CN111450126A - 德式乳酸杆菌的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种德式乳酸杆菌的新用途。属于医学领域。本发明提供的德式乳酸杆菌的新用途,其特征是:该德式乳酸杆菌在制备治疗瘢痕的药物中的应用。本发明通过研究发现德式乳酸杆菌能显著较低瘢痕成纤维细胞I、III型胶原以及αSMA的表达,并可以降低瘢痕成纤维细胞磷酸化GSK‑3β和磷酸化β‑Catenin及Wnt3的表达,进而为处理或治疗增生性瘢痕提供了一个新的方向。
Description
技术领域
本发明涉及一种德式乳酸杆菌,特别涉及一种德式乳酸杆菌的新用途。属于医学领域。
背景技术
增生性瘢痕是皮肤烧烫伤、创伤、外科手术后非正常愈合的一种疾病,严重影响外观,不但影响患者生理、心理健康,更给家庭及社会带来沉重的治疗负担。其发生的诱因主要有深度损伤包括烫伤、烧伤及创伤,创面愈合时间延长,过度的炎症反应等。
近年来,对于增生性瘢痕形成的机制研究不断深入,发现其发生发展的细胞分子生物学基础。包括成纤维细胞功能异常;炎症反应异常导致中性粒细胞、巨噬细胞浸润增多、分泌多种促纤维化生长因子;胶原重塑异常及转化生长因子(TGF-β)等信号通路过度激活等等。虽然对其发病机制的认识不断深入,但是瘢痕增生的临床防治手段却依然十分有限,包括压力治疗、激光治疗、硅酮凝胶及手术修复治疗等,均具一定局限性,效果往往难以令人满意。因此,迫切需要新的治疗方法。
益生菌是一类活的对人类有益的微生物,广泛应用于生物工程、工农业、食品安全领域。随着人们的不断研究,近年来陆续有利用益生菌用来治疗肠道等疾病的相关报导,益生菌在药物领域中应用逐渐被人们重视。但是鲜有文章报道其在增生性瘢痕中的作用。于是我们通过用八株从酸奶中分离出的益生菌和瘢痕成纤维细胞共培养发现,德式乳酸杆菌(拉丁文:L.delbruckii)能显著较低瘢痕成纤维细胞I、III型胶原以及αSMA的表达,且不影响成纤维细胞形态、凋亡与周期。在体模型中,德式乳酸杆菌不影响创面愈合,且可显著降低瘢痕模型中一型胶原的表达量。进而为处理或治疗增生性瘢痕提供了一个新的方向。而通过分子通路的深入探索我们发现,德式乳酸杆菌可以降低瘢痕成纤维细胞磷酸化GSK-3β和磷酸化β-Catenin及Wnt3的表达。进一步揭示其可能的分子生物学机制。
发明内容
本发明的目的是:提供一种德式乳酸杆菌的新用途。目的之一是,我们发现德式乳酸杆菌能显著降低瘢痕成纤维细胞I、III型胶原以及αSMA的表达;目的之二是发现德式乳酸杆菌能降低瘢痕成纤维细胞磷酸化GSK-3β和磷酸化β-Catenin及Wnt3的表达;目的之三是发现德式乳酸杆菌悬浮液不影响创面愈合,且能显著降低在体瘢痕模型(兔耳瘢痕模型)中I型胶原的表达;因此发现德式乳酸杆菌在制备治疗瘢痕的药物中的应用。
本发明的技术方案是:德式乳酸杆菌的新用途,该德式乳酸杆菌在制备治疗瘢痕的药物中的应用。
所述的德式乳酸杆菌能降低瘢痕成纤维细胞I、III型胶原以及αSMA的表达和降低磷酸化GSK-3β,磷酸化β-Catenin和wnt3的表达。
所述的德式乳酸杆菌悬浮液能在不影响创面愈合的前提下降低兔耳瘢痕模型中I型胶原的表达量。
本发明的优点是:增生性瘢痕的治疗是临床的重点和难点。据统计仅烧伤增生性瘢痕的发病率在70%以上,在美国每年在增生性瘢痕上的花费超过200亿美元。而目前现有的治疗方法效果并不十分理想。本发明通过研究发现德式乳酸杆菌能显著降低成纤维细胞I、III型胶原、αSMA的表达以及降低磷酸化GSK-3β和磷酸化β-Catenin的表达,也降低了Wnt3的表达,揭示其影响多个通路的关键分子的表达进而影响胶原的合成。同时,对创面愈合未有显著性影响,揭示其不影响创面愈合。而在在体瘢痕模型(兔耳瘢痕模型)中可以显著降低I型胶原的表达量。进而证明了本发明的德式乳酸杆菌在制备治疗瘢痕的药物中的应用这一新的用途。为增生性瘢痕的治疗提供了新的方法。
下面通过说明书附图及具体实施例对本发明做进一步详细说明,但不作为对本发明的限定。
附图说明
图1是瘢痕成纤维细胞和八种不同的益生菌共培养,Western blot显示德式乳酸杆菌能减少成纤维细胞αSMA,一型胶原及三型胶原的蛋白表达;
图2是瘢痕成纤维细胞和八种不同的益生菌共培养,RT-qPCR显示德式乳酸杆菌能减少成纤维细胞III型胶原的蛋白表达;
图3是瘢痕成纤维细胞和八种不同的益生菌共培养,RT-qPCR显示德式乳酸杆菌能减少成纤维细胞αSMA的蛋白表达;
图4是瘢痕成纤维细胞和八种不同的益生菌共培养,RT-qPCR显示德式乳酸杆菌能减少成纤维细胞I型胶原的蛋白表达;
图5是德式乳酸杆菌与成纤维细胞培养后24和48小时后对WB和rt-PCR检测显示成纤维细胞Collagen Ⅰ、Ⅲ及αSMA表达水平明显下调;
图6是采用德式乳酸杆菌悬浮液处理兔耳瘢痕对I型胶原表达明显下调,三型胶原表达无明显变化;
图7是流式细胞术检测发现德式乳酸菌处理的正常及瘢痕成纤维细胞与未处理组凋亡情况无明显差异;
图8是流式细胞术检测发现德式乳酸菌处理的正常及瘢痕成纤维细胞与未处理组细胞周期无明显差异;
图9是德式乳酸杆菌处理后,采用WB检测发现德式乳酸菌可以降低磷酸化GSK-3β和磷酸化β-Catenin的表达;
图10是采用德式乳酸杆菌悬浮液处理小鼠创面模型后,对创面愈合没有影响。
具体实施方式
本发明用八株酸奶中分离出的益生菌和瘢痕成纤维细胞共培养发现,德式乳酸杆菌(拉丁文:L.delbruckii)能显著降低成纤维细胞I、III型胶原以及αSMA的表达,德式乳酸杆菌悬浮液处理兔耳瘢痕能显著降低I型胶原的表达,马松染色结果显示胶原沉积降低;流式细胞术检测发现德式乳酸杆菌对成纤维细胞增殖和凋亡未有显著性影响,显微镜观察德式乳酸杆菌对细胞形态未有显著性影响;WB检测发现,德式乳酸杆菌处理后,显著降低磷酸化GSK-3β和磷酸化β-Catenin的表达,也降低了Wnt3的表达,揭示其影响多个通路的关键分子的表达进而影响胶原的合成。同时,细菌悬浮液处理小鼠创面模型发现,其对创面愈合未有显著性影响,揭示其不影响创面愈合。上述说明本发明德式乳酸杆菌在制备治疗瘢痕的药物中的应用这一新的用途。
为让本发明之上述的结果、特征及优点能更明显易懂,下文特举本发明之较佳实施例,并配合所附图式,作详细说明如下:
本发明的德式乳酸杆菌(拉丁文:L.delbruckii)
使用八株不同的益生菌菌株使用对应培养基进行培养,离心后使用无菌PBS缓冲液重悬,加入细胞培养皿中与瘢痕成纤维细胞进行共培养,然后使用Western blot和RT-qPCR检测纤维化相关分子表达水平。如图1-4所示,通过Western blot和RT-qPCR检测显示德式乳酸杆菌与成纤维细胞培养后可以减轻成纤维细胞CollagenⅠ、Ⅲ及αΑSMA表达水平。
如图5所示,通过Western blot和rt-PCR检测显示德式乳酸杆菌与成纤维细胞培养后24和48小时均可以减轻成纤维细胞CollagenⅠ、Ⅲ及αSMA表达水平。
12月龄新西兰大白兔麻醉后,使用打孔机在每只耳朵的内侧表面形成四个切口,然后去除表皮、真皮和软骨膜。21天后将创面随机分成对照组和德式乳酸杆菌菌液处理组。如图6所示,德式乳酸杆菌悬浮液处理兔儿瘢痕能显著降低I型胶原的表达,马松染色结果显示胶原沉积降低。进而说明,所述的德式乳酸菌悬浮液能在不影响创面愈合的情况下,减少瘢痕组织中I型胶原的表达量。
如图7和图8所示,通过流式细胞术检测发现德式乳酸杆菌对成纤维细胞增殖和凋亡未有显著性影响,显微镜观察德式乳酸杆菌对细胞形态未有显著性影响。
如图9所示,通过Western blot检测发现,德式乳酸杆菌处理后,显著降低磷酸化GSK-3β和磷酸化β-Catenin的表达,也降低了Wnt3的表达。
7周龄Balb/c小鼠麻醉后,背部脱毛,然后使用染料画出2*2cm大小范围,切除全层皮肤,随机分成对照组和德式乳酸杆菌处理组,处理组德式乳酸杆菌菌液每日处理,对照组使用等量的无菌PBS缓冲液。如图10所示,德式乳酸杆菌悬浮液处理小鼠创面模型发现,其对创面愈合未有显著性影响,揭示其不影响创面愈合。
本发明通过上述的研究发现德式乳酸杆菌能显著降低瘢痕成纤维细胞I、III型胶原以及αSMA的表达、降低瘢痕成纤维细胞磷酸化GSK-3β和磷酸化β-Catenin及Wnt3的表达;同时发现德式乳酸杆菌悬浮液不影响创面愈合,且能显著降低在体瘢痕模型(兔耳瘢痕模型)中I型胶原的表达;因此发现德式乳酸杆菌可以在制备治疗瘢痕的药物中的应用这一新的用途。为增生性瘢痕的治疗提供了新的方法。
本实施例没有详细叙述的部件和结构属本行业的公知部件和常用结构或常用手段,这里不一一叙述。
Claims (4)
1.德式乳酸杆菌的新用途,其特征是:该德式乳酸杆菌在制备治疗瘢痕的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的德式乳酸杆菌的新用途,其特征是:所述的德式乳酸杆菌能降低成纤维细胞I、III型胶原以及αSMA的表达。
3.根据权利要求1所述的德式乳酸杆菌的新用途,其特征是:所述的德式乳酸杆菌的悬浮液能降低磷酸化GSK-3β、磷酸化β-Catenin和Wnt3的表达。
4.根据权利要求1所述的德式乳酸杆菌的新用途,其特征是:所述的德式乳酸菌悬浮液能在不影响创面愈合的情况下,减少瘢痕组织中I型胶原的表达量。
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