CN111448990A - 一种灯台树生态组织培养液及其制备方法 - Google Patents

一种灯台树生态组织培养液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，属于植物生态组织培养技术领域，包括初代组织培养液、增殖组织培养液以及生根组织培养液；其中，每升初代组织培养液包括以下组分：基础培养基、CaCl2、蔗糖、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸和赤霉素，其余为水；每升增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基、CaCl2、蔗糖、6‑BA、萘乙酸、吲哚丁酸和赤霉素，其余为水；每升生根组织培养液包括以下组分：基础培养基、CaCl2、蔗糖和吲哚丁酸，其余为水。通过该组织培养液的配方能够有效提高灯台树的繁殖速率，并快速促进生根。

Description

一种灯台树生态组织培养液及其制备方法
技术领域
本发明涉及植物生态组织培养技术领域，具体涉及一种灯台树生态组织培养液及其制备方法。
背景技术
灯台树是山茱萸科、灯台树属的多年生木本植物，由于其自然生长的树形优美，且病虫害少，管理相对简单，因此具有很高的观赏价值和园林应用前景。灯台树的果肉和种子含油量较高，可以用于榨油，树皮含糠质，可提制栲胶，茎、叶的白色白色乳汁可用作橡胶或口香糖的原料，因此具有很高的经济价值。灯台树的根、叶、树皮还含有吲哚类生物碱，入药具有镇静、消炎止痛等功效，因此还具有药用价值。
目前，灯台树的繁殖主要以种子繁殖为主，但是由于种皮致密、坚硬、通气透水性较差，种子休眠期较长等原因，制约了灯台树的繁殖与工厂化生产。随着植物组织培养技术的不断发展，并逐步完善成熟，木本植物的组织培养技术也得到了很大的提高，但灯台树的组织培养技术仍未见报道。
植物只有在适宜的培养条件下，植物细胞才能进行正常的分化、分裂，完成正常的生长、发育。而且选取的外植体在不同的培养阶段所需的培养液也需要进行相应的调整，其中，生长调节剂的选择尤为重要。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，该组织培养液的配方主要是根据选取的灯台树的外植体在不同培养阶段所需的营养物质来设计的，通过该组织培养液的配方能够有效提高灯台树的繁殖速率，并快速促进生根，为灯台树的组织培育的商业化和工厂化奠定了良好的基础。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下。
一种灯台树生态组织培养液，包括用于灯台树新梢顶芽初代培养阶段的初代组织培养液、用于增殖培养阶段的增殖组织培养液以及用于生根培养阶段的生根组织培养液；
其中，每升所述初代组织培养液包括以下组分：基础培养基210～260g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、K2SO40.8～0.99g、Ca(NO3)2·4H2O 0.5～0.7g、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.8～1.0mg，其余为水；
每升所述增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基210～260g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、6-BA0.5～1.2mg、萘乙酸0.1～0.3mg、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.5～3mg，其余为水；
每升所述生根组织培养液包括以下组分：基础培养基100～130g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g和吲哚丁酸1～3mg，其余为水。
进一步，所述基础培养基是由木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.5～1配置而成。
进一步，所述初代组织培养液、所述增殖组织培养液、所述生根组织培养液中的pH值均为5.6～6.0。
更进一步，调节pH采用的试剂为15wt％的氢氧化钠溶液。
进一步，所述初代组织培养液、所述增殖组织培养液、所述生根组织培养液中均包括有0.1g/L的活性炭。
本发明还提供一种灯台树生态组织培养液的制备方法，包括以下步骤：
S1、配置基础培养基；
S2、初代组织培养液的制备：
称取基础培养基230～280g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、K2SO40.8～0.99g、Ca(NO3)2·4H2O 0.5～0.7g、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.8～1.0mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸和赤霉素，混匀后定容至1L，灭菌后得到初代组织培养液；
S3、增殖组织培养液的制备：
称取基础培养基230～280g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、6-BA0.5～1.2mg、萘乙酸0.1～0.3mg、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.5～3mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、6-BA、萘乙酸、吲哚丁酸和赤霉素，混匀后定容至1L，灭菌后得到增殖组织培养液；
S4、生根组织培养液的制备：
称取基础培养基100～130g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g和吲哚丁酸1～3mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖和吲哚丁酸，混匀后定容至1L，灭菌后得到生根组织培养液。
进一步，所述灭菌是在高压灭菌罐中以120～125℃高压灭菌20-30min。
本发明提供一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，具有如下有益效果：
1、本发明的技术方案，主要是利用基础培养基并配以相应的营养液，不仅使灯台树组织培养三个不同阶段所需的营养物质得到充分的供应，而且能够在很大程度上提高灯台树的繁殖速率，提高出苗率，并快速促进生根，使生根的数量和粗壮程度得到明显提高，进一步提高成活率。
2、本发明的技术方案提供的制备方法，操作工艺简单，适于规模化生产，为灯台树的组织培育的商业化和工厂化奠定了良好的基础，且经济环保。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中，所采用的材料及设备主要包括：木薯酒精厌氧发酵原液、MS培养基、蔗糖、CaCl2、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸、赤霉素、6-BA、赤霉素、15wt％的氢氧化钠溶液和活性炭。所述材料及设备，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。
实施例1
一种灯台树生态组织培养液，包括用于灯台树新梢顶芽初代培养阶段的初代组织培养液、用于增殖培养阶段的增殖组织培养液以及用于生根培养阶段的生根组织培养液；
其中，每升初代组织培养液包括以下组分：基础培养基230g、CaCl21.0g、蔗糖30g、K2SO40.9g、Ca(NO3)2·4H2O 0.6g、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素0.9mg，其余为水；
每升增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基230g、CaCl21.0g、蔗糖30g、6-BA1.0mg、萘乙酸0.2mg、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素2mg，其余为水；
每升生根组织培养液包括以下组分：基础培养基110g、CaCl21.0g、蔗糖30g和吲哚丁酸2mg，其余为水。
具体地，基础培养基是由木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.6配置而成。
上述灯台树生态组织培养液的制备方法，包括以下步骤：
S1、配置基础培养基：
取木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.6配置得到基础培养基；
S2、初代组织培养液的制备：
称取基础培养基230g、CaCl21.0g、蔗糖30g、K2SO40.9g、Ca(NO3)2·4H2O0.6g、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素0.9mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.8，混匀后定容至1L，经过121℃高压灭菌25min，得到初代组织培养液；
S3、增殖组织培养液的制备：
称取基础培养基230g、CaCl21.0g、蔗糖30g、6-BA1.0mg、萘乙酸0.2mg、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素2mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、6-BA、萘乙酸、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.8，混匀后定容至1L，经过121℃高压灭菌25min，得到增殖组织培养液；
S4、生根组织培养液的制备：
称取基础培养基110g、CaCl21.0g、蔗糖30g和吲哚丁酸2mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖和吲哚丁酸，再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.8，混匀后定容至1L，经过121℃高压灭菌25min，得到生根组织培养液。
实施例2
一种灯台树生态组织培养液，包括用于灯台树新梢顶芽初代培养阶段的初代组织培养液、用于增殖培养阶段的增殖组织培养液以及用于生根培养阶段的生根组织培养液；
其中，每升初代组织培养液包括以下组分：基础培养基210g、CaCl20.8g、蔗糖28g、K2SO40.8g、Ca(NO3)2·4H2O 0.5g、吲哚丁酸0.1mg和赤霉素0.8mg，其余为水；
每升增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基210g、CaCl20.8g、蔗糖28g、6-BA0.5mg、萘乙酸0.1mg、吲哚丁酸0.1mg和赤霉素0.5mg，其余为水；
每升生根组织培养液包括以下组分：基础培养基100g、CaCl20.8g、蔗糖28g和吲哚丁酸1mg，其余为水。
具体地，基础培养基是由木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.5配置而成。
上述灯台树生态组织培养液的制备方法，包括以下步骤：
S1、配置基础培养基：
取木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.5配置得到基础培养基；
S2、初代组织培养液的制备：
基础培养基210g、CaCl20.8g、蔗糖28g、K2SO40.8g、Ca(NO3)2·4H2O 0.5g、吲哚丁酸0.1mg和赤霉素0.8mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.6，混匀后定容至1L，经过120℃高压灭菌20min，得到初代组织培养液；
S3、增殖组织培养液的制备：
称取基础培养基210g、CaCl20.8g、蔗糖28g、6-BA 0.5mg、萘乙酸0.1mg、吲哚丁酸0.1mg和赤霉素0.5mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、6-BA、萘乙酸、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.6，混匀后定容至1L，经过120℃高压灭菌20min，得到增殖组织培养液；
S4、生根组织培养液的制备：
称取基础培养基100g、CaCl20.8g、蔗糖28g和吲哚丁酸1mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖和吲哚丁酸，再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.6，混匀后定容至1L，经过120℃高压灭菌20min，得到生根组织培养液。
实施例3
一种灯台树生态组织培养液，包括用于灯台树新梢顶芽初代培养阶段的初代组织培养液、用于增殖培养阶段的增殖组织培养液以及用于生根培养阶段的生根组织培养液；
其中，每升初代组织培养液包括以下组分：基础培养基260g、CaCl21.3g、蔗糖32g、K2SO40.99g、Ca(NO3)2·4H2O 0.7g、吲哚丁酸0.3mg和赤霉素1.0mg，其余为水；
每升增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基260g、CaCl21.3g、蔗糖32g、6-BA1.2mg、萘乙酸0.3mg、吲哚丁酸0.3mg和赤霉素3mg，其余为水；
每升生根组织培养液包括以下组分：基础培养基130g、CaCl21.3g、蔗糖32g和吲哚丁酸3mg，其余为水。
具体地，基础培养基是由木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：1配置而成。
上述灯台树生态组织培养液的制备方法，包括以下步骤：
S1、配置基础培养基：
取木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：1配置得到基础培养基；
S2、初代组织培养液的制备：
称取基础培养基260g、CaCl21.3g、蔗糖32g、K2SO40.99g、Ca(NO3)2·4H2O0.7g、吲哚丁酸0.3mg和赤霉素1.0mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至6.0，混匀后定容至1L，经过125℃高压灭菌30min，得到初代组织培养液；
S3、增殖组织培养液的制备：
称取基础培养基260g、CaCl21.3g、蔗糖32g、6-BA1.2mg、萘乙酸0.3mg、吲哚丁酸0.3mg和赤霉素3mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、6-BA、萘乙酸、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至6.0，混匀后定容至1L，经过125℃高压灭菌30min，得到增殖组织培养液；
S4、生根组织培养液的制备：
称取基础培养基130g、CaCl21.3g、蔗糖32g和吲哚丁酸3mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖和吲哚丁酸，再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至6.0，混匀后定容至1L，经过125℃高压灭菌30min，得到生根组织培养液。
实施例4
一种灯台树生态组织培养液，包括用于灯台树新梢顶芽初代培养阶段的初代组织培养液、用于增殖培养阶段的增殖组织培养液以及用于生根培养阶段的生根组织培养液；
其中，每升初代组织培养液包括以下组分：基础培养基240g、CaCl20.9g、蔗糖28g、K2SO40.89g、Ca(NO3)2·4H2O 0.55g、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素0.9mg，其余为水；
每升增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基240g、CaCl20.9g、蔗糖28g、6-BA0.8mg、萘乙酸0.2mg、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素1.0mg，其余为水；
每升生根组织培养液包括以下组分：基础培养基120g、CaCl20.9g、蔗糖28g和吲哚丁酸2mg，其余为水。
具体地，基础培养基是由木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.8配置而成。
上述灯台树生态组织培养液的制备方法，包括以下步骤：
S1、配置基础培养基：
取木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.8配置得到基础培养基；
S2、初代组织培养液的制备：
称取基础培养基240g、CaCl20.9g、蔗糖28g、K2SO40.89g、Ca(NO3)2·4H2O0.55g、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素0.9mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.7，混匀后定容至1L，经过123℃高压灭菌28min，得到初代组织培养液；
S3、增殖组织培养液的制备：
称取基础培养基240g、CaCl20.9g、蔗糖28g、6-BA 0.8mg、萘乙酸0.2mg、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素1.0mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、6-BA、萘乙酸、吲哚丁酸和赤霉素，充分搅拌均匀；再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.7，混匀后定容至1L，经过123℃高压灭菌28min，得到增殖组织培养液；
S4、生根组织培养液的制备：
称取基础培养基120g、CaCl20.9g、蔗糖28g和吲哚丁酸2mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖和吲哚丁酸，再用15wt％的氢氧化钠溶液调节pH至5.7，混匀后定容至1L，经过123℃高压灭菌28min，得到生根组织培养液。
实施例5
一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，与实施例1的灯台树生态组织培养液及其制备方法基本相同，其不同之处在于，初代组织培养液、增殖组织培养液、生根组织培养液中均包括有0.1g/L的活性炭。
比较例1
一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，与实施例1的灯台树生态组织培养液及其制备方法基本相同，其不同之处在于，
初代组织培养液、增殖组织培养液、生根组织培养液中均没有添加CaCl2。
比较例2
一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，与实施例1的灯台树生态组织培养液及其制备方法基本相同，其不同之处在于，每升增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基230g、CaCl21.0g、蔗糖30g、6-BA1.0mg和萘乙酸0.2mg，其余为水；没有添加吲哚丁酸0.2mg和赤霉素2mg。
比较例3
一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，与实施例1的灯台树生态组织培养液及其制备方法基本相同，其不同之处在于，每升初代组织培养液包括以下组分：基础培养基230g、CaCl21.0g、蔗糖30g、吲哚丁酸0.2mg和赤霉素0.9mg，其余为水；没有添加K2SO40.9g、Ca(NO3)2·4H2O 0.6g。
比较例4
一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，与实施例1的灯台树生态组织培养液及其制备方法基本相同，其不同之处在于，
初代组织培养液、增殖组织培养液、生根组织培养液中基础培养基选用MS培养基。
比较例5
一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，与实施例5的灯台树生态组织培养液及其制备方法基本相同，其不同之处在于，初代组织培养液、增殖组织培养液、生根组织培养液中均包括有0.5g/L的活性炭。
比较例6
一种灯台树生态组织培养液及其制备方法，与实施例5的灯台树生态组织培养液及其制备方法基本相同，其不同之处在于，
初代组织培养液、增殖组织培养液、生根组织培养液中均包括有2.0g/L的活性炭。
在无菌条件下，将待休眠灯台树枝条萌发出的长度约为2.5cm的新梢顶芽作为外植体，将外植体经过20％84消毒液表面灭菌处理15min后，分别置于实施例1、实施例5及比较例1-6的培养液中，进行多次反复切割继代培养，试验中每个处理接种30个新梢顶芽，同一处理重复3次。培养90天，统计观察生长情况。其中，培养条件为：温度为20-25℃，光照强度为1300-1800Lux，光照时间为10-13h/d。
表1不同基础培养基配置的组织培养液对灯台树试管苗生长的影响
Figure BDA0002498360960000111
Figure BDA0002498360960000121
由表1结果可知，与比较例4的MS培养基相比，本发明实施例1由木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基组成的基础培养基在用于灯台树的组织培养中，能够表现出更高的增殖系数，且植株生长高而健壮，丛生芽多，分化好；根系粗壮，生长较快，由此说明实施例1的基础培养基能够显著促进灯台树的增殖生长和根系生长。
表2不同活性炭含量对灯台树试管苗生长的影响
Figure BDA0002498360960000122
由表2结果可知，少量活性炭的加入对植株苗的生长基本没有影响，活性炭的加入主要是影响植株苗的玻璃化发生率，但是随着活性炭含量的增加，增殖系数会明显降低，且植株变矮，生长缓慢，分化较差。
表3不同组织培养液对灯台树试管苗生长的影响
Figure BDA0002498360960000123
Figure BDA0002498360960000131
由表3结果可知，对比文件1由于缺少了CaCl2，使植株的增殖生长受到影响，通过实施例1与比较例1相比可知，CaCl2的添加能够在很大程度上影响灯台树苗株的增殖系数，有助于提高增殖系数，使植株生长高而健壮，丛生芽多，且分化好。
对比文件2由于缺少了吲哚丁酸和赤霉素，使植株的增殖生长受到影响，通过实施例1与比较例2相比可知，吲哚丁酸和赤霉素的添加能够在很大程度上影响灯台树苗株的增殖系数，使苗株高而健壮；且茎叶呈绿色，生长较快。
对比文件3由于缺少了K2SO4和Ca(NO3)2·4H2O，使植株的分化受到影响，通过实施例1与比较例3相比可知，K2SO4和Ca(NO3)2·4H2O的添加能够使植株的丛生芽生长多，且生长较快，通过与吲哚丁酸和赤霉素的相互配合避免茎叶呈红色。
综上所述，采用本发明实施例1的培养液配方进行灯台树生态组织培养，能够在很大程度上提高灯台树的繁殖速率，提高出苗率，并快速促进生根，使生根的数量和粗壮程度得到明显提高，进一步提高成活率。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种灯台树生态组织培养液，其特征在于，包括用于灯台树新梢顶芽初代培养阶段的初代组织培养液、用于增殖培养阶段的增殖组织培养液以及用于生根培养阶段的生根组织培养液；
其中，每升所述初代组织培养液包括以下组分：基础培养基210～260g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、K2SO40.8～0.99g、Ca(NO3)2·4H2O 0.5～0.7g、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.8～1.0mg，其余为水；
每升所述增殖组织培养液包括以下组分：基础培养基210～260g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、6-BA0.5～1.2mg、萘乙酸0.1～0.3mg、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.5～3mg，其余为水；
每升所述生根组织培养液包括以下组分：基础培养基100～130g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g和吲哚丁酸1～3mg，其余为水。
2.根据权利要求1所述的灯台树生态组织培养液，其特征在于，所述基础培养基是由木薯酒精厌氧发酵原液与MS培养基以质量比1：0.5～1配置而成。
3.根据权利要求1所述的灯台树生态组织培养液，其特征在于，所述初代组织培养液、所述增殖组织培养液、所述生根组织培养液中的pH值均为5.6～6.0。
4.根据权利要求3所述的灯台树生态组织培养液，其特征在于，调节pH采用的试剂为15wt％的氢氧化钠溶液。
5.根据权利要求1所述的灯台树生态组织培养液，其特征在于，所述初代组织培养液、所述增殖组织培养液、所述生根组织培养液中均包括有0.1g/L的活性炭。
6.一种根据权利要求1所述的灯台树生态组织培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、配置基础培养基；
S2、初代组织培养液的制备：
称取基础培养基230～280g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、K2SO40.8～0.99g、Ca(NO3)2·4H2O 0.5～0.7g、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.8～1.0mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、K2SO4、Ca(NO3)2·4H2O、吲哚丁酸和赤霉素，混匀后定容至1L，灭菌后得到初代组织培养液；
S3、增殖组织培养液的制备：
称取基础培养基230～280g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g、6-BA0.5～1.2mg、萘乙酸0.1～0.3mg、吲哚丁酸0.1～0.3mg和赤霉素0.5～3mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖、6-BA、萘乙酸、吲哚丁酸和赤霉素，混匀后定容至1L，灭菌后得到增殖组织培养液；
S4、生根组织培养液的制备：
称取基础培养基100～130g、CaCl20.8～1.3g、蔗糖28～32g和吲哚丁酸1～3mg；
将基础培养基用水稀释至总体积的1/2，然后依次加入CaCl2、蔗糖和吲哚丁酸，混匀后定容至1L，灭菌后得到生根组织培养液。
7.根据权利要求6所述的灯台树生态组织培养液的制备方法，其特征在于，所述灭菌是在高压灭菌罐中以120～125℃高压灭菌20-30min。
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