CN111437252B

CN111437252B - 一种含有灯盏细辛提取物的眼用制剂、制备方法及应用

Info

Publication number: CN111437252B
Application number: CN202010360017.3A
Authority: CN
Inventors: 林艳和
Original assignee: Yunnan Biovalley Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Yunnan Biovalley Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-04-30
Filing date: 2020-04-30
Publication date: 2021-10-08
Anticipated expiration: 2040-04-30
Also published as: CN111437252A

Abstract

本发明提供了一种含有灯盏细辛提取物的眼用制剂，所述灯盏细辛提取物主要成分为灯盏乙素和咖啡酸酯，其中咖啡酸酯：灯盏乙素的质量比为1:1‑15:1，加入聚乙烯醇和牛磺酸等辅料，进一步提高灯盏细辛改善视网膜相关疾病，具有广泛的工业应用。

Description

一种含有灯盏细辛提取物的眼用制剂、制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种含有灯盏细辛提取物的眼用制剂及其制备方法，属于生物医学领域。

技术背景

灯盏花为菊科飞蓬属草本植物，主要分布于云南省，民间广泛用于治疗中风后遗症、风湿病、胸痹等症，取得了较好效果。早在1976年云南学者即开始对灯盏花的化学成分进行研究，分离鉴定了灯盏乙素(即野黄芩苷，scutellarin)、焦袂康酸、飞蓬甙等成分，其中灯盏乙素经药理筛选被证明是治疗中风的有效成分，在此基础上研制成功以灯盏花素为原料(黄酮类有效部位，主成分为野黄芩甙)约占90％的药品“灯盏花素片”，后来一些厂家又开发了“灯盏花素注射液”和“注射用灯盏花素”。

咖啡酸酯类成分尤其是灯盏细辛中含有的咖啡酰奎宁酸类成分有多种生物活性：抗氧化性，抗炎活性，抗微生物作用，肝细胞保护作用，抑制血小板聚集作用，一些发明专利也涉及咖啡酸酯的医药用途。有实验证明，咖啡酸酯类成分为强氧化剂，在视力变弱和视网膜退化的情况下，咖啡酸酯类成分可以起到修复和防止症状进一步恶化的作用。

咖啡酸酯类成分作为菊科飞蓬属植物灯盏花的一大类成分，含量较高，总咖啡酸酯的含量在大多批草中高于灯盏乙素含量。灯盏乙素已经单独成药，比如灯盏花素片，注射用灯盏花素，灯盏花素注射液等。而灯盏细辛中的咖啡酸酯类成分作为活性组分在灯盏细辛注射液，灯盏细辛滴丸，灯盏细辛胶囊，灯盏细辛软胶囊，灯盏细辛合剂等中都存在。然而还没有专门的灯盏细辛中的咖啡酸酯独立成药或者成为保健品。

聚乙烯醇滴眼液，适应症为可作为一种润滑剂改善眼部干燥症状，未见其其他功能的使用。

单独使用灯盏乙素或咖啡酸酯进行常规的眼用制剂尚未探明其功效，并且由于灯盏细辛内中含有相应的成分，极性各异，因此尚未有研究对于灯盏细辛提取物眼用制剂上市。

发明内容

针对上述技术问题，发明人提供了一种含有灯盏细辛提取物的眼用制剂，其中，由灯盏细辛提取物、药用辅料和水制成，所含灯盏细辛提取物的重量百分比为0.1-50％

本发明的灯盏细辛提取物为灯盏乙素和咖啡酸酯的混合物，该灯盏乙素和咖啡酸酯提取工艺参考ZL 201410764764.8，上述灯盏乙素：咖啡酸酯为1:1-1:15,优选1:1-1:5，更优选3:1。

进一步优选，所述眼用制剂为滴眼液、凝胶剂、眼用脂质体和包合物滴眼液。

本发明提供的灯盏细辛提取物眼用制剂，其包括以下组分：

灯盏细辛提取物0.1-30％、药用辅料和水，其中药用辅料包括：

余量为水，pH为5-7。

pH调节剂及缓冲剂适量的含义为加入pH调节剂及缓冲剂使溶液pH值达到5-7的量。

本发明的眼用制剂中所述防腐剂选自苯扎氯胺、苯乙醇、山梨酸和尼泊金酯类苯二甲烃铵氯化物的一种或几种组成；所述添加剂包括本领域常规的用于眼用制剂的抗氧剂、保湿剂等，本发明优选实施例中的添加剂为聚乙烯醇和/或玻尿酸。

进一步地，所述眼用制剂为

余量为水，pH为5.5-6.5。

优选地，

灯盏细辛提取物 1-15％

牛磺酸 1.5-3％

药用辅料包括，

pH调节剂适量

防腐剂 0.1-1％

添加剂 1-8％

余量为水，pH为5.5-6.5。

所述pH调节剂为KOH、NaOH等碱性溶液，则所述辅料(或该调节剂优选)还可以包括相应缓冲剂，具体为Na₂HPO₄和NaH₂PO₄，硼酸、硼砂，重量优选0.1-15％。

所述防腐剂选自苯扎氯胺、苯乙醇、山梨酸和尼泊金酯类苯二甲烃铵氯化物的一种或几种。

所述添加剂为聚乙烯醇和/或玻尿酸。

在本发明的优选实施例中，上述眼用制剂中灯盏细辛提取物的含量优选为1-15％，更优选为1.5-10％，最优选为3-6％，以上为重量百分比。

优选防腐剂0.1-1％，添加剂0.1-10％，余量为水，pH为5.5-6.5。更优选防腐剂0.1-1％，添加剂1-10％，余量为水，pH为5.5-6.5。

灯盏乙素：咖啡酸酯为1:1-15:1，优选1:1-5:1，更优选3:1。

灯盏细辛中主要含有灯盏乙素和咖啡酸酯，因此本发明分别将其提纯后，进行合理比例的配置。在上述比例下，灯盏细辛提取物配合牛磺酸，更好地降低眼压和保护视神经，具有显著的改善眼部疾病的功能。

本发明经过大量的实验发现，本发明的眼用制剂具有良好的降低眼压，保护视网膜，预防和治疗黄斑、青光眼的作用，同时，发明人还发现，在该眼用制剂中添加适量的牛磺酸具有与牛磺酸联合协同降低眼压的作用，同时牛磺酸作为该眼用制剂的药用辅料之一，本发明具有降低该眼用制剂的刺激性有益效果，实验证明，在6个月内，本发明的眼用制剂尤其是滴眼液能够保持溶液澄清透明，杂质低，有效成分含量稳定性好，产品刺激性小等优点，适合于视网膜保护以及黄斑、青光眼患者的眼睛保护和改善应用。

大量实验证明，本发明进一步提供一种上述灯盏细辛提取物的眼用制剂的制备方法，其中，包括以下步骤：

1)按照处方称取相应的成分；

2)pH调节剂使用少量水稀释成溶液；

3)将灯盏细辛提取物、药用辅料(防腐剂、添加剂，或者防腐剂、添加剂和牛磺酸)加入到水中，配置成溶液，用pH调节剂和缓冲剂溶液进行pH调节，调节后，将余量水加入后，将上述溶液通过微孔滤膜过滤，无菌分装即得。

本发明的主要药效成分为包括灯盏乙素和咖啡酸酯的混合物，有实验证明，咖啡酸酯类成分为强氧化剂，因为视网膜是代谢非常活跃的组织，需要大量的氧气，与“氧化应激”相关，氧气不足或自由基的产生会造成组织损伤，最终导致失明，所以，在视力变弱和视网膜退化的情况下，咖啡酸酯类成分可以起到修复和防止症状进一步恶化的作用，本发明采用灯盏乙素和咖啡酸酯，再结合牛磺酸，使得本发明产品具有良好的降低眼压、保护视网膜、预防和治疗黄斑、青光眼的作用，适合于视网膜保护以及黄斑、青光眼患者的眼睛保护和改善应用。本领域技术人员通过现有技术和公知技术结合，难以预料本发明的技术方案产生方非显而易见的技术效果和功用，本领域技术人员也没有动机通过现有技术的认知和掌握，来开发灯盏细辛提取物的眼用制剂，因此本发明的技术和产品与市场上同类产品相比具有了突出的实质性特点和显著的进步，也进一步证明了上述成分组合的本发明方案的创新性和创造性。

研究部分

1、水溶性研究

pH调节，当溶液为pH5-7时，溶液完全溶解，加入相应的pH缓冲剂，

过酸过碱对于眼部有刺激性。

2、灯盏细辛提取物加入牛磺酸后具有协同辅助降低眼压的作用

所述灯盏细辛提取物中灯盏乙素：咖啡酸酯为3:1，质量比。

实验动物：SD大鼠，雄性，体重190-210g

实验仪器：TonoLab回弹式眼压计、芬兰Icare Tonolab动物专用眼压仪。

实验方法：取右眼前房注射直径为10微米的聚苯乙烯微球(7.6X10⁶微球/毫升)导致的高眼压模型大鼠88只，随机分成11组分别为模型组、实验例1(灯盏细辛提取物/牛磺酸10％/1.5％)、实验例2(灯盏细辛提取物/牛磺酸15％/2％)、实验例3(灯盏细辛提取物/牛磺酸20％/2.5％)、对照组1(不含有牛磺酸的灯盏细辛提取物眼用制剂——20％的灯盏细辛提取物(其中灯盏细辛提取物中灯盏乙素：咖啡酸酯质量比3:1))、对照组2(牛磺酸2.5％的眼用制剂)、正常大鼠组、伪手术组，实验例其他成分参考实施例1，不含有聚乙烯醇。

手术开始前三天测定大鼠基础眼压值，手术后第二天开始，使用TonoLab回弹式眼压计测量眼压，每2天一次，时间统一选在早上8-10点。全部眼压的测量均由同一操作人员在相同的时间段内测量。最后一次测定眼压后处死大鼠，迅速取出右侧手术眼和左侧未手术对照眼的视网膜组织，用4％多聚甲醛固定，供HE染色用。

滴加方法为：每日一滴、每天一次，滴眼时间为下午17:00，连续15天。

表1灯盏细辛提取物眼用制剂对于高眼压大鼠降压作用的眼压值(平均值±SD，n＝9，单位mmHg)

(为连续数据，本表为节选)

组别和眼压

模型组

实验例1

实验例2

实验例3

对照组1

对照组2

第0天

15.1±0.56

15.1±0.13

14.7±0.28

15.1±0.32

15.2±10.69

15.4±1.09

第4天

33.8±0.54

32.0±0.12

33.1±0.46

36.9±0.51

33.5±1.33

33.8±0.28

第8天

38.8±0.53

37.9±0.86

39.2±0.13

38.1.0±0.67

38.5±0.11

38.0±1.03

第12天

36.7±0.48

29.9±0.54*

29.2±0.85**

25.3±0.22**

30.4±0.85

34.7±1.23

第15天

33.5±0.12

22.3±0.55**

18.9±0.13**

17.5±0.54**

29.5±0.15

32.9±1.03

注：与模型组比较：*p<0.05，**p<0.01。

研究结果：

正常大鼠在注射微球钱的眼压为13-16mmHg之间，微球组在第8天达到最高值，其中，使用马来酸噻马洛尔+拉坦前列素浓度为(0.5％+0.005％)滴眼液对微球注射导致的高眼压大鼠有降眼压作用，说明微球导致大鼠高眼压模型建立成功。相较于对照组1和2，实验例1、2、3具有明显的降低眼压的功能，且具有剂量——效果效应。

当灯盏细辛提取物中灯盏乙素：咖啡酸酯中灯盏乙素含量过低，或咖啡酸酯含量过高时，则相应的灯盏细辛提取物所发挥的药用价值就会下降。因此灯盏乙素：咖啡酸酯的比例范围为1:1-15:1。

值得注意是，上述实验组和对照组，部分大鼠眼部出现刺激性反应。

2、因此发明人进一步评估聚乙烯醇的作用：

实验对象：健康健康成年白色家兔，10只，实验前动物在实验动物房环境中至少使用3天。在实验开始前24小时对于实验动物的两只眼睛进行检查，有研究刺激症状、角膜缺陷和芥末损伤的动物不能用于试验。

实验动物及实验动物房符合国家相应规定，常规饲料，饮水不限制。

实验步骤：

拉开家兔右侧研究的下眼睑，将滴眼液滴入(或涂入)结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1s，另一侧研究不处理作为资深对照。滴入滴眼液后24h不冲洗眼睛。持续15天。(评分标准略)

表2眼刺激性反应分级

注：当角膜、虹膜、结膜积分为0时，可判为无刺激性。

根据上述试验，10只家兔与自身左眼作为对照，处方采用处方1，加入聚乙烯醇组出现轻微刺激性的家兔为2只，而未加入聚乙烯醇处方组则出现了4只轻刺激性和3只刺激性的表现。因此加入聚乙烯醇能够有效降低灯盏细辛滴眼液的潜在刺激性分析。

并且重复上述试验，测定聚乙烯醇的使用浓度，发现以实施例1为基础处方，调整聚乙烯醇的含量，发现聚乙烯醇在0.1-10％浓度下能够发挥其减轻刺激性的功能，过高则将会改变溶液的稳定性，并且其在1.5％浓度下效果最佳。

3、视神经保护作用

通过上述高眼压大鼠模型，测定RGC(视网膜视神经节细胞)丢失百分比

表3 RGC丢失百分比

组别	RGC丢失百分比
		模型组	54.9±0.12
实验例1	38.6±1.45*
		实验例2	36.0±0.49**
实验例3	24.9±0.17**
		对比例1	40.3±1.03*
对比例2	42.3±0.54*

由荧光共聚焦结果表3可知，以正常组的RGC个数为基数(RGC的丢失率为0)，得其他不同组RGC的丢失率如表3所示，与模型组相比，实验例1组、实验例2组和实验例3(灯盏细辛提取物/牛磺酸10％/1％,15％/1.5％,20％/2.5％)组RGC的丢失率均有显著性差异(p<0.05或p<0.01)，说明灯盏细辛提取物+牛磺酸浓度滴眼剂对视神经具有保护作用且呈剂量-效应关系；对比例1(20％)和2(2.5％牛磺酸)结果显示，高浓度灯盏细辛提取物和牛磺酸对于RGC具有一定的保护作用(其他实验显示，单独灯盏细辛提取物和牛磺酸保护RGC的作用不具有剂量——效应关系)，但效果均低于对比例1、2、3。显示其效果增强作用。

4、稳定性研究

采用药典的检测办法，开展6个月(室温放置)的稳定性研究，发现本发明滴眼液比常规不加入聚乙烯醇和牛磺酸的溶液，稳定性更好。

表4稳定性比较

因此，本处方与平行处方相比，稳定性更好。

本发明还提供聚乙烯醇与玻尿酸的混合物进行滴眼液改良，同样发现具有稳定性好以及降低眼部刺激的功能，另外玻尿酸具有调节眼部干涩度，使用者具有更好的适应性。

有益效果：

本发明提供了一种灯盏细辛提取物眼用制剂，具有与牛磺酸联合协同降低眼压的作用，同时在6个月内，能够保持溶液澄清透明，含量和杂质稳定性好，刺激性小等优点，适合于视网膜保护以及青光眼患者的眼睛保护和改善应用。

本发明还提供了上述灯盏细辛提取物眼用制剂在制备预防/治疗视网膜疾病药物中的应用，上述视网膜疾病包括青光眼、黄斑、飞蚊症、眼底血管性疾病(如视网膜静脉阻塞)、糖尿病视网膜病变等眼部疾病，以及本发明组合物还可用于结膜炎等眼科疾病。

具体实施方式

以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例非用于限制本发明的保护范围。

实施例1

1000g滴眼液

灯盏细辛提取物20％(云南生物谷提供，其中灯盏乙素：咖啡酸酯＝3:1)

药用辅料包括，

余量为水，pH为6.5。

制备方法：pH调节剂选用KOH，用少量水配置成溶液，称取灯盏细辛提取物200g，牛磺酸25g，防腐剂0.5g，聚乙烯醇15g，混合加水溶解，使用pH调节剂溶液，调节pH为6.5，最后加入剩余水量，使用0.22μm微孔滤膜过滤，无菌分装装至滴眼瓶中，包装即得。

实施例2

1000g滴眼液

灯盏细辛提取物15％(云南生物谷提供，其中灯盏乙素：咖啡酸酯＝3:1)

药用辅料包括，

余量为水，pH为6.5。

制备方法参考实施例1。

实施例3

1000g滴眼液

灯盏细辛提取物10％(云南生物谷提供，其中灯盏乙素：咖啡酸酯＝3:1)

药用辅料包括，

余量为水，pH为6左右。

制备方法参考实施例1。

实施例4

1000g滴眼液

灯盏细辛提取物5％(云南生物谷提供，其中灯盏乙素：咖啡酸酯＝3:1)

药用辅料包括，

余量为水，pH为5.5-6左右。

制备方法参考实施例1。

实施例5

1000g滴眼液

灯盏细辛提取物3％(云南生物谷提供，其中灯盏乙素：咖啡酸酯＝3:1)

牛磺酸 1.5％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.02％

聚乙烯醇 1.5％

余量为水，pH为6左右。

制备方法参考实施例1。

实施例6

1000g滴眼液

牛磺酸 1.5％

药用辅料包括，

KOH 适量

苯扎氯铵 0.05％

聚乙烯醇和玻尿酸(1:1) 2％

余量为水，pH为5.5。

制备方法参考实施例1。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，应当指出的是，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改造，这些都属于本发明的保护范围，因此，本发明专利的保护范围以所附权利要求为准。

Claims

1.一种含有灯盏细辛提取物的眼用制剂，其特征在于，由灯盏细辛提取物、药用辅料和水制成，组成重量百分比如下：

灯盏细辛提取物 1-20％，其中灯盏乙素和咖啡酸酯的质量比3:1；

药用辅料包括，

牛磺酸 1-5％，

pH调节剂适量

防腐剂 0.05-1％，所述防腐剂选自苯扎氯胺、苯乙醇、山梨酸和尼泊金酯类、苯二甲烃铵氯化物的一种或几种组成；

添加剂 1-10％，所述添加剂为聚乙烯醇，或聚乙烯醇和玻尿酸混合；

余量为水，pH为5.5-6.5。

2.如权利要求1所述含有灯盏细辛提取物的眼用制剂，其特征在于，所述眼用制剂由以下组分组成：

灯盏细辛提取物 1-15％

药用辅料包括，

牛磺酸 1.5-3％

pH调节剂适量

防腐剂 0.1-1％

添加剂 1-8％

余量为水，pH为5.5-6.5。

3.如权利要求1-2任一项所述含有灯盏细辛提取物的眼用制剂，其特征在于，所述pH调节剂为碱性溶液，为KOH或NaOH，该药用辅料还包括缓冲剂Na₂HPO₄和NaH₂PO₄、硼酸和/或硼砂。

4.一种权利要求1所述含有灯盏细辛提取物的眼用制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)按照处方称取相应的成分；

2)pH调节剂使用少量水稀释成溶液；

3)将灯盏细辛提取物、牛磺酸、防腐剂、添加剂加入到水中，配置成溶液，用pH调节剂溶液进行pH调节，调节pH为5.5-6.5后，将余量水加入，将上述溶液通过微孔滤膜过滤，无菌分装即得。

5.一种权利要求1所述含有灯盏细辛提取物的眼用制剂在制备治疗青光眼的药物中的应用。