CN111493315A - 一种改善记忆抗氧化组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有改善记忆力抗氧化组合物及其应用，按重量份计，该组合物由如下组分组成：苹果皮粉250～1250份，果粉250～1000份，磷脂125～500份，牛磺酸10～15份，维生素C 6～25份，维生素E 1～5份。本发明改善记忆抗氧化组合物中，各组分间相互配合，具有协同的促进改善记忆力及抗氧化的作用，且起效周期短。本发明还公开了含有该组合物的口服制剂及其在制备改善记忆力的食品或保健品中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及功能性食品和保健食品技术领域。更具体地，涉及一种改善记忆抗氧化组合物及应用。
背景技术
记忆是个人在短时间和长时间内记录事件和信息并保留它们的能力。学习和记忆代表着大脑神经功能的主要过程。然而随着年龄的不断增长，学习记忆障碍在老年人中所占比例不断上升，这将严重影响老年人的日常生活。对于学习记忆障碍的防治，历来受到人们的重视，且已有多年的历史，但一般首选的治疗方法仍是药物干预手段。氧化应激是因机体在氧化代谢过程中产生诸如自由基、丙酮等代谢产物，同时机体清除自由基能力下降，使体内的氧化还原反应平衡被打破，从而产生过多的活性氧自由基(ROS)，引起氧化损伤的过程。研究表明，ROS产生过多是氧化应激的主要原因，一旦ROS产生和清除的状态失去平衡，将诱发学习记忆障碍的病理改变，各种来源的ROS会引起蛋白质、脂类和核酸不同程度的损伤，对组织、细胞和分子造成损害。
神经组织由于其独特的结构，更容易受到氧自由基的攻击，而细胞代谢时会产生大量自由基，将会损伤DNA等大分子，加速细胞死亡并导致神经退行性疾病。有研究表明，在学习记忆障碍患者大脑中存在着一些能及时清除过量ROS的抗氧化酶包括：超氧化物歧化酶(SOD)、谷耽甘肤过氧化物酶(GSH-Px)等，由于体内产生过多的ROS，使得SOD、GSH-Px过度消耗其活性降低，抗氧化能力下降，脑细胞损伤，神经细胞代谢紊乱，最终引起学习记忆障碍。MDA是自由基发生脂质氧化反应的产物，是一种在氧化作用过程中具有代表性意义的产物。研究发现，与同龄的老年人相比，学习记忆障碍患者血清内的SOD和GSH-Px活性下降，而MDA含量上升。
目前，改善记忆力的专利分为两类，一类多是由藻油、鱼油(主要成分EPA、DHA)、卵磷脂、氨基酸等组成。这类保健食品均是通过补充脑细胞所需营养促进脑细胞的增殖、神经传导、突触的生长和发育；例如：中国专利《CN201210399554.4公开了一种辅助改善记忆的保健食品组合物及其制备方法》，专利组合物含有：DHA藻油、γ-氨基丁酸、磷脂酰丝氨酸、牛磺酸、葡萄糖酸锌、维生素C和维生素B12。试验显示服用该组合物后对于指向记忆、联想学习、图像自由回忆、无意义图形再认和人像特点联系回忆等测试项目得分均高于试验前，表明该组合物可以改善人体记忆机能。但该组合物仅适用于青少年记忆力的改善，不适合记忆力衰退的改善，DHA藻油味腥，制成软胶囊形式，给吞咽困难的人带来不方便，普通人难以坚持，不适合长期食用。中国专利《CN201110387852.7一种改善记忆力的压缩棒及其制备方法》所述改善记忆力的压缩棒包括以下重量比的成分组成：膨化粉类物质40-60％，糖类物质20-35％，油脂类物质10-15％，改善记忆类物质0.5-2％。本发明将磷脂酰丝氨酸、二十二碳六烯酸和紫薯等营养成分有机地结合在一起，制备出方便日常食用的压缩棒。专利《CN201310253539.3一种稳定性好的改善记忆力组合物、胶囊以及制备方法》提供一种稳定性好的改善记忆力组合物，包括：磷脂酰丝氨酸，银杏叶提取物，维生素，叶酸，亚麻籽油，蜂蜡，维生素。本发明还提供了一种稳定性好的改善记忆力胶囊及其制备方法，该组合物也为胶囊制剂，不适合长期服用。但总体来说，以上专利普遍存在如下不足：1、防止记忆力衰退的效果不显著，单纯补充DHA/磷脂酰丝氨酸等成分。2、只是具有一定的保健作用，提高记忆力效果不明显。3、配料较单一，很难具有多方面协同作用，不能同时具有增强大脑功能、延缓大脑衰老、改善失眠健忘、神经衰弱、老年痴呆症状和提高智力的的功效。
另一类是以药食同源中草药为主要功能原料来改善记忆力。例如:专利《CN201610820506.6改善记忆的组合物及其制备方法和应用》改善记忆的组合物的有效成分由以下重量份的药材制备而成：五味子2-6份，人参3-9份，三七1-3份，枸杞6-12份。针对老年痴呆症这一病因病机，选用滋肾填精、补气散瘀为治法，以五味子益气敛阴、滋补肾精为君药，以人参和三七补气益智、活血散瘀共为臣药，以枸杞子补肾益精、扶养正气为佐药，用以促进老年人记忆和认知障碍的恢复。专利《CN201110379615.6一种用于改善记忆的保健食品及其制备方法》采用取刺五加、余人参、龙眼肉、茯苓四位药材压片包薄膜衣形成药片。以上专利均需要对刺五加等中药材进行提取加工，工序复杂，通过益气养阴以抗疲劳来改善记忆，改善记忆功能机制作用不清楚成分复杂，功效作用不明显。
另外，国内外防治记忆力障碍或减退的药物有很多，如目前临床常用的奥拉西坦和吡拉西坦等，它们均是通过改善脑部代谢，来达到增强记忆，提高学习能力的目的。但是，这些化学药物或多或少都有人们接受不了的不良反应，而且目前仅用于脑损伤及引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍的治疗，无法对普遍的记忆力下降人群用药。
基于以上情况，特提出一种改善记忆抗氧化组合物，该组合物可以阻止活性氧的形成或降低其含量，使神经细胞的退行性速度减缓，进而保护神经细胞免受自由基的损伤，最终达提高学习记忆力并改善因衰老导致障碍病程的作用，补充目前市面没有相关技术的产品。同时该组合物应用于口服液及固体饮料中，酸甜可口，口感佳适合长期饮用。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种改善记忆力抗氧化组合物，该改善记忆力抗氧化组合物解决了现有改善记忆力功效不明显，作用成分单一等技术问题。本发明的改善记忆力抗氧化组合物中，各组分间有好的协同功效，且该组合物使用安全。使用者依从性好，能坚持长期食用，且安全无副作用。
本发明的第二个目的在于提供一种口服制剂，口服制剂为口服液或固体饮料。
为达到上述第一个目的，本发明采用下述技术方案：
一种具有改善记忆力抗氧化组合物，其特征在于，按重量份计，所述改善记忆抗氧化组合物由如下组分组成：苹果皮粉250～1250份，果粉250～1000份，磷脂125～500份，牛磺酸10～15份，维生素C 6～25份，维生素E 1～5份。
本发明可以阻止活性氧的形成或降低其含量，使神经细胞的退行性速度减缓，进而保护神经细胞免受自由基的损伤，最终达提高学习记忆力并改善因衰老导致障碍病程的作用，补充目前市面没有相关技术的产品。同时该组合物应用于口服液及固体饮料中，酸甜可口，口感佳适合长期饮用。
根据本发明的优选实施方式，所述果粉选自蓝莓粉和野樱莓果粉中的一种或两种的混合。蓝莓粉和野樱莓果粉富含维C、花青素等强抗氧化剂，保护大脑神经细胞不受脂质过氧化物的损伤。在本发明的组合物中，其与其它组分配合后还具有修复神经细胞膜和细胞壁的功能，明显的促进神经细胞再生，改善因衰老导致的记忆不佳。
苹果是我国，也是世界上种植最广泛、消费量最大的水果之一。苹果多酚是苹果中所含多酚类物质的总称，主要要包括黄烷醇类、羟基苯甲酸类、二氢查尔酮类、花色素和黄酮醇类，尤其是在苹果表皮中多酚含量较高。多酚组成和浓度因在成熟果实的不同部位呈现明显差异。果皮中的总酚浓度最大；其次为籽，其内多酚的主要成分是总类黄酮；果肉中的总酚浓度最低；在果肉和果皮中原花青素是主要的酚类物质；果肉中羟基肉桂酸是含量较多的酚类物质；果皮中类黄酮物质占主导地位。苹果多酚表现出的生理功能活性比茶多酚要高100倍以上，具有很好的抗氧化、防衰老作用。同时研究表明，苹果皮粉能增加大脑中关键神经递质乙酰胆碱的生产，并最终促进记忆力的提高。本专利优选苹果皮作为主要原料，富含类黄酮类多酚物质，其抗氧化能力远高于果肉。
磷脂中的磷脂酰胆碱是构成体内神经传递物质乙酰胆碱的前体物质。当磷脂酰胆碱消化吸收后释放出乙酰胆碱，并随血液循环进入大脑，随着大脑中乙酰胆碱含量的增加，大脑神经细胞间的信息传递速度加强，从而促进大脑功能。同时磷脂有助延缓脑细胞萎缩和脑力衰退，因此磷脂又被成为“脑的食品(brainfood)”。磷脂是构成细胞膜的最主要成分，各类磷脂脂肪酸的摄取对人体细胞、组织和器官的功能发挥着重要的作用。脑磷脂又称氨基乙醇磷脂，其分子结构与卵磷脂相似，脑磷脂是神经细胞组织重要组成部分。脑磷脂以动物脑组织中含量最多，约占脑干物质总质量的4％～6％，影响神经组织的一系列功能，口服磷脂能直接利用，令神经细胞膜修复，恢复神经元的正常代谢。
牛磺酸是一种化学结构简单的含硫氨基酸，为2-氨基乙磺酸，不参与蛋白质组成和代谢，而是以游离形式存在或与胆汁酸形成复合物。牛磺酸可促进脑细胞DNA、RNA的合成，增加膜的磷脂酰乙醇胺含量和脑细胞对蛋白质的利用率，从而促进脑细胞尤其是海马细胞结构和功能的发育。牛磺酸对神经细胞的分化成熟过程具有明显的促进作用。缺乏牛磺酸仔鼠脑重量、脑细胞容积均达不到正常水平，且学习记忆能力降低。有研究表明，中枢神经系统的一些肽类物质参与信息在脑内的加工过程，它们可调节记忆贮存或提取过程，脑β-内啡肽参与记忆调节系统，影响学习记忆的获得和再现等不同阶段。
维生素C与维生素E是人体所需的营养物质，也是机体重要的自由基清除剂和抗氧化剂。维生素E是脂溶性物质，可在细胞膜上也可以穿过脂质细胞膜在细胞内发挥抗氧化作用。维E的消灭活性氧作用能使生物膜上的磷脂和高度不饱和脂肪酸免遭氧化，从而保护神经细胞生物膜的完整性和稳定性。维生素C为水溶性生物素，对维生素E具有保护作用，对维生素E有再生作用，两者配合使用能大大增加效能，协同清楚自由基，产生更佳的抗氧化效果。
根据本发明的优选实施方式，所述苹果皮粉来源于苹果皮干燥后粉碎得到的粉末。
根据本发明的优选实施方式，本发明中采用的维生物C、维生素E均为营养强化剂。
根据本发明的优选实施方式，本发明中采用的磷脂应符合《GB 28401食品安全国家标准食品添加剂磷脂》的要求。
根据本发明的一个具体实施方式，按重量份计，所述苹果皮粉500～1250份，果粉500～1000份，磷脂250～500份，牛磺酸10～15份，维生素C 10～25份，维生素E 2～5份。
根据本发明的一个具体实施方式，按按重量份计，所述苹果皮粉500～1000份，果粉500～800份，磷脂250～300份，牛磺酸12～15份，维生素C 10～20份，维生素E 2～5份。
为达到上述第二个目的，本发明提供一种口服制剂，该口服制剂包含上述的改善记忆抗氧化组合物。
根据本发明的优选实施方式，所述组合物占口服制剂总含量的1％wt～100％wt。
根据本发明的优选实施方式，所述改善记忆力抗氧化组合物中还可根据实际要得到的口服制剂的形态，加入本领域常规的食品可接受的载体、稀释剂、矫味剂等。
根据本发明的优选实施方式，所述口服制剂为粉剂、颗粒剂、口服液。
本发明中的口服制剂根据不同的形态，按照本领域的常规手段制备即可获得。根据本发明的优选实施方式，当所述口服制剂为口服液时，口服制剂的制备包括，配料、将各物料混合均匀、灭菌、灌装、巴氏灭菌即可得到产品。
根据本发明的优选实施方式，所述口服制剂为粉剂或颗粒剂时，制备方法包括配料、混合、过筛即可。
本发明的有益效果如下：
本发明组合物的一个有益效果是各组分协同作用，从而提供一个从可以阻止活性氧的形成或降低其含量，使神经细胞的退行性速度减缓，进而保护神经细胞免受自由基的损伤，增加大脑中信息传导物质乙酰胆碱的含量，最终达到减慢学习记忆障碍病程的作用的组合物。在本发明的组合物中，其与其它组分配合后还具有修复神经细胞膜和细胞壁的功能，明显的促进神经细胞再生，改善因衰老导致的记忆不佳。
在苹果中，果皮比果肉中酚类化合物含量高、抗氧化活性高、抗增殖活性高，苹果皮的总抗氧化活性明显高于苹果品种的果肉+果皮和果肉，表明果皮在食用时具有保健作用，为抗氧化剂的重要来源。苹果皮粉中多酚包括绿原酸、根皮苷、表儿茶素及其低聚体和槲皮酮糖苷等，相比苹果果肉多酚、茶多酚更具有良好的抗氧化活性。与VC、VE三者混合使用时，VC、VE对苹果多酚的抗氧化性均具有协同增效作用，保护神经细胞免受自由基的损伤，明显降低大脑组织氧化应激损伤。
磷脂对人的智力发育,记忆力增强有独特作用。磷脂是脑细胞的组分,又是脑神经细胞传递信息的化学物质。磷脂在体内水解生成胆碱、甘油磷酸及脂肪酸,在此生化过程中形成的胆碱对脑及脑神经系统的正常功能至关重要。胆碱转化为乙酰胆碱,它是通过神经细胞传递信息的化学物质,起着兴奋大脑神经细胞的作用，磷脂同时能改善神经细胞膜的功能，可促进提高记忆力和学习能力。大脑内乙酰胆碱的数量越多，记忆、思维的形成也越快。
牛磺酸是中枢神经系统含量丰富的游离氨基酸，是神经系统重要的抑制性递质或调质。牛磺酸能促进脑细胞增殖，加速神经细胞分化成熟，提高记忆力；对神经系统的抗衰老也有一定的作用，能促进大脑细胞DNA、RNA及蛋白质的合成，对神经传导和视觉功能起重要作用。记忆减退人群中脑组织牛磺酸的含量降低，缺乏牛磺酸时，中枢神经系统发育受阻、智力低下。同时，牛磺酸还是一种重要的氧自由基清除剂，与本专利中组合物成分组合，能抵抗机体的内源性损伤，具有平衡细胞渗透压、维持细胞膜稳定性和对抗氧自由基损伤等细胞保护作用。
本发明组合物的另一个有益效果是采用改善记忆力抗氧化组合物制作出的口服液及固体饮料(颗粒剂、粉剂)口感酸甜，天然不添加防腐剂，受到消费者喜爱，依从性好，能长期服用。且生产工艺简单，原料成本简单易获得。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1
具有改善记忆力抗氧化组合物口服液，制备步骤如下：
1)配料：将苹果皮粉：1250份；蓝莓果粉：1000份；磷脂：500份；维生素C：25份；维生素E：5份、牛磺酸：15份进行混合，得混合物，混合物加入部分水进行匀浆，使其混合均匀；
2)加入黄原胶、果胶等胶体适量，用部分水溶胀，与混合物1)混合均匀，得混合物2)；
3)混料矫味：另向上述混合物中加入适量浓缩苹果清汁5500份调整酸甜度；再向混合物中加入适量去离子水，得混合液；
4)灌装：将步骤3)所得的液体按照每瓶50mL的量灌装；
5)物料杀菌：将步骤3)的混合液过滤后，将其液体采用高温杀菌(121℃，15min)，得到杀菌后的液体；得到具有改善记忆力抗氧化口服液。
实施例2
具有改善记忆力抗氧化组合物口服液，制备步骤如下：
1)配料：将苹果皮粉：250份；蓝莓果粉：250份；磷脂：125份；维生素C：6份；维生素E：1份、牛磺酸：10份进行混合，得混合物，混合物加入部分水进行匀浆，使其混合均匀；
2)加入黄原胶、果胶等胶体适量，用部分水溶胀，与混合物1)混合均匀，得混合物2)；
3)混料矫味：另向上述混合物中加入适量浓缩苹果清汁5500份调整酸甜度；再向混合物中加入适量去离子水，得混合液；
4)灌装：将步骤3)所得的液体按照每瓶50mL的量灌装；
5)物料杀菌：将步骤3)的混合液过滤后，将其液体采用高温杀菌(121℃，15min)，得到杀菌后的液体；得到具有改善记忆力抗氧化口服液。
实施例3
具有改善记忆力抗氧化组合物口服液，制备步骤如下：
1)配料：将苹果皮粉：1250份；野樱莓果粉：1000份；磷脂：500份；维生素C：25份；维生素E：5份、牛磺酸：15份进行混合，得混合物，混合物加入部分水进行匀浆，使其混合均匀；
2)加入黄原胶、果胶等胶体适量，用部分水溶胀，与混合物1)混合均匀，得混合物2)；
3)混料矫味：另向上述混合物中加入适量浓缩苹果清汁5500份调整酸甜度；再向混合物中加入适量去离子水，得混合液；
4)灌装：将步骤3)所得的液体按照每瓶50mL的量灌装；
5)物料杀菌：将步骤3)的混合液过滤后，将其液体采用高温杀菌(121℃，15min)，得到杀菌后的液体；得到具有改善记忆力抗氧化口服液。
实施例4
具有改善记忆力抗氧化组合物粉剂固体饮料，制备步骤如下：
配料：1)将苹果皮粉：1000份；野樱莓果粉：400份、蓝莓果粉400份；磷脂：250份；维生素C：5份；维生素E：4份、牛磺酸：10份进行混合，得混合物。
2)混合物加入或不加入稳定剂、甜味剂；稳定剂及甜味剂用量均需符合国家安全标准GB 2760的要求；得到具有改善记忆力抗氧化粉剂固体饮料。
对比例1
同实施例1，区别在于，不添加苹果皮粉及蓝莓果粉，其余条件不变，制备得到改善记忆力抗氧化口服液。
对比例2
同实施例1，区别在于，不添加磷脂，其余条件不变，制备得到改善记忆力抗氧化口服液。
对比例3
同实施例1，区别在于，不添加维生素C、维生素E、牛磺酸等营养强化剂，其余条件不变，制备得到改善记忆力抗氧化口服液。
对比例4
同实施例1，区别在于，将苹果皮粉及蓝莓果粉更换为苹果果粉(苹果果粉为苹果去皮后果肉干燥后得到)，其余条件不变，制备得到改善记忆力抗氧化口服液。
对比例5
同实施例1，区别在于，将苹果皮粉及蓝莓果粉更换为茶多酚粉，其余条件不变，制备得到改善记忆力抗氧化口服液。
对比例6
同实施例1，区别在于，将维生素C、维生素E及牛磺酸更换为维生素A、维生素B族，其余条件不变，制备得到改善记忆力抗氧化口服液。
对比例7
同实施例3，区别在于，将磷脂更换为藻油DHA粉，其余条件不变，制备得到改善记忆力抗氧化固体饮料。
验证试验：本发明组合物改善记忆动物实验及提升脑海马组织总抗氧化实验
ICR雄性小鼠(购于广东省医学实验动物中心)随机分成14组，每组10只。(1)空白组：生理盐水；(2)阴性组：生理盐水；(3)阳性组：66.7μg/kg的石杉碱甲；(4)实验组实施例1样品：40mg/kg；(5)实验组实施例2样品：40mg/kg；(6)实验组实施3样品：40mg/kg；(7)实验组实施例4样品：40mg/kg；(8)实验组对比例1样品：40mg/kg；(9)实验组对比例2样品：40mg/kg；(10)实验组对比例3样品：40mg/kg；(11)实验组对比例4样品：40mg/kg；(12)实验组对比例5样品：40mg/kg；(13)实验组对比例6样品：40mg/kg；(14)实验组对比例7样品：40mg/kg。小鼠自由进食，并在12h光暗循环，室温(22℃±1℃)和湿度(50±5)％的条件下适应1周后进行试验。灌胃相应药物30min后，空白组腹腔注射生理盐水，其余组腹腔注射东莨菪碱，进行诱导记忆障碍。灌胃4周之后进行行为学试验。
1)跳台试验：
跳台试验是一种对小鼠在药物和其他干预措施之后进行神经行为学评估的方法。试验前1h灌胃相应药物，30min之后腹腔注射1mg/kg东莨菪碱诱导记忆障碍。潜伏期为小鼠放在跳台仪内的绝缘平台上到首次跳下平台的时间。适应阶段：将小鼠轻轻放在绝缘平台上，小鼠自由活动30min后，放回笼中饲养。训练阶段：将小鼠预先放在平台上，将跳下平台的小鼠接受32V、50Hz交流电电击15s，然后将小鼠放在平台上适应一段时间。如果小鼠在第一次训练中，它的潜伏期超过180s或在绝缘平台上停留300s则淘汰不用。2h后进行第二次训练，如果小鼠跳下平台受电击后，能主动逃回到平台上，则终止训练。测验阶段：此即记忆保留试验。24h后，进行测验，将小鼠放在平台上并计时，记录潜伏期，最大潜伏期设为300s；并记录300s内的跳下平台的错误次数。停止测验5天后进行记忆消退测验。
表1各实验组对小鼠跳台试验的影响(
n＝10)
注：给药组与空白组比较，#p<0.05，##p<0.01；给药组与阴性组比较，*p<0.05，**p<0.01。
表1中分别记录了小鼠在两次测验中的潜伏期和错误次数。与空白组相比较，阴性组的潜伏期和错误次数都显著增加(p<0.01)，说明东莨菪碱损伤记忆造模有效。经给药后，阳性组、实施例1、3组消退测验潜伏期较阴性组显著明显延长(p<0.01)，实施2、4组消退测验潜伏期较阴性组显著明显延长(p<0.05)；而对照例1～3实验组对小鼠认知障碍的改善效果并不明显；对照例4-7，相对于阴性组有一定的改善作用，但作用不明显，无统计学差异。
2)避暗试验
由于小鼠是夜间行进动物，本能会逃向暗处，在暗室以电击刺激来训练小鼠的空间学习记忆。试验前1h灌胃相应药物，30min之后腹腔注射1mg/kg东莨菪碱诱导记忆障碍。潜伏期为小鼠从放入明室开始到首次进入暗室的时间。若小鼠在第一次训练时，潜伏期超过100s，则淘汰不用。适应阶段：将小鼠放入明室，并打开两室之间的门，小鼠自由活动30min后，取出放回笼中。训练阶段：将小鼠放入明室，5s后打开门，当小鼠完全进入暗室时，立即关闭门。避暗仪暗室底部铜栅通32V、50Hz交流电，小鼠脚部持续受电击3s后打开门并将小鼠移至明室，120s后重复该过程。当小鼠连续300s停留在明室时，训练结束。测验阶段：24h后，进行测验，记录潜伏期，最大潜伏期设为300s；并记录300s内进入暗室的错误次数。停止测验5天后进行记忆消退测验。
表2各实验组对小鼠避暗试验的影响(
n＝10)
注：给药组与空白组比较，#p<0.05，##p<0.01；给药组与阴性组比较，*p<0.05，**p<0.01。
东莨菪碱在被动回避反应试验中引起的记忆障碍依赖于长期记忆。我们测试了
实施例、对照例对避暗试验中东莨菪碱诱导的记忆缺陷的影响，结果见表2。实施例2与阴性组相比，消退测验潜伏期显著增加(p<0.05)；实施例1、2、4与阴性组相比，消退测验潜伏期更显著增加(p<0.01)；而对照例1-7与阴性组相比无显著差异。
3)脑海马体中乙酰胆碱含量测定
避暗试验结束后，立即将小鼠脱颈椎处死，将海马体从小鼠的大脑中取出并储存在-80℃直到分析。将脑样品在室温下解冻，并使用100％甲醇匀浆脱蛋白。将匀浆离心10min(15000×g，4℃)，并保存上清液。使用试剂盒测定乙酰胆碱Ach含量水平。实验结果见表3。
表3各实验组对小鼠脑海马体中乙酰胆碱试验的影响(
n＝10)
| 组别 | Ach含量(μg/mprot) |
| 空白 | 22.1±1.8 |
| 阴性 | 16.5±1.6<sup>##</sup> |
| 阳性 | 20.8±1.4** |
| 实施例1 | 19.8±1.2** |
| 实施例2 | 18.4±1.0* |
| 实施例3 | 19.9±1.1** |
| 实施例4 | 18.7±1.0* |
| 对比例1 | 16.2±1.2 |
| 对比例2 | 16.9±1.3 |
| 对比例3 | 17.3±1.4 |
| 对比例4 | 17.5±1.5 |
| 对比例5 | 17.9±1.4 |
| 对比例6 | 18.0±1.3 |
| 对比例7 | 17.5±1.5 |
注：给药组与空白组比较，#p<0.05，##p<0.01；给药组与阴性组比较，*p<0.05，**p<0.01。
神经递质Ach在记忆损伤患者的认知功能障碍中发挥重要作用，从上表可以看出，东莨菪碱的干预显著降低阴性组小鼠脑海马体中Ach含量，而给予实施例1-4之后，又可以显著提高其含量，且具有显著差异性(p<0.01，p<0.05)。而对比例与阴性组相比有略微上升，但无明显改善无统计学差异。因此本专利组合物能显著提高小鼠脑海马体中乙酰胆碱含量，从而改善记忆力。
3)组合物抗氧化能力测试——脑海马组织氧化应激水平的测定
颈椎脱臼处死小鼠后，取约0.5g的脑海马组织加预冷的PBS制成质量分数为10％的匀浆液，离心10min后取上清(4℃，10000×g)，二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯荧光定量分析海马组织匀浆中活性氧(reactiveoxygen species，ROS)水平，硫代巴比妥酸法测定海马组织匀浆中丙二醛(MDA)含量，试剂盒测定海马组织匀浆中总抗氧化能力(T-AOC)水平。
表4各组小鼠海马组织ROS荧光强度、MDA含量及T-AOC水平(
n＝10)
注：给药组与空白组比较，#p<0.05，##p<0.01；给药组与阴性组比较，*p<0.05，**p<0.01
由表4可见，给予实施例2样品可以显著减低小鼠海马组织中ROS的含量(p<0.05)，实施例1、3、4样品对小鼠海马组织中ROS的含量降低更为显著(p<0.01)；实施例1-4对MDA的含量的减低且具有显著差异性(p<0.05)；同时可以提升海马组织总抗氧化水平，且具有显著差异(p<0.05)。而对照例与阴性组相比对ROS/MDA有一定的下降，但作用不明显。
结果表明，该组合物具有抗氧化能力，能阻止活性氧ROS、丙二醛(MDA)的形成或降低其含量，能显著提升海马组织的总抗氧化能力使神经细胞的退行性速度减缓，进而保护神经细胞免受自由基的损伤，最终达提高学习记忆力并改善因衰老导致障碍病程的作用。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (9)
1.一种具有改善记忆力抗氧化组合物，其特征在于，按重量份计，所述改善记忆抗氧化组合物由如下组分组成：苹果皮粉250～1250份，果粉250～1000份，磷脂125～500份，牛磺酸10～15份，维生素C 6～25份，维生素E1～5份。
2.根据权利要求1所述的改善记忆抗氧化组合物，其特征在于，所述果粉选自蓝莓果粉和野樱莓果粉中的一种或两种的混合。
3.根据权利要求1所述的改善记忆抗氧化组合物，其特征在于，所述苹果皮粉来源于苹果皮干燥后粉碎得到的全粉末。
4.根据权利要求1所述的改善记忆抗氧化组合物，其特征在于，按重量份计，苹果皮粉500～1250份，果粉500～1000份，磷脂250～500份，牛磺酸12～15份，维生素C10～25份，维生素E 2～5份。
5.根据权利要求1所述的改善记忆抗氧化组合物，其特征在于，按重量份计，苹果皮粉500～1000份，果粉500～800份，磷脂250～300份，牛磺酸12～15份，维生素C10～20份，维生素E 2～5份。
6.一种口服制剂，其特征在于，所述口服制剂包含如权利要求1～5任一项所述的改善记忆抗氧化组合物组合物。
7.根据权利要求6所述的口服制剂，其特征在于，所述改善记忆抗氧化组合物占口服制剂总含量的1％wt～100％wt。
8.根据权利要求6所述的口服制剂，其特征在于，所述口服制剂还包含食品可接受的载体或稀释剂。
9.根据权利要求6所述的口服制剂，其特征在于，所述口服制剂为粉剂、颗粒剂、口服液。
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