CN111450044B

CN111450044B - 一种含有灯盏乙素的眼用制剂、制备方法及其应用

Info

Publication number: CN111450044B
Application number: CN202010360019.2A
Authority: CN
Inventors: 林艳和
Original assignee: Yunnan Biovalley Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Yunnan Biovalley Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-04-30
Filing date: 2020-04-30
Publication date: 2021-06-25
Anticipated expiration: 2040-04-30
Also published as: CN111450044A

Abstract

本发明提供了一种含有灯盏乙素的眼用制剂，所述眼用制剂包括灯盏乙素、药用辅料，其余成分为水，其中所述灯盏乙素在该眼用制剂中的重量百分比为0.1‑20％，该眼用制剂能够进一步提高灯盏乙素的药用活性，降低其刺激性，该适合工业化生产。

Description

一种含有灯盏乙素的眼用制剂、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种含有灯盏乙素的眼用制剂及其制备方法，属于生物医学领域。

技术背景

灯盏花乙素(灯盏乙素)是从灯盏花Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz中分离出的黄酮类有效成分，主要成分为灯盏花乙素(又名灯盏乙素，野黄芩苷，以下简称乙素)，化学命名为4’，5，6-三羟基黄酮-7-O-葡萄糖酸苷。根据药典委2013年8月公示的灯盏花素质量标准修订，用于注射级的灯盏花乙素含量需大于91％。

牛磺酸是一种含硫氨基酸，牛磺酸滴眼液中的牛磺酸为成熟视网膜中主要的氨基酸。牛磺酸滴眼液能促进视网膜生长发育，缓解睫状肌痉挛，牛磺酸滴眼液中的牛磺酸在房水和玻璃体中与还原性糖竞争性结合，使玻璃体中蛋白质避免糖化和氧化。牛磺酸滴眼液中的牛磺酸广泛分布于动物组织细胞内，牛磺酸滴眼液中的牛磺酸在海生动物含量尤为丰富，哺乳类组织细胞内亦含有较高的牛磺，特别是神经、肌肉和腺体内含量更高。牛磺酸滴眼液用于牛磺酸代谢失调引起的白内障。也可用于急性结膜炎、疱疹性结膜炎、病毒性结膜炎的辅助治疗。

聚乙烯醇滴眼液，适应症为可作为一种润滑剂改善眼部干燥症状。

研究发现，灯盏乙素具有改善视网膜，降低眼压等功效，但目前中国尚未上市灯盏乙素的滴眼液，其中所涉及的技术原因众多，其中一个，灯盏乙素作为一种黄酮类药物，水溶性低是其技术问题，其二则是灯盏花乙素生物利用度低，无法通过提高浓度来直接提高其生物利用度，现有技术常常通过增加其可溶性，通过包合物等方式来改善，制备工艺复杂，同时生物利用度也并不高，常常带来副反应，例如眼部不适感。

发明内容

针对上述技术问题，发明人提供了一种含有灯盏乙素的眼用制剂，其中，由灯盏乙素、药用辅料和水制成，所含灯盏乙素的重量百分比为0.1-20％。

进一步优选，所述眼用制剂为滴眼液、凝胶剂、眼用脂质体和包合物滴眼液。

本发明提供的含有灯盏乙素的眼用制剂，其包括以下组分：

灯盏乙素0.1-20％、药用辅料和水，其中药用辅料包括：

pH调节剂及缓冲剂适量，

防腐剂 0.02-1％，

添加剂 0.1-10％，

余量为水，pH为5-7。

pH调节剂及缓冲剂适量的含义为加入pH调节剂及缓冲剂使溶液pH值达到5-7 的量。

进一步地，所述眼用制剂为

灯盏乙素1-20％，

pH调节剂及缓冲剂适量，

防腐剂 0.1-1％，

添加剂 0.2-3％，

牛磺酸 0.1-5％

余量为水，pH为5.5-6.5。

优选地，

灯盏乙素 1-15％，

牛磺酸 1-5％，

药用辅料包括，

pH调节剂及缓冲剂适量，

防腐剂 0.1-1％，

添加剂 0.5-1.5％，

余量为水，pH为5.5-6.5。

所述pH调节剂为KOH、NaOH等碱性溶液，则相应缓冲剂为Na₂HPO₄和NaH₂PO₄，硼酸、硼砂。

所述防腐剂选自苯扎氯胺、苯乙醇、山梨酸和尼泊金酯类的一种或几种组成。

所述添加剂为聚乙烯醇。

在本发明的优选实施例中，上述眼用制剂中灯盏乙素的含量优选为1-15％，更优选为1.5-10％，最优选为3-6％，以上为重量百分比。

灯盏乙素是难溶性化合物，但在本发明的pH值范围内，上述含量的灯盏乙素具有可溶解性，尤其当灯盏乙素的重量百分比含量在15％以内时，更优选当灯盏乙素的重量百分比含量在10％以内时，该眼用制剂中的灯盏乙素完全溶解，且经放置后发现溶液稳定无析出。

本发明经过大量的实验发现，本发明的眼用制剂具有良好的降低眼压，保护视网膜，预防和治疗黄斑、青光眼的作用，同时，发明人还发现，在该眼用制剂中添加适量的牛磺酸具有与牛磺酸联合协同降低眼压的作用，同时牛磺酸作为该眼用制剂的药用辅料之一，还具有降低该眼用制剂的刺激性，以及增加灯盏乙素溶解性的有益效果，实验证明，在6个月内，本发明的眼用制剂尤其是滴眼液能够保持溶液澄清透明，杂质低，有效成分含量稳定性好，产品刺激性小等优点，适合于视网膜保护以及黄斑、青光眼患者的眼睛保护和改善应用。

具体为：

灯盏乙素 0.1-20％，

牛磺酸 0.1-5％，

药用辅料包括，

pH调节剂及缓冲剂适量，

防腐剂 0.02-1％，

添加剂 0.1-10％，

余量为水，pH为5-7。

进一步地，所述眼用制剂为

灯盏乙素 1-20％

牛磺酸 0.1-5％

药用辅料包括，

pH调节剂及缓冲剂适量，

防腐剂 0.1-1％，

添加剂 0.2-3％，

余量为水，pH为5.5-6.5。

优选地，

灯盏乙素 1-20％，

牛磺酸 1-5％，

药用辅料包括，

pH调节剂及缓冲剂适量，

防腐剂 0.1-1％，

添加剂 0.5-1.5％，

余量为水，pH为5.5-6.5。

所述添加剂为聚乙烯醇。

优选防腐剂0.1-1％，添加剂0.2-3％，余量为水，pH为5.5-6.5。更优选防腐剂0.1-1％，添加剂0.5-1.5％，余量为水，pH为5.5-6.5。

灯盏乙素是难溶性化合物，在本发明的pH值范围内，上述含量的灯盏乙素具有可溶解性，尤其当加入适量的牛磺酸之后，灯盏乙素的重量百分比含量在20％以内，该眼用制剂中的灯盏乙素完全溶解，且快速溶解，经放置后发现溶液稳定，无析出。

大量实验证明，本发明进一步提供一种上述含有灯盏乙素的眼用制剂的制备方法，其中，包括以下步骤：

1)按照处方称取相应的成分；

2)pH调节剂使用少量水稀释成溶液；

3)将灯盏乙素、药用辅料(防腐剂、添加剂，或者防腐剂、添加剂和牛磺酸)加入到水中，配置成溶液，用pH调节剂和缓冲剂溶液进行pH调节，调节后，将余量水加入后，将上述溶液通过微孔滤膜过滤，无菌分装即得。

研究部分

1、水溶性研究

pH调节，当灯盏乙素溶液为pH5-7时，溶液完全溶解，加入相应的pH缓冲剂，

过酸过碱对于眼部有刺激性。

2、灯盏乙素加入牛磺酸后具有协同辅助降低眼压的作用

实验动物：SD大鼠，雄性，体重190-210g

实验仪器：TonoLab回弹式眼压计、芬兰Icare Tonolab动物专用眼压仪。

实验方法：取右眼前房注射直径为10微米的聚苯乙稀微球(7.6X10⁶微球/毫升)导致的高眼压模型大鼠88只，随机分成11组分别为模型组、实验例1(灯盏乙素/牛磺酸 10％/1.5％)、实验例2(灯盏乙素/牛磺酸15％/2％)、实验例3(灯盏乙素/牛磺酸20％/2.5％)、对照组1(不含有牛磺酸的含有灯盏乙素的眼用制剂——20％的灯盏乙素)、对照组2(牛磺酸2.5％的眼用制剂)、正常大鼠组、伪手术组，实验例其他成分为：KOH适量，苯扎氯铵0.05％，余量为水，pH为6.5。

手术开始前三天测定大鼠基础眼压值，手术后第二天开始，使用TonoLab回弹式眼压计测量眼压，每2天一次，时间统一选在早上8-10点。全部眼压的测量均由同一操作人员在相同的时间段内测量。最后一次测定眼压后处死大鼠，迅速取出右侧手术眼和左侧未手术对照眼的视网膜组织，用4％多聚甲醛固定，供HE染色用。

滴加方法为：每日一滴、每天一次，滴眼时间为下午17:00，连续15天。

表1含有灯盏乙素的眼用制剂对于高眼压大鼠降压作用的眼压值(平均值±SD，n＝9，单位 mmHg)

(为连续数据，本表为节选)

组别和眼压

模型组

实验例1

实验例2

实验例3

对照组1

对照组2

第0天

15.1±0.56

15.4±0.12

14.9±0.56

15.0±0.55

15.1±1.22

15.4±1.09

第4天

33.8±0.54

34.4±0.56

33.8±0.55

32.9±0.43

33.5±0.78

33.8±0.28

第8天

38.8±0.56

38.1±0.99

38.2±0.46

38.0±1.08

38.5±0.22

38.0±1.03

第12天

36.7±0.56

30.1±0.59*

28.6±0.85**

27.9±0.56**

30.4±0.33

34.7±1.23

第15天

33.5±0.56

24.1±0.84**

19.1±0.35**

18.5±0.48**

29.5±0.12

32.9±1.03

注：与模型组比较：*p<0.05，**p<0.01。

研究结果：

正常大鼠在注射微球钱的眼压为13-16mmHg之间，微球组在第8天达到最高值，其中，使用马来酸噻马洛尔+拉坦前列素浓度为(0.5％+0.005％)滴眼液对微球注射导致的高眼压大鼠有降眼压作用，说明微球导致大鼠高眼压模型建立成功。相较于对照组1和2，实验例1、2、3具有明显的降低眼压的功能，且具有剂量——效果效应。

值得注意是，上述实验组和对照组，部分大鼠眼部出现刺激性反应。

2、因此发明人进一步评估聚乙烯醇的作用：

实验对象：健康健康成年白色家兔，10只，实验前动物在实验动物房环境中至少使用3天。在实验开始前24小时对于实验动物的两只眼睛进行检查，有研究刺激症状、角膜缺陷和芥末损伤的动物不能用于试验。

实验动物及实验动物房符合国家相应规定，常规饲料，饮水不限制。

实验步骤：

拉开家兔右侧研究的下眼睑，将滴眼液滴入(或涂入)结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1s，另一侧研究不处理作为资深对照。滴入滴眼液后24h不冲洗眼睛。持续15天。 (评分标准略)

表2眼刺激性反应分级

注：当角膜、虹膜、结膜积分为0时，可判为无刺激性。

根据上述试验，10只家兔与自身左眼作为对照，处方采用处方1，加入聚乙烯醇组出现轻微刺激性的家兔为1只，而未加入聚乙烯醇处方组则出现了5只轻刺激性和2只刺激性的表现。因此加入聚乙烯醇能够有效降低灯盏乙素滴眼液的潜在刺激性分析。

并且重复上述试验，测定聚乙烯醇的使用浓度，发现以实验例1为基础处方，调整聚乙烯醇的含量，发现聚乙烯醇在0.1-10％浓度下能够发挥其减轻刺激性的功能，过高则将会改变溶液的稳定性，并且其在1.5％浓度下效果最佳。

3、视神经保护作用

通过上述高眼压大鼠模型，测定RGC(视网膜视神经节细胞)丢失百分比

表3 RGC丢失百分比

由荧光共聚焦结果表3可知，以正常组的RGC个数为基数(RGC的丢失率为0)，得其他不同组RGC的丢失率如表3所示，与模型组相比，实验例1组、实验例2组和实验例3(灯盏乙素/牛磺酸10％/1％，15％/1.5％，20％/2.5％)，组RGC的丢失率均有显著性差异(p<0.05或p<0.01)，说明灯盏乙素+牛磺酸浓度滴眼剂对视神经具有保护作用且呈剂量-效应关系；对比例1(20％)和2(2.5％牛磺酸)结果显示，高浓度灯盏乙素和牛磺酸对于RGC具有一定的保护作用(其他实验显示，单独灯盏乙素和牛磺酸保护RGC 的作用不具有剂量——效应关系)，但效果均低于对比例1、2、3。显示其效果增强作用。

4、稳定性研究

采用药典的检测办法，开展6个月(室温放置)的稳定性研究，发现本发明滴眼液比常规不加入聚乙烯醇和牛磺酸的溶液，稳定性更好。

表4稳定性比较

因此，本处方与平行处方相比，稳定性更好。

有益效果：

本发明提供了一种含有灯盏乙素的眼用制剂，具有与牛磺酸联合协同降低眼压的作用，同时在6个月内，能够保持溶液澄清透明，含量和杂质稳定性好，刺激性小等优点，适合于视网膜保护以及青光眼患者的眼睛保护和改善应用。

本发明还提供了上述含有灯盏乙素的眼用制剂在制备预防/治疗视网膜疾病药物中的应用，上述视网膜疾病包括青光眼、黄斑、飞蚊症等眼部疾病。

具体实施方式

以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例非用于限制本发明的保护范围。

实施例1

1000g滴眼液

灯盏乙素 20％

牛磺酸 3％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.05％

聚乙烯醇 1.5％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为6.5。

制备方法：称取灯盏乙素200g(云南生物谷药业，HPLC98％以上)，pH选用KOH 或NaOH溶液，防腐剂0.5g，聚乙烯醇15g，牛磺酸30g，混合加水溶解，调节pH为6.5，最后加入剩余水量，使用0.22μm微孔滤膜过滤，无菌分装装至滴眼瓶中，包装即得。

实施例2

1000g滴眼液

灯盏乙素 15％

牛磺酸 2％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.05％

聚乙烯醇 1.5％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为6.5。

制备方法同实施例1。

实施例3

1000g滴眼液

灯盏乙素 10％

牛磺酸 1.5％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.03％

聚乙烯醇 1.2％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为6左右。

制备方法同实施例1。

实施例4

1000g滴眼液

灯盏乙素 5％

牛磺酸 1％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.05％

聚乙烯醇 1％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为5.5-6左右。

制备方法同实施例1。

实施例5

1000g滴眼液

灯盏乙素 3％

牛磺酸 0.5％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.05％

聚乙烯醇 1％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为6左右。

制备方法同实施例1。

实施例6

1000g滴眼液

灯盏乙素 15％

牛磺酸 2％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.05％

聚乙烯醇 1.5％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为5.5。

制备方法同实施例1。

实施例7

1000g滴眼液

灯盏乙素 10％

牛磺酸 1％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.1％

聚乙烯醇 1.5％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为6。

制备方法同实施例1。

实施例8

1000g滴眼液

灯盏乙素 2％

牛磺酸 0.5％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.3％

聚乙烯醇 1.5％

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为6。

制备方法同实施例1。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，应当指出的是，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改造，这些都属于本发明的保护范围，因此，本发明专利的保护范围以所附权利要求为准。

Claims

1.一种含有灯盏乙素的眼用制剂，其特征在于，由灯盏乙素、药用辅料和水制成，成分重量百分比如下：

灯盏乙素 10％-20％，

牛磺酸 1.5-2.5％，

pH调节剂及缓冲剂，适量，

防腐剂 0.01-1％，所述防腐剂选自苯扎氯胺、苯乙醇、山梨酸和尼泊金酯类的一种或几种，

添加剂 0.5-1.5％，所述添加剂为聚乙烯醇，

余量为水，pH为5-7。

2.如权利要求1所述含有灯盏乙素的眼用制剂，其特征在于，该眼用制剂中所含灯盏乙素的重量百分比为10-15％。

3.如权利要求1-2任一项所述含有灯盏乙素的眼用制剂，其特征在于，所述pH调节剂为碱性溶液，包括KOH和NaOH，则相应缓冲剂为Na₂HPO₄和NaH₂PO₄、硼酸或硼砂。

4.如权利要求3所述含有灯盏乙素的眼用制剂，其特征在于，所述眼用制剂处方如下：灯盏乙素 15％，

牛磺酸 2％，

药用辅料包括，

KOH 适量，

苯扎氯铵 0.05％，

聚乙烯醇 1.5％，

Na₂HPO₄和NaH₂PO₄缓冲剂，适量

余量为水，pH为6.5。

5.如权利要求3所述含有灯盏乙素的眼用制剂，其特征在于，所述眼用制剂为滴眼液、凝胶剂、眼用脂质体和包合物滴眼液。

6.一种权利要求1所述含有灯盏乙素的眼用制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)按照处方称取相应的成分；

2)pH调节剂使用少量水稀释成溶液；

3)将灯盏乙素、药用辅料加入到水中，配置成溶液，用pH调节剂和缓冲剂溶液进行pH调节，调节pH5-7后，将余量水加入，将上述溶液通过微孔滤膜过滤，无菌分装即得。

7.一种权利要求1所述含有灯盏乙素的眼用制剂在制备治疗视网膜疾病药物中的应用。