CN110028531A - 一种从土壤中提取分离黄酮类物质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种从土壤中提取分离黄酮类物质的方法。所述方法包括：(1)将土壤样品干燥，过筛；(2)加入提取液，混匀后超声提取，离心，收集上清液；对离心后的沉淀重复操作此步骤；合并上清液；蒸发除去甲醇；(3)纯化，即得；所述提取液由EDTA‑2Na与甲醇组成；其中EDTA‑2Na与土壤样品的质量比为(0.028‑0.32):1。本发明发现当EDTA‑2Na和甲醇以特定比例加入土壤中时，能够在较短时间内同时将各黄酮类物质充分提取，取得了显著的技术效果。

Description

一种从土壤中提取分离黄酮类物质的方法
技术领域
本发明涉及一种从土壤中提取分离黄酮类物质的方法，属于提取分离技术领域。
背景技术
植物所产生的黄酮类物质(紫云英苷、山奈酚、槲皮素、杨梅素等)是一类重要的次生代谢物质，其在植物体内的合成、积累与植物的生长环境密切相关；并且黄酮类物质还参与植物的抗逆过程，是植物抵抗外界不利环境的重要保护机制，在植物的整个体内代谢中占有不可替代的地位。此外，黄酮类物质经植物根系分泌到土壤后，对植物及植物根际环境起到重要作用。因此，研究黄酮类物质在土壤中的环境行为是至关重要的，而研究这一行为的前提是如何能够快速有效的从土壤中提取分离黄酮类物质。
CN105388051A公开了一种从土壤中提取分离紫云英苷的方法，其通过加入由EDTA、碳酸氢钠、甲醇组成的提取液，将土壤中紫云英苷迅速提取分离出来。从其实施例记载可知，当加入的EDTA与土壤样品质量比不超过的加入量在不超0.02时提取效果较好，其中测试例1的效果最好(EDTA与土壤质量比为0.0112:1)。
然而土壤中除紫云英苷外，还包括山奈酚、槲皮素、杨梅素等黄酮类物质，由于各物质性质不同，以及土壤中有机物、无机物对提取的干扰，使得采用上述提取方法难以同时对土壤中其它黄酮类物质进行提取。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明通过大量探索性试验，意外发现当EDTA-2Na和甲醇以特定比例加入土壤中时，能够在较短时间内同时将各黄酮类物质充分提取，取得了显著的技术效果。
本发明的技术方案如下：
一种从土壤中提取分离黄酮类物质的方法，包括：
(1)将土壤样品干燥，过筛；
(2)加入提取液，混匀后超声提取，离心，收集上清液；对离心后的沉淀重复操作此步骤；合并上清液；蒸发除去甲醇；
(3)纯化，即得；
所述提取液由EDTA-2Na与甲醇组成；其中，EDTA-2Na与土壤样品的质量比为(0.028-0.32):1。优选0.03:1。
所述土壤样品与甲醇的质量体积比为1g：(1.5-2)ml，优选1g:1.5ml。
作为本发明的优选实施方式，所述提取液中，EDTA-2Na与土壤样品的质量比为0.03:1；甲醇与土壤样品为1.5ml:1g。
所述超声条件为：超声功率为700W，超声时间为25-35min。
所述离心条件为：转速为4000-6000rpm，时间为4-6min。
所述纯化采用固相萃取的方式实现实现，条件包括：固相萃取柱为Poly-Sery HLBSPE小柱，依次用甲醇、超纯水淋洗柱子进行活化，用甲醇进行洗脱。
本发明在现有提取方法基础上，优化筛选出最佳的提取条件，从而实现了对土壤中各黄酮类物质同时提取的目的。
附图说明
图1为混合标准液的高效液相色谱谱图。
图2为土壤样品的高效液相色谱谱图。
图中1为紫云英苷；2为山奈酚；3为杨梅素；4为槲皮素。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
在以下实施例中：
空白土壤样品：取自河北省巨鹿县黄顶菊发生地区没有生长黄顶菊的土壤，里面不含紫云英苷、山奈酚、槲皮素、杨梅素。
甲醇为色谱纯。
EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠)为分析纯；配制成0.02g/ml的水溶液(2％)。
标准品：紫云英苷、山奈酚、槲皮素、杨梅素标准品购于上海纯优生物科技有限公司。
混合标准液：用甲醇配制紫云英苷、山奈酚、槲皮素、杨梅素的混合标准液，其中紫云英苷、山奈酚、槲皮素、杨梅素的浓度均为100μg/mL，备用。其高效液相色谱谱图如图1所示。
超声提取仪：购自昆山市超声仪器有限公司，型号KQ-700DE型。
Poly-Sery HLB SPE小柱：购于上海安谱实验科技股份有限公司。
固相萃取装置：购自美国Supelco公司，型号Supelco12。
采用高效液相色谱测定提取分离的各黄酮类物质的含量。
色谱条件为：
色谱柱：CAPCELL PAK MG C18色谱柱(250mm×4.6mm I.D.5μm)；
流动相：A：乙腈，B：0.2％乙酸水溶液；
检测波长：360nm；
流速：1.0mL/min；
梯度洗脱：按如下表1所述梯度洗脱参数进行梯度洗脱，即在0-10min，用90体积％的A和10体积％的B进行洗脱，在10-15min，用85体积％的A和15体积％的B进行洗脱，依此类推。
表1洗脱梯度
黄酮类物质(紫云英苷、山奈酚、槲皮素、杨梅素)回收率＝土壤样品中测定的黄酮类物质含量/加入空白土壤中的黄酮类物质含量×100％。
实施例1一种从土壤中提取分离黄酮类物质的方法
包括如下步骤：
(1)将空白土壤样品风干，过20目筛；称取5g土壤于离心瓶中，加入100μL混合标准液，漩涡震荡混匀后，静止30min；
(2)向土壤样品中加入提取液，漩涡震荡混匀后超声提取30min，5000rpm离心5min，收集上清；离心后的沉淀，重复此步骤，合并上清液；如有浑浊，过滤；将收集的上清液用旋转蒸发仪进行浓缩，以去除甲醇。
(3)活化SPE小柱，并将蒸发浓缩得到的液体全部通过活化的SPE小柱；然后用20mL甲醇冲洗柱子，收集冲洗液。
活化操作：将SPE小柱固定于固相萃取装置后，依次用5mL甲醇、5mL蒸馏水活化柱子。
(4)将收集的冲洗液用旋转蒸发仪进行浓缩，得到黄酮类物质。对比例1-5
采用与实施例1相同的提取方法，区别在于步骤(2)中提取液组成及添加量不同。
实施例1及对比例1-5中加入的提取液如表2。
表2所加不同比例提取液比例及体积(mL)
检测结果：
用注射器吸出上述实施例1及对比例1-5所得黄酮类物质浓缩物，过0.22μm滤膜于HPLC上样瓶中，进行高效液相色谱测定各黄酮类物质的浓度；其中图1为混合标准液的高效液相色谱谱图。图2为土壤样品的高效液相色谱谱图。根据测定结果计算各黄酮类物质的回收率。
表3回收率(％)
紫云英苷 山奈酚 槲皮素 杨梅素
实施例1 63.4～72.6 70.4～78.2 55.1～70.3 68.4～75.6
对比例1 46.2～50.3 46.8～48.1 39.5～56.9 47.1～55.8
对比例2 20.5～26.8 16.8～21.3 19.9～26.4 22.6～25.7
对比例3 18.2～20.5 17.3～22.8 19.2～26.5 28.5～34.8
对比例4 32.8～46.3 45.3～55.6 38.6～51.0 42.3～45.5
对比例5 8.8～10.3 5.3～7.6 8.4～11.0 2.9～5.3
由表3可以看出，实施例1(EDTA-2Na与甲醇的比例为0.02g/ml)的回收率达到：63.4％～72.6％(紫云英苷)、70.4％～78.2％(山奈酚)、55.1％～70.3％(槲皮素)、68.4％～75.6％(杨梅素)。
而最接近CN105388051A最佳条件的对比例4(EDTA-2Na与甲醇的比例为0.007g/ml)的回收率明显低于实施例1。
同时，上述测试结果也证明了土壤中存在的部分有机物和无机物对本发明所述的提取方法无实质影响，进而说明该方法可有效用于土壤中黄酮类物质的定量分析与比较。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种从土壤中提取分离黄酮类物质的方法，其特征在于，包括：
(1)将土壤样品干燥，过筛；
(2)加入提取液，混匀后超声提取，离心，收集上清液；对离心后的沉淀重复操作此步骤；合并上清液；蒸发除去甲醇；
(3)纯化，即得；
所述提取液由EDTA-2Na与甲醇组成；其中EDTA-2Na与土壤样品的质量比为(0.028-0.32):1。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述EDTA-2Na与土壤样品的质量比为0.03:1。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述土壤样品与甲醇的质量体积比为1g：(1.5-2)ml。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述土壤样品与甲醇的质量体积比为1g:1.5ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取液中，EDTA-2Na与土壤样品的质量比为0.03:1；甲醇与土壤样品为1.5ml:1g。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述超声条件为：超声功率为700W，超声时间25-35min。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111419892A (zh) * 2020-03-31 2020-07-17 右江民族医学院 鸡骨草总黄酮的提取方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009140694A2 (en) * 2008-05-16 2009-11-19 Verutek Technologies, Inc. Green synthesis of nanometals using plant extracts and use thereof
CN105168649A (zh) * 2015-09-06 2015-12-23 中国海洋大学 一种从大叶藻中提取黄酮类化合物的方法
CN105388051A (zh) * 2015-10-27 2016-03-09 中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所 一种从土壤中提取分离紫云英苷的方法
CN106568850A (zh) * 2015-10-10 2017-04-19 勐海茶业有限责任公司 一种利用hplc测定茶叶中黄酮类成分的方法
CN106706788A (zh) * 2016-12-26 2017-05-24 合肥智汇医药科技有限公司 一种柿叶提取物中黄酮类有效成分的定性与定量分析方法
CN108279278A (zh) * 2017-12-29 2018-07-13 广州白云山和记黄埔中药有限公司 一种分离黄酮类成分的方法及其应用
CN109521132A (zh) * 2018-11-16 2019-03-26 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种僵蚕hplc指纹图谱的建立方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009140694A2 (en) * 2008-05-16 2009-11-19 Verutek Technologies, Inc. Green synthesis of nanometals using plant extracts and use thereof
CN105168649A (zh) * 2015-09-06 2015-12-23 中国海洋大学 一种从大叶藻中提取黄酮类化合物的方法
CN106568850A (zh) * 2015-10-10 2017-04-19 勐海茶业有限责任公司 一种利用hplc测定茶叶中黄酮类成分的方法
CN105388051A (zh) * 2015-10-27 2016-03-09 中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所 一种从土壤中提取分离紫云英苷的方法
CN106706788A (zh) * 2016-12-26 2017-05-24 合肥智汇医药科技有限公司 一种柿叶提取物中黄酮类有效成分的定性与定量分析方法
CN108279278A (zh) * 2017-12-29 2018-07-13 广州白云山和记黄埔中药有限公司 一种分离黄酮类成分的方法及其应用
CN109521132A (zh) * 2018-11-16 2019-03-26 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种僵蚕hplc指纹图谱的建立方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张瑞海: "黄顶菊次生代谢产物紫云英苷在土壤中的环境行为", 《中国博士学位论文全文数据库农业科技辑》 *
张瑞海等: "紫云英苷在黄顶菊适生土壤中的迁移及降解", 《生态环境学报》 *
贾思怀: "《工业锅炉水处理实用技术》", 30 April 2008, 金盾出版社 *
邢东旭等: "HPLC指纹图谱法评价市售僵蚕的品质", 《蚕业科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111419892A (zh) * 2020-03-31 2020-07-17 右江民族医学院 鸡骨草总黄酮的提取方法

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