CN111494403A - 白术多糖在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的用途 - Google Patents

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冯五文
敖慧
王晶
张世洋
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Abstract

本发明提供了白术多糖在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的用途，实验结果表明白术多糖能增加结肠炎小鼠的体重、结肠长度，改善结肠炎小鼠的便血情况、粪便形态，改善肠炎小鼠的结肠病理结构，可作为防治溃疡性结肠炎的潜在药物，为临床提供一种新的用药选择。

Description

白术多糖在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的用途
技术领域
本发明涉及制药领域，特别涉及白术多糖在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的用途。
背景技术
炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease，IBD)又称肠炎，是一组反复发作的炎症性肠道疾病。炎症性肠病主要包括克罗恩病(Crohn’s disease，CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)两类。在发达国家，IBD的发病率达到了1/1000。在中国，近十年间炎症性肠病的总病例约为35万。值得注意的是，该病患病人数在逐年增加，与前10年相比，炎症性肠病总病例数增长约超过24倍，其中，克罗恩病患者数量增长甚至超过15倍。溃疡性结肠炎病变主要位于结肠的黏膜层，且以溃疡为主，多累及直肠和远端结肠，但可向近端扩展，以致遍及整个结肠，其重要症状有腹泻、脓血便、腹痛和里急后重，该病病程长，病情轻重不一，常反复发作，与结肠癌的发病有关，临床上常常表现为反复发作而治愈难度大，被世界卫生组织列为现代难治病之一。治疗溃疡性结肠炎的药物包括柳氮磺胺吡啶、肾上腺皮质激素等广谱抗炎药物和免疫抑制、免疫调节剂等，目前尚无治疗溃疡性结肠炎的特效药物。
白术(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)为菊科(Compositae)植物白术Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎。白术为多年生草本，栽培历史悠久，主产中国浙江省东阳、磐安一带，是著名的道地中药材“浙八味”之一，分布于浙江、江西、湖南、湖北、陕西，亦多栽培。白术在《神农本草》中被列为中药上品，其性温，味甘、苦，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎之功效，主要用于脾虚湿少、腹胀泄泻、痰饮眩悸动、水肿、自汗、胎动不安。白术多糖作为白术的一个中药组成成分，目前已经证明其在免疫调节、降血脂、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等多个方面的药理作用。然而，关于白术多糖在防治溃疡性结肠炎中的应用，还未见报道。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了白术多糖在防治溃疡性结肠炎中的应用。
本发明提供了白术多糖在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的用途。
进一步地，所述药物能够改善溃疡性结肠炎肠的结肠病理结构。
进一步地，所述药物能够增加结肠炎小鼠的体重、结肠长度。
进一步地，所述药物能够改善结肠炎小鼠的便血情况、粪便形态。
进一步地，所述药物的制备方法包括：
(1)取生白术，打粉，过筛；
(2)将步骤(1)所得粉末用石油醚脱脂，静置，倾去上清液，得残留物，常温下使石油醚挥发完；
(3)取步骤(2)所得物质，用乙醇继续脱脂，倾去上清液，得残留物，常温下使乙醇挥发完；
(4)取步骤(3)所得物质，用水提取：加纯水，浸泡，加热回流，过滤，取液体；
(5)将步骤(4)所得液体浓缩，加入乙醇，搅拌下进行沉淀，静置，离心，得粗多糖沉淀物；
(6)用乙醇洗涤步骤(5)所得沉淀物，除去色素，干燥，得白术多糖。
进一步地，上述药物的制备方法中：
步骤(1)中，所述筛为5号筛；
和/或，步骤(2)中，用石油醚脱的脂操作重复2～3次，每次加入的石油醚与生白术的体积质量比为1.5：1～3：1mL/g，静置时间为12～30小时；
和/或，步骤(3)中，用乙醇脱脂的操作重复2～3次，每次加入的乙醇与生白术的体积质量比为1.5：1～3：1mL/g，静置时间为12～30小时；
和/或，步骤(4)中，用纯水提取操作重复2～3次，每次加入的纯水与生白术的体积质量比为3：1～8：1mL/g，浸泡时间为5～10小时，加热回流时间为1～4小时；步骤(4)该包括：合并每次提取所得液体，离心，取液体；
和/或，步骤(5)中，所述乙醇浓度为90％～100％，加入量为使体系中乙醇含量为75％～90％，静置条件为4℃下过夜；
和/或，步骤(6)中，所述乙醇浓度为90％～100％。
进一步地，药物的制备方法中：
步骤(2)中，用石油醚脱的脂操作重复2次，每次加入的石油醚与生白术的体积质量比为2：1mL/g，静置时间为24小时；
和/或，步骤(3)中，用乙醇脱脂的操作重复2次，每次加入的乙醇与生白术的体积质量比为2：1mL/g，静置时间为24小时；
和/或，步骤(4)中，用纯水提取操作重复3次，每次加入的纯水为生白术的6倍；量，浸泡时间为8小时，加热回流时间为2小时；步骤(4)该包括：合并每次提取所得液体，离心，取液体；
和/或，步骤(5)中，所述乙醇浓度为95％，加入量为使体系中乙醇含量为80％，静置条件为4℃下过夜；
和/或，步骤(6)中，所述乙醇浓度为95％。
本发明还提供了一种治疗溃疡性结肠炎的药物，它是以白术多糖为活性成分，加上一种或多种药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
进一步地，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、增效剂。
进一步地，所述药物是含有所述药物的注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂。
所述药学上可接受的辅料，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
本发明提供了白术多糖在防治溃疡性结肠炎中的应用，白术多糖能增加结肠炎小鼠的体重、结肠长度，改善结肠炎小鼠的便血情况、粪便形态，改善肠炎小鼠的结肠病理结构，可作为防治溃疡性结肠炎的潜在药物，为临床提供一种新的用药选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为白术多糖对肠炎小鼠的结肠病理结构改善效果图。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
本发明实验动物为SPF级雄性C57小鼠(20±2g)40只，购自成都达硕实验动物有限公司[SCXK(川)014-028]。在温度为23±2℃、湿度为50±5％的条件下，小鼠将适应新条件7天。
本发明造模药物为DSS葡聚糖硫酸钠，购自MP公司，其分子量为36,000–50,000。
实施例1白术多糖的制备
取生白术1000g，打粉，过5号筛。将粉末以石油醚脱脂2次，每次加入石油醚2L后，常温静置24h，倾去上清液。残留物置于托盘上，常温挥干石油醚。复以乙醇(99.7％)继续脱脂2次，每次加入乙醇2L，加热回流2h，倾去上清液。残留物置于托盘上，常温挥干乙醇。脱脂后的白术样品加入6倍量纯水，预先浸泡8h后，加热回流2小时，过滤，重复提取3次，合并提取液并离心去沉淀，上清液真空减压浓缩至一定体积。加入95％乙醇至溶液乙醇含量为80％，搅拌沉淀白术多糖，溶液4℃环境过夜后离心，得粗多糖沉淀，以95％乙醇洗涤沉淀，除去色素，干燥得白术多糖。
按照前述工艺，1000g生白术可以制备得到350―450g白术多糖。
以下结合试验例说明本发明白术多糖在防治溃疡性结肠炎中的有益效果。
试验例1白术多糖对结肠炎的改善作用
(1)实验流程
将40只C57小鼠随机分为正常组、模型组、给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组。环境适应一周后，将实施例1制备的白术多糖溶解于蒸馏水中，与给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组小鼠分别按10，20，40mg/kg体重灌胃给药，正常组和模型组予以蒸馏水灌胃。3天后，以蒸馏水将DSS配制成2.5％的溶液，替换模型组、给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组小鼠原饮用水，进行造模，连续7天，正常组给与正常饮用水。造模期间，给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组小鼠按10，20，40mg/kg体重灌胃白术多糖，正常组和模型组予以蒸馏水灌胃。
从给药第一天开始，每日定点定时记录小鼠体重、粪便形态、粪便带血情况，并按参考文献标准(Wirtz,S.,Neufert,C.,Weigmann,B.and Neurath,M.F.,2007.Chemicallyinduced mouse models of intestinal inflammation.Nature protocols,2(3),p.541)对粪便形态、粪便带血情况进行打分。粪便形态：正常，0分；软而成型，1分；非常软，2分；腹泻，3分。便血情况：便中无血，0分；便中隐血，1分；便中明显见血，2分；腹泻样便血而染及肛门，3分。给药7天后，将小鼠脱颈处死，取出结肠，以直尺量取结肠长度，生理盐水去除结肠中粪便，多聚甲醛固定，石蜡包埋，切成4μm切片，HE染色，在光学显微镜观察肠组织的病理变化。
病理学评分依据如下：
组织损伤评分：0，表皮细胞正常；1，杯状细胞部分丢失(小于或等于25％)；2，杯状细胞大面积丢失(大于25％)；3，隐窝丢失小于或等于25％)；4，隐窝大面积丢失(大于25％)。
炎症评分由黏膜层，黏膜下层，黏膜肌层评分相加(0～6)。粘膜层：0，无炎症浸润；1，轻度炎症浸润；2，中度炎症；3，高度炎症。黏膜下：0，无炎症浸润；1，轻至中度炎症浸润；2，高度炎症。黏膜肌层：0，正常；1，中重度炎症浸润。
两个因素之和(0～10)表示结肠组织的病理学评分。
所有数据均由GraphPad Prism 7.00进行统计。采用单因素方差分析(ANOVA)分析符合正太分布的各组间的统计学差异。Kruskal Wallis检验用于分析不符合ANOVA假设的数据。结果以
Figure BDA0001965749850000041
表示，P<0.05表示具有统计学意义。
(2)实验结果
i)体重变化
表1白术多糖对结肠炎小鼠体重的影响(
Figure BDA0001965749850000042
n＝8)
Figure BDA0001965749850000043
Figure BDA0001965749850000051
注:**与正常组比较，P<0.01；#与模型组比较，P<0.05；##与模型组比较，P<0.01。
从表1可以看出，从实验的第4天开始，模型小鼠的体重开始出现下降。在实验的第7天，模型组相对正常组体重明显降低。给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组相对模型组体重升高(P<0.01)，且呈现剂量依赖性。由此可见，白术多糖对结肠炎模型小鼠的体重具有改善作用。
ii)结肠长度
表2白术多糖对结肠炎小鼠结肠长度的影响(
Figure BDA0001965749850000052
n＝8)
Figure BDA0001965749850000053
注:**与正常组比较，P<0.01；#与模型组比较，P<0.05；##与模型组比较，P<0.01。
从表2可以看出，模型组相对正常组结肠长度明显降低。给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组相对模型组结肠长度增长，且呈现剂量依赖性。其中给药中剂量组、给药高剂量组的结肠长度相对于模型组具有统计学意义(P<0.05及P<0.01)。由此可见，白术多糖对结肠炎模型小鼠的结肠具有改善作用。
iii)便血评分
表3白术多糖对结肠炎小鼠便血的影响(
Figure BDA0001965749850000054
n＝8)
Figure BDA0001965749850000055
Figure BDA0001965749850000061
注:**与正常组比较，P<0.01；#与模型组比较，P<0.05。
从表3可以看出，从第4天开始，模型组相对正常组出现明显便血。在实验的第7天，给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组相对模型组便血评分减少且呈现剂量依赖性。其中给药高剂量组相对模型组具有统计学意义(P<0.05)。由此可见，白术多糖对结肠炎模型小鼠的便血情况具有改善作用。
iv)粪便形态评分
表4白术多糖对结肠炎小鼠粪便形态的影响(
Figure BDA0001965749850000062
n＝8)
Figure BDA0001965749850000063
注:**与正常组比较，P<0.01；#与模型组比较，P<0.05。
从表4可以看出，从第4天开始，模型组相对正常组粪便明显变软。在实验的第7天，给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组相对模型组粪便形态评分减少且呈现剂量依赖性。其中给药高剂量组相对模型组具有统计学意义(P<0.05)。由此可见，白术多糖对结肠炎模型小鼠的腹泻情况具有改善作用。
v)结肠组织病理变化
表5白术多糖对结肠炎小鼠结肠病理的影响(
Figure BDA0001965749850000064
n＝8)
Figure BDA0001965749850000065
Figure BDA0001965749850000071
注:**与正常组比较，P<0.01；#与模型组比较，P<0.05；##与模型组比较，P<0.01。
从图1可见，正常组小鼠结肠黏膜结构清晰完整，隐窝结构完好，杯状细胞均匀排列，无炎症细胞浸润现象。模型组结肠黏膜缺损严重，隐窝结构消失，伴有严重炎性细胞浸润。给药后，隐窝结构恢复，炎症细胞浸润现象减弱，黏膜结构改善。其中，给药低剂量组出现隐窝结构，但仍然存在较强炎症浸润，杯状细胞减少，黏膜损伤；给药中剂量组隐窝结构有所恢复，杯状细胞相对给药低剂量组有所增加，炎症浸润有所减少；给药高剂量组基本恢复隐窝结构及杯状细胞数量、黏膜结构，但仍然存在部分炎症浸润。从表5可见，模型组病理评分明显高于正常组，给药低剂量组、给药中剂量组、给药高剂量组相对模型组病理评分减少且呈现剂量依赖性。其中给给药中剂量组、给药高剂量组相对模型组具有统计学意义(P<0.05及P<0.01)。由此可见，白术多糖对结肠炎模型小鼠的结肠病理情况具有改善作用。
综上所述，本发明提供了白术多糖在防治溃疡性结肠炎中的应用，白术多糖能增加结肠炎小鼠的体重、结肠长度，改善结肠炎小鼠的便血情况、粪便形态，改善肠炎小鼠的结肠病理结构，可作为防治溃疡性结肠炎的潜在药物，为临床提供一种新的用药选择。

Claims (10)

1.白术多糖在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物能够改善溃疡性结肠炎肠的结肠病理结构。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物能够增加结肠炎小鼠的体重、结肠长度。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物能够改善结肠炎小鼠的便血情况、粪便形态。
5.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于：所述白术多糖的制备方法包括：
(1)取生白术，打粉，过筛；
(2)将步骤(1)所得粉末用石油醚脱脂，静置，倾去上清液，得残留物，常温下使石油醚挥发完；
(3)取步骤(2)所得物质，用乙醇继续脱脂，倾去上清液，得残留物，常温下使乙醇挥发完；
(4)取步骤(3)所得物质，用水提取：加纯水，浸泡，加热回流，过滤，取液体；
(5)将步骤(4)所得液体浓缩，加入乙醇，搅拌下进行沉淀，静置，离心，得粗多糖沉淀物；
(6)用乙醇洗涤步骤(5)所得沉淀物，除去色素，干燥，得白术多糖。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：药物的制备方法中，
步骤(1)中，所述筛为5号筛；
和/或，步骤(2)中，用石油醚脱的脂操作重复2～3次，每次加入的石油醚与生白术的体积质量比为1.5：1～3：1mL/g，静置时间为12～30小时；
和/或，步骤(3)中，用乙醇脱脂的操作重复2～3次，每次加入的乙醇与生白术的体积质量比为1.5：1～3：1mL/g，静置时间为12～30小时；
和/或，步骤(4)中，用纯水提取操作重复2～3次，每次加入的纯水与生白术的体积质量比为3：1～8：1mL/g，浸泡时间为5～10小时，加热回流时间为1～4小时；步骤(4)该包括：合并每次提取所得液体，离心，取液体；
和/或，步骤(5)中，所述乙醇浓度为90％～100％，加入量为使体系中乙醇含量为75％～90％，静置条件为4℃下过夜；
和/或，步骤(6)中，所述乙醇浓度为90％～100％。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：药物的制备方法中，
步骤(2)中，用石油醚脱的脂操作重复2次，每次加入的石油醚与生白术的体积质量比为2：1mL/g，静置时间为24小时；
和/或，步骤(3)中，用乙醇脱脂的操作重复2次，每次加入的乙醇与生白术的体积质量比为2：1mL/g，静置时间为24小时；
和/或，步骤(4)中，用纯水提取操作重复3次，每次加入的纯水为生白术的6倍量，浸泡时间为8小时，加热回流时间为2小时；步骤(4)该包括：合并每次提取所得液体，离心，取液体；
和/或，步骤(5)中，所述乙醇浓度为95％，加入量为使体系中乙醇含量为80％，静置条件为4℃下过夜；
和/或，步骤(6)中，所述乙醇浓度为95％。
8.一种治疗溃疡性结肠炎的药物，其特征在于：它是以白术多糖为活性成分，加上一种或多种药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
9.根据权利要求8所述药物，其特征在于：所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、增效剂。
10.根据权利要求8或9所述药物，其特征在于：它是含有所述药物的注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂。
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