CN103845317A

CN103845317A - 恩他卡朋在预防或治疗肥胖等代谢综合征中的应用

Info

Publication number: CN103845317A
Application number: CN201210497436.7A
Authority: CN
Inventors: 黄牛; 智刚; 柴继杰; 彭士明; 侯楠楠
Original assignee: National Institute of Biological Sciences Beijin
Current assignee: National Institute of Biological Sciences Beijin
Priority date: 2012-11-28
Filing date: 2012-11-28
Publication date: 2014-06-11
Anticipated expiration: 2032-11-28
Also published as: WO2014082544A1; CA2892902C; CN103845317B; CN104955451A; US20180303788A1; NZ708610A; AU2013351676B2; EP2925312A4; EP2925312A1; US10004715B2; EP2925312B1; AU2013351676A1; CN104955451B; US10682329B2; US20140148383A1; CA2892902A1

Abstract

本发明公开了恩他卡朋在预防或治疗肥胖等代谢综合征中的应用。具体而言，本发明公开了如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗代谢类疾病、心脑血管疾病、以及由此引起的肝脏、肾脏、甲状腺疾病药物中的应用。所述的代谢疾病选自肥胖、糖尿病、高血脂症；所述的心脑血管疾病选自高血压病、冠心病、动脉粥样硬化。所述的预防和/或治疗肥胖是抑制体重增高或促进体重降低。所述的血脂选自低密度脂蛋白、低密度脂蛋白-胆固醇、胆固醇、或甘油酸三酯。所述的肾脏疾病选自糖尿病性肾病。

Description

恩他卡朋在预防或治疗肥胖等代谢综合征中的应用

技术领域

本发明涉及恩他卡朋在预防或治疗肥胖等代谢综合征中的应用。属于医药技术领域

背景技术

世界范围内，肥胖症已经成为了人类健康的巨大威胁。导致肥胖症，这一慢性疾病的因素包括环境因素和遗传因素。最近，人们利用全基因组关联研究（GWAS，genome-wide association studies)方法，对于肥胖病人的单核苷酸多态性（SNP）进行了分析，发现单一基因FTO（fat mass and obesity）基因与肥胖表型显著相关。^1-4而且，FTO基因与肥胖的关系在转基因动物模型上得到了进一步的证实。具体来说，FTO基因完全敲除和神经细胞特异敲除的小鼠与野生型相比体重明显偏低，而FTO基因高表达的小鼠则会导致肥胖。FTO基因的错义突变（I367F）会导致FTO蛋白活性降低，从而导致小鼠体重偏低。^5-8FTO基因在机体内多个组织中都有表达，特别是下丘脑中控制能量代谢的核团，这一结果支持了FTO影响机体能量代谢的观点。⁹

FTO蛋白是α-酮戊二酸和亚铁离子依赖的核酸去甲基化酶。^9,10它首选的底物是mRNA上的N⁶-meA。这一修饰化的碱基多分布于mRNA终止密码子附近，影响着mRNA的翻译过程。^11,12然而，目前人们对于FTO蛋白的作用机理仍不清楚，特别是FTO蛋白的上游下游作用元件和调控机制尚未报道。所以亟需发现小分子抑制剂，利用其来研究FTO蛋白的活性，更进一步开发新的治疗或预防肥胖疾病的药物。

恩他卡朋（英文名称：entacapone，IUPAC有机化合物系统命名，2E)-2-氰基-3-(3,4-二羟基-5-硝基苯基)-N,N-二乙基-2-丙烯酰胺，英文名称2E)-2-cyano-3-(3,4-dihydroxy-5-nitrophenyl)-N,N-diethylprop-2-enamide，化学结构如式I或附图1所示）。恩他卡朋是已经被FDA批准上市的药物，用于治疗帕金森病。

发明内容

发明人利用基于结构的虚拟筛选方法和分子生物学、细胞生物学以及高脂饲料诱导的肥胖动物模型等实验，发现恩他卡朋是FTO蛋白的抑制剂，具有治疗或预防肥胖等代谢综合征的效果，即提供了恩他卡朋新的用途。

本发明的一个实施方案提供了如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗代谢类疾病、心脑血管疾病、以及由此引起肝脏、肾脏、甲状腺疾病药物中的应用。

本发明的一个实施方案提供了如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗代谢疾病药物中的应用。尤其是预防和/或治疗肥胖、糖尿病、高血脂症药物中的应用。

本发明的一个实施方案提供了如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗心脑血管疾病药物中的应用。尤其是预防和/或治疗高血压病、冠心病、动脉粥样硬化药物中的应用。

本发明的一个实施方案提供了如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肥胖药物中的应用。尤其是抑制体重增高或促进体重降低药物中的应用。

本发明的一个实施方案提供了如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗高血脂症药物中的应用。尤其是降低低密度脂蛋白、低密度脂蛋白-胆固醇、胆固醇、或甘油酸三酯的药物中的应用。

本发明的一个实施方案提供了如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肾脏疾病药物中的应用。尤其是预防和/或治疗糖尿病性肾病药物中的应用。

本发明的一个实施方案提供了一种用于预防和/或治疗代谢类疾病、心脑血管疾病、以及由此引起肝脏、肾脏、甲状腺疾病的药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐。

本发明的一个实施方案提供了一种用于预防和/或治疗肥胖、糖尿病、高血脂症的药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐。

本发明的一个实施方案提供了一种用于预防和/或治疗高血压病、冠心病、动脉粥样硬化的药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐。

本发明的一个实施方案提供了一种用于减低低密度脂蛋白、低密度脂蛋白-胆固醇、胆固醇、或甘油酸三酯的药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐。

本发明的一个实施方案提供了一种用于预防和/或治疗糖尿病性肾病的药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐。

本发明提供了抑制体重增高、促进体重降低、降低血液低密度脂蛋白浓度、降低血液胆固醇浓度、降低血液低密度脂蛋白-胆固醇浓度、降低血液甘油三酯浓度、和/或治疗、改善或减轻选自如下疾病的病理或严重程度或症状，所述的疾病选自糖尿病、高血糖症、糖尿病性肾病、高血脂症、高血压病、冠心病、动脉粥样硬化、心脑血管疾病、以及由此引起的肝脏、肾脏、甲状腺疾病等代谢综合征的方法和应用。

一方面，本发明提供了通过给予非帕金森患者适量的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐以达到抑制体重增高、促进体重降低、降低血液低密度脂蛋白浓度、降低血液胆固醇浓度、降低血液低密度脂蛋白-胆固醇浓度、降低血液甘油三酯浓度、或治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的方法。

另一方面，本发明提供了通过给予患者适量的恩他卡朋，并联合用其他一种或多种药物以达到抑制体重增高、促进体重降低、降低血液低密度脂蛋白浓度、降低血液胆固醇浓度、降低血液低密度脂蛋白-胆固醇浓度、降低血液甘油三酯浓度、或治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的方法。

在本发明的一个特定实施方式中，患者符合一个或多个以下标准：例如

a）没有被诊断为帕金森氏病；

b）年龄小于50，40或30岁；

c）肥胖或体重过重；

d）患有或被诊断为患有糖尿病，高血糖症，糖尿病性肾病，高血脂症，高血压病，冠心病，动脉粥样硬化性心血管疾病，心血管或脑血管疾病，以及由此引起的肝脏、肾脏、甲状腺疾病等代谢综合征；

e）具有如下基因型：SNP rs7202116(G)，rs1421085(C)，或rs9939609(A)；

和/或

f）病理性表达或高表达FTO/Fto。

（比如，基因包括多拷贝的fto基因或fto基因表达量升高）。基因型参考文献如下：re rs7202116G,see e.g.Yang et al.,FTO genotype is associated with phenotypic variability of body mass index,Nature,Sep 16,2012,doi:10.1038/nature11401[epub ahead of print];rers9939609A,see e.g.Freathy RM,et al(2008)."Common variationin the FTO gene alters diabetes-related metabolic traits to the extentexpected,given its effect on BMI".Diabetes 57(5):1419-26.doi:10.2337/db07-1466.PMC 3073395.PMID 18346983;re rs1421085C,see e.g.Dina C,et al.,(2007)."Variation in FTO contributes to childhood obesity and severe adult obesity".Nature Genetics 39(6):724-6.doi:10.1038/ng2048.PMID 17496;and for multi-copy fto gene mouse,see e.g.Church et al.,Overexpression of Fto leads to increasedfood intake and results in obesity,Nature Genetics,published online14Nov 2010,doi:10.1038/ng.713.

在本发明的一个特定实施方式中，此方法进一步包括评价患者是否符合一个或多个指标，尤其是具有基因型SNP rs7202116(G)或高表达FTO/Fto

在本发明的一个特定实施方式中，此方法进一步包括评价抑制体重增加结果，促进体重降低，和/或改善一种或多种所适用的指标。

在本发明的一个特定实施方式中，此方法进一步包括本发明提供了通过给予患者有效剂量的其他一种或多种不用药物以达到抑制体重增高、促进体重降低、降低血液低密度脂蛋白浓度、降低血液胆固醇浓度、降低血液低密度脂蛋白-胆固醇浓度、降低血液甘油三酯浓度、或治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的方法，其特征在于，恩他卡朋和其他的药物共同包装、共同制剂，或共同给药。

在本发明的另一方面提供了恩他卡朋和其他的一种或多种药物共同包装或共同制剂的药物组合物，所述的一种或多种药物用于抑制体重增高、促进体重降低、降低血液低密度脂蛋白浓度、降低血液胆固醇浓度、降低血液低密度脂蛋白-胆固醇浓度、降低血液甘油三酯浓度、或治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的方法。

在本发明的一个特定实施方式中，本发明的方法和组合物中涉及的恩他卡朋剂量是0.5-5g或g/天。

本发明包括所有本发明优选实施方案的组合。

本发明具体应用于的患者不包括病理性L-多巴胺缺乏的患者，或需要L-多巴胺治疗的患者，或需要L-多巴胺和多巴胺能药物治疗的患者。和/或给予患者恩他卡朋时，不需要联合给予L-多巴胺和多巴胺能药物。

本发明可以具体应用于在给予患者恩他卡朋的同时，联合使用适量的其他一种或多种减肥药，特别是食物摄取抑制剂，和/或食物吸收抑制剂，比如奥利司他、西布曲明、绿卡色林、利莫那班、二甲双胍、艾塞那肽、普兰林肽、芬特明，或者其制药学上可以接受的盐。特别是这些药可以与恩他卡朋可以共同制成、包装成药，或共同给药。

本发明可以具体应用于在给予患者恩他卡朋的同时，联合使用适量的其他一种或多种减少血清降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯的药物，所述减少血清降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯的药物选自阿托伐他汀(立普妥)、氟伐他汀(来适可)、洛伐他汀(美降脂)、普伐他汀(普拉固)、瑞舒伐他汀(可定)、辛伐他汀(舒降之）、考来烯胺(贵舒醇)、考来维仑、考来替泊、依泽替米贝、依泽替米贝-辛伐他汀、非诺贝特、吉非罗齐、烟酸、ω-3脂肪酸；或其制药学上可接受的盐。特别是这些药可以与恩他卡朋可以共同制成、包装成药，或共同给药。

另一方面，本发明提供了新用于减肥的药物组合物，即一种或多种其他减肥药与恩他卡朋共同制成、包装成药。

在同时给药时，不同的药物通过作用于不同的通路，相互补充或协同作用，可以达到比单独用药更强的药效。由此，在同时给药时，各成分的功能剂量可能可以降低。所以，一种或多种其他减肥药与恩他卡朋共同制成、包装成药时，各成分的剂量可以比表二所示剂量有所降低，比如，50%/50%和25%/25%。

本发明中所述的“制药学上可以接受的盐”包括具有活性的化合物与毒副作用相对较低的酸或碱所制成的盐。当本发明所包含的化合物具有相对酸性的官能团时，化合物可以与一些合适的碱形成盐。这些制药学上可接受的碱很多，比如，钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机胺、镁盐、或其它适合的盐。当本发明所包含的化合物具有相对碱性的官能团时，化合物可以与一些合适的酸形成盐。这些制药学上可接受的酸很多，比如，无机酸：盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳氢酸、磷酸、磷酸一氢酸、磷酸二氢酸、硫酸、氢碘酸、亚磷酸等；有机酸：乙酸、丙酸、异丁酸、草酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、苦杏仁酸、邻苯二甲酸、磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸所对应的盐，比如精氨酸等，和葡萄糖醛酸等(见,例如,Berge et al.(1977)J.Pharm.Sci.66:1-19)。本发明中所包含的特定的化合物具有酸性和碱性的官能团，它们可以转化为其对应的酸或碱的形式。

除了盐形式，化合物有可能以前体药的形式存在。化合物的前体药是指一些化合物在体内生理条件下会发生化学结构变化形成本发明包含的化合物。另外，前体药也可以在体外环境通过化学或生物化学的方法转化为本发明的化合物。比如，当一些前体药和合适的酶或化学试剂一起在适宜的转化条件下，会缓慢地转化为本发明的化合物。前体药通常很有用，因为在一些条件下，前体药比原药更容易使用。比如，口服时，前体药比原药有更好的生物利用度。在药物组合物中前药比原药可能有更好的溶解性。本领域中前药衍生物的各种变化是共知的，例如基于前药的水解或氧化。例如，但不限于此，本发明所包含的化合物的前体药可能是其酯化的形式，在体内代谢后，形成具活性的羟基化合物。

本发明化合物可以以非溶剂化或溶剂化的形式存在，包括水合物形式。一般来说，非溶剂化或溶剂化的形式都包括在本发明的的范围内。本发明化合物存在多晶型或无定型，本发明化合物各种存在的物理形态都包括在本发明的范围内。

优选是E-恩他卡朋的晶A型，当使用粉末X射线衍射分析采用CuK α辐射实验条件时，衍射峰位置：2-Theta值（°）或d值

和衍射峰相对强度：%，具有如下特征：

且衍射峰相对强度值允许±10%变化范围。

粉末X-衍射分析

仪器：西门子DSOO粉末X射线衍射仪

波长：0.1541nm（CuKα）

范围：30-33°（2□）

测定条件：电流：150mA，电压：40KV

扫描速度：1°/分,(0.02°/步)

熔点162-163℃。

本发明化合物存在碳碳双键，各种立体异构体，特别是几何异构体，尤其是顺反异构体都包括在本发明的范围内。

本发明再一方面还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量%。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂（包括真溶液和胶体溶液）、乳剂（包括o/w型、w/o型和复乳）、混悬剂、注射剂（包括水针剂、粉针剂和输液）、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂（包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片）、胶囊剂（包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊）、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气（粉）雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。

为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

各种适宜的剂型或给药系统，包括适宜的稀释剂、载体和药物组合物的准备方法，是本领域技术人员公知的，更详细的描述参见出版物Remington:The Science and Practice of Pharmacy(Pharmaceutical Press(2012).

实际剂量可以根据患者需要和病症严重程度有所调整。针对特定的条件，确定合适的剂量是本领域技术人员公知的。一般来说，在治疗的起始阶段，适用比最佳剂量较低的剂量。然后，剂量逐步提高至最佳剂量，知道达到维持剂量。如果有需要，为了方便，每天的剂量可以按比例分开，多次给药。

为了达到治疗和预防的目的，化合物的给药方式包括，但不限于此，注射、局部注射、口服或局部给药，比如，喷雾或外敷。对于有经验的临床医生，治疗手段（比如，药物剂量和给药次数）可以根据具体情况（如病人反应，疾病程度）有所调整。

一般来说，临床试验中会针对每一种药剂形式、给药方式、患者人群来确定达到最佳效果的药物用量范围。并且有效剂量范围和安全剂量范围也会根据病人条件和反应有所调整。但是，给药形式、方法、剂量会由临床医生根据患者年龄、条件和体表面积、药物效果、疾病程度最终确定。在一种特定的实施方式中，单位剂量的被包装在一起，适宜连续给药。例如泡罩包装，每板含有至少6,9or 12个单位剂量。

例如，该化合物的口服给药剂量的优选是0.5-10,0.5-5,0.5-2.5,1-10,1-5,1-2.5,2-10,or 2-5g/天,以0.25,0.5,1,1.5,2or 2.5g的单位剂量，以2-4次（优选2次）单独服用的方式。也可以使用间歇疗法，例如每三周后隔一周，或每四周后隔三周。

术语和简称：

IUPAC是国际纯粹与应用化学联合会

LDL低密度酯蛋白

ＨDL高密度酯蛋白

LDL-c：低密度脂蛋白-胆固醇

附图说明

图1，恩他卡朋的化学结构。

图2，在体外去甲基化酶活实验中，恩他卡朋对FTO蛋白活性的剂量依赖型抑制。

图3，在Huh-7细胞系中，恩他卡朋对于甘油三酯的剂量依赖型抑

制。横轴为化合物浓度，纵轴为甘油三酯染色的强度读数。

图4，恩他卡朋对于高脂饲料饲养大鼠体重的影响。

图5，恩他卡朋对于高脂饲料饲养大鼠进食量的影响。

图6，恩他卡朋对于高脂饲料饲养大鼠血液中低密度脂蛋白-胆固醇浓度的影响。

图7，恩他卡朋对于高脂饲料饲养大鼠脂肪组织和肝组织的影响。

具体实施方式

实施例1

基于结构的虚拟筛选。我们针对FTO蛋白的底物结合位点，筛选了1323个FDA已批准的药物，并根据基于物理化学定义的一些标准，比如氢键个数、包埋碳原子的个数和疏水相互作用，删去一些不合理的构象。剩余的构象经过进一步的构象优化和重新计算相对结合自由能。根据结合构象和能量，排名靠前的一个化合物是治疗帕金森氏症的儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT，Catechol-O-methyltransferase）的抑制剂恩他卡朋（图1）。

酶活抑制实验。我们通过去甲基化实验测定了恩他卡朋对于FTO蛋白的抑制活性。我们使用了100μl的反应体系，其中含有50mM HEPES buffer(pH=7.0)，100μM a-KG，100μM(NH₄)₂Fe(SO₄)₂，1mM L-ascorbic acid，50μg/ml BSA，0.5μMssDNA with N⁶-mA(5’-ATTGTCA(m⁶A)CAGCAGA-3’)，和0.1μM FTO蛋白。反应体系在37℃孵育2小时，95℃5分钟终止反应。ssDNA使用nucleaseP1和alkal ine phosphatase消化。N⁶-mA和A的浓度通过液质联用仪器检测。当底物浓度为0.5μM，FTO蛋白浓度为0.1μM时，恩他卡朋对FTO蛋白的半数抑制活性IC₅₀值约为9μM（图2）。

细胞甘油三酯合成抑制实验。我们测定了恩他卡朋对于Huh-7肝细胞系甘油三酯合成的抑制活性，IC₅₀值约为15uM。（图3）（建议引用文献的方法）

动物模型中抑制肥胖效果。我们使用高脂饲料（45%fat,OpenSource Diets D12451）喂养23只wistar大鼠，随机选择其中12只通过灌喂给予恩他卡朋(85.6mg/天)，其余给予vehicle。给药8周后，给药组大鼠平均体重比对照组低约11%。（图4）但是，两组经体重标准化的进食量没有明显区别。（图5）给药组血清中LDL-c(低密度脂蛋白-胆固醇)较对照组明显降低约40%(p-value<0.005)。（图6和表一）。并且，给药组大鼠脂肪组织和肝组织相比于对照组有明显区别，脂肪细胞减小和脂肪肝症状减轻。（图7，ab，H&E染色，10倍放大；cd，H&E染色，20倍放大）。

表一、恩他卡朋对于大鼠血生化的影响。“变化”是给药组相对于对照组变化的百分比。

指标	变化	p-值
			胆固醇	-3.3%	0.6455
高密度脂蛋白-胆固醇HDL-c	-0.026%	0.9972
			低密度脂蛋白-胆固醇LDL-c	-41.2%	0.0005
甘油三酯	-3.8%	0.8023
			胆红素	-10.1%	0.5814
白蛋白比例Albumin ratio	-0.063%	0.9473
			谷丙转氨酶	-5.5%	0.4962
肌酸激酶	-17.6%	0.2311

动脉粥样硬化症模型。Ldlr（低密度脂蛋白受体）敲除小鼠。我们用高脂饲料喂养了Ldlr基因敲除小鼠。同样，恩他卡朋给药组体重明显低于对照组，血液中LDL-c明显降低。

实施例2共同包装或共同制剂实施例

1.恩他卡朋/奥利司他以1000mg/120mg或2000mg/120mg共同制成片剂。

2.恩他卡朋/西布曲明以1000mg/10mg或2000mg/10mg共同制成片剂。

3.恩他卡朋/绿卡色林以1000mg/10mg或2000mg/10mg共同制成片剂。

4.恩他卡朋/利莫那班以1000mg/20mg或2000mg/20mg共同制成片剂。

5.恩他卡朋/二甲双胍以1000mg/500mg或2000mg/500mg共同制成片剂。

6.恩他卡朋/艾塞那肽:1000mg或2000mg每片/250mg/mL溶液共同包装

7.恩他卡朋/艾塞那肽:1000mg或2000mg每片/混悬液ER 2mg(Bydureon),共同包装

8.恩他卡朋/普兰林肽:以1000mg或2000mg每片/600mg/mL),共同包装。

9.恩他卡朋/芬特明以1000mg/10mg或2000mg/10mg共同制成片剂。

10.恩他卡朋/阿托伐他汀以1000mg/10mg共同制成片剂。

11.恩他卡朋/氟伐他汀以1000mg/80mg共同制成片剂。

12.恩他卡朋/洛伐他汀(以1000mg/10mg共同制成片剂。

13.恩他卡朋/普伐他汀以1000mg/10mg共同制成片剂。

14.恩他卡朋/瑞舒伐他汀以1000mg/5mg共同制成片剂。

15.恩他卡朋/辛伐他汀以1000mg/10mg共同制成片剂。

16.恩他卡朋/考来烯胺以1000/5000mg共同包装，粉剂。

17.恩他卡朋/考来维仑以1000mg/625mg共同制成片剂。

18.恩他卡朋/考来替泊以1000mg/1000mg共同制成片剂。

19.恩他卡朋/依泽替米贝以1000mg/10mg共同制成片剂。

20.恩他卡朋/依泽替米贝-辛伐他汀以1000/10/10mg共同制成片剂。

21.恩他卡朋/非诺贝特以1000mg/54mg共同制成片剂。

22.恩他卡朋/吉非罗齐以1000mg/600mg共同制成片剂。

23.恩他卡朋/吉非罗齐以1000mg/500mg共同制成片剂。

24.恩他卡朋/ω-3脂肪酸以1000mg/4mg共同制成片剂。

参考文献

1.Frayling,T.M.et al.A common variant in the FTO gene isassociated with body mass index and predisposes to childhood andadult obesity.Science 316,889-894,(2007).

2.Scuteri,A.et al.Genome-wide association scan shows geneticvariants in the FTO gene are associated with obesity-related traits.PLoS Genet 3,e115,doi:07-PLGE-RA-0253(2007).

3.Scott,L.J.et al.A genome-wide association study of type 2diabetes in Finns detects multiple susceptibility variants.Science 316,1341-1345,(2007).

4.Dina,C.et al.Variation in FTO contributes to childhood obesityand severe adult obesity.Nat Genet 39,724-726,(2007).

5.Gao,X.et al.The fat mass and obesity associated gene FTOfunctions in the brain to regulate postnatal growth in mice.PLoS One 5,e14005,(2010).

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7.Church,C.et al.A mouse model for the metabolic effects of thehuman fat mass and obesity associated FTO gene.PLoS Genet 5,e1000599,(2009).

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9.Gerken,T.et al.The obesity-associated FTO gene encodes a2-oxoglutarate-dependent nucleic acid demethylase.Science 318,1469-1472(2007).

10.Han,Z.et al.Crystal structure of the FTO protein reveals basis forits substrate specificity.Nature 464,1205-1209,(2010).

11.Meyer，K.D.et al.Comprehensive Analysis of mRNA MethylationReveals Enrichment in 3'UTRs and near Stop Codons.Cell 149, 1635-1646(2012).

12.Jia,G.et al.N6-methyladenosine in nuclear RNA is a majorsubstrate of the obesity-associated FTO.Nat Chem Biol 7,885-887,(2011)。

Claims

1.如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗代谢类疾病、心脑血管疾病、以及由此引起的肝脏、肾脏、甲状腺疾病药物中的应用

2.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的代谢疾病选自肥胖、糖尿病、高血脂症；所述的心脑血管疾病选自高血压病、冠心病、动脉粥样硬化。

3.根据权利要求2的应用，其特征在于，预防和/或治疗肥胖是抑制体重增高或促进体重降低。

4.根据权利要求2的应用，其特征在于，所述的血脂选自低密度脂蛋白、低密度脂蛋白-胆固醇、胆固醇、或甘油酸三酯。

5.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的肾脏疾病选自糖尿病性肾病。

6.一种用于预防和/或治疗代谢类疾病、心脑血管疾病、以及由此引起的肝脏、肾脏、甲状腺疾病的药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如式Ｉ所示的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐

7.根据权利要求6的药物组合物，其特征在于，所述的代谢疾病选自肥胖、糖尿病、高血脂症；所述的心脑血管疾病选自高血压病、冠心病、动脉粥样硬化。

8.根据权利要求7的药物组合物，其特征在于，预防和/或治疗肥胖是抑制体重增高或促进体重降低。

9.根据权利要求7的药物组合物，其特征在于，所述的血脂选自低密度脂蛋白、低密度脂蛋白-胆固醇、胆固醇、或甘油酸三酯。

10.根据权利要求6的药物组合物，其特征在于，所述的肾脏疾病选自糖尿病性肾病。

11.一种抑制体重增加、促进体重降低、降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯、或治疗、改善或减轻选自如下疾病的病理、严重程度或症状的方法，所述的疾病选自糖尿病、高血糖症、糖尿病性肾病、高血脂症、高血压病、冠心病、动脉粥样硬化、心脑血管疾病、以及由此引起的肝脏、肾脏、甲状腺疾病，此方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐。

12.根据权利要求1的方法，所述的剂量是1-5克/天。

13.根据权利要求11的方法，其特征在于，所述患者满足以下一个或多个标准：

a）没有被诊断为帕金森氏病；

b）年龄小于50岁；

c）肥胖或体重过重；

e）具有基因型SNP rs7202116(G)，rs1421085(C)，或rs9939609(A)等与肥胖症或病理性体重增加相关的基因型；

f）病理性表达或高表达FTO/Fto。

14.根据权利要求11的方法，其特征在于，包括检测（a）患者具有rs7202116(G)基因型，或高表达FTO/Fto。

15.根据权利要求1的方法，其特征在于，进一步包括给予患者有效剂量的其他第二种药物用于抑制体重增高、促进体重降低、减少血清降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯，或治疗动脉粥样硬化。

16.一种抑制体重增加、促进体重降低、降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯，或治疗动脉粥样硬化的方法，包括给予需要治疗的患者有效剂量的恩他卡朋或其制药学上可接受的盐，并同时给予患者有效剂量的其他第二种用于抑制体重增高、促进体重降低、减少血清降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯，或治疗动脉粥样硬化的药物。

17.根据权利要求16的方法，所述的剂量是1-5克/天。

18.根据权利要求16的方法，所述的恩他卡朋和其他药物是一起包装、一起制剂或一起服用。

19.根据权利要求16的方法，其特征在于，所述患者满足以下一个或多个标准：

a）没有被诊断为帕金森氏病；

b）年龄小于50岁；

c）肥胖或体重过重；

f）病理性表达或高表达FTO/Fto。

20.根据权利要求16的方法，其特征在于，包括检测患者具有rs7202116(G)基因型，或高表达FTO/Fto。

21.一种药物组合物，包括有恩他卡朋或其制药学上可接受的盐，和其他第二种用于抑制体重增高、促进体重降低、降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯，或治疗动脉粥样硬化的药物一起包装或一起制剂。

22.根据权利要求21的药物组合物，其中恩他卡朋的剂量是1-5克。

23.根据权利要求21的药物组合物，其特征在于，所述抑制体重增高的药物是食物摄取抑制剂或食物吸收抑制剂。

24.根据权利要求21的药物组合物，其特征在于，所述抑制体重增高的药物选自奥利司他、西布曲明、绿卡色林、利莫那班、二甲双胍、艾塞那肽、普兰林肽、芬特明或其制药学上可接受的盐。

25.根据权利要求21的药物组合物，其特征在于，所述降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯的药物选自阿托伐他汀(立普妥)、氟伐他汀(来适可)、洛伐他汀(美降脂)、普伐他汀(普拉固)、瑞舒伐他汀(可定)、辛伐他汀(舒降之）、考来烯胺(贵舒醇)、考来维仑、考来替泊、依泽替米贝、依泽替米贝-辛伐他汀、非诺贝特、吉非罗齐、烟酸、ω-3脂肪酸；或其制药学上可接受的盐。

26.一种抑制体重增高、促进体重降低、降低血清中低密度脂蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或甘油酸三酯，或治疗动脉粥样硬化的药物组合物，含有0.5-2.5克恩他卡朋或其制药学上可接受的盐。

27.根据权利要求1-10任一项的应用，其特征在于，所述的恩他卡朋是晶A型，当使用粉末X射线衍射分析采用CuKα辐射实验条件时，衍射峰位置：2-Theta值（°）或d值

和衍射峰相对强度：%，具有如下特征：

且衍射峰相对强度值允许±10%变化范围。

28.根据权利要求11-20任一项的方法，其特征在于，所述的恩他卡朋是晶A型，当使用粉末X射线衍射分析采用CuKα辐射实验条件时，衍射峰位置：2-Theta值（°）或d值

和衍射峰相对强度：%，具有如下特征：

且衍射峰相对强度值允许±10%变化范围。

29.根据权利要求21-26任一项的药物组合物，其特征在于，所述的恩他卡朋是晶A型，当使用粉末X射线衍射分析采用CuKα辐射实验条件时，衍射峰位置：2-Theta值（°）或d值

和衍射峰相对强度：%，具有如下特征：

且衍射峰相对强度值允许±10%变化范围。