CN111417640B - 化合物及其在干细胞和/或祖细胞扩增中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I的化合物和含有所述化合物的药物组合物。另外，本发明涉及扩增干细胞和/或祖细胞的方法以及治疗造血障碍/恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病的方法。

Description

化合物及其在干细胞和/或祖细胞扩增中的应用
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年11月3日递交的美国临时申请62/581,149的权益，其内容通过引用整体并入本文。
技术领域
本发明涉及本文描述的化合物和含有所述化合物的药物组合物。另外，本发明涉及扩增干细胞和/或祖细胞(HPC)的方法以及治疗造血障碍/恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病的方法。
背景技术
造血干细胞(HSC)的三种来源是骨髓、动员的外周血和脐带血(UCB)。HSC用于移植情况(自体或异体的)，其是在患有恶性血液病、骨髓衰竭状况、各种周身性先天性疾病(例如镰状细胞贫血和地中海贫血)和自体免疫疾病(例如狼疮)患者中实现治愈的最有效治疗策略之一。然而，由于无法在体外充分扩增这些细胞以使该程序安全和成功，全世界成千上万的人无法获得这种挽救生命或改善生活的治疗机会。更特别地，每三位患者中就有一位将放弃移植机会，因为找不到人类白细胞抗原(HLA)相同的供体。另一部分患者将无法进行移植，仅仅是因为移植物(即脐带血或自体)中可用的HSC太少而无法成功进行移植。骨髓移植的安全性和有效性直接取决于可用于移植的HSC和HPC的数量。可以输注的越多，血液功能恢复的就越快，并且由于缺乏粒细胞而导致感染或由于缺乏血小板而导致出血的风险期也越短。在优选非清髓性调理的情况下，例如在针对主要遗传性血液疾病(全球发病率和死亡率的主要遗传原因)的基因治疗的情况下，提供足够的HSC的挑战进一步升级。
在成人中，HSC主要位于骨髓(BM)中，必须被动员才能进入循环，然后再通过单采术收集，用于自体或异体造血干细胞移植(HSCT)。收集足够数量的CD34+细胞((HSC)的替代物的标记)至关重要，因为CD34+细胞的剂量影响造血恢复的成功率和速度。一些报道表明，较高的输注CD34+细胞剂量可独立预测生存率的提高。
以BM或动员的外周血干细胞(mPBSC)进行的异体HSCT是另一种移植备选。但是，约有三分之一到四分之一的适合这类移植的患者找不到合适的供体。对于那些接受移植的人，由于移植物抗宿主疾病、复发或移植物排斥而导致移植相关的死亡率很高；并且存在长期免疫缺陷的风险。作为另外的选择，脐带血已被证明是异体HSCT的有效选择。但是，单个脐带血(CB)单位通常无法为成年患者提供足够的HSC，使得无法快速有效地恢复。
因此，需要增加干细胞和/或祖细胞扩增的新策略。
发明内容
一个方面涉及式I的化合物或其药学上可接受的盐，
其中R1、R2、R3、V1、V2、X和W如本文所定义。
另一方面涉及一种药物组合物，其包含本文所定义的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
另一方面涉及一种药物组合物，其包含通过本文所定义的化合物或方法扩增的干细胞和/或祖细胞。
在一个方面，提供了本文所定义的干细胞和/或祖细胞的扩增方法。
另一个方面涉及通过本文所定义的方法能够获得的/获得的细胞群。
在一个方面，提供了本文所定义的造血障碍/恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病的治疗方法。
另一个方面涉及一种治疗造血障碍/恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病的方法，其包括对有需要的受试者施用本文所定义的化合物或其药学上可接受的盐。
另一个方面涉及一种治疗接受器官移植，特别是实体器官移植的患者的方法。
附图说明
现参照附图，其中：
图1A描绘了不同培养条件下的全部细胞和CD34+细胞与新鲜样品相比的倍率扩增，以及不同培养条件下的CD34+细胞的比例；
图1B描绘了不同培养条件下的CD34+CD45RA-、CD34+CD45RA+和CD34+CD201+细胞与新鲜样品相比的倍率扩增；
图1C描绘了不同培养条件下的CD34+CD45RA-、CD34+CD45RA+和CD34+CD201+细胞的比例；
图1D描绘了不同培养条件下的不同细胞类型的细胞组成(按百分比计)；
图2A示出了在不同培养条件下的来自新鲜样品或体外扩增的样品的人脐带血细胞的移植(以骨髓抽吸物中的人CD45+细胞的百分比计)；
图2B示出了在小鼠中移植的人脐带血细胞中骨髓和淋巴细胞的比例。
具体实施方式
在一个实施方式中，提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐
其中
X是O或S；
V1是N或CH；
V2是N或CH；
W是N或C；
其中所述V1、V2和W中的不超过一个是N；
R1是卤素、烷基、氟烷基、环烷基、炔基、烯基、氰基或COORa，其中Ra是烷基；
R2是H、烷基，并且当W是N时，R2不存在；
或者R1和R2与芳环原子附接在一起以形成碳环；
R3是可选地取代的苯基、可选地取代的5或6元杂芳基或可选地取代的稠合双环杂芳基；
在一个实施方式中，所述化合物是式Ia的化合物
其中R1、R2和R3如本文所定义。
在一个实施方式中，所述化合物是式Ib的化合物
其中R1、R2和R3如本文所定义。
在一个实施方式中，所述化合物是式Ic的化合物
其中R1和R3如本文所定义。
在一个实施方式中，所述化合物是式Id的化合物
其中R1、R2和R3如本文所定义。
在一个实施方式中，所述化合物是式Ie的化合物
其中R1、R2和R3如本文所定义。
在一个实施方式中，R1是卤素、C1-6烷基、C1-6氟烷基、C3-6环烷基、C2-3炔基、C2-3烯基、氰基或COORa，其中Ra是C1-6烷基。
在一个实施方式中，R1是卤素、C1-3烷基、C1-3氟烷基、C3-6环烷基、C2-3炔基、C2-3烯基、氰基或COORa，其中Ra是C1-3烷基。
在一个实施方式中，R1是F、Cl、Br、Me、Et、iPr、n-Pr、CF3、环丙基、CCH、CH＝CMe、氰基或COOEt。
在一个实施方式中，R1是F、Me、Et、iPr、n-Pr、CF3、环丙基、CCH、CH＝CMe、氰基或COOEt。
在一个实施方式中，R1是Me、CF3或与R2连接以形成(CH2)3-5环。
在一个实施方式中，R1是Me或CF3，优选CF3。
在一个实施方式中，R2是H或C1-6烷基。
在一个实施方式中，R2是H或C1-3烷基。
在一个实施方式中，R2是H或Me，优选H。
在一个实施方式中，R2是H、甲基、乙基、异丙基或正丙基；或优选H或甲基。
在一个实施方式中，R1和R2附接在一起以形成(CH2)3-5。
在一个实施方式中，R3是可选地单取代或双取代的苯基、可选地单取代的5或6元杂芳基或可选地单取代的稠合双环杂芳基。
在一个实施方式中，R3是可选地在苯基的3、4和5位的任意位置单取代或者双取代的苯基、可选地单取代的5或6元杂芳基或可选地单取代的9或10元稠合双环杂芳基。
在一个实施方式中，R3是未取代的苯基、在4位单取代的苯基、在3位单取代的苯基、在3和4位双取代的苯基或在3和5位双取代的苯基。
在一个实施方式中，R3是选自吡啶基、嘧啶基、噻唑基、苯并噻唑基、异喹啉基、喹啉基、噻吩基和吲唑基的未取代或单取代的杂芳基。
在一个实施方式中，R3是选自2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-噻唑基、6-苯并噻唑基、5-异喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、6-喹啉基、3-噻吩基和5-吲唑基的未取代或单取代的杂芳基。
在一个实施方式中，R3是选自2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和3-噻吩基的未取代或单取代的杂芳基。
在一个实施方式中，当R3是取代的苯基时，所述取代基是卤素、可选地取代的C1-3烷基、-O-C1-3氟烷基、-O-C1-3烷基、-O-苄基-、-O-苯基、-S-C1-3烷基、磺酰胺、C1-3氟烷基、-COO-C1-3烷基、甲酰胺、氨基、苯基、5或6元杂芳基，或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)3-5O-，其中所述可选地取代的C1-3烷基的取代基是OH、OMe、CN或COOEt。
在一个实施方式中，当R3是取代的苯基时，所述取代基是卤素、可选地取代的C1-3烷基、-O-C1-3氟烷基、-O-C1-3烷基、-O-苄基、-O-苯基、-S-C1-3烷基、-SO2NH(C1-3烷基)-SO2N(C1-3烷基)2、-SO2NH2、C1-3氟烷基、-COO-C1-3烷基、-CONH(C1-3烷基)、-CON(C1-3烷基)2、-CONH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2、-NH2、苯基、或5或6元杂芳基；或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)O-或-O(CH2CH2)O-；其中所述可选地取代的C1-3烷基的取代基是OH、OMe、CN或COOEt。
在一个实施方式中，当R3是取代的苯基时，所述取代基是F、Cl、Br、Me、Et、CH2OH、CH2OMe、CH2CH2OH、CH2CH2OMe、CH2CN、CH2COOEt、OCF3、OCHF2、-OMe、-O-苄基、-O-苯基、-SMe、-SO2NH2、CF3、COOMe、–CONHMe、-CONH2、-NH2、3-吡啶基、4-吡啶基，或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)O-或-O(CH2CH2)O-。
在一个实施方式中，当R3是取代的苯基时，所述取代基是卤素、-S-C1-3烷基、-O-C1-3氟烷基、-O-C1-3烷基，或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)3-5O-。
在一个实施方式中，R3是在4位取代有H、F、Cl、Br、Me、Et、OMe、OEt、SMe或CF3的苯基。
在一个实施方式中，R3是在3位取代有H、F、Cl、Br、Me或OMe的苯基。
在一个实施方式中，当R3是在3位和4位取代的苯基时，3位和4位的取代基一起形成-CH2O-或-OCH2CH2O-。
在一个实施方式中，当R3是取代的杂芳基时，所述取代基是卤素、可选地取代的C1-3烷基、-O-C1-3氟烷基、-O-C1-3烷基、-O-苄基、-O-苯基、-S-C1-3烷基、-SO2NH(C1-3烷基)-SO2N(C1-3烷基)2、-SO2NH2、C1-3氟烷基、-COO-C1-3烷基、-CONH(C1-3烷基)、-CON(C1-3烷基)2、-CONH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2、-NH2、苯基、或5或6元杂芳基；或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)O-或-O(CH2CH2)O-；其中所述可选地取代的C1-3烷基的取代基是OH、OMe、CN或COOEt。
在一个实施方式中，当R3是取代的杂芳基时，所述取代基是F、Cl、Br、Me、Et、CH2OH、CH2OMe、CH2CH2OH、CH2CH2OMe、CH2CN、CH2COOEt、OCF3、OCHF2、-OMe、-O-苄基、-O-苯基、-SMe、-SO2NH2、CF3、COOMe、–CONHMe、-CONH2、-NH2、3-吡啶基、4-吡啶基，或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)O-或-O(CH2CH2)O-。
在一个实施方式中，当R3是取代的杂芳基如2-、3-、4-吡啶基或噻吩基时，所述取代基是卤素、C1-3烷基或-O-C1-3烷基，优选地，R3是4-吡啶基或3-噻吩基。
在一个实施方式中，在式I中或式Ia至Ie的任一项中，优选在式Ia和Ie中，R1是C1-6烷基、C1-6氟烷基，R2是H，或者R1与R2连接以形成(CH2)3-5，R3是未取代的苯基、在4位单取代的苯基、在3位单取代的苯基、在3和4位双取代的苯基或在3和5位双取代的苯基，或者R3是选自吡啶基、嘧啶基、噻唑基、苯并噻唑基、异喹啉基、喹啉基、噻吩基和吲唑基的未取代或单取代的杂芳基。
在一个实施方式中，在式I中或式Ia至Ie的任一项中，优选在式Ia和Ie中，R1是卤素、C1-3烷基、C1-3氟烷基、C3环烷基、C2-3炔基、C2-3烯基、氰基或COORa，其中Ra是C1-3烷基，优选地，R1是Me、CF3或与R2连接以形成(CH2)3-5环；R2是H，R3是未取代的苯基、在4位单取代的苯基、在3位单取代的苯基、在3和4位双取代的苯基或在3和5位双取代的苯基，其中所述苯基的取代基是F、Cl、Br、Me、Et、CH2OH、CH2OMe、CH2CH2OH、CH2CH2OMe、CH2CN、CH2COOEt、OCF3、OCHF2、-OMe、-O-苄基、-O-苯基、-SMe、-SO2NH2、CF3、COOMe、–CONHMe、-CONH2、-NH2、3-吡啶基、4-吡啶基，或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)O-或-O(CH2CH2)O-，或者R3是选自2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和3-噻吩基的未取代或单取代的杂芳基，其中所述取代基是卤素、C1-3烷基或-O-C1-3烷基。
在一个实施方式中，在式I中或式Ia至Ie的任一项中，优选在式Ia中，R1是C1-3烷基或C1-3氟烷基，优选地，R1是Me；R2是H，R3是在4位单取代的苯基或在3和4位双取代的苯基，其中所述苯基的取代基是F、Cl、Br、Me、Et、CH2OH、CH2OMe、CH2CH2OH、CH2CH2OMe、CH2CN、CH2COOEt、OCF3、OCHF2、-OMe、-O-苄基、-O-苯基、-SMe、-SO2NH2、CF3、COOMe、–CONHMe、-CONH2、-NH2、3-吡啶基、4-吡啶基，或者R3的两个取代基一起形成-O(CH2)O-或-O(CH2CH2)O-，优选地，所述苯基的取代基是F、-Cl、-SMe、-OMe、CF3，或者两个取代基形成-O(CH2CH2)O-，或者R3是选自2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和3-噻吩基的未取代或单取代的杂芳基，优选地，所述杂芳基是未取代的3-噻吩基。
在一个实施方式中，式I的化合物是表1或2的化合物。
在一个实施方式中，式I的化合物是
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方式中，式I的化合物是
或其药学上可接受的盐。
本文所定义的方法使用了发明人所提出的全部范围的化合物。排除在要求保护的化合物的范围之外的化合物是由以下条款定义或以下列举的那些。
通用条款1：当V1是N，X是S，R1和R2一起形成(CH2)3-5且R3是苯基时，则所述苯基不同于i)未取代的苯基或ii)在4位被F、Cl或OMe取代的苯基，例如在所述化合物具有式I或Ia时。
通用条款1a：例如在所述化合物具有式I或Ia时，V1是N，X是S，R1和R2一起形成(CH2)3-5，R3是可选地取代的5或6元杂芳基或可选地取代的稠合双环杂芳基、在3位单取代的苯基、在3和4位双取代的苯基、在3和5位双取代的苯基、在4位被Br单取代的苯基、可选地取代的C1-3烷基、-O-C1-3氟烷基、-O-C2-3烷基、-O-苄基、-O-苯基、-S-C1-3烷基、-SO2NH(C1-3烷基)-SO2N(C1-3烷基)2、-SO2NH2、C1-3氟烷基、-COO-C1-3烷基、-CONH(C1-3烷基)、-CON(C1-3烷基)2、-CONH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或-NH2。
通用条款2：当V1是N，X是S，R3是未取代的苯基且R2是H时，则R1不同于Cl或Br，例如在所述化合物具有式I或Ia时。
通用条款3：当V1和V2是CH，W是C，X是S，R2是H，R1是CH3且R3是苯基时，则所述苯基不同于i)未取代的苯基或ii)在4位被F、Cl、Br或OMe取代的苯基，例如在所述化合物具有式I或Ie时。
作为另外选择，排除在要求保护的化合物的范围之外的化合物是：
当存在硫原子(例如核环原子)时，硫原子可以处于不同的氧化水平，即S、SO或SO2。所有此类氧化水平都在本公开的范围内。当存在氮原子时，氮原子可以处于不同的氧化水平，即N或NO。所有此类氧化水平都在本公开的范围内。
除非另有定义，否则本文所用的术语“烷基”应理解为是指饱和的单价未支化或支化的烃链。烷基的实例包括但不限于C1-10烷基，条件是支化的烷基包括至少3各碳原子，例如C3-10。直链烷基可具有1至6个碳原子，优选1至3个碳原子；而支化的烷基包括C3-6。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。
术语“烯基”是指包括其中一个或多个单键被双键取代的烷基残基。
术语“炔基”是指包括其中一个或多个单键被三键取代的烷基残基。
术语“氟烷基”意味着包括上述所有烷基的一个或多个氢原子被氟原子代替的烷基：直链或支化的氟烷基和直链或支化的低级氟烷基，例如三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、二氯甲基、氯甲基、三氟乙基、二氟乙基、氟乙基。
术语“环烷基”表示具有3至10个碳原子的可选取代的环烷基部分。“环烷基”基团的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
R1和R2的定义中的术语“碳环”优选指与附接的芳族环原子形成环的烷基链，甚至更优选地，碳环指与附接的芳族环原子形成环的链(CH2)3-5。
术语“杂芳基”表示5至11元芳族环状部分，其中所述环状部分包括选自氧(O)、硫(S)或氮(N)的至少一个杂原子。杂芳基可以是单环或多环。杂芳基可以是5至6元单环或5元单环或6元单环。杂芳基可以是稠合的6,6或5,6双环。当杂芳基是多环时，所述环包含至少一个含杂原子的环，另一个环可以是环烷基、芳基或杂环，并且附接的点可以在任何可利用的原子上。该术语包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基和吲唑基。
还提供了本公开的化合物的药学上可接受的盐。术语化合物的药学上可接受的盐是指它们可以由药学上可接受的无机和有机酸和碱获得。
例如，常规无毒盐包括得自诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸和高氯酸等无机酸的盐，以及由诸如甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸(pamoic acid)、马来酸、羟基马来酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、萘2磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸和三氟乙酸等有机酸制备的盐。
其他盐虽然本身不是药学上可接受的，但可用作获得本公开的化合物及其药学上可接受的酸加成盐的中间体。获自适当碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐或铵盐。
本公开的化合物的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的本公开的化合物合成。一般而言，通过离子交换层析或通过使游离碱与化学计量的量或与过量的所需成盐的无机或有机酸在合适的溶剂或溶剂的各种组合中反应来制备碱性化合物的盐。类似地，酸性化合物的盐通过与适当的无机或有机碱反应形成。
在一个实施方式中，提供了包含本文定义的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的药物组合物。
在一个实施方式中，提供了包含通过本文定义的化合物或方法扩增的干细胞和/或祖细胞的药物组合物。
药物组合物还可包括缓冲溶液或额外的药物活性组分，例如抗生素。
在一个实施方式中，本文定义的药物组合物用于静脉内施用。
在一个实施方式中，提供了扩增干细胞和/或祖细胞(例如造血干细胞和/或祖细胞)的方法，所述方法包括将起始细胞群与本文定义的至少一种化合物或其药学上可接受的盐接触。
在本文方法的一个实施方式中，所述方法包括将干细胞和/或祖细胞(例如造血干细胞和/或祖细胞)与扩增干细胞和/或祖细胞的化合物以及本文定义的至少一种化合物或其药学上可接受的盐接触。
在本文方法的一个实施方式中，所述方法包括以下步骤：将干细胞和/或祖细胞(例如造血干细胞和/或祖细胞)与用于扩增干细胞和/或祖细胞的第一化合物接触，使细胞在第一时间段内扩增，添加本文定义的至少一种化合物或其药学上可接受的盐，并使细胞再在第二时间段内扩增。
在本文方法的一个实施方式中，所述方法包括以下步骤：将干细胞和/或祖细胞(例如造血干细胞和/或祖细胞)与用于扩增干细胞和/或祖细胞的第一化合物接触，使细胞在第一时间段内扩增，基本上去除所述第一化合物(例如通过用适当的洗涤介质洗涤扩增的细胞)，使由所述第一时间段扩增的所述细胞与本文定义的至少一种化合物或其药学上可接受的盐接触，使细胞再在第二时间段内扩增。
除本发明的化合物(式I或Ia-Ie)以外的用于扩增干细胞的(第一)化合物可以是下式的化合物
例如WO 2013/110198(PCT/CA2013/050052)中描述的化合物，其内容通过引用以其整体并入本文。具体而言，所述化合物可以是下述中的一种：
本文定义的扩增干细胞和/或祖细胞的方法还可包括至少一种细胞扩增剂。
在本文定义的扩增造血干细胞和/或祖细胞的方法的一个实施方式中，所述细胞扩增剂是针对血小板生成素(TPO)受体的激动剂抗体(例如专利公开WO 2007/145227中详述的VB22B sc(Fv)2等)；细胞因子，例如SCF、IL-6、Flt-3配体、TPO或TPO模拟物(例如WO/2007/022269；WO/2007/009120；WO/2004/054515；WO/2003/103686；WO/2002/085343；WO/2002/049413；WO/2001/089457；WO/2001/039773；WO/2001/034585；WO/2001/021180；WO/2001/021180；WO/2001/017349；WO/2000/066112；WO/2000/035446；WO/2000/028987；WO/2008/028645等中所述，其通过引用并入本文)；粒细胞集落刺激因子(G-CSF)；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；前列腺素或前列腺素受体激动剂(例如，专利公开WO/2008/073748中详述的前列腺素E2受体-1(EP-I)激动剂、前列腺素E2受体-2(EP-2)激动剂、前列腺素E2受体-3(EP-3)激动剂和前列腺素E2受体-4(EP-4)激动剂，其通过引用并入本文)；四亚乙基五胺(TEPA)；Notch配体(δ-1)；和/或WNT激动剂。这些公开及其内容通过引用并入本文。
优选地，细胞扩增剂选自白介素-3(IL-3)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、血小板生成素(TPO)、FMS样酪氨酸激酶3配体(FLT3-L)、干细胞因子(SCF)、白介素-6(IL-6)及其组合。
细胞扩增剂可以是SCF、FLT3-L、TPO、IL-6或其组合。在本文定义的扩增干细胞(例如造血干细胞)和/或祖细胞的方法的一个实施方式中，所述细胞扩增剂是StemRegenin 1(SR1)。
在一个实施方式中，提供了调节(拮抗)芳烃受体活性的方法，其包括将干细胞和祖细胞与本文定义的化合物接触。
在一个实施方式中，提供了增加干细胞和祖细胞数量的方法；所述方法包括将细胞与能够拮抗芳烃受体和/或芳烃受体通路的下游效应子的活性和/或表达的化合物接触，其中所述化合物是本文定义的化合物。
在一个实施方式中，提供了本文定义的扩增干细胞(例如造血干细胞)和/或祖细胞的方法，其中造血干细胞和/或祖细胞是人造血干细胞和祖细胞。
在一个实施方式中，提供了本文定义的扩增CD34+干细胞和/或祖细胞的方法，其中CD34+干细胞和/或祖细胞是人造血干细胞和祖细胞。
在一个实施方式中，起始细胞群包括由鼓动的外周血(mPB)、骨髓(BM)或脐带血(UCB)收集的CD34+细胞。在一个实施方式中，起始细胞群是CD34+干细胞和/或祖细胞。
在一个实施方式中，起始细胞群包括由脐带血(UCB)收集的CD34+细胞。
在一个实施方式中，起始细胞群基本上由例如从一个或两个脐带血单位纯化的CD34+细胞组成。
然后可以洗涤扩增的细胞以去除本发明的化合物或组合物和/或细胞培养物中的任何其他成分，并重悬于合适的细胞悬浮液中以供短期使用或长期储存于介质(例如适于低温储藏的介质)中。
施用扩增细胞或包含所述扩增细胞的组合物的优选方法是静脉输注。输注的细胞数量将考虑到诸如性别、年龄、体重、疾病或失调的类型、失调的阶段、细胞群中所需细胞的百分比以及产生治疗益处所需的细胞数量等因素。在一个具体实施方式中，组合物通过静脉输注施用，对于脐带血为至少≥0.3x 105个CD34+/kg或>2x 106个CD34+，对于骨髓或鼓动的外周血细胞为2.5x 105个CD34+/kg以上。
可以将扩增的干细胞(例如造血干细胞)和/或造血祖细胞滴注(例如在治疗白血病的情况下)到用抗癌药、全身照射或免疫抑制药预处理的患者中，以消灭癌细胞或促进供体细胞移植。负责人适当选择要治疗的疾病、预处理和细胞移植方法。这样移植的造血干细胞和/或造血祖细胞在移植物中的植入、造血功能的恢复、移植的副作用的存在以及移植的治疗效果可以通过移植疗法中使用的常规测定来判断。
在本文定义的扩增干细胞和/或祖细胞的方法的一个实施方式中，所述方法是体内、体外或离体的，特别地，该方法是离体或体外的。
在一个实施方式中，提供了通过本文定义的方法扩增的细胞群。
在一个实施方式中，提供了治疗造血障碍/恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病的方法，所述方法包括对需要的受试者施用本文定义的扩增的干细胞(例如造血干细胞)，或者通过本文定义的方法扩增造血干细胞并对需要的受试者施用所述扩增的干细胞。
还提供了具有扩增的HSC的细胞群，其通过上述扩增方法能够获得或获得。在一个具体实施方式中，将该细胞群重悬于适于对哺乳动物宿主使用药学上可接受的介质中，从而提供治疗组合物。
还提供了治疗造血障碍/恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病的方法，其包括对有需要的受试者使用本文定义的化合物或其药学上可接受的盐。
在本文定义的方法的一个实施方式中，造血障碍/恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病包括骨髓衰竭、先天性疾病(例如镰状细胞性贫血和地中海贫血)、狼疮、急性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生异常、骨髓增生异常综合症、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、再生障碍性贫血、纯红细胞发育不全、血红蛋白尿、范科尼贫血、地中海贫血、镰状细胞性贫血、维斯科特-奥尔德里奇综合症、先天性代谢缺陷(例如高雪氏病)。
在一个实施方式中，提供了治疗接受移植器官(例如实体器官移植)的患者的方法，其包括对所述患者施用本文定义的扩增的干细胞(例如造血干细胞)，或者通过本文定义的方法扩增造血干细胞并对所述患者施用所述扩增的造血干细胞。在另一个实施方式中，扩增的细胞是来自器官供体的骨髓细胞。
对于治疗接受移植器官(例如实体器官移植)的患者的方法，可参见Basak GW等,Am J Transplant 2015PMID:25648262；Elahimehr R等,Transplant Rev(Orlando)2016,PMID:27553809；和Marino Granados JM等,Curr Opin Organ Transplant 2015,PMC4391059.Good review of preclinical and clinical studies。
本文所称的受试者是例如骨髓供体或患有血细胞水平降低或受限的个体或有其风险的个体。可选地，受试者是在骨髓采集之前的骨髓供体或在骨髓采集之后的骨髓供体。受试者可选地是骨髓移植的接受者。本文所述的方法特别适用于骨髓储备有限的受试者，例如老年受试者或先前暴露于免疫耗竭治疗或清髓治疗如化学疗法(例如用于治疗白血病或淋巴瘤)的受试者。可选地，与对照血细胞水平相比，受试者的血细胞水平降低或处于发展血细胞水平降低的风险中。如本文所用，术语对照血细胞水平是指在改变受试者血细胞水平的事件之前或基本上不存在该事件的受试者血细胞的平均水平。例如，改变受试者血细胞水平的事件包括贫血、创伤、化学疗法、骨髓移植和放射疗法。例如，受试者由于例如创伤而有贫血或失血。
如本文所用，术语“造血干细胞”或“HSC”旨在表示细胞同时具有多能性使得它们能够分化为功能成熟的细胞，例如粒细胞(例如早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(例如巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)和单核细胞(例如单核细胞、巨噬细胞)，以及保持多能性的同时再生的能力(自我更新)。
HSC是起始细胞群的一部分。这些细胞可选地从含有造血来源细胞的身体或身体器官获得。这些来源包括未分离的骨髓、脐带、外周血、肝脏、胸腺、淋巴和脾脏。可以以本领域技术人员已知的方式富集具有造血干细胞特征的细胞的所有上述粗制或未分级的血液制品。
如本文所用，术语“起始细胞群”是用于识别如本领域已知的包含从上述各种来源之一采集的干细胞和/或祖细胞(例如造血干细胞(HSC)和/或造血祖细胞)的细胞群。
首先可以对起始细胞群进行富集或纯化步骤(包括基于特定细胞标记物对细胞进行阴性和/或阳性选择)以提供起始细胞群。基于特定细胞标记物分离所述起始细胞群的方法可使用荧光激活细胞分选(FACS)技术(也称为流式细胞仪)或固体或不溶性基底(与特定细胞表面标记物相互作用的结合抗体或配体与之结合)。例如，可以使细胞与含有抗体的固体基底(例如珠粒、烧瓶、磁性颗粒的柱)接触，并除去任何未结合的细胞。当使用包含磁性或顺磁性珠粒的固体基质时，可以容易地通过磁力分离器分离结合至珠粒的细胞。
起始细胞群可以富集CD34+细胞，意味着可以根据细胞表面标记物CD34+的存在来选择细胞群。可以使用例如流式细胞仪和荧光标记的抗CD34抗体检测和计数CD34+细胞。此外，起始细胞群可直接用于扩增，或冷冻并储存以备后用。在CD34+细胞中富集血细胞群的方法包括Miltenyi Biotec(CD34+直接分离试剂盒,MiltenyiBiotec,Bergisch,Gladbach,Germany)或Baxter(Isolex 3000)商售的试剂盒。起始细胞群可优选地含有至少50％的CD34+细胞，在一些实施方式中超过90％的CD34+细胞。
可以将本文使用的化合物和另外的细胞扩增剂添加到固定在用于培养的基底或载体上的扩增培养基中。
干细胞的扩增可以在就组成而言的天然培养基、半合成培养基或合成培养基中进行，并且就形状而言，其可以是固体培养基、半固体培养基或液体培养基，以及用于造血干细胞和/或造血祖细胞培养的任何营养培养基(其补充有上述细胞扩增因子的混合物)。这种培养基通常包含钠、钾、钙、镁、磷、氯、氨基酸、维生素、细胞因子、激素、抗生素、血清、脂肪酸或糖类等。在培养中，视情况需要，可以单独或组合加入其他化学成分或生物成分。要引入培养基中的此种成分可以是胎牛血清、人血清、马血清、胰岛素、转铁蛋白、乳铁蛋白、胆固醇、乙醇胺、亚硒酸钠、单硫代甘油、2-巯基乙醇、牛血清白蛋白、丙酮酸钠、聚乙二醇、各种维生素、各种氨基酸、琼脂、琼脂糖、胶原蛋白、甲基纤维素、各种细胞因子或各种生长因子等。适用于扩增HSC的方法的这种基础培养基的实例包括但不限于StemSpanTM无血清扩增培养基(SFEM)(StemCell Technologies,Vancouver,Canada)、StemSpanTM H3000-已知成分培养基(StemCell Technologies,Vancouver,Canada)、CellGroTM,SCGM(CellGenix,Freiburg Germany),StemProTM-34SFM(Invitrogen)、Dulbecco改性Eagles培养基(DMEM)、Ham营养混合物H12混合物F12、McCoy's 5A培养基、Eagles最低必需培养基(EMEM)、αMEM培养基(α改性Eagles最低必需培养基)、RPMI1640培养基、Isocove改性Dulbecco培养基(IMDM)、StemPro34(Invitrogen)、X-VIVO 10(Cambrex)、X-VIVO 15(Cambrex)和StemlineII(Sigma-Aldrich)。
可以在通常用于动物细胞培养的培养容器中培养干细胞和/或祖细胞，例如陪替氏培养皿、烧瓶、塑料袋、TeflonTM袋，可选地在用细胞外基质或细胞粘附分子初步涂覆之后。用于涂覆的材料可以是胶原I至XIX、纤连蛋白、玻连蛋白、层粘连蛋白1至12、氮、肌腱蛋白、血小板反应蛋白、血管假性血友病因子、骨桥蛋白、纤维蛋白原、各种弹性蛋白、各种蛋白聚糖、各种钙粘素、桥粒胶蛋白、桥粒芯蛋白、各种整合素、E-选择素、P-选择素、L-选择素、免疫球蛋白超家族、基质胶、聚D-赖氨酸、聚L-赖氨酸、几丁质、壳聚糖、琼脂糖凝胶、藻酸凝胶、水凝胶或其片段。这样的涂布材料可以是具有人工修饰的氨基酸序列的重组材料。可以使用生物反应器来培养造血干细胞和/或造血祖细胞，所述生物反应器可以机械地控制培养基的组成和pH等并获得高密度培养物(Schwartz R M,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,88:6760,1991；Koller M R,Bone Marrow Transplant,21:653,1998；Koller,M R,Blood,82:378,1993；Astori G,Bone Marrow Transplant,35:1101,2005)。这些出版物及其内容通过引用并入本文。
起始细胞群，特别是富含CD34+的细胞，可以在HSC扩增的条件下生长，例如在2至21天之间和/或直到所示的倍率扩增并获得特征细胞群。在一个具体实施方式中，细胞在HSC扩增的条件下离体生长不超过21天、12天、10天或7天。
药物组合物可包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。许多药学上可接受的载体和/或赋形剂是本领域已知的。本领域技术人员会明白药学上可接受的载体和/或赋形剂必须与该制剂的其他成分相容并且被对其有需要的受试者耐受。各载体和/或赋形剂的比例可以由熟练的从业者根据标准药学实践确定。
为了确保施用的一致性，在本公开的一个实施方式中，药物组合物为离散剂量单位的形式，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。所有方法都包括使活性化合物与液体载体和/或固体载体结合的步骤，然后，必要时将产物成型为所需的制剂。
本公开的化合物和扩增细胞可配制用于肠胃外施用，例如通过注射(例如快速浓注或连续输注)，并且可以以单位剂量形式存在于安瓿瓶、预填装注射器、小体积输注液中，或者在添加/不添加防腐剂的情况下存在于多剂量容器中。以任何常规方式配制组合物以用于本文所述的方法。施用可以通过本领域普通技术人员已知的任何有效途径进行。例如，组合物口服施用、胃肠外(例如静脉内)施用、通过肌内注射施用、通过腹腔内注射施用、经皮施用、体外施用、鼻内施用或局部施用。
提供以下实施例以进一步说明制备和使用本公开化合物的细节。它们无意于以任何方式限制本公开的范围，并且它们不应如此解释。此外，以下实施例中描述的化合物不应被解释为形成被认为是本公开的唯一属，并且化合物或其部分的任何组合本身可以形成属。
实施例：
方案I：本发明的化合物的一般合成，其中X＝S
可通过在诸如乙醇或DMF等溶剂中，在碱的存在下，将化合物II、邻卤代吡啶甲腈(V1或V2或W＝N)或2-卤苄腈(V1、V2、W＝C，R2＝H)与2-巯基乙酰胺衍生物III或IV缩合，制备通式V的化合物。
方案II：本发明的化合物的一般合成，其中X＝O
可通过在诸如乙醇等溶剂中，在碱的存在下，将化合物VI、邻卤代吡啶甲腈(R2＝H,CH3或通过(CH2)3-5连接基与R1连接)与2-羟基乙酰胺衍生物VII缩合，然后在更强的碱的存在下使中间体VIII环化，制备通式IX的化合物。
化学实验
本文所用的缩写或符号包括：AcOH：乙酸；dba：二亚苄基丙酮；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；DIPEA：二异丙胺；DMSO：二甲基亚砜；dppf：1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁；EtOAc：乙酸乙酯；EtOH：乙醇；MeOH：甲醇；Hex：己烷；MS：质谱分析法；NMR：核磁共振；THF：四氢呋喃。
实施例
通过以下非限制性实施例，本发明的其他特征将变得显而易见，所述非限制性实施例通过示例的方式阐释了本发明的原理。如本领域技术人员所公知的，反应在惰性气氛(氮气或氩气)中进行，以保护反应组分不受空气和水分的影响。温度以摄氏度(℃)给出。在以下实施例中使用的反应物可以如本文所述获得，或者如果本文中未描述，则其本身可以商购(在表中描述为A0)，或者可以通过本领域已知的方法由商购材料制备。使用TeledyneIsco Rf仪器在二氧化硅(SiO2)上进行闪速层析。使用电喷雾质谱分析法记录质谱分析。在500MHz Bruker或400MHz Varian仪器上记录NMR。使用Agilent仪器在下列条件之一下进行制备型HPLC：
柱：Phenomenex-Kinetex C18,21x100mm,5μm
流动相：溶剂A：5％MeOH，95％水+0.1％甲酸，溶剂B：95％MeOH，5％水+0.1％甲酸
流量：20mL/min，室温
采集波长＝220和254nm
条件A：
流动相：从0至30分钟：等度30％溶剂B，然后12分钟渐变至100％溶剂B。最后5分钟为100％溶剂B。
条件B:
流动相：从0至2分钟：等度30％溶剂B，然后8分钟渐变至100％溶剂B。最后2分钟为100％溶剂B。
实施例1：制备中间体1.4(一般程序A1)
步骤1
将EtOH(4.16mL,71.3mmol)缓慢加入NaH(60％w/w；2.85g,71.3mmol)的醚(51mL)冰冷悬浮液中。加入额外的EtOH(8.5ml)。接下来滴加1.1(5.0g,59.4mmol)和甲酸乙酯(5.02mL,62.4mmol)的混合物。加入额外的醚(10mL)，将混合物在室温下搅拌过夜。加入醚(50mL)，过滤混合物。将固体用醚(25mL)洗涤，然后在减压下干燥，得到钠盐1.2；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.56(quin,J＝7.90Hz,2H),1.87(t,J＝7.72Hz,2H),2.24(td,J＝7.30,0.95Hz,2H),8.50,8.87(2s,1H)。
步骤2
向1.2(7.30g,54.4mmol)中加入2-氰基乙酰胺(4.58g,54.4mmol)的水(27.5mL)溶液，然后加入哌啶-1-乙酸酯(1.38g,9.53mmol)(通过将哌啶(0.81g；0.94mL)加入AcOH(0.57g；0.54mL)的水(1.4mL)溶液中而制备)的水(1.4mL)溶液。将该混合物在回流下加热2小时，然后加热至室温(过夜)。通过添加AcOH将pH调节至5。将得到的悬浮液在冰浴中冷却并过滤。将固体用水洗涤并在空气中干燥，得到哌啶酮1.3；m/z＝161.1(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.03(quin,J＝7.57Hz,2H),2.64(t,J＝7.41Hz,2H),2.80(t,J＝7.72Hz,2H),8.00(s,1H),12.62(br.s.,1H)。
步骤3
在室温下将哌啶酮1.3(1.0g,6.24mmol)加入PCl5(0.390g,1.87mmol)的POCl3(1.75mL,18.7mmol)悬浮液中。将混合物在回流下加热2.5小时。将冷却的混合物倒入冰水混合物(75mL)中。通过添加固体Na2CO3将混合物碱化(pH 7-8)。将混合物用EtOAc萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-40％EtOAc:Hex)纯化，得到2-氯吡啶1.4；MS:m/z＝179.3/181.1(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.11(quin,J＝7.65Hz,2H),2.93(t,J＝7.57Hz,2H),3.00(t,J＝7.72Hz,2H),8.26(s,1H)。
实施例2：制备中间体2.4(程序A2)
步骤1
在室温下将DMF(10.30μl,0.133mmol)加入酸2.1(0.6g,2.66mmol)、(COCl)2(0.466mL,5.32mmol)的CH2Cl2(10.6mL)悬浮液中。在室温下搅拌混合物6小时，然后在减压下浓缩，得到酰氯2.2。
步骤2
将酰氯2.2(649mg,2.66mmol)的二噁烷(1.5mL)溶液加入冰冷NH4OH溶液(1.60mL,23.9mmol)中。将混合物在0℃搅拌45分钟。用水(50mL)稀释混合物，加入EtOAc(100mL)。分离相。将有机层用水(2x)、盐水(25mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩，得到酰胺2.3；MS:m/z＝225.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.95(br.s.,1H),8.17(br.s.,1H),8.39(dd,J＝2.52,0.63Hz,1H),8.91(dd,J＝2.52,0.63Hz,1H)。
步骤3
将(CF3CO)2O(0.308mL,2.18mmol)迅速加入酰胺2.3(445mg,1.98mmol)的CH2Cl2(14mL)冰冷溶液/悬浮液中。将混合物在0℃搅拌2小时。添加饱和NaHCO3溶液(15mL)和CH2Cl2，在室温下搅拌混合物5小时。分离相。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-20％EtOAc:Hex)纯化，得到氯吡啶2.4；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.09(dd,J＝2.52,0.63Hz,1H),9.16(dd,J＝2.52,0.63Hz,1H)。
实施例3：制备中间体3.5(程序A3)
步骤1
在室温下将(COCl)2(1.28mL,14.6mmol)加入酸3.1(1.00g,7.29mmol)的CH2Cl2(29mL)悬浮液中。在室温下搅拌混合物2小时。将反应混合物在减压下浓缩，得到酰氯3.2。化合物直接用于下一个反应。
步骤2
将冷NH4OH溶液(4.86mL,72.9mmol)快速加入酰氯3.2(1.13g,7.29mmol)在二噁烷(10mL)和THF(10mL)的混合物中的冰冷悬浮液。将混合物在0℃搅拌45分钟。将粗混合物用水稀释并用EtOAc(3x)萃取。将水层用固体NaCl饱和，并用EtOAc(2x)再萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩，得到酰胺3.3；MS:m/z＝137.2(MH+)；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.34(d,J＝0.63Hz,3H),7.53(br.s.,1H),7.98-8.04(m,1H),8.08(br.s.,1H),8.54(dd,J＝2.21,0.63Hz,1H),8.82(d,J＝1.58Hz,1H)。
步骤3
将H2O2(0.90mL,7.90mmol)加入酰胺3.3(538mg,3.95mmol)的AcOH(4.9mL)冷溶液中。将混合物在室温搅拌30分钟，然后在80℃加热4小时。将混合物在冰浴中冷却，加入20％Na2SO3溶液直至用KI-淀粉纸测定没有残留过氧化物。接下来加入15N NH4OH以使混合物碱化。将所得悬浮液加热至室温，过滤，用水洗涤固体。将固体在空气中干燥，得到3.4；MS:m/z＝153.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.29(d,J＝0.63Hz,2H),7.54-7.62(m,1H),7.72(br.s.,1H),8.15(br.s.,1H),8.24-8.29(m,1H),8.43(s,1H)。
步骤4
将吡啶1-氧化物3.4(306mg,2.01mmol)加入冷(约5℃)POCl3(1.87mL,20.11mmol)。将所得悬浮液在60℃加热4小时，在100℃加热2.5小时。将冷却的反应混合物倒入冰水混合物(50mL)中并剧烈搅拌。加入固体Na2CO3以获得约7的pH。将混合物用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)并在减压下浓缩。将残留物通过闪速层析(10-30％EtOAc:Hex)纯化，得到：(1)6-氯异构体3.6和(2)2-氯异构体3.5；3.6:MS:m/z＝153.1(MH+)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 2.46(d,J＝0.63Hz,3H),7.82(dq,J＝2.21,0.90Hz,1H),8.54(dd,J＝2.21,0.63Hz,1H)；3.5:MS:m/z＝153.3/155.2(MH+)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 2.40(t,J＝0.60Hz,3H),7.82(dq,J＝2.20,0.60Hz,1H),8.43(dq,J＝2.52,0.90Hz,1H)。
实施例4：制备中间体4.2(程序A4)
步骤1
将4.1(1.0g,5.60mmol；M.Graffner-Nordberg,J.Med.Chem.2001,44,2391)的DMF(11.2mL)溶液在10分钟内加入亚硝酸异戊酯(1.13mL,8.40mmol)的DMF(4.7mL)溶液(保持在70℃)。1.5小时后，使温度升至85℃并保持18小时。加入另外量的亚硝酸异戊酯(3.5mL,25.99mmol)，将混合物在85℃搅拌4小时。将混合物冷却至室温并倒入水(200mL)中。将混合物用EtOAc(3x)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(0-50％EtOAc:Hex)纯化，得到4.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.28(d,J＝2.21Hz,1H),8.87(d,J＝2.21Hz,1H)。
实施例5：制备中间体5.4(程序A5)
步骤1
在室温下将(COCl)2(0.49mL,5.61mmol)和DMF(8.7μl,0.112mmol)加入5.1(506mg,2.24mmol；Schlosser等Tetrahedron 2004,60,11869)的CH2Cl2(11.2mL)悬浮液中。将混合物在室温搅拌3.5小时，然后在减压下浓缩，得到5.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.15(s,1H),8.90(s,1H)。
步骤2
将5.2(547mg,2.24mmol)的二噁烷(1.5mL)溶液滴加至NH4OH(15M)(1.49mL,22.43mmol)的二噁烷(1.0mL)的冰冷溶液中。将混合物在0℃搅拌1小时。将反应混合物倒入水(125mL)中，将混合物用EtOAc(2x)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩，得到5.3；MS:m/z:未观察到分子峰；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm 6.11(br.s.,1H),6.42(br.s.,1H),8.09(s,1H),8.80(s,1H)。
步骤3
将(CF3CO)2O(0.33mL,2.34mmol)滴加至5.3(405mg,1.80mmol)在Et3N(0.654mL,4.69mmol)和CH2Cl2(12mL)中的冰冷悬浮液/溶液。将反应混合物在0℃搅拌1.75小时。加入饱和NaHCO3溶液(5mL)，并将混合物剧烈搅拌5分钟。将混合物用CH2Cl2(60mL)和饱和NaHCO3溶液(20mL)稀释。分离相。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(0-50％EtOAc:Hex)纯化，得到5.4；MS:m/z＝未观察到分子峰；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.94(s,1H),8.93(s,1H).
实施例6：制备中间体6.4(程序A6)
步骤11
在室温下将(COCl)2(1.91mL,21.8mmol)和DMF(0.012mL,0.156mmol)加入6.1(1.35g,3.11mmol；Schlosser等Tetrahedron 2004,60,11869)的CH2Cl2(18mL)溶液。将混合物在室温搅拌3小时，然后在减压下浓缩。将残留物保持在高真空泵中直至稳定重量，得到6.2；(500MHz,CDCl3)δppm 7.85(d,J＝8.2Hz,1H),8.08(dq,J＝8.2,0.06Hz,1H)。
步骤2
将6.2(759mg,3.11mmol)的二噁烷(3.1mL)溶液滴加至NH4OH(15M)(2.1mL,31.1mmol)的冰冷溶液中。将混合物在0℃搅拌1小时。将反应混合物倒入水(125mL)中，将混合物用EtOAc(2x)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-50％EtOAc:Hex)纯化，得到6.3；MS:m/z＝225.1/227.3(MH+)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.68(br.s.,1H),7.55(br.s.,1H),7.77(d,J＝8.51Hz,1H),8.05(dd,J＝8.51,0.63Hz,1H)。
步骤3
将(CF3CO)2O(0.23mL,1.63mmol)滴加至6.3(281mg,1.251mmol)在Et3N(0.45mL,3.25mmol)和CH2Cl2(8.3mL)中的冰冷悬浮液/溶液。将混合物在0℃搅拌2时。加入饱和NaHCO3溶液和CH2Cl2，并将混合物在室温搅拌5分钟。分离相。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-20％EtOAc:Hex)纯化，得到6.4；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.87(d,J＝8.61Hz,1H),8.10(d,J＝8.61Hz,1H)。
实施例7：制备中间体7.2(程序A7)
步骤1
将7.1(302mg,1.57mmol；V.J.Colandrea,WO2005/058848)、SOCl2(6.9mL,94mmol)和DMF(0.68mL,8.79mmol)的混合物在回流下加热过夜(14小时)。将冷却的混合物在减压下浓缩。将残留物置于EtOAc(70mL)中，将溶液用饱和NaHCO3溶液和盐水的1:1混合物洗涤(3x)，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(0-20％EtOAc:Hex)纯化，得到7.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.44(t,J＝7.04Hz,3H),4.47(q,J＝7.04Hz,2H),8.58(d,J＝2.35Hz,1H),9.16(d,J＝2.35Hz,1H)。
实施例8：制备中间体8.2(程序A8)
步骤1
将8.1(1.70g,10.51mmol)、Zn(CN)2(0.74g,6.30mmol)和Zn(0.031g,0.47mmol)在DMF(10.5mL)中的混合物脱气(B.Van Wagenen,US2003/55085)。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.189g,0.231mmol)，将溶液再次脱气，然后在125℃加热5小时。将粗混合物用EtOAc(150mL)稀释，通过硅藻土过滤混合物(用EtOAc(25mL)洗涤滤饼)。将滤液用水和饱和NaHCO3溶液(3/1)的混合物以及盐水洗涤两次，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-100％EtOAc:Hex)纯化，得到8.2；MS:m/z＝153.1/155.1(MH+)；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.60(s,3H),7.34(d,J＝8.22Hz,1H),7.73(d,J＝8.61Hz,1H)。
实施例9：制备中间体9.3(一般程序B1)
步骤11
将2-巯基乙酸9.1(0.679mL,9.77mmol)和4-氟苯胺9.2(0.926mL,9.77mmol)的混合物在130℃加热5小时。将冷却的混合物置于EtOAc中，将溶液用0.5N HCl溶液、水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(15-40％EtOAc:Hex)纯化，得到硫醇9.3；MS:m/z＝186.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.95(t,J＝5.90Hz,1H),3.28(d,J＝5.87Hz,2H),7.15(t,J＝9.00Hz,2H),7.59(dd,J＝9.39,5.48Hz,2H),10.13(s,1H)。
实施例10：制备中间体10.4(一般程序B2)
步骤1
将DMF(0.042mL,0.54mmol)加入酸10.1(1.45g,10.81mmol)和(COCl)2(1.892mL,21.62mmol)的CH2Cl2(21.6mL)冰冷溶液中。将混合物在室温搅拌过夜(6小时)。将反应混合物在减压下浓缩，得到中间体10.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 2.44(s,3H),4.18(s,2H)。
步骤2
将DIPEA(0.717mL,4.10mmol)滴加至10.2(569mg,3.73mmol)和10.3(369mg,3.92mmol)的CH2Cl2(19mL)冰冷溶液中。将混合物在0℃搅拌1小时，并在室温下搅拌1小时。将混合物用CH2Cl2稀释，将溶液用水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(20-50％EtOAc:Hex)纯化，得到中间体10.4；MS:m/z＝211.1(MH+)；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.37(s,3H),3.90(s,2H),7.11(dd,J＝7.43,5.09Hz,1H),7.78(ddd,J＝8.20,7.40,1.96Hz,1H),8.00(d,J＝8.22Hz,1H),8.32(ddd,J＝4.70,2.00,1.00Hz,1H),10.71(s,1H)。
实施例11：制备中间体11.3(一般程序B3)
步骤1
将10.2(0.848g,5.56mmol)的CH2Cl2(2.8mL)溶液滴加至11.1(0.381g,2.78mmol)在CH2Cl2(8.4mL)和吡啶(0.450mL,5.56mmol)中的冰冷悬浮液。将混合物在0℃搅拌1.5小时。加入水(5mL)，将混合物用CH2Cl2稀释。将混合物用1N HCl溶液、水、饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(20-50％EtOAc:Hex)纯化，得到11.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 2.39(s,3H),2.46(s,3H),2.92(t,J＝7.09Hz,2H),3.66(s,2H),3.68(s,2H),4.32(t,J＝6.94Hz,2H),7.18(d,J＝8.51Hz,2H),7.44(d,J＝8.51Hz,2H),8.08(br.s.,1H)。
步骤2
在室温下将K2CO3(400mg,2.89mmol)加入11.2(356mg,0.964mmol)的MeOH(9.6mL)脱气溶液。将混合物在室温搅拌过夜(20小时)。将混合物在减压下浓缩。加入水(10mL)，将混合物用1N HCl溶液酸化(pH<2)。将混合物用EtOAc萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(40-100％EtOAc:Hex)纯化，得到11.3；MS:m/z 212.1(MH+)；1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 1.39(br.s.,1H),2.03(t,J＝9.30Hz,1H),2.86(t,J＝6.46Hz,2H),3.41(d,J＝9.14Hz,2H),3.82-3.90(m,2H),7.23(d,J＝8.20Hz,2H),7.50(d,J＝8.51Hz,2H),8.46(br.s.,1H)。
实施例12：制备化合物1002(一般程序C1)
步骤1
将氯吡啶1.4(30mg,0.168mmol)、硫醇9.3(34.2mg,0.185mmol)和K2CO3(58.0mg,0.420mmol)在EtOH(1.7mL)中的混合物在回流下加热4.5小时。将冷却的混合物用EtOAc稀释，将所得溶液用水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物在MeOH和CHCl3的混合物中再结晶，得到化合物1002；MS:m/z＝328.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(quin,J＝7.53Hz,2H),3.00(t,J＝7.43Hz,2H),3.02(t,J＝7.60Hz,2H),7.15(t,J＝9.00Hz,2H),7.29(br.s,2H),7.69(dd,J＝9.00,5.09Hz,2H),8.28(s,1H),9.42(s,1H)。
实施例13：制备化合物1003(一般程序C2)
步骤1
将氯吡啶13.1(50mg,0.23mmol)、硫醇13.2(42mg,0.25mmol)和K2CO3(79.5mg,0.575mmol)在EtOH(2.3mL)中的混合物在回流下加热5小时。将冷却的混合物用水(15mL)稀释。将所得悬浮液搅拌15分钟，然后过滤，用几滴MeOH和己烷洗涤固体，得到化合物1003；MS:m/z＝347.9/349.7(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm7.09(t,J＝7.41Hz,1H),7.33(t,J＝7.88Hz,2H),7.37(s,1H),7.69(d,J＝7.57Hz,1H),8.78(d,J＝2.21Hz,1H),8.84(d,J＝2.21Hz,1H),9.54(s,1H)。
实施例14：制备化合物1009(一般程序C3)
步骤1
将3.5(40mg,0.262mmol)、硫醇13.2(48.2mg,0.288mmol)和K2CO3(91mg,0.655mmol)在EtOH(2.6mL)中的悬浮液在回流下加热5.5小时。将冷却的混合物用EtOAc稀释，用水和盐水(15mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(30-50％EtOAc:Hex)纯化，得到化合物1009；MS:m/z＝284.3(MH+)；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm2.43(s,3H),7.07(tt,J＝7.37,1.14Hz,1H),7.24-7.37(m,4H),7.69(dd,J＝8.67,1.10Hz,2H),8.32(dd,J＝2.05,0.79Hz,1H),8.54(dd,J＝2.21,0.63Hz,1H),9.40(s,1H)。
实施例15：制备化合物1049(一般程序C4)
步骤1
将5.4(30mg,0.145mmol)、硫醇15.1(41.1mg,0.167mmol)和K2CO3(50.2mg,0.363mmol)在EtOH(1.4mL)中的混合物在室温搅拌10分钟，然后在回流下加热3小时。将冷却的混合物用EtOAc(60mL)稀释，将溶液用水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-50％EtOAc:Hex)纯化，然后通过制备型HPLC(方法A)进一步纯化，得到化合物1049；MS:m/z＝415.9/417.9(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.48(br.s.,2H),7.53(d,J＝8.61Hz,2H),7.70(d,J＝8.61Hz,2H),8.73(s,1H),9.39(s,1H),9.92(s,1H)。
实施例16：制备化合物1118(一般程序C5)
步骤1
将16.1(22mg,0.163mmol)、硫醇13.2(28.6mg,0.171mmol)和K2CO3(56.2mg,0.407mmol)在DMF(0.65mL)中的混合物在室温搅拌7小时。将混合物用EtOAc(50mL)稀释，将溶液用水和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-20％EtOAc:Hex)纯化，得到化合物1118；MS:m/z＝283.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.44(s,3H),7.06(tt,J＝7.40,1.17Hz,1H),7.19(s,2H),7.31(dd,J＝8.61,7.43Hz,1H),7.35(dd,J＝8.22,1.17Hz,1H),7.69(dd,J＝8.80,0.98Hz,2H),7.76(d,J＝8.22Hz,1H),7.91(s,1H),9.29(s,1H)。
实施例17：制备化合物1055(一般程序D)
步骤1
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(4.91mg,6.01μmol)加入化合物1037(50mg,0.120mmol)、硼酸17.1(44.3mg,0.360mmol)和K2CO3(49.8mg,0.360mmol)在二噁烷(1.15mL)和水(0.287mL)中的脱气的(真空至氩3x)部分溶液。将混合物再次脱气，在85℃加热21小时。将冷却的混合物置于EtOAc(150mL)中，加入水(30mL)。将分离的水层用CH2Cl2(3x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将固体在CHCl3和MeOH的1:1混合物中再结晶，得到化合物1055；MS:m/z＝415.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.39-7.47(m,2H),7.50(dd,J＝8.02,5.28Hz,1H),7.57(s,2H),7.78(dt,J＝7.04,2.15Hz,1H),7.99-8.12(m,2H),8.58(dd,J＝4.70,1.57Hz,1H),8.87(d,J＝1.96Hz,1H),9.04(d,J＝5.87Hz,1H),9.72(s,1H)。
实施例18：制备化合物1020
步骤1
向化合物1012(50mg,0.143mmol)、Pd(Ph3P)4(16.5mg,0.014mmol)和CuI(2.73mg,0.014mmol)在THF(0.72mL)和DMF(0.72mL)的混合物中依次加入DIPEA(0.41mL,2.86mmol)和乙炔基三甲基硅烷(101μL,0.716mmol)。将混合物用N2冲刷并在110℃加热2.5小时。将冷却的混合物用水(15mL)稀释，并用EtOAc(3x)萃取。将水层过滤并用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残留物通过闪速层析(0-100％EtOAc:Hex)纯化，得到18.1；MS:m/z＝367.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 0.22-0.32(m,9H),7.55(s,2H),7.77(br.s.,2H),8.71-8.77(m,2H),9.84(s,1H)。
步骤2
向18.1(50mg,0.136mmol)的MeOH(2mL)溶液中加入K2CO3(37.7mg,0.273mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，然后在减压下浓缩。将溶解在10％MeOH的CH2Cl2(50mL)溶液中的残留物用水稀释。将所得悬浮液过滤，在空气中干燥固体，得到化合物1020；MS:m/z＝295.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 4.50(s,1H),7.57(s,2H),7.76(br.s.,1H),8.44(br.s.,1H),8.69-8.80(m,1H),9.84(br.s.,1H)。
实施例19：制备化合物1021
步骤1
将1020(20mg,0.068mmol)和Pd-C 10％Degussa型,50％湿(7.2mg)的MeOH(5mL)悬浮液在氢气氛下搅拌45分钟。将混合物通过0.45μm过滤单元过滤，用MeOH(1mL)洗涤，浓缩，得到化合物1021；MS:m/z＝299.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.28(t,J＝7.57Hz,3H),2.76(q,J＝7.57Hz,2H),7.52(s,2H),7.75-7.77(m,2H),8.41-8.44(m,3H),8.59(d,J＝1.89Hz,1H),9.74(s,1H)。
实施例20：制备化合物1090
步骤1
在密封式小瓶中将1003(25.7mg,0.074mmol)、丙-1-烯-2-基硼酸(7.8μL,0.081mmol)和K3PO4(47.0mg,0.221mmol)在DME-水(2:1,3mL)中的混合物用N2流吹扫5分钟。向混合物中加入Pd(Ph3P)4(8.53mg,7.38μmol)，将小瓶密封，将混合物在微波辐射下于90℃加热4小时。将冷却的混合物用EtOAc和水稀释。将水层用EtOAc(3x)提取，将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过制备型HPLC(方法B)纯化，得到1090；MS:m/z＝310.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.22(s,3H),5.27(s,1H),5.65(s,1H),7.03-7.12(m,1H),7.33(t,J＝7.83Hz,2H),7.42(s,1H),7.70(d,J＝7.43Hz,2H),8.66(d,J＝2.35Hz,1H),8.87(d,J＝2.35Hz,1H),9.44(s,1H)。
实施例21：制备化合物1103
步骤1
将化合物1090(57.3mg,0.185mmol)和Pd-C 10％Degussa型,50％湿(20mg)的MeOH(25mL)悬浮液在氢气氛下搅拌18小时。将混合物在硅藻土垫上过滤，用MeOH洗涤并在减压下浓缩。将残留物通过制备型HPLC(方法B)纯化，得到化合物1103；MS:m/z＝312.1(MH+)；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.31(d,J＝6.65Hz,6H),3.09(dt,J＝13.89,6.75Hz,1H),7.03-7.11(m,1H),7.28-7.40(m,4H),7.70(d,J＝7.83Hz,2H),8.44(d,J＝1.96Hz,1H),8.60(d,J＝1.96Hz,1H),9.40(s,1H)。
实施例22：制备化合物1111
步骤1
在密封式小瓶中将化合物1003(56.9mg,0.163mmol)、烯丙基三丁基锡烷(60.2μL,0.196mmol)和K2CO3(45.2mg,0.327mmol)在甲苯/水(5/1)(3.3mL)中的悬浮液用N2流吹扫10分钟。向混合物中加入Pd(Ph3)4(4.72mg,4.09μmol)，将小瓶密封，将混合物在105℃加热23小时。将混合物用EtOAc和水稀释，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。由于反应未完成，因此将残留物重新置于相同的反应条件(加热15小时)。将粗材料通过制备型HPLC(方法B)纯化，然后通过硅胶垫过滤(Hex/EtOAc(50/50)，以及3％Et3N)。将滤液在减压下浓缩，得到化合物1111；MS:m/z＝310.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.53(d,J＝6.65Hz,2H),5.10-5.19(m,2H),5.97-6.11(m,1H),7.04-7.11(m,1H),7.35(d,J＝6.65Hz,2H),7.31(d,J＝8.22Hz,2H),7.65-7.73(m,2H),8.34(d,J＝1.96Hz,1H),8.54(d,J＝1.96Hz,1H),9.42(s,1H)。
实施例23：制备化合物1112
步骤1
在密封式小瓶中将化合物1003(29.8mg,0.086mmol)、三乙基硼烷(34.2μl,0.034mmol)、K3PO4(36.3mg,0.171mmol)和二((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)(丁基)膦(1.53mg,4.28μmol)在甲苯/水(10/1)(1.57mL)中的悬浮液用N2流吹扫5分钟。向混合物中加入Pd2(dba)3(0.980mg,1.070μmol)，将小瓶密封，将混合物在105℃加热17小时。将冷却的混合物用EtOAc和水稀释，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过制备型HPLC(方法B)纯化，得到化合物1112；MS:m/z＝298.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.28(t,J＝7.43Hz,3H),2.76(q,J＝7.70Hz,2H),7.07(t,J＝7.24Hz,1H),7.29-7.36(m,4H),7.69(d,J＝8.22Hz,2H),8.38(s,1H),8.57(s,1H),9.40(s,1H)。
实施例24：制备化合物1134
步骤1
化合物1111(30mg,0.097mmol)和Pd-C 10％Degussa型,50％湿(10.3mg)的MeOH(6mL)悬浮液在氢气氛下搅拌18小时。将混合物过滤(0.45μm过滤单元)并在减压下浓缩。将残留物通过制备型HPLC(方法B)纯化，得到化合物1134；MS:m/z＝312.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.94(t,J＝7.43Hz,3H),1.69(dq,J＝15.06,7.24Hz,2H),2.67-2.74(m,2H),7.05-7.10(m,1H),7.28-7.37(m,4H),7.67-7.73(m,2H)8.36(d,J＝1.96Hz,1H),8.54(d,J＝1.96Hz,1H),9.40(s,1H)。
实施例25：制备化合物1153(一般程序E)
步骤1
将1.4(75mg,0.420mmol)、25.1(66.6mg,0.441mmol；J.M.Hung等,Eur.J.Med.Chem.2014,86,420)和Na2CO3(46.7mg,0.441mmol)在EtOH(1.7mL)中的混合物在回流下加热18小时。将冷却的混合物在EtOAc和水之间分配。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(10-30％EtOAc:Hex)纯化，得到25.2；MS:m/z＝294.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.06(quin,J＝7.65Hz,2H),2.85(td,J＝7.49,3.63Hz,4H),5.06(s,2H),7.06(t,J＝7.41Hz,1H),7.31(t,J＝8.20Hz,2H),7.56(dd,J＝8.67,1.10Hz,2H),8.09(s,1H),10.16(s,1H)。
步骤2
在室温下将t-BuOK(45.4mg,0.405mmol)加入25.2(95mg,0.324mmol)的THF(3.2mL)溶液。将混合物在回流下加热2小时。将混合物置于CH2Cl2中，将溶液用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4),在减压下过滤浓缩。将残留物通过闪速层析(2-15％EtOAc:Hex)纯化，得到化合物1153；MS:m/z＝294.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(quin,J＝7.57Hz,2H),2.98(t,J＝7.25Hz,2H),2.99(t,J＝7.57Hz,2H),6.33(s,2H),7.04(tt,J＝7.57,0.95Hz,1H),7.30(dd,J＝8.51,7.57Hz,2H),7.82(dd,J＝7.57,1.26Hz,2H),8.12(s,1H),9.84(s,1H)。
MS和NMR数据的列表
化合物1001；MS:m/z＝310.3；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(quin,J＝7.49Hz,2H),2.90-3.06(m,4H),7.06(tt,J＝7.57,0.95Hz,1H),7.29(s,1H),7.31(dd,J＝8.51,7.57Hz,2H),7.69(dd,J＝8.51,1.30Hz,2H),8.28(s,1H),9.35(s,1H)。
化合物1002；实施例12中所述。
化合物1003；MS:实施例13中所述。
化合物1004；MS:m/z＝304.1/306.1(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm7.09(tt,J＝7.25,1.26Hz,1H),7.33(dd,J＝8.51,7.57Hz,1H),7.37(s,2H),7.69(dd,J＝8.83,1.26Hz,1H),8.65-8.76(m,1H),9.54(s,1H)。
化合物1005；MS:m/z＝298.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.36(s,3H)2.55(s,3H)7.06(tt,J＝7.33,1.18Hz,1H)7.27(s,2H)7.31(dd,J＝8.51,7.57Hz,2H)7.68(dd,J＝8.83,1.26Hz,2H)8.22(s,1H)9.34(s,1H)。
化合物1006；MS:m/z＝311.3(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(quin,J＝7.49Hz,2H),3.00(t,J＝7.25Hz,2H),3.02(t,J＝7.25Hz,2H),7.35(dd,J＝8.51,4.73Hz,1H),7.37(s,2H),8.09(ddd,J＝8.35,2.52,1.42Hz,1H),8.27(dd,J＝4.73,1.58Hz,1H),8.30(s,1H),8.87(d,J＝2.52Hz,1H),9.57(s,1H)。
化合物1007；MS:m/z＝311.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(quin,J＝7.53Hz,2H),3.00(t,J＝7.00Hz,2H),3.01(t,J＝6.90Hz,2H),7.12(dd,J＝7.04,5.09Hz,1H),7.36(s,2H),7.80(ddd,J＝8.00,6.70,1.56Hz,1H),8.05(d,J＝8.61Hz,1H),8.31(s,1H),8.35(d,J＝3.91Hz,1H),9.49(s,1H)。
化合物1008；MS:m/z＝338.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.10(tt,J＝7.41,1.26Hz,1H),7.34(dd,J＝8.51,7.25Hz,2H),7.52(s,2H),7.70(dd,J＝8.67,1.10Hz,2H),8.97-9.10(m,2H),9.61(s,1H)。
化合物1009；实施例14中所述。
化合物1010；MS:m/z＝288.3(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.09(tt,J＝7.41,0.90Hz,1H),7.33(s,2H),7.33(t,J＝7.88Hz,2H),7.69(dd,J＝8.67,1.10Hz,2H),8.46(dd,J＝9.62,2.68Hz,1H),8.74(dd,J＝2.84,0.95Hz,1H),9.51(s,1H)。
化合物1011；MS:m/z＝305.2/307.1(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.54(s,2H),7.75(d,J＝6.31Hz,1H),8.44(d,J＝6.31Hz,1H),8.74(d,J＝2.21Hz,1H),8.75(d,J＝2.52Hz,1H)9.86(s,1H)。
化合物1012；MS:m/z＝349.1/351.1(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.54(s,2H),7.75(d,J＝6.31Hz,2H),8.43(d,J＝6.31Hz,2H),8.80(d,J＝2.21Hz,1H),8.88(d,J＝2.21Hz,1H),9.86(s,1H)。
化合物1013；MS:m/z＝339.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.69(s,2H),7.76(d,J＝6.31Hz,2H),8.45(d,J＝6.31Hz,2H),9.06(dd,J＝2.21,0.63Hz,1H),9.09(dd,J＝2.21,0.63Hz,1H),9.93(s,1H)。
化合物1014；MS:m/z＝311.3(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(quin,J＝7.57Hz,2H),3.00(t,J＝6.90Hz,2H),3.02(t,J＝7.60Hz,2H),7.47(s,2H),7.75(d,J＝6.31Hz,2H),8.32(s,1H),8.41(d,J＝6.31Hz,2H),9.69(s,1H)。
化合物1015；MS:m/z＝339.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.38(dd,J＝8.04,4.89Hz,1H),7.60(br.s.,2H),8.09(d,J＝8.20Hz,1H),8.30(d,J＝4.10Hz,1H),8.89(br.s.,1H),9.05(s,1H),9.07(s,1H),9.82(s,1H)。
化合物1016；MS:m/z＝295.3(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.10(tt,J＝7.60,0.90Hz,1H),7.34(dd,J＝8.51,7.25Hz,2H),7.47(s,2H),7.69(dd,J＝8.51,1.26Hz,2H),8.99-9.08(m,2H),9.63(s,1H)。
化合物1017；MS:m/z＝382.1(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.70(t,J＝7.09Hz,2H),3.59(td,J＝7.17,5.20Hz,2H),4.62(t,J＝5.20Hz,1H),7.17(d,J＝8.51Hz,2H),7.50(s,2H),7.58(d,J＝8.51Hz,2H),9.04(d,J＝0.95Hz,2H),9.55(s,1H)。
化合物1018；MS:m/z＝382.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 3.28(s,3H),4.37(s,2H),7.28(d,J＝8.83Hz,2H),7.53(s,2H),7.68(d,J＝8.51Hz,2H),8.94-9.08(m,2H),9.63(s,1H)。
化合物1019；MS:m/z＝368.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 4.47(d,J＝5.67Hz,2H),5.11(t,J＝5.83Hz,1H),7.28(d,J＝8.51Hz,2H),7.51(s,2H),7.64(d,J＝8.51Hz,2H),8.97-9.08(m,2H),9.58(s,1H)。
化合物1020；实施例18中所述。
化合物1021；实施例19中所述。
化合物1022MS:m/z＝339.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.15(td,J＝5.99,0.95Hz,1H)7.59(s,2H)7.78-7.87(m,1H)8.06(d,J＝8.20Hz,1H)8.38(dd,J＝4.89,1.10Hz,1H)9.00-9.10(m,2H)9.97(s,1H)。
化合物1023MS:m/z＝359.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.25(d,J＝1.17Hz,3H)6.87(s,1H)7.21(br.s.,2H)8.72(s,1H)8.83(d,J＝1.57Hz,1H)。
化合物1024MS:m/z＝366.3(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.19(t,J＝7.57Hz,3H)2.59(q,J＝7.57Hz,2H)7.18(m,J＝8.83Hz,2H)7.50(s,2H)7.56-7.63(m,2H)9.04(s,2H)9.55(s,1H)。
化合物1025；MS:m/z＝338.2(MH+)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.11(tt,J＝7.30,1.30Hz,1H),7.35(dd,J＝8.51,7.25Hz,2H),7.43(s,2H),7.69(dd,J＝8.67,1.10Hz,2H),8.72(br.d,J＝0.60Hz,1H),9.39(s,1H),9.80(s,1H)。
化合物1026；MS:m/z＝339.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.60(s,2H),7.76(d,J＝6.26Hz,2H),8.46(d,J＝6.26Hz,2H),8.76(s,1H),9.41(s,1H),10.13(br.s.,1H)。
化合物1027；MS:m/z＝338(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.97(s,2H),7.11(tt,J＝7.40,1.20Hz,1H),7.35(dd,J＝8.22,7.43Hz,2H),7.70(dd,J＝8.41,0.98Hz,2H),8.01(d,J＝8.61Hz,1H),8.78(d,J＝8.61Hz,1H),9.73(s,1H)。
化合物1028；MS:m/z＝339.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.14(s,2H),7.77(d,J＝6.26Hz,1H),8.03(d,J＝8.22Hz,1H),8.46(d,J＝6.26Hz,1H),8.80(d,J＝8.22Hz,1H),10.07(br.s.,1H)。
化合物1029；MS:394.9m/z＝(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.59(s,2H)7.80(dd,J＝8.80,2.15Hz,1H)8.05(d,J＝8.61Hz,1H)8.56(d,J＝1.96Hz,1H)9.06(d,J＝3.13Hz,2H)9.30(s,1H)9.89(s,1H)。
化合物1030；MS:414.0m/z＝(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.28-7.36(m,1H)7.39-7.48(m,2H)7.55(br.s.,2H)7.61-7.70(m,4H)7.77-7.85(m,2H)8.99-9.09(m,2H)9.70(s,1H)。
化合物1031；MS:444.0m/z＝(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 5.10(s,2H)6.75(dt,J＝8.22,1.17Hz,1H)7.19-7.28(m,1H)7.29-7.37(m,2H)7.37-7.44(m,2H)7.44-7.51(m,3H)7.54(s,2H)9.05(d,J＝3.52Hz,2H)9.58(s,1H)。
化合物1032；MS:424.0m/z＝(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.19(t,J＝7.04Hz,2H)3.63(s,2H)4.08(q,J＝7.04Hz,2H)7.22(m,J＝8.61Hz,2H)7.52(s,2H)7.60-7.68(m,2H)9.04(s,2H)9.61(s,1H)。
化合物1033；MS:444.0m/z＝(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.76(s,3H)7.10(d,J＝8.61Hz,1H)7.31-7.36(m,1H)7.40-7.45(m,2H)7.50(dd,J＝8.41,1.37Hz,4H)7.64-7.70(m,2H)9.03(s,2H)9.57(s,1H)。
化合物1034；MS:m/z＝337.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.08(tt,J＝7.40,1.20Hz,1H),7.33(t,J＝7.83Hz,2H),7.42(s,2H),7.69(dd,J＝8.61,1.17Hz,2H),7.79(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H),8.15(d,J＝8.61Hz,1H),8.62(s,1H),9.52(s,1H)。
化合物1035；MS:m/z＝338.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.61(s,2H),7.78(d,J＝6.65Hz,2H),7.82(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H),8.17(d,J＝8.61Hz,1H),8.45(d,J＝5.09Hz,2H),8.67(s,1H),9.91(br.s.,1H)。
化合物1036；MS:m/z＝415.9/417.9(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.26-7.34(m,2H)7.60(s,2H)7.70(dt,J＝7.43,1.96Hz,1H)8.06(t,J＝1.76Hz,1H)9.02-9.09(m,2H)9.75(s,1H)。
化合物1037；MS:m/z＝415.9/417.9(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.50(d,J＝8.61Hz,2H)7.55(br.s.,2H)7.63-7.75(m,2H)9.03(d,J＝4.70Hz,2H)9.71(s,1H)。
化合物1038；MS:m/z＝377.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.98(s,2H)7.30(d,J＝8.61Hz,2H)7.53(s,2H)7.67-7.74(m,2H)8.98-9.06(m,2H)9.67(s,1H)。
化合物1039；MS:m/z＝391.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.51(s,2H)7.67-7.80(m,2H)7.82(d,J＝6.65Hz,1H)8.07(d,J＝8.22Hz,1H)8.53(d,J＝5.87Hz,1H)9.04-9.10(m,2H)9.36(d,J＝0.78Hz,1H)10.00(s,1H)。
化合物1040；MS:m/z＝389.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.48(s,2H)7.55(dd,J＝8.41,4.11Hz,1H)7.62(dd,J＝7.43,1.17Hz,1H)7.78(dd,J＝8.22,7.43Hz,1H)7.95(d,J＝8.61Hz,1H)8.24-8.35(m,1H)8.92(dd,J＝4.11,1.76Hz,1H)9.05(s,2H)10.00(s,1H)。
化合物1041；MS:m/z＝389.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.49(dd,J＝8.22,4.30Hz,1H)7.62(s,2H)7.97(d,J＝9.00Hz,1H)8.04(dd,J＝9.00,2.35Hz,1H)8.24-8.32(m,1H)8.40(d,J＝2.35Hz,1H)8.79(dd,J＝4.11,1.76Hz,1H)9.01-9.11(m,2H)9.94(s,1H)。
化合物1042；MS:m/z＝389.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.58(td,J＝7.53,1.37Hz,1H)7.66(td,J＝7.53,1.37Hz,3H)7.89-8.01(m,2H)8.70(d,J＝2.35Hz,1H)9.01-9.11(m,2H)9.14(d,J＝2.74Hz,1H)10.07(s,1H)。
化合物1043；MS:m/z＝389.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.40-7.69(m,3H)7.72-7.88(m,2H)7.98(br.s.,1H)8.13(s,1H)8.82(br.s.,1H)9.04(br.s.,2H)10.14(br.s.,1H)。
化合物1044；MS:m/z＝342.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.39(t,J＝7.04Hz,3H),4.41(q,J＝7.04Hz,2H),7.09(tt,J＝7.40,1.20Hz,1H),7.33(dd,J＝8.61,7.43Hz,2H),7.59(s,2H),7.69(dd,J＝8.80,0.98Hz,2H),9.14(d,J＝1.96Hz,1H),9.16(d,J＝1.96Hz,1H),9.56(s,1H)。
化合物1045；MS:m/z＝372.0/374.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.39(d,J＝9.00Hz,2H),7.56(s,1H),7.75(d,J＝9.00Hz,2H),9.00-9.08(m,2H),9.74(s,1H)。
化合物1046；MS:m/z＝396.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.78(t,J＝6.85Hz,2H),3.25(s,3H),3.53(t,J＝6.85Hz,2H),7.19(d,J＝8.22Hz,2H),7.50(s,2H),7.59(d,J＝8.22Hz,2H),9.04(s,2H),9.56(s,1H)。
化合物1047；MS:m/z＝352.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.28(s,3H),7.14(d,J＝8.61Hz,2H),7.50(s,2H),7.57(d,J＝8.22Hz,2H),9.03(s,2H),9.54(s,1H)。
化合物1048；MS:m/z＝368.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.75(s,3H),6.91(d,J＝9.00Hz,2H),7.47(s,2H),7.58(d,J＝9.00Hz,2H),9.03(s,2H),9.51(s,1H)。
化合物1049；实施例15中所述。
化合物1050；MS:m/z＝413.9/415.9(M-H)-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.02(br.s.,2H),7.53(d,J＝9.00Hz,2H),7.71(d,J＝8.61Hz,2H),8.01(d,J＝8.61Hz,1H),8.78(d,J＝8.61Hz,1H),9.85(s,1H)。
化合物1051；MS:m/z＝372.0/374.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.41(d,J＝9.00Hz,2H),7.47(s,2H),7.75(d,J＝9.00Hz,2H),8.73(s,1H),9.39(s,1H),9.93(s,1H)。
化合物1052；MS:m/z＝350.0(M-H)-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.28(s,3H),7.15(d,J＝8.22Hz,2H),7.41(s,2H),7.57(d,J＝8.61Hz,2H),8.71(s,1H),9.38(s,1H),9.73(s,1H)。
化合物1053；MS:m/z＝369.9/371.9(M-H)-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.01(s,2H),7.41(d,J＝9.00Hz,2H),7.76(d,J＝9.00Hz,2H),8.01(d,J＝8.61Hz,1H),8.78(d,J＝8.61Hz,1H),9.86(s,1H)。
化合物1054；MS:m/z＝350.0(M-H)-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.29(s,3H),6.94(s,2H),7.15(d,J＝8.61Hz,2H),7.58(d,J＝8.61Hz,2H),8.00(d,J＝8.22Hz,1H),8.77(d,J＝8.61Hz,1H),9.66(s,1H)。
化合物1055；实施例17中所述。
化合物1056；MS:m/z＝415.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.40-7.54(m,2H)7.58(s,2H)7.63-7.71(m,2H)7.82(dt,J＝7.83,1.76Hz,1H)8.16(t,J＝1.76Hz,1H)8.61-8.70(m,2H)9.00-9.09(m,2H)9.75(s,1H)。
化合物1057；MS:m/z＝415.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.46(dd,J＝7.83,4.70Hz,1H)7.56(br.s.,2H)7.72(m,J＝9.00Hz,2H)7.85(m,J＝8.61Hz,2H)8.07(d,J＝7.83Hz,1H)8.53(d,J＝3.52Hz,1H)8.90(d,J＝1.96Hz,1H)9.04(d,J＝5.09Hz,2H)9.74(s,1H)。
化合物1058；MS:m/z＝415.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.58(s,2H)7.66-7.74(m,2H)7.77-7.85(m,2H)7.85-7.93(m,2H)8.56-8.62(m,2H)9.00-9.09(m,2H)9.79(s,1H)。
化合物1059；MS:m/z＝414.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.34-7.39(m,2H)7.39-7.45(m,1H)7.45-7.50(m,2H)7.56(s,2H)7.62-7.66(m,2H)7.72(dt,J＝7.53,1.71Hz,1H)8.04(t,J＝1.96Hz,1H)9.02-9.06(m,2H)9.68(s,1H)。
化合物1060；MS:m/z＝356.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.10-7.21(m,2H)7.50(br.s.,2H)7.63-7.73(m,2H)9.02(s,2H)9.66(br.s.,1H)。
化合物1061；MS:m/z＝406.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.62(s,2H)7.68(d,J＝8.61Hz,2H)7.94(d,J＝8.61Hz,2H)9.00-9.11(m,2H)9.92(s,1H)。
化合物1062；MS:m/z＝362.0/364.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.43(s,3H),7.36(s,2H),7.50(d,J＝8.61Hz,2H),7.69(d,J＝9.00Hz,2H),8.33(dd,J＝1.96,0.78Hz,1H),8.54(d,J＝1.56Hz,1H),9.53(s,1H)。
化合物1063；MS:m/z＝285.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43(s,3H),7.50(s,2H),7.75(d,J＝6.65Hz,2H),8.37(dd,J＝1.96,0.78Hz,1H),8.42(d,J＝6.26Hz,2H),8.56(d,J＝1.96Hz,1H),9.74(s,1H)。
化合物1064；MS:m/z＝412.9/414.9(M-H)-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.46(s,2H),7.51(d,J＝9.00Hz,2H),7.69(d,J＝9.00Hz,2H),7.80(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H),8.16(d,J＝8.61Hz,1H),8.63(s,1H),9.65(s,1H)。
化合物1065；MS:m/z＝351.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.28(s,3H),7.13(d,J＝8.22Hz,2H),7.39(s,2H),7.56(d,J＝8.61Hz,2H),7.79(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H),8.15(d,J＝8.61Hz,1H),8.61(s,1H),9.44(s,1H)。
化合物1066；MS:m/z＝371.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.38(d,J＝8.61Hz,2H),7.46(s,2H),7.74(d,J＝8.61Hz,2H),7.80(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H),8.16(d,J＝8.22Hz,1H),8.63(s,1H),9.65(s,1H)。
化合物1067；MS:m/z＝338.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.37(dd,J＝8.22,4.70Hz,1H),7.50(s,2H),7.81(dd,J＝8.41,1.37Hz,1H),8.09(ddd,J＝8.31,2.45,1.37Hz,1H),8.17(d,J＝8.61Hz,1H),8.29(br.d,J＝3.90Hz,1H),8.65(s,1H),8.88(d,J＝1.96Hz,1H),9.73(s,1H)。
化合物1068；MS:m/z＝318.1/320.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.43(s,3H),7.36(s,2H),7.37(d,J＝9.00Hz,2H),7.74(d,J＝8.61Hz,2H),8.33(dd,J＝2.15,0.98Hz,1H),8.54(dd,J＝2.35,0.78Hz,1H),9.53(s,1H)。
化合物1069；MS:m/z＝298.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.27(s,3H),2.43(s,3H),7.12(d,J＝8.22Hz,2H),7.28(s,2H),7.56(d,J＝8.22Hz,1H),8.31(dd,J＝1.96,0.78Hz,1H),8.53(d,J＝1.57Hz,1H),9.33(s,1H)。
化合物1070；MS:m/z＝353.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.44(s,3H),7.23(d,J＝8.22Hz,1H),7.57(s,2H),7.96(dd,J＝8.41,2.54Hz,1H),8.74(d,J＝2.35Hz,1H),9.02-9.09(m,2H),9.74(s,1H)。
化合物1071；MS:m/z＝369.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.84(s,3H),6.83(dd,J＝8.61,0.78Hz,1H),7.53(s,2H),7.96(dd,J＝8.61,2.74Hz,1H),8.39-8.45(m,1H),9.00-9.08(m,2H),9.68(s,1H)。
化合物1072；MS:m/z＝284.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.63(s,3H),6.80(s,2H),7.08(tt,J＝7.40,1.20Hz,1H),7.33(dd,J＝8.61,7.43Hz,2H),7.42(d,J＝8.61Hz,1H),7.70(dd,J＝8.61,1.17Hz,2H),8.30(d,J＝8.22Hz,1H),9.50(s,1H)。
化合物1073；MS:m/z＝318.1/320.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.63(s,3H),6.85(s,2H),7.38(d,J＝9.00Hz,2H),7.43(d,J＝8.61Hz,1H),7.75(d,J＝8.61Hz,2H),8.30(d,J＝8.22Hz,1H),9.64(s,1H)。
化合物1074；MS:m/z＝390.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.38(t,J＝9.00Hz,1H)7.58(s,2H)7.65(ddd,J＝9.10,4.40,2.54Hz,1H)7.98-8.03(m,1H)9.01-9.06(m,2H)9.78(s,1H)。
化合物1075；MS:m/z＝374.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.39(dt,J＝10.56,9.19Hz,1H)7.44-7.53(m,1H)7.57(br.s.,2H)7.85(ddd,J＝13.40,7.53,2.54Hz,1H)9.03(d,J＝4.70Hz,2H)9.79(br.s.,1H)。
化合物1076；MS:370.0m/z＝(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.22(d,J＝1.96Hz,3H)7.09(t,J＝9.19Hz,1H)7.45-7.54(m,3H)7.60(dd,J＝7.04,2.35Hz,1H)9.02(s,2H)9.58(s,1H)。
化合物1077；MS:m/z＝356.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.85-6.93(m,1H)7.35(td,J＝8.12,6.85Hz,1H)7.48-7.54(m,1H)7.58(s,2H)7.67(dt,J＝12.03,2.20Hz,1H)9.00-9.07(m,2H)9.76(s,1H)。
化合物1078；MS:m/z＝370.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.18(s,3H)7.20(t,J＝8.61Hz,1H)7.40(dd,J＝8.22,1.96Hz,1H)7.54(br.s.,2H)7.60(dd,J＝12.52,1.96Hz,1H)9.03(d,J＝4.70Hz,2H)9.68(br.s.,1H)。
化合物1079；MS:m/z＝374.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.91(tt,J＝9.39,2.35Hz,1H)7.47-7.56(m,2H)7.64(s,2H)9.05(dd,J＝11.15,1.76Hz,2H)9.89(s,1H)。
化合物1080；MS:m/z＝368.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.75(s,3H),6.92(d,J＝9.00Hz,2H),7.39(s,2H),7.58(d,J＝9.00Hz,2H),8.70(s,1H),9.37(s,1H),9.70(s,1H)。
化合物1081；MS:m/z＝340.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(quin,J＝7.53Hz,2H),3.00(q,J＝7.56Hz,2H),3.74(s,3H),6.89(d,J＝9.39Hz,2H),7.23(s,2H),7.56(d,J＝9.00Hz,1H),8.26(s,1H),9.25(s,1H)。
化合物1082；MS:m/z＝344.0/346.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.14(quin,J＝7.53Hz,2H),3.01(q,J＝7.56Hz,4H),7.33(s,2H),7.36(d,J＝8.61Hz,2H),7.74(d,J＝9.00Hz,2H),8.29(s,1H),9.48(s,1H)。
化合物1083；MS:m/z＝367.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.75(s,3H),6.91(d,J＝9.00Hz,2H),7.37(s,2H),7.57(d,J＝9.00Hz,2H),7.78(d,J＝8.61Hz,1H),8.14(d,J＝8.61Hz,1H),8.60(s,1H),9.42(s,1H)。
化合物1084；MS:m/z＝422.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.35(d,J＝8.61Hz,2H),7.57(br.s,2H),7.82(d,J＝9.00Hz,2H),9.02-9.09(m,2H),9.80(s,1H)。
化合物1085；MS:m/z＝368.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.75(s,3H),6.67(dd,J＝8.22,2.35Hz,1H),7.23(t,J＝8.22Hz,1H),7.32(dd,J＝9.00,1.56Hz,1H),7.39(t,J＝2.15Hz,1H),7.54(br.s,2H),9.01-9.08(m,2H),9.57(s,1H)。
化合物1086；MS:m/z＝404.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.16(d,J＝9.00Hz,2H),7.18(t,J＝73.95Hz,1H),7.54(s,2H),7.73(d,J＝9.39Hz,2H),8.97-9.11(m,2H),9.71(s,1H)。
化合物1087；MS:m/z＝402.0/404.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm3.84(s,3H),7.14(d,J＝9.00Hz,1H),7.54(s,2H),7.60(dd,J＝9.00,2.74Hz,1H),7.87(d,J＝2.35Hz,1H),8.99-9.09(m,2H),9.62(s,1H)。
化合物1088；MS:m/z＝356.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.19(t,J＝9.00Hz,2H),7.44(s,2H),7.70(dd,J＝9.00,5.09Hz,2H,)8.72(s,1H),9.39(s,1H),9.86(s,1H)。
化合物1089；MS:m/z＝355.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.17(t,J＝8.80Hz,2H),7.42(s,2H),7.70(dd,J＝9.39,5.09Hz,2H),7.79(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H),8.15(d,J＝8.22Hz,1H),8.62(s,1H),9.58(s,1H)。
化合物1090；实施例20中所述。
化合物1091；MS:m/z＝310.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.80(d,J＝5.09Hz,2H),1.07(d,J＝7.83Hz,2H),2.06-2.13(m,1H),7.07(t,J＝7.24Hz,1H),7.27-7.35(m,4H),7.69(d,J＝8.22Hz,2H),8.15(s,1H),8.57(s,1H),9.39(s,1H)。
化合物1092；MS:m/z＝430.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.95-7.03(m,4H)7.07-7.14(m,1H)7.33-7.41(m,2H)7.50(s,2H)7.65-7.72(m,2H)9.02(s,2H)9.64(s,1H)。
化合物1093；MS:m/z＝372.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.12(dt,J＝9.10,0.93Hz,1H)7.34(t,J＝8.22Hz,1H)7.52-7.69(m,3H)7.90(t,J＝1.96Hz,1H)8.98-9.09(m,2H)9.75(br.s.,1H)。
化合物1094；MS:m/z＝352.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.29(s,3H)6.90(d,J＝7.83Hz,1H)7.20(t,J＝7.83Hz,1H)7.43-7.57(m,4H)9.02(d,J＝0.78Hz,2H)9.52(s,1H)。
化合物1095；MS:m/z＝407.9(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.57(d,J＝9.00Hz,1H)7.61(br.s.,2H)7.69(dd,J＝8.80,2.54Hz,1H)8.10(d,J＝2.35Hz,1H)9.00-9.08(m,2H)9.83(br.s.,1H)。
化合物1096；MS:m/z＝386.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.31(s,3H)7.34(d,J＝8.61Hz,1H)7.51-7.58(m,3H)7.71(d,J＝2.35Hz,1H)9.03(d,J＝3.52Hz,2H)9.64(s,1H)。
化合物1097；MS:m/z＝388.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.12(dd,J＝8.61,2.35Hz,1H)7.23(d,J＝8.61Hz,1H)7.50(d,J＝2.35Hz,3H)9.02(d,J＝1.96Hz,2H)9.60(s,1H)10.15(s,1H)。
化合物1098；MS:m/z＝382.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 5.99(s,2H)6.86(d,J＝8.22Hz,1H)7.09(dd,J＝8.41,2.15Hz,1H)7.31(d,J＝1.96Hz,1H)7.47(s,2H)9.01(s,2H)9.51(s,1H)。
化合物1099；MS:m/z＝396.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 4.15-4.26(m,4H)6.79(d,J＝9.00Hz,1H)7.11(dd,J＝8.80,2.54Hz,1H)7.27(d,J＝2.35Hz,1H)7.46(br.s.,2H)9.01(s,2H)9.44(s,1H)。
化合物1100；MS:m/z＝344.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.34(dd,J＝5.28,1.37Hz,1H)7.45(dd,J＝5.28,3.33Hz,1H)7.53(s,2H)7.66(dd,J＝3.13,1.57Hz,1H)9.02(d,J＝3.13Hz,2H)10.08(s,1H)。
化合物1101；MS:m/z＝409.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.78(s,3H)7.55(s,2H)7.70(dd,J＝9.00,1.96Hz,1H)7.94(d,J＝8.61Hz,1H)8.31(d,J＝1.96Hz,1H)9.04(d,J＝5.87Hz,2H)9.78(s,1H)。
化合物1102；MS:m/z＝340.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.76(s,2H)8.08(d,J＝5.87Hz,1H)8.66(d,J＝5.48Hz,1H)8.91(s,1H)9.05(d,J＝1.56Hz,1H)9.09(s,1H)10.54(s,1H)。
化合物1103；实施例21中所述。
化合物1104；MS:m/z＝324.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.76-1.92(m,4H)2.88(t,J＝6.06Hz,2H)2.95(t,J＝6.46Hz,2H)7.03-7.09(m,1H)7.25-7.35(m,4H)7.68(d,J＝7.43Hz,2H)8.18(s,1H)9.34(s,1H)。
化合物1105；MS:m/z＝354.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.74-1.93(m,4H),2.87(t,J＝6.06Hz,2H),2.95(t,J＝6.46Hz,2H),3.73(s,3H),6.85-6.92(m,2H),7.24(s,2H),7.53-7.59(m,2H),8.16(s,1H),9.24(s,1H)。
化合物1106；MS:m/z＝342.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.76-1.92(m,4H),2.87(t,J＝6.06Hz,2H),2.95(t,J＝6.46Hz,2H),7.11-7.18(m,2H),7.29(br.s.,2H),7.65-7.72(m,2H),8.18(s,1H),9.41(br.s.,1H)。
化合物1107；MS:m/z＝340.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.21(t,J＝4.70Hz,1H)7.61(s,2H)8.68(d,J＝4.70Hz,2H)9.04(d,J＝5.87Hz,2H)10.42(s,1H)。
化合物1108；MS:m/z＝340.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.70(s,2H)8.37(d,J＝2.74Hz,1H)8.45(dd,J＝2.74,1.57Hz,1H)9.01-9.06(m,1H)9.08(d,J＝1.56Hz,1H)9.27(d,J＝1.57Hz,1H)10.44(s,1H)。
化合物1109；MS:m/z＝340.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.67(s,2H)8.89(s,1H)9.05(d,J＝1.56Hz,1H)9.08(d,J＝1.57Hz,1H)9.10(s,2H)10.00(s,1H).
化合物1110；MS:m/z＝378.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.44-7.52(m,3H)7.53-7.59(m,1H)8.03(s,1H)8.06(s,1H)9.02(s,2H)9.64(s,1H)12.99(s,1H)。
化合物1111；实施例22中所述。
化合物1112；实施例23中所述。
化合物1113；MS:m/z＝338.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.66(br.s.,4H),1.85(d,J＝4.70Hz,2H),2.85-2.91(m,2H),3.08(d,J＝10.96Hz,2H),6.99-7.13(m,1H),7.21-7.37(m,4H),7.63-7.75(m,2H),8.19(s,1H),9.35(s,1H)。
化合物1114；MS:m/z＝314.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43(s,3H),3.74(br.s,2H),6.90(d,J＝9.00Hz,2H),7.26(s,2H),7.57(d,J＝9.00Hz,2H),8.30(dd,J＝2.15,0.98Hz,1H),8.53(d,J＝1.57Hz,1H),9.30(s,1H)。
化合物1115；MS:m/z＝302.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43(s,3H),7.16(t,J＝8.80Hz,2H),7.32(s,2H),7.70(dd,J＝9.39,5.09Hz,2H),8.32(dd,J＝1.96,0.78Hz,1H),8.54(d,J＝1.57Hz,1H),9.47(s,1H)。
化合物1116；MS:m/z＝368.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.75(s,3H),6.92(br.s,2H),6.93(d,J＝9.00Hz,2H),7.58(d,J＝9.00Hz,2H),7.99(d,J＝8.61Hz,1H),8.77(d,J＝8.22Hz,1H),9.63(s,1H)。
化合物1117；MS:m/z＝356.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.98(s,2H),7.19(t,J＝8.80Hz,2H),7.71(dd,J＝9.39,5.09Hz,2H),8.01(d,J＝8.22Hz,1H),8.78(d,J＝8.61Hz,1H),9.79(s,1H)。
化合物1118；实施例16中所述。
化合物1119；MS:m/z＝313.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43(s,3H),3.74(s,3H),6.89(d,J＝9.00Hz,2H),7.13(s,2H),7.33(dd,J＝8.41,1.37Hz,1H),7.56(d,J＝9.00Hz,2H),7.74(d,J＝8.22Hz,1H),7.89(s,1H),9.19(s,1H)。
化合物1120；MS:m/z＝301.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43(s,3H),7.15(t,J＝9.00Hz,2H),7.19(s,2H),7.35(dd,J＝8.41,1.37Hz,1H),7.69(dd,J＝9.00,5.48Hz,2H),7.75(d,J＝8.22Hz,1H),7.91(s,1H),9.37(s,1H)。
化合物1121；MS:m/z＝386.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.82(s,3H)7.14(dd,J＝11.35,8.61Hz,1H)7.25-7.33(m,1H)7.46-7.62(m,3H)9.03(d,J＝5.09Hz,2H)9.61(s,1H)。
化合物1122；MS:m/z＝382.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.30(t,J＝7.04Hz,3H)3.99(q,J＝6.91Hz,2H)6.83-6.92(m,2H)7.45(s,2H)7.50-7.58(m,2H)9.01(s,2H)9.48(s,1H)。
化合物1123；MS:m/z＝381.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.23(br.s.,1H)7.58(s,2H)7.78(d,J＝9.00Hz,2H)7.84(d,J＝9.00Hz,3H)9.04(d,J＝6.26Hz,2H)9.78(s,1H)。
化合物1124；MS:m/z＝395.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.76(d,J＝4.30Hz,3H)7.58(s,2H)7.79(s,4H)8.32(d,J＝4.70Hz,1H)9.04(d,J＝5.87Hz,2H)9.77(s,1H)。
化合物1125；MS:m/z＝396.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.82(s,3H)7.62(s,2H)7.85-7.96(m,4H)8.99-9.09(m,2H)9.90(s,1H)。
化合物1126；MS:m/z＝381.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.86(s,6H)6.69(d,J＝9.39Hz,2H)7.35-7.50(m,4H)8.99(s,2H)9.36(s,1H)。
化合物1127；MS:m/z＝417.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.25(s,2H)7.62(s,2H)7.72-7.80(m,2H)7.85-7.93(m,2H)8.99-9.10(m,2H)9.90(s,1H)。
化合物1128；MS:m/z＝357.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.58(s,2H)7.77(td,J＝8.71,2.93Hz,1H)8.05(dd,J＝9.19,4.11Hz,1H)8.37(d,J＝3.13Hz,1H)8.99-9.08(m,2H)10.16(s,1H)。
化合物1129；MS:m/z＝314.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.63(s,3H),3.75(s,3H),6.75(br.s,2H),6.91(d,J＝9.00Hz,2H),7.41(d,J＝8.61Hz,1H),7.57(d,J＝9.00Hz,2H),8.29(d,J＝8.22Hz,1H),9.40(s,1H)。
化合物1130；MS:m/z＝315.0/317.0(M-H)-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.43(s,3H),7.23(s,2H),7.35(dd,J＝7.83,1.57Hz,1H),7.36(d,J＝9.00Hz,3H),7.76(d,J＝8.22Hz,1H),7.74(d,J＝9.00Hz,3H),7.92(s,1H),9.43(s,1H)。
化合物1131；LCMS:m/z＝297.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.27(s,3H),2.43(s,3H),7.12(d,J＝8.22Hz,2H),7.16(s,2H),7.34(dd,J＝8.22,0.78Hz,1H),7.56(d,J＝8.22Hz,2H),7.75(d,J＝8.22Hz,1H),7.90(s,1H),9.22(s,1H)。
化合物1132；MS:m/z＝361.0/363.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.43(s,3H),7.24(s,2H),7.35(dd,J＝8.22,1.17Hz,1H),7.49(d,J＝9.00Hz,2H),7.69(d,J＝9.00Hz,2H),7.76(d,J＝8.22Hz,1H),7.92(s,1H),9.43(s,1H)。
化合物1133；MS:m/z＝384.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.45(s,3H),7.24(m,J＝8.61Hz,2H),7.51(s,2H),7.65(m,J＝8.61Hz,2H),9.02(d,J＝1.17Hz,2H),9.61(s,1H)。
化合物1134；实施例24中所述。
化合物1135；MS:m/z＝348.2,/350.2(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43(s,3H),3.83(s,3H),7.11(d,J＝9.00Hz,1H),7.32(br.s.,2H),7.58(dd,J＝9.00,2.35Hz,1H),7.87(d,J＝2.74Hz,1H),8.31(s,1H),8.52(s,1H),9.42(br.s.,1H)。
化合物1136；MS:m/z＝401.0/403.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.84(s,3H),7.13(d,J＝9.00Hz,1H),7.43(s,2H),7.60(dd,J＝9.00,2.74Hz,1H),7.79(d,J＝8.61Hz,1H),7.86(d,J＝2.74Hz,1H),8.15(d,J＝8.22Hz,1H),8.62(s,1H),9.53(s,1H)。
化合物1137；MS:m/z＝352.2(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43(s,3H),7.42(br.s.,2H),7.67(m,J＝8.61Hz,2H),7.94(m,J＝8.61Hz,2H),8.34(s,1H),8.53-8.56(m,1H),9.74(br.s.,1H)。
化合物1138；MS:m/z＝405.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.54(s,2H),7.69(d,J＝9.00Hz,2H),7.81(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H),7.96(d,J＝8.61Hz,2H),8.17(d,J＝8.22Hz,1H),8.65(s,1H),9.86(s,1H)。
化合物1139；MS:m/z＝318.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.41(s,3H)7.07-7.13(m,1H)7.33(t,J＝8.02Hz,1H)7.38(s,2H)7.61-7.66(m,1H)7.90(t,J＝2.15Hz,1H)8.33(d,J＝1.17Hz,1H)8.53(d,J＝1.96Hz,1H)9.54(s,1H)。
化合物1140；MS:m/z＝298.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.28(s,3H)2.41(s,3H)6.87(d,J＝7.43Hz,1H)7.18(t,J＝7.63Hz,1H)7.29(s,2H)7.46(d,J＝7.43Hz,1H)7.53(s,1H)8.28-8.32(m,1H)8.52(d,J＝1.57Hz,1H)9.30(s,1H)。
化合物1141；MS:m/z＝342.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.41(s,3H)4.16-4.24(m,4H)6.77(d,J＝9.00Hz,1H)7.10(dd,J＝8.80,2.54Hz,1H)7.20-7.31(m,3H)8.29(d,J＝1.17Hz,1H)8.51(d,J＝1.96Hz,1H)9.23(s,1H)。
化合物1142；MS:m/z＝328.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.30(t,J＝7.04Hz,3H)2.41(s,3H)3.98(q,J＝6.78Hz,2H)6.82-6.90(m,2H)7.23(s,2H)7.48-7.57(m,2H)8.25-8.31(m,1H)8.51(d,J＝1.96Hz,1H)9.27(s,1H)。
化合物1143；MS:m/z＝330.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.41(s,3H)2.44(s,3H)7.18-7.26(m,2H)7.30(s,2H)7.61-7.68(m,2H)8.30(d,J＝1.17Hz,1H)8.52(d,J＝1.56Hz,1H)9.40(s,1H)。
化合物1144；MS:m/z＝371.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.11(dt,J＝6.85,1.08Hz,1H)7.34(t,J＝8.02Hz,1H)7.48(s,2H)7.60-7.67(m,1H)7.79(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H)7.89(t,J＝2.15Hz,1H)8.14(d,J＝8.61Hz,1H)8.62(s,1H)9.66(s,1H)。
化合物1145；MS:m/z＝351.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.28(s,3H)6.89(d,J＝7.43Hz,1H)7.19(t,J＝7.63Hz,1H)7.40(s,2H)7.46(d,J＝8.61Hz,1H)7.53(s,1H)7.77(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H)8.13(d,J＝8.61Hz,1H)8.60(s,1H)9.42(s,1H)。
化合物1146；MS:m/z＝395.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm4.15-4.26(m,4H)6.78(d,J＝8.61Hz,1H)7.10(dd,J＝8.80,2.54Hz,1H)7.26(d,J＝2.74Hz,1H)7.35(s,2H)7.76(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H)8.12(d,J＝8.61Hz,1H)8.58(s,1H)9.34(s,1H)。
化合物1147；MS:m/z＝381.1(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.30(t,J＝6.85Hz,3H)3.99(q,J＝6.78Hz,2H)6.84-6.91(m,2H)7.34(s,2H)7.50-7.56(m,2H)7.76(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H)8.12(d,J＝8.61Hz,1H)8.58(s,1H)9.38(s,1H)。
化合物1148；MS:m/z＝383.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.45(s,3H)7.19-7.26(m,2H)7.41(s,2H)7.60-7.69(m,2H)7.77(dd,J＝8.61,1.57Hz,1H)8.13(d,J＝8.22Hz,1H)8.60(s,1H)9.52(s,1H)。
化合物1149；MS:m/z＝368.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.42(s,3H)7.31(d,J＝8.22Hz,2H)7.35(s,2H)7.77-7.83(m,2H)8.32(d,J＝1.17Hz,1H)8.53(d,J＝1.96Hz,1H)9.58(s,1H)。
化合物1150；MS:m/z＝290.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.41(s,3H)7.28-7.39(m,3H)7.43(dd,J＝5.09,3.52Hz,1H)7.64(dd,J＝3.33,1.37Hz,1H)8.30(d,J＝1.17Hz,1H)8.52(d,J＝1.96Hz,1H)9.88(s,1H)。
化合物1151；MS:m/z＝421.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.32(d,J＝8.61Hz,2H)7.45(s,2H)7.75-7.84(m,3H)8.15(d,J＝8.22Hz,1H)8.62(s,1H)9.70(s,1H)。
化合物1152；MS:m/z＝343.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.34(dd,J＝5.09,1.17Hz,1H)7.39-7.47(m,3H)7.65(dd,J＝3.13,1.17Hz,1H)7.77(dd,J＝8.41,1.37Hz,1H)8.13(d,J＝8.22Hz,1H)8.60(s,1H)9.99(s,1H)。
化合物1153；实施例25中所述。
化合物1154；MS:m/z＝340.0(MH+)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.56(s,2H),7.17(t,J＝8.61Hz,2H),7.85(dd,J＝9.39,5.09Hz,2H),8.88(d,J＝2.35Hz,1H),8.90(d,J＝1.96Hz,1H),10.21(s,1H)。
与实施例1和2(表1和2)有关的材料和方法
实施例1
CD34+活性评价
使用RosetteSepTM CD34预富集鸡尾酒从新鲜单位中分离人CD34+脐带血(CB)细胞，然后使用EasySep kitTM(StemCell Technologies)进行CD34阳性选择。然后通过在HSC扩增培养基中于37℃培养6天，将细胞大量预扩增，所述培养基由StemSpanACF(StemCellTechnologies)构成，其补充了100ng/mL干细胞因子(SCF,Shenandoah)、100ng/mL FMS样酪氨酸激酶3配体(FLT3L,Shenandoah)、50ng/mL血小板生成素(TPO,Shenandoah)、2mMGlutaMAXTM(Invitrogen)、10μg/mL低密度脂蛋白(LDL,StemCell Technologies)、10μg/mL环丙沙星和35nM UM0128171。每天监测培养物，并根据需要补充新鲜培养基。预扩增后，收获细胞，等分并冷冻直至使用。
对于各活性评价，在35nM UM0128171的存在下，将CD34+预扩增细胞(在384孔板中，每孔约2000个细胞)在HSC扩增培养基中培养。将化合物在DMSO中连续稀释(1/2)(每个化合物10个稀释度)，然后添加到细胞中，以达到1/1000的最终稀释度。所有实验均包括StemRegenin1(SR1)和/或化合物1001作为对照以监测测试性能。将板在静态条件下(即不摇动且不添加培养基)在37℃下温育7天。在7天扩增期结束时进行流式细胞仪分析。用PE标记的抗人CD45RA(BD Biosciences)和APC标记的抗人CD34(BD Biosciences)将细胞染色，并使用配备了ForeCyt软件的Intellicyt IQue细胞仪进行分析。在关注的种群周围设置门控，以获得细胞数量和相对比例。通过在4-PL曲线中绘制CD34+细胞数相对于浓度(对数标度)的曲线并在Microsoft Excel中使用IDBS XLfit(设置模型251)拟合曲线来计算EC1.5值，即化合物/载体比大于或等于1.5时的浓度。结果呈现于表1和2。
实施例2
抑制AhR介导的基因转录。
用AhR应答性萤火虫荧光素酶报告基因X4-4.27转染HEK细胞系，并将生成的稳定转染子再次用phRL-CMV(海肾荧光素酶表达载体；Promega)以及pBAsi-hU6 PurDNA(携带嘌呤霉素抗性基因的质粒；TaKaRa,Shiga,Japan)转染，并保持在潮霉素B和嘌呤霉素(2mg/mL)的存在下。所得克隆体之一被命名为HEK-XRE 11.1，并用于报告基因测定。
将HEK-XRE 11.1细胞以每孔50uL体积中25,000个细胞的密度接种在384孔板中。通过添加0.1nM浓度的MeBIO完成ARh途径的诱导。然后将ARh拮抗剂化合物以连续稀释(8个稀释度，1:3，10mM至5nM)的方式添加到接种细胞中，一式两份。作为内部对照，不使用海肾表达。在每块板上添加化合物1001和SR1作为剂量对照(8个稀释度，1:3，对于SR1为5mM至2.5nM，对于化合物1001为2mM至1nM)。使用Lumi-384-CellTiterGlo-Corning方案评估培养24小时后的发光活性。使用Excel中的非线性回归生成剂量-响应曲线。结果呈现于表1和2。
与实施例3和4(图1和2)有关的材料和方法
实施例3
体外细胞组成评价
如前所述，从三个脐带血单位中分离出人CD34+脐带血(CB)细胞，并冷冻直至使用。在第一个试验中，解冻后合并两个单位，将CB CD34+细胞在HSC扩增培养基中培养7天，所述培养基补充有35nM UM0128171(称为UM171)、1μM化合物1001、二者的组合或DMSO。每天监测培养物，并根据需要补充新鲜培养基。在第二个试验中，将一个单位解冻，将CB CD34+细胞在HSC扩增培养基中培养7天，所述培养基补充有0.5μM化合物1001(单独或与35nMUM171组合)、0.5μM化合物1114(单独或与35nM UM171组合)、0.5μM SR1(单独或与35nMUM171组合)、DMSO或35nM UM171。
使用以下抗人类抗体的组合分析未扩增(d0)和扩增(d7)的CB细胞的表型：CD34(BD Biosciences)，CD45RA(BD Biosciences or BioLegend)，CD201，CD90和CD117(来自BioLegend)，CD86和FcεR1(皆来自eBiosciences)。在室温下于弱光下染色15-30分钟后，洗涤细胞，并在FACSCanto II(BD Biosciences)流式细胞仪上进行分析。通过将扩增后获得的活细胞总数除以各条件下接种的活细胞总数来计算倍率扩增。对于关注的各子群，如下计算绝对细胞数：
(关注的子群的细胞百分比×活细胞总计数)/100
尽管在所有条件下培养的细胞总数均增加(图1A，左图)，但与其他条件(图1A，中间)相比，在CB培养物中使用化合物1001会增加CD34+细胞(即造血干细胞和祖细胞)的数量。UM171与化合物1001或化合物1114的组合使用可增加培养物中CD34+细胞的总体百分比(图1A，右图，和图1D)。化合物1001或化合物1114的存在(单独或与UM171组合)有利于扩增短期祖细胞中富集的CD34+CD45RA+细胞(图1B、1C和1D)(Doulatov,Sergei,等,Natureimmunology 11.7(2010):585.)。另一方面，培养物中UM171的存在(单独或与化合物1001或化合物1114组合)增加了长期祖细胞中富集的CD34+CD45RA-和CD34+CD201+细胞的扩增(图1B)和比例(图1C和1D)(Majeti,Ravindra,Christopher Y.Park,和Irving L.Weissman.Cellstem cell 1.6(2007):635-645；Notta,Faiyaz,等Science 333.6039(2011):218-221和Fares,Iman,等Blood(2017):blood-2016.)。与单独使用的化合物相比(图1D)，UM171与化合物1001或化合物1114的组合使用还增加了树突状细胞和肥大细胞的百分比。因此，根据UM171和化合物1001或化合物1114的存在，我们可以诱导不同比例的不同类型的造血祖细胞或其他细胞类型。
实施例4
体内移植和骨髓与淋巴谱系贡献的评价
将NSG(NOD.Cg-Prkdcscid I12rgtmlWjl/SzJ,The Jackson Laboratory,ME,USA)小鼠饲养在无特定病原体条件下，并置于免疫学和癌症研究所(Institute for ResearchinImmunology and Cancer)的无菌通风架中。所有动物工作均符合加拿大动物保护理事会准则(Canadian Council on Animal Care guidelines)并获得Comitéde DéontologieetExpérimentation Animale de l’Universitéde Montréal的批准。
如前所述从两个脐带血单位中分离出人CD34+脐带血(CB)细胞，并冷冻直至使用。解冻后合并两个单位，将CB CD34+细胞在HSC扩增培养基中培养7天，所述培养基补充有35nM UM0128171、1μM化合物1001、二者的组合或DMSO。每天监测培养物，并根据需要补充新鲜培养基。
通过尾静脉注射将存在于7天培养物中的2000个未扩增的CD34+CB细胞或其后代移植到亚致死量照射(250cGy,移植前不到24小时)的8至12周龄雌性NSG(NODScid IL2Rγnull,Jackson Laboratory)中。在移植后3、12和20周，通过流式细胞仪监测NSG骨髓(BM)中的人类细胞。在第20周处死动物时，通过股气抽吸(第3和12周)或冲洗两个股骨来收集NSGBM细胞。对新鲜收集的BM细胞进行流式细胞仪分析。用1x红细胞裂解缓冲液(StemCellTechnologies)处理细胞，洗涤并用抗人CD45CD45(BioLegend)、抗小鼠CD45.1(eBioscience)和抗人CD33、抗人CD19、抗人CD3和抗人CD34(皆来自BD Biosciences)染色。然后洗涤细胞并使用FACSCanto II(BDBiosciences)进行分析。
CB细胞在UM171的存在下(单独或与化合物1001组合)扩增，导致移植后3周的植入率更高，而CB细胞在化合物1001的存在下(单独或与UM171组合)进行扩增，长期(移植后12和20周，图2A)移植效率更高。此外，在化合物1001的存在下，淋巴谱系的贡献显著增加(图2B)。
尽管已经结合本发明的具体实施方式描述了本说明书，但是应当理解，能够进行进一步的修改，并且本申请旨在覆盖任何变化、使用或改编，包括与本公开内容的背离，如在本领域内的已知或习惯实践中那样，且可应用于上文所述的和所附权利要求的范围内如下所述的基本特征。
本文引用的所有参考文献通过引用整体并入本文。

Claims (17)

1.一种扩增干细胞和/或祖细胞的非治疗方法，所述方法包括将起始细胞群与式I的化合物或其药学上可接受的盐接触，
其中，
X是O或S；
V1是N或CH；
V2是N或CH；
W是N或C；
其中所述V1、V2和W中的不超过一个是N；
R1是卤素、C1-6烷基、C1-6氟烷基、C3-6环烷基、C2-3炔基、C2-3烯基、氰基或COORa，其中Ra是C1-6烷基；
R2是H或C1-6烷基，并且当W是N时，R2不存在；
或者R1和R2与芳环原子附接在一起以形成碳环，所述碳环指与附接的芳族环原子形成环的链(CH2)3-5；
R3是不具有取代基的苯基、在4位单取代的苯基、在3位单取代的苯基、在3和4位双取代的苯基或在3和5位双取代的苯基；或者，R3是未取代或单取代的杂芳基，所述杂芳基选自吡啶基、嘧啶基、噻唑基、苯并噻唑基、异喹啉基、噻吩基和吲唑基，所述苯基或杂芳基上的取代基是卤素、甲基、乙基、甲氧基、羟基甲基、羟基乙基、氰基甲基、甲氧基甲基或苯基中的一种。
2.如权利要求1所述的非治疗方法，其中，所述化合物是式Ia的化合物，
3.如权利要求1所述的非治疗方法，其中，所述化合物是式Ib的化合物，
4.如权利要求1所述的非治疗方法，其中，所述化合物是式Ic的化合物，
5.如权利要求1所述的非治疗方法，其中，所述化合物是式Id的化合物，
6.如权利要求1所述的非治疗方法，其中，所述化合物是式Ie的化合物，
7.如权利要求1至6中任一项所述的非治疗方法，其中，R2是H。
8.如权利要求1至6中任一项所述的非治疗方法，所述方法包括：
i)将所述起始细胞群与用于扩增干细胞和/或祖细胞的第一化合物接触并使所述细胞在第一时间段内扩增，可选地基本去除所述第一化合物，添加所述式I的化合物或其药学上可接受的盐，使所述细胞再在第二时间段内扩增；或者
ii)使所述起始细胞群与用于扩增干细胞和/或祖细胞的第一化合物和所述式I的化合物接触，
其中所述第一化合物选自：
9.如权利要求1所述的非治疗方法，其中，所述化合物选自表1或表2的化合物或其药学上可接受的盐：
表1
表2
10.式Ib、式Ic或式Id的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
R1是F、C1-6烷基、C1-6氟烷基、C3-6环烷基、C2-3炔基、C2-3烯基、氰基或COORa，其中Ra是C1-6烷基；
R2是H或甲基，并且当W是N时，R2不存在；
或者R1和R2与芳环原子附接在一起以形成碳环，所述碳环指与附接的芳族环原子形成环的链(CH2)3-5；
R3是不具有取代基的苯基、在4位单取代的苯基、在3位单取代的苯基、在3和4位双取代的苯基或在3和5位双取代的苯基；或者，R3是未取代或单取代的杂芳基，所述杂芳基选自吡啶基、嘧啶基、噻唑基、苯并噻唑基、异喹啉基、噻吩基和吲唑基，所述苯基或杂芳基上的取代基是卤素、甲基、乙基、甲氧基、羟基甲基、羟基乙基、氰基甲基、甲氧基甲基或苯基中的一种。
11.如权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R2是H。
12.如权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R3是可选地单取代的5或6元杂芳基。
13.一种化合物或其药学上可接受的盐，
其中，所述化合物选自表1和2的化合物：
表1
表2
14.如权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自以下化合物或其药学上可接受的盐:
15.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求10至14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及可选的药学上可接受的载体。
16.如权利要求15所述的药物组合物，所述药物组合物用于通过扩增干细胞和/或祖细胞治疗造血障碍、造血恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病。
17.一种化合物在药物制备中的应用，所述药物用于通过扩增干细胞和/或祖细胞治疗造血障碍、造血恶性肿瘤、自体免疫疾病和/或遗传性免疫缺陷疾病，
其中，所述化合物是权利要求1至7和9中任一项所述的非治疗方法中定义的化合物或权利要求10至14中任一项所述的化合物。
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