CN102836201B - 一种鸡骨草总黄酮的制备方法 - Google Patents
一种鸡骨草总黄酮的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种鸡骨草总黄酮的制备方法，属于药材加工领域。它是将干燥的鸡骨草粉碎过筛，以水为提取剂，采用纤维素酶提取，提取液过滤后调整总黄酮质量浓度和pH值得上样液，然后采用AB-8型大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱，减压浓缩和冷冻干燥，得鸡骨草总黄酮产品。本发明的有益效果是：操作简便、快捷、廉价、无毒，是一种绿色生产方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种从鸡骨草中提取、纯化总黄酮的方法，具体是一种利用纤维素酶提取串联AB-8型大孔吸附树脂分离纯化制备鸡骨草总黄酮的方法，属于药材加工领域。
背景技术
鸡骨草为《中国药典》2010年版一部收载的豆科植物广州相思子(AbruscarItorIiensis Hance)的干燥全株，别名红母鸡草、猎腰草、黄食草、土甘草，药材名鸡骨草。主要分布于广东、广西，为我国特有。因其最先发现在广州白云山，故又称广州相思子，以全株入药(除去豆荚)。鸡骨草全草含相思子(L-abrine)、黄酮苷、胆碱、甾醇、皂苷、氨基酸、糖类、鞣质、蒽醌类化合物，其性凉，味甘淡，有清热利湿、解毒、疏肝止痛、活血化瘀等功效，用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化腹水、胆囊炎、胃痛、风湿痹痛、打痹痛、毒蛇咬伤、乳腺炎、沁尿系统感染等病症。但是，目前国内外对鸡骨草黄酮类化合物的研究还相当缺乏，而黄酮类化合物对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无副作用，并以此开发出多种药品和保健食品。因此，如何高效地对鸡骨草黄酮类化合物进行提取与分离纯化，也越来越受到国内外学者的重视。
常用的总黄酮提取方法有水煎煮法，热回流提取，超声波辅助提取，微波辅助提取等。但是水煎煮法提取时间很长，一般4～6小时；热回流提取，超声波辅助提取和微波辅助提取总黄酮则需要使用有机溶剂；而酶法提取作为一种优良的提取方法，具有操作简便快捷、提取时间短、转移率高以及无溶剂污染等特点，目前己广泛应用在生物活性物质的提取方面，如山楂叶总黄酮，银杏叶总黄酮，芹菜黄酮等，而应用于鸡骨草总黄酮提取方面至今未见报道。
大孔吸附树脂是一类不溶于酸、碱及各种有机溶剂且有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂，近年来广泛被应用于医药、环保和食品等领域，在中草药研究方面也较广泛，尤其在黄酮类成分中，如红树莓总黄酮，银杏叶总黄酮和杭白菊总黄酮等及其他各类成分均有采用大孔吸附树脂法进行分离纯化的研究，而应用于鸡骨草总黄酮分离纯化方面至今未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种鸡骨草总黄酮的制备方法，即一种利用纤维素酶提取串联AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鸡骨草总黄酮的方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：将干燥的鸡骨草粉碎过40目筛，水为提取剂，纤维素酶用量是鸡骨草原料质量的0.3％～0.5％，提取剂水的体积与鸡骨草原料质量之比12ml/g～16ml/g，pH值4.4～5.2，酶解温度45℃～55℃，酶解时间80min～100min，得提取液，经检验总黄酮转移率大于90％；将提取液过滤后调整得到总黄酮质量浓度1.5mg/ml～2.0mg/ml和pH值4.5～5.5的上样液，然后以1.0BV/h～2.0BV/h的流速，采用AB-8型大孔吸附树脂吸附，随后以体积份数60％～75％的乙醇为洗脱剂进行洗脱，洗脱剂液流速0.5BV/h～1.0BV/h，洗脱剂用量2.3BV～3.0BV，得洗脱液；将洗脱液在真空度0.08MPa～0.10MPa和温度50℃～60℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液；将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-45℃～-60℃条件下干燥殆尽，得鸡骨草总黄酮产品，经检验纯度大于30％。
由于采用了以上技术方案，本发明具有以下优点：
1、本发明利用纤维素酶提取串联AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鸡骨草总黄酮，其主要优点是以水为提取剂，采用纤维素酶提取。与乙醇回流提取、超声波辅助乙醇提取或微波辅助乙醇提取相比，提取时不使用乙醇等有机溶剂，故无需浓缩除去乙醇，过滤后直接调整pH和质量浓度便可直接进行大孔吸附树脂分离纯化，因此本发明操作简便、快捷、廉价、无毒；
2、用本发明方法制备鸡骨草总黄酮，其总黄酮转移率大于90％，纯化物中总黄酮的含量大于30％，且重现性好。
附图说明
图1是实施例1的AB-8大孔吸附树脂动态洗脱曲线。
图2是实施例2的AB-8大孔吸附树脂动态洗脱曲线。
图3是实施例3的AB-8大孔吸附树脂动态洗脱曲线。
具体实施方式
实施例1
纤维素酶提取：干燥的鸡骨草粉碎过40目筛，纤维素酶用量是鸡骨草原料质量的0.4％，提取剂水的体积与鸡骨草原料质量之比14.5ml/g，pH值4.8，酶解温度50℃和酶解时间85min，此时总黄酮转移率为98.61％；
AB-8型大孔吸附树脂分离纯化：上样液pH值5.0、上样液质量浓度1.6mg/ml、上样液流速2.0BV/h、洗脱剂为体积份数60％的乙醇、洗脱剂流速1.0BV/h和洗脱剂用量2.3BV；动态洗脱曲线见图1；
在真空度0.10MPa和温度60℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液，将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-50℃条件下干燥殆尽，得鸡骨草总黄酮产品，此产品纯度为35.21％。
实施例2
纤维素酶提取：干燥的鸡骨草粉碎过40目筛，纤维素酶用量是鸡骨草原料质量的0.4％，提取剂水的体积与鸡骨草原料质量之比14ml/g，pH值4.7，酶解温度47℃和酶解时间80min，此时总黄酮转移率为94.01％；
AB-8型大孔吸附树脂分离纯化：上样液pH 4.5、上样液质量浓度1.6mg/ml、上样液流速1.5BV/h、洗脱剂为体积份数65％的乙醇、洗脱剂流速0.75BV/h和洗脱剂用量2.5BV；动态洗脱曲线见图2；
在真空度0.10MPa、温度60℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液，将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-50℃条件下干燥殆尽，得鸡骨草总黄酮产品，此产品纯度为33.88％。
实施例3
纤维素酶提取：干燥的鸡骨草粉碎过40目筛，纤维素酶用量是鸡骨草原料质量的0.5％，提取剂水的体积与鸡骨草原料质量之比16ml/g，pH值5.0，酶解温度53℃和酶解时间100min，此时总黄酮转移率为90.11％；
AB-8型大孔吸附树脂分离纯化：上样液pH 5.5、上样液质量浓度1.8mg/ml、上样液流速1.5BV/h、洗脱剂为体积份数70％的乙醇、洗脱剂流速0.75BV/h和洗脱剂用量2.8BV；动态洗脱曲线见图3；
在真空度0.10MPa、温度60℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液，将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-50℃条件下干燥殆尽，得鸡骨草总黄酮产品，此产品纯度为32.70％。
Claims (1)
1.一种鸡骨草总黄酮的制备方法，其特征是将干燥的鸡骨草粉碎过40目筛，以水为提取剂，采用纤维素酶提取，纤维素酶用量是鸡骨草原料质量的0.3％～0.5％，提取剂水的体积与鸡骨草原料质量之比12ml/g～16ml/g，pH值4.4～5.2，酶解温度45℃～55℃，酶解时间80min～100min，得提取液；提取液过滤后调整总黄酮质量浓度和pH值得上样液，然后采用AB-8型大孔吸附树脂吸附，上样液流速1.0BV/h～2.0BV/h，上样液中总黄酮质量浓度1.5mg/ml～2.0mg/ml，上样液pH值4.5～5.5；洗脱剂洗脱，所述的洗脱剂为体积份数60％～75％的乙醇，洗脱剂流速0.5BV/h～1.0BV/h，洗脱剂用量为2.3BV～3.0BV，得洗脱液；减压浓缩和冷冻干燥，得鸡骨草总黄酮产品；
所述提取液中总黄酮转移率大于90％；
所述减压浓缩是将洗脱液在真空度0.08MPa～0.10MPa、温度50℃～60℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液；
所述冷冻干燥是将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-45℃～-60℃条件下干燥殆尽，得鸡骨草总黄酮产品；
所述鸡骨草总黄酮产品纯度大于30％。
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