CN111413392B - 一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,本发明将石蒜属种子的胚剖取出来,用手持式组织研磨棒在溶剂中进行破碎处理,将一定量振荡处理后的溶液移入不同的缓冲溶液中,使其成为较为稳定的悬浊液,再进行脉冲伏安法扫描采集电化学信号,构建电化学图谱。本发明提供的采集方法简便易操作,能快速构建出石蒜属种子的电化学图谱。本发明对石蒜属种子的分析取用的是种子内的胚,避免了种子内大量淀粉对电化学信号采集的影响;本方法在溶剂中对胚进行研磨处理,使其在溶剂中均匀分布;在采集石蒜属种子的电化学图谱过程中,所使用的设备以及试剂成本较低。
Description
技术领域
本发明属于植物电化学分析技术领域,特别是涉及一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法。
背景技术
石蒜属植物是多年生草本植物,在世界范围内约有20余种,原产于中国和日本,少数产于缅甸和朝鲜。我国约有15种,主要分布于长江流域,尤以温暖地区种类较多。石蒜不仅具有良好的观赏价值,还是具有可观的药用价值。石蒜属植物的鳞茎中含有石蒜碱、加兰他敏、力可拉敏等多种生物碱,其中加兰他敏是治疗阿尔兹海默症、小儿麻痹后遗症药物中的有效成分。
目前,国内对于石蒜属植物的研究主要集中在遗传多样性分析、组织培养体系的建立和生物碱提取方法等方面,对石蒜属植物种子的相关研究报道较少。对于其遗传多样性的分析,目前采取的方法主要有形态性状估测法、细胞学标记法、生化标记法、DNA分子标记法等。形态性状估测法的不稳定因素较多,细胞学标记法耗力多、耗时长,生化标记法在应用上存在限定范围,DNA分子标记法则有实验成本高、检测步骤复杂等缺点。
植物种子中包含了大量与之相关的遗传信息。石蒜属植物属于被子植物,可通过种子繁殖,因此对石蒜种子的遗传信息进行采集分析是一种较为科学的石蒜属植物分析方法。
例如,中国专利CN108456719A公开了一种分析辣木亲缘关系的反应体系、试剂盒及其应用方法,该方法通过SRAP分子标记技术从170对引物中筛选出13对多态性好、清晰度高的引物,对18份辣木DNA进行标记,并使用NTSYS软件完成对数据的分析和UPGMA聚类,进一步研究辣木亲缘关系和遗传多样性,但是该方法分析过程复杂,不利于推广应用。
本发明针对市场上现有技术的缺点与不足,设计了一种针对石蒜属种子的电化学图谱采集方法。该方法能够快速采集石蒜属种子中的遗传物质信息。
发明内容
本发明的目的在于提供一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法。本发明的方法具有采集速度快、实验成本低、简便高效等优点。
为了达到上述的目的,本发明采取以下技术方案:
一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,包括如下步骤:
(1)将待测样品的种子剖开后,取种子的胚分别加入两种不同溶剂中,进行研磨超声萃取,得到两种不同的萃取液;所述胚与溶剂的加入量的比值为(1~2)个:(20~50)μL;
(2)用移液枪移取一定量的两种萃取液,分别加至两种固定量的缓冲溶液中,进行超声振荡使溶液中各组分混合均匀,形成较为稳定的悬浊液;缓冲溶液为磷酸缓冲溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液或者柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中的一种,缓冲溶液的浓度为0.1mol/L~0.3mol/L;种胚萃取液和缓冲溶液的体积比为(3~5):(15000~20000);
(3)将玻碳电极、铂电极、银/氯化银电极组成的三电极体系分别插入至步骤(2)的四种悬浊液中,通过脉冲伏安法扫描采集样品电化学信号;脉冲伏安法扫描的扫描区间为1.6~0V;
(4)将步骤(3)经多次扫描得到的电化学信号进行分析处理,叠加构建样品的电化学图谱。
作为优选,所述步骤(1)中溶剂为水、无水乙醇或乙二醇。
作为优选,所述步骤(1)中研磨是在溶剂中对植物组织进行破碎处理。
作为优选,所述步骤(1)中研磨时间为1min~2min。
作为优选,所述步骤(1)中超声萃取时间为2~5min。
作为优选,所述步骤(3)中扫描速度为5~10mV/s;采样间隔为1~5mV。
作为优选,所述步骤(4)同一溶液进行脉冲伏安法扫描的次数为5次~6次。
本发明提供了一种以电化学图谱技术为基础,对石蒜属种子进行电化学图谱采集的方法。将石蒜属种子的胚剖取出来,用手持式组织研磨棒在溶剂中进行破碎处理,将一
定量振荡处理后的溶液移入不同的缓冲溶液中,使其成为较为稳定的悬浊液,再进行脉
冲伏安法扫描采集电化学信号,构建电化学图谱。本发明提供的采集方法简便易操作,能快速构建出石蒜属种子的电化学图谱。
本发明具有的有益效果是:本发明对石蒜属种子的分析取用的是种子内的胚,避免
了种子内大量淀粉对电化学信号采集的影响;本方法在溶剂中对胚进行研磨处理,使其在溶剂中均匀分布;在采集石蒜属种子的电化学图谱过程中,所使用的设备以及试剂成
本较低。
附图说明
图1为中国石蒜的电化学图谱;
图2为忽地笑的电化学图谱。
具体实施方式
为了更清晰地展现本发明的实施目的及技术优点,下面将通过具体实施例对本发明提供的方法与技术方案进行进一步的说明。此实施例仅是为了更完整地对本发明进行阐释说明,不应理解成对本发明的限制。
实施例1:对中国石蒜种子电化学图谱的采集。
(1)缓冲溶液的配制:
称取一定量的磷酸二氢钾和磷酸氢二钠溶于水中,配制成pH=7的磷酸缓冲液,磷酸二氢钾和磷酸二氢钠的浓度均为0.1mol/L;称取一定量的醋酸钠和冰醋酸溶于水中,配制成pH=5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液,配制得到醋酸-醋酸钠缓冲溶液的浓度为0.1mol/L。
(2)种子胚体的取样:
取8颗饱满的中国石蒜种子,将种子样品分别从中间部位剖开,用经消毒处理的镊子将胚从包裹的胚乳中取出,得到8颗中国石蒜种子的胚。
(3)萃取液的制备:
各取2个胚分别加入到40μL水、40μL无水乙醇中,用手持式组织研磨棒充分研磨1min,得到2份中国石蒜种子在水中的萃取液和2份中国石蒜种子在无水乙醇中的萃取液,共4份萃取液。
(4)待测悬浊液的制备:
将上述4份萃取液取5μL分别加入到15ml的磷酸缓冲液、15ml的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中,得到水与磷酸缓冲液、水与醋酸-醋酸钠缓冲液、无水乙醇与磷酸缓冲液、无水乙醇与醋酸-醋酸钠缓冲液4种不同的体系,每种体系需5组待测悬浊液,共20组待测样品。
(5)电化学扫描分析:
分别将玻碳电极、铂电极、银/氯化银电极组成的三电极体系插入至上述4种体系悬浊液中,形成回路后进行脉冲伏安法扫描。其中,所述脉冲伏安扫描的扫描区间为1.6V;扫描速度为5mV/s;采样间隔为1mV。
对中国石蒜种子经过脉冲伏安法扫描得到的4种不同体系电化学信号进行分析处理,分别构建样品的电化学图谱,叠加结果如附图1所示。
实施例2:对中国石蒜种子电化学图谱的采集
(1)缓冲溶液的配制:
称取一定量的磷酸二氢钾和磷酸氢二钠溶于水中,配制成pH=7的磷酸缓冲液,磷酸二氢钾和磷酸二氢钠的浓度均为0.3mol/L;称取一定量的醋酸钠和冰醋酸溶于水中,配制成pH=5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液,配制得到醋酸-醋酸钠缓冲溶液的浓度为0.3mol/L。
(2)种子胚体的取样:
取8颗饱满的中国石蒜种子,将种子样品分别从中间部位剖开,用经消毒处理的镊子将胚从包裹的胚乳中取出,得到8颗中国石蒜种子的胚。
(3)萃取液的制备:
各取2个胚分别加入到50μL水、50μL无水乙醇中,用手持式组织研磨棒充分研磨1min,得到2份中国石蒜种子在水中的萃取液和2份中国石蒜种子在无水乙醇中的萃取液,共4份萃取液。
(4)待测悬浊液的制备:
将上述4份萃取液取3μL分别加入到20ml的磷酸缓冲液、20ml的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中,得到水与磷酸缓冲液、水与醋酸-醋酸钠缓冲液、无水乙醇与磷酸缓冲液、无水乙醇与醋酸-醋酸钠缓冲液4种不同的体系,每种体系需5组待测悬浊液,共20组待测样品。
(5)电化学扫描分析:
分别将玻碳电极、铂电极、银/氯化银电极组成的三电极体系插入至上述4种体系悬浊液中,形成回路后进行脉冲伏安法扫描。其中,所述脉冲伏安扫描的扫描区间为1V;扫描速度为6mV/s;采样间隔为3mV。
实施例3:对忽地笑种子电化学图谱的采集。
(1)缓冲溶液的配制:
称取一定量的磷酸二氢钾和磷酸氢二钠溶于水中,配制成pH=7的磷酸缓冲液,磷酸二氢钾和磷酸二氢钠的浓度均为0.1mol/L;称取一定量的柠檬酸和柠檬酸钠溶于水中,配制成pH=5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液,柠檬酸和柠檬酸钠的浓度均为0.1mol/L。
(2)种子胚体的取样:
取8颗饱满的忽地笑种子,将种子样品分别从中间部位剖开,用经消毒处理的镊子将胚从包裹的胚乳中取出,得到8颗忽地笑种子的胚。
(3)萃取液的制备:
各取2个胚分别加入到50μL水、50μL无水乙醇中,用手持式组织研磨棒充分研磨1min,得到2份忽地笑种子在水中的萃取液和2份忽地笑种子在无水乙醇中的萃取液,共4份萃取液。
(4)待测悬浊液的制备:
将上述4份萃取液取5μL分别加入到20ml的磷酸缓冲液、20ml的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中,得到水与磷酸缓冲液、水与柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液、无水乙醇与磷酸缓冲液、无水乙醇与柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液4种不同的体系,每种体系需5组待测悬浊液,共20组待测样品。
(5)电化学扫描分析:
分别将玻碳电极、铂电极、银/氯化银电极组成的三电极体系插入至上述4种体系悬浊液中,形成回路后进行脉冲伏安法扫描。其中,所述脉冲伏安扫描的扫描区间为1.6~0V;扫描速度为5~10mV/s;采样间隔为1~5mV。
对忽地笑种子经过脉冲伏安法扫描得到的4种不同体系电化学信号进行分析处理,分别构建样品的电化学图谱,结果如附图2所示。
由以上实施例可知,本发明提供了一种以电化学图谱技术为基础,对石蒜属种子进行电化学图谱采集的方法。将石蒜属种子的胚剖取出来,用手持式组织研磨棒在溶剂中进行破碎处理,将振荡处理后的萃取液移入两种缓冲溶液中,使其成为较为稳定的悬浊液,再进行脉冲伏安法扫描采集电化学信号,构建电化学图谱。本发明提供的采集方法简便易操作且实验成本较低,能快速构建出石蒜属种子的电化学图谱。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明方法及其核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求保护范围内。
Claims (7)
1.一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,其特征在于,该方法具体包括以下步骤:
(1)将待测样品的种子剖开后,取种子的胚分别加入两种不同溶剂中,进行研磨超声萃取,得到两种不同的萃取液;所述胚与溶剂的加入量的比值为(1~2)个:(20~50)μL;
(2)用移液枪移取一定量的两种萃取液,分别加至两种固定量的缓冲溶液中,进行超声振荡使溶液中各组分混合均匀,形成较为稳定的悬浊液;缓冲溶液为磷酸缓冲溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液或者柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中的一种,缓冲溶液的浓度为0.1mol/L~0.3mol/L;种胚萃取液和缓冲溶液的体积比为(3~5):(15000~20000);
(3)将玻碳电极、铂电极、银/氯化银电极组成的三电极体系分别插入至步骤(2)的四种悬浊液中,通过脉冲伏安法扫描采集样品电化学信号;脉冲伏安法扫描的扫描区间为1.6~0V;
(4)将步骤(3)经多次扫描得到的电化学信号进行分析处理,叠加构建样品的电化学图谱。
2.根据权利要求1所述的一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,其特征在于:所述步骤(1)中溶剂为水、无水乙醇或乙二醇。
3.根据权利要求1所述的一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,其特征在于:所述步骤(1)中研磨是在溶剂中对植物组织进行破碎处理。
4.根据权利要求1所述的一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,其特征在于:所述步骤(1)中研磨时间为1min~2min。
5.根据权利要求1所述的一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,其特征在于:所述步骤(1)中超声萃取时间为2~5min。
6.根据权利要求1所述的一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,其特征在于:所述步骤(3)中扫描速度为5~10mV/s;采样间隔为1~5mV。
7.根据权利要求1所述的一种石蒜属种子的电化学图谱采集方法,其特征在于:所述步骤(4)同一溶液进行脉冲伏安法扫描的次数为5次~6次。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108680621A (zh) * | 2018-05-21 | 2018-10-19 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一种植物种类的鉴别方法 |
CN108717002A (zh) * | 2018-05-30 | 2018-10-30 | 杭州电子科技大学 | 一种检测忽地笑中加兰他敏的方法 |
CN109187673A (zh) * | 2018-10-24 | 2019-01-11 | 杭州电子科技大学 | 一种基于花粉的植物亲缘关系鉴定方法 |
CN109655519A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-04-19 | 杭州电子科技大学 | 一种雌雄异株植物的性别鉴定方法 |
CN109655517A (zh) * | 2019-01-29 | 2019-04-19 | 杭州电子科技大学 | 一种水产品中2-甲基异茨醇的检测方式 |
-
2020
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108680621A (zh) * | 2018-05-21 | 2018-10-19 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一种植物种类的鉴别方法 |
CN108717002A (zh) * | 2018-05-30 | 2018-10-30 | 杭州电子科技大学 | 一种检测忽地笑中加兰他敏的方法 |
CN109187673A (zh) * | 2018-10-24 | 2019-01-11 | 杭州电子科技大学 | 一种基于花粉的植物亲缘关系鉴定方法 |
CN109655517A (zh) * | 2019-01-29 | 2019-04-19 | 杭州电子科技大学 | 一种水产品中2-甲基异茨醇的检测方式 |
CN109655519A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-04-19 | 杭州电子科技大学 | 一种雌雄异株植物的性别鉴定方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
An electrochemical method for plant species determination and classification based on fingerprinting petal tissue;Li Fu et.al;《Bioelectrochemistry》;20190605;第129卷;第199-205页 * |
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Publication number | Publication date |
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