CN111363852A - 一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒 - Google Patents

一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN111363852A
CN111363852A CN202010313939.9A CN202010313939A CN111363852A CN 111363852 A CN111363852 A CN 111363852A CN 202010313939 A CN202010313939 A CN 202010313939A CN 111363852 A CN111363852 A CN 111363852A
Authority
CN
China
Prior art keywords
swine fever
african swine
pcr reaction
sample
10min
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN202010313939.9A
Other languages
English (en)
Inventor
叶繁全
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN202010313939.9A priority Critical patent/CN111363852A/zh
Publication of CN111363852A publication Critical patent/CN111363852A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒，所述试剂盒由20支PCR反应管、300μl PCR反应混合物、2.0g琼脂糖、100μl溴化乙锭10μg/μl、0.25％溴酚蓝点样缓冲液100μl、5μl Taq酶(5U/μl)组成，其中PCR反应混合物包含引物序列Primer:F 5’‑CTGGCATAGGACGGAGTA‑3’，R 5’‑CGCAACATTCGCATCTAC‑3，所述试剂盒的有益效果为引物序列高度保守，可以检测不同来源，突变的非洲猪瘟病毒，可以更好的应对非洲猪瘟病毒突变。

Description

一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒。
背景技术
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪痘病毒(African swine fevervirus,ASFV)感染引起的，巧猪、豪猪、野猪及家养猪易感，猪一旦感染后，主要临床症状表现为高热、食欲废绝、皮肤发绀，剖检后会发现淋巴结、肾、胃肠黏膜等出血，毒力强的毒株感染猪后，造成的病死率可高达100％，虽然无该病毒感染人的报道，但发生该病后对养猪业带来极大的危害，动物产品的销售、贸易等均受到严重限制，因此世界动物卫生组织将其列为法定上报的动物疫病，在我国动物病原微生物名录中，也被列为一类动物疾病。
ASFV二十面体对称，病毒粒子直径200nm，结构呈同心球状，最中央区域为核质体，其直径约80nm，由病毒基因组、完成基因早期转录所必需的酶以及一些DNA结合蛋白组成，如p150、p37、p34、p14以及p14.5、p10，核质体外围是一些蛋白组成的核衣壳，壳粒是其基本结构单位，共有1982-2172个。
1921年，ASF最早在肯尼亚出现，随后的几十年里该病发生于撒哈拉沙漠周边一些国家，1957年非洲大陆外的葡萄牙国家首次爆发该病，葡萄牙的这次ASF发生后很快就被控制和消灭掉，到了1960年，里斯本附近地区又爆发了ASF，从该病爆发开始到1995年，ASFV在伊比利亚半岛(西班牙和葡萄牙)的许多地区蔓延，上世纪70年代末到80年代中后期，ASFV迅速扩散到世界其他的地方，其中影响较大的是另外一些欧洲国家(如意大利、法国、荷兰、比利时等)和美洲的一些国家，多米尼加共和国和巴西尤其严重。通过追根溯源发现，给健康猪饲喂污染ASFV的机场和港口的泔水，是造成ASFV从疫区国家传播到无疫病国家的主要原因。一旦猪群感染，发病猪及猪肉制品立马成为新的病毒传染源。西班牙ASFV的流行病学资料显示，控制措施如果能落实到位，ASF还是可以清除的，然而在意大利的撒丁岛和非洲大陆，特别是非洲东南部地区，该病毒仍持续存在。上世纪90年代到本世纪初，ASF的流行病学和分布情况发生了改变，开始进入其他的一些地区，包括一些西非国家；1996年科特迪瓦发生ASF，1997年尼日利亚和多哥发生ASF，1999年加纳发生ASF，2003年布基纳法索发生ASF，2010年乍得发生ASF等；在西非发生的同时，马达加斯加和毛里求斯这样的岛屿国家也出现了ASF的流行；2007年，格鲁吉亚首次发生了ASF，随后向西北方向流行，再次进入欧洲大陆。到目前为止，ASF己在非洲、美洲、欧洲及欧亚大陆交界处等许多国家流行，2018年8月3日，中国确诊首例非洲猪瘟疫情，2018年之前，中国没有非洲猪瘟。分子流行病学研究表明：传入中国的非洲猪瘟病毒属基因Ⅱ型，与格鲁吉亚、俄罗斯、波兰公布的毒株全基因组序列同源性为99.95％左右，通常非洲猪瘟跨国境传入的途径主要有四类：一是生猪及其产品国际贸易和走私，二是国际旅客携带的猪肉及其产品，三是国际运输工具上的餐厨剩余物，四是野猪迁徙。中国已查明疫源的68起家猪疫情，传播途径主要有三种：一是生猪及其产品跨区域调运，占全部疫情约19％；二是餐厨剩余物喂猪，占全部疫情约34％；三是人员与车辆带毒传播，这是当前疫情扩散的最主要方式，占全部疫情约46％。
PCR检测具有检测特异性高、灵敏度强、操作简单、可大批量检测等特点，用于检测各种组织、体液中病原微生物的核酸，与其它试验相比，此方法更加快速、敏感，且不需要分离培养病原微生物，并能进行大批量的流行病学调查，Steiger等首先根据AS FV DNA保守区序列设计一对PCR引物，用建立的PCR检测细胞培养和感染组织中的ASFV核酸，虽然该对引物检测时灵敏高，但在血液样品检测时，可能会检出假阳性，并伴有非特异性条带产生，本发明的目的在于提供一种PCR检测方法，具有高度的特异性和能适应ASFV变异的性能。
发明内容
本发明的目的在于提供适宜ASFV变异的PCR诊断试剂盒，其具有高度保守的引物序列，可以更好的应对ASFV的变异以及具有高度的特异性。
本发明的制备和使用过程如下：
1.从NCBI上获得非洲猪瘟序列，通过NCBI Blast功能，获得保守序列，比对结果见图1；
2.使用Primer Premier 6.0针对保守序列设计引物，设计的引物序列为：Primer:F 5’-CTGGCATAGGACGGAGTA-3’，R 5’-CGCAACATTCGCATCTAC-3，扩增区域94354-94632，长度279bp；
3.样品处理
选择多只疑似非洲猪瘟的猪，采集每只病猪的的淋巴结、肾、胃、肠等若干份，-20℃冰箱中保存，并做好记录，称取每份样品10g，剪碎后加入5ml PBS缓冲液(pH值为7.4)，用组织匀浆机低温研磨，反复冻融2次，再次研磨，放入低温离心机以5000r/min离心10min，上清液转移至另一支灭菌离心管内-20℃保存，用于DNA的提取；
4.样品DNA模板提取
将组织匀浆液转移至1.5ml离心管中，煮沸裂解10min，然后以10000r/min低温离心10min，将上清液移入另一支干净离心管内，-20℃保存，备用；
5.试剂盒组成
20支PCR反应管、300μl PCR反应混合物、2.0g琼脂糖、100μl溴化乙锭10μg/μl、0.25％溴酚蓝点样缓冲液100μl、5μl Taq酶(5U/μl)；
6.PCR扩增
取步骤四样品5μl，加入15μl PCR反应混合物、1U Taq酶，PCR反应程序：95℃5min，94℃1min，55℃1min，72℃1min，35个循环；72℃10min，样品出现预定大小的荧光带即为阳性。
本发明的有益效果是：
获得了非洲猪瘟病毒检测试剂盒，所述试剂盒的引物序列高度保守，可以检测不同来源，突变的非洲猪瘟病毒，可以更好的应对非洲猪瘟病毒突变。
附图说明
图1序列对比图
图2特异性检验结果图
图3不同种类非洲猪瘟病毒检测
图4敏感性检验结果图
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1
本实施例涉及的材料和试剂见表1，实验仪器见表2；
表1实验材料和试剂
Figure BDA0002458856520000031
Figure BDA0002458856520000041
表2实验仪器设备
AB104-N电子分析天平 梅特勒-托利多上海有限公司
PTC-200型PCR仪 美国MJResearch公司
DYY-6D型核酸电泳仪 北京市六一仪器厂
GelDoc凝胶成像系统 美国Bio-Rad公司
Sigma3K-15高速冷冻离心机 德国Sigma公司
MilliQIntegral超纯水仪 美国Milipore公司
1.从NCBI上获得非洲猪瘟序列(序列号：U18466.2)，通过NCBI Blast功能，获得保守序列，比对结果见图1；
2.使用Primer Premier 6.0针对保守序列设计引物，设计的引物序列为：Primer:F5’-CTGGCATAGGACGGAGTA-3’，R 5’-CGCAACATTCGCATCTAC-3，扩增区域94354-94632，长度279bp；
3.样品处理
选择多只疑似非洲猪瘟的猪，采集每只病猪的的淋巴结、肾、胃、肠等若干份，-20℃冰箱中保存，并做好记录，称取每份样品10g，剪碎后加入5ml PBS缓冲液(pH值为7.4)，用组织匀浆机低温研磨，反复冻融2次，再次研磨，放入低温离心机以5000r/min离心10min，上清液转移至另一支灭菌离心管内-20℃保存，用于DNA的提取；
4.样品DNA模板提取
将组织匀浆液转移至1.5ml离心管中，煮沸裂解10min，然后以10000r/min低温离心10min，将上清液移入另一支干净离心管内，-20℃保存，备用；
5.试剂盒组成
20支PCR反应管、300μl PCR反应混合物、2.0g琼脂糖、100μl溴化乙锭10μg/μl、0.25％溴酚蓝点样缓冲液100μl、5μl Taq酶(5U/μl)；
6.PCR扩增
取步骤四样品5μl，加入15μl PCR反应混合物、1U Taq酶，PCR反应程序：95℃5min，94℃1min，55℃1min，72℃1min，35个循环；72℃10min，样品出现预定大小的荧光带即为阳性。
实验一试剂盒特异性检验
1.病料的收集和处理
选择多只疑似非洲猪瘟的猪，采集每只病猪的的淋巴结、肾、胃、肠等若干份，-20℃冰箱中保存，并做好记录，称取每份样品10g，剪碎后加入2ml PBS缓冲液(pH值为7.4)，用组织匀浆机低温研磨，反复冻融2次，再次研磨，放入低温离心机以5000r/min离心10min，上清液转移至另一支灭菌离心管内-20℃保存，用于DNA的提取；
2.基因组DNA的提取
将组织匀浆液转移至1.5ml离心管中，煮沸裂解10min，然后以10000r/min低温离心10min，将上清液移入另一支干净离心管内，-20℃保存，备用；
3.用本试剂盒对步骤二的DNA样品，以及猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PrV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductive and respiratory syndrome virus,PRRS)、猪乙型脑炎病毒(Japaneseenceph alitis virus,JEV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus infection,PPI)的cDNA为模板，用设计的引物PCR扩增，观察结果，结果见图2。
根据实验结果可以看出，本试剂盒在猪瘟病毒样品中可以扩增出特异条带，在PrV、PCV2、PRRS、JEV、PPI cDNA为模板的PCR体系中未扩增出特异条带，说明本试剂盒特异性良好。
实验二：应对非洲猪瘟病毒变异能力检测
从NCBI上查找相差比较大的不同区域，不同时间段非洲猪瘟病毒序列(MN641876.1、MH910496.1、MN336500.2、M77121.1、NC044956.1、AY261365.1、NC044942.1、LR536725.1)，人工合成相关的4Kb的DNA序列，插入pGEM-T载体，瞬时转染大肠杆菌DH5а，挑选克隆测序，测序正确的菌株，扩大培养，用本试剂盒PCR检测，实验结果见图3。
实验三：试剂盒敏感性检验
将初始浓度为400ng/μl的标准模板ASFV DNA分别按1：10、1：30、1：50、1：70、1：90、1：100稀释，从每个稀释度各取2μl模板用ASFV PCR试剂盒进行检验，观察结果，实验结果见图4。
结果显示1％稀释的ASFV DNA模板也能用本试剂盒检测出来。
从实验结果可以看出，均出现了目的条带，说明本试剂盒能够很好的检测不同类型的非洲猪瘟病毒，具有很好的抗病毒变异功能。
实验三：与其他方法的比较
收集猪血液95份，用本试剂盒与HA、ELISA方法分别检测样品，观察结果，实验结果见表3。
表3不同检测方法非洲猪瘟病毒检出率
方法 阳性检出个数 阳性检出率(％)
PCR 23 24.2
ELISA 14 14.7
HA 17 17.9

Claims (2)

1.一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒检测试剂盒包括：20支PCR反应管、300μl PCR反应混合物、2.0g琼脂糖、100μl溴化乙锭10μg/μl、0.25％溴酚蓝点样缓冲液100μl、5μl Taq酶(5U/μl)，其中PCR反应混合物包含引物序列：Primer:F 5’-CTGGCATAGGACGGAGTA-3’，R 5’-CGCAACATTCGCATCTAC-3；
2.一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒检测试剂盒的制备和使用过程如下：
1)从NCBI上获得非洲猪瘟序列，通过NCBI Blast功能，获得保守序列；
2)使用Primer Premier 6.0针对保守序列设计引物，设计的引物序列为：Primer:F5’-CTGGCATAGGACGGAGTA-3’，R 5’-CGCAACATTCGCATCTAC-3，扩增区域94354-94632，长度279bp；
3)样品处理
选择多只疑似非洲猪瘟的猪，采集每只病猪的的淋巴结、肾、胃、肠等若干份，-20℃冰箱中保存，并做好记录，称取每份样品10g，剪碎后加入5ml PBS缓冲液(pH值为7.4)，用组织匀浆机低温研磨，反复冻融2次，再次研磨，放入低温离心机以5000r/min离心10min，上清液转移至另一支灭菌离心管内-20℃保存，用于DNA的提取；
4)样品DNA模板提取
将组织匀浆液转移至1.5ml离心管中，煮沸裂解10min，然后以10000r/min低温离心10min，将上清液移入另一支干净离心管内，-20℃保存，备用；
5)试剂盒组成
20支PCR反应管、300μl PCR反应混合物、2.0g琼脂糖、100μl溴化乙锭10μg/μl、0.25％溴酚蓝点样缓冲液100μl、5μl Taq酶(5U/μl)；
6)PCR扩增
取步骤四样品5μl，加入15μl PCR反应混合物、1U Taq酶，PCR反应程序：95℃5min，94℃1min，55℃1min，72℃1min，35个循环；72℃10min，样品出现预定大小的荧光带即为阳性。
CN202010313939.9A 2020-04-20 2020-04-20 一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒 Withdrawn CN111363852A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010313939.9A CN111363852A (zh) 2020-04-20 2020-04-20 一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010313939.9A CN111363852A (zh) 2020-04-20 2020-04-20 一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111363852A true CN111363852A (zh) 2020-07-03

Family

ID=71203529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010313939.9A Withdrawn CN111363852A (zh) 2020-04-20 2020-04-20 一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111363852A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113073146A (zh) * 2021-03-30 2021-07-06 铭基食品有限公司 Bax全自动病原微生物快速检测系统在非洲猪瘟病毒检测中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103320536A (zh) * 2013-07-01 2013-09-25 青岛农业大学 一种非洲猪瘟pcr检测方法及寡核苷酸引物对
CN105695634A (zh) * 2016-03-28 2016-06-22 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 检测非洲猪瘟病毒的pcr引物、试剂盒及其应用
CN109593893A (zh) * 2019-02-03 2019-04-09 郑州中道生物技术有限公司 非洲猪瘟病毒荧光pcr快速检测试剂盒
CN110438260A (zh) * 2019-07-29 2019-11-12 华南农业大学 一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒
CN110551853A (zh) * 2019-09-19 2019-12-10 华南农业大学 一种快速区分非洲猪瘟病毒野毒株与基因缺失株的三重pcr检测引物及试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103320536A (zh) * 2013-07-01 2013-09-25 青岛农业大学 一种非洲猪瘟pcr检测方法及寡核苷酸引物对
CN105695634A (zh) * 2016-03-28 2016-06-22 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 检测非洲猪瘟病毒的pcr引物、试剂盒及其应用
CN109593893A (zh) * 2019-02-03 2019-04-09 郑州中道生物技术有限公司 非洲猪瘟病毒荧光pcr快速检测试剂盒
CN110438260A (zh) * 2019-07-29 2019-11-12 华南农业大学 一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒
CN110551853A (zh) * 2019-09-19 2019-12-10 华南农业大学 一种快速区分非洲猪瘟病毒野毒株与基因缺失株的三重pcr检测引物及试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANNA LACASTA等: "Expression library immunization can confer protection against lethal challenge with African swine fever virus", 《JOURNAL OF VIROLOGY》 *
DONATELLA BACCIU等: "Genomic analysis of Sardinian 26544/OG10 isolate of African swine fever virus", 《VIROLOGY REPORTS》 *
李洪利等: "非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用", 《中国畜牧兽医》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113073146A (zh) * 2021-03-30 2021-07-06 铭基食品有限公司 Bax全自动病原微生物快速检测系统在非洲猪瘟病毒检测中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107586887B (zh) 一种猪圆环病毒2型与3型pcr鉴别诊断试剂盒及其检测方法
CN110453011B (zh) 一种基于CRISPR/Cas12a快速精准检测非洲猪瘟病毒的方法及应用
CN106947838A (zh) 非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光lamp检测引物组、试剂盒及检测方法
CN111286559A (zh) 检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒
CN102212617B (zh) 用于检测猪瘟病毒野毒株的引物对、探针、以及试剂盒
CN110904270A (zh) 猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT-PCR检测方法及应用
CN114015815A (zh) 猪非典型瘟病毒的微滴数字pcr试剂盒及其检测方法
CN111363852A (zh) 一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒
CN110607398B (zh) 一种荧光可视化快速检测猪流行性腹泻病毒的rt-lamp试剂盒
CN116814859A (zh) 鉴别非洲猪瘟病毒基因ⅰ型和ⅱ型的引物探针组合物、试剂盒及方法
CN113293233A (zh) 一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒
CN111154917B (zh) 鉴别猪伪狂犬病毒变异毒株的pcr引物及方法
CN113215154B (zh) TGEV、PEDV、PDCoV三重PCR检测的引物组合、试剂盒及其应用
CN109321683A (zh) 一种a型塞尼卡病毒检测引物、试剂盒、病毒检测方法和应用
CN107828916A (zh) 用于检测猪圆环病毒3型的引物、pcr试剂盒及应用
CN114085929A (zh) 一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和疫苗株的试剂盒
CN113493850A (zh) 实时荧光定量检测猪全血弓形体和附红细胞体的pcr引物探针组、试剂盒及其检测方法
CN110257560B (zh) 一种用于蓝舌病病毒8型检测的试剂、检测方法及应用
CN113604609A (zh) 一种检测SARS-CoV-2与其D614G突变株的引物组合及其应用
CN111172319A (zh) 一种检测猪流行性腹泻病毒的引物对及其试剂盒和应用
CN108441581A (zh) 一种检测猪瘟病毒的方法
CN109355393A (zh) 宫颈小细胞癌相关的hpv整合基因位点及其应用
CN112501351B (zh) 尼帕病毒TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒及其应用
RU2731716C1 (ru) Набор для дифференциации пестивирусов крупного рогатого скота и способ дифференциации пестивирусов крупного рогатого скота
CN114277191B (zh) 一种检测非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒的引物组合物及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20200703