CN111474253A - 一种茄尼醇标准样品的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种茄尼醇标准样品的制备方法及其应用，包括茄尼醇粗提物溶液的制备、半制备型色谱分离纯馏分系统的创建、馏分收集；本发明采用半制备型液相色谱系统，制备分离出的茄尼醇标准样品，纯度高，工艺简单，制备速度快，产品质量稳定，均匀性好，能够制得高纯度(99％以上)茄尼醇标准样品，明显优于现有技术中采用重结晶制得纯度为95％的产品，所涉及的溶剂无污染，可实现清洁生产。本发明旨在提供一种经济、快速、有效的茄尼醇标准样品制备方法，能够弥补我国在茄尼醇标准样品研制方面的技术空白，同时解决对食品中的茄尼醇进行定量检测研究时缺少茄尼醇标准样品的难题。
Description
技术领域
本发明涉及化合物提取纯化领域，尤其涉及一种茄尼醇标准样品的制备方法及其应用，具体来说是涉及一种用于保健食品中茄尼醇的定量检测的茄尼醇标准样品的制备方法及其应用。
背景技术
茄尼醇，九聚异戊二烯伯醇，英文名solanesol，分子式:C45H74O，分子量:631.0685，是一种重要的医药中间体，是泛醌类药物中间体不可替代的成分，是合成维生素K的侧链和辅酶Q10以及合成抗溃疡药物、抗癌药物不可替代的天然原料。茄尼醇带有多个连续的双键，因此采用人工合成的方法难以得到，所以目前茄尼醇的主要获得途径仍然是从植物中提取。同时由于植物中茄尼醇的存在方式一部分为游离态，另一部分为与有机酸结合的茄尼醇酯化合物，所以从植物中提取茄尼醇通常需要皂化使其中的茄尼醇酯变为游离的茄尼醇，然后通过萃取将皂化液中茄尼醇分离出来。
目前常见的从植物中提取茄尼醇的方法主要有溶剂提取和超临界提取等方法。超临界提取采用液体CO2作为提取剂，具有设备要求复杂，运行成本高的缺点，所以溶剂提取仍然是从植物中提取茄尼醇的主要方法。采用溶剂提取法从植物中提取化合物时，提取溶剂与原料之间目标化合物的浓度差是决定提取速度和效率的主要因素之一。
柱色谱提取法具有提取效率高、制备纯度高、上样量大、溶剂消耗少、便于实现在线制备等优点，使得其在天然产物制备中应用广泛，可用于茄尼醇等醇类天然产物的分离制备。截至目前，国内尚未有研究机构能够提供茄尼醇标准样品及其制备方法，而进口国外生产的茄尼醇标准样品存在费用高昂、手续繁琐、到货周期长等问题，因此为茄尼醇含量测定制备相应标准样品尤为必要。
发明内容
本发明解决的技术问题是，克服现有技术的缺陷，提供一种茄尼醇标准样品的制备方法及其应用，该制备方法的制备工艺简单且制备速度快，能够制备得到高纯度的茄尼醇标准样品。本发明旨在提供一种经济、快速、有效的茄尼醇标准样品制备方法，能够弥补我国在茄尼醇标准样品研制方面的技术空白，同时解决对食品中的茄尼醇进行定量检测研究时缺少茄尼醇标准样品的难题。
为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：
一种茄尼醇标准样品的制备方法，包括如下步骤：
步骤一：将马铃薯茎叶切碎，经过60目筛子筛选，溶解在含碱的乙醇溶液中，并采用超声提取含碱的乙醇溶液，然后经0.22μm或0.45μm滤膜过滤，得到茄尼醇粗提物溶液；
步骤二：将步骤一得到的茄尼醇粗提物溶液注入到半制备型色谱分离纯馏分系统中，其中色谱分离纯馏分条件如下：色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm，30μm)、流动相为体积百分比50:50的甲醇和乙醇、流速为5～10mL/min、柱温为30℃、运行时间为15min、检测波长为210nm、进样量为0.1～1mL，收集4.5～9.5min时间段的馏分；
步骤三：将步骤二中得到的馏分接收在预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中，然后加入少量盐酸中和至pH7，干燥后得到茄尼醇标准样品。
本发明采用半制备型液相色谱系统，通过上述茄尼醇标准样品的制备方法制备分离出的茄尼醇标准样品，纯度高，工艺简单，制备速度快，产品质量稳定，均匀性好，能够制得高纯度(99％以上)茄尼醇标准样品，明显优于现有技术中采用重结晶制得纯度为95％的产品，所涉及的溶剂无污染，可实现清洁生产。
作为优选，步骤一中的碱为氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化钙中的其中一种或至少其中两种的混合物，碱的用量为马铃薯茎叶质量的0.01-10％。
作为优选，步骤二中的流速为10mL/min，进样量0.1～1mL，收集4.5～9.5min时间段的馏分。
作为优选，步骤三中的干燥为采用减压蒸馏的方法吹去全部液态水，然后置于冻干机-60～-40℃中冻干20～30小时，冻干后的茄尼醇固体碾磨粉碎后，再次冻干20～30小时，得到茄尼醇标准样品。
作为优选，茄尼醇固体采用棕色样品瓶进行分装，使用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖密封住棕色样品瓶，并采用塑料袋独立真空塑封，放在-18℃冰箱中保存，有效期为1年。采用塑料袋独立真空塑封棕色样品瓶，进一步提高了对棕色样品瓶内的茄尼醇固体的密封隔离作用。
一种茄尼醇标准样品的应用，将根据一种茄尼醇标准样品制备方法制备得到的茄尼醇标准样品用于保健食品中茄尼醇的定量检测，通过本发明制得的茄尼醇标准样品的红外光谱图、正离子模式下质谱图、紫外光谱图、1H-NMR图谱、13C-NMR图谱对茄尼醇进行定性检测。
本发明由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果：本发明采用半制备型液相色谱系统，制备分离出的茄尼醇标准样品，纯度高，工艺简单，制备速度快，产品质量稳定，均匀性好，能够制得高纯度(99％以上)茄尼醇标准样品，明显优于现有技术中采用重结晶制得纯度为95％的产品，所涉及的溶剂无污染，可实现清洁生产。本发明旨在提供一种经济、快速、有效的茄尼醇标准样品制备方法，能够弥补我国在茄尼醇标准样品研制方面的技术空白，同时解决对食品中的茄尼醇进行定量检测研究时缺少茄尼醇标准样品的难题。
附图说明
图1为茄尼醇的红外光谱图；
图2为茄尼醇正离子模式下质谱图；
图3为茄尼醇紫外光谱图；
图4为茄尼醇的1H-NMR图谱；
图5为茄尼醇的13C-NMR图谱。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细描述。
实施例
一种茄尼醇标准样品的制备方法，包括如下步骤：步骤一：将马铃薯茎叶切碎，经过60目筛子筛选，溶解在含碱的乙醇溶液中，并采用超声提取含碱的乙醇溶液，然后经0.22μm或0.45μm滤膜过滤，得到茄尼醇粗提物溶液；
步骤二：将步骤一得到的茄尼醇粗提物溶液注入到半制备型色谱分离纯馏分系统中，其中色谱分离纯馏分条件如下：色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm，30μm)、流动相为体积百分比50:50的甲醇和乙醇、流速为5～10mL/min、柱温为30℃、运行时间为15min、检测波长为210nm、进样量为0.1～1mL，收集4.5～9.5min时间段的馏分；其中，PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm，30μm)表示的是：色谱柱的柱子长度为250mm，色谱柱的外径为20mm，色谱柱的填料粒径为30μm；
步骤三：将步骤二中得到的馏分接收在预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中，然后加入少量盐酸中和至pH7，干燥后得到茄尼醇标准样品。
本发明采用半制备型液相色谱系统，通过上述茄尼醇标准样品的制备方法制备分离出的茄尼醇标准样品，纯度高，工艺简单，制备速度快，产品质量稳定，均匀性好，能够制得高纯度(99％以上)茄尼醇标准样品，明显优于现有技术中采用重结晶制得纯度为95％的产品，所涉及的溶剂无污染，可实现清洁生产。
本实施例中，步骤一中的碱为氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化钙中的其中一种或至少其中两种的混合物，碱的用量为马铃薯茎叶质量的0.01-10％。
本实施例中，步骤二中的流速为10mL/min，进样量0.1～1mL，收集4.5～9.5min时间段的馏分。
本实施例中，步骤三中的干燥为采用减压蒸馏的方法吹去全部液态水，然后置于冻干机-60～-40℃中冻干20～30小时，冻干后的茄尼醇固体碾磨粉碎后，再次冻干20～30小时，得到茄尼醇标准样品。
本实施例中，茄尼醇固体采用棕色样品瓶进行分装，使用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖密封住棕色样品瓶，并采用塑料袋独立真空塑封，放在-18℃冰箱中保存，有效期为1年。采用塑料袋独立真空塑封棕色样品瓶，进一步提高了对棕色样品瓶内的茄尼醇固体的密封隔离作用。
一种茄尼醇标准样品的应用，将本实施例的一种茄尼醇标准样品制备方法制备得到的茄尼醇标准样品用于保健食品中茄尼醇的定量检测，具体地：本实施例制得的茄尼醇标准样品的茄尼醇的红外光谱图、正离子模式下质谱图、紫外光谱图、1H-NMR图谱、13C-NMR图谱分别如图1所示、如图2所示、如图3所示、如图4所示、如图5所示，通过茄尼醇的红外光谱图、正离子模式下质谱图、紫外光谱图、1H-NMR图谱、13C-NMR图谱对茄尼醇标准样品进行定性检测。
总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。
Claims (6)
1.一种茄尼醇标准样品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤一：将马铃薯茎叶切碎，经过60目筛子筛选，溶解在含碱的乙醇溶液中，并采用超声提取含碱的乙醇溶液，然后经0.22μm或0.45μm滤膜过滤，得到茄尼醇粗提物溶液；
步骤二：将步骤一得到的茄尼醇粗提物溶液注入到半制备型色谱分离纯馏分系统中，其中色谱分离纯馏分条件如下：色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm，30μm)、流动相为体积百分比50:50的甲醇和乙醇、流速为5～10mL/min、柱温为30℃、运行时间为15min、检测波长为210nm、进样量为0.1～1mL，收集4.5～9.5min时间段的馏分；
步骤三：将步骤二中得到的馏分接收在预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中，然后加入少量盐酸中和至pH7，干燥后得到茄尼醇标准样品。
2.根据权利要求1所述的一种茄尼醇标准样品的制备方法，其特征在于：步骤一中的碱为氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化钙中的其中一种或至少其中两种的混合物，碱的用量为马铃薯茎叶质量的0.01-10％。
3.根据权利要求1或2所述的一种茄尼醇标准样品的制备方法，其特征在于：步骤二中的流速为10mL/min，进样量0.1～1mL，收集4.5～9.5min时间段的馏分。
4.根据权利要求3所述的一种茄尼醇标准样品的制备方法，其特征在于：步骤三中的干燥为采用减压蒸馏的方法吹去全部液态水，然后置于冻干机-60～-40℃中冻干20～30小时，冻干后的茄尼醇固体碾磨粉碎后，再次冻干20～30小时，得到茄尼醇标准样品。
5.根据权利要求4所述的一种茄尼醇标准样品的制备方法，其特征在于：茄尼醇固体采用棕色样品瓶进行分装，使用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖密封住棕色样品瓶，并采用塑料袋独立真空塑封，放在-18℃冰箱中保存。
6.一种茄尼醇标准样品的应用，其特征在于：将根据权利要求1或2或4或5所述的一种茄尼醇标准样品制备方法制备得到的茄尼醇标准样品用于保健食品中茄尼醇的定量检测。
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