CN111419892A - 鸡骨草总黄酮的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鸡骨草总黄酮的提取方法，将鸡骨草干燥，粉碎，加入有机溶剂，再加纤维素酶、果胶酶、酒石酸、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L‑半胱氨酸，搅拌均匀，浸泡；将提取液加热回流提取，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩，得提取物粗品；粗品溶于蒸馏水，离心，取上清液上样于大孔吸附树脂柱上；先用水洗脱至无浑浊，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂；得浸膏，干燥，得鸡骨草总黄酮。本方法利用纤维素酶、果胶酶及酒石酸浸泡鸡骨草再用乙醇和乙酸乙酯提取，利于鸡骨草黄酮类有效成分的浸出，提高黄酮的提取率；用氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L‑半胱氨酸浸泡，使粉碎后的药材不易发生氧化，提高黄酮类化合物的稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物有效成分提取技术领域，具体是一种鸡骨草总黄酮的提取方法。
背景技术
鸡骨草（Abrus cantoniensis Hance ）又称广东相思子，是豆科相思子属的一种植物，别名为红母鸡草、石门坎、细叶龙鳞草、大黄草等，主要分布在山地或旷野灌木林边，以广东、广西等地多见。鸡骨草味甘微苦、性凉，归肝、胆、胃经。具有清热解毒，舒肝止痛的功能。鸡骨草可在春夏潮湿季节用鸡骨草煲汤作食疗，是治疗黄疸、急、慢性肝炎、乳腺炎等的有效药物，还具有抗菌、抗炎、抗肿瘤和抗氧化等功能。
近年来，对鸡骨草的研究越来越深入，其药用价值日益受到国内外学者的重视鸡骨草的其他化学成分提取已经成为了研究热点。植物黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，因其能清除人体内的游离自由基，抑制自由基的产生，可作为天然的食品防腐剂，广泛应用于产品的保鲜和加工中。目前也有学者对鸡骨草总黄酮的提取有了一定研究，如专利CN 201110177604.X公开了一种鸡骨草总黄酮的制备方法，其特征是将干燥的鸡骨草粉碎过40 目筛，以水为提取剂，采用纤维素酶提取，纤维素酶用量是鸡骨草原料质量的0.3％～0.5％，提取剂水的体积与鸡骨草原料质量之比12ml/g ～ 16ml/g，pH 值4.4 ～ 5.2，酶解温度45℃～ 55℃，酶解时间80min ～ 100min，得提取液；提取液过滤后调整总黄酮质量浓度和pH 值得上样液，然后采用AB-8 型大孔吸附树脂吸附，上样液流速1.0BV/h ～ 2.0BV/h，上样液中总黄酮质量浓度1.5mg/ml ～ 2.0mg/ml，上样液pH 值4.5 ～ 5.5 ；洗脱剂洗脱，所述的洗脱剂为体积份数60％～ 75％的乙醇，洗脱剂流速0.5BV/h ～ 1.0BV/h，洗脱剂用量为2.3BV ～ 3.0BV，得洗脱液；减压浓缩和冷冻干燥，得鸡骨草总黄酮产品。该方法主要是将鸡骨草粉碎后加入纤维素酶酶解用水浸提，提纯，减压，干燥后即得鸡骨草总黄酮。现有的方法总黄酮的提取率较低，且产品的纯度低，且由于黄酮类结构中存在酚羟基，稳定性较差，直接粉碎后提取很容易发生氧化。
发明内容
本发明针对上述问题，提供一种鸡骨草总黄酮的提取方法。本方法利用纤维素酶、果胶酶及酒石酸浸泡鸡骨草后再用乙醇和乙酸乙酯提取，利于鸡骨草黄酮类有效成分的浸出，提高黄酮的提取率；再用氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L-半胱氨酸浸泡，使得粉碎后的药材不易发生氧化，提高黄酮类化合物的稳定性；纯化过程中上柱后采用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱，有效提高总黄酮的纯度。
为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：
一种鸡骨草总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
（1）将新鲜鸡骨草干燥，粉碎，得鸡骨草粉，按照料液比为1:15-20g/L的用量加入有机溶剂，所述有机溶剂由乙醇和乙酸乙酯组成，再加入纤维素酶、果胶酶、酒石酸、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L-半胱氨酸，搅拌均匀，浸泡0.5-1.5h，得提取液；
（2）将提取液加热回流提取，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂，得提取物粗品；
（3）将提取物粗品溶于3-5倍蒸馏水，离心，取上清液以1.0-3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；吸附完毕后静置，然后按1.0-3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无浑浊，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂；得浸膏，再经干燥，即得鸡骨草总黄酮。
进一步地，步骤（1）和步骤（3）所述干燥是先经过冷冻干燥后再进行微波干燥。
进一步地，所述冷冻干燥是在温度为-25~-45℃下干燥2-4h，然后在功率为150-250W下干燥至产品合格；步骤（1）干燥至鸡骨草含水量为12-15%，步骤（3）将浸膏干燥至含水量为4-6%。
进一步地，所述鸡骨草粉与纤维素酶、果胶酶、酒石酸、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L-半胱氨酸的重量比为100:0.4-0.8:0.3-0.6:0.5-1.0:1-3:0.5-1.0:0.3-0.6。
进一步地，步骤（2）所述回流提取是在温度为60-70℃下回流提取3次，每次提取1.5-2.5h。
进一步地，所述大孔吸附树脂柱为HPD-100型、LD605型、HP-20型或AB-8 型大孔吸附树脂柱。
进一步地，所述树脂填充量与草果粉的质量比为1:3-6。
进一步地，所述洗脱剂中乙醇和乙酸乙酯的体积比为1:3-5。
进一步地，所述洗脱剂的用量为填充大孔吸附树脂体积的10-15倍。
进一步地，所述减压浓缩是在真空度为0.08- 0.10MPa、温度75-80℃条件下浓缩至固含量为50-60%。
与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：
1、本方法利用纤维素酶、果胶酶及酒石酸浸泡鸡骨草后再用乙醇和乙酸乙酯提取，利于鸡骨草黄酮类有效成分的浸出，提高黄酮的提取率；再用氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L-半胱氨酸浸泡，使得粉碎后的药材不易发生氧化，提高黄酮类化合物的稳定性，氯化钠还利于黄酮的溶出。
2、本方法以乙醇和乙酸乙酯作为提取液，有效提高鸡骨草的提取率，经过大孔吸附树脂柱吸附，再用乙醇和乙酸乙酯洗脱，能够提高总黄酮的纯度，该方法简单，成本较低。
3、本方法鸡骨草整个干燥过程先经过冷冻干燥再用微波干燥，能够使得总黄酮等有效成分不被破坏，干燥彻底，操作简单，成本低。
4、本方法总黄酮的提取量达到27mg/g以上，总黄酮的纯度达到70%以上，提取的鸡骨草总黄酮在食品防腐剂、医药等领域中具有广泛的用途。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。应该强调的是，下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本发明的范围及其应用。
实施例1
一种鸡骨草总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
（1）将新鲜鸡骨草，在温度为-35℃下干燥3h，然后在功率为200W下干燥至含水率为13%，粉碎至80目，粉碎，取鸡骨草粉100g，按照料液比为1:20g/L的用量加入有机溶剂，所述有机溶剂由体积比为1:4乙醇和乙酸乙酯组成，再加入纤维素酶0.6g、果胶酶0.5g、酒石酸0.8g、氯化钠3g、乙二胺四乙酸二钠0.8g、L-半胱氨酸0.5g，搅拌均匀，浸泡1.5h，得提取液；
（2）将提取液在温度为65℃下加热回流提取3次，每次提取2h，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂，得提取物粗品；
（3）将提取物粗品溶于4倍蒸馏水，离心，取上清液以2.0BV/h的上样流速上样于HPD-100型大孔吸附树脂柱上,所述树脂填充量与鸡骨草粉的质量比为1:5；吸附完毕后静置，然后按2.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无浑浊，再用体积比为1:3的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，洗脱剂的用量为填充大孔吸附树脂体积的15倍，收集洗脱液，在真空度为0.09MPa、温度75℃条件下浓缩至固含量为55%回收溶剂；得浸膏，在温度为-35℃下干燥3h，然后在功率为200W下干燥至含水率为4.3%，得2.934g鸡骨草总黄酮，采用HPLC-UV 法进行定量分析得知芹菜素-6，8- 二C- 葡萄糖苷、芹菜素-6-C- 葡萄糖-8-C- 阿拉伯糖苷及芹菜素-6-C- 阿拉伯糖-8-C- 葡萄糖苷的含量分别为29.18%、21.14%和27.97%，总黄酮含量为78.29%。
实施例2
一种鸡骨草总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
（1）将新鲜鸡骨草，在温度为-30℃下干燥4h，然后在功率为250W下干燥至含水率为15%，粉碎至80目，粉碎，取鸡骨草粉100g，按照料液比为1:20g/L的用量加入有机溶剂，所述有机溶剂由体积比为1:3乙醇和乙酸乙酯组成，再加入纤维素酶0.5g、果胶酶0.3g、酒石酸0.6g、氯化钠2g、乙二胺四乙酸二钠0.5g、L-半胱氨酸0.6g，搅拌均匀，浸泡0.5h，得提取液；
（2）将提取液在温度为70℃下加热回流提取3次，每次提取1.5h，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂，得提取物粗品；
（3）将提取物粗品溶于5倍蒸馏水，离心，取上清液以3.0BV/h的上样流速上样于HP-20型大孔吸附树脂柱上,所述树脂填充量与鸡骨草粉的质量比为1:4；吸附完毕后静置，然后按3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无浑浊，再用体积比为1:4的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，洗脱剂的用量为填充大孔吸附树脂体积的12倍，收集洗脱液，在真空度为0.08MPa、温度80℃条件下浓缩至固含量为60%回收溶剂；得浸膏，在温度为-30℃下干燥4h，然后在功率为250W下干燥至含水率为4.8%，得2.837g鸡骨草总黄酮。采用HPLC-UV 法进行定量分析得知芹菜素-6，8- 二C- 葡萄糖苷、芹菜素-6-C- 葡萄糖-8-C- 阿拉伯糖苷及芹菜素-6-C- 阿拉伯糖-8-C- 葡萄糖苷的含量分别为27.51%、18.64%和26.97%，总黄酮含量为72.76%。
实施例3
一种鸡骨草总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
（1）将新鲜鸡骨草，在温度为-35℃下干燥4h，然后在功率为150W下干燥至含水率为13.5%，粉碎至80目，粉碎，取鸡骨草粉100g，按照料液比为1:18g/L的用量加入有机溶剂，所述有机溶剂由体积比为1:5乙醇和乙酸乙酯组成，再加入纤维素酶0.8g、果胶酶0.5g、酒石酸0.6g、氯化钠2.5g、乙二胺四乙酸二钠0.8g、L-半胱氨酸0.4g，搅拌均匀，浸泡1h，得提取液；
（2）将提取液在温度为65℃下加热回流提取3次，每次提取2h，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂，得提取物粗品；
（3）将提取物粗品溶于4倍蒸馏水，离心，取上清液以2.0BV/h的上样流速上样于HPD-100型大孔吸附树脂柱上,所述树脂填充量与鸡骨草粉的质量比为1:5；吸附完毕后静置，然后按2.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无浑浊，再用体积比为1:4的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，洗脱剂的用量为填充大孔吸附树脂体积的15倍，收集洗脱液，在真空度为0.08MPa、温度75℃条件下浓缩至固含量为50%回收溶剂；得浸膏，在温度为-35℃下干燥3h，然后在功率为150W下干燥至含水率为5.1%，得3.194g鸡骨草总黄酮。采用HPLC-UV 法进行定量分析得知芹菜素-6，8- 二C- 葡萄糖苷、芹菜素-6-C- 葡萄糖-8-C- 阿拉伯糖苷及芹菜素-6-C- 阿拉伯糖-8-C- 葡萄糖苷的含量分别为30.67%、20.16%和28.94%，总黄酮含量为79.77%。
对比例1
一种鸡骨草总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
（1）将新鲜鸡骨草，晒干至含水率为13.5%，粉碎至80目，粉碎，取鸡骨草粉100g，按照料液比为1:18g/L的用量加入有机溶剂，所述有机溶剂由体积比为1:5乙醇和乙酸乙酯组成，浸泡1h，得提取液；
（2）将提取液在温度为65℃下加热回流提取3次，每次提取2h，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂，得提取物粗品；
（3）将提取物粗品溶于4倍蒸馏水，离心，取上清液以2.0BV/h的上样流速上样于HPD-100型大孔吸附树脂柱上,所述树脂填充量与鸡骨草粉的质量比为1:5；吸附完毕后静置，然后按2.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无浑浊，再用体积比为1:4的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，洗脱剂的用量为填充大孔吸附树脂体积的15倍，收集洗脱液，在真空度为0.08MPa、温度75℃条件下浓缩至固含量为50%回收溶剂；得浸膏，在60℃热风干燥至含水率为5.1%，得2.579g鸡骨草总黄酮。采用HPLC-UV 法进行定量分析得知芹菜素-6，8- 二C- 葡萄糖苷、芹菜素-6-C- 葡萄糖-8-C- 阿拉伯糖苷及芹菜素-6-C- 阿拉伯糖-8-C- 葡萄糖苷的含量分别为24.67%、18.16%和26.97%，总黄酮含量为69.80%。
对比例2
一种鸡骨草总黄酮的提取方法，包括如下步骤：
（1）将新鲜鸡骨草，在温度为-35℃下干燥4h，然后在功率为150W下干燥至含水率为13.5%，粉碎至80目，粉碎，取鸡骨草粉100g，按照料液比为1:18g/L的用量加入有机溶剂，所述有机溶剂由体积比为1:5乙醇和乙酸乙酯组成，再加入纤维素酶0.8g、果胶酶0.5g，搅拌均匀，浸泡1h，得提取液；
（2）将提取液在温度为65℃下加热回流提取3次，每次提取2h，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂，得提取物粗品；
（3）将提取物粗品溶于4倍蒸馏水，离心，取上清液以2.0BV/h的上样流速上样于HPD-100型大孔吸附树脂柱上,所述树脂填充量与鸡骨草粉的质量比为1:5；吸附完毕后静置，然后按2.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无浑浊，再用体积比为1:4的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，洗脱剂的用量为填充大孔吸附树脂体积的15倍，收集洗脱液，在真空度为0.08MPa、温度75℃条件下浓缩至固含量为50%回收溶剂；得浸膏，在温度为-35℃下干燥3h，然后在功率为150W下干燥至含水率为5.1%，得2.763g鸡骨草总黄酮。采用HPLC-UV 法进行定量分析得知芹菜素-6，8- 二C- 葡萄糖苷、芹菜素-6-C- 葡萄糖-8-C- 阿拉伯糖苷及芹菜素-6-C- 阿拉伯糖-8-C- 葡萄糖苷的含量分别为25.44%、18.97%和26.02%，总黄酮含量为70.43%。
以上内容是结合具体的/优选的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，其还可以对这些已描述的实施例做出若干替代或变型，而这些替代或变型方式都应视为属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将新鲜鸡骨草干燥，粉碎，得鸡骨草粉，按照料液比为1:15-20g/L的用量加入有机溶剂，所述有机溶剂由乙醇和乙酸乙酯组成，再加入纤维素酶、果胶酶、酒石酸、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L-半胱氨酸，搅拌均匀，浸泡0.5-1.5h，得提取液；
(2)将提取液加热回流提取，抽滤，经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂，得提取物粗品；
(3)将提取物粗品溶于3-5倍蒸馏水，离心，取上清液以1.0-3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；吸附完毕后静置，然后按1.0-3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无浑浊，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂；得浸膏，再经干燥，即得鸡骨草总黄酮。
2.根据权利要求1所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：步骤（1）和步骤（3）所述干燥是先经过冷冻干燥后再进行微波干燥。
3.根据权利要求2所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：所述冷冻干燥是在温度为-25~-45℃下干燥2-4h，然后在功率为150-250W下干燥至产品合格；步骤（1）干燥至鸡骨草含水量为12-15%，步骤（3）将浸膏干燥至含水量为4-6%。
4.根据权利要求1所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：所述鸡骨草粉与纤维素酶、果胶酶、酒石酸、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、L-半胱氨酸的重量比为100:0.4-0.8:0.3-0.6:0.5-1.0:1-3:0.5-1.0:0.3-0.6。
5.根据权利要求1所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：步骤（2）所述回流提取是在温度为60-70℃下回流提取3次，每次提取1.5-2.5h。
6.根据权利要求1所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂柱为HPD-100型、LD605型、HP-20型或AB-8 型大孔吸附树脂柱。
7.根据权利要求1所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：所述树脂填充量与草果粉的质量比为1:3-6。
8.根据权利要求1所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：所述洗脱剂中乙醇和乙酸乙酯的体积比为1:3-5。
9.根据权利要求8所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：所述洗脱剂的用量为填充大孔吸附树脂体积的10-15倍。
10.根据权利要求1所述鸡骨草总黄酮的提取方法，其特征在于：所述减压浓缩是在真空度为0.08- 0.10MPa、温度75-80℃条件下浓缩至固含量为50-60%。
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