CN111499681A - 一种柠檬苦素的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：预处理，将柠檬籽和柠檬皮渣加入水浸泡，加入预处理酶分解杂质；提取，将预处理产物加入提取酶进行酶解，同时加入酸进行酸解，固液分离，去除固体残渣，留下液体，得到初产物；去除果胶，将初产物真空浓缩，加酒精醇沉，分离絮状物沉淀，留下液体；提纯，先进行萃取，然后使用大孔树脂分离。本发明提取方法设计合理，各个步骤相互关联，逐一去除杂质，萃取和大孔树脂分离联合使用，并且先进行萃取然后再进行大孔树脂分离，结合了两种分离的有点，分离效率高，产品纯度高。
Description
技术领域
本发明属于生物医疗技术领域，涉及一种植物天然药物成分的提取技术领域，具体涉及一种柠檬苦素的提取方法及其应用。
背景技术
柠檬苦素，又称为黄柏内酯、吴茱萸内酯，具有抗肿瘤、昆虫拒食、抗病毒、镇痛、抗炎、催眠等多种生物活性，是一种重要的天然药物原料，可用于治疗肺炎、功能性食品添加剂、抗癌食品、杀虫剂、饲料添加剂等。目前，提取分离柠檬苦素采用多次萃取、多次柱层析和制备液相的方法，这种提取方法较为繁琐，且提取率低。
CN102442916A公开了一种向天果中柠檬苦素类化合物C的分离纯化方法，具体公开了 (1)以干燥的向天果为原料，粉碎过筛得粉末；(2)将上述粉末加入到醇类溶剂中，采用索氏提取器提取2-3小时，过滤，取上清液；(3)将上清液加入到大孔吸附树脂XDA-7中，吸附2-3小时后，水洗树脂柱，再用体积比例为6:3:1的乙醇-丙酮-正己烷的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得初产物；(4)将初产物用乙醇回流溶解，放置结晶，过滤后再用低极性溶剂洗涤2次并干燥，得到柠檬苦素类化合物C。该方法产物损失大，而且提取的成本高，还存在改进的空间。
CN102442916A公开了从柑橘落果中提取天然活性产物的方法，具体公开了采用干燥后粉碎至20-100目的柑橘落果为原料，按重量/体积比1∶10-1∶50加入50-90％的乙醇在40-80℃下回流提取1-3h，过滤，滤液回收乙醇，得浓缩液备用；将该浓缩液加入少量氯仿结晶后，加水分层，将水层直接加热到75℃，过滤，加0.1mol/L的盐酸调节pH至3-4进行沉淀得橙皮苷粗品；将所得的氯仿层溶液旋干，加入适量丙酮结晶，真空干燥得辛弗林粗品；将结晶过滤后的丙酮溶液旋干，加入二氯甲烷溶解，过滤，按体积比1∶2向溶液中加入异丙醇，结晶得柠檬苦素粗品。利用高压液相色谱法对所得三种活性产物进行了定性和定量分析，其中以橙皮苷的纯度最高，为91.41％。该方法加入了丙酮、氯仿等化学溶剂作为提取物，所得到的产品，不能够直接用作医药，特别是用作食品药品直接被人体内服，还有待进一步改进。
综上所述，现有技术仍缺乏一种提取效率高、提取方法好的沥青基防水胶料。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，改进了从柑橘中提取柠檬苦素的方法，提取的产物保留天然环保的特性，能够直接用于医药用途，本发明的技术方案如下。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理；将柠檬籽和柠檬皮渣加入水浸泡，加入预处理酶分解杂质；
(2)提取：将预处理的产物加入提取酶进行酶解，同时加入酸进行酸解，
(3)固液分离：去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶：将初产物真空浓缩，然后醇沉，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯：萃取，将步骤(4)获得的溶液作为提取液加入萃取剂进行萃取，萃取完成后分离萃取液，合并萃取液使用旋转蒸发设备去除萃取剂，随后利用大孔树脂分离，即将旋转蒸发后的产物溶解并加入大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，之后水洗大孔树脂并使用洗脱剂解吸，收集解吸液并进行真空干燥，即可得到柠檬苦素成品。
柠檬苦素主要存在于柠檬籽和柠檬皮渣等植物组织中，本发明第一步是处理原材料，将植物组织附带的多糖和蛋白等杂志去除到；第二步是处理植物的细胞壁，通过分解细胞壁的纤维素使得果胶分子解离出来，在这个过程中柠檬苦素、柑橘黄酮、小分子植物单糖和各种分子量的果胶都会被释放；第三步是固液分离，将植物固体残渣排除，得到初产物；第四步是去除大分子果胶和其他大分子杂质，加酒精醇沉，会让大分子失去溶解能力，大分子果胶沉淀，分离絮状物沉淀；第四步提纯，首先是萃取，去除柑橘黄酮，根据实践判断，初产物中柑橘黄酮的含量是比柠檬苦素的含量高10倍以上，柠檬苦素分子量470，柑橘黄酮的分子量1000左右，二者利用极性的差异萃取是最好的办法；去除了柑橘黄酮之后，剩下的小分子果胶和小分子多糖，通过大孔树脂分离，这个主要利用树脂的吸附能力的差异进行处理。
本发明萃取和大孔树脂分离联合使用，并且先进行萃取然后再进行大孔树脂分离，萃取和大孔树脂分离是两种成分是分离方法，萃取分离效率高，操作成本低，大孔树脂分离产物纯度高，但是产物损失大，因此，先进行萃取，再进行大孔树脂吸附就能得到高纯度的产物，并且提高分解效率。特别是如果不分离柑橘黄酮，那么大孔树脂分离就没有好的效果，会造成产物损失，可能是柑橘黄酮的存在会增大解析的难度，使得柠檬苦素难以大量从大孔树脂上解吸处理。因此，本发明先进行萃取在进行大孔树脂吸附，得到药用的高纯度柠檬苦素。
作为优选，所述步骤(5)中提取液与萃取剂的体积比1：(1-3)，萃取时间为15-40分钟，萃取1-3次，所述萃取剂为二氯甲烷溶液。
作为优选，所述步骤(5)中所述洗脱剂为无水乙醇，所述大孔树脂为HPD100型大孔树脂、HPD600型大孔树脂、HPD722型大孔树脂、HPD750型大孔树脂中的一种。
作为优选，所述步骤(3)中初产物会静置7-14天。
本申请人长期实践中发现，包含柠檬苦素、柑橘黄酮和各种分子量果胶的初产物，进行放置后，柑橘黄酮随着时间分解，会分解一部分，柠檬苦素放置一段时间，随着时间的增长会增加一些量。查询理论后认为，柠檬苦素大量存在籽里面，分子量470左右，在植物中是存在很多前体还没有继续反应生成柠檬苦素，但是在植物体中不需要那么多的量，所以就没有继续生产，但是在植物组织破坏后柠檬苦素的前体没有收到限制，就可以不断产生。柑橘黄酮是花青素的一种，是光合作用的必需品，在植物中含量是非常高的，随着植物组织的破坏，他就开始慢慢的分解，像放久的植物会褪色一般。因此，放置一段时间，是一个看是简单却非常有效的工艺方法，能够有效提高柠檬苦素的产率，并降低分离的难度。但是，也不能长时间放置，毕竟柠檬苦素不能无限增长，而且放久后待处理溶液会发生微生物感染的风险。
作为优选，所述步骤(1)中预处理柠檬籽和柠檬皮渣与水的重量比为1:(9-20)，所述预处理酶包括淀粉酶、蛋白酶，所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶,所述淀粉酶为化学名称为1,4-α-D-葡聚糖水解酶。
作为优选，所述步骤(2)中提取酶为诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，加入量为预处理重量的0.1-1％，提取时间为0.5-2小时，所述酸为硝酸，酸解过程中反应体系的pH为2-4，提取时间为0.5-2小时。
作为优选，所述步骤(3)中固液分离使用设备为板框式过滤机。
作为优选，所述步骤(4)中用乙醇和异丙醇的混合溶液进行醇沉，乙醇和异丙醇的体积比为(3-5):1，所述乙醇的浓度不小于96％，所述异丙醇的浓度不小于94％。
本发明还保护柠檬苦素的用途，所述用途包括用于制备功能性饮料和药物。
作为优选，所述用途包括肺炎治疗和康复、肝脏治疗和康复的药物制备。
本发明的有益效果有：
(1)本发明提取方法设计合理，各个步骤相互关联，逐一去除杂质，得到高纯度的药用柠檬苦素；
(2)本发明萃取和大孔树脂分离联合使用，并且先进行萃取然后再进行大孔树脂分离，结合了两种分离的有点，分离效率高，产品纯度高；
(3)本发明将初产物放置一段时间，能够有效提高柠檬苦素的产率，并降低柑橘黄酮的含量，有效降低了分离的难度。
具体实施方式
发明实施例1
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡，加入10gCelluclast1.5L 纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶,5g 1,4-α-D-葡聚糖水解酶分解杂质；
(2)提取，将预处理产物加入2g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理1小时，随后加入硝酸处理1小时，酸解过程中反应体系的pH为3；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液先按体积比1:1加入二氯甲烷溶液萃取30分钟，萃取 3次，合并萃取液使用旋转蒸发设备挥去萃取剂，将旋转蒸发后的产物加入水溶解至500ml，并加入40gHPD750型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为A1。
发明实施例2
本实施例与实施例1不同之处在于，萃取工艺不用。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡，加入10gCelluclast1.5L 纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶,5g 1,4-α-D-葡聚糖水解酶分解杂质；
(2)提取，将预处理产物加入1g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理2小时，随后加入硝酸处理2小时，酸解过程中反应体系的pH为4；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液先按体积比1:3加入二氯甲烷溶液萃取30分钟，萃取 3次，合并萃取液使用旋转蒸发设备挥去萃取剂，将旋转蒸发后的产物加入水溶解至500ml，并加入60g HPD750型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30 分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为A2。
发明实施例3
本实施例与实施例1主要不同之处在于，步骤(3)中将初产物会静置7天。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡，加入10gCelluclast1.5L 纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶,5g 1,4-α-D-葡聚糖水解酶分解杂质；
(2)提取，将预处理产物加入2g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理1小时，随后加入硝酸处理1小时，酸解过程中反应体系的pH为3；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物，将初产物会静置7天；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液先按体积比1:1加入二氯甲烷溶液萃取30分钟，萃取 3次，合并萃取液使用旋转蒸发设备挥去萃取剂，将旋转蒸发后的产物加入水溶解至500ml，并加入40gHPD750型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为A3。
发明实施例4
本实施例与实施例1主要不同之处在于，步骤(3)中将初产物会静置14天。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡，加入10gCelluclast1.5L 纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶,5g 1,4-α-D-葡聚糖水解酶分解杂质；
(2)提取，将预处理产物加入2g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理1小时，随后加入硝酸处理1小时，酸解过程中反应体系的pH为3；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物，将初产物会静置7天；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液先按体积比1:1加入二氯甲烷溶液萃取30分钟，萃取 3次，合并萃取液使用旋转蒸发设备挥去萃取剂，将旋转蒸发后的产物加入水溶解至500ml，并加入40gHPD750型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为A4。
对比实施例1
本实施例与实施例1主要不同之处在于，萃取时步骤相反。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡，加入10gCelluclast1.5L 纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶,5g 1,4-α-D-葡聚糖水解酶分解杂质；
(2)提取，将预处理产物加入2g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理1小时，随后加入硝酸处理1小时，酸解过程中反应体系的pH为3；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液先加入40gHPD750型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液旋转蒸发后加入水溶解至500ml，按体积比1:1加入二氯甲烷溶液萃取30分钟，萃取3次，合并萃取液使用旋转蒸发设备挥去萃取剂，真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为B1。
对比实施例2
本实施例与实施例1主要不同之处在于，没有进行萃取。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡，加入10gCelluclast1.5L 纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶,5g 1,4-α-D-葡聚糖水解酶分解杂质；
(2)提取，将预处理产物加入2g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理1小时，随后加入硝酸处理1小时，酸解过程中反应体系的pH为3；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液旋转蒸发，后将产物加入水溶解至500ml，并加入40gHPD750 型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为B2。
对比实施例3
本实施例与实施例1主要不同之处在于，没有进行大孔树脂分离。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡，加入10gCelluclast1.5L 纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶,5g 1,4-α-D-葡聚糖水解酶分解杂质；
(2)提取，将预处理产物加入2g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理1小时，随后加入硝酸处理1小时，酸解过程中反应体系的pH为3；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液先使用旋转蒸发设备，将旋转蒸发后的产物加入水溶解至500ml，并加入40gHPD750型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为B3。
对比实施例4
本实施例与实施例1主要不同之处在于，没有加入酶进行预处理。
一种柠檬苦素的提取方法，包括以下几个步骤：
(1)预处理，将10kg柠檬籽和柠檬皮渣加入200kg水浸泡；
(2)提取，将预处理产物加入2g诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，处理1小时，随后加入硝酸处理1小时，酸解过程中反应体系的pH为3；
(3)固液分离，使用板框式过滤机去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶，将初产物真空浓缩，通过手持折光仪糖度计测定浓缩液糖度，糖度达到8％时停止真空浓缩，随后使用98％乙醇、94％异丙醇混合溶液进行醇沉，乙醇与异丙醇的体积比为4:1，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯，将步骤(4)的溶液先按体积比1:1加入二氯甲烷溶液萃取30分钟，萃取 3次，合并萃取液使用旋转蒸发设备挥去萃取剂，将旋转蒸发后的产物加入水溶解至500ml，并加入40gHPD750型大孔树脂大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，水洗大孔树脂30分钟，然后使用无水乙醇解吸30分钟，收集解吸液真空干燥，即可得到柠檬苦素成品，记为B4。
测试实施例
将产品A1-A4、B1-B4称量，记录成品的质量，然后通过高效液相测量柠檬苦素的纯度，称量结果如表1所示。
测试实施例
测试实施例一
将制备的产物称量，并使用高效液相色谱测量纯度。样品经前处理后,经AgilentEclipse XDB–C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱分离,以0.1％磷酸水溶液(A)-乙腈(B) 为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,于波长210nm处检测。
测试结果汇总表1
通过实施例A1-A4与对比实施例B1-B3可知，本申请萃取和大孔树脂分离联合使用，相比单一使用分离效率高，产品纯度高，并且萃取和大孔树脂的分离顺序发生变化的话，会使得效果变差，所以并且先进行萃取然后再进行大孔树脂分离，结合了两种分离的有点。
通过实施例A1-A4与对比实施例B4可知，本申请使用预处理酶处理，产物的纯度会得到提高，有效处理了多种难以分离的植物单糖和蛋白质杂质。
通过实施例A1-A2与对比实施例A3-A4可知，将初产物放置一段时间，能够有效提高柠檬苦素的产率，并降低柑橘黄酮的含量，有效降低了分离的难度。
根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。
Claims (10)
1.一种柠檬苦素的提取方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
(1)预处理；将柠檬籽和柠檬皮渣加入水浸泡，加入预处理酶分解杂质；
(2)提取：将预处理的产物加入提取酶进行酶解，同时加入酸进行酸解，
(3)固液分离：去除固体残渣，留下液体，得到初产物；
(4)去除果胶：将初产物真空浓缩，然后醇沉，分离絮状物沉淀，留下液体；
(5)提纯：萃取，将步骤(4)获得的溶液作为提取液加入萃取剂进行萃取，萃取完成后分离萃取液，合并萃取液使用旋转蒸发设备去除萃取剂，随后利用大孔树脂分离，即将旋转蒸发后的产物溶解并加入大孔树脂完全浸泡，过滤分离大孔树脂，之后水洗大孔树脂并使用洗脱剂解吸，收集解吸液并进行真空干燥，即可得到柠檬苦素成品。
2.根据权利要求1所述的提取柠檬苦素的方法，其特征在于，所述步骤(5)中提取液与萃取剂的体积比1：(1-3)，萃取时间为15-40分钟，萃取1-3次，所述萃取剂为二氯甲烷溶液。
3.根据权利要求1或2所述的提取柠檬苦素的方法，其特征在于，所述步骤(5)中所述洗脱剂为无水乙醇，所述大孔树脂为HPD100型大孔树脂、HPD600型大孔树脂、HPD722型大孔树脂、HPD750型大孔树脂中的一种。
4.根据权利要求3所述的提取柠檬苦素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中将得到的初产物静置7-14天。
5.根据权利要求4所述的提取柠檬苦素的方法，其特征在于，所述步骤(1)中柠檬籽和柠檬皮渣与水的重量比为1:(9-20)，所述预处理酶包括淀粉酶、蛋白酶，所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶,所述淀粉酶为1,4-α-D-葡聚糖水解酶。
6.根据权利要求4所述的提取柠檬苦素的方法，其特征在于，所述步骤(2)中提取酶为诺维信Celluclast 1.5L纤维素酶，加入量为总重量的0.1-1％，提取时间为0.5-2小时，所述酸为硝酸，酸解过程中反应体系的pH为2-4，提取时间为0.5-2小时。
7.根据权利要求4所述的提取柠檬苦素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中固液分离使用的设备为板框式过滤机。
8.根据权利要求4所述的提取柠檬苦素的方法，其特征在于，所述步骤(4)中醇沉用乙醇和异丙醇的混合溶液进行处理，乙醇和异丙醇的体积比为(3-5):1，所述乙醇的浓度不小于96％，所述异丙醇的浓度不小于94％。
9.根据权利要求1-8任一项所述的提取柠檬苦素的方法所提取的柠檬苦素的用途，所述用途包括用于制备功能性饮料和药物。
10.根据权利要求9所述的柠檬苦素的用途，其特征在于，所述用途包括肺炎治疗和康复、肝脏治疗和康复的药物制备。
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| CN111499681B (zh) | 2021-04-27 |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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Denomination of invention: A method of extracting limonin Effective date of registration: 20230621 Granted publication date: 20210427 Pledgee: Agricultural Bank of China Limited HUAIJI County sub branch Pledgor: GUANGZHOU LEMON BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.|Limeng (Qingyuan) Biotechnology Co.,Ltd.|Guangdong xianyouduomei Biotechnology Co.,Ltd. Registration number: Y2023980045234 |
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| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 510631 room 1708, 140 Zhongshan Avenue West, Tianhe District, Guangzhou City, Guangdong Province (not for factory use) (office use only) Patentee after: GUANGZHOU LEMON BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Patentee after: Guangdong Guanqingling Biotechnology Co.,Ltd. Patentee after: Guangdong xianyouduomei Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 510631 room 1708, 140 Zhongshan Avenue West, Tianhe District, Guangzhou City, Guangdong Province (not for factory use) (office use only) Patentee before: GUANGZHOU LEMON BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Patentee before: Limeng (Qingyuan) Biotechnology Co.,Ltd. Patentee before: Guangdong xianyouduomei Biotechnology Co.,Ltd. |