CN111467497A - Fto作为靶点在治疗压力负荷性心肌损伤中的应用 - Google Patents

Fto作为靶点在治疗压力负荷性心肌损伤中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及FTO(脂肪和肥胖相关)蛋白作为靶点在治疗压力负荷性心肌损伤中的应用。本发明证实心脏经受压力超负荷的刺激后，FTO下调是心肌受损的重要原因；过表达FTO的压力负荷性心肌损伤小鼠比模型组小鼠心肌糖摄取明显增加，心功能明显改善，由此得出过表达FTO可以治疗压力超负荷后心肌损伤，FTO是治疗压力负荷性心肌损伤的药物靶点。本发明还提供了一种疗效显著的FTO过表达载体。本发明优点在于：开发了FTO作为改善压力负荷性心肌损伤治疗靶点的用途，为压力负荷性心肌损伤疾病提供了新的药物研究方向；提供了一种具有临床应用前景的以FTO为靶点的压力超负荷后心肌损伤药物。

Description

FTO作为靶点在治疗压力负荷性心肌损伤中的应用
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体地说，涉及FTO作为靶点在治疗压力负荷性心肌损伤中的应用，和所设计的FTO过表达载体及其在制备治疗压力负荷性心肌损伤临床药物中的用途。
背景技术
临床上，心肌损伤的原因多种多样，而心脏压力超负荷是导致心肌损伤及重塑的重要原因之一。临床上常见的压力超负荷疾病主要包括高血压、主动脉瓣狭窄等，但结合目前国情及有效器械治疗瓣膜异常的实施，目前这类疾病以高血压为主要原发疾病。虽然目前抗高血压及抗心肌重塑药物已取得了很大的进展，但仍不可以完全逆转心肌损伤及重塑，并最终导致严重的心肌损伤甚至心力衰竭。因此，从新的视角去探索心肌损伤治疗的新靶点迫在眉睫。
心肌能量代谢异常是心肌损伤的重要病理基础。心肌主要的能量底物为脂肪酸和葡萄糖，另外氨基酸、酮类和乳酸也提供一小部分能源。正常状态下，心肌主要利用脂肪酸，其次为葡萄糖；而当心肌受损时，葡萄糖则为心肌主要能源物质，这是因为在消耗同等氧原子的前提下，葡萄糖比脂肪酸能提供更多的ATP。因此，改善受损心肌葡萄糖代谢是心肌损伤治疗的一个重要发展方向。探讨不同类型心肌损伤发生中心肌糖摄取情况，有助于早期发现心肌损伤危险因素，同时更有效的改善心肌损伤预后。
N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)是一种真核生物最常见的RNA修饰，主要存在于mRNA的CDS区、3'-UTR区，特别是终止密码子附近区域。m6A修饰通过影响mRNA的代谢，广泛地参与了各种复杂的生物学过程，如精子发生、胚胎发育、热休克反应、紫外线诱导的DNA损伤、神经元功能等，在乳腺癌、肝癌、白血病等肿瘤的发生发展中也起到一定的作用。
FTO(Fat mass and obesity associated,脂肪和肥胖相关)蛋白是m6A重要的去甲基化酶，其在脂肪形成中具有重要的作用。此外，期刊文献(谭爱花，等.脂肪量和肥胖相关基因与恶性肿瘤的研究进展.中国癌症防治杂志2019年04期)公开了研究发现FTO基因还参与乳腺癌、子宫内膜癌、急性髓系白血病等多种恶性肿瘤的发生发展及预后，FTO基因编码的蛋白是m6A修饰的重要组成部分，可调控肿瘤干细胞功能，促进癌细胞的生长和转移；专利文献CN102417932A，公开日2012.04.18，公开了离体细胞受到辐射后，FTO基因的表达水平与受到的辐射剂量成正比，存在一定的剂量-效应关系，且可以通过RT-PCR或westernblot法检测，因此可以通过检测待测离体细胞中的FTO基因的表达水平来判断受照射剂量的大小。
但目前FTO在葡萄糖代谢中的作用尚未清楚。因此，阐明FTO在心肌葡萄糖代谢以及心肌受损中的作用，为治疗心肌损伤提供新的作用靶点和实验依据，设计简便高效的药物制剂，具有十分重要的临床意义。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供FTO的新用途和一种具有临床应用前景的FTO过表达载体。
第一方面，本发明提供了FTO的促进剂在制备预防或治疗压力负荷性心肌损伤的药物中的应用。
作为本发明的一个优选例，所述压力负荷性心肌损伤是由高血压或主动脉瓣狭窄引起的心肌损伤。
作为本发明的另一优选例，所述FTO的促进剂为序列如SEQ ID NO:2所示的过表达载体或由所述过表达载体包装制备的病毒。
作为本发明的另一优选例，预防或治疗的对象为压力负荷性心肌损伤动物模型。
更优选地，所述压力负荷性心肌损伤动物模型是通过主动脉弓缩窄术构建的。
第二方面，本发明提供了FTO在制备研究心肌葡萄糖代谢的实验试剂中的应用。
第三方面，本发明提供了FTO的促进剂在制备促进体外心肌细胞葡萄糖摄取的实验试剂中的应用。
作为本发明的一个优选例，所述FTO的促进剂为序列如SEQ ID NO:2所示的过表达载体或由所述过表达载体包装制备的病毒。
第四方面，本发明提供了一种治疗压力负荷性心肌损伤的过表达载体，所述过表达载体的序列如SEQ ID NO:2所示。
第五方面，本发明提供了一种腺相关病毒，所述腺相关病毒是由如上所述的过表达载体包装制备的。
本文中，所述“实验试剂”是指不同于药物，其是用于在体外进行研究实验所使用的试剂。
本发明优点在于：
1、本发明证实心脏经受压力超负荷的刺激后，FTO下调是心肌受损的重要原因；过表达FTO的压力负荷性心肌损伤小鼠比模型组小鼠心肌糖摄取明显增加，心功能明显改善，由此得出过表达FTO可以治疗压力超负荷后心肌损伤，FTO是治疗压力负荷性心肌损伤的药物靶点。本发明开发了FTO作为改善压力负荷性心肌损伤治疗靶点的用途，为压力负荷性心肌损伤疾病提供了新的药物研究方向。
2、本发明构建了一种FTO过表达载体，该载体在基本载体、目的片段和插入位置等方面选择恰当，经动物实验证实其能显著地增强受损心肌收缩能力，改善心功能，优于其他FTO过表达载体，具备良好的临床应用前景。
3、本发明为在体内或体外研究FTO与心肌葡萄糖代谢的关系奠定了基础。
附图说明
附图1：m6A甲基化峰。
附图2：FTO mRNA表达情况。
附图3：FTO蛋白表达情况。
附图4：FTO敲减后的左室射血分数。
附图5：FTO敲减后的短轴缩短率。
附图6：FTO敲减后小鼠心肌糖摄取情况。
附图7：FTO过表达后小鼠心肌糖摄取情况。
附图8：FTO过表达后的左室射血分数。
附图9：FTO过表达后的短轴缩短率。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
1方法
1.1动物和TAC术
本实验所使用的动物为清洁级C57BL/6小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。8周龄的雄性小鼠通过主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction，TAC)构造压力负荷性心肌损伤模型，步骤如下：
(1)小鼠胸部脱毛、麻醉固定后，沿颈部正中切口切开皮肤，暴露胸部到胸骨角；
(2)用眼科剪沿胸骨上窝至胸骨角剪开胸部，用扩胸器撑开胸壁，可看到白色脂肪状的组织即胸腺；
(3)用显微镊小心钝性分离胸腺组织，用消毒棉签吸除血液，主动脉弓即在胸腺下方；
(4)小心分离主动脉弓附近组织，充分暴露主动脉及其分支(头臂干、左颈总动脉、左锁骨下动脉)；
(5)用自制弯钩将5号丝线穿过主动脉弓，将27G针头横置于主动脉弓上，结扎丝线于针头上，小心抽出针头；
(6)检查没有出血点后，挤出胸部空气避免气胸，关胸，缝合皮肤；
(7)将小鼠置于加热垫上待其苏醒后放回动物房中。
1.2 m6A测序
将TAC术后8周的小鼠心脏取出，进行m6A测序。m6A测序服务由上海欧易生物医学科技有限公司提供。步骤为：将心脏组织总RNA提取出来后，用NanoDrop检测其浓度和纯度。用Oligo-dT磁珠对总RNA带有polyA的mRNA进行富集。对磁珠进行富集，得到带有polyA的mRNA。之后加入片段化试剂，将完整的mRNA进行片段化。将片段化后的RNA分成两份：一份加入带有m6A抗体的免疫磁珠，对含有m6A甲基化的mRNA片段进行富集；另一份作为control，直接构建常规的转录组测序文库。对m6A抗体免疫磁珠进行富集，带有m6A的mRNA片段进行回收后，按照转录组的建库流程构建常规的测序文库。将构建好的2个测序文库，即m6A-seq文库和RNA-seq文库分别进行高通量测序。随后对下机数据进行生物信息学分析。
1.3心功能检测
用Vevo 770型小动物超声仪(加拿大VisualSonics公司)检测小鼠心功能：左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)。将小鼠脱毛、麻醉后置于加热板上。涂适量超声胶于心前区，用VisualSonics Vev0770超声仪自带的频率为30MHz的探头在小鼠胸壁上采集胸骨旁长轴切面，记录B型切面图像及录影。取胸骨旁左室长轴切面，在二尖瓣腱索水平获得M型切面图像。测量LVEF、FS以评估心功能。
1.4 PET-CT
使用小动物PET-CT检测小鼠心肌糖摄取情况。检测所用18F标记的FDG由复旦大学附属肿瘤医院核医学科于检查当天制备。小动物PET-CT扫描及图像分析采用InveonMicro-PET-CT系统(Inveon Research Workplace，Siemens Medical Solution，California，USA)完成。
(1)小鼠于检查前禁食一晚，注射药物前给小鼠称体重，需要记录的数据有：小鼠编号、注射前时间、注射前活性、注射时间、注射后时间、注射后活性、体重；
(2)稀释药物：将取得的放射性药物(即18F标记的FDG)稀释成约200μCi每个注射器，用生理盐水将体积补齐至50μL；
(3)将小鼠放置麻盒中先快速诱导麻醉1分钟，然后再维持麻醉，等小鼠呼吸平稳后腹腔注射18F标记的FDG，记录注射时间；
(4)称空针活性，并记录时间；
(5)小鼠在异氟烷麻醉状态下维持1h后上机扫描。在重新校准每克注射剂量百分比(ID/g)后，使用Inveon研究工作场所从感兴趣区域(ROI)重建图像并量化标准摄取值。
2结果
2.1 m6A测序结果
TAC组m6A甲基化峰比sham组高(图1)，表明压力负荷性心肌损伤后m6A甲基化水平增高。
2.2 PCR和western-blot结果
为了进一步探讨TAC术后m6A水平升高的驱动因素，我们使用PCR和western-blot检测了TAC术后m6A去甲基化酶FTO mRNA表达和蛋白表达情况，发现TAC组FTO mRNA和蛋白表达水平均低于sham组(图2和图3)，说明压力负荷性心肌损伤后m6A去甲基化酶FTO表达下降。
2.3心超结果
FTO敲减后加重小鼠心功能障碍。FTO敲减通过尾静脉注射敲减型腺相关病毒9型(AAV9)实现。敲减型AAV9由穿梭质粒pAAV-U6-shRNA(FTO)-CMV-EGFR-WPRE-spolyA(序列如SEQ ID NO:1所示)与pAAV-RC9(以pAAV-RC质粒(购于Agilent Technologies)为基本骨架，用AAV9外壳蛋白编码序列GenBank ID:AY530579替换其第2013至4220位序列)、pHelper质粒(购于Agilent Technologies)共转染AAV-293细胞制备得到。敲减3周后行TAC术，随后将动物分为4组：sham+Con组(假手术+注射对照病毒组)、sham+FTO-KD组(假手术+注射FTO敲减病毒)、TAC+Con组、TAC+FTO-KD组。小鼠TAC术后EF值和FS值下降，FTO敲减后心功能进一步降低(图4和图5)，说明FTO缺失后，小鼠心肌应对压力应激的能力减弱，当遇到压力应激后，心肌损伤进一步加重。
2.4 PET-CT结果
对于发生压力负荷性心肌损伤的小鼠(TAC+Con组)，FTO敲减后，小鼠心肌糖摄取减少(图6)，这将导致小鼠心肌能量来源减少，加重心肌损伤。
2.5 FTO过表达后心功能改善结果
FTO过表达后可增加心肌糖摄取(图7)，提高LVEF(图8)和FS值(图9)。FTO过表达通过尾静脉注射过表达AAV9实现。过表达AAV9由穿梭质粒pAAV-CMV-FTO-HA-P2A-EGFR-3FLAG(序列如SEQ ID NO:2所示)与pAAV-RC9(以pAAV-RC质粒(购于Agilent Technologies)为基本骨架，用AAV9外壳蛋白编码序列GenBank ID:AY530579替换其第2013至4220位序列)、pHelper质粒(购于Agilent Technologies)共转染AAV-293细胞制备得到。过表达3周后行TAC术，随后将动物分为4组：sham+Con组(假手术+注射对照病毒组)、sham+FTO-OE组(假手术+注射FTO过表达病毒)、TAC+Con组、TAC+FTO-OE组。TAC+Con组心肌糖摄取比sham+Con组高，而TAC+FTO-OE组又比TAC+Con组高，TAC+FTO-OE组是TAC+Con组的1.4倍(图7)，说明过表达FTO后可增加受损心肌糖摄取，增加能量来源。同时，过表达FTO后，TAC+FTO-OE组比TAC+Con组心脏EF和FS值增加，分别是TAC+Con组的1.4倍和1.6倍(图8和图9)，说明过表达FTO可以增强受损心肌收缩能力，改善心功能。
3结论
由上述结果可知，心脏经受压力超负荷的刺激后，FTO下调是心肌受损的重要原因。TAC+FTO-OE组比TAC+Con组心肌糖摄取明显增加，心功能明显改善。由此得出过表达FTO可以治疗压力超负荷后心肌损伤，FTO是治疗压力负荷性心肌损伤的药物靶点。
本发明与既往传统的心肌损伤治疗如强心、利尿、扩血管、改善神经内分泌治疗相比，针对FTO靶点治疗压力负荷性心肌损伤患者，通过促进心肌糖摄取，增加了心肌能量代谢的能量来源，从而起到改善EF和FS值的作用，对压力负荷性心肌损伤起到保护作用，提高患者生活质量。本发明开发了FTO作为改善压力负荷性心肌损伤治疗靶点的用途；同时为压力负荷性心肌损伤疾病提供新的药物研究方向。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 复旦大学附属中山医院
<120> FTO作为靶点在治疗压力负荷性心肌损伤中的应用
<130> /
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 5215
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tgcggccgcc cccttcaccg agggcctatt tcccatgatt 180
ccttcatatt tgcatatacg atacaaggct gttagagaga taattggaat taatttgact 240
gtaaacacaa agatattagt acaaaatacg tgacgtagaa agtaataatt tcttgggtag 300
tttgcagttt taaaattatg ttttaaaatg gactatcata tgcttaccgt aacttgaaag 360
tatttcgatt tcttggcttt atatatcttg tggaaaggac gaaacaccgg gcagctgaaa 420
taccctaaat tcaagagatt tagggtattt cagctgcttt tttggctagc cgttacataa 480
cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata 540
atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag 600
tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc 660
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cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt 840
ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca 900
aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag 960
gtctatataa gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagtcg ccatccacgc 1020
tgttttgacc tccatagaag acaccgggac cgatccagcc tccggtcgac gccaccatgg 1080
tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg 1140
acgtaaacgg ccacaagttc agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca 1200
agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg 1260
tgaccaccct gacctacggc gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc 1320
acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca 1380
aggacgacgg caactacaag acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga 1440
accgcatcga gctgaagggc atcgacttca aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc 1500
tggagtacaa ctacaacagc cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag aagaacggca 1560
tcaaggtgaa cttcaagatc cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc 1620
actaccagca gaacaccccc atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc 1680
tgagcaccca gtccgccctg agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc 1740
tggagttcgt gaccgccgcc gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac aagtaaggta 1800
ccggttatcg ataatcaacc tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt 1860
aactatgttg ctccttttac gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct 1920
attgcttccc gtatggcttt cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt 1980
tatgaggagt tgtggcccgt tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac 2040
gcaaccccca ctggttgggg cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg aactttcgct 2100
ttccccctcc ctattgccac ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca 2160
ggggctcggc tgttgggcac tgacaattcc gtggtgttgt cggggaaatc atcgtccttt 2220
ccttggctgc tcgcctatgt tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc 2280
ccttcggccc tcaatccagc ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct 2340
cttccgcgtc ttcgccttcg ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg 2400
catcgatacc gctcgagaat aaaatatctt tattttcatt acatctgtgt gttggttttt 2460
tgtgtgaatt ctctagaagg aacccctagt gatggagttg gccactccct ctctgcgcgc 2520
tcgctcgctc actgaggccg ggcgaccaaa ggtcgcccga cgcccgggct ttgcccgggc 2580
ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagctg cctgcagggg cgcctgatgc ggtattttct 2640
ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg catacgtcaa agcaaccata gtacgcgccc 2700
tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt 2760
gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc 2820
ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta 2880
cggcacctcg accccaaaaa acttgatttg ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc 2940
tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg 3000
ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcgggctatt cttttgattt ataagggatt 3060
ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat 3120
tttaacaaaa tattaacgtt tacaatttta tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat 3180
gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc ctgacgggct 3240
tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccc tctccgggag ctgcatgtgt 3300
cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgagaggaa agggcctcgt gatacgccta 3360
tttttatagg ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg 3420
ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg 3480
ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt 3540
attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt 3600
gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg 3660
ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa 3720
cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt 3780
gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag 3840
tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt 3900
gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga 3960
ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt 4020
tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta 4080
gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg 4140
caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc 4200
cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt 4260
atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg 4320
gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg 4380
attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa 4440
cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa 4500
atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga 4560
tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg 4620
ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact 4680
ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac 4740
cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg 4800
gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg 4860
gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga 4920
acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc 4980
gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg 5040
agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc 5100
tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc 5160
agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgt 5215
<210> 2
<211> 7175
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tgcggccgca cgcgtgtgtc tagaacgcgt ggagctagtt 180
attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc atatatggag ttccgcgtta 240
cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt 300
caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac tttccattga cgtcaatggg 360
tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat atgccaagta 420
cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc cagtacatga 480
ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg 540
tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg gtttgactca cggggatttc 600
caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact 660
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gggaggtcta tataagcaga gctcgtttag tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc 780
cacgctgttt tgacctccat agaagacacc gggaccgatc cagcctccgg taccgaaaac 840
cccggtccgg ctagcgccac catgaagcgc gtccagaccg cggaggaacg agagcgggaa 900
gctaagaaac tgaggctcct tgaggagctt gaagacactt ggcttcctta cctgaccccc 960
aaagatgatg agttctatca gcagtggcag ctgaaatacc ctaaactggt tttccgagag 1020
gccggcagca taccagagga gctgcataag gaggtccccg aggcctttct cacactgcat 1080
aagcatggct gcttgtttcg ggacgtggtg aggatccaag gcaaagatgt gctcacccca 1140
gtgtctcgca tcctcatcgg ggacccaggc tgcacctaca agtacttgaa caccagactc 1200
ttcacggtgc cctggcccgt gaagggctgc acggtcaagt acacagaggc tgagatcgcc 1260
gctgcatgtc agaccttcct aaagctcaat gactacctcc aggtggagac catccaggcc 1320
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gaggacgagt ccagcttcga aggcagagat cctgatactt ggcatgttgg ttttaagatc 1680
tcttgggaca tcgagacacc aggattaaca atccctcttc accagggaga ctgctatttc 1740
atgctggatg acctcaatgc cacccaccag cactgtgttt tggctggctc acagcctcgg 1800
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cgctgtcagt tggcgctgca gaatgtcctc aatgactcag acgatggcga cgtctcgttg 1920
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cccgtgccct ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg cttcagccgc 2700
taccccgacc acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga aggctacgtc 2760
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ggcaacatcc tggggcacaa gctggagtac aactacaaca gccacaacgt ctatatcatg 2940
gccgacaagc agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa catcgaggac 3000
ggcagcgtgc agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga cggccccgtg 3060
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tccttttacg ctatgtggat acgctgcttt aatgcctttg tatcatgcta ttgcttcccg 3420
tatggctttc attttctcct ccttgtataa atcctggttg ctgtctcttt atgaggagtt 3480
gtggcccgtt gtcaggcaac gtggcgtggt gtgcactgtg tttgctgacg caacccccac 3540
tggttggggc attgccacca cctgtcagct cctttccggg actttcgctt tccccctccc 3600
tattgccacg gcggaactca tcgccgcctg ccttgcccgc tgctggacag gggctcggct 3660
gttgggcact gacaattccg tggtgttgtc ggggaaatca tcgtcctttc cttggctgct 3720
cgcctgtgtt gccacctgga ttctgcgcgg gacgtccttc tgctacgtcc cttcggccct 3780
caatccagcg gaccttcctt cccgcggcct gctgccggct ctgcggcctc ttccgcgtct 3840
tcgccttcgc cctcagacga gtcggatctc cctttgggcc gcctccccgc atcgataccg 3900
agcgctgctc gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg 3960
gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc 4020
attttgtctg actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc 4080
aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg tctattggga accaagctgg 4140
agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca atctccgcct cctgggttca agcgattctc 4200
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ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc atattggcca ggctggtctc caactcctaa 4320
tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact 4380
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ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc 4740
tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct 4800
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accgaaacgc gcgagacgaa agggcctcgt gatacgccta tttttatagg ttaatgtcat 5340
gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc 5400
tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg 5460
ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc 5520
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gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct 5640
caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac 5700
ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact 5760
cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa 5820
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taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt 5940
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accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc 6720
accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa 6780
gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg 6840
ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag 6900
atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag 6960
gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa 7020
cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt 7080
gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg 7140
gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgt 7175

Claims (10)

1.FTO的促进剂在制备预防或治疗压力负荷性心肌损伤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述压力负荷性心肌损伤是由高血压或主动脉瓣狭窄引起的心肌损伤。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述FTO的促进剂为序列如SEQ ID NO:2所示的过表达载体或由所述过表达载体包装制备的病毒。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，预防或治疗的对象为压力负荷性心肌损伤动物模型。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述压力负荷性心肌损伤动物模型是通过主动脉弓缩窄术构建的。
6.FTO在制备研究心肌葡萄糖代谢的实验试剂中的应用。
7.FTO的促进剂在制备促进体外心肌细胞葡萄糖摄取的实验试剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述FTO的促进剂为序列如SEQ ID NO:2所示的过表达载体或由所述过表达载体包装制备的病毒。
9.一种治疗压力负荷性心肌损伤的过表达载体，其特征在于，所述过表达载体的序列如SEQ ID NO:2所示。
10.一种腺相关病毒，其特征在于，所述腺相关病毒是由权利要求9所述的过表达载体包装制备的。
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