添加于试验液中。将评价结果示于表1。

[表1]

表1所示的相对值，为在评价1～4中，将在各评价系统中所使用的(i)酚化合物的TEER降低抑制率(％)设为1.0时的(i)～(iii)的TEER降低抑制率(％)的相对值。

针对(iii)酚化合物及没食子酸的并用，示出了由实际评价中所得的TEER降低抑制率(实测值：M.V.)计算出的相对值((iii)的TEER降低抑制率(实测值)/(i)酚化合物的TEER降低抑制率)，作为实测值(酚化合物+没食子酸(实测值))的相对值。此外，将(i)酚化合物的TEER降低抑制率与(ii)没食子酸的TEER降低抑制率之和((i)的TEER降低抑制率+(ii)的TEER降低抑制率)作为酚化合物及没食子酸并用时的TEER降低抑制率的“理论值”(T.V.)。将该TEER降低抑制率的理论值除以(i)酚化合物的TEER降低抑制率而得的值，作为理论值的相对值(酚化合物+没食子酸(理论值))示于表1。

表1中的协同效应，由(iii)的实测值的相对值及理论值的相对值，通过以下计算式算出。

协同效应＝(实测值的相对值)/(理论值的相对值)

针对表1所示的结果，列举使用儿茶素作为酚化合物的评价1为例进行说明。

相对值是将(i)儿茶素(CA)的TEER降低抑制率设为1.0时的TEER降低抑制率的相对值。(ii)没食子酸(GA)的TEER降低抑制率的相对值为0.4。儿茶素及没食子酸并用(CA+GA)时的TEER降低抑制率的理论值的相对值((CA+GA)(理论值))为1.4。该理论值的相对值是将(i)CA的TEER降低抑制率及(ii)GA的TEER降低抑制率之和((i)+(ii))除以(i)CA的TEER降低抑制率而求得。由实际评价中所得的(iii)(CA+GA)的TEER降低抑制率计算出的实测值的相对值((CA+GA)(实测值))为2.8。协同效应是将上述实测值的相对值(2.8)除以理论值的相对值(1.4)而求得。

由表1发现：(iii)没食子酸与上述酚化合物并用所获得的肠道屏障功能改善效果(实测值)，比(ii)没食子酸单独使用时肠道屏障功能改善效果加上(i)该酚化合物单独使用时的肠道屏障功能改善效果所得的计算上的效果(理论值)更高。

＜实施例3＞

用上述使用Caco-2细胞的评价方法，使用没食子酸及表2～表3所示的酚化合物作为样品，评价肠道屏障功能改善效果(评价5～43)。

与实施例2同样地在各评价系统中将以下(i)～(iii)作为样品，评价TEER降低抑制率(％)。

(i)酚化合物(表2所示的化合物为10μM；表3所示的化合物为1μM)

(ii)没食子酸(在表2所示的化合物的评价系统中为10μM；在表3所示的化合物的评价系统中为1μM)

(iii)酚化合物及没食子酸的并用(在表2所示的化合物的评价系统中分别为10μM；在表3所示的化合物的评价系统中分别为1μM)

样品以使试验液中的浓度成为上述浓度的形式添加于试验液中。

针对(iii)酚化合物及没食子酸的并用，将上述评价中所得的TEER降低抑制率(实测值：M.V.)作为“+没食子酸(实测值)”示于表2及表3。

此外，与实施例2同样地将(i)酚化合物的TEER降低抑制率与(ii)没食子酸的TEER降低抑制率之和((i)的TEER降低抑制率+(ii)的TEER降低抑制率)作为酚化合物及没食子酸并用时的TEER降低抑制率的“理论值”(酚化合物及没食子酸并用时的TEER降低抑制率的理论值)。将该TEER降低抑制率的理论值作为“+没食子酸(理论值)”示于表2及表3中。

表2及表3所示的协同效应，由“+没食子酸(实测值)”(M.V.)及“+没食子酸(理论值)”(T.V.)用下式算出。

协同效应＝(+没食子酸(实测值)(M.V.))/(+没食子酸(理论值)(T.V.))

将结果示于表2及表3。表2及表3中，“酚化合物”为各评价系统中所使用的酚化合物。

表2为酚化合物及没食子酸的试验液中的浓度分别为10μM的结果。表3为酚化合物及没食子酸的试验液中的浓度分别为1μM的结果。另外，单独使用没食子酸时(上述(ii))，没食子酸的1μM及10μM浓度皆在Caco-2细胞中抑制由促炎因子所致的TEER的降低。

[表2]

[表3]

针对表2及表3所记载的酚化合物，(iii)的与没食子酸并用所获得的肠道屏障功能改善效果(实测值)，也比(ii)没食子酸单独使用时的肠道屏障功能改善效果加上(i)该酚化合物单独使用时的肠道屏障功能改善效果所得的计算上的效果(理论值)更高。

表2所记载的酚化合物使用以下制造商的试剂。

原花青素B1：AdooQ BioScience公司

原花青素B2：Toronto Research Chemicals Inc.

原花青素B3、槲皮素、槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷、柑桔素：Funakoshi株式会社

2-香豆酸、3-香豆酸：ChromaDex公司

金雀异黄素：SIGMA公司

芹菜素、木犀草素、山柰酚、杨梅素、花旗松素：EXTRASYNTHESE公司芸香苷、反式云杉新苷：Nacalai Tesque株式会社

大豆黄酮、氯化矮牵牛素：Cayman Chemical Company

儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯：和光纯药工业株式会社

茶黄素：Cosmo Bio株式会社

白皮杉醇：东京化成工业株式会社

柑桔素查尔酮(4,2',4',6'-四羟基查尔酮)：Carbosynth Limited

表3所记载的水解性单宁中，鞣云实素使用SIGMA公司制的产品，β-葡萄糖没食子鞣苷使用Carbosynth(CAB)公司制的产品。对于除此之外的水解性单宁，使用从植物纯化的物质(纯度皆为90％以上)。例如特里马素I及没食子单宁从山灰桉(Eucalyptuscypellocarpa)的叶子中纯化而得。牛儿鞣素是从中日老鹳草(Geranium thunbergii)的叶子中纯化而得。对于其他水解性单宁，使用从昆士亚(Kunzea ambigua)的叶、互生叶白千层(Melaleuca alternifolia)等桃金娘科植物纯化而得的物质。从植物中纯化水解性单宁，可用文献(笠岛直树，“Kunzea ambigua及Eucalyptus cypellocarpa的成分研究”(发刊2005年9月，博士论文，冈山大学)的76-95页)中所记载的方法进行。将表3所记载的水解性单宁的结构示于表4及5。

[表4]

[表5]

工业实用性

本发明的肠道屏障功能改善用组合物等在饮食品领域、医药领域等中有用。

Claims

1.一种肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，含有没食子酸作为有效成分。

2.根据权利要求1所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，进一步含有酚化合物。

3.根据权利要求2所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，所述酚化合物为多酚及/或香豆酸类。

4.根据权利要求3所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，所述多酚为选自黄烷-3-醇聚合物、黄烷醇类、黄酮醇类、黄烷酮类、黄酮类、异黄酮类、花色素类、二氢黄酮醇类、二苯乙烯类、查尔酮类及水解性单宁中的1种以上的化合物。

5.根据权利要求2～4中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，所述酚化合物为选自原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3、儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素、花旗松素、大豆黄酮、金雀异黄素、芹菜素、木犀草素、柑桔素、柑桔素查尔酮、山柰酚、芸香苷、槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、杨梅素、白皮杉醇、矮牵牛花色素、反式云杉新苷、鞣云实素、Stenophyllanin A、StenophyllaninB、木麻黄鞣宁、牛儿鞣素、特里马素I、长梗马兜铃素、旌节花素A、尤金弗罗林D2、1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1,2,3,4,6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、β-葡萄糖没食子鞣苷、2-香豆酸及3-香豆酸中的1种以上的化合物。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，为经口用组合物。

7.根据权利要求6所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，所述经口用组合物为饮食品、医药品或医药部外品。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，其用于整肠。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的肠道屏障功能改善用组合物，其特征在于，其附有具整肠作用的主旨的标示。

10.一种没食子酸的肠道屏障功能改善作用增强剂，其特征在于，含有酚化合物作为有效成分。

11.一种肠道屏障功能改善方法，其特征在于，向对象投用没食子酸。

12.一种没食子酸的应用，其特征在于，用于肠道屏障功能改善。

13.一种增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用的方法，其特征在于，使没食子酸及酚化合物组合并向对象投用。

14.一种酚化合物的应用，其特征在于，用于增强没食子酸的肠道屏障功能改善作用。