CN101897990A - 一种用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物及应用 - Google Patents
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Abstract
一种用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物及其应用。由壳聚糖、酸性多聚糖和三七总皂苷组成,重量配比为:100∶10~50∶10~100。壳聚糖选自壳聚糖,壳聚糖乳酸盐,醋酸盐,或盐酸盐;酸性多聚糖选自羧甲基壳聚糖钠,透明质酸钠,透明质酸锌,海藻酸钠,或羧甲基纤维素钠;三七总皂苷以人参皂苷Rg1和Rb1总量计算不少于40.0%。其剂型为干凝胶粉剂、胶囊、凝胶膜、水凝胶、纤维涂层。用于创伤、烧伤、烫伤、压伤、皮肤溃烂、胃肠溃疡,以及伤口不愈合中,具有能迅速止血,减少渗出,保湿透气,抑菌,消炎,止痒,不粘连,有效地抑制瘢痕形成,使伤口愈合时间明显缩短,无须更换敷料,基本达到理想功能性外用敷料要求。
Description
技术领域
本发明属于医药外科用敷料技术领域,涉及含有大分子有机化合物,具体涉及含有多聚糖及中药三七的外用敷料及其应用方法。
背景技术
皮肤是人体的重要器官,具有屏障保护、吸收与代谢、分泌与排泄、体温调节、免疫等各种功能。由于创伤、擦伤、皮肤溃烂和烧伤等原因,可能导致皮肤的大范围伤害,并有可能导致并发症,危及人类生命。凡是涉及到真皮损伤的伤口,最终形成病理性瘢痕愈合是其必然的结果。过度纤维化的瘢痕难以被机体吸收,给创伤后的功能恢复和重建带来很大的障碍。在伤口愈合过程分为四期:(1)组织液渗出期:由胶原纤维细胞分泌胶原蛋白填充伤口,其中I型胶元蛋白为形成瘢痕的主要胶原。(2)炎症期(清创期):发生在24-48小时,并伴随细菌感染,此时主要有免疫细胞清除受损组织和微生物。(3)增殖分化期:首先是表皮干细胞分化表皮,真皮干细胞分化表皮组织,成纤维细胞,以及毛发、汗腺和皮脂腺等皮肤附属器,造血干细胞中的内皮祖细胞分化新生血管、淋巴管和神经。(4)组织重朔:过度纤维化的瘢痕难以被机体吸收,造成血管以及毛发等皮肤附属器的重建发生严重障碍,形成终身病理性瘢痕。以往对于增生性瘢痕还没很好的治疗方法,还是以预防发生为主要手段。如何有效地促进伤口快速无瘢痕愈合一直是医药界不懈探索的领域。
通常采用敷料对伤口进行保护,防止伤口的感染和脱水。传统观点认为,应尽可能的为伤口创造一个干燥的环境,减少感染机会,有利于伤口的愈合。但是,随着伤口敷料研究的进展,湿润的无感染的伤口愈合环境已被广泛接受为最佳的愈合环境,对连续的组织修复过程是最有利的。[Wound Repair andRegeneration,2009,17:505;2010,31:83]在这种“湿润伤口愈合”理论的指导下,随着材料学及工业学的进步,伤口敷料也发生了革命性的变化。但是,目前市售的医用伤口敷料大多功能单一,常需要配合化学抗菌药物使用,易导致伤口组织细胞进一步损伤,引起组织液大量渗出,发炎,最终形成病理性瘢痕愈合[Journal of pharmaceutical science,2008,97:2892]。理想的功能性医用伤口敷料应具有:(1)迅速止血;(2)防止细菌感染;(3)减少组织液渗出和炎症;(4)加速愈合;(5)良好的生物相容性;(6)减轻瘢痕。[Acta DermatovenerolAlpPanonica Adriat,2006,15:5]。
伤口的愈合是多种细胞参与对多种组织进行修复的一个复杂工程,涉及到多种细胞的增生、移动、分化等。干细胞作为具有多分化潜能的细胞,对组织修复具有重要意义。当组织受到创伤时,受伤细胞开始分泌的生长刺激因子,释放到外周血中刺激骨髓分化造血干细胞进入血液中,这些生长刺激因子造血干细胞随着血液的运行,被引导“归巢”到伤口部位,再与组织间充质干细胞联合,开始增殖和分化成所需的组织。例如在伤口组织修复中:造血干细胞首先分化为淋巴细胞和吞噬细胞等清除受伤组织细胞;皮肤表皮干细胞分化为表皮组织;造血干细胞分化为血管内皮祖细胞,再继续分化为新生血管和淋巴管和神经;真皮干细胞负责分化表皮组织,成纤维细胞,以及毛发,汗腺和皮脂腺等皮肤附属器。干细胞自身增殖与分化的速度以及调控并不能够满足快速修复创伤组织需要。因此,如何加速这些干细胞增殖和分化以及调控是加速组织修复与良好重塑的关键。[Cell,2000,100:157,168;The new Englandjournal ofmedicine,2003,349:570;Wound Repair and Regeneration,2007,15:18]。
三七为中国云南特有的五加科植物Panax notoginseng(Burk.)F.H.CSen的根。具有消肿止痛,活血化淤,加速伤口愈合作用。用于治疗跌打损伤,各种伤口,久不愈合,以及烧伤等。近年来对三七药理作用的物质基础研究结果表明三七总皂苷(panax notoginosides,简称PNS,下同)为主要活性成分(主要为人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1)。PNS具有促进皮肤干细胞和造血干细胞的增殖与诱导定向分化效应,抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,可有效地防止过度增殖产生的病理性瘢痕。PNS对可通过上调血管内皮细胞生长因子等细胞因子的表达,促进内皮祖细胞的增殖与分化,形成新生血管,淋巴管和神经。此外,三七还具有良好的镇痛作用,是一种阿片样受体激动剂,但不具有成瘾的不良反应。[中国中西医结合急救杂志,2003,10:135;中国实验血液学杂志,2003,11:120;第三军医大学学报,2003,25:1562;中国实用美容整形外科杂志,2005,16:243]。
壳聚糖(Chitosan,简称CS,下同)是由天然甲壳素水解产物天然氨基葡萄糖组成的直链高分子聚合物,是一种具有良好的生物相溶性和生物可降解性的碱性糖胺聚糖。CS具有选择性促进表皮细胞的生长,加快组织修复,抑制成纤维细胞的过度增殖,减少粘连和瘢痕形成。由于CS在伤口处可抑制I型瘢痕胶原纤维蛋白的产生,加速III弹性胶原蛋白的分泌从而促进了肉芽组织和上皮组织的形成,减少伤口的过度收缩,在伤口愈合过程中具有调控正常愈合与过度愈合之间的平衡的作用,从而起到减小疤痕的作用。CS还具有良好的止血,广谱抑菌,消炎,对伤口疼痛有很好的舒缓作用,减少组织液渗出,预防组织粘连和术后感染,促进组织修复,无毒,可降解,已被由于制造可降解的手术缝合线,也常用的功能性伤口敷料的原料。羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl CSitosan,简称CMCS,下同)为CS经过羧甲基化改性后的一种水溶性酸性糖胺聚糖,具有良好保湿性,透气性,柔韧性,无毒,可降解,可防止组织粘连,促进伤口愈合和减少疤痕的优异性能。[第二军医大学学报,1999,20:962;中国修复重建外科杂志,1993,7:244;中国修复重建外科杂志,1994,8:81;第二军医大学学报,1994,15:452;Pharmacy&Pharmaceutical Sciences,2000,3,303;J FoodBioteCSnol,1998,61,1124;Food Prot.,1999,62:239;Applied Biomaterials,2004,69:216;Science,1992,258:1798;Carbohydr Polym,1997,33:33;Biomaterials,2002,23:4609]。
CS常与适当酸性多聚糖组合使敷料的功能性得以改进和优化。如与透明质酸,肝素,海藻酸,羧甲基纤维素等组合敷料,但大多仅为敷料组合,与理想的功能性敷料比较还有很大差距。目前尚未见有本发明提出的CS与适量酸性多聚糖复合PNS组成的全天然功能性伤口敷料应用于促进伤口快速愈合并抑制瘢痕形成的文献报道,也没有任何其他有关抑制瘢痕加速伤口愈合的功能性伤口敷料文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合的功能性敷料。本发明以CS添加适当比例的酸性多聚糖为载体材料,再复合PNS,组成干凝胶或含水凝胶的全天然功能性创伤敷料,用于抑制瘢痕加速伤口愈合。CS是一种含有游离氨基的阳离子多聚糖,具有良好的抗菌性和成膜性,但无保湿性,因此所成膜柔韧性较差。酸性多聚糖是含有游离羧基的阴离子多聚糖,具有优良的保湿性能,但是成膜性较差。CS和适量酸性多聚糖通过静电自组装结合形成了网状水凝胶,在缺损部位形成保护层。显示出优良的保湿性,透气性和柔韧性,抑制纤维胶原的分泌,为所复合的PNS促进干细胞增殖,定向分化与调控提供了优良的场所。具有迅速止血、减少组织液渗出、抑菌消炎、防止粘连、加速伤口愈合作用。本发明的功能性敷料组合,具有明显的协同作用效果,有效地抑制瘢痕形成,使伤口愈合时间明显缩短,伤口愈合过程中无须更换敷料,基本达到理想功能性外用敷料要求。
PNS中主要成分人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的结构如下:
壳聚糖/透明质酸静电自组装网状纤维水凝胶具有如下结构:
本发明的用于促进伤口无瘢痕快速愈合的辅料组合物由壳聚糖、酸性多聚糖和三七总皂苷组成,其之间的重量比为:壳聚糖∶酸性多聚糖∶三七总皂苷=100∶10~50∶10~100。
其中所述的壳聚糖选自壳聚糖(简称CS,下同),壳聚糖乳酸盐,醋酸盐,或盐酸盐。所述的酸性多聚糖选自羧甲基壳聚糖钠(简称CMCS,下同),透明质酸钠(简称HA钠,下同),透明质酸锌(简称HA锌,下同),海藻酸钠,或羧甲基纤维素钠。
本发明的这种敷料可以制备成多种剂型,如干凝胶粉剂、干凝胶胶囊剂、凝胶薄膜剂、水凝胶剂、纤维涂层等。所述的干凝胶粉剂和干凝胶胶囊剂是将壳聚糖,酸性多聚糖,三七总皂苷组合混合均匀,分装而制成。所述的凝胶膜剂是将壳聚糖,酸性多聚糖,三七总皂苷组合混合均匀,加1~5倍组合物重量水制成软材,压成薄膜片置于聚乙烯膜上,70~90℃热气流烘干,使含水至10~100wt%,再复合上聚乙烯透气膜,剪切,用铝复合膜密封包装而制成。
所述的水凝胶剂是将壳聚糖,酸性多聚糖,三七总皂苷混合均匀,加1~10倍组合物重量水制成软材,使含水至75~91wt%,分装于聚乙烯管中,密封而成。所述的纤维涂层剂型,是将壳聚糖、酸性多聚糖、三七总皂苷分别加1~1000倍自身重量的水溶解,按组合物的比例依次将其喷涂于脱脂棉或化纤纱布上,80~100℃减压干燥,剪切成块,用铝复合膜密封包装,即得脱脂棉纱布或化纤纱布涂层。
本发明所用原料均为市售,其中三七总皂苷(PNS)按人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1总重量40~95wt%。本发明组合物中按干燥品计算含三七总皂苷以人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1总重量计算为1.0~30.0%。
一般伤口自然愈合过程,市从基层胚芽细胞向棘层细胞分化,达到初步愈合需要1周时间,再分化到角质细胞达到完全愈合还需要1周时间,再到角质细胞脱落达到重塑还需要2周,因此,伤口整个修复与重塑过程需要4周才会全部完成。在这个过程中,首先是渗出期,炎症期(或清创期),表现为红肿,奇痒等;愈合期,表现为伤口收缩结痂,首次脱痂为初步愈合,二次脱痂为完全愈合;重塑期,表现为新生血管,以及毛发等附属器的重建。凡是涉及到真皮损伤的伤口,成纤维细胞大量分泌I型胶原纤维蛋白,最终形成病理性瘢痕愈合是其必然的结果。其中成纤维细胞是瘢痕形成的效应细胞,成纤维细胞增殖和合成分泌功能异常旺盛,导致细胞外基质尤其是I型瘢痕胶原纤维蛋白的大量沉积,并逐渐转变的结缔组织,而成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,则进一步为已经过度纤维化的瘢痕发生挛缩提供了动力。
本发明组合是依据PNS具有诱导干细胞快速定向分化和抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖效应,而CS具有选择性促进表皮细胞的生长,抑制成纤维细胞的过度增殖,减少伤口的过度收缩,减少粘连和瘢痕形成,也为骨髓造血干细胞和间充质干细胞的增殖和定向分化提供了优良的场所,并具有明显的调控正常愈合与过度愈合之间的平衡的作用,伤口愈合时间明显缩短。
本发明的产品与市售产品进行了一系列创伤伤口愈合的对比试验,其结果证明:
1.在促凝血作用对比试验中,本发明的敷料CS/CMCS/PNS(实施例)与正常凝血时间比较提前36%,明显优于云南白药(云南白药与正常凝血时间比较仅提前5.0%)。
2.广谱抑菌作用对比试验中,对金葡球菌、大肠杆菌和白色念珠菌,本发明敷料组合物与CS相同,具有广谱抑菌作用。
3.促进伤口愈合作用试验中,与敷料组CS/CMCS(100∶25)、对照组0.2%依沙丫啶溶液和其他敷料组对比,本发明功能敷料组CS/CMCS/PNS(实施例1):给药后伤口立即止血,组织液渗出当天停止,并形成黑色柔性结痂,面积收缩至56%,无粘连,无红肿,无瘙痒。第2天结痂逐渐变硬。第6天结痂脱落,伤口初步愈合。第10天表皮二次脱落,伤口完全愈合,表面光滑平整,无瘢痕,皮肤弹性与周边正常皮肤类似。组织切片结果:真皮层细胞间排列疏密均匀,毛囊和毛发以及血管已初步形成,真皮层,表皮层和角质层分化清晰,与正常皮肤切片均接近。I型胶原纤维蛋白和III型胶原纤维蛋白与正常皮接近,表现为无瘢痕愈合。第28天愈合重塑情况与正常皮肤基本一致。而依沙丫啶对照组情况是:给药后伤口止血缓慢,当天面积收缩至73%,组织液渗出持续3天,边缘有红肿,瘙痒状况出现,第3天伤口面积肿胀至82%,此时炎症更加严重。第4天伤口形成粉红色硬痂,面积收缩至71%,炎症减轻。第6天伤口出现过度性收缩至46%。第10天结痂脱落,伤口初步愈合,但中心愈合不完全。第14天表皮二次脱落,伤口完全愈合,但是表面不平整;组织切片结果:真皮层细胞间排列过于紧密,真皮层和表皮层分化不清晰,表面不平整,有明显隆起,尚未形成角质层,未见有毛囊和毛发形成。第28天愈合重塑情况与正常皮肤比较呈白色高于皮面,边缘毛发稀少,中间部分几乎无毛。本发明功能敷料与现有技术相比有十分明显的效果差异。
4.促进实验性胃肠损伤的愈合作用对比试验中,在大白鼠灌服100mg/kg灌服水杨酸后用本发明功能敷料(CS/CMCS/PNS)与敷料组(CS/CMCS)治疗和用水的对照组对比试验,表明本发明功能敷料组合中CS与PNS显示出良好的协同作用,使伤口愈合结果表现为无瘢痕快速愈合。
与现有技术比较,本发明突出的优点在于:本发明首次提出以CS添加适量酸性多聚糖为载体材料,复合PNS组合成功能性医用伤口敷料,当遇到水或体液时,酸性多聚糖和部分CS经过静电自组装相成凝胶,将剩余的CS和PNS网络在其中,快速形成网状纤维含水凝胶保护层,替代伤口分泌胶原形成的纤维蛋白补充伤口缺损,有效地减少组织液渗出和炎症,为PNS促进干细胞增殖与分化的组织重建提供了良好的场所,并调控正常愈合与过度愈合之间的平衡,显示出有效地抑制瘢痕,加速伤口愈合作用。本发明组合还具有能迅速止血,减少渗出,保湿透气,柔软舒适,抑菌,消炎,止痒,不粘连,伤口愈合时间明显缩短,也无须更换敷料,基本达到理想功能性外用敷料要求。
附图说明
图1.伤口愈合过程曲线:横坐标为伤口愈合时间(天数),纵坐标为伤口相对(0天)面积(%)。(-◆-CS/HA/PNS;-■-CS/HA;-▲-依沙丫啶)
图2.伤口愈合过程照片:第1至4列分别为功能敷料组,单纯敷料组,依沙呀啶对照组,云南白药对照组。第1至4行分别为第0,3,6,8,10,14天伤口愈合状况。
图3.第14天伤口愈合组织切片与荧光免疫组化照片:第1至4列分别为正常皮,功能敷料组,单纯敷料组,依沙丫啶对照组。第1至4行分别为未染色,HE染色,血管内皮生长因子受体-2抗体荧光染色,I型瘢痕胶原抗体荧光染色,III型弹性胶原抗体荧光染色。
具体实施方式
一.敷料及制备实施例
实施例1
将CS乳酸盐(医用),CMCS钠(医用),PNS(按干燥品计含人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为43wt%),按100∶25∶100(重量比)混合均匀,用铝复合膜密封包装,即得干凝胶粉剂,或分装于胶囊中,用铝复合膜密封包装,得干凝胶胶囊剂(含人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为19.1wt%)。
实施例2
将CS乳酸盐(医用),CMCS钠(医用),PNS,按100∶25∶100(重量比)混合均匀混合均匀,喷2倍量水,揉搓制成软材,压成薄膜片置于聚乙烯膜上,80℃热气流烘干15分钟,含水至37.5%,再复合上聚乙烯透气膜,剪切,用铝复合膜密封包装,即得凝胶膜剂。
实施例3
将1.0%CS乳酸盐溶液(重量),1.0%PNS溶液(重量),1.0%CMCS钠溶液(重量),按100∶80∶20(重量)比例,依次喷涂于脱脂棉纱布上,80~100℃减压干燥,剪切成块,用铝复合膜密封包装,即得到具有迅速止血,减少渗出,保湿透气,柔软舒适,抑菌,消炎,止痒,不粘连,伤口愈合时间明显缩短的敷料纱布。
实施例4
将CS乳酸盐(医用),HA钠(医用),PNS(含量75wt%)按100∶20∶25(重量)配料,混合均匀,喷2倍量水,揉搓制成软材,压成薄膜片置于聚乙烯膜上,80℃热气流烘干15分钟,含水至39%,再复合上聚乙烯透气膜,剪切,用铝复合膜密封包装,即得凝胶膜剂。
实施例5
将CS乳酸盐(医用),CMCS钠(医用),PNS(含量43wt%),按100∶25∶50(重量)比配料,混合均匀后加20倍重量的水,制成软材,分装于聚乙烯管中,密封即得水凝胶剂。
实施例6
CS醋酸盐-HA钠-PNS,按4∶1.5∶2(重量比)混合均匀,用铝复合膜密封包装,即得干凝胶粉剂。
实施例7
CS盐酸盐-HA锌-PNS,按4∶2.5∶1.2(重量比)混合均匀,用铝复合膜密封包装,即得干凝胶粉剂。
实施例8
CS乳酸盐-海藻酸钠(或羧甲基纤维素)-PNS,按4∶1.5∶1.6(重量比)混合均匀,用铝复合膜密封包装,即得干凝胶粉剂。
二.对创伤伤口愈合的对比试验
供试品:CS/CMCS(100∶25),CS/HA/PNS(100∶25∶100),CS/CMCS/PNS(100∶25∶100)(同上述一敷料及制备实施例的实施例1),云南白药(其中PNS含量43%)。
实施例1.促凝血作用:
凝血时间测定方法:分别按下表加10mg各组合供试品,加入新鲜血液1ml,摇匀,记录血液凝固时间。PNS或CMCS均显示出抗凝血作用,而CS显示出促凝血作用,与CS的各种组合均显示出不同程度的协同促凝血作用。其中CS/CMCS/PNS组合明显优于其它组合,显示出良好的协同促凝血作用。典型组合试验结果见表1。与正常凝血时间比较,CS/CMCS/PNS凝血时间提前36%,明显优于云南白药。
表1.凝血时间测定结果(分钟)
实施例2.广谱抑菌作用:
按浊度法测定(《中国药典》2005年版二部附录XI A)。将纯菌液用无菌生理盐水稀释成3×108/ml浓度的菌液,每组试管中分别加入0.1ml,加入肉膏汤1ml(1∶2稀释),加入不同浓度的CS或功能敷料组CS/CMCS/PNS的生理盐水溶液1ml,充分摇匀后,37℃恒温培养18小时,观察细菌生长情况,浑浊为有菌生长,澄清为无菌生长。能够抑制细菌生长的最大稀释倍数(以CS计算)即为对该细菌的最小抑制浓度。试验结果见表2。结果表明:本发明敷料组合物与CS相同,具有广谱抑菌作用,但未发现有杀菌作用。
表2.最小抑菌浓度(%)测定结果
菌株名称 | 金葡球菌 | 大肠杆菌 | 白色念珠菌 |
拉丁名 | Staphylococcus aureus | EsCSeriCSia coil | Candida albicans |
编号 | CMCC(B)26003 | CMCC(B)44103 | CMCC(F)98001 |
CS(%) | 0.015 | 0.030 | 1.000 |
CS/CMCS/PNS(%) | 0.012 | 0.032 | 1.100 |
实施例3.促进伤口愈合作用:
试验方法:本发明功能敷料组CS/CMCS/PNS;敷料组CS/CMCS;对照组0.2%依沙丫啶溶液;其他敷料组。家兔皮肤伤口模型制备:在家兔背部剪毛后(或再用硫化钠溶液脱毛48小时后),每只家兔皮下注射0.5%利多卡因注射液0.5ml局麻,供3处,在局麻部位旁用手术剪剪出直径约为1.0cm的圆型全皮切口3处,用70%酒精溶液消毒,分别将供试敷料涂布在伤口处,用石蜡脱脂纱布覆盖,再用绷带包扎。对照组用0.2%依沙丫啶(Ethacridine)溶液处理,包扎,每隔2天重新用0.2%依沙丫啶溶液处理,包扎,连续处理2次。其它组不做任何处理。在试验过程中各功能敷料组均未发生细菌感染现象。
观察指标:(1)炎症期:组织液渗出,红肿,瘙痒。(2)愈合期:伤口面积收缩与结痂,第一次脱痂为初步愈合,第二次脱痂伤为全愈合,各皮层增殖与分化状态。(3)重塑期:新生毛发和血管重建。(4)瘢痕指标:表面平整度,皮肤弹性,I型胶原多于是III型胶原的2倍以上。
组织切片:第14天,每只家兔皮下注射0.5%利多卡因注射液0.5ml局麻,取下伤口愈合组织,组织切片用乙醇固定,PBS溶液冲洗,直接光学显微镜下观察细胞分化排列情况。组织切片用乙醇固定,PBS溶液冲洗,再用HE染色,光学显微镜下观察细胞分化排列情况。
荧光免疫组化:将组织切片先用乙醇固定,PBS溶液冲洗,加入一抗,37℃下孵化1小时,用0.2%吐温20的PBS冲洗,再加入罗丹明标记二抗,继续孵化半小时,用0.2%吐温20的PBS冲洗,在荧光显微镜下观察荧光。一抗:兔抗人血管内皮生长因子受体-2多抗[Vegfr-2];兔抗人I型胶原多抗(Collagen I);鼠抗人III型胶原单抗(Collagen III)。罗丹明标记抗兔IgG抗体[a Rb IgG(H+L)/TRITC];罗丹明标记抗鼠IgG抗体[a Mob IgG(H+L)/TRITC]。Vegfr-2是血管内皮内皮细胞的特异性标志。Collagen I是瘢痕胶原纤维蛋白的标志,Collagen III是弹性胶原纤维蛋白的标志。在正常皮中I型胶原含量与III型胶原接近,而在瘢痕皮中I型胶原明显多于III型胶原。
试验结果:(见附图)
(1)本发明功能敷料组CS/CMCS/PNS(4∶1∶5):给药后伤口立即止血,组织液渗出当天停止,并形成黑色柔性结痂,面积收缩至56%,无粘连,无红肿,无瘙痒。第2天结痂逐渐变硬。第6天结痂脱落,伤口初步愈合,伤口未出现过度性收缩,中心皮下有少量血丝状。第10天表皮二次脱落,伤口完全愈合,表面光滑平整,无瘢痕,皮肤弹性与周边正常皮肤类似。第14天皮下有血管分布,皮肤颜色,表面平整度与正常皮肤均接近,重塑情况均良好;组织切片结果:真皮层细胞间排列疏密均匀,毛囊和毛发以及血管已初步形成,真皮层,表皮层和角质层分化清晰,与正常皮肤切片均接近。I型胶原纤维蛋白和III型胶原纤维蛋白与正常皮接近,表现为无瘢痕愈合。第28天愈合重塑情况与正常皮肤基本一致。
(2)敷料组:给药后伤口立即止血,组织液渗出当天停止,并形成黑色柔性结痂(但是柔性不如实验组),面积收缩至79%,无粘连,无红肿,无瘙痒。第2天伤口面积收缩至46%。之后结痂逐渐变硬。第6天伤口出现轻微过度性收缩至25%。第8天结痂脱落,伤口初步愈合,但中心愈合不完全。第12天表皮二次脱落,伤口完全愈合,表面光滑平整,无瘢痕,皮肤弹性与周边正常皮肤均接近。第14天皮肤颜色,表面平整度,无有明显瘢痕,皮肤弹性与正常皮肤均接近,重塑情况一般;组织切片结果:真皮层细胞间排列疏松,真皮层和表皮层分化不清晰,但尚未形成角质层,未见有毛囊和毛发形成,皮下血管分布较少,与正常皮肤比较有明显差异。I型胶原纤维蛋白和III型胶原纤维蛋白与正常皮接近,表现为无病理性瘢痕愈合。显示出对表皮干细胞分化具有明显促进作用,但是未发现对血管内皮祖细胞和真皮干细胞分化有明显促进作用。第28天愈合重塑情况与正常皮肤比较边缘毛发正常,中心部位稀少,介于功能敷料组与对照组之间,与正常皮肤比较有差异。
(3)依沙丫啶对照组:给药后伤口止血缓慢,当天面积收缩至73%,组织液渗出持续3天,边缘有红肿,瘙痒状况出现,第3天伤口面积肿胀至82%,此时炎症更加严重。第4天伤口形成粉红色硬痂,面积收缩至71%,炎症减轻。第6天伤口出现过度性收缩至46%。第10天结痂脱落,伤口初步愈合,但中心愈合不完全。第14天表皮二次脱落,伤口完全愈合,但是表面不平整,中心有明显白色瘢痕,皮肤弹性较硬不如周边正常皮肤柔软;组织切片结果:真皮层细胞间排列过于紧密,真皮层和表皮层分化不清晰,表面不平整,有明显隆起,尚未形成角质层,未见有毛囊和毛发形成,与正常皮肤比较有明显差异。I型胶原纤维蛋白明显多于正常皮,而III型胶原纤维蛋白与正常皮接近,表明为病理性瘢痕愈合。第28天愈合重塑情况与正常皮肤比较呈白色高于皮面,边缘毛发稀少,中间部分几乎无毛,远不如敷料组,与正常皮肤比较有明显差异。
(4)其他组:
瘢痕皮肤组织切除后的再修复:第14天将对照组麻醉后,剪下伤口瘢痕愈合组织,再将功能敷料组CS/CMCS/PNS涂在伤口处,伤口愈合结果均同上述功能敷料组,第28天均表现为快速无瘢痕性愈合。
用透明质酸(HA)钠替换功能敷料组中的CMCS(实施例6,7),作用效果略优,但透明质酸价格昂贵;而用海藻酸钠或羧甲基纤维素钠代替上述CMCS制备敷料时(实施例8),试验效果不如功能敷料组。上述各组最终均表现为快速无瘢痕性愈合。
单用PNS有明显炎症反应,组织液渗出3天,第4天伤口由胶原形成黄色硬痂。第8天结痂脱落,伤口初步愈合,中心皮下有少量血丝状。第13天表皮二次脱落,伤口完全愈合,但是表面四周轻微隆起,新生毛发和血管等皮肤附属器形成以及柔韧性等与正常皮肤基本接近,虽然最终均表现为快速无病理性瘢痕愈合,但是伤口愈合表面略微高于正常皮肤。
单用云南白药(市售)几乎无炎症反应,组织液渗出2天,第3天伤口由胶原和药粉混合形成黑色硬痂。第7天结痂脱落,伤口初步愈合,中心皮下有少量血丝状。第13天表皮二次脱落,伤口完全愈合,但是表面四周轻微隆起,四周新生毛发和血管等皮肤附属器形成以及柔韧性等与正常皮肤基本接近,但中心有白色无毛亮痕,虽然最终均表现为快速无病理性瘢痕愈合,但是伤口愈合表面略微高于正常皮肤,中心有白色亮痕。第28天表面四周略微高于正常皮肤,四周毛发与正常皮接近,但中心仍少部分有白色亮痕毛发稀少。
单用PNS未见有减少组织液渗出和其他消炎作用。云南白药有一定的消炎作用,可能与所含其他中药成分有关,但与三七无关,促进伤口愈合作用强度不如功能敷料组,可能与云南白药中所PNS含量低(人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl总量5~10mg/lg)有关。由此可见PNS是促进伤口愈合作用的物质基础,呈现浓度依赖关系。而CS不但具有明显的消炎作用,而且对PNS促进正常愈合与过度愈合之间的平衡具有重要的调控作用。
表3.伤口愈合时间与效果
表4.第14天愈合伤口组织切片结果
实施例4.促进实验性胃肠损伤的愈合作用试验结果
取昆明大白鼠30只,按100mg/kg灌服水杨酸,4小时开始每日灌服给药。实验组:C/CMCS/PNS,50mg/1ml;敷料组:CS/CMCS,25mg/1ml,对照组:水/1ml。连续给药7天,解剖观察胃肠损伤愈合,结果见表4。
表4.实验性胃肠损伤的愈合结果
大白鼠(只) | CS/CMCS/PNS | CS/CMCS | 对照组 |
未愈合 | 0 | 0 | 7 |
初步愈合 | 2 | 6 | 3 |
完全愈合 | 8 | 4 | 0 |
综合评价:
(1)PNS具有促进表皮干细胞快速分化,抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进真皮干细胞快速分化为表皮组织、毛发、汗腺、皮脂腺等皮肤附属器,以及血管内皮祖细胞快速分化为血管、淋巴管和神经,可有效地防止过度增殖病理性瘢痕,但未见有减少组织液渗出和其他消炎作用。
(2)CS具有迅速止血,快速形成网状纤维含水凝胶保护层,替代伤口过量分泌胶原形成的纤维蛋白补充伤口缺损,选择性促进表皮干细胞的生长,抑制I型瘢痕胶原纤维蛋白过度分泌,有效地减少组织液渗出,抑菌消炎,减少粘连和瘢痕形成,为PNS促进干细胞增殖,分化与调控的组织重建提供了良好的湿润场所,但未见对血管内皮祖细胞和真皮干细胞的增殖与分化有明显的促进作用。
(3)本发明功能敷料组合中CS与PNS显示出良好的协同作用,使伤口愈合结果表现为无瘢痕快速愈合。
Claims (7)
1.一种用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物,其特征在于由壳聚糖、酸性多聚糖和三七总皂苷组成,组合物中其重量配比为:
壳聚糖∶酸性多聚糖∶三七总皂苷=100∶10~50∶10~100
其中所述壳聚糖选自壳聚糖,壳聚糖乳酸盐,醋酸盐,或盐酸盐;酸性多聚糖选自羧甲基壳聚糖钠,透明质酸钠,透明质酸锌,海藻酸钠,或羧甲基纤维素钠;三七总皂苷按干燥品计算含量以人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1总重量计算为40.0~95.0%,组合物按干燥品计算,含三七总皂苷以人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1总重量计算为1.0~30.0%。
2.根据权利要求1所述用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物,其特征在于为干凝胶粉剂;是将壳聚糖、酸性多聚糖、三七总皂苷组合物混合均匀,用铝复合膜分装。
3.根据权利要求1所述用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物,其特征在于为干凝胶胶囊剂;是将壳聚糖、酸性多聚糖、三七总皂苷组合物混合均匀,分装于胶囊内。
4.根据权利要求1所述用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物,其特征在于为凝胶膜剂;是将壳聚糖、酸性多聚糖、三七总皂苷组合物混合均匀,加1~5倍组合物重量的水制成软材,压成薄膜片置于聚乙烯膜上,70~90℃气流烘干,使含水至20~60wt%,再复合上聚乙烯透气膜,剪切,用铝复合膜密封包装而制成。
5.根据权利要求1所述用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物,其特征在于为水凝胶剂;是将壳聚糖、酸性多聚糖、三七总皂苷组合物混合均匀,加1~10倍组合物重量的水制成软材,使其含水量75~91wt%,分装于聚乙烯管中,密封而制成。
6.根据权利要求1所述用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物,其特征在于为纤维涂层剂;是将壳聚糖、酸性多聚糖、三七总皂苷分别加1~1000倍自身重量的水溶解,按组合物的比例依次将其喷涂于脱脂棉或化纤纱布上,80~100℃减压干燥,剪切成块,用铝复合膜密封包装而成。
7.用于抑制瘢痕促进伤口快速愈合敷料组合物的应用,其特征在于在创伤、烧伤、烫伤、压伤、皮肤溃烂、胃肠溃疡,以及伤口久不愈合中的应用。
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Cited By (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102210885A (zh) * | 2011-06-06 | 2011-10-12 | 深港产学研基地 | 高透气性可降解的载药皮肤创伤敷料及其制备方法和设备 |
CN102631697A (zh) * | 2012-05-10 | 2012-08-15 | 贾国平 | 一种硫酸镁干片的制备及检验方法 |
CN103463199A (zh) * | 2012-06-07 | 2013-12-25 | 林胜杰 | 用于皮下组织创伤的组成物 |
CN103784393A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-14 | 河南科技大学 | 柴胡皂苷a在制备水凝胶中的应用及水凝胶的制备方法 |
CN104436292A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-03-25 | 安徽省健源医疗器械设备有限公司 | 一种芦荟胶止血纱布及其制备方法 |
CN104758305A (zh) * | 2014-01-03 | 2015-07-08 | 上海中医药大学 | 三七皂苷Ft1的医药用途 |
CN104874009A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-02 | 苏州市贝克生物科技有限公司 | 一种医用抗菌凝胶材料的制备方法 |
CN104874008A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-02 | 苏州市贝克生物科技有限公司 | 一种医用生物抗菌敷料的制备方法 |
CN104940978A (zh) * | 2015-06-14 | 2015-09-30 | 傅兴琴 | 一种抗菌透气敷料的制备方法 |
CN105012325A (zh) * | 2014-04-24 | 2015-11-04 | 上海中医药大学 | 三七皂苷st-4的医药用途 |
CN105582017A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-05-18 | 广西梧州制药(集团)股份有限公司 | 一种治疗胃溃疡合并胃肠道出血的组合物及其制备方法 |
CN105749332A (zh) * | 2016-04-06 | 2016-07-13 | 杭州元研细胞生物科技有限公司 | 一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法 |
CN105999367A (zh) * | 2016-08-08 | 2016-10-12 | 耿云花 | 一种外科医用敷料及其制备方法 |
CN107029272A (zh) * | 2017-04-10 | 2017-08-11 | 河南汇博医疗股份有限公司 | 一种海藻酸盐医用敷料及其制备方法 |
CN107261192A (zh) * | 2017-07-27 | 2017-10-20 | 江南大学 | 一种促进伤口无瘢痕愈合的苦莓苷f1敷料及制备方法 |
CN109310706A (zh) * | 2016-06-07 | 2019-02-05 | 卓英医疗有限责任公司 | 用于组织修复的多糖组合物 |
CN111450126A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-07-28 | 中国人民解放军第四军医大学 | 德式乳酸杆菌的新用途 |
CN112773816A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-05-11 | 浙江甬誉生物科技有限公司 | 一种创面修复喷剂及其制备方法和应用 |
CN114949021A (zh) * | 2022-05-28 | 2022-08-30 | 广西医科大学 | 一种含有鸡油提取物的皮肤修复药物 |
CN115006585A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-09-06 | 楼天女 | 一种止血性能好的伤口敷料及其制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1864701A (zh) * | 2005-05-20 | 2006-11-22 | 天津药物研究院 | 一种在口腔中快速溶解的中药薄膜剂及其制备方法 |
WO2007093805A1 (en) * | 2006-02-16 | 2007-08-23 | The University Of Bolton Education Corporation | Composite fibre of alginate and chitosan |
-
2010
- 2010-07-06 CN CN 201010223606 patent/CN101897990B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1864701A (zh) * | 2005-05-20 | 2006-11-22 | 天津药物研究院 | 一种在口腔中快速溶解的中药薄膜剂及其制备方法 |
WO2007093805A1 (en) * | 2006-02-16 | 2007-08-23 | The University Of Bolton Education Corporation | Composite fibre of alginate and chitosan |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
刘剑毅: "三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用", 《第三军医大学学报》, vol. 25, no. 17, 15 September 2003 (2003-09-15), pages 1562 - 1563 * |
许海棠: "壳聚糖基功能敷料的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)》, 28 February 2007 (2007-02-28), pages 20 - 21 * |
Cited By (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102210885B (zh) * | 2011-06-06 | 2013-08-07 | 深港产学研基地 | 高透气性可降解的载药皮肤创伤敷料及其制备方法和设备 |
CN102210885A (zh) * | 2011-06-06 | 2011-10-12 | 深港产学研基地 | 高透气性可降解的载药皮肤创伤敷料及其制备方法和设备 |
CN102631697A (zh) * | 2012-05-10 | 2012-08-15 | 贾国平 | 一种硫酸镁干片的制备及检验方法 |
CN103463199A (zh) * | 2012-06-07 | 2013-12-25 | 林胜杰 | 用于皮下组织创伤的组成物 |
CN104758305A (zh) * | 2014-01-03 | 2015-07-08 | 上海中医药大学 | 三七皂苷Ft1的医药用途 |
CN103784393A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-14 | 河南科技大学 | 柴胡皂苷a在制备水凝胶中的应用及水凝胶的制备方法 |
CN105012325A (zh) * | 2014-04-24 | 2015-11-04 | 上海中医药大学 | 三七皂苷st-4的医药用途 |
CN105012325B (zh) * | 2014-04-24 | 2019-04-26 | 上海中医药大学 | 三七皂苷st-4的医药用途 |
CN104436292A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-03-25 | 安徽省健源医疗器械设备有限公司 | 一种芦荟胶止血纱布及其制备方法 |
CN104874008A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-02 | 苏州市贝克生物科技有限公司 | 一种医用生物抗菌敷料的制备方法 |
CN104874009A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-02 | 苏州市贝克生物科技有限公司 | 一种医用抗菌凝胶材料的制备方法 |
CN104940978A (zh) * | 2015-06-14 | 2015-09-30 | 傅兴琴 | 一种抗菌透气敷料的制备方法 |
CN105582017A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-05-18 | 广西梧州制药(集团)股份有限公司 | 一种治疗胃溃疡合并胃肠道出血的组合物及其制备方法 |
CN105582017B (zh) * | 2016-02-23 | 2019-03-29 | 广西梧州制药(集团)股份有限公司 | 一种治疗胃溃疡合并胃肠道出血的组合物及其制备方法 |
CN105749332A (zh) * | 2016-04-06 | 2016-07-13 | 杭州元研细胞生物科技有限公司 | 一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法 |
CN105749332B (zh) * | 2016-04-06 | 2019-03-15 | 杭州元研细胞生物科技有限公司 | 一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法 |
RU2760358C2 (ru) * | 2016-06-07 | 2021-11-24 | Джоинтерапьютикс С.Р.Л. | Композиции полисахаридов для восстановления тканей |
CN109310706A (zh) * | 2016-06-07 | 2019-02-05 | 卓英医疗有限责任公司 | 用于组织修复的多糖组合物 |
US11116787B2 (en) | 2016-06-07 | 2021-09-14 | Jointherapeutics S.R.L. | Polysaccharide compositions for tissue repair |
CN105999367A (zh) * | 2016-08-08 | 2016-10-12 | 耿云花 | 一种外科医用敷料及其制备方法 |
CN107029272A (zh) * | 2017-04-10 | 2017-08-11 | 河南汇博医疗股份有限公司 | 一种海藻酸盐医用敷料及其制备方法 |
CN107261192A (zh) * | 2017-07-27 | 2017-10-20 | 江南大学 | 一种促进伤口无瘢痕愈合的苦莓苷f1敷料及制备方法 |
CN111450126A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-07-28 | 中国人民解放军第四军医大学 | 德式乳酸杆菌的新用途 |
CN111450126B (zh) * | 2020-03-31 | 2023-03-14 | 中国人民解放军空军军医大学 | 德氏乳酸杆菌的新用途 |
CN112773816A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-05-11 | 浙江甬誉生物科技有限公司 | 一种创面修复喷剂及其制备方法和应用 |
CN112773816B (zh) * | 2020-12-29 | 2022-01-11 | 浙江甬誉生物科技有限公司 | 一种创面修复喷剂及其制备方法和应用 |
CN114949021A (zh) * | 2022-05-28 | 2022-08-30 | 广西医科大学 | 一种含有鸡油提取物的皮肤修复药物 |
CN115006585A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-09-06 | 楼天女 | 一种止血性能好的伤口敷料及其制备方法 |
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