CN111363690B - 一株裂解性能强的蛭弧菌诱变株及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一株裂解性能强的蛭弧菌诱变株及其应用，属于微生物诱变育种技术领域。所述蛭弧菌诱变株为Bdellovibrio sp.BDN‑1F2，于2018年6月11日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO：60385。本发明利用Co60辐照诱导突变法以增强蛭弧菌的裂解性能，有效地提高了蛭弧菌对革兰氏阴性以及阳性致病菌的裂解能力，拓宽了蛭弧菌的应用范围、更好地满足生产实践的需要。对本发明蛭弧菌诱变株的裂解性能进行检验证实可裂解原来不能裂解的两株致病弧菌，且增强了对革兰氏阳性菌的裂解能力，为更多以阳性菌为宿主的蛭弧菌分离及性能增强提供了方法基础。
Description
技术领域
本发明属于微生物诱变育种技术领域，特别涉及Co60辐射诱变在增强一株以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为寄生宿主的蛭弧菌裂解性能中的应用，尤其涉及一株裂解性能强的蛭弧菌诱变株及其应用。
背景技术
蛭弧菌是一类能够裂解其它细菌的小型细菌，它可以寄生并裂解大多数科、属的革兰氏阴性细菌，对一些致病菌的裂解作用使其具有了重要的价值。因此大多数蛭弧菌的培养均选择革兰氏阴性菌为宿主，常用的如大肠杆菌。
蛭弧菌的生长繁殖也受到各种因素影响，包括宿主。首先要有足够数量的宿主菌，才能够保证蛭弧菌与宿主菌的碰撞、粘附和侵入并完成生活史，否则蛭弧菌没有机会碰撞、粘附、侵入并裂解宿主，会造成自身能量消耗过多而死亡。如宿主为致病或潜在致病菌，则有潜在致病的风险。解决这一问题的方法之一是选择以游泳体的形式以制备微生态制剂。但是，游泳体制备较繁琐，且极易死亡，极难存活。故在生产实践中几不可能执行。另一可能，则是转变蛭弧菌的宿主为有益或至少无害的革兰氏阳性菌。
目前研究表明，蛭弧菌可裂解革兰氏阴性菌，而不能裂解革兰氏阳性菌。纵使可裂解极少数革兰氏阳性菌，其裂解能力也非常之弱。
本实验室成功分离出一株以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为寄生宿主的蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1，对26株致病菌及一株溶藻弧菌(V.alginolyticus)ATCC17749和一株副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)ATCC 17802共28株致病指示菌的裂解率为68％，对其中溶藻弧菌(V.alginolyticus)的裂解率为75％，对副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的裂解率为50％。其中26株致病菌裂解谱在文献“201711333688.5、一株海洋蛭弧菌及在氨苄青霉素下促进蛭质体形成的应用”中公开。因此，增强裂解性能是该蛭弧菌应用亟待解决的问题。
野生型蛭弧菌，因其自身的性能难以满足生产需求，故有改善的必要。微生物诱变育种以诱变的手段改变目标微生物的遗传结构，进而筛选出优良菌种，有效应用于工业生产。
因此，对以有益或至少无害的革兰氏阳性菌为宿主的蛭弧菌进行诱变育种，增强其裂解性能，对具有重要意义。传统诱变育种多以紫外诱变为主，但其突变率不高且需要多次累积突变，极易回复。而Co60辐照诱变能获得较高的突变率和较宽的突变谱，且不易回复。但是通过Co60辐照诱变以达到增强蛭弧菌裂解性能的研究，目前尚无任何报道。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一株裂解性能强的蛭弧菌诱变株。
本发明的另一目的在于提供上述蛭弧菌诱变株的应用。
本发明以Co60辐照诱变的方法为手段，以增强蛭弧菌裂解性能为目的，提供一种Co60辐照诱导突变在增强一株蛭弧菌裂解性能中的应用。以有效提高以革兰氏阳性菌为宿主的蛭弧菌对革兰氏阴性致病菌的裂解能力，并拓宽对革兰氏阳性菌的裂解，更好地满足生产实践的需要。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明提供一株裂解性能强的蛭弧菌诱变株，名称为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1F2，其保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期：2018年6月11日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号：GDMCC NO：60385。
所述蛭弧菌BDN-1F2是有野生型蛭弧菌BDN-1经Co60辐照诱变得到。
本发明提供一种裂解性能强的微生物制剂，含有上述蛭弧菌诱变株BDN-1F2。
本发明提供一种所述的蛭弧菌BDN-1F2或微生物制剂在裂解与水产养殖相关的致病菌和/或潜在致病菌中的应用。
优选的，所述的蛭弧菌BDN-1F2或微生物制剂在裂解革兰氏阴性和/或阳性致病菌中的应用。
所述的革兰氏阴性致病菌为溶藻弧菌(V.alginolyticus)或副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)；
所述的革兰氏阳性致病菌为产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、猪链球菌(Streptococcus suis)或肠球菌(Enterococcussp.)。
本发明提供一种Co60辐照诱导突变方法，包括以下步骤：
(1)诱变剂量
诱变的致死率与辐射剂量有关，而诱变剂量与辐射剂量和辐射时间有关，即诱变剂量＝辐射剂量率×辐射时间。本发明诱变剂量为一次诱变剂量5Gy/min×60min；二次诱变剂量5Gy/min×100min。
(2)诱导突变
将培养好的蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1菌液，均分为三份样品，其中第一份不做处理，为游泳体蛭质体混合培养液；第二份在6000rpm离心，使蛭质体沉淀，弃上清液，用15‰盐度的无菌蒸馏水悬浮蛭质体沉淀，为蛭质体培养液；第三份在6000rpm离心，沉淀蛭质体，上清液再在20000rpm、4℃下离心20min，弃上清液，用15‰盐度的无菌蒸馏水悬浮游泳体沉淀，为游泳体沉淀。将样品包装好后，置于疫苗箱，送样辐照诱导突变。
(3)诱变株筛选
将诱变处理的培养液全部直接在20000rpm、4℃下离心20min，用15‰盐度的无菌蒸馏水悬浮沉淀，稀释适当浓度后倒双层平板，筛选出出斑时间短，噬菌斑较大且透亮之斑，得到能裂解溶藻弧菌和副溶血弧菌的一次诱变株。
(4)累加诱变
用步骤(3)中的一次诱变株，按步骤(2)重复操作一次累加诱变，按步骤(3)继续筛选出出斑时间短、噬菌斑较大且透亮之斑，得到能裂解溶藻弧菌和副溶血弧菌的二次诱变株，即裂解性能强的蛭弧菌诱变株BDN-1F2。
步骤(2)中所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1，来源于广东某海域海水，经人工富集培养、分离纯化得到，为一株以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis GIM1.136＝ATCC6633)为寄生宿主的蛭弧菌。
所述的蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1的保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期：2017年11月27日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号：GDMCC NO：60291。该菌株在文献“201711333688.5、一株海洋蛭弧菌及在氨苄青霉素下促进蛭质体形成的应用”中公开。
步骤(3)中所述的溶藻弧菌为溶藻弧菌(V.alginolyticus)ATCC 17749，副溶血弧菌为副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)ATCC 17802均购于美国模式培养物保藏中心。
步骤(2)中所述的一次诱变剂量为5Gy/min×60min。
步骤(4)中所述的累加诱变剂量为5Gy/min×100min。
本发明特别提供四株革兰氏阳性宿主菌产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、猪链球菌(Streptococcus suis)以及肠球菌(Enterococcus sp.)，以检测诱变株对革兰氏阳性菌的裂解能力。
本发明就现有研究，发明一种通过对一株以革兰氏阳性菌为宿主的蛭弧菌进行Co60辐照诱导突变，得到裂解能力增强的诱变株，可强力裂解与水产养殖相关的致病菌和/或潜在致病菌。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明提供了一株以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为寄生宿主且裂解能力较强的蛭弧菌诱变株；
(2)本发明利用Co60辐照诱导突变法以增强蛭弧菌的裂解性能，为增强蛭弧菌的裂解性能提供了一种新方法，有效地提高了蛭弧菌对革兰氏阴性以及阳性致病菌的裂解能力，拓宽了蛭弧菌的应用范围、更好地满足生产实践的需要。
(3)本发明增强蛭弧菌裂解性能效果显著，经实施例中采用本发明增强蛭弧菌裂解性能的检验证实可以裂解原来不能裂解的两株致病弧菌，且增强了对革兰氏阳性菌的裂解能力，为更多以阳性菌为宿主的蛭弧菌分离及性能增强提供了方法基础。
附图说明
图1是蛭弧菌诱变株BDN-1F1裂解副溶血弧菌的双层平板图。
图2是蛭弧菌诱变株BDN-1F1裂解溶藻弧菌的双层平板图。
图3是蛭弧菌诱变株BDN-1F2裂解副溶血弧菌的双层平板图。
图4是蛭弧菌诱变株BDN-1F2裂解溶藻弧菌的双层平板图。
图5是蛭弧菌诱变株BDN-1F2的系统进化树。
图6是实施例4中样①中溶藻弧菌的浓度趋势图。
图7是实施例4中样②中副溶血弧菌的浓度趋势图。
图8是实施例4中样③中溶藻弧菌与副溶血弧菌的浓度趋势图。
图9是实施例4中样④中溶藻弧菌的浓度趋势图。
图10是实施例4中样⑤中副溶血弧菌的浓度趋势图。
图11是实施例4中样⑥中溶藻弧菌与副溶血弧菌的浓度趋势图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中涉及到的培养基：
DNB液体培养基的配方(g/L)：营养肉体0.8，酸水解酪蛋白0.5，酵母提取粉0.1，氯化钠15；最终pH 7.2；
DNB上层培养基配方：15‰盐度的无菌水中加入质量比为0.8％的琼脂粉，最终pH7.2；
DNB下层培养基配方：DNB液体培养基中加入质量比为1.5％的琼脂粉，最终pH7.2；
营养肉汤(NB)液体培养基配方(g/L)：蛋白胨10；牛肉膏粉3；氯化钠5，最终pH7.2；
营养肉汤(NB)固体培养基配方：营养肉汤液体培养基中加入质量比为1.5％的琼脂粉，最终pH 7.2；
2216E佐贝尔海洋细菌液体培养基配方(g/L)：蛋白胨5，酵母浸膏1，磷酸高铁0.01，氯化钠30；
TCBS琼脂培养基配方(g/L)：TCBS琼脂培养基89g，煮沸溶解于1000mL蒸馏水中，冷却后倾倒与无菌平板；
DNB双层固体培养基平板法：将蛭弧菌菌液0.5mL与宿主菌浓缩液0.5mL混合均匀，静置30min，与50℃的DNB上层培养基3mL混合均匀，迅速倾注于固体DNB培养基上并铺平制成双层平板。
本实施例中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis GIM 1.136)购买于广东省微生物研究所。
本实施例中两株革兰氏阴性菌溶藻弧菌(V.alginolyticus)ATCC 17749和副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)ATCC 17802均购于美国模式培养物保藏中心。
本实施例中四株革兰氏阳性宿主菌产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、肠球菌(Enterococcus sp.)、猪链球菌(Streptococcus suis)均在文献“200810220488.3、紫外诱导突变在增强蛭弧菌裂解性能中的应用”中公开。
实施例1Co60一次辐照
(1)宿主培养：取新培养的宿主菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis GIM1.136)，在无菌操作台中酒精灯外焰下烧好瓶口，吸取3mL宿主菌种子液转入250mL瓶装NB液体培养基中，将接种好的宿主菌放在31℃左右的恒温摇床中培养约15h后，放入冷冻离心机中在6000rpm转速、4℃下离心10min，然后弃上清液，每管加入1mL 15‰盐度的无菌蒸馏水，打散混合均匀后移入一个离心管中，得到宿主菌浓缩液，套袋，4℃保存，备用；
(2)溶藻弧菌与副溶血弧菌浓缩液制备：分别取安瓿保种的两株弧菌各一支，用酒精棉擦拭瓶口，轻轻敲碎瓶口后，吸取1mL 2216E佐贝尔海洋细菌液体培养基吸打粉末至溶解，并吸取转入50mL瓶装2216E佐贝尔海洋细菌液体培养基中，37℃，200r/min培养8h，放入冷冻离心机中在6000rpm转速、4℃下离心10min，然后弃上清液，每管加入1mL DNB液体培养基，打散混合均匀后移入一个离心管中，得到两株弧菌浓缩液，套袋，4℃保存，备用；
(3)BDN-1种子液培养：挑取噬菌斑若干个，接入50mL DNB液体培养基中，再加入250μL浓度为1mol/L的MSG(谷氨酸钠)，再加入1mL的枯草芽孢杆菌宿主菌浓缩液，之后在31℃下摇床培养至第三天后作为BDN-1种子液。
(4)辐照样品制备：取步骤(3)中的BDN-1种子液，接种1mL到50mL DNB液体培养基中，再加入250μL浓度为1mol/L的MSG，再加入1mL的枯草芽孢杆菌宿主菌浓缩液，之后在31℃下摇床培养至48h，分为三份样品，存放于无菌试管中，每份10mL；其中第一份不做处理，为游泳体蛭质体混合培养液；第二份在6000rpm离心，使蛭质体沉淀，弃上清液，用10mL15‰盐度的无菌蒸馏水悬浮蛭质体沉淀，为蛭质体培养液；第三份在6000rpm离心，沉淀蛭质体，上清液再在20000rpm、4℃下离心20min，弃上清液，用10mL 15‰盐度的无菌蒸馏水悬浮游泳体沉淀，为游泳体沉淀。将样品包装好后，置于疫苗箱，送样辐照诱导突变，辐照剂量为5Gy/min×60min。
(5)诱变株筛选：将诱变处理的培养液全部直接在20000rpm、4℃下离心20min，用1mL 15‰盐度的无菌蒸馏水悬浮沉淀，稀释适当浓度后倒双层平板，筛选出出斑时间短、噬菌斑较大且透亮之斑，挑出接入50mL DNB液体培养基中，再加入250μL浓度为1mol/L的MSG(谷氨酸钠)，再加入1mL的枯草芽孢杆菌宿主菌浓缩液，之后在31℃下摇床培养二天后，作为一次诱变株BDN-1F1种子液，4℃保存备用。
(6)诱变株裂解致病弧菌能力的检测：将诱变株BDN-1F1菌液分别与步骤(2)制备的两株弧菌浓缩液混合，倒DNB双层平板，以检测能否裂解溶藻弧菌和副溶血弧菌。
蛭弧菌诱变株BDN-1F1裂解副溶血弧菌的双层平板图，见图1；
蛭弧菌诱变株BDN-1F1裂解溶藻弧菌的双层平板图，见图2。
双层平板上所出现噬菌斑的数量代表蛭弧菌的数量，噬菌斑直径大小代表蛭弧菌裂解能力的强弱。噬菌斑数量越多，直径越大，说明蛭弧菌的裂解能力越强。
比较一次Co60辐照诱变前后蛭弧菌菌液制成的双层平板上的噬菌斑的数量和大小来判断其裂解性能，通过对比，结果见表1。
表1：蛭弧菌诱变株BDN-1F1与野生株对致病弧菌裂解能力的比较
注：表1中噬菌斑直径的单位为mm；噬菌斑数量的单位为个/平板。
表1结果表明，一次Co60诱变株BDN-1F1可裂解野生株所不裂解的两株致病弧菌，裂解性能有所提高。
实施例2Co60二次辐照
(1)宿主培养：同实施例1步骤(1)。
(2)溶藻弧菌与副溶血弧菌浓缩液制备：同实施例1步骤(2)。
(3)BDN-1F1种子液培养：参照实施例1步骤(3)，挑取噬菌斑来源于诱变株BDN-1F1双层平板。
(4)辐照样品制备：取步骤(3)中的BDN-1F1种子液，参照实施例1步骤(4)，加大辐照剂量为5Gy/min×100min。
(5)诱变株筛选：参照实施例1步骤(5)得到二次诱变株BDN-1F2种子液，4℃保存备用。
(6)诱变株裂解致病弧菌能力的检测：参照实施例1步骤(6)。
蛭弧菌诱变株BDN-1F2裂解副溶血弧菌的双层平板图，见图3；
蛭弧菌诱变株BDN-1F2裂解溶藻弧菌的双层平板图，见图4。
比较二次Co60辐照诱变前后蛭弧菌菌液制成的双层平板上的噬菌斑数量和大小来判断其裂解性能，结果见表2。
表2：蛭弧菌诱变株BDN-1F2与野生株对致病弧菌裂解能力的比较
注：表2中噬菌斑直径的单位为mm；噬菌斑数量的单位为个/平板。
从表2可知，二次Co60诱变株BDN-1F2裂解能力进一步增强。二次诱变后的蛭弧菌裂解溶藻弧菌所出现的噬菌斑数量相对于一次诱变株由1个升至135个，裂解副溶血弧菌所出现的噬菌斑数量相对于一次诱变株由2个升至47个，裂解能力大大提高。结果表明经二次Co60诱变后筛选到的蛭弧菌诱变株较野生株和一次Co60诱变株裂解性能有大的提高。
二次Co60诱变株BDN-1F2分子生物学鉴定结果：
接种平板噬菌斑摇床培养一瓶蛭弧菌菌液，先在6000rpm下离心10min，再将上清液经0.30μm醋酸纤维素滤膜过滤，滤液于20000rpm下离心20min，用500μL的TE缓冲液富集沉淀，送于测序公司(上海生工生物工程有限公司)进行测序；其中，PCR扩增所用引物为：
63F：5'-CAGGCCTAACACATGCAAGTC-3'；
842R：5'-CGWCACTGAAGGGGTCAA-3'，其中，简并碱基W表示A/T；
PCR反应条件为：95℃预变性3min；94℃，变性1min；56℃，退火45s；72℃，延伸1min；35个循环；72℃，终延伸10min；本发明采用单克隆鉴定方法，经正向引物63F和反向引物842R扩增得到两条片段，DNAStar拼接两条序列，得到约758bp目的片段。
将16S rDNA基因测序结果序列通过NCBI BLAST在GenBank数据库中进行同源比对分析鉴定，RDP classifier搜索分类为蛭弧菌；用MEGA 7.0软件进行多序列同源性分析，采用Neighbor-joining方法构建系统进化树，结果如图5所示。进一步NCBI BLAST分析发现，该蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)和它们与最近的亲缘关系-Bdellovibrio sp.BDH12和Bdellovibrionales bacterium BDHSH06有99％的相似度，因此，菌株BDN-1F2鉴定为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)。
综上所述，本发明辐照诱变得到的蛭弧菌命名为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1F2，其保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期：2018年6月11日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号：GDMCCNO：60385。
所述的蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1F2的16S rDNA的序列如SEQ ID NO：3所示。
实施例3Co60一次和二次辐照后的诱变株与野生株裂解阳性菌能力比较
(1)革兰氏阳性宿主菌浓缩液制备：分别取安瓿保种的四株革兰氏阳性宿主菌各一支，用酒精棉擦拭瓶口，轻轻敲碎瓶口后，吸取1mL NB液体培养基吸打粉末至溶解，并吸取转入50mL瓶装NB液体培养基中，37℃，200r/min培养8h，放入冷冻离心机中在6000rpm转速、4℃下离心10min，然后弃上清液，每管加入1mL DNB液体培养基，打散混合均匀后移入一个离心管中，得到革兰氏阳性宿主菌浓缩液，套袋，4℃保存，备用；
(2)诱变株裂解革兰氏阳性宿主菌能力的检测：参照实施例1步骤(6)。
比较Co60辐照诱变前后蛭弧菌菌液制成的双层平板上的噬菌斑的数量和大小来判断其裂解革兰氏阳性宿主菌性能，通过对比，结果见表3。
表3：蛭弧菌诱变株与野生株的对革兰氏阳性宿主菌裂解能力比较
注：表3中噬菌斑直径的单位为mm；噬菌斑数量的单位为个/平板。
表3说明，经过二次Co60诱变的蛭弧菌诱变株在对革兰氏阳性宿主菌的裂解上表现出较强的裂解能力，不仅能裂解野生株和一次Co60诱变株不能裂解的革兰氏阳性宿主菌，对野生株和一次Co60诱变株能裂解的革兰氏阳性宿主菌则表现出更强的裂解能力。
实施例4Co60一次和二次辐照后的诱变株对溶藻弧菌、副溶血弧菌的消除试验
(1)宿主培养：同实施例1步骤(1)；
(2)BDN-1F1和BDN-1F2种子液培养：同实施例1，2步骤(2)；
(3)溶藻弧菌和副溶血弧菌种子液培养：分别取安瓿保种的溶藻弧菌及副溶血弧菌各一支，用酒精棉擦拭瓶口，轻轻敲碎瓶口后，吸取1mL NB液体培养基吸打粉末至溶解，并吸取转入50mL瓶装NB液体培养基中，37℃，200r/min培养8h，4℃保存，备用；
(4)模拟水体样品制备：样①于50mL DNB液体培养基中加入诱变株BDN-1F1和溶藻弧菌；样②于50mL DNB液体培养基中加入诱变株BDN-1F1和副溶血弧菌；样③于50mL DNB液体培养基中加入诱变株BDN-1F1和溶藻弧菌、副溶血弧菌；样④于50mL DNB液体培养基中加入诱变株BDN-1F2和溶藻弧菌；样⑤于50mL DNB液体培养基中加入诱变株BDN-1F2和副溶血弧菌；样⑥于50mL DNB液体培养基中加入诱变株BDN-1F2和溶藻弧菌、副溶血弧菌。其中上述样品诱变株接种量为1mL，使其终浓度达到104pfu/mL，溶藻弧菌、副溶血弧菌接种量均为100μL，使其终浓度达到107cfu/mL及108cfu/mL；并对应设置诱变株及溶藻弧菌、副溶血弧菌对照组。将上述样品置于摇床37℃，200r/min培养7天，每隔24h通过稀释平板涂布于TCBS平板检测溶藻弧菌、副溶血弧菌浓度。
(5)结果观察：如图6～11所示，实验组弧菌浓度均呈下降趋势，对照组弧菌浓度略为上升，这说明诱变株对模拟水体中的溶藻弧菌和副溶血弧菌均有消除作用；且弧菌的下降幅度则显示出两株诱变株对不同弧菌裂解能力的差异，其中诱变株BDN-1F2消除作用较诱变株BDN-1F1好；诱变株对溶藻弧菌的消除作用较副溶血弧菌好。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 华南理工大学
<120> 一株裂解性能强的蛭弧菌诱变株及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 63F
<400> 1
caggcctaac acatgcaagt c 21
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 842R
<400> 2
cgwcactgaa ggggtcaa 18
<210> 3
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 蛭弧菌（Bdellovibrio sp.）BDN-1F2的16S rDNA的序列
<400> 3
gtggcgcacg ggtgagtaac gcgtaggtga cgtgcctttt agtgggggac aacatcgtga 60
aaacggtgct aataccgcat aagttaagcg acattgaaaa agcttaagaa agtgggcttc 120
ggctcacgct gaaagatcgg cctgcgtatc attagcttgt tggtggggta acggcctacc 180
atggctacga tgattaactg gtctgagagg atgatcagtc acactggaac tgagacacgg 240
tccagactcc tacgggaggc agcagtaggg aatattgcgc aatgggggaa accctgacgc 300
agcaatgcca cgtgagtgag gaaggccctt gggttgtaaa gctctgtcct atgggaagaa 360
ctgcattacg gttaataccc gtagtgtttg acggtaccat agaagaaagc accggctaac 420
tccgtgccag cagccgcggt aatacggagg gtgcaagcgt tgttcggatt tactgggcgt 480
aaagcgcgcg caggcggatt ggcaagtcag atgtgaaatc tcggggctca accccgaaac 540
tgcgtctgaa actatcagtc tagagtctca tagggggcag gggaatttca cgtgtagggg 600
taaaatccgt agagatgtga aggaacaccc gtggcgaagg cgcctgcctg gatgagcact 660
gacgctgagg cgcgaaagcg tggggagcaa acaggattat ataccctggt actccacgcc 720
gtaaacgatg agtactagcc cttggaggta ttgacccc 758
Claims (3)
1.一株裂解性能强的蛭弧菌诱变株，其特征在于：所述蛭弧菌诱变株为Bdellovibrio sp. BDN-1F2，于2018年6月11日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO：60385。
2.一种裂解性能强的微生物制剂，其特征在于：所述微生物制剂含有权利要求1所述的蛭弧菌诱变株BDN-1F2。
3.权利要求1所述的蛭弧菌诱变株BDN-1F2或权利要求2所述的微生物制剂在裂解与水产养殖相关的致病菌和/或潜在致病菌中的应用，其特征在于：
所述的致病菌为溶藻弧菌（V. alginolyticus）、副溶血弧菌（V. parahaemolyticus）、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）、艰难梭菌（Clostridium difficile）、猪链球菌（Streptococcus suis）或肠球菌（Enterococcus sp.）。
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|---|---|---|---|---|
| CN115474565A (zh) * | 2021-05-31 | 2022-12-16 | 华南理工大学 | 蛭弧菌诱变株在凡纳滨对虾养殖中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107974418A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-01 | 华南理工大学 | 一株海洋蛭弧菌及在氨苄青霉素下促进蛭质体形成的应用 |
| CN108998386A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-12-14 | 东南大学 | 一种应用于污泥深度脱水的噬菌型细菌 |
-
2018
- 2018-12-25 CN CN201811591698.3A patent/CN111363690B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107974418A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-01 | 华南理工大学 | 一株海洋蛭弧菌及在氨苄青霉素下促进蛭质体形成的应用 |
| CN108998386A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-12-14 | 东南大学 | 一种应用于污泥深度脱水的噬菌型细菌 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Phylogenomic Insights into Distribution and Adaptation of Bdellovibrionota in Marine Waters;Li Qing-Mei等;《microorganisms》;20210403(第9期);1-17 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111363690A (zh) | 2020-07-03 |
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